JPS618666A - B細胞機能検査薬 - Google Patents

B細胞機能検査薬

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JPS618666A
JPS618666A JP59128510A JP12851084A JPS618666A JP S618666 A JPS618666 A JP S618666A JP 59128510 A JP59128510 A JP 59128510A JP 12851084 A JP12851084 A JP 12851084A JP S618666 A JPS618666 A JP S618666A
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JP
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cells
chlorella
cell
chemicals
function
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JP59128510A
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Inventor
Kuniaki Tanaka
邦明 田中
Fumiko Konishi
史子 小西
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KURORERA KOGYO KK
Chlorella Industry Co Ltd
Original Assignee
KURORERA KOGYO KK
Chlorella Industry Co Ltd
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5091Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12Unicellular algae; Culture media therefor
    • C12N1/125Unicellular algae isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/89Algae ; Processes using algae

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  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はB細胞機能検査薬に関する。
B細胞は、肺臓やリンパ節、血液のような末梢リンパ系
組織中に存在するリンパ球のうち、抗体産生細胞の前駆
細胞である。B細胞は抗原刺激を受けると増殖分化し、
プラズマ細胞となって抗体を産4生ずる。B細胞の機能
、すなわち抗原刺激を受けた際に抗体産生細胞へと増殖
分化する機能が高ければ、外界からの異物に対する抗体
が多く産生され、このような異物によって引き起こされ
る疾病等が回避又は治癒される。従って、B細胞の機能
を検査することによって、その人の健康状態、特に疾病
に対する抵抗力ないしは免疫力を知ることができる。例
えばB細胞免疫不全症の場合、B細胞が少ないかあるい
は機能が低下している。
この発明の目的は、B細胞機能検査薬を提供することで
ある。。
すなわち、この発明は、クロレラ属に属する藻類の藻体
な水性溶媒で抽出して得られる抽出物中の、分子量5,
000以上の物質を主要有効成分とするB細胞機能検査
薬を提供する。
この発明のB細胞機能検査薬は、正常なり細胞を幼若化
する、すなわち、正常なり細胞の分裂、増殖を促進する
作用を有しているが、機能が低下したB細胞、あるいは
B細胞比率が少ない場合はあまり幼若化しない、このた
め、全試料あるいはB細胞画分をこの発明のB細胞機能
検査薬で処理し、B細胞の幼若化の程度を調べることに
よって、B細胞の機能を検査することができる。
この発明のB細胞機能検査薬は、以下のようにして得ら
れる、クロレラ抽出物(以下、CEという)中に含まれ
る、分子量5.000以上の物質を主要有効成分とする
ものである。
まず、材料となるクロレラを準備する。クロレラ属に属
するいずれのクロレラをも用いることができる。クロレ
ラ属藻類の培養方法は広く知られており1例えば、炭素
源として酢酸又はグルコース、窒素源として尿素等、カ
リウム、リン源としてリン酸カリウムを加えた屋外池中
で、攪拌しながら行なうヘテロ培養によって培養するこ
とができる。
次に、クロレラ藻体を水性溶媒によって抽出する。もっ
とも、この抽出に先立って、藻体をスプレードライする
ことが好ましい。スプレードライは、120℃以上の熱
風中に藻体を噴霧し、脱水することによって行なうこと
ができる。その後、クロレラ藻体を水性溶媒で抽出する
。ここで、水性溶媒とは、水、pH5から9の酸及び塩
基溶液並びに低級アルコールのような極性の強い有機溶
媒を意味する。抽出は、4℃ないし98℃の水性溶媒を
用いて15分間から1時間抽出するこ′とによって行な
うことができ、好ましくは、83℃から98℃の水を用
いて15分間から30分間行なうことができる。また、
抽出時の藻体と水性溶媒との比率は、例えば藻体1gに
対して溶媒20m1である。CEは、抽出後、遠心して
上清を回収することによって得ることができる。
このようにして得られたCEをそのままこの発明のB細
胞検査薬として用いることができる。
もっとも、さらに検査薬としての機能を向上させるため
に、分子量5 、000以上の画分(以下、CE−Aと
いう)を回収して精製することが好ましい。分子量5 
、000以上の両分は、ゲルろ過又は水による透析によ
って行なうことができる。ゲルろ過による場合には、広
く知られた市販のセファデックスG−25(商品名)を
用いて行なうことができる。
B細胞の機能を検査する際には、上述のようにして得ら
れたCE又はCE−Aを試料B細胞に作用させ、その後
のB細胞の幼若化の程度を調べる。この際、CE又はC
E−Aには何らの製剤処理を行なう必要もない。B細胞
の幼若化の程度は、例えrfゝ■でラベルしたウリジン
デオキシリポース(以下、”’I U d Rと記載す
る)のような、放射ラベルしたヌクレオシド等の、核酸
合成に用いられるマーカーとB細胞機能検査薬の存在下
で試料B細胞をインキュベートし、その後、細胞中への
マーカーの取り込み量を測定することによって行なうこ
とができる。
B細胞機能を検査する際のこの発明のB細胞機能検査薬
の使用方法の一例をさらに詳細に説明する。小試験管に
リンパ球比重液31を入れ、この上に2mlのリン酸緩
衝溶液(PBS)で稀釈した2易1の試料血液(合計4
m1)を静かに積層する。これを400gで30分間遠
心すると、赤崩球は底部に、リンパ球は液と液との界面
に集まるので、リンパ球のみを採取する。このリンパ球
は、T細胞とB細胞とを含む。得られたリン、<球懸濁
液をRPM11840培地を用いて5xlO’細胞/’
mlに調製する。その100 ルlを、10mg/ml
のCE又はGE−A(RPMI 1840培地に溶かし
たもの) 100 pLlと混合し、炭酸ガスインキュ
ベーターを用いて37℃で42時間インキュベートした
後、20 pg/+ilの” I U d Rを20g
1加え、さらに6時間インキュベートした後の細胞への
取り込み量を調べる。
炭素源として酢酸又はグルコース、窒素源として尿素等
、カリウム、リン源としてリン酸カリウムを加えた屋外
池中で、攪拌しながら行なうヘテロ培養によってクロレ
ラ拳ブルガリス(Chlorella vulgari
s)を培養した。クロレラ藻体を120°Cの熱風中に
噴霧して乾燥した。このようにして得られた乾燥クロレ
ラ藻体のIgを93℃の水201中に入れ、ときどきか
きまぜながら93℃から98℃にて15分間加熱した。
その後、4℃に冷却し、8.0OOrp脂で15分間遠
心し。
上清を回収してCEを得た。次にセファデックスG−2
5(商品名)を用いてゲルろ過し、分子量。
5.000以主の両分(CE−A)を得た。
C3H/HeN マウスの牌細胞をRPM11840培
地零1(含5zウシ胎児血清、2−メルカプトエタノー
ル)培地で5xlO’ 細胞/1に懸濁し、その100
pl と実施例1で得たCE−Aを種々の濃度に稀釈し
たもの又は対照として、既知のT細胞幼若化剤であるコ
ンカナバリンA(以下、ConAと記載する)若しくは
既知のB細胞幼若化剤であるリポポリサッカライド(大
腸菌由来、バイオロジカル・ラボラトリーズ社、米国カ
リフォルニア製造、以下LPSと記載する)の種々の濃
度の溶液100p+ とを混合してマイクロプレートに
まき、37℃に81/Xで炭酸ガスインキュベーター中
でインキュベートした。さらにまた、対照として上述の
細胞懸濁液のみを同じ条件で培養した。測定の6時間前
にプレートに201LCi/mlの12ダTUdRを2
0JL+加えた。測定は培養開始後24時間、48時間
、及び72時間のそれぞれにおいて行なった。 lIb
1Rの取り込み量は、6検体の平均値を示した。
結果を第1表及び図に示す。
第1表 培養時間24時間、48時間、72時間の細胞による”
IUdRの取り込み量(xlO’ cpll)才2SI
  促進指数(Stimulation Index)
幼若化剤を加えないコントロールの取り込み量を1.0
に取り、その他のものの取り込み量をそれとの比で表わ
したもの 第1表かられかるように、C3H/HeNマウス牌細胞
に試験管内でGE−Aを添加しIUdRの取り込みを調
べると、LPSにはやや劣るが、取り込みが高まり、リ
ンパ球幼若化能を示した。また、図かられかるように、
この活性は濃度依存性である。また、第1表から、取り
込みのピークは48時間であることがわかる。
零I  RPMIIEi40培地の組成(単位はmg/
1m l )L−アルギニン・HGI     200
L−アスパラギン      50.OL−アスパラギ
ン酸     20.OL−システィン       
50.0L−グルタミン酸       20.0L−
グルタミン       300.0グリシン    
    10.0 L−ヒスチジン・MCI     15.0ヒドロキシ
−し−プ゛ロリン  20.OL−イソロイシン   
   50.0L−ロイシン         50.
OL−リジンMCI          40.OL−
メチオニン       15.OL−フェニルアラニ
ン    15.OL−プロリン         2
0.OL−セリン          30.OL−ス
レオニン       20.OL−トリプトファン 
    5.O L−チロシン        20.OL−バリン  
        20.OL−パラアミノ安息香酸  
 1.0 ビオチン          0.2 パントテン酸カルシウム  0.25 コリンクロライド     3.0 葉酸           1.0 イノシトール       35.0 ニアシンアミド       1.0 ピリドキシン−MCI      1.0リボフラビン
       0.2 チアミン・HCl        1.0ビタミン81
2         0.005グルコース     
  2000 グルタチオン       l・O Mail           8000KCI  ’
          400Mg5Q+・7H□010
0 Na、 opo4−7Ha 0        151
2(:a(NO3)2−4H,0100 フエノールレツド      5.0 CE−Aがリンパ球を幼若化していることは実施例2よ
り明らかとなったが、CE−Aがリンパ球中のB細胞を
幼若化しているのかT細胞を幼若化しているのかを調べ
た。
CH/HeN牌細胞をanti−〇(anti thy
l、 2)と補体で処理して、T細胞を破壊した。これ
を用いて実施例1と同様な実験を行なった。結果を第3
表に示す。
第2表 anti−θ十補体処理牌細胞(゛48時間培養)の”
’I U d R取り込み量(xlo’cpm)第3表
かられかるように、T細胞を破壊した試料を用いてもC
E−Aの活性が落ちないことから、CE−AはB細胞の
幼若化剤であることがわかる。
また、B細胞を含まない、C3H/HeNマウスの胸腺
細胞を用いて実施例1と同様な実験を行なった。結果(
48時間培養のもの)を第3表に示す。
第3表 第3表に示されているように、T細胞から成る胸腺細胞
を、T細胞幼若化剤であるCanAは幼若化するが、 
GE−Aは幼若化しなかった。従って、C;E−Aはや
はりB細胞幼若化能を有していることがわかる。
【図面の簡単な説明】
図はこの発明のB細胞機能検査薬であるGE−Aと、既
知のB細胞幼若化剤であるLPSの、B細胞に対する幼
若化の程度を示す図である。

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)クロレラ属に属する藻類の藻体を水性溶媒で抽出
    して得られる抽出物中の、分子量5,000以上の物質
    を主要有効成分とするB細胞機能検査薬。
  2. (2)前記抽出は、93℃から98℃の温度下で15分
    間から30分間行なわれる特許請求の範囲第1項記載の
    検査薬。
JP59128510A 1984-06-22 1984-06-22 B細胞機能検査薬 Pending JPS618666A (ja)

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AU43792/85A AU556437B2 (en) 1984-06-22 1985-06-18 Extract of chlorella used for testing b-cell blastogenesis
EP85107601A EP0165606A3 (en) 1984-06-22 1985-06-19 Testing agent for b cell blastogenesis
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CA1244329A (en) 1988-11-08
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