JPS63106562A

JPS63106562A - 逆受身赤血球凝集反応用試薬

Info

Publication number: JPS63106562A
Application number: JP25307686A
Authority: JP
Inventors: Takeshi Takahashi; 剛高橋; Kazumi Fukuyama; 福山　和美; Yatsuhiro Kamimura; 上村　八尋
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1986-10-23
Filing date: 1986-10-23
Publication date: 1988-05-11

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、ｒｇＭ型抗体で感作した動物赤血球の凍結乾
燥品よりなり、逆受身赤血球凝集反応測定時に陰性像が
大きくなることなく、正確に測定が可能な逆受身赤血球
凝集反応試薬に関する。

〔従来技術〕

逆受身赤血球凝集反応（以下、ＲＰＨＡという）は、抗
体で感作した動物赤血球と検体とを反応させて赤血球凝
集を起こさせ、その赤血球凝集の程度から検体中の抗原
を定量しようとする免疫学的分析法の一種である。

ところで、従来ＲＰＨＡ試薬として用いられる感作赤血
球（抗体で感作した動物赤血球）は、主にＩｇＧ型抗体
で感作されたものが用いられており、凍結乾燥品よりな
るものが試薬として市販されている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

ところが、ＩｇＧ型抗体を使用する場合は凍結乾燥品と
しても安定性等の問題はないが、ＴｇＭ型抗体の場合は
、不安定であり凍結乾燥操作を経たものを使用するとＲ
ＰＨＡ測定時に陰性像が大きくなってしまい、正確に測
定することが困難であることが判明した。

本発明の目的は、陰性像が大きくなることがなく、赤血
球凝集反応を正確に行うことのできるＲＰＨＡ試薬を提
供することである。

〔問題点を解決するための手段〕

そこで、本発明者等はＩｇＭ型抗体による感作赤血球を
凍結乾燥する際の安定化剤について種々検討を重ねて来
たところ、糖または塘アルコールの存在下にＴｇＭ型抗
体感作赤血球を凍結乾燥すると、凍結乾燥時にもＩｇＭ
型抗体感作赤血球が安定であり、かかる凍結乾燥品より
なる試薬は陰性像が大きくなることがなく、正確な測定
を行えることを見出した。

本発明はかかる新知見に基づいて完成されたものであり
、その要旨はＴｇＭ型抗型金体物赤血球に感作して得た
感作赤血球を、糖または糖アルコールから選ばれる少な
くとも一種の安定化剤の存在下に凍結乾燥した凍結乾燥
品よりなる逆受身赤血球凝集反応用試薬である。

本発明で用いるＩｇＭ型抗体は、本発明の目的を達成し
うる限り、特に限定されるものではない。

また、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体のいず
れであってもよい。

ＩｇＭ型抗体としては、ＣＳＬＥＸ１　　（特開昭６１
−６３７００号、抗原＝シアリル化されたＬｅｗｉｓｘ
エピトープ）　、、　Ａｎｔｉ−ＨＢｓ　（抗原＝ｔｌ
Ｂｓ抗原）などが挙げられる。

本発明では安定化剤として、少なくとも糖および糖アル
コールから選ばれる少なくとも一種が使用される。

糖としては、単糖類（例、グルコース、ソルボースナト
）、三糖類（例、マルトース、サッカロースなど）、三
糖類（例、ラフィノースなど）、多ｔＪｇ類（例、デン
プン、デキストリンなど）などが挙げられるが、好まし
くは三糖類が用いられる。

また、糖アルコールとしては、ソルビトール、マンニト
ールなどが挙げられる。

糖および糖アルコールの添加量は、通常感作赤血球５　
ｗ　／　ｖ％当たり１０〜５０ｗ／ｖ％程度であり、好
ましくは２０〜３０Ｗ／Ｖ％程度である。

また、安定化剤として、さらにアルブミンを併用するこ
とが好ましい、アルブミンとしては、牛血清アルブミン
、ヒト血清アルブミンなどが用いられる。アルブミンの
添加量は、通常感作赤血球５　ｗ　／　ｖ％当たり５〜
１０　ｗ／　ｖ％程度であり、好ましくは７〜８　ｗ　
／　ｖ％程度である。

本発明の試薬の調製方法は以下の通りである。

抗体を感作させる赤血球は、特に動物種を選ぶ必要はな
いが、安定でしかも感度の高い試薬をつくるためにはモ
ルモット、ウサギ、ヒツジ、ニワトリ、馬、ヤギ又は、
ヒトの０型赤血球などが望ましい。赤血球は生理食塩水
で充分洗浄した後、ゲルタール・アルデヒド、ホルマリ
ン等の処理で安定化させることが好ましい。

このような赤血球の粒径は、約２０μｍ以下、特に５〜
１５μｍ程度のものが好ましい。

抗体で赤血球を感作するのは自体公知の手段、例えば、
医学のあゆみ、１工、７５９　（１９７０）に記載の方
法で実施することが出来る。

感作に際しては、赤血球と抗体とを緩衝液中で感作させ
るのがよく、一般には赤血球浮遊液と抗体含有液を混合
することにより行う。

本操作は、ｐ１１４〜１０、好ましくはｐＨ６〜８、温
度０〜６０℃、好ましくは２０〜４０’Ｃで行うのがよ
い。

感作赤血球は、上記安定化剤を添加後に、自体既知の手
段で凍結乾燥して、例えばバイアル中に、好ましくはナ
トリウムアジド等のごとき保存剤を添加して、封入して
おくことが好ましい。

〔作用・効果〕

本発明試薬は、抗体としてｒｇＭ型抗体を使用している
にもかかわらず、ＲＰＨＡ測定時に陰性像が大きくなる
こともなく、正確に測定できるものである。

〔実験例・実施例〕

本発明をより詳細に説明するために実験例および実施例
を挙げるが、本発明はこれらにより限定されるものでは
ない。

実験例各種添加剤を用いて、感作赤血球を凍結乾燥する際の安
定化効果を検討した。その調製方法は実施例１に準じた
。

判定は、凍結乾燥しない場合と比べて、陰性像がほぼ同
じであれば＋＋、若干大きくなる程度であれば＋、大き
くなって試薬として不適当であれば−とじた。

結果を第１表に示す。

（以下余白）表１実施例１ヒツジ赤血球をリン酸緩衝液で充分に洗浄後、ゲルター
ルアルデヒドを終濃度０．５　ｗ　／　ｖ％に添加して
約１時間室温処理し、上記緩衝液でゲルタールアルデヒ
ドを除いて固定化赤血球を得た。

５　ｗ　／　ｖ％ヒツジ固定化赤血球懸ｉｉｉにタンニ
ン酸液（１０■／ｄ１生理食塩液）を等量混合し、３゛
７℃で１５分間反応させた。その後タンニン酸処理ヒツ
ジ固定化赤血球（５Ｗ／Ｖ％）とＣＳＬＥＸ１抗体（Ｉ
　ｇＭ型、７０　ｐ　ｇ　／ｍｌ）とを等量混合して、
ｐＨ７，２の条件下、３７℃で１時間反応させ、ＣＳＬ
ＥＸ１抗体感作赤血球を得た。

そして、充分に同上リン酸緩衝液で洗浄した後に当ＳＳ
　ａ作赤血球５　ｗ　／　ｖ％に対して、ソルビトール
を２０　ｗ／ｖ％、牛血清アルブミンを７．５ｗ／Ｖ％
となるように添加した。さらに分注し凍結乾燥すること
により本発明の試薬が得られる。

（測定方法）凍結乾燥後の前記怒作赤血球（本発明試薬）を動物血清
を含有する塩化すｌ−ＩＪウム含有等張化トリス緩衝液
（ｐＨ６，５）に２％以上のヒツジ赤血球ストローマ等
を含むトリス緩衝液で０．５％に調整懸濁し、ＣＳＬＥ
Ｘ１抗原に対する凝集反応をマイクロプレート法で測定
した。

（Ｃ５ＬＥＸＩおよびＡｎｔｉ−１１８ｓの作製）ＣＳ
ＬＥＸ１またはＡｎｔｉ−ＨＢｓを産生するハイブリド
ーマをマウス腹腔に投与して得たマウスの腹水を硫安分
画しグロブリン画分を得た。

このグロブリン画分をゲル濾過法で精製しＩｇＭ画分を
回収して１ｇＭ型のモノクローナル抗体を得た。

手続ネ甫正占（自発）昭和６１年１２月２５日昭和６１年特許願第２５３０７６号２、発明の名称逆受身赤血球凝集反応用試薬３、補正をする者事件との関係　特許出願人氏名（名称）　株式会社　ミドリ十字４、代理人■５４１住所　大阪市東区平野町４丁目５３番地３ニューライフ
平野町４０６号Ｔｈ　（０６）　２２７−１１５６明細書の「発明の詳細な説明」の欄６、補正の内容（１）明細書第８頁の表のの箇所をに訂正する。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ＩｇＭ型抗体を動物赤血球に感作して得た感作赤
血球を、糖または糖アルコールから選ばれる少なくとも
一種の安定化剤の存在下に凍結乾燥してなる凍結乾燥品
よりなる逆受身赤血球凝集反応用試薬。
（２）ＩｇＭ型抗体がＣＳＬＥＸ１又は抗ＨＢｓ抗体で
ある特許請求の範囲第（１）項記載の試薬。
（３）安定化剤としてさらにアルブミンを存在させるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の試薬。