JPS61275655A - 腫瘍結合標識ｐ５３を検出するための免疫組織化学分析方法 - Google Patents
腫瘍結合標識ｐ５３を検出するための免疫組織化学分析方法Info
- Publication number
- JPS61275655A JPS61275655A JP11772886A JP11772886A JPS61275655A JP S61275655 A JPS61275655 A JP S61275655A JP 11772886 A JP11772886 A JP 11772886A JP 11772886 A JP11772886 A JP 11772886A JP S61275655 A JPS61275655 A JP S61275655A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tissue
- analysis method
- contacting
- slide
- immunohistochemical analysis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
- G01N33/567—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds utilising isolate of tissue or organ as binding agent
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分舒〉
本発明は腫瘍結合標識を検査するための方法に関し、更
に詳しくはこの目的のための免疫組織化学的方法に関す
る。
に詳しくはこの目的のための免疫組織化学的方法に関す
る。
〈従来の技術〉
ｐ５３と命名される腫瘍結合標識もしくは抗原はレーン
（Ｌａｎｅ）らによって動物の腫瘍中で始めて見出され
た［ Ｎａｔｕｒｅ ２７８： ２６１−２６３ （１
９７９） ；デ・レオ（Ｄｅ Ｌｅｏ） らのＰｒｏ
ｅ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ７６：２
４２０−２４２４ （１９７９） ］。９５５３分は５
３．３００ダルトンの分子量をもつリン蛋白であり、腫
瘍細胞の植生に通常見出される。ロッター（Ｒｏｔｔｅ
ｒｌ らは９５３に対して陽である腫瘍が進化する傾向
があるのに対して、ｐ５３に対して陰である腫瘍は退化
する傾向があることを発見した［ Ｉｎｔ、 Ｊ、 Ｃ
ａｎｃｅｒ ３１： ３１５−３２０ （１９８３）
］。また、細胞核中のｐ５３の存在は正常細胞から腫瘍
状態への変態の指標になりうる。
（Ｌａｎｅ）らによって動物の腫瘍中で始めて見出され
た［ Ｎａｔｕｒｅ ２７８： ２６１−２６３ （１
９７９） ；デ・レオ（Ｄｅ Ｌｅｏ） らのＰｒｏ
ｅ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ７６：２
４２０−２４２４ （１９７９） ］。９５５３分は５
３．３００ダルトンの分子量をもつリン蛋白であり、腫
瘍細胞の植生に通常見出される。ロッター（Ｒｏｔｔｅ
ｒｌ らは９５３に対して陽である腫瘍が進化する傾向
があるのに対して、ｐ５３に対して陰である腫瘍は退化
する傾向があることを発見した［ Ｉｎｔ、 Ｊ、 Ｃ
ａｎｃｅｒ ３１： ３１５−３２０ （１９８３）
］。また、細胞核中のｐ５３の存在は正常細胞から腫瘍
状態への変態の指標になりうる。
クララフォード（Ｃｒａｗｆｏｒｄ）ら［Ｉｎｔ、 Ｊ
、 Ｃａｎｃｅｒ３０： ４０３−４０８（１９８２）
］およびベンチモル（Ｂｅｎｅｈｉ−ｍｏｌ） ら［
ＥＭＢＯＪ、 １： １０５５−１０６２（１９８２
）］は固相放射能免疫分析および免疫沈澱分析を使用し
て、乳ガン患者の血清中に９５３に対する抗体が存在す
ることを見出した。更に、クララフォードらは乳ガン血
清中のｐ５３の存在は転移疾患の徴候であるうろことを
示唆している。
、 Ｃａｎｃｅｒ３０： ４０３−４０８（１９８２）
］およびベンチモル（Ｂｅｎｅｈｉ−ｍｏｌ） ら［
ＥＭＢＯＪ、 １： １０５５−１０６２（１９８２
）］は固相放射能免疫分析および免疫沈澱分析を使用し
て、乳ガン患者の血清中に９５３に対する抗体が存在す
ることを見出した。更に、クララフォードらは乳ガン血
清中のｐ５３の存在は転移疾患の徴候であるうろことを
示唆している。
種々の腫瘍細胞培養物中でのｐ５３の検出がこの抗原に
特異な種々の抗体を使用して行われた。たとえばレ−：
／ （Ｌａｎｅ） らのＮａｔｕｒｅ ２７８： ２
８１−２６３（１９７９） ； デ・レオ（Ｄｅ Ｌｅ
ｏ）らのＰｒｏｃ、 Ｗａｔｔ、Ａｃａｄ。
特異な種々の抗体を使用して行われた。たとえばレ−：
／ （Ｌａｎｅ） らのＮａｔｕｒｅ ２７８： ２
８１−２６３（１９７９） ； デ・レオ（Ｄｅ Ｌｅ
ｏ）らのＰｒｏｃ、 Ｗａｔｔ、Ａｃａｄ。
Ｓｅｉ、 ７６： ２４２０−２４２４（１９７９）参
照。モノクロナール抗体もヒトおよびマウスの細胞培養
物からのｐ５３に対して製造された。たとえばトーマス
（Ｔｈｏｍａｓ）らのＶｉｒｏｌｏｇｙ １３１： ５
０２−５１７（１９８３）； ガーネイ（Ｇｕｒｎｅｙ
）らのＪ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３４： ７５２−７１３
３（１９８０）参照。
照。モノクロナール抗体もヒトおよびマウスの細胞培養
物からのｐ５３に対して製造された。たとえばトーマス
（Ｔｈｏｍａｓ）らのＶｉｒｏｌｏｇｙ １３１： ５
０２−５１７（１９８３）； ガーネイ（Ｇｕｒｎｅｙ
）らのＪ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３４： ７５２−７１３
３（１９８０）参照。
これらの従来技術の方法は動物の細胞線中のｐ５３の検
出のための免疫螢光法およびヒトの細胞線中のｐ５３の
検出のための免疫沈澱法を利用するものであったン然し
なから、我々の知る限りにおいて、ｐ５３はヒトの腫瘍
試料またはにトの腫瘍細胞線中で免疫組織化学的方法に
よって集中されたことはなかった。
出のための免疫螢光法およびヒトの細胞線中のｐ５３の
検出のための免疫沈澱法を利用するものであったン然し
なから、我々の知る限りにおいて、ｐ５３はヒトの腫瘍
試料またはにトの腫瘍細胞線中で免疫組織化学的方法に
よって集中されたことはなかった。
〈発明が解決しようとする問題点とそれを解決するため
の手段〉 我々はヒト細胞中の９５３のみならず組織試料中のｐ５
３の検出も可能にする免疫組織化学的ｐ５３の分析法を
開発した。この改良されたｐ５３分析法は従来技術の免
疫螢光分析よりも感度がよくて安定であり且つ免疫沈澱
法よりも実施が簡単である免疫酵素着色法を利用するも
のである。
の手段〉 我々はヒト細胞中の９５３のみならず組織試料中のｐ５
３の検出も可能にする免疫組織化学的ｐ５３の分析法を
開発した。この改良されたｐ５３分析法は従来技術の免
疫螢光分析よりも感度がよくて安定であり且つ免疫沈澱
法よりも実施が簡単である免疫酵素着色法を利用するも
のである。
本発明によれば、ヒトの組織、部分または細胞をガラス
・スライド上に固定して、試料中のｐ５３抗原と反応す
る抗−ｐ５３抗体と共に培養する。９５ｇ抗原／抗体錯
体を次いで酵素−で直接に又は間接に標識した抗ｔｇの
添加によって集中させる。次に、この酵素用の発色性基
質溶液を上記のスライドに加えて発色させる。このスラ
イドを次いで顕微鏡下で検査してｐ５３抗原の存在を示
す特異着色細胞を調べる。
・スライド上に固定して、試料中のｐ５３抗原と反応す
る抗−ｐ５３抗体と共に培養する。９５ｇ抗原／抗体錯
体を次いで酵素−で直接に又は間接に標識した抗ｔｇの
添加によって集中させる。次に、この酵素用の発色性基
質溶液を上記のスライドに加えて発色させる。このスラ
イドを次いで顕微鏡下で検査してｐ５３抗原の存在を示
す特異着色細胞を調べる。
本発明による腫瘍細胞または組織中の９５３を検出する
方法は、検査すべき組織または細胞の調製物をガラス・
スライド上に固定し、固定した組織または細胞をｐ５３
に対する抗体と接触させ、この組織または細胞を酵素で
直接に又は間接に標識した抗ｔｇと接触させ、この組織
または細胞を酵素の存在下で色調変化する発色性指示薬
と接触させ、そしてこのスライドを検査してｐ５３の存
在を調べることから成る。
方法は、検査すべき組織または細胞の調製物をガラス・
スライド上に固定し、固定した組織または細胞をｐ５３
に対する抗体と接触させ、この組織または細胞を酵素で
直接に又は間接に標識した抗ｔｇと接触させ、この組織
または細胞を酵素の存在下で色調変化する発色性指示薬
と接触させ、そしてこのスライドを検査してｐ５３の存
在を調べることから成る。
本発明の目的にとって、「酵素で直接に標識した抗Ｔｇ
ＪとはＩｇに対する抗体がネイケン（Ｎａｋａｎｅ）ら
の方法［Ｊ、 ｔ（ｉｓｔｏｅｈｅ＋＊、 Ｃｙ、ｔｏ
ｅｈｅｍ、 ２２： １０８４−１０９１ （１９７４
） ］のような方法によって酵素に結合していることを
意味する。抗Ｉｇ−酵素結合体は１つの試剤を構成する
。「酵素で間接に標識した抗！ｇＪとは抗ｔｇを１つの
試剤として分析物に加え、次いで本発明の分析法におい
て抗Ｉｇに結合する別のＩｇ−酵素試剤を加えることを
意味する。酵素で間接に標識した抗Ｉｇは下記の実施例
１に示す。
ＪとはＩｇに対する抗体がネイケン（Ｎａｋａｎｅ）ら
の方法［Ｊ、 ｔ（ｉｓｔｏｅｈｅ＋＊、 Ｃｙ、ｔｏ
ｅｈｅｍ、 ２２： １０８４−１０９１ （１９７４
） ］のような方法によって酵素に結合していることを
意味する。抗Ｉｇ−酵素結合体は１つの試剤を構成する
。「酵素で間接に標識した抗！ｇＪとは抗ｔｇを１つの
試剤として分析物に加え、次いで本発明の分析法におい
て抗Ｉｇに結合する別のＩｇ−酵素試剤を加えることを
意味する。酵素で間接に標識した抗Ｉｇは下記の実施例
１に示す。
〈実施例〉
以下の実施例は本発明によろｐ５３分析法を具体的に説
明するためのものである。
明するためのものである。
塞ａｎ ｉ
この実施例は本発明の分析法を行うための好ましい操作
法を示す。
法を示す。
１、 顕微鏡スライド正荷電ポリマー溶液たとえば蒸留
水１＠ｊ当たり１００μｇのポリ−１−リジン（分子量
ａｏ、 ｏｏｏ〜７０．０００）の溶液で５分間処理し
てから洗浄および乾燥する。他の正荷電ポリマー溶液た
とえばポリ−１−１ルジニンを使用することもできる。
水１＠ｊ当たり１００μｇのポリ−１−リジン（分子量
ａｏ、 ｏｏｏ〜７０．０００）の溶液で５分間処理し
てから洗浄および乾燥する。他の正荷電ポリマー溶液た
とえばポリ−１−１ルジニンを使用することもできる。
２、 低温装置を使用して試験すべき組織の凍結部分（
６〜８ミクロン）を切断してポリ−１−リジン被覆のス
ライドに移す。この凍結部分の代わりに任意のヒト細胞
または組織を使用することもできろ。
６〜８ミクロン）を切断してポリ−１−リジン被覆のス
ライドに移す。この凍結部分の代わりに任意のヒト細胞
または組織を使用することもできろ。
３ 直ちに、ザンボニ（Ｚａｍｂｏｎｉ）の固定剤のよ
うな固定剤中のスライド上に凍結組織部分を４℃で１０
〜１５分間固定し、ｐＨ７，４の０．ＯＩＭリン酸塩緩
衝食塩水（ＰＢＳ）中で５分間洗い、−２０℃の冷アセ
トン中に１分間入れ、最後にリン酸塩緩衝食塩水中で５
分間づつ２回洗う。
うな固定剤中のスライド上に凍結組織部分を４℃で１０
〜１５分間固定し、ｐＨ７，４の０．ＯＩＭリン酸塩緩
衝食塩水（ＰＢＳ）中で５分間洗い、−２０℃の冷アセ
トン中に１分間入れ、最後にリン酸塩緩衝食塩水中で５
分間づつ２回洗う。
下記の工程４〜１１は１８〜２５℃の室温で行うのが好
ましい。
ましい。
４ リン酸塩緩衝食塩水溶液中の２％以上の正常の血清
を組織部分に加えて１５分間培養する。
を組織部分に加えて１５分間培養する。
過剰の試剤をスライドから除く。
５、 抗−ｐ５３モノクロナール抗体（２％血清／リン
酸塩緩衝食塩水中１： １０に希釈したものが好ましい
）を組織部分に加えて３０分間培養する。
酸塩緩衝食塩水中１： １０に希釈したものが好ましい
）を組織部分に加えて３０分間培養する。
好ましい具体例において、抗−９５３モノクロナ一ル抗
体はマウスから由来したものである。リン酸塩緩衝食塩
水溶液中でそれぞれ５分間づつ２回洗う。
体はマウスから由来したものである。リン酸塩緩衝食塩
水溶液中でそれぞれ５分間づつ２回洗う。
６、 抗−１μ抗体（リン酸塩緩衝食塩水溶液中１８２
０に希釈したものが好ましい）を組織部分に加えて３０
分間培養する。好ましい分析において、抗−Ｉｇ抗体は
抗−ｐ５３抗体の起源の種たとえば抗−マウスＩｇＧ抗
体に対して種特異性である。
０に希釈したものが好ましい）を組織部分に加えて３０
分間培養する。好ましい分析において、抗−Ｉｇ抗体は
抗−ｐ５３抗体の起源の種たとえば抗−マウスＩｇＧ抗
体に対して種特異性である。
７、 パーオキシダーゼ／抗−パーオキシダーゼ（ＰＡ
Ｐ）錯体（好ましくは２％正常血清／リン酸塩緩衝食塩
水中１： ５０に希釈したもの）を組織部分に加えて３
０分間培養する。ここでも好ましい分析において、この
ＰＡＰ錯体ばマウスＰＡＰ錯体のような抗−ｐ５３抗体
と同じ種の起源のものである。リン酸塩緩衝食塩水中で
５分間づつ２回洗う。
Ｐ）錯体（好ましくは２％正常血清／リン酸塩緩衝食塩
水中１： ５０に希釈したもの）を組織部分に加えて３
０分間培養する。ここでも好ましい分析において、この
ＰＡＰ錯体ばマウスＰＡＰ錯体のような抗−ｐ５３抗体
と同じ種の起源のものである。リン酸塩緩衝食塩水中で
５分間づつ２回洗う。
８、 発色性基質溶液を調製する。発色性基質溶液の例
は当業技術において周知であり、ジアミノベンチジン、
アミノエチルカーバゾールおよび４−クロロ−ａ−ナフ
トールがあげられる。好ましい分析において、ジアミノ
ベンチジン（１０ｍｇｌ＋３０％過酸化水素（２０μｌ
） ＋ ＋Ｊン酸塩緩衝水溶液（１６ｍｊ）を発色性
溶液として使用する。組織部分に加えて室温で６分間培
養する。流出しつつある飲料水中で５分間洗う。
は当業技術において周知であり、ジアミノベンチジン、
アミノエチルカーバゾールおよび４−クロロ−ａ−ナフ
トールがあげられる。好ましい分析において、ジアミノ
ベンチジン（１０ｍｇｌ＋３０％過酸化水素（２０μｌ
） ＋ ＋Ｊン酸塩緩衝水溶液（１６ｍｊ）を発色性
溶液として使用する。組織部分に加えて室温で６分間培
養する。流出しつつある飲料水中で５分間洗う。
９ 組織部分を希釈ヘマトキシリン、マラカイトグリー
ン、またはメチレンブルー中で対比染色する。好ましく
は、ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）のへマドキシリン（１：１
０希釈水）を１０分間この組織部分に適用する。流出し
つつある飲料水中で５分間洗う。
ン、またはメチレンブルー中で対比染色する。好ましく
は、ハリス（Ｈａｒｒｉｓ）のへマドキシリン（１：１
０希釈水）を１０分間この組織部分に適用する。流出し
つつある飲料水中で５分間洗う。
ｌＯたとえば、９５％エタノール中に２分間づつ２回、
絶対エタノール中に２分間づつ２回、そしてキシレン中
に２分間づつ２回浸漬することによって組織部分を脱水
する。
絶対エタノール中に２分間づつ２回、そしてキシレン中
に２分間づつ２回浸漬することによって組織部分を脱水
する。
１１、たとえば２５Ｘ１０の倍率でスライドを顕微鏡検
査して特異的に染色された細胞を検出する。
査して特異的に染色された細胞を検出する。
実施例 ２
この実施例はガーネイ （Ｇｕｒｎｅｙ） らによって
ＪＶｉｒｏｌｏｇｙ ３４： ７５２−７６３（１９８
０）に記載されているような、ｐ５３に対するモノクロ
ナール抗体の製造を実証するものである。
ＪＶｉｒｏｌｏｇｙ ３４： ７５２−７６３（１９８
０）に記載されているような、ｐ５３に対するモノクロ
ナール抗体の製造を実証するものである。
１、 Ｂａｌ ｂ／ｃマウスにＳＶ４０変態細胞を注
入する。
入する。
２、 免疫動物からの牌臓細胞を、ポリエチレングリコ
ール１０００を使用して、ガルフレ（Ｇａｌｆｒｅ）ら
のＮａｔｕｒｅ ２６６： ５５０−５５２ （１９７
７）に記載の方法によりネズミ科の骨髄ＮＳＩと融合さ
せる。
ール１０００を使用して、ガルフレ（Ｇａｌｆｒｅ）ら
のＮａｔｕｒｅ ２６６： ５５０−５５２ （１９７
７）に記載の方法によりネズミ科の骨髄ＮＳＩと融合さ
せる。
３ この融合細胞を多重井戸プレート中で２０％子牛脂
児血清、５０μＭハイポキサンチン、５μＭアミノプテ
リンおよび１０μＭチミジンを含むダルベコ（Ｄｕｌｂ
ｅｅｅｏ）の最小必須媒質中で生育させる。
児血清、５０μＭハイポキサンチン、５μＭアミノプテ
リンおよび１０μＭチミジンを含むダルベコ（Ｄｕｌｂ
ｅｅｅｏ）の最小必須媒質中で生育させる。
４ 生育を示しつつある井戸からの培養物上澄液ヲ、エ
ングバル（Ｅｎｇｖａｌｌ）およびパールマン（Ｐｅｒ
ｌｍａｎｎ）らのＪ、 Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０
９： １２９−１３５（１９７２）に記載の酵素結合
免疫吸収分析によって、ｐ５３抗原に対する抗体を調べ
る。
ングバル（Ｅｎｇｖａｌｌ）およびパールマン（Ｐｅｒ
ｌｍａｎｎ）らのＪ、 Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０
９： １２９−１３５（１９７２）に記載の酵素結合
免疫吸収分析によって、ｐ５３抗原に対する抗体を調べ
る。
５ 陽性細胞を軟質寒天中でクローン化して、大きな培
養血中で発展させる。培養上澄液を集め、−２０℃で貯
蔵する。
養血中で発展させる。培養上澄液を集め、−２０℃で貯
蔵する。
実施例 ３
ここに述べるマウスのパーオキシダーゼ／抗−パーオキ
シダーゼ（ＰＡＰ）錯体はスターンバーガー（Ｓｒｅｒ
ｎｂｅｒｇｅｒ） らのＪ、 Ｈｉｓｔｏｅｈｅｍ、
Ｃｙｔｏｃｈｅｍ、１８： ３１５−３３３（１９
７０）に記載の方法に準拠するものである。
シダーゼ（ＰＡＰ）錯体はスターンバーガー（Ｓｒｅｒ
ｎｂｅｒｇｅｒ） らのＪ、 Ｈｉｓｔｏｅｈｅｍ、
Ｃｙｔｏｃｈｅｍ、１８： ３１５−３３３（１９
７０）に記載の方法に準拠するものである。
１ マウスにホースラディツシュ・パーオキシダーゼ（
ＨＲＰＯ）を注入して抗血清を作る。
ＨＲＰＯ）を注入して抗血清を作る。
２、 マウス抗−ＨＲＰＯ血清に室温でＨＲＰＯを接種
する。
する。
３、 えられた沈澱物を１２．０ＯＯＧで４℃において
２０分間遠心分離して冷リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）
で３回洗う。
２０分間遠心分離して冷リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）
で３回洗う。
４゜ 沈澱物をＨＲＰＯ溶液中に再び懸濁させ、次いで
ＩＮの塩酸を使用してｐＨ２，３に調製することによっ
て溶解させろ。
ＩＮの塩酸を使用してｐＨ２，３に調製することによっ
て溶解させろ。
５、 溶液を直ちにＩＮの水酸化ナトリウムを使用して
ｐＨ７，４に中和する。
ｐＨ７，４に中和する。
６、 次に００８Ｎの酢酸ナトリウム（２，７１１１ｊ
）と０１５Ｎの酢酸アンモニウムを加える。
）と０１５Ｎの酢酸アンモニウムを加える。
７、 沈澱物を冷５０％飽和硫酸アンモニウム中で１回
洗う。
洗う。
８、 沈澱物を蒸留水にとかし、酢酸ナトリウム／酢酸
アンモニウム食塩水に対して透析する。
アンモニウム食塩水に対して透析する。
９ 透析溶液を２０．０ＯＯＧで４℃において１６分間
遠心分離して残存沈澱物を除く。
遠心分離して残存沈澱物を除く。
１０ えられたマウスＰＡＰ錯体を分別（小口分け）
して−２０℃で貯蔵する。
して−２０℃で貯蔵する。
宋Ｊす１−」−
この実施例はネイケン（Ｎａｋａｎｅ）らのＪ、旧ｓｔ
ｏｅｈｅｍ。
ｏｅｈｅｍ。
Ｃｙｔｏｃｈｅｍ、 ２２： １０８４−１０９１（１
９７４）に記載の方法のようにして抗−Ｉｇに酵素を結
合させる操作を示・ すものである。
９７４）に記載の方法のようにして抗−Ｉｇに酵素を結
合させる操作を示・ すものである。
１ ホースラディツシュ・パーオキシダーゼ（ＨＲＰＯ
）酵素をｐＨ８，０の０．１Ｍ重炭酸ナトリウム中の過
ヨウ素酸ナトリウムで３０〜３５分間処理することによ
って活性化する。
）酵素をｐＨ８，０の０．１Ｍ重炭酸ナトリウム中の過
ヨウ素酸ナトリウムで３０〜３５分間処理することによ
って活性化する。
２、 ０．ＯＩＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９，５）中で
平衡させたセファデックスＧ−２５（米１ｍニューシャ
ーシー州ピスカタウェイのファーマシア・インコーホレ
ーテッド製）上のようなカラム・クロマトグラフによっ
て、過剰の過ヨウ素酸ナトリウムをＨＲＰＯから除く。
平衡させたセファデックスＧ−２５（米１ｍニューシャ
ーシー州ピスカタウェイのファーマシア・インコーホレ
ーテッド製）上のようなカラム・クロマトグラフによっ
て、過剰の過ヨウ素酸ナトリウムをＨＲＰＯから除く。
３ 活性化したＨＲＰＯを抗−Ｉｇに加えて室温で２時
間培養する。
間培養する。
４ この溶液を水浴中で４℃に冷却する。
５、 ナトリウム・ボロ八イドライドを冷０．ＯＩＭ炭
酸ナトリウム（ｐＨ９，５）中にとかして４℃で１２〜
２４時間かけて抗−Ｉｇ−ＨＲＰ Ｏに加える。
酸ナトリウム（ｐＨ９，５）中にとかして４℃で１２〜
２４時間かけて抗−Ｉｇ−ＨＲＰ Ｏに加える。
６、 この溶液にアセトンを加えて過剰のナトリウム・
ボロ八イドライドを加え、室温で３０分間放置する。
ボロ八イドライドを加え、室温で３０分間放置する。
７ 抗−Ｉｇ−ＨＲＰ Ｏ錯体を蛋白安定化用溶液中で
希釈して一２０℃で貯蔵する。
希釈して一２０℃で貯蔵する。
上記のｐ５３の免疫組織化学的分析法には多くの利点が
ある。第１に、この分析法は殆どの病理学研究室におい
て標準の凍結組織部分を使用して日常作業的に遂行する
ことができる。ポリアクリルアミドゲル電気泳動および
免疫沈澱のような従来の分析（よ臨床研究室中で日常作
業的に遂行されない。第２に、この分析法は高度に安定
な反応生成物を利用する免疫パーオキシダーゼ着色技術
を提供する。それ故、着色試料をｐ５３抗原の集中の損
失なしに数年間貯蔵することができる。他方、免疫螢光
着色試料は集中を保存するために特別の条件下で保存し
なければならない。第３に、この分析法は特別の指示、
訓練または装置なしに容易に行うことができる。
ある。第１に、この分析法は殆どの病理学研究室におい
て標準の凍結組織部分を使用して日常作業的に遂行する
ことができる。ポリアクリルアミドゲル電気泳動および
免疫沈澱のような従来の分析（よ臨床研究室中で日常作
業的に遂行されない。第２に、この分析法は高度に安定
な反応生成物を利用する免疫パーオキシダーゼ着色技術
を提供する。それ故、着色試料をｐ５３抗原の集中の損
失なしに数年間貯蔵することができる。他方、免疫螢光
着色試料は集中を保存するために特別の条件下で保存し
なければならない。第３に、この分析法は特別の指示、
訓練または装置なしに容易に行うことができる。
本発明を特定の具体例について説明したけれども、それ
らの詳細は限定条件と解釈すべきではない。本発明の精
神と範囲を逸脱することなしに種々の均等操作、変化お
よび変形が実施しうろことは明らかだからである。それ
故、このような均等操作は本発明に包含されるものであ
ることを理解すべきである。
らの詳細は限定条件と解釈すべきではない。本発明の精
神と範囲を逸脱することなしに種々の均等操作、変化お
よび変形が実施しうろことは明らかだからである。それ
故、このような均等操作は本発明に包含されるものであ
ることを理解すべきである。
特許出願人 アボット ラボラトリーズ 。
′（
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ヒト細胞または組織の試料中のｐ５３抗原を検出す
るための下記（ａ）〜（ｅ）から成る免疫組織化学分析
方法： （ａ）スライド上にヒト細胞または組織を固定し、（ｂ
）この細胞または組織をｐ５３に対する抗体と接触させ
、 （ｃ）この細胞または組織を酵素で直接または間接に標
識した抗−Ｉｇと接触させ、 （ｄ）この細胞または組織を発色性指示薬と接触させ、
そして （ｅ）ｐ５３の存在についてこのスライドを検査する。 ２、スライドを正荷電ポリマー溶液で予備処理し次いで
細胞または組織を固定剤で処理する特許請求の範囲第１
項記載の免疫組織化学分析方法。 ３、ポリマー溶液がポリ−１−リジンであり、固定剤が
ザンボニ（Ｚａｍｂｏｎｉ）の固定剤である特許請求の
範囲第２項記載の免疫組織化学分析方法。 ４、抗−ｐ５３抗体がマウス抗−ｐ５３モノクロナール
抗体である特許請求の範囲第１項記載の免疫組織化学分
析方法。 ５、抗−Ｉｇが抗−マウスＩｇＧであり、酵素がマウス
のパーオキシダーゼ／抗−パーオキシダーゼ（ＰＡＰ）
錯体である特許請求の範囲第４項記載の免疫組織化学分
析方法。 ６、ｐ５３を検出するための下記（ａ）〜（ｈ）から成
る免疫組織化学分析方法： （ａ）顕微鏡スライドをポリ−１−リジンで処理し、（
ｂ）組織の凍結部分を切断してこれを顕微鏡スライドに
移し、 （ｃ）スライド上の凍結組織をザンボニ（Ｚａｍｂｏｎ
ｉ）の固定剤中で固定し、 （ｄ）この組織をマウス抗−ｐ５３モノクロナール抗体
と接触させ、 （ｅ）この組織を抗−マウスＩｇＧ抗体と接触させ、（
ｆ）この組織をマウスのパーオキシダーゼ／抗−パーオ
キシダーゼ（ＰＡＰ）錯体と接触させ、（ｇ）この組織
を発色性基質溶液と接触させ、そして （ｈ）着色した細胞の存在についてスライドを顕微鏡で
検査する。 ７、発色性基質がジアミノベンチジンと過酸化水素とを
含む溶液である特許請求の範囲第６項記載の免疫組織化
学分析方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73798685A | 1985-05-28 | 1985-05-28 | |
| US737986 | 1985-05-28 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61275655A true JPS61275655A (ja) | 1986-12-05 |
| JP2608707B2 JP2608707B2 (ja) | 1997-05-14 |
Family
ID=24966093
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61117728A Expired - Lifetime JP2608707B2 (ja) | 1985-05-28 | 1986-05-23 | 腫瘍結合マーカーｐ５３を検出するための免疫組織化学検定法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0204922A3 (ja) |
| JP (1) | JP2608707B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02157657A (ja) * | 1988-12-09 | 1990-06-18 | P C C Technol:Kk | 配糖化した化合物を生産する細胞の検出方法 |
| US5541333A (en) * | 1991-12-17 | 1996-07-30 | Abbott Laboratories | Carbazole derivatives |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5281517A (en) * | 1985-11-04 | 1994-01-25 | Cell Analysis Systems, Inc. | Methods for immunoploidy analysis |
| US5134662A (en) * | 1985-11-04 | 1992-07-28 | Cell Analysis Systems, Inc. | Dual color camera microscope and methodology for cell staining and analysis |
| US5008185A (en) * | 1985-11-04 | 1991-04-16 | Cell Analysis Systems, Inc. | Methods and apparatus for the quantitation of nuclear proteins |
| US5362623A (en) * | 1991-06-14 | 1994-11-08 | The John Hopkins University | Sequence specific DNA binding by p53 |
| EP0636248A4 (en) * | 1992-04-14 | 1996-11-13 | Univ Duke | METHOD FOR DETECTING P53 AND HSP70 COMPLEX CONTAINING TUMORS. |
| FR2698367B1 (fr) * | 1992-11-02 | 1995-02-17 | Eurobio Lab | Fragments de la protéine p53 et leurs utilisations dans la détection et le suivi d'états pathologiques. |
| US6140464A (en) * | 1995-06-07 | 2000-10-31 | Ludwig Institute For Cancer Research | Nonapeptides that bind a HLA-A2.1 molecule |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4298590A (en) * | 1975-02-25 | 1981-11-03 | Samuel Bogoch | Detection of malignant tumor cells |
| EP0015473A1 (de) * | 1979-02-28 | 1980-09-17 | F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft | Verfahren zum Immobilisieren von Zellen |
| GB2098730B (en) * | 1981-04-21 | 1985-02-06 | Welsh Nat School Med | Immunolocalisation |
| GB2121417A (en) * | 1982-02-22 | 1983-12-21 | Carlton Med Prod | Antigens and antibodies useful in the detection of cancer |
-
1986
- 1986-04-15 EP EP86105151A patent/EP0204922A3/en not_active Withdrawn
- 1986-05-23 JP JP61117728A patent/JP2608707B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02157657A (ja) * | 1988-12-09 | 1990-06-18 | P C C Technol:Kk | 配糖化した化合物を生産する細胞の検出方法 |
| US5541333A (en) * | 1991-12-17 | 1996-07-30 | Abbott Laboratories | Carbazole derivatives |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0204922A3 (en) | 1987-09-30 |
| EP0204922A2 (en) | 1986-12-17 |
| JP2608707B2 (ja) | 1997-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3043999B2 (ja) | 排泄物検体中のｈ．ピロリ菌のイムノアッセイ | |
| Mason et al. | Alkaline phosphatase and peroxidase for double immunoenzymatic labelling of cellular constituents. | |
| Grauballe et al. | Optimized enzyme‐linked immunosorbent assay for detection of human and bovine rotavirus in stools: Comparison with electron‐microscopy, immunoelectro‐osmophoresis, and fluorescent antibody techniques | |
| JP3673522B2 (ja) | 抗アネキシンｖモノクローナル抗体並びにその利用及びそれを産生するハイブリドーマ細胞系 | |
| Mead et al. | Antitubulin antibody in healthy adults and patients with infectious mononucleosis and its relationship to smooth muscle antibody (SMA). | |
| JPS61275655A (ja) | 腫瘍結合標識ｐ５３を検出するための免疫組織化学分析方法 | |
| Biberfeld et al. | Surface immunoglobulin light chain determinants on normal and PHA-stimulated human blood lymphocytes studied by immunofluorescence and electronmicroscopy | |
| JPS61286757A (ja) | 梅毒の診断法 | |
| DK169571B1 (da) | Monoklont antistof, fremgangsmåde til dets fremstilling, hybridomcellelinie, der producerer antistoffet, fremgangsmåder til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) med antistoffet, samt diagnostisk præparat indeholdende det monoklonale antistof | |
| US4448890A (en) | Detection of human cancer cells with antibodies to human cancer nucleolar antigens | |
| JP3441076B2 (ja) | 妊娠哺乳類の羊膜破壊の検出法 | |
| US4916055A (en) | Detection of human cancer with a monoclonal antibody specific for antigen gp650 | |
| EP0157613A2 (en) | Monoclonal antibodies specific for human basal cell and malignant squamous cell protein, hybridomas therefor, malignancy test methods and diagnostic kits | |
| DK169583B1 (da) | Monoklont antistof, fremgangsmåde til dets fremstilling, hybridomcellelinie, der producerer antistoffet, fremgangsmåde til kvantitativ immunologisk bestemmelse af prokollagen-peptid (type III) med antistoffet, samt diagnostisk præparat indeholdende det monoklonale antistof | |
| Cattaneo et al. | Detection of human proteins in buried blood using ELISA and monoclonal antibodies: towards the reliable species indentification of blood stains on buried material | |
| JP3499875B2 (ja) | 解離性大動脈瘤を検出するための抗体試薬及びその用途 | |
| Aarli | Localization and Properties of an Acid‐Solubl'e Muscle Antigen Reacting with Antibodies in Myasthenia Gravis Sera | |
| JPH0611507A (ja) | ヒトポドカリキシンの測定方法 | |
| JPH02504073A (ja) | ヒトまた動物体液を検査するための方法およびそのための試薬 | |
| JP3709078B2 (ja) | ジアセチルポリアミンの測定法及びキット | |
| JPS60249058A (ja) | Ａｔｌウイルス抗体の測定方法および試薬 | |
| CN100381820C (zh) | 评价受试物质的毛发生长促进活性的方法和试剂盒 | |
| AU647125B2 (en) | Simplified solid-phase immunobead assay for detection of ciguatoxin and related polyethers | |
| JP2878317B2 (ja) | ラミニン測定試薬 | |
| EP0106894B1 (en) | Methods and test kit for diagnosing cancer in humans |