JPS609792B2 - アデノシンモノホスフエ−トデアミナ−ゼ - Google Patents
アデノシンモノホスフエ−トデアミナ−ゼInfo
- Publication number
- JPS609792B2 JPS609792B2 JP2923979A JP2923979A JPS609792B2 JP S609792 B2 JPS609792 B2 JP S609792B2 JP 2923979 A JP2923979 A JP 2923979A JP 2923979 A JP2923979 A JP 2923979A JP S609792 B2 JPS609792 B2 JP S609792B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phosphate buffer
- enzyme
- deaminase
- adenosine monophosphate
- optimum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアデノシンモノホスフェートデアミナーゼ（以
下ＡＭＰデアミナーゼと略記する）に関するものである
。
下ＡＭＰデアミナーゼと略記する）に関するものである
。
ＡＭＰデアミナーゼは別名ＡＭＰアミノヒドロラーゼ、
５′ーアデニル酸デアミナーゼ又はアデニル酸デアミナ
ーゼを称される酵素であって、アデノシンモノホスフェ
ート（以下ＡＭＰと略記する）を加水分解してィノシン
モノホスフェート（以下ＩＭＰと略記する。
５′ーアデニル酸デアミナーゼ又はアデニル酸デアミナ
ーゼを称される酵素であって、アデノシンモノホスフェ
ート（以下ＡＭＰと略記する）を加水分解してィノシン
モノホスフェート（以下ＩＭＰと略記する。
）とアンモニアを生成する反応に関与する。従来のＡＭ
Ｐデアミナーゼは動物組織、特に骨格筋に多く存在し、
心筋、平滑筋、肝臓およびミオシンからも分離されたり
、また血球中に存在することがよく知られている。しか
し、これらの原料から採取した酵素はいずれも不安定で
あって、特に中性からアルカリ性での活性発現が低く、
産業的に利用制限を受ける場合が多い。また動物臓器に
給源を求めた場合、酵素を大量に製造することが困難で
あり、したがって、そのコストが高くなるという欠点が
ある。本発明者等はその給源を微生物に求めて広くスク
リーニングした結果、酵母菌体からＡＭ円デアミナーゼ
を採取する事に成功し、しかもその酵素が従来から知ら
れている動物起源の酵素より作用ｐＨ城が広く、工業的
に利用価値の高いＡＭ円デアミナーゼであることを見出
し、本発明に到達した。
Ｐデアミナーゼは動物組織、特に骨格筋に多く存在し、
心筋、平滑筋、肝臓およびミオシンからも分離されたり
、また血球中に存在することがよく知られている。しか
し、これらの原料から採取した酵素はいずれも不安定で
あって、特に中性からアルカリ性での活性発現が低く、
産業的に利用制限を受ける場合が多い。また動物臓器に
給源を求めた場合、酵素を大量に製造することが困難で
あり、したがって、そのコストが高くなるという欠点が
ある。本発明者等はその給源を微生物に求めて広くスク
リーニングした結果、酵母菌体からＡＭ円デアミナーゼ
を採取する事に成功し、しかもその酵素が従来から知ら
れている動物起源の酵素より作用ｐＨ城が広く、工業的
に利用価値の高いＡＭ円デアミナーゼであることを見出
し、本発明に到達した。
すなわち本発明は少なくとも下記性質｛１１〜‘７｝を
有してなる新規なＡＭＰデアミナーゼである。｛１１
ＡＭＰ＋日２０→ＩＭＰ十ＮＨ３上記のごとくＡＭ円を
加水分解してＩＭＰとアンモニアを生成する。
有してなる新規なＡＭＰデアミナーゼである。｛１１
ＡＭＰ＋日２０→ＩＭＰ十ＮＨ３上記のごとくＡＭ円を
加水分解してＩＭＰとアンモニアを生成する。
■ 分子量が２８００００〜３２００００（ゲル猿過法
）、８００００（ＳＤＳ電気泳動法）である。
）、８００００（ＳＤＳ電気泳動法）である。
【３｝ 至適ｐＨが７．５〜７．８（リン酸緩衝液中）
である。
である。
【４｝ 安定ｐＨが７〜８（リン酸緩衝液中）である。
■ 至適温度３５００付近（リン酸緩衝液中）である。
職 安定温度が４０００以下（リン酸緩衝液中）である
。｛７ー ＡＭＰに対する物値が２×１０‐６Ｍ（ＡＴ
Ｐを含む）である。
職 安定温度が４０００以下（リン酸緩衝液中）である
。｛７ー ＡＭＰに対する物値が２×１０‐６Ｍ（ＡＴ
Ｐを含む）である。
本発明の酵素は酵母を培養し、培養物から採取すること
ができる。
ができる。
本発明に用いる酵母はサッカロマィセス属、ハンゼヌラ
属、クロェケラ属、キャンディダ属、トルロプシス属、
エンドミコプシス属に属するＡＭＰデアミナーゼ生産菌
であればいずれでもよい。
属、クロェケラ属、キャンディダ属、トルロプシス属、
エンドミコプシス属に属するＡＭＰデアミナーゼ生産菌
であればいずれでもよい。
また本発明における酵母の培養形式は液体培養、固体培
養のいずれによってもよく、例えばグルコース、ポリベ
プトンを主栄養源として酵母エキス、麦芽エキス、およ
び若干の無機塩を添加して通気燈拝して酵母を培養する
方法、または亜硫酸パルプ廃液、廃糖密を主原料として
酵母を培養する方法などがある。
養のいずれによってもよく、例えばグルコース、ポリベ
プトンを主栄養源として酵母エキス、麦芽エキス、およ
び若干の無機塩を添加して通気燈拝して酵母を培養する
方法、または亜硫酸パルプ廃液、廃糖密を主原料として
酵母を培養する方法などがある。
さらに製パン用に培養された酵母、ビール製造用に培養
された酵母等も前記方法に培養された酵母と同様に使用
できる。培養条件は一般に培養温度２５〜３５００、好
ましくは３０００付近、培養時間８〜４報時間、好まし
くは１０〜１母時間である。本発明では培養物からＡＭ
Ｐデアミナーゼを採取するに当って、菌体から酵素を溶
出させるいかなる方法を採用してもよい。
された酵母等も前記方法に培養された酵母と同様に使用
できる。培養条件は一般に培養温度２５〜３５００、好
ましくは３０００付近、培養時間８〜４報時間、好まし
くは１０〜１母時間である。本発明では培養物からＡＭ
Ｐデアミナーゼを採取するに当って、菌体から酵素を溶
出させるいかなる方法を採用してもよい。
例えばガラスビーズ、石英砂等で磨砕する方法、トルェ
ンによる自己消化法、界面活性剤、酵母細胞壁溶解酵素
で溶菌させる方法などが利用できる。特にガラスビーズ
を用いて機械的に磨砕する方法が有効である。精製酵素
を得るには、酵素を溶出させた菌体を適当な分解手段で
除去した後、溶出液を直接或いは濃縮後、イオン交換ク
ロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、ゲル様過
法等を用いて行なう。特にフオスフェート・セルローズ
を用いるカラムクロマトグラフィーの応用が有効である
。本発明により得られる酵素は次の性質を有する。｛１
１ 作用 ＡＭ円および水に作用して、ＩＭＰとアンモニアを生成
する。
ンによる自己消化法、界面活性剤、酵母細胞壁溶解酵素
で溶菌させる方法などが利用できる。特にガラスビーズ
を用いて機械的に磨砕する方法が有効である。精製酵素
を得るには、酵素を溶出させた菌体を適当な分解手段で
除去した後、溶出液を直接或いは濃縮後、イオン交換ク
ロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、ゲル様過
法等を用いて行なう。特にフオスフェート・セルローズ
を用いるカラムクロマトグラフィーの応用が有効である
。本発明により得られる酵素は次の性質を有する。｛１
１ 作用 ＡＭ円および水に作用して、ＩＭＰとアンモニアを生成
する。
｛２１ 分子量が２８００００〜３２００００（ゲル猿
過法）、８００００（ＳＤＳ電気泳敷法）である。
過法）、８００００（ＳＤＳ電気泳敷法）である。
■ 至適ｐＨは第１図に示されるように７．５〜７．８
である。
である。
至適ｐＨの測定は５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液中、１
０ｍＭ ＡＭＰ、牛血清ァルブミン（斑Ａ）０．２の９
／羽および酵素を加えて行なった。従来の動物起源のＡ
Ｍｍデアミナーゼは至適ＰＨが６．４または５．９であ
る。
０ｍＭ ＡＭＰ、牛血清ァルブミン（斑Ａ）０．２の９
／羽および酵素を加えて行なった。従来の動物起源のＡ
Ｍｍデアミナーゼは至適ＰＨが６．４または５．９であ
る。
【４’安定ｐＨ‘ま第３図に示されるように７〜８であ
る。
る。
安定ｐＨの測定は４００、２蝿時間、５０ｍＭリン酸カ
リウム緩衝液中あるいは５０ｍＭグリシン−水酸化カリ
ウム緩衝液中にて行なった。第３図中、ｏ−−ｏは５０
ｍＭリン酸カリウム緩衝液中、■−−■は５０ｍＭグリ
シン−水酸化カリウム緩衝液中を示す。【５｝ 至適温
度は第２図に示される通り３５ｏｏ付近である。
リウム緩衝液中あるいは５０ｍＭグリシン−水酸化カリ
ウム緩衝液中にて行なった。第３図中、ｏ−−ｏは５０
ｍＭリン酸カリウム緩衝液中、■−−■は５０ｍＭグリ
シン−水酸化カリウム緩衝液中を示す。【５｝ 至適温
度は第２図に示される通り３５ｏｏ付近である。
至適温度の測定は５０ｍＭリン酸緩衝液（ＰＨ７．８）
中、ｌｏｗＭ ＡＭＦ、既ＡＯ．２雌′の‘および酵素
を加えて行なった。｛６｝ 安定温度は第４図に示され
る通り４０００以下である。
中、ｌｏｗＭ ＡＭＦ、既ＡＯ．２雌′の‘および酵素
を加えて行なった。｛６｝ 安定温度は第４図に示され
る通り４０００以下である。
安定温度の測定は１粉ご間、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．５）中にて行なった。‘７１ＡＭＰに対する物値
は２×１０‐５Ｍ（ＡＴＰを含む場合）また２×１０−
５Ｍ（ＡＴＰを含まない場合）である。
Ｈ７．５）中にて行なった。‘７１ＡＭＰに対する物値
は２×１０‐５Ｍ（ＡＴＰを含む場合）また２×１０−
５Ｍ（ＡＴＰを含まない場合）である。
‘８｝ 金属の影響は第１表に示される通りである。
第１表【９｝ 基質特異性はＡＭＰに対して特異性が高
く、アデニン、アデノシン、ＡＴＰを分解しない。
く、アデニン、アデノシン、ＡＴＰを分解しない。
Ｏ■ ＡＴＰ、アルカリ金属、Ｍず十およびポリアミン
によって活性化される。ＯＵ リン酸により酵素作用が
抑制される。
によって活性化される。ＯＵ リン酸により酵素作用が
抑制される。
本発明において酵素活性は次の方法により測定した。Ａ
ＭＰ２０ｍＭ、塩化カリウム４０ｍＭ、斑ＡＯ．２の９
／私、リン酸緩衝液（ＰＨ７．５）を含む溶液へ酵素を
加えて、３７０で１び分間反応させ、フェノール試薬、
ニトロプルシツド、アンチホルミンを用いるインドフェ
ノール法により生成するアンモニア量に応じて生じた色
素を６３帥ｍで測定した。ＡＭＰデアミナーゼは３７ｑ
Ｃにて１分間に１マイクロモルのアンモニアを生成する
量を１単位とした。本発明のＡＭＰデアミナーゼの性質
は一般に知られている動物起源の酵素よりも作用ｐＨ城
が広いこと、特にアルカリ側に対しても作用域を有する
点で、ＡＴＰ関与のリガーゼとの共役作用による各種生
体成分の定量が可能となり、臨床検査への応用が大きく
改良される。
ＭＰ２０ｍＭ、塩化カリウム４０ｍＭ、斑ＡＯ．２の９
／私、リン酸緩衝液（ＰＨ７．５）を含む溶液へ酵素を
加えて、３７０で１び分間反応させ、フェノール試薬、
ニトロプルシツド、アンチホルミンを用いるインドフェ
ノール法により生成するアンモニア量に応じて生じた色
素を６３帥ｍで測定した。ＡＭＰデアミナーゼは３７ｑ
Ｃにて１分間に１マイクロモルのアンモニアを生成する
量を１単位とした。本発明のＡＭＰデアミナーゼの性質
は一般に知られている動物起源の酵素よりも作用ｐＨ城
が広いこと、特にアルカリ側に対しても作用域を有する
点で、ＡＴＰ関与のリガーゼとの共役作用による各種生
体成分の定量が可能となり、臨床検査への応用が大きく
改良される。
例えば血中遊離脂肪酸を定量する際、ＡＴＰ関与の合成
酵素（アシル・コェンザィムＡ・シンセターゼ）と共に
本発明の酵素を用いることにより、生成するＡＭＰを測
定することができる。次に本発明を実施例により説明す
る。
酵素（アシル・コェンザィムＡ・シンセターゼ）と共に
本発明の酵素を用いることにより、生成するＡＭＰを測
定することができる。次に本発明を実施例により説明す
る。
実施例 １
市販パン酵母（サッカロマィセスセルビシェハンゼンの
培養菌体）２５０夕を等量のリン酸緩衝液（ｐＨ７．５
）に懸濁し、ガラスビーズにて１８分間磨砕した。
培養菌体）２５０夕を等量のリン酸緩衝液（ｐＨ７．５
）に懸濁し、ガラスビーズにて１８分間磨砕した。
遠心分離により上清を採取し、その２５０の‘に硫安１
１Ｍを添加して沈殿部分を回収し、５０の‘の溶液とし
た。続いて透析脱塩後、２５０の【容量のフオスフェー
ト・セルローズ・カラムに負荷し、リン酸緩衝液の濃度
を高めてＡＭＰデアミナーゼを溶出した。この操作を２
回繰返してＡＴＰデアミナーゼを含まない酵素溶液とし
た後、凍結乾燥により５単位／ｍ９の酵素粉末１００の
ｏを得ることができた。収率は１４．７であった。比活
性は３４３単位／雌蛋白で、ＳＤＳ電気泳動で単一ハン
ドとなった。得られた酵素の性質は次の通りである。
１Ｍを添加して沈殿部分を回収し、５０の‘の溶液とし
た。続いて透析脱塩後、２５０の【容量のフオスフェー
ト・セルローズ・カラムに負荷し、リン酸緩衝液の濃度
を高めてＡＭＰデアミナーゼを溶出した。この操作を２
回繰返してＡＴＰデアミナーゼを含まない酵素溶液とし
た後、凍結乾燥により５単位／ｍ９の酵素粉末１００の
ｏを得ることができた。収率は１４．７であった。比活
性は３４３単位／雌蛋白で、ＳＤＳ電気泳動で単一ハン
ドとなった。得られた酵素の性質は次の通りである。
【１’ＡＭＰを加水分解してＭＰとアンモニアを生成す
る。
る。
｛２’分子量が２８００００〜３２００００（ゲル猿過
法）、８００００（ＳＤＳ電気泳動法）、３６００００
（沈降平衡法）｛３｝ 至適ｐＨが７．５〜７．８（リ
ン酸緩衝液中）である。
法）、８００００（ＳＤＳ電気泳動法）、３６００００
（沈降平衡法）｛３｝ 至適ｐＨが７．５〜７．８（リ
ン酸緩衝液中）である。
‘４１ 安定ｐＨが７〜８（リン酸緩衝液中）である。
【５｝ 至適温度が３５ｏＣ付近（リン酸緩衝液）であ
る。【６１ 安定温度が４０ｏｏ以下（リン酸緩衝液中
）である。
る。【６１ 安定温度が４０ｏｏ以下（リン酸緩衝液中
）である。
｛７｝ ＡＭＰに対する舵値が２×１０‐６Ｍである。
図面の簡単な説明第１図は本発明の酵素の至適ｐＨを示
す。
す。
第２図は本発明の酵素の至適温度を示す。第３図は本発
明の酵素の安定ｐＨを示す。第４図は本発明の酵素の安
定温度を示す。第１図 第２図 第３図 第４図
明の酵素の安定ｐＨを示す。第４図は本発明の酵素の安
定温度を示す。第１図 第２図 第３図 第４図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 少なくとも下記性質（１）〜（７）を有してなる新
規なアデノシンモノホスフエートデアミナーゼ。 （１） アデノシンモノホスフエート＋Ｈ＿２Ｏ→イノ
シンモノホスフエート＋ＮＨ＿３ 上記のごとくアデノ
シンモノホスフエートを加水分解してイノシンモノホス
フエートとアンモニアを生成する。 （２） 分子量が２８００００〜３２００００（ゲル濾
過法）、８００００（ＳＤＳ電気泳動法）である。 （３） 至適ｐＨが７．５〜７．８（リン酸緩衝液中）
である。 （４） 安定ｐＨが７〜８（リン酸緩衝液中）である。 （５） 至適温度３５℃付近（リン酸緩衝液中）である
。（６） 安定温度が４０℃以下（リン酸緩衝液中）で
ある。 （７） アデノシンモノホスフエートに対するｋｍ値が
２×１０＾−＾６Ｍ（アデノシントリホスフエートを含
む）である。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2923979A JPS609792B2 (ja) | 1979-03-12 | 1979-03-12 | アデノシンモノホスフエ−トデアミナ−ゼ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2923979A JPS609792B2 (ja) | 1979-03-12 | 1979-03-12 | アデノシンモノホスフエ−トデアミナ−ゼ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55120788A JPS55120788A (en) | 1980-09-17 |
| JPS609792B2 true JPS609792B2 (ja) | 1985-03-13 |
Family
ID=12270679
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2923979A Expired JPS609792B2 (ja) | 1979-03-12 | 1979-03-12 | アデノシンモノホスフエ−トデアミナ−ゼ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS609792B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0716812T3 (da) * | 1994-12-16 | 2001-07-30 | Nestle Sa | Fremgangsmåde til fremstilling af et aromatiserede middel |
| CN1950501B (zh) * | 2004-04-28 | 2012-06-13 | 天野酶株式会社 | 放线菌来源的amp脱氨酶及其应用 |
-
1979
- 1979-03-12 JP JP2923979A patent/JPS609792B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS55120788A (en) | 1980-09-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3912588A (en) | Creatine amidohydrolase in the conversion of creatinine to creatine | |
| JPS6031472B2 (ja) | 酸性ウリカ−ゼ | |
| JPS6013668B2 (ja) | グルタチオン・パ−オキシダ−ゼの製造法 | |
| JPS609792B2 (ja) | アデノシンモノホスフエ−トデアミナ−ゼ | |
| JP4025392B2 (ja) | 耐酸性カタラーゼの製造法 | |
| US4420562A (en) | Method for producing creatinase | |
| JPH02268679A (ja) | １，５―アンヒドログルシトールデヒドロゲナーゼの製造法 | |
| JP3078067B2 (ja) | 耐熱性アデノシン−５’−３リン酸スルフリラーゼ及びその製造法 | |
| JPH02286082A (ja) | キチン分解酵素の分離精製方法 | |
| JPH0998779A (ja) | トレハロース合成酵素、その製法及びそれを用いたトレハロースの製造法 | |
| JPH05236954A (ja) | 耐熱性アデノシン−５’−ホスホスルフェートキナーゼ及びその製造法 | |
| JPS6341558B2 (ja) | ||
| SU994554A1 (ru) | Способ получени метиониназы | |
| JPH0424992B2 (ja) | ||
| JPS6394989A (ja) | アセチルＣｏＡの製造法 | |
| JPH04117281A (ja) | ベタインアルデヒド脱水素酵素の製造方法 | |
| JPS582677B2 (ja) | Ｌ−セリンの製法 | |
| JPS59159777A (ja) | ピルビン酸オキシダ−ゼの製造法 | |
| JPS6023840B2 (ja) | スエヒロタケによるグルコアミラーゼの製造法 | |
| JPS6098982A (ja) | ポリアミン測定用酵素の製造法 | |
| JP3862034B2 (ja) | グルコースの測定方法 | |
| JPH0157959B2 (ja) | ||
| JPS61170386A (ja) | 発酵法によるキサンチン・デヒドロゲナ−ゼの製造法 | |
| JPS63198984A (ja) | アルコ−ルオキシダ−ゼ及びその製造方法 | |
| JPS6019990B2 (ja) | 発酵法によるウリカ−ゼの製造法 |