JPS6038656A - 赤血球凝集反応試薬 - Google Patents
赤血球凝集反応試薬Info
- Publication number
- JPS6038656A JPS6038656A JP14711883A JP14711883A JPS6038656A JP S6038656 A JPS6038656 A JP S6038656A JP 14711883 A JP14711883 A JP 14711883A JP 14711883 A JP14711883 A JP 14711883A JP S6038656 A JPS6038656 A JP S6038656A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antigen
- sensitized
- antigens
- red corpuscle
- type
- Prior art date
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- Granted
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/554—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being a biological cell or cell fragment, e.g. bacteria, yeast cells
- G01N33/555—Red blood cell
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は被検液中の２種以上の抗原または抗体を一度の
測定で高感度に検出しうる赤血球凝集反応試薬に関する
。
測定で高感度に検出しうる赤血球凝集反応試薬に関する
。
技術水準
現在、赤血球凝集（ＨＡ）反応試薬としてはＢ型肝炎の
特定試薬、肝ガンのアルファフェトプロティンの判定試
薬等、数々の試薬が作られている。
特定試薬、肝ガンのアルファフェトプロティンの判定試
薬等、数々の試薬が作られている。
これらの試薬は放射能あるいは酵素を用いた高感度試薬
と同様に、簡単でしかも安価に利用できる利点がある。
と同様に、簡単でしかも安価に利用できる利点がある。
ところで従来は試薬の性質上、単品の抗原または抗体物
質について高感度で判定することに重点が置かれており
、赤血球に単品の抗原または抗体物質を感作させた試薬
が用いられていた。
質について高感度で判定することに重点が置かれており
、赤血球に単品の抗原または抗体物質を感作させた試薬
が用いられていた。
しかし、一度の測定結果で症状の進行を判断できるよう
に、数種の抗原物質または抗体物質を検出できる試薬が
められている。また、自然には混合する機会の非當に少
ない抗原物質または抗体物質を併せて検出できるような
試薬を用いて、統一的な判断を正しく得たい場合もある
。
に、数種の抗原物質または抗体物質を検出できる試薬が
められている。また、自然には混合する機会の非當に少
ない抗原物質または抗体物質を併せて検出できるような
試薬を用いて、統一的な判断を正しく得たい場合もある
。
後者の例としては、先述の肝炎の判定の際に、免疫学的
に差を生じないサブタイプを判定できる試薬が該当する
。
に差を生じないサブタイプを判定できる試薬が該当する
。
即ち、例えば、日本・韓国等の東南アジアでは、ａｄタ
イプのＢ型肝炎の表面抗原が多いが、欧米ではａｙタイ
プが多いと言われている。そこでａｄ、 ａｙの両タイ
プの抗原物質または抗体物質を併せて検出できるような
試薬があれば便宜的である。。
イプのＢ型肝炎の表面抗原が多いが、欧米ではａｙタイ
プが多いと言われている。そこでａｄ、 ａｙの両タイ
プの抗原物質または抗体物質を併せて検出できるような
試薬があれば便宜的である。。
従って、本発明は一度に複数の抗原物質または、抗体物
質を高感度に検出しうる試薬を提供することを目的とす
るものであり、その要旨は２種以上の抗原または２種以
上の抗体を赤血球に感作させて成る赤血球凝集反応試薬
にある。
質を高感度に検出しうる試薬を提供することを目的とす
るものであり、その要旨は２種以上の抗原または２種以
上の抗体を赤血球に感作させて成る赤血球凝集反応試薬
にある。
本発明において赤血球に感作される２種以上の抗原物質
としては、同種抗原中の異種サブタイプ抗原群（例えば
、Ｂ型肝炎Ｓ抗原のａｄタイプとａｙタイプ）、あるい
は同一の生理活性を有する蛋白群（例えば、人尿性ウロ
キナーゼと組織プラスミノーゲンアクチベーター）等が
用いられ、また２種以上の抗体物質も上記抗体と同様の
関連性を有するものが用いられることは容易に理解され
るであろう。
としては、同種抗原中の異種サブタイプ抗原群（例えば
、Ｂ型肝炎Ｓ抗原のａｄタイプとａｙタイプ）、あるい
は同一の生理活性を有する蛋白群（例えば、人尿性ウロ
キナーゼと組織プラスミノーゲンアクチベーター）等が
用いられ、また２種以上の抗体物質も上記抗体と同様の
関連性を有するものが用いられることは容易に理解され
るであろう。
この複数の抗原物質を感作させる赤血球は、従来赤血球
凝集反応用として用いられているものが使用でき、特に
動物を選ぶ必要ばないが、安定でしかも感度の高い試薬
を作るためには、ヒツジ、ニワトリ、ヒトのＯ型赤血球
等が望ましい。赤血球は、通常生理食塩水で十分洗浄し
た後、ゲルタールアルデヒド、ホルマリン等で処理して
安定化される。補助的にタンニン酸を用いることもでき
る。赤血球は５−１５μｍ程度のものが好ましい。
凝集反応用として用いられているものが使用でき、特に
動物を選ぶ必要ばないが、安定でしかも感度の高い試薬
を作るためには、ヒツジ、ニワトリ、ヒトのＯ型赤血球
等が望ましい。赤血球は、通常生理食塩水で十分洗浄し
た後、ゲルタールアルデヒド、ホルマリン等で処理して
安定化される。補助的にタンニン酸を用いることもでき
る。赤血球は５−１５μｍ程度のものが好ましい。
かかる赤血球の抗原または抗体による感作は公知の方法
、例えば（医学のあゆみ、 ７８，７５９ （１９７０
））に記載の方法等によって実施することができる。
、例えば（医学のあゆみ、 ７８，７５９ （１９７０
））に記載の方法等によって実施することができる。
赤血球への抗原または抗体の感作は緩衝液中で行うのが
良く、一般には赤血球浮遊液と抗原または抗体含有液を
混合することにより行う。
良く、一般には赤血球浮遊液と抗原または抗体含有液を
混合することにより行う。
ところで、数種の抗原物質または数種の抗体物質を同時
に赤血球に感作させた赤血球の血球凝集反応の感度は、
各々の抗原物質または抗体物質を単独で赤血球に感作さ
せた場合に比べて劣っていることが多い。
に赤血球に感作させた赤血球の血球凝集反応の感度は、
各々の抗原物質または抗体物質を単独で赤血球に感作さ
せた場合に比べて劣っていることが多い。
ところが、まず、任意の一種の抗原物質または抗体物質
を赤血球に感作した後、緩衝液で十分に洗浄し、続いて
次の別種の抗原物質または抗体物質を感作するという操
作を繰り返して得た試薬はすぐれた感度を有することを
、本発明者らは見い出シタ。従って、本発明においては
、任意の一種の抗原または抗体を赤血球に感作させた後
、次の別種のを抗原または抗体を感作するという操作を
繰り返すことが好ましい。本操作は、ｐｌ＋ ５〜８．
５、感作させる抗原物質または抗体物質の濃度（即ち、
蛋白濃度）が、２８０ｒ＋ｍの波長における吸光度が、
０．０５〜０．１となる濃度程度で行う。
を赤血球に感作した後、緩衝液で十分に洗浄し、続いて
次の別種の抗原物質または抗体物質を感作するという操
作を繰り返して得た試薬はすぐれた感度を有することを
、本発明者らは見い出シタ。従って、本発明においては
、任意の一種の抗原または抗体を赤血球に感作させた後
、次の別種のを抗原または抗体を感作するという操作を
繰り返すことが好ましい。本操作は、ｐｌ＋ ５〜８．
５、感作させる抗原物質または抗体物質の濃度（即ち、
蛋白濃度）が、２８０ｒ＋ｍの波長における吸光度が、
０．０５〜０．１となる濃度程度で行う。
感作赤血球は凍結乾燥して、例えばバイアル中に、好ま
しくはナトリウムアジド等の保存剤を添加して、封入し
ておくことが望ましい。
しくはナトリウムアジド等の保存剤を添加して、封入し
ておくことが望ましい。
本発明の赤血球凝集反応試薬は、単一の赤血球に生理活
性においてなんらかの関連性を有する複数の抗体物質ま
たは抗原物質を感作させているので、一度に複数の抗原
物質または抗体物質を検出しうるという効果を有する。
性においてなんらかの関連性を有する複数の抗体物質ま
たは抗原物質を感作させているので、一度に複数の抗原
物質または抗体物質を検出しうるという効果を有する。
以下に、本発明を実施例によって更に具体的に説明する
。
。
実施例１
２％ゲルタール・アルデヒドおよびタンニン酸Ｌｏｎｇ
／ｄｌで処理したヒツジ固定赤血球を充分に洗浄し、終
濃度ｌＯ％へマトクリソト値になるように、高度精製し
たＢ型肝炎のＳ抗原（比活性：■当たりＲＰＩＩ＾値で
ｌ ： ３００００ ）のａｄタイプ−波長２８０ｎｍ
で吸光度０．０５の値にした等量−をＰＨ５，５で混合
し、室温で１２時間攪拌して感作する。終了後、０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，５）で数回、充分に洗浄し、
続いてａｙタイプの同様Ｓ抗原（比活性：■当たりＩ？
ＰＨΔ値でｌ ： ２００００ ）を上記と全く同様の
方法で感作する。感作後充分に全量の１０倍程度の液量
の上記リンｒ！ｔ、緩衝液で６回程度洗浄する。
／ｄｌで処理したヒツジ固定赤血球を充分に洗浄し、終
濃度ｌＯ％へマトクリソト値になるように、高度精製し
たＢ型肝炎のＳ抗原（比活性：■当たりＲＰＩＩ＾値で
ｌ ： ３００００ ）のａｄタイプ−波長２８０ｎｍ
で吸光度０．０５の値にした等量−をＰＨ５，５で混合
し、室温で１２時間攪拌して感作する。終了後、０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，５）で数回、充分に洗浄し、
続いてａｙタイプの同様Ｓ抗原（比活性：■当たりＩ？
ＰＨΔ値でｌ ： ２００００ ）を上記と全く同様の
方法で感作する。感作後充分に全量の１０倍程度の液量
の上記リンｒ！ｔ、緩衝液で６回程度洗浄する。
こうして得られた感作赤血球の性能を調べるためにａｙ
タイプ単独で感作した赤血球と、赤血球凝集反応の比較
を行った。試料は、サブタイプが判明している血漿を用
いた。結果を後記第１表に示す。第１表に示したように
、実施例１の感作赤血球は両サブタイプについて、単独
感作型とほぼ同程度の感度を示だ。
タイプ単独で感作した赤血球と、赤血球凝集反応の比較
を行った。試料は、サブタイプが判明している血漿を用
いた。結果を後記第１表に示す。第１表に示したように
、実施例１の感作赤血球は両サブタイプについて、単独
感作型とほぼ同程度の感度を示だ。
実施例２
２％ゲルタールアルデヒドおよびタンニン酸１２■／ｄ
ｌで処理したヒツジ固定化赤血球を充分に洗浄し、終濃
度１０％へマトクリソト値になるように、高度精製した
人尿性ウロキナーゼ（比活性： ７００００単位／Ｅ２
８０ｎｍ以上）−波長２８０ｎｍで吸光度０．０５の値
にした等量−をρ１１６．５で混合し、室温で１２時間
攪拌して感作する。感作終了後、０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６，５＞で数回、充分に洗浄し、続いて組織より
抽出した後に高度精製した組織プラスミノーゲンアクチ
ベーター（比活性ニア万単位／ Ｅ ２８０ｎｍ以上）
を上記と全く同様の方法で感作する。感作後、充分に全
量の１０倍粉度の液量の上記リン酸緩衝液で６回程度洗
浄する。
ｌで処理したヒツジ固定化赤血球を充分に洗浄し、終濃
度１０％へマトクリソト値になるように、高度精製した
人尿性ウロキナーゼ（比活性： ７００００単位／Ｅ２
８０ｎｍ以上）−波長２８０ｎｍで吸光度０．０５の値
にした等量−をρ１１６．５で混合し、室温で１２時間
攪拌して感作する。感作終了後、０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６，５＞で数回、充分に洗浄し、続いて組織より
抽出した後に高度精製した組織プラスミノーゲンアクチ
ベーター（比活性ニア万単位／ Ｅ ２８０ｎｍ以上）
を上記と全く同様の方法で感作する。感作後、充分に全
量の１０倍粉度の液量の上記リン酸緩衝液で６回程度洗
浄する。
かくして得られた試薬の感度の判定は、人尿性と組織性
の各々のプラスミノーゲンを賦活化する活性物質の力価
を測定することにより行った。その結果、実施例２で作
製した試薬は、単品の抗原を感作させた試薬と同程度の
感度を示した。
の各々のプラスミノーゲンを賦活化する活性物質の力価
を測定することにより行った。その結果、実施例２で作
製した試薬は、単品の抗原を感作させた試薬と同程度の
感度を示した。
風下余白
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ０２種以上の抗原または２種以上の抗体を赤血球に感作
させて成る赤血球凝集反応試薬。 ■抗原がＢ型肝炎Ｓ抗原のａｄタイプおよびＢ型肝炎Ｓ
抗原のａｙタイプの２種である特許請求の範囲第０項記
載の赤血球凝集反応試薬。 ■抗体がＢ型肝炎Ｓ抗原のａｄタイプに対する抗体およ
びＢ型肝炎Ｓ抗原のａｙタイプに対する抗体の２種であ
る特許請求の範囲第０項記載の赤血球凝集反応試薬。 ■抗原がヒト尿性ウロキナーゼおよび組織プラスミノゲ
ンアクチベーターの２種である特許請求の範囲第０項記
載の赤血球凝集反応試薬。 ■抗体がヒト尿性ウロキナーゼの抗体および組織プラス
ミノゲンアクチベーターの抗体の２種である特許請求の
範囲第０項記載の赤血球凝集反応試薬。 ■感作の方法が、複数の抗原または抗体を任意の一種づ
づ順次赤血球に感作させるものであることを特徴とする
特許請求の範囲第■〜■のいずれかの項記載の赤血球凝
集反応試薬。 ■感作条件が、ｐＨ５〜８．５、蛋白濃度が２８０ｎｍ
の波長における吸光度が０．０５〜０．１ トナル濃度
Ｔ：である特許請求の範囲第■〜■のいずれかの項記載
の赤血球凝集反応試薬。 ■赤血球がヒツジ、ニワトリまたはヒト０型赤血球であ
る特許請求の範囲第■〜■のいずれかの項記載の赤血球
凝集反応試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14711883A JPS6038656A (ja) | 1983-08-10 | 1983-08-10 | 赤血球凝集反応試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14711883A JPS6038656A (ja) | 1983-08-10 | 1983-08-10 | 赤血球凝集反応試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6038656A true JPS6038656A (ja) | 1985-02-28 |
| JPH0334589B2 JPH0334589B2 (ja) | 1991-05-23 |
Family
ID=15422934
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14711883A Granted JPS6038656A (ja) | 1983-08-10 | 1983-08-10 | 赤血球凝集反応試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6038656A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH032565A (ja) * | 1989-05-30 | 1991-01-08 | Olympus Optical Co Ltd | 免疫学的分析方法 |
| US5079173A (en) * | 1987-08-19 | 1992-01-07 | Shionogi & Co., Ltd. | Methods, hybridomas, monoclonal antibodies and sensitized cells for measuring hbs antigen |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5821565A (ja) * | 1981-07-31 | 1983-02-08 | Fuji Photo Film Co Ltd | 多種抗体検出用マイクロカプセル及びそれを用いた検出方法 |
-
1983
- 1983-08-10 JP JP14711883A patent/JPS6038656A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5821565A (ja) * | 1981-07-31 | 1983-02-08 | Fuji Photo Film Co Ltd | 多種抗体検出用マイクロカプセル及びそれを用いた検出方法 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5079173A (en) * | 1987-08-19 | 1992-01-07 | Shionogi & Co., Ltd. | Methods, hybridomas, monoclonal antibodies and sensitized cells for measuring hbs antigen |
| JPH032565A (ja) * | 1989-05-30 | 1991-01-08 | Olympus Optical Co Ltd | 免疫学的分析方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0334589B2 (ja) | 1991-05-23 |
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