JPS6030694A - Ｌ−トリプトフアンの分離精製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＬ−１〜リプトフアンの分離精製方法に関する
。

さらに詳しくは発酵または酵素法により得られたＬ−１
−リプトファンを含む反応マス中に脂肪族低級アルコー
ルを添加して晶出させることにより発泡性が低く、かつ
色相のすぐれた精り一トリプトファンを得る方法に関名
１ Ｌ−）−リプトファンは、必須アミノ酸の一つであり、
医薬品、飼料などに使用される有用な化合物である。

Ｌ−１−リブトファンの製造方法としては、発酵法、酵
素法が知られているが、合成法と違い、発酵法、酵素法
の場合は菌体由来の不純物が蓄積し、各種精製工程を経
ても不純物は充分除去しきれず、発泡成分、着色成分と
して残留する。またＬ−１−リブトファン自体熱、光に
弱く遮光下においても熱変性により発泡成分、着色成分
に変化する。

発酵法または酵素法によるＬ−）−リプトファン製造法
は、水性媒体中で、トリプトファンシンセターゼの作用
を有する酵素や菌体の存在下で、例えばインドールとセ
リンと乞反応させて得られているが、インドール及びト
リプトファンは水に難溶性であるため、また得られたス
ラリー状の反応液から分離のためには、菌体や酵素を除
去せねばならず、こ１は活性炭などの固体の菌体吸着物
の存在下反応液スラ・１リーを水希釈して水溶液となし
固液分離されるので最終的には通常２〜４％のＬ−）−
リプトフアンを含む希薄な反応水溶液しか得られない。

この反応マスを通常レエ加熱濃縮後、晶析工程に付して
、Ｌ−１−リプ１フアン結晶を晶出し、分離、乾燥して
製品としているが、発酵法、酵素法で得られたし一トリ
プトファンを含む反応液は、前記のような除菌のための
助処理を行っても、そのまま晶出して得られた製品シエ
、不純物が含ま汎ていて発泡性や着色性が大きく、市場
価値の乏しい製品しか得ることができなかった。

本発明者らは、これらの問題について鋭意検討の結果、
晶析操作乞アルコール／水系で実施することにより、発
泡成分、着色成分となる不純物をｐｌ個へ抽出移行せし
めて、これを分離、乾燥することにより発泡成分及び着
色成分の殆んど含まれない製品り一トリプトファンを得
ることが可能となり、本発明方法を完成させたものであ
る。

本発明に用いる脂肪族低級アルコールは、メタノール、
エタノール、ｎ−−１０パノール、インプロパツール、
ｎ−ブタノール、イソブタメールなとであり、特にイソ
プロパツールは好ましいアルコールである。

本発明は以下のようにして実施する。

Ｌ−１−リプトファンを２〜３重量％含む反応マスから
除菌濾過した反応水溶液を、常法に従い減圧まｒ：　＋
ｘ　ｌｋ　圧下、５０〜１００℃にｌＪＤ熱ａｍしＣ１
Ｌ−トリプトファン５〜３０重量％含有、好ましくは１
０〜２０重隆％含有の濃縮液とする。冷却後、用いるア
ルコールの共沸点以下、好ましくは２０〜５０゛Ｃの濃
縮液にアルコールを添加して、アルコールの濃度が少く
とも５重量％以上になるようにして晶析を行う。晶析マ
ス中のアルコール濃度が５％以下では精製効果に乏しく
、また、７０〜８０重量％のような高濃度にする必要は
なく、必要量以上のアルコールの添加は工業的メリット
がないだけでなく、精Ｌ−１−リプトファンの収率も低
下する傾向になるので、通常は不純物の含有量にあわせ
て２０〜６０重量％の範囲の濃度で実施するのが好まし
い。また晶析工程に付す晶析マス中のＬ−１−リブトフ
ァン濃度は５重量％以上に濃度アップすれば充分であり
、３０％以上の濃縮はトリプトファン自体の加熱分解に
よる発泡の原因にもなるので、必要以上の濃縮（工避け
たほうがよい。晶析工程、及びこｎにより得られたスラ
リの固液分離の温度ＧＸ−１０’０〜２０℃が適当であ
り、晶析工程では窒素雰囲気下でもよく、弱攪拌しなが
ら２〜４０時間析出させるのが望ましい。

分離したＬ−１−リプトファンは、その後さらに水もし
くは含水アルコールで洗浄し、望ましくは８０℃以下の
空気または窒素雰囲気下で乾燥すれば、発泡成分及び着
色成分となる不純物を殆んど含有しない精Ｌ−１〜リプ
トファンが得られる。

また固液分離により分離された母液中のアルコールは、
常法によりアルコール−水共沸系で回収される。

以下実施例を示すが、実施例中％は重量％である。

〔実施例１〕 大腸菌を培養して生産さ第１た酵素！〜リプトファンシ
ンセターゼの存在下、水性媒体中でインドールとセリン
ン縮合させて得たＬ−トリプトファンを含む反応液に、
活性炭及び水を添加し、９５〜１００″Ｃで１時間加熱
して菌体乞フロック化後、活性炭に吸着された菌体乞濾
過により除去した。このようにして前処理して得ら第１
たＬ−）−リブトファン４％を含有する水溶液１３３ｓ
、９（１−リプトファン公約５３４、！ｉ’　）　Ｙ　
＋−リプトファン濃度１１，５％になるまで當圧で９５
〜１００　”Ｑで２４時間かけて加熱濃縮した。

次に室温まで冷却後、これに濃縮マスとほぼ同量のイソ
プロパツール４２６ｇ　を添加して、晶析マス中のイン
プロパツール濃度を４７．８％にして、１時間弱攪拌を
続け、さらに５“Ｃで２０時間冷却して１−リー液を、
ヌツチェを用いて濾過し、固相分をさらに１６０ｇの冷
水を用いて洗浄後、７０℃の空気中で減圧乾燥させた。

このようにしてＬ−トリプトファンのドライケーキ３７
．５．９Ｙ得た。（晶析収率７０２％）また泡立ち度、
透過率は表１のとおりであった。

〔実施例２〕 実施例１で−ｆツブロバノール４２６ｇｙｘ添加する代
りに、イソプロパツール１３７ｇ（晶析マス中のイソプ
ロパツール濃度２２．６％）を添加したほかは実施例１
と全く同様にしてＬ−トリプトファンのドライケーキ４
５１ｇを得た。（晶析収率８４５％）これの泡立ち度、
透過率は表１のとおりであった。

〔実施例３〕 実施例１でイソプロパツール４２６ｇを添加する代りに
、メタノール４２６ｇを添加したほかは実施例１と全く
同様にしてＬ−トリプトファンのドライケーキ３５．０
］ｔ’得た。（晶析収率６５．５％）これの泡立ち度、
透過率は表１のとおりであった。

〔比較例ｆ〕

インプロパツールを添加しなかった以外は、実施例１と
全く同様にしてＬ−）−リプトファンのドライ〔比較例
２〕 実施例１で製造した反応液乞、実施例１と同様の活性炭
、熱処理による除菌操作の前処理を２回繰返し、また晶
析工程ではイソプロパツールを添加しなかつ７と以外は
実施例１と全く同様にしてＬ−１〜リプトフアンのドラ
イケーキ３０．０．第７を得た。（晶析収率５６．２％
、ただしこれには前処理時の活性炭による吸着ロスの繰
返し分も含まれる。）これの泡立ち度、透過率は表１の
とおりであった。

表１ 注−１ノ 泡立ち度の測定方法はとも栓、目盛付の５９ｍ１容試験
管（１８ｍｔ１１９６Ｘ　２４０　＋ｕ　）　ヲ用１ｚ
）、乾燥サンフル（ドライケーキ）０．６１１ｆ入１２
ＮＨＣ７３（ｌＡ’ｌＪＯ工３．０秒間上下によく振と
５発泡させる。振とぅ直後および一定時間後の泡高さ？
測定した。即ち、例えば振と５後の油部分を含めた全容
積が４Ｑｍｌの場合泡立ち度’ｆｘ　１０と表示した。

注−２ン 透過率の測定方法（工、乾燥サンプル（ドライヶーキフ
を２ＮのＨＣｌに溶かし２％水溶液とし、４３０ｎｍに
て透過率（Ｔ％）を測定しＴ：。

特許出願人 三井東圧化学株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　発酵または酵素法により得られたＬ−１−リプトフ
   ァン反応液から、晶析によりＬ−１−リプトファンを分
   離するに際し、反応液を濃縮後、脂肪族低級アルコール
   を添加して、晶出を行うことを特徴とするＬ−）−リプ
   トファンの分離精製方法。 ２　濃縮液晶析マス中の１−リプトファン含有量が、５
   〜３０％である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３　濃縮液晶析マス中のアルコール濃度が２０〜６０重
   量％の割合になるようにアルコールを添加する特許請求
   の範囲第１項記載の方法。