JPS6171358A - 好中球機能検査薬 - Google Patents

好中球機能検査薬

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JPS6171358A
JPS6171358A JP59194426A JP19442684A JPS6171358A JP S6171358 A JPS6171358 A JP S6171358A JP 59194426 A JP59194426 A JP 59194426A JP 19442684 A JP19442684 A JP 19442684A JP S6171358 A JPS6171358 A JP S6171358A
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JP
Japan
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neutrophil
chlorella
cve
water solvent
neutrophils
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Pending
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JP59194426A
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English (en)
Inventor
Kuniaki Tanaka
邦明 田中
Fumiko Konishi
史子 小西
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
KURORERA KOGYO KK
Chlorella Industry Co Ltd
Original Assignee
KURORERA KOGYO KK
Chlorella Industry Co Ltd
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Publication date
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
    • C12N1/125—Unicellular algae isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/16—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor using radioactive material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
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    • C12R2001/89—Algae ; Processes using algae

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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ この発明は好中球機能検査薬に関する。
［従来技術］ 従来、好中球は細菌等の異物が生体内に侵入してきた際
に、生体防御の第１段階として異物を認識し、貧食、そ
して分解する作用を有するとされてきた。最近の本発明
者らの研究から、好中球からマクロファージや１９７７
球のような第２゜第３段階の生体防御に関与する細胞に
何らかの作用の受は渡しがあることが示されてきた。こ
のこ、とから、好中球は既知の作用のみならず、生体防
御においてより重要な位置を占めていることがわかった
。さらに研究が進むにつれ、このような観点からの種々
病態における好中球の役割も明らかになろう。
いずれにせよ、好中球の機能が高いときには外界からの
異物に対する抵抗力が大きく、好中球の機能が低いとき
には抵抗力が弱っている。従って、好中球のＪａ爺を検
査することができれば、その人の健康状態を知ることが
できる。
従来の好中球機能の検査法は、好中球の貧食機能や、殺
菌作用を応用したものであるが、操作が煩雑であった。
［発明の目的］ この発明の目的は、好中球の機能を検査することができ
る検査薬を提供することである。
［発明の概要］ すなわち、この発明は、クロレラ属に属する藻類の藻体
を水性溶媒で抽出して得られる抽出物中の、分子量５０
００以上の物質を主要有効成分とする好中球機能検査薬
を提供する。
［発明の効果Ｊ この発明によると、好中球の機部状態を試験管レベルで
筒便に検査することができる、従来の検査薬とは全く異
なる原理に基づく検査薬が提供される。
［発明の詳細な説明コ この発明の好中球機能検査薬は、以下のようにして得ら
れる、クロレラ抽出物（以下、ＣＥという）中に含まれ
る、分子量５０００以上の物質を主要有効成分とするも
のである。
まず、材料となるクロレラを準備する。クロレラ属に属
するいずれのクロレラをも用いることができる。クロレ
ラ属藻類の培養方法は広く知られており、例えば、炭素
源として酢酸又はグルコース、窒素源として尿素等、カ
リウム、リン源としてリン酸カリウムを加えた屋外池中
で、かくはんしながら行なうヘテロ培養によって培養す
ることができる。
次に、クロレラ藻体を水性溶媒によって抽出する。もっ
とも、この抽出に先立って、藻体をスプレードライする
ことが好ましい、スプレードライは、１２０℃以上の熱
風中に藻体を噴霧し、脱水することによって行なうこと
ができる。その後、クロレラ藻体を水性溶媒で抽出する
。ここで、水性溶媒とは、水、ｐＨ５から９の酸及び塩
基溶液並びに低級アルコールのような極性の強い有機溶
媒を意味する。抽出は、４℃ないし９８℃の水性溶媒を
用いて１５分間から１時間抽出することによって行なう
ことができ、好ましくは、９３℃から９８℃の水を用い
て１５分間から３０分間行なうことができる。また、抽
出時の藻体と水性溶媒との比率は、例えば藻体１ｇに対
して溶媒２０１である。ＣＥは、抽出後、遠心して上清
を回収することによって得ることができる。
このようにして得られたＣＥをそのままこの発明の好中
球機能検査薬として用いることができる。もっとも、さ
らに検査薬としてのＲｔｌＡを向上させるために、分子
量５０００以上の画分（以下、ＣＶＥ−Ａという）を回
収することによって精製することが好ましい０分子量　
５０００以上の両分は、ゲルろ過又は水による透析によ
って行なうことができる。ゲルろ過による場合には、広
く知られた市販のセファデックスＧ−２５（商品名）を
用い、水又はｐＨ５ないし８の無機溶媒を溶媒に用いて
行なうことができる。
上述のようにして得られたＣＥ又はＣＶＥ−Ａを試験管
内で好中球と混合しインキュベートすることにより、好
中球のＤＮＡ合成が促進され、細胞分裂を行なう準備状
態になる。好中球はほぼ成熟した細胞であり、従来、こ
のような作用は認められなかった。一般に、このように
細胞分裂を促進する機能を有する物質と細胞とを一緒に
インキュベートすると、機能の高い細胞はど細１庖分裂
が促進されることが知られている０例えば、Ｔ細胞の細
胞分裂を促進する物質としてフンカナバリンＡが知られ
ているが、Ｔ細胞の機能の程度に応じてフンカナバリン
Ａによる細胞分裂促進効果に差が現われるので、フンカ
ナバリンＡはＴ細胞の機能検査薬として用いられている
。同様に、ＧＥ又はＧＥＶ−Ａにより、機能の高い好中
球はどそのＤＮＡ合成がさかんになる。従って、ＣＥ又
はＣＶＥ−Ａとともに好中球をインキュベートし、その
ＤＮＡ合成の程度を検査することによって好中球の機能
を知ることができる。この際、ＣＥ又はＣＶＥ−Ａには
何らの製剤処理を行なう必要もない、　ＤＮＡ合成の程
度は、例えば′２ｓｌでラベルしたウリジンデオキシリ
ポース（以下、　ＩＵｄＲと記載する）のような、放射
ラベルしたヌクレオシド等の、核酸合成に用いられるマ
ーカーと好中球Ｉａ詣検査薬との存在下で試料好中球を
インキュベートし、その後、細胞中へのマーカーの取り
込み量を測定することによって行なうことができる。
この発明の好中球機能検査薬を用いた好中球機能の検査
は、具体的には例えば次のようにして行なうことができ
る。先ず、検査すべき大の末梢血を採血し、常法である
比重分離法を用いて好中球を得る。好中球１　ｘ　１０
５〜１　ｘ　１０’細胞１０．１ｍｌと、３０　ＪＬｇ
／ｍｌノＣＶＥ−Ａ（溶媒ハイずｎ　モＲＰＭ１１８４
０）０．１ｍｌ　とを混合し、３７℃で１時間ブレイン
キュベートする０次に、この混合液に　ｒＵｄＲを　１
ルＣｉ入れ、さらに３７℃で３時間インキュベートし。
”Ｉ［ＩｄＲの細胞内取り込み量を調べる。
支１１ ヒト末梢血を採血し、常法である比重分離法を用いて好
中球を得た。好中球１　ｘ　１０５〜１ｘ１０６　細胞
１０．１ｍｌト、　３０１ｊ＝ｇ／＋１（７）Ｃ：ＶＥ
−Ａ（溶媒ハイずれもＲＰＭ１１６４０）　０．１＋ｓ
ｌ　とを混合し、３７℃で１時間ブレインキュベートし
た０次に、この混合液に”Ｉ　ＩＪ　ｄ　Ｒを　ｌルＣ
ｉ入れ、さらに３７℃で３時間インキュベートし、”Ｉ
　Ｕ　ｄ　Ｒの細胞内取り込み量をガンマ−ウェルカウ
ンターにより調べた。対照として、ＣＶＥ−Ａを加えず
に同じ操作を行なった。
”’ＩＩＪ　ｄ　Ｒの取り込み量（ｃｐｓ）は、ＣＶＥ
−Ａ　（”）の実験群が２２１０±１０１　、　ＣＶＥ
−ＡＣ−）の対照群が８４３±２３であった。この結果
から、ＣＶＥ−Ａによって好中球のＤＮＡ合成が高めら
れていることがわかる。

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）クロレラ属に属する藻類の藻体を水性溶媒で抽出
    して得られる抽出物中の、分子量５０００以上の物質を
    主要有効成分とする好中球検査薬。
  2. （２）前記抽出は、９３℃から９８℃の温度下で１５分
    間から３０分間行なわれる特許請求の範囲第１項記載の
    好中球検査薬。
JP59194426A 1984-09-17 1984-09-17 好中球機能検査薬 Pending JPS6171358A (ja)

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AU47168/85A AU558017B2 (en) 1984-09-17 1985-09-09 Chlorella extract as testing agent for neutrophil function
EP85111459A EP0175267A3 (en) 1984-09-17 1985-09-11 Testing agent for neutrophil function
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US4778766A (en) 1988-10-18
AU558017B2 (en) 1987-01-15
EP0175267A2 (en) 1986-03-26
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CA1245957A (en) 1988-12-06

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