JPS6027391A - 抗生物質オ−ランチニン・ｂおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗生物質オーランチニン・Ｂおよびそ
の製造方法に関するものである。

さきに、本発明者らは、バチルス属に属する微生物を培
地に培養することにより、新規抗生物質が生成されるこ
とを見出し、この物質なオーランチニンとしてＪ、　Ａ
ｎｔｌｂｉｏｔｌｃｓ、　３１．５２５−５３２　（１
９７８）に、またＫＭ−２１４物質として特願昭５１−
１５４３４　号（特開昭５２−１００４０１号）として
開示した。その後、本発明者は、オー２ンチニン生産菌
のバチルス・オーランチナス（Ｂａａｉｌｌｕａａｕｒ
ａｎｔｉｎｕａ）　ＫＭ−２１４株が、オーランチニン
（ＫＭ−２１４物質）よりも強い抗菌活性を有する新規
抗生物質を生産することを見出し、この物質なオー２ン
チニン・Ｂと命名した。本発明は上記の知見に基づくも
のである。

本発明の目的は新規抗生物質オー２ンチニン・Ｂおよび
その製造方法を提供することにある。

オーランチニン・Ｂの理化学的性質を次に示す。

（１）　元素分析（％＞　ｃ　：　６７．１６　Ｈ：　
７．７４（２）分子量および分子式 分子量は７８０　（、フィールドディソープション質量
分析で鰐、　ｎ％ｚ　７８０　を与えた）がめられ、元
素分析値から分子式 〇＜４ＨｓｏＯｓ＊が与えラレル。

（３）　融点　９５°〜９８℃ （４）　比旋光度 ５ 〔α）Ｄ＋　１２４（ｅ　＝　０．３３　エタノール）
（５）紫外線吸収スペクトル 第１図の通シ（メタノール中で測定） （６）　赤外線吸収スペクトル 第２図の通シ（ＫＢｒ法で測定） オーランチニジ・Ｂの生物学的性質は次の通りである。

（１）抗菌活性 寒天希釈法による最小阻止濃度（ＭＩＧ）　は第１表に
示す通りである。

第　１　表 （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏａａｕａ　ａｕｒｅｕｓ）＃　
＃　Ｆ８−１２７７　２５ １　／’　ＫＢ−１９９１２，５ バチルス・サプチルス　ＡＴＣＣ６６３３１００（Ｂａ
ｃｉｌｌｕｓ　１ｕｂｔｉ口１）バチルス・セレウス　
ＩＰＯ３００１１００（、Ｂａａｉｌｌｕｍ　ａｅｒｅ
ｕｓ）バチルス・アンスラシス　ＫＢ−３１５０（Ｂａ
ｃｉｌｌｕａ　ａｎｔｈｒａｃｉｇ）ミクロコツカス・
ルテイウス　ＡＴＣＣ９３４１１２，５（Ｍｌｃｒｏｃ
ｏｃｅｕｓ　１ｕｔｅｕａ）ミコバクテリウム・スメグ
マテス　ＡＴＣＣ６０７）１００（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ　ｓｍａｇｍａｔｉｇ）ニジエリシア・コリ　
ＮＩＨＪ　＞１００（Ｅｓｃｈｓｒｉｅｈｉａ　ｃｏｌ
ｉ）クレブシェラ・ニューモニアエ　Ａ’ｌ’ＣＣ１０
０３１＞１００（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏ
ｎｌａｓ）プロテウス・ブルガリス　ＩＦＯ３１６７＞
１００（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ）シュード
モナス・エルギノーサ　ＩＰｏ　３０８０　＞１００（
１００（Ｐｓｅｕｄｏ＠　ａ＠ｒｕｇｌｎｏｓａ）クロ
ストリジウム・バー７リングンス　ＫＢ　１２８　０．
７８（Ｃｌｏｓｔｒｌｄｉｕｍ　ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎ
ｓ）／ｒ　Ｉ　ＫＢ　１２９　６．２５ クロストリジウム・カイナントイ　ＫＢ　１３３　１，
５６（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｋａｉｎａｎｔｏｉ）
クロストリジウム・ノピイ　ＫＢ　１３６　０．３Ｊ（
Ｃｌｏａｔｒｌｄｉｕｍ　ｎｏｖｙｌ）バクテロイデス
・フラジリス　ＫＢ　１６９　＞Ｚｏ。

（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａａ　ｆ’ｒａｇｉｌ１ｇ）フッ
バクテリウム・バリウム　ＫＢ　２３４　≦１１００（
Ｆｕａｏｂａｃｔｅｒｉｕ　ｖａｒｌｕｍ）（２）急性
前件 本抗生物質をマウス腹腔内投与した場合のＬＤ＋ｓｏ値
は１００■／ＫＦ以上である。

オーラチ二ン・Ｂはダラム陽性菌に活性を示し、ヒトお
よび動物の微生物感染症に対する治療薬、予防某として
の使用が期待される。上記の理化学的性質および生物学
的性質に一致する既知抗生物質は知られていないので、
本抗生物質は新規化合物であると認められる。

本発明によυ、バチルス属に属し、抗生物質オーランチ
ニジ・Ｂを生産する能力を有する菌株を培地に好気的に
培養し、培養物中にオーランチニジ・Ｂを蓄積させ、こ
れを採取することによってオーランチニジ・Ｂを得るこ
とができる。本発明の方法に、バチルス属に属し、かつ
外線、エックス線、放射線、化学薬剤尋を用いる人工的
変異手段で変異して得られる変異株を使用するととがで
きるが、実施例に記載された菌株は、バチルス９オーラ
ンチナス（Ｂａａ　ｔ　ｌ　ｌｕ＠ａｕｒａｎｔｌｎｕ
ｓ）微工研菌寄第３３７９号である。

培養は、培地として公知のバチルス属微生物の培養に用
いられる培地を使用して行なうことができる。培地の炭
素源としては、たとえばグルコース、マルトース、テン
プｙ１デキストリン等の糖質を、また窒素源としては、
たとえば硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、アミノ
酸、蛋白性物質等の無機、有機の窒素源を単独または混
合物として使用することができる。所望によシ、たとえ
ばカリウム、ナトリウム、マグネシウム、カルシウム、
鉄、燐酸等の無機物、ビタミン、肉エキス、酵母エキス
、ペプトン、有機酸、その他の生育促進物質を適宜加え
ることができる。

培養は静置でもよいが、振盪捷たは通気攪拌培養などの
好気的条件下に行なうのが実用的である。培養中に消泡
な必要とする時は、たとえばニラフールＢＯ−２（日光
ケミカルズ株式会社製）を使用するとよいが、この他に
シリコン樹脂、大豆油、アデカノールＩ、Ｇ−１０９（
旭電化株式会社製）などの消泡剤も使用することができ
る。通常、培養はｐＨ６，０〜７．０、温度２０〜４２
０６１時間はおよそ２４〜７２時間程度で行なわれる。

オーランチニン・Ｂの精製単離の例を次に示す。オーラ
ンチニン・Ｂは主として培養液中に生成蓄積される。本
抗生物質は脂溶性酸性物質であるから、培養物からの本
抗生物質の採取および精製は脂溶性酸性抗生物質を採取
するために用いられる一般的方法を適用するのが実用的
である。たとえば適当な溶媒を用いる溶媒抽出法が好適
である、。

培養物から菌体その他を除去した培養液からが、酸性側
（ｐＨ４以下）に調整した後に抽出するのが好ましい。

たとえば、このようにして得られたオーランチニン・Ｂ
を含むｎ−酢酸ブチル抽出液を減圧下濃縮乾固し、その
乾固物から油脂類を除くためにｎ−ヘキサンで洗浄し、
粗物質を得る。

この粗物質をセファデックスＬＨ−２０（生化学工業社
製）のカラムにのせ、メタノールで展開し、活性区分を
集め濃縮乾固する。ついでシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーを行ない、クロロホルム−メタノールの混合溶
媒系で溶出し、活性区分を集めて減圧渥縮乾固し、黄白
色粉末を得た。この粉末についてホウ酸処理したシリカ
ゲルのクロマトグラフィーな行ない、クロロポルム−メ
タノールの混合溶媒で展開溶出し、活性部を集め濃縮乾
固する。さらに、この粉末をセファデックスＬＨ−２０
０カラムにのせ、メタノールで展開し、活性分画を集め
濃縮乾固し、黄白色粉末状のオーランチ二ン・Ｂを得る
。

なお、生産されたオーランチニン・Ｂの定量は、バチル
ス・ズブチルスおよびクロストリジウム・パーフリンゲ
ンスを試験菌とする通常の微生物検定法で行なうことが
できる。

実施例 グルコース１．０％、硫酸アンモニウム１．０％、酵母
エキス０．５％、燐酸第一カリウム０．２％、硫酸マグ
ネシウム７水塩０，０５％および炭酸カルシウム０．３
チを含有する培地（１）Ｈ７，０）　１００ｄを５００
ｍ１容坂ロフラスコに分注し、１２０℃、２０分滅薗す
る。これにバチルス・オーランチナス（微工研菌寄第３
３７９号）を接種し、２７℃で４８時間、毎分１２０回
転で往復振盪培養を行なった。

この培養物を上記と同一組成の培地７０Ａ！を有する１
００１容タンクファーメンタ−に１チの割合で接種し、
２７℃、毎分２００回転で毎分３５１の無菌空気を送り
、６８時間通気攪拌培養を行ない、オーランチニン・Ｂ
を含有する培養物を得た。

この培養物をシャープレス屋遠心機を用いて遠心処理し
、菌体な含む不溶物を除き、培養ｒ液６０１を得た。こ
の培養Ｐ液を希塩酸でｐＨな２に調整した後、ｎ−酢酸
ブチル４０１を加え室温で約１時間攪拌抽出する。ｎ−
酢酸ブチル層を減圧下で濃縮し、２ノのｎ−へキサンを
加え、オーランチニン・Ｂを含む褐色タール状物質１５
ｇを得た。このタール状物質を６０コのメタノールに溶
解し、あらかじめメタノールに懸濁させたセファデック
スＬｌｌ−２０（４０Ｑ　Ｆ　、生化学工業社製）を充
填したカラム上輪に添加した・カラムをメタノールで溶
出し、２０ｄずつ分画した。

活性分画（Ｎｏ、６５〜１４５）を集めて減圧下で濃縮
することにより粗物質５．５１を得た。この組物５ｑ２
．７５１／のクロロホルム溶液を、あらかじめクロロホ
ルムに懸濁させたシリカゲル（７０Ｆ　。

和光紬薬社製）を５雪諺の厚さに充填した遠心クロマト
グラフ装置（日立製作新製、Ｃ，ＬＣ−５型）にのせ、
クロロホルム−メタノール（９７：３Ｖ／マ）を溶出溶
媒とする遠心クロ・マトグ２フィーを行なった。溶出液
の活性分画を集め、濃縮乾固し組物質６５０■を得た。

あらかじめホウ酸処理したシリカゲルを５ｍｇの厚さに
しいた薄層板にこの物質のクロロホルム溶解液をスポッ
トし、クロロホルム−メタノール（１０：１）で展開し
た。薄層板を風乾後、オーランチニン・Ｂの活性￥ＦＲ
ｆ　値０．３５付近をかきとって集め、展開溶媒と同じ
溶媒で溶出した。溶出液を減圧下で濃縮乾固し、８８■
の粉末を得た。この粉末を５１のメタノールに溶解し為
あらかじめメタノールに懸濁させたセファデックスＬＨ
−２０（１０，９、生化学工業社製）を充填したカラム
上端に添加した。カラムをメタノールで溶出し、Ｓ　ｒ
ｕｔずつ分画した。活性分画（Ｎｏ。

６〜１５）を集めて減圧下で濃縮乾固し、５９■のオー
ランチニン・Ｂを黄色粉末として単離した。

【図面の簡単な説明】

第１図はオーランチニン・Ｂの紫外線吸収スペクトル（
エタノール中で測定）、第２図は赤外線吸収スペクトル
（ＫＢｒ法で測定）を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１１次の理化学的性質を有する抗生物質オーランチ二
   ン・Ｂｏ ■　分子式　〇４４）１１１００１２ ■　比旋光度 〔α〕２５°＋１２４　（ｅ悶０．３３．エタノール）
   ■　紫外線吸収スペクトル　第１図の通シ■　赤外線吸
   収スペクチル　第２図の通り（２）　バチルス属に属し
   、抗生物質オーランチ二ン・Ｂを生産する能力を有する
   菌株を培地に好気的に培養し、培養物中にオー２ンチニ
   ン・Ｂを蓄積させ、これを採取することを特徴とする特
   許請求の範囲第１項記載の抗生物質オー２ンチニン・Ｂ
   の製造法。 （３）　バチルス属細菌として、バチルス・オーランチ
   ナス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｕｒａｎｔｉｎｕｓ）（微
   工研菌寄第３３７９号）を使用する特許請求の範囲第２
   項記載の方法。