JPS5848855A - ＨＢｅ抗原の製法及びＨＢｅ抗体の検出試薬 - Google Patents
ＨＢｅ抗原の製法及びＨＢｅ抗体の検出試薬Info
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- JPS5848855A JPS5848855A JP14713581A JP14713581A JPS5848855A JP S5848855 A JPS5848855 A JP S5848855A JP 14713581 A JP14713581 A JP 14713581A JP 14713581 A JP14713581 A JP 14713581A JP S5848855 A JPS5848855 A JP S5848855A
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- hbe antigen
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- G01—MEASURING; TESTING
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/576—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for hepatitis
- G01N33/5761—Hepatitis B
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は高純度のＨＢｅ抗原を、取得する製法及びこの
ＨＢｅ抗原によって１惑作されたＨＢｅ抗体の検出試薬
に関する。
ＨＢｅ抗原によって１惑作されたＨＢｅ抗体の検出試薬
に関する。
本発明は詳しくはＨＢｅ抗原陽性の血漿がらＢ型肝炎に
関係しているＨＢｅ抗原を高純度にかつ収率よく取得す
るＨＢｅ抗原の製法及び、このＨＢｅ抗原を粒状担体に
感作させて得たＨＢｅ抗体の検出試薬に係り、ＨＢｅ抗
体の受身抗体凝集反応において特異反応性の高い検出試
薬を提供しようとするのである。
関係しているＨＢｅ抗原を高純度にかつ収率よく取得す
るＨＢｅ抗原の製法及び、このＨＢｅ抗原を粒状担体に
感作させて得たＨＢｅ抗体の検出試薬に係り、ＨＢｅ抗
体の受身抗体凝集反応において特異反応性の高い検出試
薬を提供しようとするのである。
ＨＢａ 抗原ハ１９７．２年にマグニウスとエスブマー
クにより最初に発見され、ＨＢｓ抗原及びＨＢｃ抗原と
共にＢ型肝炎ウィルスに関連する第３の抗原として詔め
られた〔マグニウス Ｌ、０．およびニス！ ブマーク、Ｊ、Ａ、 （Ｍａｇｎｌｕｓ、Ｌ、Ｏ，ａｎ
ｄ Ｅｐｓｍａｒｋ、Ｊ。
クにより最初に発見され、ＨＢｓ抗原及びＨＢｃ抗原と
共にＢ型肝炎ウィルスに関連する第３の抗原として詔め
られた〔マグニウス Ｌ、０．およびニス！ ブマーク、Ｊ、Ａ、 （Ｍａｇｎｌｕｓ、Ｌ、Ｏ，ａｎ
ｄ Ｅｐｓｍａｒｋ、Ｊ。
Ａ、）、ザジｒ−ナルオブインムノロジー（Ｔｈｅ Ｊ
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ）
Ｌ隻」、 １０１７（１９７２）〕。
ｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ）
Ｌ隻」、 １０１７（１９７２）〕。
ＨＢｅ抗原及びＨＢｅ抗原の感作を受けたことにより産
生されるＨＢａ抗一体はＨＢｓ＋抗原陽性者に多く見い
出され、Ｂ型肝炎ウィルスの増殖と非常に四速が深＜
、ＨＢｅ抗原及びＨＢｅ抗体の測定はその感染性及びＢ
型肝炎の予後の診断の指標として臨床上非常に重要であ
る。すなわちＩ（Ｂｅ抗原１慟性の血液中にはＢ型肝炎
ウィルスの重態であるＤａｎｅ粒子が含まれていて感染
性が高く、一方ＨＢｍ抗原が陽性であってもＨＢｅ抗体
が陽性であればその血液中にはＤａｎｅ粒子は認められ
ず、感染性はないが或はあるとしても極めて低いといわ
れている。又ＨＢｅ抗原は慢性肝炎や肝硬変で高率に検
出され、急性Ｂ型肝炎においてＨＢｅ抗原が存在する場
合には充分な注意が必要であり、ＨＢｅ抗体が存在する
場合には比較的明るい予後が推定できる。このようにＨ
Ｂｅ抗原とともにＨＢｅ抗体の測定は感染の危険性を判
断する資料を提供し、患者にあっては病状の経過の追跡
および予後の推定に役立つ。
生されるＨＢａ抗一体はＨＢｓ＋抗原陽性者に多く見い
出され、Ｂ型肝炎ウィルスの増殖と非常に四速が深＜
、ＨＢｅ抗原及びＨＢｅ抗体の測定はその感染性及びＢ
型肝炎の予後の診断の指標として臨床上非常に重要であ
る。すなわちＩ（Ｂｅ抗原１慟性の血液中にはＢ型肝炎
ウィルスの重態であるＤａｎｅ粒子が含まれていて感染
性が高く、一方ＨＢｍ抗原が陽性であってもＨＢｅ抗体
が陽性であればその血液中にはＤａｎｅ粒子は認められ
ず、感染性はないが或はあるとしても極めて低いといわ
れている。又ＨＢｅ抗原は慢性肝炎や肝硬変で高率に検
出され、急性Ｂ型肝炎においてＨＢｅ抗原が存在する場
合には充分な注意が必要であり、ＨＢｅ抗体が存在する
場合には比較的明るい予後が推定できる。このようにＨ
Ｂｅ抗原とともにＨＢｅ抗体の測定は感染の危険性を判
断する資料を提供し、患者にあっては病状の経過の追跡
および予後の推定に役立つ。
ＨＢｅ抗体の検出はオフタロニー法や交叉電気泳動法な
ど各種の免疫学的方法で簡単に行うことが出来るが、ラ
ジオインムクアッセイ法や受身赤血球凝集反応法（ＰＨ
Ａ法と記す）に比べ、感度が数百分つ−から数十分の−
しがなく、著しく高温度のＨＢ、抗体しか検出できない
欠点がある。
ど各種の免疫学的方法で簡単に行うことが出来るが、ラ
ジオインムクアッセイ法や受身赤血球凝集反応法（ＰＨ
Ａ法と記す）に比べ、感度が数百分つ−から数十分の−
しがなく、著しく高温度のＨＢ、抗体しか検出できない
欠点がある。
ＰＨＡ法は感度の高い優れた検出法の１つであり、既に
真弓らがＰＨＡ法用感作血球の製法につき報告している
〔ザジャーナルオブインムノロジ−（Ｔｈｅ Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ） １１
９．１５５６（１９７７）〕ＯＬ、かしこの方法は１ｉ
ｔｕ作血球の調製に必要な高純度のＨＢｅ抗原を収率よ
く取得するのが極めて困σ（Ｃであり、得られたＩ’ｆ
Ｂｅ抗原を用いて感作した感作血球は非特異反応が多い
という間顯があり、Ｈ１３ｅ抗体の測定をＰ ＨＡ法で
行うことは未だ一般的ではない。
真弓らがＰＨＡ法用感作血球の製法につき報告している
〔ザジャーナルオブインムノロジ−（Ｔｈｅ Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ） １１
９．１５５６（１９７７）〕ＯＬ、かしこの方法は１ｉ
ｔｕ作血球の調製に必要な高純度のＨＢｅ抗原を収率よ
く取得するのが極めて困σ（Ｃであり、得られたＩ’ｆ
Ｂｅ抗原を用いて感作した感作血球は非特異反応が多い
という間顯があり、Ｈ１３ｅ抗体の測定をＰ ＨＡ法で
行うことは未だ一般的ではない。
本発明者らはＩ■Ｂｅ抗原１（ＩＩ性の＋ｍ Ｑ＋％か
ら高純度のＨＢ ｅ抗原を収率よく取得する方法を１【
バ究し、その結果ＨＢｅ抗体結合セファロースを用いて
塩酸グアと ニシンによる洗〆溶出を行った後、陽イオン交換体を用
いてＨＢｅ抗原を取得することにより目的を達し、これ
を粒状担体に感作して得られる検出試薬は相←伊受身赤
血球凝集反１＋？；、において従来になく特異反応性が
高いことを見い出し、本発明を完成した。
ら高純度のＨＢ ｅ抗原を収率よく取得する方法を１【
バ究し、その結果ＨＢｅ抗体結合セファロースを用いて
塩酸グアと ニシンによる洗〆溶出を行った後、陽イオン交換体を用
いてＨＢｅ抗原を取得することにより目的を達し、これ
を粒状担体に感作して得られる検出試薬は相←伊受身赤
血球凝集反１＋？；、において従来になく特異反応性が
高いことを見い出し、本発明を完成した。
本発明におけるＨＢｅ抗体結合セファロースを用いたＨ
Ｂｅ抗原の製法は真弓らの報告により公知である〔ザジ
ャーナルオブインムノロジ−（ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ） １１９ 、１５
５６ （１９７７）〕。しかし本発明では溶離剤として
新しく塩酸グアニジンを用いることにし、■ＩＢｅ抗原
を吸着したＨＢｅ抗体結合セファロースを０．５〜１．
５Ｍの塩酸グアニジン水溶液で洗浄した後、２〜５ψ竜
酸グアニジン水溶液でＨＢｅ抗原を溶離し、これにより
従来法よりも収率よく高純度のＨＢｅ抗原を取得するこ
とに成功した。さらに本発明は溶離したＨＢｅ抗原をｐ
Ｈ５〜８、イオン強度０．０５以下の低塩濃度の水溶
液で透析した後、同じ＜ ｐＨ５〜８、イオン強度０．
０５以下の低塩濃度において陽イオン交換体に接触させ
てＨＢｅ抗原を未吸着画分に得ることにし、これよりＨ
Ｂｅ抗原の純度はさらに高くなり、このＨＢｅ抗原を粒
状担体に感作してＰＨＡ法によるＨＢｅ抗体の測定を行
うと、従来法で得たＨＢｅ抗原を感作したものに比べ、
極めて非特異反応性が低へ）ことを見い出した。
Ｂｅ抗原の製法は真弓らの報告により公知である〔ザジ
ャーナルオブインムノロジ−（ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ） １１９ 、１５
５６ （１９７７）〕。しかし本発明では溶離剤として
新しく塩酸グアニジンを用いることにし、■ＩＢｅ抗原
を吸着したＨＢｅ抗体結合セファロースを０．５〜１．
５Ｍの塩酸グアニジン水溶液で洗浄した後、２〜５ψ竜
酸グアニジン水溶液でＨＢｅ抗原を溶離し、これにより
従来法よりも収率よく高純度のＨＢｅ抗原を取得するこ
とに成功した。さらに本発明は溶離したＨＢｅ抗原をｐ
Ｈ５〜８、イオン強度０．０５以下の低塩濃度の水溶
液で透析した後、同じ＜ ｐＨ５〜８、イオン強度０．
０５以下の低塩濃度において陽イオン交換体に接触させ
てＨＢｅ抗原を未吸着画分に得ることにし、これよりＨ
Ｂｅ抗原の純度はさらに高くなり、このＨＢｅ抗原を粒
状担体に感作してＰＨＡ法によるＨＢｅ抗体の測定を行
うと、従来法で得たＨＢｅ抗原を感作したものに比べ、
極めて非特異反応性が低へ）ことを見い出した。
本発明においてはＨＢｅ抗原陽性の血漿またはＨＢｅ抗
原を含む水溶液、例えばＨＢｅ抗原陽性の血漿を硫安分
画して得られるβ及びγ−グログリン画分が原料となる
。本発明はＨＢｅ陽性血薬血漿はＨＢｅ抗原を含む水溶
液を、ｐＨ５〜８、イオン強度０、００１〜０．３好ま
しくは０．１〜０．３の塩濃度で１ＩＢｅ抗体結合セフ
ァロースに接触させてＨＢｅ抗原を吸着させ２％１１
ｅ抗原を吸着したＨＢｅ抗体結合セファロースを０．５
〜１．５Ｍの塩酸グアニジン溶液で充分に洗浄する。こ
の洗浄により非特異的にＨＢｅ抗体セファロースに吸着
している不純物やＨＢ ｅ抗体との結合力９弱い変性し
たＨＢｅ抗原は除去される。充分に洗浄されたＨＢｅ抗
呻を吸・畠したＨ Ｂ ｅ 抗体セファロースに、２〜
５ＭのＩ！（酸グアニジン溶液を添加してＨＢｅ抗原を
溶離する。
原を含む水溶液、例えばＨＢｅ抗原陽性の血漿を硫安分
画して得られるβ及びγ−グログリン画分が原料となる
。本発明はＨＢｅ陽性血薬血漿はＨＢｅ抗原を含む水溶
液を、ｐＨ５〜８、イオン強度０、００１〜０．３好ま
しくは０．１〜０．３の塩濃度で１ＩＢｅ抗体結合セフ
ァロースに接触させてＨＢｅ抗原を吸着させ２％１１
ｅ抗原を吸着したＨＢｅ抗体結合セファロースを０．５
〜１．５Ｍの塩酸グアニジン溶液で充分に洗浄する。こ
の洗浄により非特異的にＨＢｅ抗体セファロースに吸着
している不純物やＨＢ ｅ抗体との結合力９弱い変性し
たＨＢｅ抗原は除去される。充分に洗浄されたＨＢｅ抗
呻を吸・畠したＨ Ｂ ｅ 抗体セファロースに、２〜
５ＭのＩ！（酸グアニジン溶液を添加してＨＢｅ抗原を
溶離する。
得られた溶離液はｐ Ｈ５〜９好ましくはｐ Ｈ６〜８
、イオン強度０．０５以下の低塩濃度の水溶液で１）析
する。透析後のｌｌＢｅ抗原水溶沙をｐ Ｈ５〜９好ま
しくはｐＨ６〜８、イオン強度０．０５Ｍ以下の低塩濃
度の緩衝液、例えばリン酸緩衝液で平衡化した賜イオン
交換体（例えばＣＭ−セファデックス、ＣＭ−セルロー
ス、ＳＰ−セファデックス）と接触させる。ＨＢｅ抗原
は吸着されい保吸着画分に得られる。
、イオン強度０．０５以下の低塩濃度の水溶液で１）析
する。透析後のｌｌＢｅ抗原水溶沙をｐ Ｈ５〜９好ま
しくはｐＨ６〜８、イオン強度０．０５Ｍ以下の低塩濃
度の緩衝液、例えばリン酸緩衝液で平衡化した賜イオン
交換体（例えばＣＭ−セファデックス、ＣＭ−セルロー
ス、ＳＰ−セファデックス）と接触させる。ＨＢｅ抗原
は吸着されい保吸着画分に得られる。
陽イオン交換体はわずかに存在していた不純物を吸着し
、得られたＨＢｅ抗原は非常に純度の高いもこのように
して製したＨＢｅ抗原水溶液は粒状担体に感作させるこ
とによりＨＢｅ抗体の検出試薬が得られる。粒状（１１
体としては公知のラテックス樹脂類、ゴム類、（＋＋［
桟ｌＩｇ／着削及び、動物（例えばヒツジ、モルモット
、０型の人、ニワトリなど）の赤血球をホルマリンやグ
ルタルアルデヒドで固定したものを用いる。これらの粒
状担体は約２０４以下、特に５〜１５μ程度のものが好
Ｉ商であり、水性溶媒に浮遊させて使用するのがよい。
、得られたＨＢｅ抗原は非常に純度の高いもこのように
して製したＨＢｅ抗原水溶液は粒状担体に感作させるこ
とによりＨＢｅ抗体の検出試薬が得られる。粒状（１１
体としては公知のラテックス樹脂類、ゴム類、（＋＋［
桟ｌＩｇ／着削及び、動物（例えばヒツジ、モルモット
、０型の人、ニワトリなど）の赤血球をホルマリンやグ
ルタルアルデヒドで固定したものを用いる。これらの粒
状担体は約２０４以下、特に５〜１５μ程度のものが好
Ｉ商であり、水性溶媒に浮遊させて使用するのがよい。
水性溶媒としては例えば、水、生理食塩水、各種緩衝液
（例えばグリシン緩衝液、ホウ醸紗衝液）などがあげら
れる。通常約０．３〜１％（容量）になるよう約 に粒状担体を水性溶媒に浮遊させ、ｐＩ■をＮ、５〜る
。
（例えばグリシン緩衝液、ホウ醸紗衝液）などがあげら
れる。通常約０．３〜１％（容量）になるよう約 に粒状担体を水性溶媒に浮遊させ、ｐＩ■をＮ、５〜る
。
８．９ＦＭ整し好ましくはｐＨを約５．０〜８．０ＫＭ
整×粒状担体に抗原を感作させる処理は公知のように粒
状抗体と抗原を水、生理食塩水、各種緩衝液などの水性
溶媒中で接触させるのがよく、−・般に抗原含有液と粒
状担体浮遊液を混合することによって行われる。この感
作処理はｐ Ｈ４，５〜８．０、約１５〜３７℃の温度
で行うのが好ましい。
整×粒状担体に抗原を感作させる処理は公知のように粒
状抗体と抗原を水、生理食塩水、各種緩衝液などの水性
溶媒中で接触させるのがよく、−・般に抗原含有液と粒
状担体浮遊液を混合することによって行われる。この感
作処理はｐ Ｈ４，５〜８．０、約１５〜３７℃の温度
で行うのが好ましい。
このようにして得られるＨＢｅ抗体の検出試薬は、試験
例で示されるように、特異反応性が極めて高く従ってＨ
Ｂｅ抗体を検出する精度が暑るしく向上し、Ｂ型肝炎に
おける感染性の有；Ｑｉ（、肝炎患者の予後の推定など
に極めて有効である。本発明を実施例によって１を体的
に説明する。
例で示されるように、特異反応性が極めて高く従ってＨ
Ｂｅ抗体を検出する精度が暑るしく向上し、Ｂ型肝炎に
おける感染性の有；Ｑｉ（、肝炎患者の予後の推定など
に極めて有効である。本発明を実施例によって１を体的
に説明する。
実施例Ｉ
ＨＢｅ抗原陽性のヒト血＠１ｅをｐ Ｈ６，６の０．１
５ＭＮａＣ１で平衡化したＨ１３ｅ抗体結合セファロー
スのカラム（径４ ｔｍ！長さ３０を碧Ｉ）に載せて吸
着させ、平衡化に用いたと同じ０．１５ Ｍ ＮａＣ１
で充分に洗浄する。次にｐ Ｈ７，０のＩ Ｍ壌ｍグア
ニジン水溶液でさらに洗浄した後、ｐＨ７，０の３Ｍ塩
酸グアニジン水溶液でＨＢｅ抗原の溶出を行う。ＨＢｅ
抗原の溶出は２８０７１Ｍにおける吸光度（以下Ａ ２
８Ｏｎｍ値）で確認した。溶出したＨＢｅ抗原水溶液を
ｐＨ７，２，０，０１Ｍのリン酸緩衝液で透析する。儒
析の終ったＨＢｅ抗原水溶液について逆受身赤血球凝集
反応法（以下ＲＰ ＨＡ法）でＨＢｅ抗原の抗原価を測
定し、Ａ ２８Ｏｎｍ値との比からＡ ２８０ ｎｍ
＝ １．０当りの抗原価を求めたところ１２，０００で
あり、ＨＢｅ抗原陽性血漿の３．５に比べ約３４００
（Ａ前装されていた。次に透析の終ったＨＢｅ抗原水溶
液をｐＨ７，２の０．０１ Ｍ ＩＪン酸緩細液で平衡
化したＣＭ−セファデックスのカラム（径２σ月さ１０
ｃｍ）に載せて通過させた。吸着されないで」ｍ過して
出てくる両分にＨＢｅ抗原が得られ、その純度を求めた
ところ２１，０００であり、さらに１．７５倍精製され
ていた。
５ＭＮａＣ１で平衡化したＨ１３ｅ抗体結合セファロー
スのカラム（径４ ｔｍ！長さ３０を碧Ｉ）に載せて吸
着させ、平衡化に用いたと同じ０．１５ Ｍ ＮａＣ１
で充分に洗浄する。次にｐ Ｈ７，０のＩ Ｍ壌ｍグア
ニジン水溶液でさらに洗浄した後、ｐＨ７，０の３Ｍ塩
酸グアニジン水溶液でＨＢｅ抗原の溶出を行う。ＨＢｅ
抗原の溶出は２８０７１Ｍにおける吸光度（以下Ａ ２
８Ｏｎｍ値）で確認した。溶出したＨＢｅ抗原水溶液を
ｐＨ７，２，０，０１Ｍのリン酸緩衝液で透析する。儒
析の終ったＨＢｅ抗原水溶液について逆受身赤血球凝集
反応法（以下ＲＰ ＨＡ法）でＨＢｅ抗原の抗原価を測
定し、Ａ ２８Ｏｎｍ値との比からＡ ２８０ ｎｍ
＝ １．０当りの抗原価を求めたところ１２，０００で
あり、ＨＢｅ抗原陽性血漿の３．５に比べ約３４００
（Ａ前装されていた。次に透析の終ったＨＢｅ抗原水溶
液をｐＨ７，２の０．０１ Ｍ ＩＪン酸緩細液で平衡
化したＣＭ−セファデックスのカラム（径２σ月さ１０
ｃｍ）に載せて通過させた。吸着されないで」ｍ過して
出てくる両分にＨＢｅ抗原が得られ、その純度を求めた
ところ２１，０００であり、さらに１．７５倍精製され
ていた。
実施例２
実施例１で得たＨＢｅ抗原水溶液の一定ｈ１をゲルター
ルアルデヒド処理した緬羊赤血球に１み作した。
ルアルデヒド処理した緬羊赤血球に１み作した。
すなわち緬羊赤血球をリン酸緩衝化生理食塩水で４回洗
浄し、これを５％濃度の懸濁液にする。これにゲルター
ルアルデヒドの２．５％溶液を２０％の割合で加え、室
温にて６０分間反応を行い、次いで上記の生理食塩水で
４回洗浄して未反応のゲルタールアルデヒドを除くと固
定化赤血球が得られる。
浄し、これを５％濃度の懸濁液にする。これにゲルター
ルアルデヒドの２．５％溶液を２０％の割合で加え、室
温にて６０分間反応を行い、次いで上記の生理食塩水で
４回洗浄して未反応のゲルタールアルデヒドを除くと固
定化赤血球が得られる。
この固定化赤血球を５％濃度の懸濁液とし、今回らの方
法〔医学のあゆみ、７８．７５９〜７６０Ｂｅ抗体の検
出試薬を得る。
法〔医学のあゆみ、７８．７５９〜７６０Ｂｅ抗体の検
出試薬を得る。
比較試験１
従来法（前記真弓らの報告）と実施例１による）ＩＢｅ
抗涼ロウいて、それぞれの純ＩＷと回収率をｉｉｉ！ｌ
定して第１表にまとめた。出発材料はいずれもＨＢｅ抗
原陽性血漿を使用し、回収率は血漿からの値を示した。
抗涼ロウいて、それぞれの純ＩＷと回収率をｉｉｉ！ｌ
定して第１表にまとめた。出発材料はいずれもＨＢｅ抗
原陽性血漿を使用し、回収率は血漿からの値を示した。
第１表 ＨＢ ｅｐｔ摩の純度と回収率比較試験２
ＨＢｅ抗原感作血球の特異性を（静めるため、ＨＢ５そ
の結果を第２表にまとめた。従来法（前記真弓らの報告
）を追試して得たＨＢｅ抗原を感作したものでは、偽陽
性が２２人と極めて高く、従来法で得たＨＢｅ抗原水溶
液中にはこのような非特異反応の原因となる成分が充分
に除去され°Ｃいないことがわかる。一方実施例２で得
られたＨＢｅ抗原を感にまで少なくなった。
の結果を第２表にまとめた。従来法（前記真弓らの報告
）を追試して得たＨＢｅ抗原を感作したものでは、偽陽
性が２２人と極めて高く、従来法で得たＨＢｅ抗原水溶
液中にはこのような非特異反応の原因となる成分が充分
に除去され°Ｃいないことがわかる。一方実施例２で得
られたＨＢｅ抗原を感にまで少なくなった。
第２表 ＨＢｅ抗原感作血球の特異性
（注）総計 ２１６人
このように本発明により得られたＨＢｅ抗原を粒状１口
体に感作することにより、従来法に比ベテ４Ｉるしく特
異反応性の高い検出試薬が得られ、本発明の有効性が明
らかとなった。
体に感作することにより、従来法に比ベテ４Ｉるしく特
異反応性の高い検出試薬が得られ、本発明の有効性が明
らかとなった。
出願人 株式会社ミ トリ十字
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ｉｆ） ｌｌＢｅ抗原陽性の血漿又はＨＢｅ抗原を含
む水溶液を、 （Ｉ） ｐＨ５〜８、イオン強１ｖ：０．００１〜０
．３塩濃度でＨＢｅ抗体結合セファロースに接触させて
ＨＢｅ抗原を吸着させ、０．５〜１．５ Ｍの塩酸グア
ニジン溶液で洗浄した後、２〜５Ｍの塩酸グアニジン溶
液で溶離する工程 （ＩＩ） 溶離したＨＢｅ抗原水溶液を、ｐＨ５〜９
、イオン強度０．０５以下の低塩濃度の水溶液で透析し
た後、ｐＨ５〜９、イオン強度０．０５以下の低ｊｉｘ
＞ｓ度において陽イオン交換体に接触させてＨＢｅ抗
原を未吸着画分に得る工程 この第魯Ｉ工程と第■工程を用いることを特徴とするＨ
Ｂｅ抗原の製法。 ｉ２） ＨＢｅ抗原陽性の血漿又はＨＢｅ抗原を含む
水溶液を、 （Ｉ） ｐ Ｈ５〜８、イオン強度０．００１〜０．
３ ノ塩濃度でＨＢｅ抗体結合セファロースに接触させ
てｌｌＢｅ抗原を段着させ、０．５〜１．５Ｍの塩酸グ
アニジン溶液で洗浄した後、２〜５Ｍの塩酸グアニジン
溶液で溶離する工程 （ＩＩ） 溶離したＨＢｅ抗原水溶液を、ｐＨ５〜９
、イオン強度０．０５以下の低塩濃度の水溶液で透析し
た後、ｐＨ５〜９、イオン強度０．０５以下の低塩濃度
において陽イオン交換体に接触させてＨＢｅ抗原を未吸
着画分に得る工程 この第１工程と第■工程を用いて取得したＨＢｅ抗原に
よって感作された粒状担体からなるＨＢｅ抗体の検出試
薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14713581A JPS5848855A (ja) | 1981-09-17 | 1981-09-17 | ＨＢｅ抗原の製法及びＨＢｅ抗体の検出試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14713581A JPS5848855A (ja) | 1981-09-17 | 1981-09-17 | ＨＢｅ抗原の製法及びＨＢｅ抗体の検出試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5848855A true JPS5848855A (ja) | 1983-03-22 |
Family
ID=15423352
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14713581A Pending JPS5848855A (ja) | 1981-09-17 | 1981-09-17 | ＨＢｅ抗原の製法及びＨＢｅ抗体の検出試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5848855A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62192326A (ja) * | 1986-02-17 | 1987-08-22 | ビオテスト フアルマ ゲゼルシヤフト ミツト ベシユレンクタ− ハフツング | エイズの予防および治療用免疫グロブリン含有製剤の製造方法 |
| EP0577565A2 (en) * | 1992-06-08 | 1994-01-05 | SORIN BIOMEDICA S.p.A. | Stabilized compositions of the delta antigen peptide of hepatitis D virus |
-
1981
- 1981-09-17 JP JP14713581A patent/JPS5848855A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62192326A (ja) * | 1986-02-17 | 1987-08-22 | ビオテスト フアルマ ゲゼルシヤフト ミツト ベシユレンクタ− ハフツング | エイズの予防および治療用免疫グロブリン含有製剤の製造方法 |
| EP0577565A2 (en) * | 1992-06-08 | 1994-01-05 | SORIN BIOMEDICA S.p.A. | Stabilized compositions of the delta antigen peptide of hepatitis D virus |
| EP0577565A3 (ja) * | 1992-06-08 | 1994-03-16 | Sorin Biomedica Spa |
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