JPS61119193A - 新規抗生物質ａｓｅ−９及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明性新規な抗生物質ＡＳＥ−９及びその酸付加塩並
びにその製造法に関する、〔従来の技術〕 従来、サツカロ−リス？う属の微生物が生産する抗生物
質としては、アミノ配糖体系であるス？ラリシン類（５
ｐｏｒｉｒｉｃｉｎａ　）　［Ｊ。

Ａｎｔｌｂｉｏｔ、＋　３２：　１８０　（１９７９）
　）、サツカロシン（５ａｅｃｈａｒｏｅｉｎ　）　（
Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔ１３６：　６５１（１９８３））
、アゾラミシン（Ａｐｒａｍｙｅｉｎ　）　（特開昭５
５−１０２３９７号〕及びラクトン系であるＵ−５９７
６１Ｃ％開昭５６−５７７９７号〕等が知られている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は医療用として有用な新規抗生物質を得ることを
目的とする。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは新規抗生物質ｔ−得ることを目的として、
種々の放線菌を分離し、その生産物について研究を行な
った結果、和歌山県海　　　Ｉ南軍の畑土壌から分離し
た放線菌が、その培養物中に抗菌活性を有する新規な抗
生物質（以下、これを［抗生物質ＡＳＢ−９Ｊと称する
）を生産することを見い出し、本発明を完成し次。

すなわち、本発明は新規な抗生物質ＡＳＥ−９およびそ
の酸付加塩並びにその製造法を提供するものである。

本発明の抗生物質ＡＳＥ−９を産生ずる本発明者らＫよ
って分離された菌株は次のような菌学的性質を有する。

（１１形態的性状 スターチ・無機塩寒天培地（ｒｓｐ培地４）（Ｉｎｔｅ
ｒ、Ｊ、Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ、、　１６
　ａ　３１３〜３４０（１９６６））上で、３７℃にて
１０〜１４日間培養し、観察した所見は次の通りである
。

基土菌糸は曲線状又は直線′状で分校を伴って伸長し、
菌糸の部分によ炒、あるいは培養後期に分断を生じ、直
径０．４〜０．６μであり、胞子は着生しない。

基土菌糸より生じた気菌糸は曲線状又は直線状で単純分
枝を表し、直径０．５〜０．７μであり、その先端はル
ープ状又はゆるく２〜３回巻いた螺旋を呈するものと、
曲線状又は直線状を呈するものがある。気菌糸は分節し
てビーズ様に多数連鎖（通常１０個以上）した胞子を形
成し、しげしげ胞子と胞子の間に空の部分が認められる
。

胞子は卵形又は短円筒形で、大きさはＱ、　５〜０．７
　Ｘ　０．７〜１．３μであり、透過型電子顕微鏡で観
察すると、その表面は直線状又は曲線状の長い毛様物質
が房状に多数生えた殻により覆われている。

基土菌糸や気菌糸に胞子のう、菌核又は−毛胞子を形成
しない。

（２）　　染色性 ダラム染色は陽性で、抗酸性染色は陰性である。

（３１ｍ１体組成 ｌ）　　Ｂｅａｋｅｒ等の方法［ＡｐｐｌｏＭｌｅｒｏ
ｂｉｏｌ、１２：　４２１−４２３（１９６４）］Ｋよ
り分析したシアミノピメリン酸はメゾ−型が検出され、
Ｉ　　　　　Ｉ、＊ｃｈｓｖａｌｌ＠ｒの方法（Ｊ、Ｌ
ａｂ、ＣＩ　ｉｎ、Ｍ＠ｄ、　７１：　９３４−９４４
（１９６８）Ｅで分析し九糖はアラビノースとガラクト
ースが検出され念。

２）　　Ｍｏｒｄａｒｓｋａ等の方法（Ｊ、Ｇ＠ｎ、Ｍ
Ｉｅｒｏｂｉｏｌ。

７１ニア７−８６（１９７２））による脂質の分析にお
いて、脂質ＬＣＮ−人は検出されず、又、Ｍｉｎｎｉｋ
ｌｎ等（Ｊ、Ｇ＠ｍ、Ｍｉｅｒｏｂｌｏｌ、　８８　：
　２００−２０４（１９７５）３による分析において、
ノカルドミコール酸又はミコール酸は検出されなかった
。

（４）　　培養的性状 各種培地上で、３７℃にて１４日間培養し、観察した所
見は次表に示す通りである。色の表示はＣｏ１ｏｒ　Ｈ
ａｒｍｏｎｙ　ｍａ＋ｎａａｌ第４版１９５８年（Ｃｏ
ｎｔａｉｎ＠ｒ　ＣｏｒｐｏｒａｔＩｏｎ　ｏｆＡｍｅ
ｒｉｃａ　）　Ｋよる色の分類に従った。

（ｌ 以下余白 （５）生理的性状 ｌ）生育温度範囲（イーストエキス　麦芽エキス寒天培
地、１４日間培養） ２３〜４５℃（至適温度：３０〜４０℃）２）ゼラチン
の液化　陽性 ３）スターチの加水分解　陽性 ４）脱脂牛乳のペプトン化　陽性 脱脂牛乳の凝固　陰性 陰性。

６）酸素の要求性　好気性 ７）硫化水素の生成　陽性 ８）硝酸塩の還元　陽性 ９）リゾチーム（Ｉｙｓｏｚｙｍ・）Ｋ対する耐性度　
感受性（Ｉｎｔ＠ｒ、Ｊ、Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂｍｅｔｅｒ
ｌｏ１＋Ｉ　　２７：１７６−１７８（１９７７）Ｋ従
った〕１０）　　塩化す）　ＩＪクムに対する耐性度０
〜１１％で生育、１２％以上では生育しない。〔基礎培
地として１８Ｐ培地２を用いた〕 １１）抗生物質に対する耐性度 （Ｊ、Ａｎｔｉｂｌｏｔ、＊　　３２　　：１　８０−
１８６　（１９７９）Ｋ従った〕 １２）各種物質の分解能 〔Ｇｒａｙ、Ｔ、Ｒ，Ｇ等編Ｅａ＠１ｏｇｙ　ｏｆ　５
ｏｉｌ　ｂａｃｔｅｒｉｍＰａ　　２９３−３２１　　
ｌ　Ｌ１ｖ＊ｒｐｏｏｌ　　ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒ
ｅｓｓ　＋Ｌｌｖｅｒｐｏｏｌ＋　１９６７　＊　Ｊ、
Ｇｅｍ　Ｍｌｅｒｏｂｌｏｌ。

６９：３３−８０（１９７１）及びＪ、Ｇ＠ｅ、Ｍｌｃ
ｒｏｂｌｏｌ。

、リー：７５−８５（１９７５）Ｋ従っ念〕１３）炭素
源の利用性 以下余白 ン 以上のように、本菌株の特徴的性状としては、■形態に
おいて、分断性のある真性の基土菌糸より生じた気菌糸
にゆるく巻いた螺旋状、直線状あるいは曲線状の胞子連
鎖を形成し、胞子は長い毛様物質の生え九殻に覆われて
おり、■菌体分析において、メゾ−シアミノピメリン酸
、アラビノース及びガラクトースが検出され、脂質ＬＣ
Ｎ−人、ノカルドミコール波及びミコール酸は検出され
ず、■染色性においてダラム染色は陽性、抗酸性染色は
隈性であり、■好気性である等が挙けられる。

これらの特徴的性状をもとに、種々の文献により検討し
たところ、本菌株はサツカロ？リス？う属（５ａｅｅｈ
ａｒｏｐｏｌｙａｐｏｒａ　Ｌａｃ＠ｙ　＆：Ｇｏｏｄ
ｆ命１１ｏｗ　）　（Ｊ、Ｇ＠ｎ０Ｍ１ｅｒｏｂｉｏ１
．８８ニア５〜８５（１９７５））に属する。そこで本
発明者らは本菌株を公知の菌株と区別する丸めにサツカ
ロ？リス？ラースピーシズ（５ａｅｅｈａｒｏ　−ｐｏ
ｌｙｓｐｏｒｍ　ｍｐ、）　ＡＳＥ−９と命名し、工業
技術院微生物工業技術研究所に微工研菌寄第７９１６号
（ＦＥＲＭ　Ｐ−７９１６）として寄託した。

本発明の抗生物質人ＢＢ−９は上記菌株を栄養源含有培
地に接種し、好気的に培養するととＫより製造される。

抗生物質Ａ８に一９生産株としては、サツカロ？リスー
ラ属に属し抗生物質人５Ｋ−９ｉ生産する能力を有する
ものであれば、すべて本発明に使用することができる。

つぎに、抗生物質Ａｓ　Ｅ−９の製造における菌株の培
養について説明する。サッカロゼリス？う属に属する抗
生物質Ａ　ＨＥ−９生産株の培養には通常放線菌の培養
法が用いられる。

培地としては、固型培地または液体培地が用いられるが
特に大量主意のためＫは液体培地、％に水性培地が好ま
しい。

培地の栄養源としては、放線菌の培養に通常用いられる
炭素源、窒素源、更に必要に応じて塩類、微量栄養素、
発育促進物質などを使用することができる。

炭素源としては、例えばグルコース、スターチ、デキス
トリン、グリセリン、糖蜜、ツラクトース、マンニトー
ル、マンノース、マルトース、ラフィノース、有機酸等
が；窒素源としては、例えば大豆粉、・−ンスチープ　
　　。

リカー、綿実粉、カゼイン、ペプトン、酵母、肉エキス
、アミノ酸、尿素、碑安などが；ま念塩類としては、例
えばナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネ
シウム塩、リン酸基、その他の重金属塩等が使用される
。

培養法としては、一般の抗生物質の生産に用いられる方
法が採用されるが、液体培養法、特に振とりまたは深部
通気攪拌培養が最適である。培養条件は、好気的条件下
で行なわれ、培養温度は一般に２３〜４５℃であるが、
３０〜４０℃が好ましく、培！ｐｌｉは６〜８であるが
７付近が最も好ましい。培養液中の抗生物質ＡＳＫ−９
の生産ｔｈ、２〜６日の培養で充分高くなるが、通常３
日の培養で最高に達する。

以上の如くして培養物中に生産された抗生物質ＡＳＫ−
９を培養物中から採取するためＫは、後記する本抗生物
質の理化学的性質を利用することによって有利に行なわ
れる。

すなわち、抗生物質人８に−９は主として培養Ｆ液中に
含有されるので、培養物をｐ過助剤、例えばノｑ−ライ
ト、ラジオライト、セライトなどを加えて一過するか又
は遠心分離して、培養Ｆ液と菌体とに分離し、その培養
Ｆ液から抗生物質＾８に−９を分離・精製する。

培養Ｆ液から抗生物質ＡＳＥ−９を分離・精製するため
Ｋは、一般の塩基性水溶性抗生物質を分離する轟該分野
で知られた種々の方法を採用することができ、例えば、
陽イオン交換樹脂又は他の固体吸着剤を用いるクロマト
グラフィーのよう表方法によって培養Ｆ液から分離する
ことができる。好ましくは、培養ｐ液をｐＨ約７に調節
し、アンバーライ）！ＲＣ５０、ＣＧ−５０などの弱酸
性陽イオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィー
による方法、あるいは、ＣＭ−セルロース、ＣＭ−セフ
ァデックスなどを用いるカラムクロマトグラフィーによ
る方法である。次いで吸着された本抗生物質を弱酸また
は弱塩基の溶出剤、例、ｔハ希ｆ＜塩酸、アンモニア水
、塩化アンモニウムで、必ｌ！に応じその濃度を順次変
えて溶出すればよい。又、必要に応じて脱塩操作、例え
ばカーボン吸着水洗後、含水アセトン溶ン　　　　出ア
ンバーライトｘＲＡ−４００（ＯＨ型）、ダウエックス
−１（ＯＨ型）等の強塩基性イオン交換樹脂等を用いて
行なえる。これらの操作は、数回組みあわせることが更
に好ましい。

溶出のチェックは、バチルス・ズブチリス（Ｂａｅｌｌ
ｌｕｓ　ｍｔ＋ｂｔｌｌ　Ｉｓ　）　ｆ用いるペー、ｅ
−ディスク法又はシリカゲル薄層クロマトグラフィーに
より行なうことができる。溶出した活性画分を濃縮し、
凍結乾燥することＫより、抗生物質ムＢＥ−９の淡黄色
粉末が遊離環基の型にて得られる。

得られた遊離塩基型のＡＳＫ−９は、必要に応じて、通
常の手段により、酸付加塩を形成し得る。このような塩
としては、医薬的に許容し得る非毒性塩が挙げられる。

例えば塩酸、硫酸、リン酸などの無機塩との酸付加塩、
酢を 酸、プロピオン酸、リンゴ酸、コハク酸、酒石酸、クエ
ン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスノＱライン酸などの
有機酸との酸付加塩である。

以上の如くして得られた抗生物質Ａ　Ｓ　Ｋ−９は次の
ような理化学的性質を有する。

■　元素分析値 Ｃ：約５４％、Ｈ＝約７．３％、Ｎ：約１２％、Ｓ：約
０．０３％■　分子量（ダル濾過法） ■融潰 ２４０〜２４２℃（分解） ■　比旋光度 〔α］”　　１４．５’　（ｅ＝１　、Ｉ！２０　）■
　紫外部吸収スペクトル（水溶液） 第１図 １％ λ”’　ｎｍ　：２３５　（Ｋ　　　　８３０）中性又
は酸性水ｗａｘ　　　　　　　　　　　　　　１α１％ ２５２（１９７０）塩基性水 ａＩＬ ■　赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ法）電２図 ３５００．１６９０．１５１０．１３６０，１１５０゜
１０９０ｃ１１−’に特徴的な吸収帯を示す。

■　溶解性 水に可溶。メタノールＫｌ＆溶、酢酸エチル、クロロホ
ルム、べ／ゼンに不溶。

■　塩基性、酸性、中性の区別 塩基性 ■　物質の色及び性状 淡黄色粉末 ［相］　呈色反応 過マンガン酸カリウム脱色反応、ニンヒドリン反応は陽
性。モーリッシュ反応、エルソンモルガン反応は陰性。

■　核磁気共鳴スペクトル（水素核） 第３図（ＤｔＯ中、１００ＭＨｚ） ０　薄層クロマトグラフィー（シリカゲル、メルク社製
、Ａｒｔ５７３５） １０％酢酸アンモニウム：メタノール（１：　１　）　
　　　　　　　　　　　　Ｒｆ＝０．７３ブタノール：
酢酸：　Ｈ，Ｏ（２：ｌ：１）　ｇｆ＝ｏ、５２ゾロノ
ｑノール：ビリシン：酢酸：水 （１５：１０：３：１２）　　　　　　Ｒｆ冨０．８８
０　アミノ酸分析（６ＮＨＣ４１０５℃、１８時間加水
分解） アスノＱライン酸、スレオニン、セリン、グルタミン酸
、ゾロリン、グリシン、アラニン、バリン、メチオニン
、インロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、リシン
、アルギニン上記理化学的性質から明らかなように１本
発明の抗生物質ＡＩ９に−９は、水溶性塩基性のベゾタ
イド系抗生物質であり、紫外部吸収スペクトルにおいて
２３５ｎｍ付近に極大吸収を持つという特徴を有する。

２３５ｎｍ付近に極大吸収を有する既知のベゾタイド系
抗生物質としては、コマミシンＡ％　Ｂ（Ｋｏｍａｍｙ
−ｅｉｎ　）　（特開昭４５−８６３６号〕等が知られ
ている、しかしながら、これら既知抗生物質は何れも中
性又は酸性脂溶性物質であり、インブタノール等の有機
溶剤で抽出可能であるが、本発明の抗生物質人８Ｅ−９
はいかなるｐＦｉＣ９ においてもインブタノール等の溶剤で抽出されない。ま
たコマミシンＡ、Ｂは何れもシラスの比旋光度を有して
いるが、本発明のＡＨΣ−９０比旋光度はマイナスであ
る。従って本発明の抗生物質ＡＳＫ−９は新規物質であ
ると判断される、 〔作用〕 本発明の抗生物質ＡＳＥ−９は次のような抗菌活性を有
する。

抗生物質人５Ｅ−９の各穏微生物に対する最小発育阻止
濃度（ＭＩＣ）　Ｑ次表に示す。

以下余白 以上の抗菌スペクトルから、本発明の抗生物質ＡＳＩ−
９ｉｉグラム陽性菌に対して抗菌活性を示すことがわか
る。前記公知抗生物質コマミシンＡ％ＢＦｉ抗カビ及び
抗イースト菌作用を有しているが、本発明のＡ　ＢＮ　
−９は抗カビ及び抗イースト菌作用はなく、抗ダラム陽
性菌作用を有する。理化学的性質からだけでなくこの事
実からも本発明の抗生物質ＡＳＥ−９は新規であること
がわかる。

〔発明の効果〕

これらの抗菌作用からみて、抗生物質人ｆ９Ｅ−９およ
びその酸付加塩は医療用の抗菌剤として、特にグラム陽
性菌に起因する諸疾患に対する治療又は予防剤として有
用である。

〔実施例〕

次に実施例を挙げて本発明を説明する。

実施例 ゛５００−三角フラスコにグルコース１％、デキストリ
ン１％、カゼイン氷解物０．５％、酵母エキス０．５％
、ＣａＣ０１０，１％、ｐＨ７，０の培地１００ｔ／″
ｆ！：入れ１２０℃、２０分オートクレイプ滅菌したも
のにサツカロ−リス？う・スピーシズｈｓｖ−ｇｇ株の
斜面培地から一白金耳の菌を接種し、３０℃、３日間振
盪培養を行ない、種母とした。可溶性澱粉４％、大豆粉
２％、Ｃ，Ｓ、Ｌ　１％、Ｋ、ＨＰｏ、　０．０５％、
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，Ｏｓ％、ＫＣｌ　Ｏ，０５％
、ｃａｃＯｓ　０．１％、ＣｏＣ４・６ａ、ｏ　ｏ、　
ＯＯ１３％、ｐＨ７，０の組成を有する抗生物質生産培
地に前記種母３％を移植し、３０℃、９６時間振盪培養
を行った。生産培地で得られた培養液１０ｔより遠心分
離にて培養上清液８．６ｔを得た。この上清液を１ＮＨ
ｃｔＪ液にてＰＨ６，８に調整し、イオン交換樹脂ｘｎ
ｃ−５０（Ｈａ）（ローム・アンド・ハース社製）５０
０ｔＲ１に吸着させ、水洗（２，５ｔ）後０．５Ｎ塩酸
で溶出し、５００ｓ！／ずつ分画した。各分画はノζチ
ルス・スプチリスＡＴＣＣ６６３３株を用いたディスク
アッセイを行ない抗菌活性を示した分画ｌから分画５ま
で２．５１　’に集めて濃アンモニア水で中和した。そ
の後１５〇−の活性炭カラムＫＡ８ｍ−９物質を含むア
ンモニア中和液を吸着させ、水洗後Ｑ、０２　Ｎ’ＦＩ
Ｃ１：アセトン（１：１）で溶出し、２０？ずつ分画し
た。各分画は前記バチルス・スプチリス人ＴＣ０６６３
３株を用い念ディスクアッセイを行ない、活性分画Ｎｎ
８〜Ｎ１４８を集め、イオン交換樹脂ＩＲＡ−４１０（
ＯＨ型）（ローム・アンド・ハース社製）で中和した。

その後約２０−まで減圧＃Ｉ縮し、ＣＭ−セファデック
スｃ　−２５（ＮＨ４型）　（ファルマシア・ファイン
・ケミカル社製）１５０−のカラムにチャージし、水３
００−で洗浄後０〜０．１　Ｎ塩化アンモ二りム水溶液
の濃度勾配により（２ｔ）溶出し、２０ｆずつ分画した
。分画５９〜ｙｓｌｅｔ集め、１００ｇｔｌの活性炭カ
ラムに吸着させ、５００１Ｒｔの水でカラムを洗浄後０
．０２　ＮＴｌＣ１：人ｓ＠ｔｏｍｓ　（１：　１　）
で溶出し、１゜ ２０ｆずつ分画した。抗菌活性を示す分画Ｎ１６〜Ｉｂ
３０ｔでを集め、イオン交換樹脂ｆＲＡ−４１０（ｏｗ
型）で中和後、減圧濃縮し、凍結乾燥してＡＳＥ−９の
淡黄色粉末１６５１ｑを得た。収率は２２％であつ九。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の抗生物質ＡＳＥ−９の紫外部吸収スペ
クトル、第２図は同赤外部吸収スペクトル、第３図は同
核磁気共鳴スペクトル（水素核）である。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性質を有する抗生物質 ＡＳＥ−９及びその酸付加塩。 （１）元素分析値 Ｃ：約５４％、Ｈ：約７．３％、Ｎ：約１２％、Ｓ：約
   ０．０３％（２）分子量 ６６００（グルろ過法） （３）融点 ２４０〜２４２℃（分解） （４）比旋光度 〔α〕Ｄ＾２＾５＿Ｄ−１４．５°（ｃ＝１、Ｈ＿２Ｏ
   ）（５）紫外部吸収スペクトル（水溶液） 第１図 （６）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図 （７）溶解性 水に可溶。メタノールに微溶。酢酸エチル、クロロホル
   ム、ベンゼンに不溶。 （８）塩基性、酸性、中性の区別 塩基性 （９）物質の色及び性状 淡黄色粉末 （１０）呈色反応 過マンガン酸カリウム脱色反応、ニンヒド リン反応は陽性。 モーリツシユ反応、エルソンモルガン反応 は陰性。 ２、サツカロポリスポラ属に属する抗生物質ＡＳＥ−９
   生産菌を培養し、その培養物から抗生物質ＡＳＥ−９を
   採取することを特徴とする抗生物質ＡＳＥ−９の製造法
   。 ３、抗生物質ＡＳＥ−９生産菌がサツカロポリスポラ・
   スピーシズ（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　ｓ
   ｐ．）ＡＳＥ−９株（微工研菌寄第７９１６号）である
   特許請求の範囲第２項記載の製造法。