JPS6042654A - グルコ−スオキシダ−ゼ使用による抗核抗体の免疫組織化学的検査方法 - Google Patents
グルコ−スオキシダ−ゼ使用による抗核抗体の免疫組織化学的検査方法Info
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- JPS6042654A JPS6042654A JP14361883A JP14361883A JPS6042654A JP S6042654 A JPS6042654 A JP S6042654A JP 14361883 A JP14361883 A JP 14361883A JP 14361883 A JP14361883 A JP 14361883A JP S6042654 A JPS6042654 A JP S6042654A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は一般に医学的診断に使用される免疫酵素学的方
法に関し、更に詳細には試料血清中の被検抗核抗体（抗
咳因子＊ ａｎｔｌｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ）の免役組織化学的検査方法に関する。
法に関し、更に詳細には試料血清中の被検抗核抗体（抗
咳因子＊ ａｎｔｌｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｂｏｄｉ
ｅｓ）の免役組織化学的検査方法に関する。
最近の数年間に治療挙上の試験方法の改良のための集中
的研究が益々増加しつつある。該研究の推進における重
要点は伝統旧放射性追跡標識を−そう安全で一層安定な
標識に１置き換えることである。
的研究が益々増加しつつある。該研究の推進における重
要点は伝統旧放射性追跡標識を−そう安全で一層安定な
標識に１置き換えることである。
研究勢力は多数の臨床重鎖検査において充分に成果會あ
げている。例えば抗核抗体（ＡＮＡと略称）の試験にお
いて螢光標識が広く受容されるようｔこなった。螢光標
識は迅速にその成績を与えるけれども多数の検査につい
て完全に満足でおるとは保証されていない、つま９検査
ｑ能状態は一回であってその後の数日又はそれより多い
日数のうちに螢光が薄れるからその使用寿命は着しく萌
られている。史に螢光試験法はその背景領域における汚
染菌の出現（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ）が屡り高度であ
り、これは各種タンノリ１への非特異的結合による自己
螢光にもとづくものである。又螢光試験法は比較的高価
な螢光顕微鏡の使用を要するから成る研究機関にとって
は実行不能でもある。
げている。例えば抗核抗体（ＡＮＡと略称）の試験にお
いて螢光標識が広く受容されるようｔこなった。螢光標
識は迅速にその成績を与えるけれども多数の検査につい
て完全に満足でおるとは保証されていない、つま９検査
ｑ能状態は一回であってその後の数日又はそれより多い
日数のうちに螢光が薄れるからその使用寿命は着しく萌
られている。史に螢光試験法はその背景領域における汚
染菌の出現（ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ）が屡り高度であ
り、これは各種タンノリ１への非特異的結合による自己
螢光にもとづくものである。又螢光試験法は比較的高価
な螢光顕微鏡の使用を要するから成る研究機関にとって
は実行不能でもある。
放射性追跡標識にもとづく試験に代替されるその他の試
験方法は免疫検査法及び免疫組織化学的試験法における
酵素標識の利用であってこれは最近多くの臨床研究機関
によって実施されている。
験方法は免疫検査法及び免疫組織化学的試験法における
酵素標識の利用であってこれは最近多くの臨床研究機関
によって実施されている。
最も普通に使用される酵素は西洋ワサビの・ぜ−オキシ
ダーゼであって多くの組織抗原及び関連抗体の免疫組織
化学的検量方法において標識物として成功裡に使用され
ている。酵素はその寸法が比較的小さく細胞への透過性
が高いことにもとづき電子顕微鏡検査の領域で特別な有
用性を見出している。けれども光学顕微鏡による検査法
においては西洋ワサビのパーオキタダーゼは全く満足で
６ると説明されていないがその理由は生体内での・イー
オ午シダーゼ様の活性の存在を抑制するように企図して
さえも背景領域における汚染像の非特異的出現（ｎｏｎ
ｓｐａｃ目１ｃ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ５ｔａｉｎ
）の頑向を高度に示すことにある。ノ４’−オキシダー
ゼ標識に対するその他の拒絶態様は該酵素の呈色性の改
良のために高度の発癌性物質であるソアミノペンゾジン
の使用を一般に必要とする小実である。この発癌物質の
代替物が開発されたけれどもその対比効果（コントシス
ト）と強度とは充分に満足でない。
ダーゼであって多くの組織抗原及び関連抗体の免疫組織
化学的検量方法において標識物として成功裡に使用され
ている。酵素はその寸法が比較的小さく細胞への透過性
が高いことにもとづき電子顕微鏡検査の領域で特別な有
用性を見出している。けれども光学顕微鏡による検査法
においては西洋ワサビのパーオキタダーゼは全く満足で
６ると説明されていないがその理由は生体内での・イー
オ午シダーゼ様の活性の存在を抑制するように企図して
さえも背景領域における汚染像の非特異的出現（ｎｏｎ
ｓｐａｃ目１ｃ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ５ｔａｉｎ
）の頑向を高度に示すことにある。ノ４’−オキシダー
ゼ標識に対するその他の拒絶態様は該酵素の呈色性の改
良のために高度の発癌性物質であるソアミノペンゾジン
の使用を一般に必要とする小実である。この発癌物質の
代替物が開発されたけれどもその対比効果（コントシス
ト）と強度とは充分に満足でない。
上述の諸点から非特異的背景汚染＠を実質上出現させず
比較的に耐久性ある記録を与え得る簡単で低費用であり
安全性と信頼性とを兼ねる抗核抗体検査方法の決定的必
要性の存在が認識されよう。
比較的に耐久性ある記録を与え得る簡単で低費用であり
安全性と信頼性とを兼ねる抗核抗体検査方法の決定的必
要性の存在が認識されよう。
本発明はこの要求にこたえるものである。
本発明は生体内諸物質に起因する背景汚染像の出現量を
実質的に減すると共に比較的耐久性ある検登記録を与え
る免役組織化学的方法全提供する。
実質的に減すると共に比較的耐久性ある検登記録を与え
る免役組織化学的方法全提供する。
更に本発明で使用される試薬類はその製造費が比較的低
く、室温貯蔵時にも長期にわたって安定であって発癌性
を最少化されている。
く、室温貯蔵時にも長期にわたって安定であって発癌性
を最少化されている。
本発明に従い試料中の被検成分の免疫酵素学的検査方法
が提供されるがこの方法は下記の各工程即ち支持体上に
固定され脱水によυ安に化された抗原供給源と該試料と
全接触させ；グルコースオキシダーゼと接合し該被検成
分と反応し得る抗体と該抗原供給源とを接触させ；グル
コースと呈色試薬混合物とをき有する耐液と該抗原供給
源とを恒温保持し；そして恒晶保持後の抗原供給源の分
析を呈色反りにもとづいて行う諸工程を包含する。
が提供されるがこの方法は下記の各工程即ち支持体上に
固定され脱水によυ安に化された抗原供給源と該試料と
全接触させ；グルコースオキシダーゼと接合し該被検成
分と反応し得る抗体と該抗原供給源とを接触させ；グル
コースと呈色試薬混合物とをき有する耐液と該抗原供給
源とを恒温保持し；そして恒晶保持後の抗原供給源の分
析を呈色反りにもとづいて行う諸工程を包含する。
呈色試薬混合物は好ましくは１−二）ロブルウ？）ラゾ
リウム クロリド（ｔ −ｎｌｔｒｏｂｌｕｅｔｅｔｒ
ａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｌｄｅ ）及びｍ−７エナ
ジンメトサルフエート（ｍ −ｐｈｅｎａｚｉｎｅｍｅ
ｔｈｏｓｕｌｆａｔｅ ）を言み、これは光学顕微鏡下
の分析を可能にする。試料の被検成分が抗核抗体である
ならばガラス製スライド上に同定された抗原供給源は好
適にはＨｅＰ−２細胞群又はラットの腎臓組織であり、
接合抗体はヒトの免疫グロブリンと反応し得るヤギの免
疫グロブリンである。
リウム クロリド（ｔ −ｎｌｔｒｏｂｌｕｅｔｅｔｒ
ａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｌｄｅ ）及びｍ−７エナ
ジンメトサルフエート（ｍ −ｐｈｅｎａｚｉｎｅｍｅ
ｔｈｏｓｕｌｆａｔｅ ）を言み、これは光学顕微鏡下
の分析を可能にする。試料の被検成分が抗核抗体である
ならばガラス製スライド上に同定された抗原供給源は好
適にはＨｅＰ−２細胞群又はラットの腎臓組織であり、
接合抗体はヒトの免疫グロブリンと反応し得るヤギの免
疫グロブリンである。
更に詳細には本発明により背景汚染像を実質的に出現さ
せることなく血清試料中の被検抗核抗体を免疫組織化学
的に検査する方法が提供される。
せることなく血清試料中の被検抗核抗体を免疫組織化学
的に検査する方法が提供される。
この方法は下記の各工程即ちスライド上に固定されアセ
トンで約ｔ℃において脱水処理された核抗原供給源を提
供し；この核抗原供給源と該血清試料とを接触させ；グ
ルコースオキシダーゼと接合し抗核抗体と反に５ Ｌ、
得るヤギ免疫グロブリンと該核抗原（ＪＦ、給源とを接
触させ；β−Ｄ−グルコース、ｔ−ニドロブルウ テト
ラゾリウム及ヒ／−メトキシフエナジ／ メトザル７エ
ートを含有する浴数と該核抗原供給源とを恒温保持し；
そして該核抗原供給源の分析を光学顕微鏡使用下にホル
マザン汚染の存在にもとづいて行う諸工程を包含する。
トンで約ｔ℃において脱水処理された核抗原供給源を提
供し；この核抗原供給源と該血清試料とを接触させ；グ
ルコースオキシダーゼと接合し抗核抗体と反に５ Ｌ、
得るヤギ免疫グロブリンと該核抗原（ＪＦ、給源とを接
触させ；β−Ｄ−グルコース、ｔ−ニドロブルウ テト
ラゾリウム及ヒ／−メトキシフエナジ／ メトザル７エ
ートを含有する浴数と該核抗原供給源とを恒温保持し；
そして該核抗原供給源の分析を光学顕微鏡使用下にホル
マザン汚染の存在にもとづいて行う諸工程を包含する。
本発明の他の態様は固形支持体上に固定された免疫化学
的基質の安定化方法であってこの方法は下記の各工程即
ち該支持体上に固定された基質を提供し；この基質と有
機溶剤とを接触させることにより該基質を実質的に脱水
し；この支持体を保ｍｌ鞘の中にＩＷき：この保護軸に
ガスを充填し；そして該支持体を保護軸内に密封する諸
工程を包含する。
的基質の安定化方法であってこの方法は下記の各工程即
ち該支持体上に固定された基質を提供し；この基質と有
機溶剤とを接触させることにより該基質を実質的に脱水
し；この支持体を保ｍｌ鞘の中にＩＷき：この保護軸に
ガスを充填し；そして該支持体を保護軸内に密封する諸
工程を包含する。
支持体は好ましくけガラス製スライドであって基質Ｆｉ
、Ｈｅｐ−２細胞群又はラット腎臓組織である。
、Ｈｅｐ−２細胞群又はラット腎臓組織である。
有機溶剤はアセトン、メタノール又はそれらの混合物で
あることができ相互作用（即ち接触）工程を約μ〜ｇ℃
において行う。保ｆ！鞘はポリエステルフィルムから成
ることができ、乾燥剤を含有し得る。ガスはチッ素ガス
であることが好ましい。
あることができ相互作用（即ち接触）工程を約μ〜ｇ℃
において行う。保ｆ！鞘はポリエステルフィルムから成
ることができ、乾燥剤を含有し得る。ガスはチッ素ガス
であることが好ましい。
本発明の他の態様及び利点は下文の実施例の記載から明
瞭となろう。但し該例は本発明の原理を開示するための
例示であるｂ 実施例 本発明の実施に有用な出発材料は抗核抗体検査法に適切
に用いられるヒトの上皮細胞群（Ｈ＠ｐ−，２）又はラ
ットの腎臓組織を固定して有するスライドである。これ
らのスライドは多数の供給先（例えばＡｎｔｌｂｏｄｌ
ｅｓ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ 、 Ｄａｖｌｓ 。
瞭となろう。但し該例は本発明の原理を開示するための
例示であるｂ 実施例 本発明の実施に有用な出発材料は抗核抗体検査法に適切
に用いられるヒトの上皮細胞群（Ｈ＠ｐ−，２）又はラ
ットの腎臓組織を固定して有するスライドである。これ
らのスライドは多数の供給先（例えばＡｎｔｌｂｏｄｌ
ｅｓ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ 、 Ｄａｖｌｓ 。
Ｃａ１ｌｆｏｒｎｌａ ｅ及びＢｅｈｒｌｎｇ ｓＬａ
Ｊｏｌｌａ ｅＣａｌｌｆｏｒｎｌａ ）から市販品
として入手され得るか又は常法に従って調製し得る。一
般にこれらのスライドを一λθ℃に貯蔵して劣化を防ぐ
。
Ｊｏｌｌａ ｅＣａｌｌｆｏｒｎｌａ ）から市販品
として入手され得るか又は常法に従って調製し得る。一
般にこれらのスライドを一λθ℃に貯蔵して劣化を防ぐ
。
本発明に従い組織学的等級に適う品質のアセトン、メタ
ノール又はこれらの有機溶剤混合物を含有する浴の中に
上記のスライドを約７０分間浸漬する。浴の温度を約≠
〜約ｒ℃に保つことが好ましい。浴からスライドを取出
してから約２〜３分間空気中で乾燥させる。有機溶剤混
合物との処理による脱水はスライド上の固定された基質
を有意に安定化するけれども操作を継続する場合にはこ
のスライドを約ｊ℃に貯蔵することが好ましい。
ノール又はこれらの有機溶剤混合物を含有する浴の中に
上記のスライドを約７０分間浸漬する。浴の温度を約≠
〜約ｒ℃に保つことが好ましい。浴からスライドを取出
してから約２〜３分間空気中で乾燥させる。有機溶剤混
合物との処理による脱水はスライド上の固定された基質
を有意に安定化するけれども操作を継続する場合にはこ
のスライドを約ｊ℃に貯蔵することが好ましい。
脱水処理後のスライドを保護靴の中に置く。保護靴はポ
リエチレンフィルム例えばアルミニウム外層を有する１
イラパツグ（ＭＹＬＡＲｂａｇｓ ）が好Ｊ −ｔ’
する。このバッグの中に標準乾燥剤を含有する小形の包
装体を置きこのバッグを部分的に密封する。バッグの未
密封１畜所からチッ素ガスを導入してバッグをやや膨ら
ませる８２次にバッグを完全に密封してテラ累ガスの逃
散を防ぐ。
リエチレンフィルム例えばアルミニウム外層を有する１
イラパツグ（ＭＹＬＡＲｂａｇｓ ）が好Ｊ −ｔ’
する。このバッグの中に標準乾燥剤を含有する小形の包
装体を置きこのバッグを部分的に密封する。バッグの未
密封１畜所からチッ素ガスを導入してバッグをやや膨ら
ませる８２次にバッグを完全に密封してテラ累ガスの逃
散を防ぐ。
グルコースオキシダーゼ酵素と接合したヤギ免疫グルプ
リンを次のようにして―製し得る。グルコースオキシダ
ーゼは数ある商業的供給源（例えばＳｌｇｍａ ｔ ｓ
ｔ、 Ｌｏｌｌ！ｌ ｔ ＭｌｓｌＯＵｒｌ を及びＢ
ｏｅｈｒｌｎｇｅｒ Ｍａｎｎｅｈｅｌｍ 、１ｎｄｌ
ａｎａｐｏｌｌｓ 、 Ｉｎｄｌａｎａ）から入手され
るがこのグルコースオキシダーゼを約／、２η／−の濃
度で蒸留水にとかす。この溶液に対し約θ、、２ｍ／の
０．１Ｍの過ヨウ素酸ナトリウムを加える。混合物を約
２０分間攪拌してから好ましくは／ ｍ Ｍ酢酸ナトリ
ウム緩衝液に対しｐＨ４４ＩＩ−で約７２時間透析する
。透析後のグルコースオキシダーゼ溶液と１ヤギの抗ヒ
ト免疫グロブリン類（ＩｇＧ ｅ ＩｇＡ 及びＩｇＭ
）のＩｇＧフ２クションの約ｒダを含有するｐＨ９ｊ
のｌ−の０．０ ／ Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液１とを
混合する。約２時間の攪拌後に１約≠Ｉｎ９／−のナト
リウムポロハイトレー） （ｓｏｄｉｕｍ ｂｏｒｏｈ
ｙｄｒａｔｅ ）の水溶液ヲ言む０．／−の水溶液１を
加える。この反応（ｔ℃で約２時間）の終了後に全混合
物をケ°ルｔ４過コラム〔ｖｌｌえばｐｈａｒｍａｃｌ
ａ ｌ Ｐｌｓｃａｔａｗａｙ ＃ Ｎｅｗ ＪｅｒＳ
ｅ’Ｊから入手可能の５ｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ −３０
０（ｍ種名）〕を用いてクロマトグラフ処理し得る。か
ようにして酵素−ＩｇＧ接合物を含有するフラクション
を貯蔵する。次にこの貯蔵物を滴定して操作に必要な希
釈率を決定する。
リンを次のようにして―製し得る。グルコースオキシダ
ーゼは数ある商業的供給源（例えばＳｌｇｍａ ｔ ｓ
ｔ、 Ｌｏｌｌ！ｌ ｔ ＭｌｓｌＯＵｒｌ を及びＢ
ｏｅｈｒｌｎｇｅｒ Ｍａｎｎｅｈｅｌｍ 、１ｎｄｌ
ａｎａｐｏｌｌｓ 、 Ｉｎｄｌａｎａ）から入手され
るがこのグルコースオキシダーゼを約／、２η／−の濃
度で蒸留水にとかす。この溶液に対し約θ、、２ｍ／の
０．１Ｍの過ヨウ素酸ナトリウムを加える。混合物を約
２０分間攪拌してから好ましくは／ ｍ Ｍ酢酸ナトリ
ウム緩衝液に対しｐＨ４４ＩＩ−で約７２時間透析する
。透析後のグルコースオキシダーゼ溶液と１ヤギの抗ヒ
ト免疫グロブリン類（ＩｇＧ ｅ ＩｇＡ 及びＩｇＭ
）のＩｇＧフ２クションの約ｒダを含有するｐＨ９ｊ
のｌ−の０．０ ／ Ｍ重炭酸ナトリウム緩衝液１とを
混合する。約２時間の攪拌後に１約≠Ｉｎ９／−のナト
リウムポロハイトレー） （ｓｏｄｉｕｍ ｂｏｒｏｈ
ｙｄｒａｔｅ ）の水溶液ヲ言む０．／−の水溶液１を
加える。この反応（ｔ℃で約２時間）の終了後に全混合
物をケ°ルｔ４過コラム〔ｖｌｌえばｐｈａｒｍａｃｌ
ａ ｌ Ｐｌｓｃａｔａｗａｙ ＃ Ｎｅｗ ＪｅｒＳ
ｅ’Ｊから入手可能の５ｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ −３０
０（ｍ種名）〕を用いてクロマトグラフ処理し得る。か
ようにして酵素−ＩｇＧ接合物を含有するフラクション
を貯蔵する。次にこの貯蔵物を滴定して操作に必要な希
釈率を決定する。
本発明の他の態様に従い上記の諸試薬の使用下に抗核抗
体検査法を次のようＫして遂行する。少量の血清試料又
はその他の供試溶液とスライド上の同定された核抗原供
給源とを接触させる。室温下約３０分間接触の後にリン
酸塩緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕずずｅｒｅ
ｄ １ａｌｉｎｅ ） （ｐｕｓ ） を用いてスライ
ドから血清試料を洗去し、次に冷ＰＢＳ溶液中に約７０
分間浸漬する。スライドをｐｓｓから取出して過剰の水
分を吸取紙で吸取る。
体検査法を次のようＫして遂行する。少量の血清試料又
はその他の供試溶液とスライド上の同定された核抗原供
給源とを接触させる。室温下約３０分間接触の後にリン
酸塩緩衝食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕずずｅｒｅ
ｄ １ａｌｉｎｅ ） （ｐｕｓ ） を用いてスライ
ドから血清試料を洗去し、次に冷ＰＢＳ溶液中に約７０
分間浸漬する。スライドをｐｓｓから取出して過剰の水
分を吸取紙で吸取る。
少量、好ましくは約Ｊ’ ｏ ｐｔ、の酵素−ＩｇＧ接
合物と抗原供給源とを約３θ分間室温下に接触させる。
合物と抗原供給源とを約３θ分間室温下に接触させる。
このスライドｔ−ＰＢｓで再び洗い、冷ＰＢＳ溶液中に
７０分間浸漬し、取出してから過剰水分を吸取紙で吸取
る。
７０分間浸漬し、取出してから過剰水分を吸取紙で吸取
る。
この時点で呈色試薬を調製してよい。試薬は次の組成を
有する：約２容針のβ−Ｄ−グルー−ス（０，／ Ｍリ
ン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨｌ）、り）／−中７５ｍ９
〕、／容１のｔ−ニトロブルク テトラゾリウム（ｔ−
Ｎｅｔ）［同一緩衝液／−中２ダ］（必要ならばこの試
薬液を部用直前にワットマン／１６／Ｐ紙で１過しても
よい）、及び／容量の／−メトキシフェナジン メトサ
ルフェート（ｍ−ＰＦａｓ３〔同一緩衝液／−中０．
ｆ タ）。好適呈色試薬はｔ −ＮＯＴ と ｍ−ＰＭ
Ｓ とであるがその他の物質をも利用し得る。グルコー
ス分子のベータ型への変旋光を確実とするために上記の
混合物を呈色反応の約７時間前に調製してもよい。
有する：約２容針のβ−Ｄ−グルー−ス（０，／ Ｍリ
ン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨｌ）、り）／−中７５ｍ９
〕、／容１のｔ−ニトロブルク テトラゾリウム（ｔ−
Ｎｅｔ）［同一緩衝液／−中２ダ］（必要ならばこの試
薬液を部用直前にワットマン／１６／Ｐ紙で１過しても
よい）、及び／容量の／−メトキシフェナジン メトサ
ルフェート（ｍ−ＰＦａｓ３〔同一緩衝液／−中０．
ｆ タ）。好適呈色試薬はｔ −ＮＯＴ と ｍ−ＰＭ
Ｓ とであるがその他の物質をも利用し得る。グルコー
ス分子のベータ型への変旋光を確実とするために上記の
混合物を呈色反応の約７時間前に調製してもよい。
上記の呈色試薬の少量、好ましくは約７００μＬＳと抗
原供給、源とを接触させる。スライドをスライド室の中
に置き５５℃で約３０分間恒温保持してホルマザン汚染
（ずｏｒｍａｚａｎ ５ｔａｌｎ ） 全形成させる。
原供給、源とを接触させる。スライドをスライド室の中
に置き５５℃で約３０分間恒温保持してホルマザン汚染
（ずｏｒｍａｚａｎ ５ｔａｌｎ ） 全形成させる。
次にＰ８Ｓ使用により過剰の呈色試薬をスライドから洗
去し、冷ＰＢＳ中に約７５分間浸漬してから吸取紙使用
によシ過剰水分を再び除く。
去し、冷ＰＢＳ中に約７５分間浸漬してから吸取紙使用
によシ過剰水分を再び除く。
次に標準的技法に従いこのスライドを光学顕微鏡下の検
査に供する。即ちグリセロール−ゼラチン載置用媒質を
５５℃の恒温器中に約ｊ〜７０分間層いて液化させ大き
な形の一滴を抗原供給源の上に載せる。次にこの抗原供
給源を被覆片（ｃｏｖｅｒｓｌｉｐ ） で蔽い、この
場合に気泡形成會起妊せないように注意する。
査に供する。即ちグリセロール−ゼラチン載置用媒質を
５５℃の恒温器中に約ｊ〜７０分間層いて液化させ大き
な形の一滴を抗原供給源の上に載せる。次にこの抗原供
給源を被覆片（ｃｏｖｅｒｓｌｉｐ ） で蔽い、この
場合に気泡形成會起妊せないように注意する。
光学顕微鏡下にスライドを検査した時に血清試料中の抗
核抗体の存在は稍拡大された均質の暗色の核を出現させ
、背景°領域中の暗色の汚染を実質的に出現させない。
核抗体の存在は稍拡大された均質の暗色の核を出現させ
、背景°領域中の暗色の汚染を実質的に出現させない。
１文中の記載事項から本発明は抗核抗体検査法において
効果的で低費用で高閲に明瞭な耐久性の記録を達成させ
ることが明かである。更にスライド上に固定された核抗
原供給源は著しく安定であって低温貯蔵を必要としない
。
効果的で低費用で高閲に明瞭な耐久性の記録を達成させ
ることが明かである。更にスライド上に固定された核抗
原供給源は著しく安定であって低温貯蔵を必要としない
。
現在好適とされる具体例を引用して本発明の特別な態様
を詳細に８１】載したのであるが本発明の本旨と範囲と
を逸脱することなく種々に変改を施し得ることは当業技
術者に理解されよう。
を詳細に８１】載したのであるが本発明の本旨と範囲と
を逸脱することなく種々に変改を施し得ることは当業技
術者に理解されよう。
Claims (9)
- （１）試料中の被検成分の免疫酵素学的検査方法におい
て、 支持体上に固定され脱水により安定化された抗原供給源
と該試料とを接触させ；グルコースオキシダーゼと接合
し該被検成分と反応し得る抗体と該抗原供給源とを接触
させ；グルコースと呈色試薬混合物とを含有する溶液と
該抗原供給源とを恒温保持し；そして恒温保持後の抗原
供給源の分析を呈色反応にもとづいて行う各工程を含む
ことを特徴とする上記の方法。 - （２）呈色試薬混合物が１−ニトロプルク テトラゾリ
ウム クロリド及びｍ−ツェナノン メトサルフェート
を本質的に含む特許請求の範囲第１項に記載の方法。 - （３）抗原供給源がＨｅｐ−コ細胞群又はラット腎臓組
織である特許請求の範囲第１項に記載の方法。 - （４）支持体がガラス製スライドである特許請求の範囲
第１項に記載の方法。 - （５） 接合された抗体がヒトの免疫グロブリンと反広
し得るヤギの免疫グロブリンである特許請求の範囲第１
項に記載の方法。 - （６）被検成分が抗核抗体である％奸請求の範囲第１項
に記載の方法。 - （７）分析が光学顕微鏡使用下に行われる特許請求の範
囲第１項に記載の方法。 - （８）固形の支持体上に固定された免疫化学的基質の安
定化方法において、 該支持体上に固定された基質を提供し；この基質と有機
溶剤とを相互作用させることにょ）該基質を実質的に脱
水し；この支持体を保護軸の中に置き；この保護軸にガ
スを充填し；そして該支持体を保護鞘内に密封する 各工程を含むことを特徴とする上記の方法。 - （９）支持体がガラス製スライドである特許請求の範囲
第ｇ項に記載の方法。 叫 基質がＨｅｐ−コ細施群から本質的に成る特許請求
の範囲第ｒ項に記載の方法。 α◇ 有機溶剤がアセト／、メタノール又はそれらの混
合物である特許請求の範囲第を項に記載の方法。 （ＩＩ 接触工程が約弘〜ざ℃において遂行される特許
請求の範囲第を項に記載の方法。 （至）保膿鞘がポリエスルテフイルムでおる特許請求の
範囲第ｇ項に記載の方法。 α◆ 保−鞘が乾燥剤を含有する％許請求の範囲第ｇ項
に記載の方法。 （ト） ガスがチッ素ガスである特許請求の範囲第に項
に記載の方法。 （ｌ 血清試料中の被検抗核抗体の検出に際し背景領域
における汚染像の出現を実質的に防止する免疫組織−化
学的方法において、 スライド上に固定されアセトンで約≠℃において脱水処
理された核抗原供給源を提供し；この核抗原供給源と該
血清試料とを接触させ；グルコースオ千７ダーゼと接合
し抗核抗体と灰石し得るヤギ免疫グロブリンと該核抗原
供給源とヲ接触すセ；β−Ｄ−グルコース、を−二トロ
ツルウ テトラゾリウム及び／−メト午シフエナノン
メトサルフェートを含有する溶液と該核抗原供給源とを
恒温保持し；そして該核抗腺供給源の分析を光学顕ａ鏡
使用下にホルマザン汚染の存在にもとづいて行う 各工程を含むこと全特徴とする上記の方法◇
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14361883A JPS6042654A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | グルコ−スオキシダ−ゼ使用による抗核抗体の免疫組織化学的検査方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14361883A JPS6042654A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | グルコ−スオキシダ−ゼ使用による抗核抗体の免疫組織化学的検査方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6042654A true JPS6042654A (ja) | 1985-03-06 |
Family
ID=15342932
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14361883A Pending JPS6042654A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | グルコ−スオキシダ−ゼ使用による抗核抗体の免疫組織化学的検査方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6042654A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02157657A (ja) * | 1988-12-09 | 1990-06-18 | P C C Technol:Kk | 配糖化した化合物を生産する細胞の検出方法 |
-
1983
- 1983-08-05 JP JP14361883A patent/JPS6042654A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02157657A (ja) * | 1988-12-09 | 1990-06-18 | P C C Technol:Kk | 配糖化した化合物を生産する細胞の検出方法 |
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