JPS603829B2 - 細胞培養方法 - Google Patents

細胞培養方法

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JPS603829B2
JPS603829B2 JP56091733A JP9173381A JPS603829B2 JP S603829 B2 JPS603829 B2 JP S603829B2 JP 56091733 A JP56091733 A JP 56091733A JP 9173381 A JP9173381 A JP 9173381A JP S603829 B2 JPS603829 B2 JP S603829B2
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cell culture
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microalgae
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    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C12N5/0043—Medium free of human- or animal-derived components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Description

【発明の詳細な説明】 この発明はヒト細胞の培養方法、特に個体から分離され
たヒトの体細胞を、長期にわたって、かつ効率的に継代
培養する方法に関するものである。
従来、ヒト細胞の継代培養は医学、薬学の領域を含め、
広く生物学上の研究材料として欠くことができず、近年
がん研究、遺伝子操作および細胞融合のメカニズムの解
明等、多くの分野においてその利用がなされてきた。
通常、動物細胞の継代培養には、アミノ酸、ビタミン、
ミネラル等の合成渚地に加えて、少数の例外を除き成牛
、牛の胎児、牛の新生児、馬、ニワトリ、ウサギ等の血
清が必要とされている。血清が不可欠である理由は血清
中に細胞の増殖因子（一般的栄養物質以外の物質）が含
まれ、血清を用いなくては、この因子の欠如により増殖
が不可能となるからである。しかし、ヒト正常細胞の総
代培養は、動物の血清（通常牛の胎児血清）を含む基礎
培地で培養を行っても、普通試験管内での寿命としては
最大限５０〜６雌艦代しか培養できなかった。それ以上
は正常な形態および遺伝子に変化をきたすか、あるいは
正常は細胞分裂が継続不能となって全体が死滅し、いか
に努力しても限られた期間内でのみ継代株化し得るにす
ぎなかった。したがって、常に新たに正常細胞を入手す
る必要があった。この発明は以上のような従来の問題点
を解決するためになされたものであり、従来必須添加物
質とされた動物の血清の全部または一部の代わりに微細
藻類抽出物を使用することにより、従来不可能であった
分裂回数を飛躍的に伸ばし、しかも細胞を正常のまま長
期にわたり、効率的に継代培養することのできる細胞培
養方法を提案することを目的としている。
この発明は微細藻類抽出物を含む培地によりヒト細胞を
培養することを特徴とする細胞培養方法である。
微細藻類とはクロレラ、セネデスムス、スピルリナ等の
単細胞またはそれに近い藻類であり、天然に棲息するも
のなちびに培養されたものが含まれる。
本発明における微細藻類抽出物とは、上記微細藻類の藻
体を適当な溶媒で抽出した抽出物であり、溶媒としては
特に水性溶媒がよい。
水性溶媒としては例えば水単独、あるいは酸、塩基、も
しくは有機溶媒が溶解された溶液などがある。抽出方法
は簾体を常温または加熱した溶媒と接触させ抽出を行う
。熱水抽出を行う場合、１００ｑｏで１分以上接触させ
るのが望ましく、接触後遠心分離等により藻体を分離す
ると、抽出物が得られる。本発明において使用できる抽
出物はこのような方法により得られた抽出液、またはこ
れら抽出液を分子分画した高分子画分、あるいはこれら
の濃縮物または凍結もしくは贋霧乾燥等により乾燥した
抽出物粉末などがあり、特に糠たんぱく、多糖体などを
含む高分子画分またはその乾燥粉末が望ましい。本発明
では微細藻類抽出物を含む培地によりヒト細胞を培養す
るのであるが、基本塔地、培養方法等は通常の組織培養
におけるものが採用できる。
すなわち基本塔地としてはアミノ酸、ビタミン類を含む
合成培地を使用し、これに前記抽出物を添加し、無菌状
態でヒト細胞の培養を行う。培養の対象となるヒト細胞
は正常な組織細胞、がん細胞等のヒトの個体から取出さ
れた体細胞が含まれる。本発明における微細藻類抽出物
の基本培地への添加量は、通常その抽出物が抽出粉末の
場合０．１４００ｙ／の‘、好ましくは１〜１００ｙ′
の‘の範囲にすることが望ましい。
微細藻類抽出物を添加した培地はそのまま培養に供しう
るが、さらに通常の培養に使用される前記血清を添加し
てもよい。この場合、通常約１０％の添加が必要とされ
る血清を１％に減少させることができる。微細藻類抽出
物を含む培地によりヒト細胞を培養することにより、細
胞の増殖を促進し、形態学的、遺伝学的な変異を発現す
ることなく、正常な継代培養を維持し、さらに通常より
長期にわたって縫代培養することができる。
そして通常１０％の添加が必要とされる血清を１／Ｉ０
に減少させても培養を行うことが可能であり、血清の使
用量を大幅に減少させることができる。このような細胞
の継代培養を可能にした理由については明らかではない
が、微細藻類抽出物中の、特に糠たんぱく、多糖体など
を含む高分子画分に含まれる微細藻類特有の生理活性物
質の作用により、細胞の新陳代謝が盛んになり、賦活せ
られるものと推定される。次に本発明の実施例について
説明する。実施例 まずクロレラ粉末３０夕を水１〆に懸濁させ、１０００
０で３０分間熱水抽出し、遠心分離し、その上澄液（乾
燥重量換算で４．５夕）をＳｅｐｈａｄｅ幻Ｇ−２５（
Ｐｈａｍａｃｉａ社製商標）カラムにより分子分画を行
い、分子量３０００以上の画分をさらにＤＥＡＥ−ｃｅ
ｌｌ山ｏｓｅ（Ｂｒｏｗ叫生製商標）カラムに吸着させ
、Ｍ／１００炭酸緩衝液により溶出した成分を凍結乾燥
し、０．６３夕を調製した。
次に株細胞としてヒト線雛芽細胞を１×１ぴ個を、表１
に示す基本培地に牛の胎児血清（ＦＣＳ）を１０％添加
した培地により培養した区（Ｃ区）ならびに同様に同株
細胞１×１ぴ個を基本塔地にＦＣＳＩ％および上記クロ
レラ成分１０ｙ／風上を添加した培地により培養した区
（Ｔ区）により、その細胞の増殖および継代を調べたと
ころ、細胞の増殖は、Ｃ区では５０〜６路蟻代（約１０
ケ月）で細胞が正常分裂を継続し得ず、死滅したのに対
し、Ｔ区では現在まで９０〜１２雌隣代（約１年４ケ月
）にわたって培養が継続され、なお生存しており、細胞
についても形態学的、遺伝学的等の何らの変異も認めら
れず、従来法に比べて約２倍の継代培養が可能であった
。表１ 基本培地の組成（物ノム）

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 微細藻類抽出物を含む培地によりヒト細胞を培養す
    ることを特徴とする細胞培養方法。 ２ 微細藻類はクロレラ、セネデスムスまたはスピルリ
    ナである特許請求の範囲第１項記載の細胞培養方法。 ３ 抽出物は水性溶媒抽出物である特許請求の範囲第１
    項または第２項記載の細胞培養方法。 ４ 細胞はヒトの正常細胞である特許請求の範囲第１項
    ないし第３項のいずれかに記載の細胞培養方法。
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