JPS60227685A - 物質ｇｉｆ−２及びその製造法 - Google Patents

物質ｇｉｆ−２及びその製造法

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JPS60227685A
JPS60227685A JP59082000A JP8200084A JPS60227685A JP S60227685 A JPS60227685 A JP S60227685A JP 59082000 A JP59082000 A JP 59082000A JP 8200084 A JP8200084 A JP 8200084A JP S60227685 A JPS60227685 A JP S60227685A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は静菌性を有する物質ＧＩＦ−２及びその製造法
に関するものである。
本発明者らは、昆虫寄生菌群微生物を取扱中たオた捷昆
虫寄生菌群微生物を静菌させる細菌の存在を知り、該細
菌を検索したところバチルス・セレウスに属する細菌で
あることを確認し、更に該細菌の生産する静菌物質につ
いて研究したところ、該物質が新規物質であることを確
認し、これをＧＩＦ−２と命名し、本発明を完成するに
到った。
本発明で使用する菌はＧＩＦ−２を生産するものであれ
ばいずれでもよいが、例示としてはＢａｃｉｌｌｕｓ　
ｃｅｒｅｕｓ　ＳＷかあげられる。Ｂａｃｉｌｌｕｓｃ
ｅｒｅｕｓ　ＳＷは新だに分離された新菌株であり、微
工研にＦＥＲＭ　Ｐ−７２４２として寄託され、１だ菌
学的性質の概要は次の通りである。
ダラム染色　十 胞子染色　十 Ｖ−Ｐ　ｔｅｓｔ　＋ カタラーゼテスト　＋ オキシダーゼテスト　＋ （′５） ５０℃における生育　− 熱耐性テスト１０℃３０分）＋（生育）Ｅｇｇ−Ｙｏｌ
ｋ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　＋バチルス・セレウスＳ界方ど
け生育する適宜の培地で培養される。培地としては次の
組成のものが例示される。
（培地１） ポリはプトン　６　％ イースト・エキストラクト　０．５チ ＮａＣ１０，５％ 脱イオン水　９６　チ （ｐＨ＝　７．０　） （Ｌ培地） パクト・トリプトン　１　チ イースト・エキストラクト　０．５襲 ＮａＣｌ　”　０．５％ （ｐＨ二ＺＯ） （ＭＹ培地） ラクトース　１　％ ポリはプトン　０５％ （４） イースト・エキストラクト　０．３％ マルト・エキストラクト　０．３％ （０，０５Ｍリン酸バッファーによりｐｒ−＋　＝ＺＯ
に調整） 捷た、これら培地以外でも、炭素源、窒素源、微量栄養
素を適宜含有した細菌培地等が有効に使用される。
培養は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３０°Ｃで２〜
３日間振とり培養、通気培養、静置培養など好気的に培
養される。
得られた培養液は７，５００ｒｐｍＸ１０　分の遠心分
離により菌体が分離される。
この培養ろ液は、好ましくは、更に濃縮される。
得られた培養ろ液に最終１チになるように塩化カルシウ
ムを添加し、生じる沈澱を２．５０Ｏｒｐｍ×１０分の
遠心分離により取得し、得られた沈澱は１００ｍＭＢＤ
ＴＡ−０，０５Ｍ）リス−ＨＣｌバッファ　−（＋）Ｈ
８，Ｏ）に溶解し、これを０．［１５Ｍ燐酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝７．ｔＨに対し、て透析し、内液に最終８゜チなる
ようにエタノールを加えた。
沈澱物を除去Ｌ７、得られた上澄液を真空乾燥し、脱イ
オン水に溶解し７、塩酸を加え、ｐ）１３に調整し、沈
澱物を生成させた。
得られた沈澱物を０．０５　Ｍ　ＮａＨＣＯ３に溶解し
、脱イオン水に対し透析【７、内液をセファデックスＧ
−１００／Ｈ２０に通した。
通過液に最終８０％になるようにエタノールを加え、２
〜３日４℃に放置すると白色結晶沈澱物が生成する。
これを真空で乾燥させ、顕微鏡で観察すると、白色柱状
微細結晶を呈する、ＧＩＦ−２が得られた。
次に、０ＩＦ−２の理化学的性質を示す。
１、　分子量：質量分析機による測定で分子量は１０５
７であった。
２　物ａの色及び性状：白色柱状微細結晶３、融点：２
１０〜２１５℃で薄茶色に多少収縮し、２６４〜２６９
℃で濃茶色となり、２４０〜２４５°Ｃで炭化する。
４、紫外線吸収スズクトル二本物質２．８％水溶液の紫
外紳吸収スはクトルは第１図に示す通り。
５、　赤外線吸収スはクトル：第２図に示す通り。
６　溶剤に対する溶解性：水、メタノール、エタノール
、ｔ−ブタノールに可溶。
ｎ−ブタノール、アセトン、エチルアセテート、エーテ
ル、クロロホルム、ベンゼン、４塩化炭素、石油エーテ
ルに不溶。
Ｚ　呈色反応： ＣＢＢテスト　＋ キサントプロティンテスト　＋ アダム・キーライラッテスト　− エーリツヒテスト　− ピューレットテスト　＋ ８、性質の区別：本物質１．４ｍｇ／ｍｌ水でｐＨ＝７
６である。
９　アミノ酸絹成二アミノ酸分析機によるアミノ酸組成
は次の通りである。
（７） ただし、６つのＸのうち１っけアマイド結合を有するも
のである。また、上記アミノ酸以外にβ−アミノ酸１分
子が質量分析において認められる。
１０　推定構造式 ただし３つのＸのうち１っはアマイド結合を有するもの
でありＲ８は次式のβ−アミノ酸残基を示す。
（８） 次ＩＣ１ＧＩＦ’−２の抗菌活性を示す。
次の培地を用いて各種微生物に対する抗菌活性をみた。
表１〜４にその結果を示す。
細菌（一般）用培地 肉エキス　１ｏ！９ はプトン　１０ｇ ＮａＣ１１５’／ｉ 水　１１ （ｐＨ７２） ミコバクテリウム用培地 グリセロール　１ｏｇ ポリはプトン　１［１ｇ カザミノ酸　５ｇ 酵母エキス　５ｇ Ｎａ２ＨＰＯ４０，５Ｅｌ 水　１） （ｐＨ７，２） 真菌用培地 ラクトース　１０ｇ ポリはプトン　５ｇ 酵母エキス　３ｇ 麦芽エキス　３ｇ ０．０５Ｍ燐酸緩衝液　１１ （ｐＨ７，（ｌ］） 操作：ミクロタイタープレート上で２７°Ｃ３〜７日培
養による。
表１ Ｓｔｒａｉｎ　Ｍ、Ｉ、Ｃ，（μｇ／ｍ１）Ｂａｃｉ！
Ｉｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ　ＩＡＭ　１２０６）６２５
ＩＡＭ　１０６９　＞６２５ ＩＡＭ　１１４５　＞６２５ ＩＡＭ　１１６８　＞６２５ ＩＡＭ　１１６９　＞６２５ ＩＡＭ　１２０７　＞６２５ ＩＡＭ　１２１２　＞６２５ Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ　ＩＡＭ　１２１
３　＞６２５ＩＡＭ　１２５９　＞６２５ ＩＡＭ　１２６０　＞６２５ ＩＡＭ　１１０６０　＞６２５ ＩＡＭ　１２０２１　＞６２５ ＩＡＭ　１２１１８　＞６２５ Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓＩＡＭ
　１１０５４　＞６２５ Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｏｌｙｍｉｘａ　ＩＡＭ　１２１
０　＞６２５Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ　ＩＡＭ
　１０２９　＞６２５ＩＡＭ　１０７２　＞６２５ ＩＡＭ　１１１０　＞６２５ ＩＡＭ　１６５６　＞６２５ ＩＡＭ　１７２９　＞６２５ Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｏａｇｕｌａｎｓ、ＩＡＭ１１９
４　）６２５Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ　８Ｗ　
＞＜５２５（１１） 表２ Ｓｔｒａｉｎ　Ｍ、１．Ｃ，（μｇ／ｌｎｌ’）Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ＩＡＭ　１２６Ｂ　＞６
２５ｐｒｏｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ　ＩＡＭ　１０
２５　）６２５Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　１ｕｔｅｕｓ
　ＩＡＭ　１０５（Ｓ　）６２５Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｏ
ｐａｃａ　ＩＡＭ　１２１２３　）６２５ＡＵ　１５７
４　＞６２’５ （１２） 表３ ＡＴＣＣ２８９９６３９ ＡＴＣＣ２Ｂ９９７１９．５ ＣＢ８１５３　１９．５ Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ　ｔｈｒｏｍｂｏｌｄｅｓＡ
ＴＣＣ１２５８７３９ Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ　ｎａｎｏｄｅｓＣＢ８１５
４　１９．５ Ｃｏｎｉｄｌｏｂｏｌｕｓ　ｎａｎｏｄｅｓＣＢ８１８
３　１９．５ 表４ Ｓｔｒａｉｎ　Ｍ、１．Ｃ０（８ｇ７ｍ１）ＡＴＣＣ１
６ｄ９６３９ Ｍｕｃｏｒ　ｒｏｕｘｉａｎｕｓ　ＩＡ、Ｍ　６１５１
　７８Ｍｕｃｏｒ　ｊａｖａｎｉｃｕｓ　ＩＡＭ　６０
８７１５６Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｌｕｔｅｏｌｕ
ｓＩＡＭ１２２０７　１９．５ Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ａｎｏｍａｌａ　ＩＡＭ　４９６
７　３９Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ｗｉｎｇｅｉ　ＩＡＭ　
４９８３　１９．５Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ　ａｆｒｉｃａ
ｎａ　ＩＡＭ　４９８４　３９次に本発明の実施例を示
す。
実施例１゜ バチラス・セレウスＳＷ、ＦＥＢＭＰ−７２４２を前記
培地１に接種し、２７℃で６日間振とり培養した。
得られた培養液を７，５００ｒｐｍＸ１１］分の遠心分
離を行い、得られた培養ろ液に最終１％になるように塩
化カルシウムを添加し１．２，５００　ｒｐｍ×１０分
の遠心分離を行い、沈澱物を取得する。
得られた沈澱物は１００　ｍ　ＭＥＤＴＡ−０，０５Ｍ
　）（１５） リス−ＨＣｌバッファー（ｐＨ８，０）に溶解し、これ
を０．０５　Ｍ熱酸緩衝液（１）Ｉ４＝　７．　Ｅｌ　
）に対して透析し、内液に最終８０チになるようにエタ
ノールを加えた。
沈澱物を除去し、得られた上澄液を真空乾燥し、脱イオ
ン水に溶解し、塩酸を加え、ｐＨ３に調整し、沈澱物を
生成させた。
得られた沈澱物を０．０５　Ｍ　ＮａＨＣＯ３に溶解し
、脱イオン水に対し透析し、内液をセファデックスＧ−
１００／Ｈ２０に通した。
通過液に最終８０ｑ６になるようにエタノールを加え、
２〜６日４℃に放置すると白色結晶沈澱物が生成する。
これを真空で乾燥させ、顕微鎖で観察すると、白色柱状
微細結晶を呈する、ＧＩＦ−２が得られた。
【図面の簡単な説明】
躯１図け０ＩＦ−２の紫外線吸収スはクトルを示す図で
、第２図けＧＩＦ−２の赤外線吸収スＲクトルを示す図
である。 （１６） 躯　躬　ぼ

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）下記の理化学的性質を有する物質ＧＩＦ−２゜１
    、　分子量：質量分析機による測定で分子量は１０５７
    であった。 ２、物質の色及び性状：白色柱状微細結晶３　融点：２
    １０〜２１５℃で薄茶色に多少収縮し、２６４〜２６９
    ℃で濃茶色となり、２４０〜２４５℃で炭化する。 ４、紫外線吸収スはクトル二本物質２．８チ水溶液の紫
    外線吸収スはクトルは第１図に示す通り。 ５、赤外線吸収スペクトル：第２図に示す通り０ ６、溶剤に対する溶解性：水、メタノール、エタノール
    、ｔ−ブタノールに可溶。 ｎ−ブタノール、アセトン、エチルアセテート、エーテ
    ル、クロロホルム、ベンゼン、４塩化炭素、石油エーテ
    ルに不溶。 Ｚ　呈色反応 ＣＢＢテスト　＋ キサントプロティンテスト　＋ アダム・キーライラッテスト　− エーリツヒテスト　− ピユーレットテスト　＋ ８、性質の区別：本物質１．４ｍｇＡ水テｐＨ＝７６で
    ある。 ９　アミノ酸組成二アミノ酸分析機によるアミノ酸胡成
    は次の通りである。 ただし３つのＸのうち１つはアマイド結合を有するもの
    である。 着た。上記アミノ酸以匁にβ−アミノ酸１分子が質量分
    析において認められる。 １０゜推定構造式 ただし３つのＸのうち１つはアマイド結合を有するもの
    であり、Ｒは次式のβ−アミノ酸残基を示す。 Ｈ
  2. （２）バチルス属に属するＧＩＦ−２生産菌を培養し、
    ＧＩＦ−２を採取するととを特徴とする物質ＧＩＦ−２
    の製造法。
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JPH0149360B2 (ja) 1989-10-24
CA1296669C (en) 1992-03-03
EP0193608A4 (en) 1989-01-02
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