JPS591981B2

JPS591981B2 - ＨＢｓ抗体検出用受身赤血球凝集試験用担体の製造方法

Info

Publication number: JPS591981B2
Application number: JP51102253A
Authority: JP
Inventors: 哲船越; 八尋上村; 恒和福島; 俊彦田中
Original assignee: Green Cross Corp Korea
Current assignee: GC Biopharma Corp
Priority date: 1976-08-27
Filing date: 1976-08-27
Publication date: 1984-01-14
Also published as: JPS5329920A

Description

【発明の詳細な説明】本発明はＨＢｓ抗体検出用試薬の製造方法に関する。

更に詳しくは加熱処理によつて得られる高い特異性を有
し、且つＢ型肝炎ウィルスを不活化した精製ＨＢｓ抗原
で感作された粒状担体を含有させることを特徴とする上
記試薬の製造方法に関するものである。

Ｂ型肝炎の治療、予防に関しては、多くの研究者によつ
て研究が進められているが、これらに対し、患者あるい
は検体中のＨＢＢ抗原あるいはＨＢｃ抗原を検出するこ
とが予防上極めて有効てあり、この目的のために優れた
測定試薬も幾つか完成されている。

ＨＢｃ抗原とＨＢＢ抗原とは最近になつて分類されたも
ので、感染性のあるのはＨＢｃ抗原でＨＢｓ抗原は肝炎
ウィルスの外殼であつて、感染性を有していない。

従来からオーストラリア抗原（ＨＢＡｇ）として測定さ
れていたものは、ＨＢｓ抗原である。し力化肝炎患者そ
の池の血清試料についてＨＢｃ抗原を検出することは極
めて困難で、ＨＢｃ抗体のみか検出できる現状であるの
に反し、ＨＢｓ抗原の測定によつて肝炎ウィルスの存在
を推定できることは、これまで多くの報告によつて明ら
かにされているところである。このように、Ｂ型肝炎感
染の予防、治療の目的でＨＢｓ抗原を検定することは重
要であるが、ＨＢｓ抗原の感作を受けたことによつて産
生されるＨＢｓ抗体を高感度に検定することも、又極め
て重要な臨床予防、治療上の問題である。

すなわち健康人ではＨＢｓ抗体を保持しているかどうか
で、初期感染を受けたことがあるかどうかが判別できる
と共に、感染の危険性を判断する資料を提供し、患者に
あつては、病状の経過を追跡するのに役立つ。又ＨＢｓ
抗原ワクチンの効果判定、あるいはワクチンの必要性な
どの検査に大切である。更に最近になつてＨＢｓ抗体、
ガンマ−グロブリンが、Ｂ型肝炎の治療、予防に有効で
あることが明らかにされたことから、優れたＨＢｓ抗体
の検出法は極めて重要である。ＨＢｓ抗体の検出はオク
タロニ一法、一元免疫拡散法、交叉電気泳動法など各種
の免疫学的方法で簡単に検出することが出来るが、ラジ
オインムノアツセイ法や受身赤血球凝集反応法（以下Ｐ
ＨＡ法と呼ぶ）に比べ、感度が数百分の一から数千分の
一しかなく、著しく高濃度のＨＢｓ抗体しか検出できな
いのが欠点である。

上記のようにＨＢｓ抗体の検出には、ＰＨＡ法が最も優
れた方法の１つであるということは、多くの研究者によ
つて示されてきているところである。

ＰＨＡ法とは、精製したＨＢｓ抗原を化学的処理によつ
て、人０型赤血球、羊赤血球などの動物赤血球に感作し
、これとＨＢｓ抗体との凝集反応をみるものである〔ビ
アス、Ｇ．Ｎ．及びシェルマツ、Ｎ．Ｒ．（Ｖｙａｓ，
Ｇ．Ｎ．ａｎｄＳｈｕｌｍａｎ，Ｎ．Ｒ．）：サイエン
ス（Ｓｃｉｅｃｅ），１７０，３３２，１９７０及び今
井光信、高橋隆、外「受身赤血球凝集反応によるＡｕ抗
体の検出」、医学のあゆみＬ上，７５９，１９７１〕。
しかし、この方法で感作に用いるＨＢｓ抗原浮遊液は極
めて純度の高いものが要求される。

これまでのＰＨＡ法に用いられるＨＢｓ抗原の精製は、
超遠心分離法やアフイニテイクロマトグラフイ一法など
高度の技術を駆使して高純度のものを製造する必要があ
り、設備と技術の面でこれの大量製造は経済的にも極め
て能率が悪いものであつた。

しかしながら、このようにして得られたＨＢｓ抗原の浮
遊液を用いたにしても、なお且つ非特異的凝集を免れな
い状態であり、そのようなＰＨＡ法に適合する高度精製
ＨＢｓ抗原浮遊液を大量に得て、ＰＨＡ試薬を工業規模
で製造することは極めて困難であつた。

一方製造されたＰＨＡ試薬の非特異反応をなくするため
の方法として、ＨＢｓ抗原（オーストラリア抗原）をラ
テツクス粒子に感作後加熱する方法が示されている（特
開昭５１−９７１５号）。

この場合、非特異反応は低減するとしても、精製度の低
いＨＢｓ抗原材料を用いた場合は、やはりその分だけ検
出感度は低く、高度精製ＨＢ８抗原を用いる場合は、や
はり、従来の方法による超遠心分離法など高度技術を駆
使したＨＢｓ抗原の精製方法を採らなければならない。
そこで本発明者らはＰＨＡ法の感作用抗原として望まれ
る非特異的反応性のない、検出感度の高いＨＢｓ抗原浮
遊液を得ることを目的として、種々検討した結果、従来
ＨＢｓ抗原ワクチンの製法として公知の加熱処理をＨＢ
８抗原を含む溶液に施した後、収得したＨＢｓ抗原浮遊
液をＰＨＡ法の感作用抗原として用いれば、従来に無い
優れたＨＢｓ抗体検査用試薬が得られることを見い出し
たのである。

本発明は、従来公知の精製法で得られたＨＢｓ抗原を含
む水溶液を加熱処理し、収得されたＨＢ８抗原浮遊液に
よつて粒状担体を感作することによつてＨＢｓ抗体検出
用試薬の製造方法に関する。本発明において感作処理に
用いられるＨＢｓ抗原を含有する水溶液は人由来のＨＢ
ｓ抗原陽性のプール血漿から得られる。７このＨＢｓ抗原を含有する水溶液は公知精製法によつて
、例えば、硫安分画、エタノール分画、超遠心分画、密
度勾配超遠心分画、アフイニテイクロマトグラフイなど
によつて精製される。

更にこの加熱前処理として水溶液中の人血清成分を除去
する目的で、抗人血清兎ガンマ−グロブリンを用いてこ
れを吸収し、次いで加熱処理を行う。

この加熱前処理によつて精製の条件は極めてよくなる。
この場合、そのままでもＰＨＡ法に適用できるょうなア
フィニテイクロマトグラフイ一法や密度勾配超遠心分画
法による高度精製ＨＢｓ抗原浮液を用いた場合、抗人血
清兎ガンマ−グロブリンによる処理はもはや必要でなく
、加熱処理するだけで、非特異凝集に関係する因子は破
壊することができるが、あらかじめそのようにＨＢｓ抗
原を精製することは経済的に有利な方法とはいえない。

ＨＢｓ抗原を含有する水溶液の加熱処理の条件は以下の
ようである。

１５５〜６５℃、１２−８時間から９５〜１００℃、３
〜１分の方？２単糖類、二糖類、糖アルコールのような
安定剤を５〜３０％の割合で含有し、５５〜６５℃、５
５〜４０時間から１００〜１２０℃、７０〜５０分の方
法（特開昭５０−９５４２０号）。

３尿素又はグアニジン１〜７モルを含む５５〜６５℃、
２４〜８時間から、１００〜１２０℃、３０〜３分の間
の段階的な方法（特開昭５０一１０５８１７号）。

以上のような処理条件が可能であるが、１の方法はＢ型
肝炎ウイルスの通常の不活化法であり、２の方法は安定
剤の添加によつて、激しい加熱処理が可能になり、ＨＢ
ｓ抗原の抗原性を保持し、感染性を低下させる方法であ
る。

３の方法はタンパク変性剤の添加によつてＨＢｓ抗原の
抗原性力塙まるという方法である。

これら発明のいかなる加熱方法も本発明の加熱処理方法
として適用できる。かくして加熱処理され，たＨＢｓ抗
原を含有する水溶液は生成沈殿及び塩を除去した後、あ
らかじめ高度精製されたものの場合は、そのまま、部分
精製の場合は、更にカラムクロマトグラフイ一を行い精
製後感作用抗原として使用する。後者のカラムクロマト
グラフイ一法による精製法としては、数十万〜数百万の
範囲の分子量を有する物質の分離に適用できるゲル淵過
剤（セフアローズ８、セフアデツク８、ＢｉＯ−ゲル鳴
を用いて分画する方法が簡便で好ましく、得られた水溶
液はそのまま感作用抗原として用いられる。

すなわち、ゲルＦ過で溶出してくるＨＢｓ抗原を含む最
初の画分を集め、感作に用いられるＨＢｓ抗原浮遊液を
得るのである。なお以下で部分精製ＨＢｓ抗原の加熱処
理し、その後ゲル濾過法で収得されたＨＢｓ抗原浮遊液
をＨ一ＨＢｓ抗原、あらかじめ密度勾配超遠心法（サイ
エンス、１７０，３３２（１９７０））で高度に精製さ
れたＨＢｓ抗原（Ｚ−ＨＢ８抗原）を加熱処理し得られ
たＨＢｓ抗原浮遊液をＺＨ−ＨＢｓ抗原、あらかじめア
フイニテイクロマトグラフイ一法〔ジヤーナルオブ
イムノロジイ（ＪＯｕｒａｎａｌＯｆＩｎｌｍｕｎＯｌ
Ｏｇｙ）１１０，１１５１（１９７３）〕によつて高度
に精製されたＨＢｓ抗原（Ａ−ＨＢｓ抗原）を加熱処理
して得られる感作用抗原をＨＡ一ＨＢｓ抗原と呼ぶ。

かくして得られた感作用抗原としてのＨＢｓ抗原浮遊液
を、次いで粒状担体に感作させることによつて、ＨＢｓ
抗体検出用試薬が提供される。

粒状担体としては、動物の変性赤血球、たとえば羊、モ
ルモツト、０型の人およびニワトリの赤血球をホルマリ
ン、グルタルアルデヒド、タソニン酸等で処理したもの
が使用できる。従来公知のラテツクス樹脂はそれ自体が
非特異的凝集反応を有するために好ましくない。この粒
状担体は約２０μ以下、特に５〜１５μ程度のものを使
用するのが有利である。

この粒状担体は、一般に水性溶媒に浮遊させて使用する
のがよい。

水溶溶媒としては、例えば、水、生理食塩水、各種緩衝
液（り７酸緩衝液、グリシン緩衝液、ホワ酸緩衝液など
）などが挙げられる。通常約０．１〜１０％（容量）程
度になるように粒状担体を水性溶媒に浮遊させ、ＰＨ約
７。

０〜８．９、特に７．２〜８．０程度に調整するのが好
ましい。

この粒状担体へのＨＢｓ抗原浮遊液による感作処理は、
自体公知の方法〔医学のあゆみ、７８，７５９−７６０
、（１９７０）〕に準じて行うことができる。感作は上
記水性溶媒中で行われるのがよく、ＨＢｓ抗原浮遊液と
粒状担体とを混合することによつて行われる。

感作反応は、一般にはＰＨ４．５〜８．６、温度約１５
〜３７℃、反応時間約１５〜６０分で行われる。

ＨＢｓ抗原浮遊液と粒状担体との反応組成比率は、精製
法の違いによるＨＢｓ抗原浮遊液の種類と粒状担体の種
類によつて各至適濃度が選択されるものであるが、例え
ば、グルタルアルデヒド処理羊赤血球の５％浮遊液を用
いた時、ＨＢｓ抗原浮遊液の濃度は、Ｈ−ＨＢｓ抗原で
は吸光度（Ｅ２８Ｓ値）の読みが０．０５〜０．１５の
濃度、ＨＺ−ＨＢｓ抗原は０．０１５〜０．０２５の濃
度、ＨＡ−ＨＢｓ抗原では０．０１〜０．０２の濃度に
調整し、これにグルタルアルデヒド処理羊赤血球（５０
ｔ）浮遊液）の１〜１１倍量を加える。

かくして反応後、洗浄した後適当な濃度の粒状担体の浮
遊液とし、適当量ずつ小分けして凍結乾燥する。

このものは用時適当な水性溶媒に溶解し、ＰＨＡ法によ
るＨＢｓ抗体検出用試薬として測定に用いる。このよう
にして得られた試薬は測定に際して次のような性質を有
している。

１ＨＢｓ抗体陽性血清で凝集する。

２ＨＢｓ抗原陽性血清で凝集せず、且つ陰性鐵は明瞭で
ある。

３緩衝液で凝集しない。

４ＨＢｓ抗体陰性、ＨＢｓ抗原陰性の血清で凝集しな
い。

？ＨＢｓ抗体陽性血清に、ＨＢｓ抗原陽性血清の添加
で凝集が阻止される。

本試薬の測定効果を血清を用いて比較したのが、：表１
である。

比較は、実施例１で得た試薬を用いるＰＨＡ法、本発明
者らが別途発明したラジオイムノアツセイ法（特開昭５
０−８８２２０号）（ＲＩＡ）、及び交叉電気泳動法（
ＣＥ）によるものである。この結果から本発明で得た試
薬を用いたＰＨＡ法による測定は、ＲＩＡ法での測定と
比較して同等以上、ＣＥ法に対しては１０，０００
倍以上の感度を有している。

感作用抗原であるＨＢｓ抗原の精製法の違いによる本発
明による試薬の効果の差違を検討した資料・は表２であ
る。

対象とした試薬は、Ｈ−ＨＢｓ抗原感作グルタルアルデ
ヒド処理羊赤血球（実施例ｌで得た試薬）、ＨＺ−ＨＢ
ｓ抗原感作グルタルアルデヒド処理羊赤血球（実施例６
で得た試薬）、ＨＡ−ＨＢｓ抗原感作グルタルアルデヒ
ド処理羊赤血球（実施例９で得た試薬）である。この結
果は、検出感度に関してはいずれの感作抗原を用いた試
薬も有意差は認められなかつたが、陽性確認のための阻
止試験（中和反応）において、Ｚ−ＨＢｓ抗原の場合は
１．エ７％、Ａ−ＨＢｓ抗原の場合は２．２８％に阻
止試験陰性であつたのに対し、Ｈ−ＨＢｓ抗原、ＨＺ−
ＨＢｓ抗原、ＨＡ−−ＨＢｓ抗原の場合はすべて阻止試
験陽性であり、非特異反応の起つていない事を示唆する
ものである。

以上のようにＨＢｓ抗体検出のための、ＰＨＡ法の感作
抗原として、加熱処理を施したＨＢｓ抗原浮遊液を用い
たＨＢｓ抗体検出試薬は、４加熱しないものを用いた
場合に比べ、特異反応性が高く、且つ、検出感度も低下
することなくＨＢｓ抗体を検出することができる。

＠製造に際し、同時にＢ型肝炎ウイルスを不活化する
加熱処理の施されているＨＢｓ抗原材料を用いることが
できるから、製造者に対する肝炎ウイルス感染の危険性
が少ない。

Ｏ公知の密度勾配超遠心分離法やアフイニテイークロマ
トグラフイ一法で精製したＨＢｓ抗原浮遊液はもちろん
であるか、硫安分画、エタノール分画などの簡単な方法
で部分精製した程度のＨＢ８抗原を含有する水溶液も加
熱処理を施す操作を製造工程に含めることによつて上記
４及び◎を満たした試薬が得られることは、極めて経済
的であり、産業上の有用性が高いものという事ができる
。

実施例１１２５検体のＨＢｓ抗原陽性プール血漿２５ｔに水２５
ｔを加え、ＰＨ７．Ｏにおいて硫安飽和度３５％と５０
％の間で沈殿する部分を遠心分離で１集める。

沈殿は生理食塩液に溶解させた後、透析によつて硫安を
除去し、７０℃、１０分間の加熱処理を施した後、生じ
た沈殿を遠心分離で除去し、前処理液（以下の実施例で
前処理液とはこの溶液を指す）２０００ｍ１を得る。こ
の液２００ｍ１を採闘り、抗人血清兎ガンマ−グロブ
リンの１０Ｗ／％溶液１０ｍ１を加えて、１夜室温にて
放置後、６０℃、１０時間の加熱処理を施し、生じた沈
殿を遠心分離によつて除去する。このようにして得た澄
明な溶液を１０×９０ＣＴ！Ｌのセフアローズ６Ｂ２（
ＳｅｐｈａｒＯｓｅ６Ｂ）のカラムを用いて分子篩する
ことによつて、図面に示したような分像を得た。ＨＢｓ
抗原を含む最初の画分（図面の４〜４．４ｔ）を集め、
これを希釈してＥ２８Ｏ値０．１の精製ＨＢｓ抗原浮遊
液１。８ｔを得る。

５別に新鮮な緬羊の血液を遠
心分離法によつて、リン酸緩衝液で洗浄して５％赤血球
浮遊液（ヘマトクリツト法で測定）９０ｍ１を作成する
。これに２．５Ｗ／％グルタールアルデヒド水溶液１８
ｍ１を加え、２０℃１時間放置後、遠心分離法によつ３
てリン酸緩衝液で洗浄後、再びリン酸緩衝液で９０ｍ１
の血球浮遊液とし、０．００５Ｗ／Ｖ％タンニン酸のリ
ン酸緩衝溶液９０ｍ１をこれに加え、３７℃、１５分間
インキユベートする。これを遠心分離法によりリン酸緩
衝液で洗浄後、最初に作４成した精製ＨＢｓ抗原浮遊液
の１，／１０量をこれに加え、２０℃で３０分間放置し
た後、遠心分離法によつてリン酸緩衝液で洗浄し、最後
に適当な濃度（例えば５％）の血球浮遊液とした後、適
当量（例えば２ｍ０ずつ小分けして凍結乾燥する。この
ものは用時リン酸緩衝液で０．５％赤血球浮遊液として
ＰＨＡ法による測定に用いる。収量は０．５％赤血球浮
遊液換算値で９００ｍ１であつた。得られたものは前記
４◎の特徴を満たした。実施例２新鮮な人０型血液を用い、実施例１で得た精製ＨＢｓ抗
原浮遊液１８０ｍ１について、実施例１と同様にして人
０型赤血球に感作させ、０，５（Ｆｂ血液浮遊液換算値
で８８０ｍ１を得た。

得られたものは前記４、Ｏの特徴を満たした。実施例
３実施例１で得られた前処理液２００ｍ１に抗人血清兎ガ
ンマ−グロブリンの１０Ｗ／％溶液１０ｍ１を加えて３
７℃で１時間インキユベートした後、生じた沈殿を遠心
分離して除去し、上清に２０Ｗ／ＶＯＩ）となるようマ
ンニツトを溶解し、１００℃で１５分間加熱処理を施す
。

このものをリン酸緩衝液ＰＨ７．２で透析し、沈殿を遠
心分離によつて除去した後、セフアローズ２Ｂのカラム
を用いて分画する操作によつて精製ＨＢｓ抗原浮遊液を
得た後、実施例１と同様に感作処理して、０．５０１）
赤血球浮遊液換算値で９３０ｍ１を得た。得られたもの
は前記（イ）、◎の特徴を満たした。実施例４実施例１で得られた前処理液２００ｍ１に６モルになる
ように尿素を加え、６０℃で１０時間加熱処理を施す。

このものをＰＨ７．２リン酸緩衝液で透析して生じた沈
殿を遠心分離によつて除去した後、セフアローズ４Ｂの
カラムを用いて分画する操作によつて精製ＨＢｓ抗原浮
遊液を得た後、実施例１と同様に感作処理して、０．５
％赤血球浮遊液換算値で８８０ｍ１を得た。得られたも
のは前記４、９の特徴を満たした。実施例５ＨＢｓ抗原陽性ブール血漿（２００プーノ（ハ）をコー
ン（ＣＯｈｎ）の低温エタノール法に従つて分画して得
られるフラクシヨン一、１５０９にＰＨ７．６の０．０
６モルリン酸塩緩衝液２００ｍ１を加えて懸濁し、同一
液にて透析後、沈殿物を遠心分離で除去し、上清を得、
これに２モルとなるようにグアニジンを加えて６０℃、
１０時間加熱処理を施す。

このものをＰＨ７．２リン酸緩衝液で透析して生じた沈
殿を遠心分離によつて除去した後、セフアローズ４Ｂの
カラムを用いて分画する操作によつて精製ＨＢ８抗原浮
遊液を得た後、実施例１と同様に感作処理を行う。分子
篩後Ｅ２，Ｏ値０．８の精製ＨＢｓ抗原浮遊液１．５１
を得、その１８０ｍ１を用いて赤血球への感作を行つた
。収量は、０．５％感作赤血球浮遊液換算値で９５０ｍ
１であつた。得られたものは前記４、◎の特徴を満たし
た。実施例６ＨＢｓ抗原陽性プール血漿（１００ブしノ（ハ）から４
８０ｍ１を採り、重力５９，０００ｇ、２０時間の遠心
分離を行い、ペレツトを得る。

これを重力１３８，０００９、２０時間で塩化セシウム
を用いた密度勾配超遠心分離法で分離し、密度１．２０
〜１．２３の部分をプールし、再度、同様の超遠心分離
をしてＨＢｓ抗原浮遊液を得る。このものはリン酸緩衝
液として、６０℃、１０時間の加熱処理を施した後、生
じた沈殿を遠心分離で除去し、Ｅ２８Ｏ値０．０１５の
ＨＢｓ抗原浮遊液１８０ｍ１を得、これを実施例１と同
様にして緬羊赤血球に感作させ、０．５％赤血球浮遊液
換算値として８９０ｍ１を得た。得られたものは前記４
、◎の特徴を満たした。実施例７実施例６と同様にし
て得られたペレツトを１００ｍ１（７）ＰＨ７．２リン
酸緩衝液に溶解し、１００℃、１分間の加熱処理を施し
た後、沈殿を遠心分離で除去し、以後セフアローズ６Ｂ
を用いて分画及びそれ以後の操作を実施例１に準じて行
つた。

但し、分子篩後、Ｅ，８Ｏ値０．７の精製ＨＢ８抗原浮
遊液２５０ｍ１を得、その１８０ｍ１を用いて以後の赤
血球感作を行つた。収量は０．５％赤血球浮遊液換算値
で８７０ｍ１であつた。得られたものは前記４、＠の特
徴を満たした。実施例８山羊抗ＨＢｓ抗原２００ｍ１を、ＨＢｓ抗原を含まない
人血清で吸収した後、硫安塩析法で分画して、山羊抗Ｈ
Ｂｓ抗原ガンマ−グロブリンを得、これを臭化シアンで
活性化したセフアローズ４Ｂ２００ｕ１にカツプルさせ
たものでカラムを作り、０．５Ｍ食塩を加えた０．０５
Ｍトリス一塩酸緩衝液（ＰＨ７．６）で平衡化する。

ＨＢ８Ａ８陽性プール血漿（１００プーノ（ハ）から５
ｔを採り、このカラムを通過させ、吸着しているＨＢｓ
抗原を１Ｍ食塩（ＰＩ｛２．６）で溶出する。ＨＢｓ抗
原を含む溶出液は、６０℃、１０時間の加熱処理を施し
た後、生じた沈殿を除去し、セフアローズ６Ｂで分子篩
することによつてＥ２８Ｏ値０．０７のＨＢｓ抗原浮遊
液２７０ｍ１を得る。この後１８０ｍ１を用いて実施例
１と同様にして緬羊赤血球に感作させ、０．５％赤血球
浮遊液換算値として９１０ｍ１を得た。得られたものは
前記４、◎の特徴を満たした。実施例９実施例５で得られたフラクシヨン、１５０９に水４５０
ｍ１を加え、６０℃、３０分間加熱した後、遠心分離し
て沈殿を除去する。

この液は０．５Ｍ食塩を加えた０．０５Ｍトリス一塩酸
緩衝液（ＰＨ７．６）で平衡させた後、実施例８と同様
にして作成した山羊抗ＨＢ８抗原カツプルセフアローズ
４Ｂのカラムを通し、ＨＢｓ抗原の溶出液を得る。この
溶出液は透析して再び０．５Ｍ食塩を含む０．０５Ｍト
リス一塩酸緩衝液（ＰＨ７．６）とし、別に馬抗人血漿
血清２００ｍ１を硫安塩析法で分画して得た馬抗人血漿
ガンマ−グロブリンを用いて同様にしてセフアローズ４
Ｂにカツプルさせて作成したカラムを通し、人血漿成分
を完全にカラムに吸着除去する。この液を６０℃、１０
時間加熱した後、遠心分離して上清を集め、Ｅ２８Ｏ値
０．０１２の溶液２１０ｍ１を得、このうち１８０ｍ１
を用いて実施例１と同様にして緬羊赤血球に感作させ、
０．５（Ｆｂ赤血球浮遊換算値として９２０ｍ１を得た
。得られたものは前記４、◎の特徴を満たした。試験例実施例１〜９で得られた０．５％ＨＢｓ抗原浮遊液感作
赤血球を用いて、マイクロタイタ一法によりてＡ，Ｂ，
Ｃ，Ｄ，Ｅ，５検体のＨＢｓ抗体陽性血清試料中のＨＢ
ｓ抗体の定義を行つた結果は表３の通りであつた。

【図面の簡単な説明】

図面は実施例１に記載の本発明の態様におけるセフアロ
ーズ６Ｂを用いるゲル濾過における分画を示すグラフで
ある。

Claims

【特許請求の範囲】１ＨＢ＿Ｓ抗原を含む水溶液を、（１）５５〜６５℃で１２〜８時間から９５〜１００℃
で３〜１分間、または（２）単糖類、二糖類、糖アルコ
ールから選ばれる安定剤を５〜３０％の割合で含有させ
、５５〜６５℃で５０〜４０時間から１００〜１２０℃
で７０〜５０分間、または（３）尿素またはグアニジン
１〜７モルを含有さた、５５〜６５℃で２４〜８時間か
ら１００〜１２０℃で３０〜３分間加熱処理し、これを
精製して得たＨＢ＿Ｓ抗原浮遊液によつて動物の変性赤
血球を感作することを特徴とするＨＢ＿Ｓ抗体検出用受
身赤血球凝集試験用担体の製造方法。