JPS61111696A - 新規な抗生物質ｌ１１−１及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規な抗生物質Ｌｌｌ−１及びその製造法に関
する。

〔従来の技術〕

従来、放線菌が主題するトリエン系抗生物質としてはク
ロモトリエニン（Ｃｈｒａｎｏｔｒｉｅｎｉｎ　）（Ａ
ｎｔｉｂｉｏｔｉｋｉ　、　Ｖｏｌ、２０　、９７３−
９７８（１９７５））、マイコトリエニン （Ｍｙｃｏｔｒｉｅｎｉｎ　）　Ｉ：　Ｊ、　Ａｎｔｉ
ｂｉｏｔ、　ｔ　Ａ　２０　ｔ３２９−３３３（１９６
７））、レゾスタフイ　リン（Ｒｅ＋ｒｉｓｔａｐｈｙ
ｌｉｎ　）　（Ｊ、人ｕｔｉｂｉｏｔ、　　ｒＶｏＣ２
４，３９３−３９６（１９７１））、う、ｅミシン（Ｒ
ａｐａｍｙｃｉｎ　）　（Ｊ、　Ａｎｃｉｂｉｏｔ、　
ｅＶｏｊ、２８，７２１−７２６（１９７５））、ト　
リ　エン（Ｔｒｉｅｎ　　）（人ｎｔｌｂｉｏｔｉｋｉ
　　、Ｖｏｌ−１７，７３８−７４２（１９７２）：ｌ
　　、　　　ト　　リエニン（Ｔｒｉｅｎｉｎｅ　）　
（Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔ、　ａ　Ｖｏｉ２１．６１１
−６１５（１９６８））、ＭＭ８ＣＮａｔｕｒｅ、Ｖｏ
ｊ、２０６，３９９−’４００（１９６５））、　１３
１　−１　（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｋｉ　＊ＶｏＣ１９，
９９−１０４（１９７４）：）等が仰られている。しか
しながら、これらのトリエン系抗生物質は、主に抗カビ
活性を有しているにすぎない。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は医療用として有用な新規抗生物質ｆｒ、得るこ
とを目的とする。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは新規な抗生物質を得べく目然昇から多くの
微生物を分離し、その生産物の生物学的性質を調べたと
ころ、三亘県亀山市の畑土壌より分離した微生物がスト
レプトコッカス（５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　）　ｊ
ｌｉに対して特異的な抗菌活性を有する物／Ｘを産生ず
ることを見出した。そして該培養物から、この抗菌活性
物質を分離精製し、その理化学的性質を調べた結果、後
述の如く、これまでの公知化合物と異なる諸性質を有す
ることから、この物質は新規化合物であると判断し、抗
生物質Ｌｌｌ−１と命名した。

本発明は斯かる新知見に基いて完成されたもので、新規
な抗生物質Ｌ１１−１及びその製造法を提供するもので
ある。

本発明者らによって分離された抗生物質Ｌｌｌ−１を産
生する菌株は次の歯学的性質を有する。

幻　形態的％徴 Ｌｌｌ−１株はスターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ培地
４　）　（Ｉｎｔｅｒ、　Ｊ、　Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ、。

ＶｏＣ１６，３１３〜３４０（１９６６）：］上で、２
８Ｃ，１０〜１４日間培養し、観察した所見は次の通り
である。なお、■ＳＰ培地２．３及び５上においてもほ
ぼ同様な形態が観察された。

基生菌糸は曲線状で分校を伴って伸張し、直径０．４〜
０．５μであり、菌糸は分裂せず、胞子を着生しない。

基生菌糸より生じた気菌糸は曲線状で単純分岐ｔ−なし
て伸張し、直径０．４〜０．６μであり、分校の先端に
多数連鎖した胞子を形成する。胞子の連鎖は通常２〜４
回密にまいて螺旋を形成する。胞子の形は楕円体形ない
し短円筒形を呈し、大きさは０、６〜０．８　Ｘ　０．
８〜１．２μであり、胞子の表面は透過型電子顕微鏡で
観察すると、とげ状を呈しており、走査型電子顕微鏡で
、憫察すると、しわ状（ｒｕｇｏｓｅ　）　　を呈して
いる。鞭毛、胞子や胞子のうけ観察されない。

（２）各培地における生育状、態 各種培地上で、２８℃、１４日間培養し、観察した所見
は第１表の通りである。なお、色の表示はＣｏ１ｏｒ　
ＨａｒｍｏｎＦ　Ｍ＆ｎｕａｌ　　第４版１９５８年（
（：：ｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏ
ｆＡｍｅｒｉｃａ　）による色の分類に従った。

す、下余白 Ｃ）生理的性質 ■　生育温度範囲：２０−４５℃ （至適温度範囲２２８℃付近） ■　生育ｐＨ範囲＝６〜８ （至適ｐＨ範囲ニア付近） ■　ゼラチンの液化：陽性 ■　澱粉の加水分解二階性 ■　脱脂牛乳の凝固二＠性 脱脂牛乳のペプトン化：陽性 ■　メラニン様色素の生成：　ＩＳＰ培地６及び７で陽
性 （４）　　炭素源の同化性 Ｌ−アラビノース、Ｄ−７ラクトース、Ｄ−クルコース
、イノシトール、Ｄ−マンニトール、ラフィノース、Ｌ
−９ムノース、シュクロース及びＤ−キシロースの全て
が利用された。

（５）　　菌体組成 り、　Ｂｅａｋｅｒらの方法（Ａｐｐｌ、　Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ、　＋１２．４２１〜４２３（１９６４））に
より分析したシアミノピメリン酸はＬＬ−型が検出され
た。

以上の区学的性質、特に真性の基柱菌糸より多数の胞子
の連鎖を有する気菌糸を形成し、シアミノピメリン酸が
ＬＬ−Ｗであり、鞭毛胞子や胞子のうを形成しないなど
の特徴的性質を有することにより判断すると、本菌株は
ストレプトマイセス属に属する雌株であることは明らか
である〇 よって、本ピ株を公矧のものと区別する几め、ストレｆ
トマイセス・スピーシズ１，１ｌ−１（５ｔｒｅｐｔｏ
Ｗｃｅｓ　　ｓｐ、ＬＸｌ　−１）と命名し、工業技術
院工業技術研究所に受託番号微工研菌寄第７９１７号（
ＦＥＢＭ　Ｐ　−７９１７）として寄託した。

本発明の抗生物質Ｌｌｌ−１は、例えばストレプトマイ
セス属に属する抗生物質Ｌｌｌ−１生童菌を培養し、そ
の培養物から抗生物質Ｌｌｌ−１’を採取することによ
り製造される。

本発明で使用される抗生物質Ｌｌ　１−１生産菌として
は、前述のストレゾトマイセス・スビシーズＬｌｌ−１
があげられるが、放線醒の一般的性状として１学上の性
質は極めて変異し易く、一定したものではなく、自然的
にあるいは通常行われる紫外線照射、放射線層Ｍまたは
変異誘導剤例えば、Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−二ト
ロソクアニゾン、エチルメタンスルホネートなどを用い
る人工的変異手段くより変異することは周矧の事実であ
る。従ってこのような人工変異株は勿論、自然変異株も
含め、ストレプトマイセス属に属し、抗生物質Ｌｌｌ−
１を生産する能力を有する菌株は、すべて本発明に使用
することができる。

本発明方法において、培養は放線菌の培養に一般に用い
られている条件によって行うことができる。

培地としては微生物が同化し得る炭素源、消化し得る窒
素源、さらには必要に応じ、無機塩などを含有させた栄
養培地が使用される。

同化し得る炭素源としては、グルコース、フ９クトース
、マルトース、キシ四−ス、シュクロース、澱粉、ガラ
クトース、グリセリン、糖蜜、デキストリンなどが単独
または組合せて用いられる。消化し得る窒素源としては
コーン・スチーデ・リカー−硫安、ペプトン、酵母、大
豆粉、肉エキス、アミノ酸などが単独ま九は組合せて用
いられる。その他必要に応じてナトリウム塩、カリウム
塩、マグネシウム塩、リン酸塩、その低重金属塩などの
無機塩類が添加される。

培養゛は通常振とりまたは通気攪拌培養などの好気的条
件下で行うのがよく、工業的には深部通気攪拌培養が好
ましい。培地のＰＨは６〜８、特に７付近が好ましい。

培養温度は２０〜４５Ｃ１特に２８’Ｃ付近で行うのが
好ましい。培養時間は液体培養の場合、通常２〜５日で
あるが、培養物中の抗生物質Ｌｌｌ−１の蓄積量は約３
日で最大に達するので、この時点で培養を終了するのが
好ましい。これらの培地組成、培地の液性、培養温度、
攪拌速度、通気性などの培養条件は使用する菌株の種類
や外部の条件などに応じて好ましい結果が得られるよう
に適宜調節、選択されることは言うまでもない。液体培
養において発泡があるときは、クリボン油、植物油、界
面活性剤などの消泡剤が適宜使用される。

このようにして得られた抗生物質Ｌｌｌ−１は生とじて
培養Ｆ液中に含有されるので、培養ｖｌＪを濾過補助剤
、例えばセライ）１．Ｑ−ライト、ハイフロース−ＩＱ
−セルなどを加えて濾過するか、または遠心分離して培
養Ｆ液と菌体とに分離し、その培養Ｆ液から抗生物質Ｌ
ｌｌ　−Ｘｔ−採取するのが有利である。

培養Ｆ液から抗生物質Ｌｌｌ−１ｔ−分離、精製する友
めには、Ｆ液を非親水性有機溶媒、例えば酢酸エチル、
酢酸ブチル、ブタノール、クロロホルム、メチルイソブ
チルケトンなどで抽出し、その抽出物を濃縮すればよく
、斯くすることにより粗底物として抗生物質Ｌｌｌ−１
が得られる。更に精製するには、クリカグル、活性アル
ミナ、活性炭、吸着樹脂例えばＩ（Ｐ−２０等の担体を
用いるカラムクロマトグラフィーが好ましい。溶出溶媒
としては、クロロホルム−メタノール、クロロホルム−
アセトン、酢酸エチル−メタノール、酢酸エチル−アセ
トン、水性アセトン、水性アルコールなどの混合溶媒が
挙げられる。溶出のチェックはピプリオノ９−コランス
を用いるぺ一一一ディスク法ま友はシリカゲル薄層クロ
マトグラフィーにより行うことができる。このよう釦し
て得られた溶出′ｆＬを同一取分を含む７ラクシヨンを
合せ、濃縮することにより精製された抗生物質Ｌｌｌ−
１’に得ることができる。

以上の如くして得られた抗生物質Ｌｌｌ−１は次のよう
な理化学的性質を有する。

く理化学的性質〉 ■　元素分析値 Ｃ：約６５％、Ｈ：約８％ＳＮ：的６．５チ■　分子量 ６３９　（ＦＡＢマススペクトルによる）■融点 ８４〜８６℃（分解） ■　比旋光度 （ｆｆ：ｌｉ　　＋４３．４°（Ｃ：Ｏ−５％、）夕／
−ル）■　紫外部吸収スペクトル ｓ 肩２６７（１４１９）、 １チ ２７７（Ｅ　　５１０）、 ｏＲ １％ ノー２８７（Ｅ　　　　　３８９） １（！ （第１１） （６）　　赤外ｆｌｓａ収スペクトル（ＫＢｒ　ｆＥ　
）３４００．２９５０．１８２０．１６９０，１６４０
．１５８０．１５３０，１４６０．１３８０，１３００
．１２　７０．１２２０，１１８０．１１００．１０４
０．１０００．８５０．８３０譚−１に特徴的な吸収帯
を有する。

（第２図） ■　核磁気共鳴スペクトル（水素核、ＣＤＣｌ３中１０
０ＭＨｚ） 第３図 ■　溶解性 メタノール、エタノール、ブタノール、酢酸エチル、ア
セトン、クロロホルムに可溶。水、フクロヘキサン、石
油エーテルに不溶。

■　酸性、塩基性、中性の区別 中　　性 ［相］　物質の色及び性状 白色粉末 ■　呈色反応 過マンガンばカリウム脱色反応、フェーリング反応およ
びトレン反応は陽性。ニンヒドリン反応、塩化鉄反応お
よび坂口反応は陰性。

■　薄層クロマトグラフィー（東京化成製シリカゲルｆ
） 展開溶媒　　　　　　　　　　　Ｒｆ値クロロホルム：
メタノール（１００：６）　　　０．２６クロロホルム
：アセトン　（１０：４）　　　０．１０酢酸エチル　
：メタノール（２０：１）　　　０．４２□□□分子式 Ｃ３Ｓ　Ｆｕｎ　Ｎｓ　Ｏｓと推定される。

上記理化学的性質から、本発明の抗生物質Ｌｌｌ−１は
前記公矧のレジスタフィリン（分子量＝５０４、分子式
：　Ｃ＊ａ　Ｈｓｓ　Ｎｚ　Ｏｓ　）と同様、紫外部吸
収スペクトルにおいて２３３ｎｍ、　２６７　ｎｍ〜２
７７ｎｍ、２８７ｎｍ付近に吸収を有しており、トリエ
ン系抗生物質と予想される。ま几赤外部吸収スペクトル
においてもレジスタフィリンと同様に１８２０ｃＩｎ−
’　　付近に４員壌ラクトンのカルボニル基及びｌ　６
９０ｏｎ号、１６４０　　ａｎ−”付近にアミドグルー
ゾに由来する強い吸収を有している。

しかしながら、レジスタフィリンは９００　　ｏｎ−’
付近に強い吸収を有しているが、抗生物／ＸＬｌ　１−
１には９　Ｑ　Ｑ　　ｃｍ−”に相当する１及収がなく
、かわりに８３０　ロー１に強い吸収を有している。

また核磁気共鳴スペクトルにおいても、抗生物質Ｌｌｌ
−１は２．４　ｐｐｍにＮ−ＣＲ２に由来する強いピー
クを有しているが、レジスタフィリンには２．４ｐｐｍ
にピークがない。さらに分子量、推定分子式においても
、本発明の抗生物質Ｌｌｌ−１とレジスタフィリンは明
瞭に区別でき、新規な化合物である。

〔作　用〕

本発明の抗生物質Ｌｌｌ−１の各種微生物に対する最少
発育阻止譲度（ＭＩＣ）は第２表の通りである。

以下余白 第２表 〔発明の効果〕 第２表の如く、本発明の抗生物質Ｌｌｌ−１はダラム陽
性菌、特にストレプトコツカス属に対しオ強い抗菌活性
を示しており、ストレプトコツカス属に起因する動物又
はヒトにおける諸疾患に河する治療又は予防剤として有
用である。

〔実施例〕

次に実施力を挙げて不発明を具体的に説明するが、これ
により本発明を限定するものではない。

実施力１ ストレプトマイセス・スピーシズＬｌｌ−１株（微工研
困Ｗ第７９１７号）の斜面培地から一白金耳を取り、１
００ｍ１の糎培地（グルコース２チ、可溶性画紛２％、
大豆粉２チ、ＮａＣＪ　Ｏ，２５％％酵母エキス０．５
％、ＣａＣＯ５Ｏ，３５う、ｐ）ｉ６．５）’を入れ７
Ｃ５００１ｎｌ＄三角フラスコに接種し、２８℃で３日
間振盪培養して種母とした。この種母をグリセリン３％
、可溶性Ｕ粉０．５％、Ｃ３Ｌ０．５％、肉エキス０．
５慢、？リペデトン０．５％、ＮａＣ１Ｏ，５％、Ｃｏ
Ｃ１，・６Ｈ２００，００１％（ｐＨ７，０、滅困前）
からなる培地１００ゴを入れた５　００　ｍｌ答三角フ
ラスコに３％接ａｉｌＬ、２８℃で３日間振盪培養した
。この様にして得た層誉散１０！ｔを濾過して一体を除
き、Ｆ液８ｊを得た。これｔｌ−回数エチル２Ｅで２回
佃比するとＬｌｌ−１吻質は、大部分ｇＦ−故エチェチ
ルノーった。このａｌＥａｉｌ−ｒ−チル層を無水ｍＷ
ナトリウムで脱水した後、減圧濃縮すると、約３？の茶
喝色油状物買を得た。このＬｌｌ−１物買を含有する茶
褐色油状物質３？を９友のクロロホルムに浴かし、クロ
ロホルム：メタノール（１００：４　）にて充填した７
リカダルカラム（２００ｍ／）の上にのせ、上記展開液
を用いてクロマトグラフィーを行う。２０１分画でビブ
リオ・、Ｑ−フランスに対して活性を示す分画Ａ２７〜
５９ｆｔ集め、減圧ｖＪｋ縮すると、純度的７０％のＬ
ｌｌ−１物質の淡黄色４分末１６０　ｑ　を子浄九。

実施例２ 実施例１で侍ｆｃ純度約７０％のＬｌｌ−１物質の淡黄
色粉末１５０叩を少量の酢酸エチルに溶解し、酢酸エチ
ルで充填し几シリカゲルカラム（１５ｏｉ）の上にのせ
、酢酸エチルで展開し、クロマトグラフィー２行う。

１０ｒ分画で分画すると、分画Ａ５９〜９５でシリカゲ
ル薄層クロマトグツフィー（酢酸エチル：メタノール＝
１００：５）に於て、Ｌｌｌ−１物質の単一スピットを
示した。この分画を減圧濃縮すると、白色粉末７２■が
得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の抗生物質Ｌｌｌ−１の紫外部吸収スペ
クトル、８２図は同赤外部吸収スペクトル、第３図は同
核ａ気共鳴スペクト、−（水素核）である。 以上 手続補正書（自発） 昭和６０年１１　月　　１日 昭和、９年特許　　願第２３４４８９号２　発明の名称 新規な抗生物質Ｌｌｌ−１及びその製造法３　補正をす
る者 事件との関係　　　出願人 （主　　所 名　称　東洋醸造株式会社 ６、補正の対象 明細書の「特許請求の範囲」、「発明の詳細な説明」、
「図面の簡単な説明」の欄および図面 ７、　補正の内容 （１）明細書中、特許請求の範囲を別紙の如く訂正する
。 （２明細書中、第７頁第６行及び第７頁第９行「伸張」
とあるを「伸長」と訂正する。 （３）同第９頁、第１表「可溶性色素」の欄第５行 「イエロー・メイプル」とある次Ｋｒ（３０？）」を挿
入する。 （４）　同第１８頁第２行 ｒ６３９（ＦＡＢマススペクトル）」とあるをｒ６８３
（ＦＡＢマススペクトル）第４図」と訂正する。 （５）　　同第２０頁第１４行 ｒ　Ｃｓ５Ｈ４ｅＮｓＣｈ　と推定される。」とあるを
ｒ　Ｃ１ｙＨｓｓＮｓＯｓ　　Ｊと訂正する。 （６ン　同第２７頁第１３行 「（水素核）である。」とあるを「（水素核）、第４図
は同ＦＡＢマススペクトルである。」と訂正する。 （７）別添の第４図を特徴する 特許請求の範囲 １、　下記の理化学的性質を有する抗生物質Ｌｌｌ−１
゜ ■　元素分析 Ｃ：約６５％、Ｈ：約８％、Ｎ：約６．５％■　分子量 ６８３（ＦＡＢマススペクトルによる）■融点 ８４〜８６℃（分解） ■　比旋光度 〔α）”　＋　４３．４°（Ｃ：０．５％、メタノール
）■　紫外部吸収スペクトル 第１図の通シ ■　赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ法）第２図の通り ■　溶解性 メタノール、エタノール、ブタ７−ル、酢酸エチル、ア
セトン、クロロホルムに可溶。水、シクロヘキサン、石
油エーテルに不溶。 ■　酸性、塩基性、中性の区別 中　　性 ■　物質の色及び性状 白色粉末 ■　呈色反応 過マンガン酸カリウム脱色反応、フェーリング反応およ
びトレン反応は１＠性、ニンヒドリン反応、塩化鉄反応
および坂口反応は陰性。 ２、　ストレプトマイセス属に属する抗生物質Ｌｌｌ−
１生産菌を培養し、その培養物から抗生物質Ｌｌｌ−１
を採取することを特徴とする抗生物質Ｌｌｌ−１の製造
法。 ３、　抗生物質Ｌｌｌ−１生産菌がストレプトヤイセス
Ｑスピーシズ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、　）
Ｌｌｌ−１株（微工研菌寄第７９１７号）である特許請
求の範囲第２項記載の製造法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性質を有する抗生物質Ｌ１１−１。 （１）元素分析 Ｃ：約６５％、Ｈ：約８％、Ｎ：約６．５％（２）分子
   量 ６３９（ＦＡＢマススペクトルによる） （３）融点 ８４〜８６℃（分解） （４）比旋光度 〔α〕＾２＾３＿Ｄ＋４３．４°（Ｃ：０．５％、メタ
   ノール）（５）紫外部吸収スペクトル 第１図の通り （６）赤外部吸収スペクトル（ＫＢｒ法） 第２図の通り （７）溶解性 メタノール、エタノール、ブタノール、 酢酸エチル、アセトン、クロロホルムに 可溶。水、シクロヘキサン、石油エーテ ルに不溶。 （８）酸性、塩基性、中性の区別 中性 （９）物質の色及び性状 白色粉末 （１０）呈色反応 過マンガン酸カリウム脱色反応、フェー リング反応およびドレン反応は陽性。ニ ンヒドリン反応、塩化鉄反応および坂口 反応は陰性。 ２、ストレプトマイセス属に属する抗生物質Ｌ１１−１
   生産菌を培養し、その培養物から抗生物質Ｌ１１−１を
   採取することを特徴とする抗生物質Ｌ１１−１の製造法
   。 ３、抗生物質Ｌ１１−１生産菌がストレプトマイセス・
   スピーシズ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ．）Ｌ１
   １−１株（微工研菌寄第７９１７号）である特許請求の
   範囲第２項記載の製造法。