JPS60205364A - 酸素供給層を有する分析用具 - Google Patents
酸素供給層を有する分析用具Info
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- JPS60205364A JPS60205364A JP59064211A JP6421184A JPS60205364A JP S60205364 A JPS60205364 A JP S60205364A JP 59064211 A JP59064211 A JP 59064211A JP 6421184 A JP6421184 A JP 6421184A JP S60205364 A JPS60205364 A JP S60205364A
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- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
- G01N33/525—Multi-layer analytical elements
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は液体特に体液中の成分を測定する分析用具に関
するもので、中でも酸化酵素を含有する分析用具に関す
るものである。
するもので、中でも酸化酵素を含有する分析用具に関す
るものである。
液体状ＩＦ’ｌの分析にあたり、緩やかな条件でかつ特
異的に検出反応が行なえる酵素的分析法が好適であり、
中でも酸化酵素を使う方法が豐んになっている。これは
、ｍ検物質またはその反応生成物を酸化酵素によって酸
化したときに生成する過酸化水素にパーオキシダーゼを
作用させ色素を形成する反応に導き、比色的にごれらを
測定する方法であり、検出手段として、螢光法５発光法
及び各種電極を用いることも可能である。
異的に検出反応が行なえる酵素的分析法が好適であり、
中でも酸化酵素を使う方法が豐んになっている。これは
、ｍ検物質またはその反応生成物を酸化酵素によって酸
化したときに生成する過酸化水素にパーオキシダーゼを
作用させ色素を形成する反応に導き、比色的にごれらを
測定する方法であり、検出手段として、螢光法５発光法
及び各種電極を用いることも可能である。
過酸化水素を比色定ｍする方法にはいわゆるトリンダー
の試薬を用いる方法（Ａｎｎ、Ｃｌ１ｎ、Ｂｉ。
の試薬を用いる方法（Ａｎｎ、Ｃｌ１ｎ、Ｂｉ。
ｃｈｅｍ６Ｌ ２４頁、１９６９年）、及び０ アニシ
ジン、ベンジジン、０−ｌ・リジン、テトラメチルベン
ジジンなどの被酸化型色原体をもらいる方法がよく知ら
れている。これらの方法は酸化酵素によって生成する過
酸化水素にパーオキシダーゼを作用させ１アミノアンチ
ピリンとフェノール類との酸化カンプリングを行わゼ、
生成した色素を定量するか又は被酸化型色原体を直接酸
化して色素を形成させる。この反応系の利点は１Ｍ酸化
酵素種類を変えても同じ検出系を利用できる点にあり、
広く各種の分析項目への応用がヰ★討されている。酸化
酵素のなかで臨床検査上特に重要なものにグルコースオ
キシダーゼ。
ジン、ベンジジン、０−ｌ・リジン、テトラメチルベン
ジジンなどの被酸化型色原体をもらいる方法がよく知ら
れている。これらの方法は酸化酵素によって生成する過
酸化水素にパーオキシダーゼを作用させ１アミノアンチ
ピリンとフェノール類との酸化カンプリングを行わゼ、
生成した色素を定量するか又は被酸化型色原体を直接酸
化して色素を形成させる。この反応系の利点は１Ｍ酸化
酵素種類を変えても同じ検出系を利用できる点にあり、
広く各種の分析項目への応用がヰ★討されている。酸化
酵素のなかで臨床検査上特に重要なものにグルコースオ
キシダーゼ。
ウリカーゼ、コレステロールオキシダーゼ、グクセロー
ル−３−リン酸オキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、ア
シルＣｏＡオキシダーゼ、ザルコシンオキシダーゼ、各
種アミノ酸オキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、ラ
クト−スオキシダービ、ピルビン酸オキシダーゼ、ガラ
クＩ・−スオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ等
がある。
ル−３−リン酸オキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、ア
シルＣｏＡオキシダーゼ、ザルコシンオキシダーゼ、各
種アミノ酸オキシダーゼ、ビリルビンオキシダーゼ、ラ
クト−スオキシダービ、ピルビン酸オキシダーゼ、ガラ
クＩ・−スオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ等
がある。
従来より、これらの酸化酵素とパーオキシダーゼ及び色
原体を含む反応溶液を用いて、臨床検査としての体液分
析が主として実施されてきた。
原体を含む反応溶液を用いて、臨床検査としての体液分
析が主として実施されてきた。
一方、ｌ−記の分析用組成物を混合・乾燥して一体化し
た試薬（以下固相試薬という）が、臨床検査の基本的ニ
ーズである分析の迅速・簡易性を満たす手段として有用
視されてきた。
た試薬（以下固相試薬という）が、臨床検査の基本的ニ
ーズである分析の迅速・簡易性を満たす手段として有用
視されてきた。
例えば、これらの酸化酵素と過酸化水素の検出系等とを
ポリマー中に分散させてプラスチックフィルムに塗布し
た試験フィルムが特公昭４９−３３８ｏｏｑ明細書に開
示されている。また特公昭５１−２１６７７号明細書に
液体不浸透性光透過性支持体−トに試薬層及び展開層を
設＋（た多層試験）・イルムが記載されている。更に、
多層ａ＋’：、験フィルムの応用として特開昭５Ｌ ４
０１９１″：Ｊ明細書記載の光遮蔽層、特開昭５２−３
４８８号明細書記載のバリヤ一層、特開昭５３−１８１
０８９８１０８９号明細書記載レーション層および放射
線ブロッキング層、特開昭５４−２９７００号明細書記
載のマイグレーション■１止層などが加えられた構造の
ものがある。これら固相試薬の中には具体例として酸化
酵素を含むものが多くみられる。
ポリマー中に分散させてプラスチックフィルムに塗布し
た試験フィルムが特公昭４９−３３８ｏｏｑ明細書に開
示されている。また特公昭５１−２１６７７号明細書に
液体不浸透性光透過性支持体−トに試薬層及び展開層を
設＋（た多層試験）・イルムが記載されている。更に、
多層ａ＋’：、験フィルムの応用として特開昭５Ｌ ４
０１９１″：Ｊ明細書記載の光遮蔽層、特開昭５２−３
４８８号明細書記載のバリヤ一層、特開昭５３−１８１
０８９８１０８９号明細書記載レーション層および放射
線ブロッキング層、特開昭５４−２９７００号明細書記
載のマイグレーション■１止層などが加えられた構造の
ものがある。これら固相試薬の中には具体例として酸化
酵素を含むものが多くみられる。
ところで、特開昭５７−２０８４）９７号明細書には多
層系の固相試薬における反応系での酸素不足の問題を是
正する手段として、酸化酵素を含む系を最外層に含ませ
ると空気中の酸素との接触が良くなるので、酸化反応の
効率が向上することが記載されている。
層系の固相試薬における反応系での酸素不足の問題を是
正する手段として、酸化酵素を含む系を最外層に含ませ
ると空気中の酸素との接触が良くなるので、酸化反応の
効率が向上することが記載されている。
この点に関して１本発明者らが独自に評価したところ、
試ネ１中に溶存している酸素以外に。
試ネ１中に溶存している酸素以外に。
酸化酵素を含む層の一面が人気と直接に接触しているこ
とによる酸素を利用し°ζいるため、酸化酵素を含む系
を最外層にふくませるとかなりの効果があるが２その効
果は不充分であり、特に高濃度の測定対象物を含む検体
においては問題となることがわかった。
とによる酸素を利用し°ζいるため、酸化酵素を含む系
を最外層にふくませるとかなりの効果があるが２その効
果は不充分であり、特に高濃度の測定対象物を含む検体
においては問題となることがわかった。
一般に、固相試薬における酸化反応に必要な酸素は試料
中に溶存している酸素と大気中から反応系に溶解する酸
素によって賄われているとＩＩＩ測されていたが５本発
明者らが調査・研究したところ、従来の固相試薬の試薬
層における酸化反応によって消費され減少した酸素量が
所定の溶存量に戻るため大気中より溶解して平衡に達す
る時間は３反応時間に比べて極めて長いため、大気中か
ら溶解して供給される酸素は役立っていないことがわか
った。したがって１反応前から反応系に溶存していた酸
素のみが酸化反応に利用されることになる。また１次に
示す理論的根拠により、試料中に溶存する酸素だけでは
とても充分な反応が期待できない。
中に溶存している酸素と大気中から反応系に溶解する酸
素によって賄われているとＩＩＩ測されていたが５本発
明者らが調査・研究したところ、従来の固相試薬の試薬
層における酸化反応によって消費され減少した酸素量が
所定の溶存量に戻るため大気中より溶解して平衡に達す
る時間は３反応時間に比べて極めて長いため、大気中か
ら溶解して供給される酸素は役立っていないことがわか
った。したがって１反応前から反応系に溶存していた酸
素のみが酸化反応に利用されることになる。また１次に
示す理論的根拠により、試料中に溶存する酸素だけでは
とても充分な反応が期待できない。
純水を溶媒としたときの空気の溶解度は２５℃１気圧で
０．０１６７ （ｓ＋Ｉ／ ｍｌ）であり、内酸素は０
、００５７ （ｍｌ／ １）である〔口本化学会編；化
学便覧基礎編ｒ１．６２］頁；丸善Ｑ＠ ； １９６５
年〕。０゜００５７ （ｍｌ／ ｍｌ）の溶存酸素［１
は計算すると２５μｍｏｌ／ｄｉになるが、試料中には
他の物質も熔解しているので実際には２５μｍｏｌ／ｄ
ｌよりも少ない量しか溶存していない。
０．０１６７ （ｓ＋Ｉ／ ｍｌ）であり、内酸素は０
、００５７ （ｍｌ／ １）である〔口本化学会編；化
学便覧基礎編ｒ１．６２］頁；丸善Ｑ＠ ； １９６５
年〕。０゜００５７ （ｍｌ／ ｍｌ）の溶存酸素［１
は計算すると２５μｍｏｌ／ｄｉになるが、試料中には
他の物質も熔解しているので実際には２５μｍｏｌ／ｄ
ｌよりも少ない量しか溶存していない。
一方、正常な血清の各種成分は１例えばグルコースは３
６０〜５８０ ｐ ｍｏｌ ／ ｄｌ、コレステロール
は３６０〜６７０ ／Ｊｍｏｌ ／ｄＬ Ｌリグリセラ
イドは３４〜１５２μｍｏｌ／ｄｌ、尿酸は１２〜４２
μ＋ｌ１ｏｌ ／ｄｌであり、異常な場合はこれらの値
より増加する。一般に前述の固相試薬では、検体を未希
釈あるいはせいぜい数倍に希釈して通用されるので試料
中に溶存している酸素だけでは完全に基質を酸化できな
いことは明らかである。
６０〜５８０ ｐ ｍｏｌ ／ ｄｌ、コレステロール
は３６０〜６７０ ／Ｊｍｏｌ ／ｄＬ Ｌリグリセラ
イドは３４〜１５２μｍｏｌ／ｄｌ、尿酸は１２〜４２
μ＋ｌ１ｏｌ ／ｄｌであり、異常な場合はこれらの値
より増加する。一般に前述の固相試薬では、検体を未希
釈あるいはせいぜい数倍に希釈して通用されるので試料
中に溶存している酸素だけでは完全に基質を酸化できな
いことは明らかである。
したがって、溶存している酸素のみが利用されるとする
と血清中尿酸のように極めて低濃度の被検物質であって
も、正常域を超える高い濃度の場合充分な酸化が不可能
となり、その他の血清中被検物質の場合は正常域でも酸
化が不充分となる。 以Ｈの検討結果から溶存酸素が微
量であること及び酸素の溶解速度はかなり遅く実質利用
されないことがわかった。しかしながら、酸化酵素を含
む系を最外層にもってくると不充分ではあるが、かなり
の効果を示し、これは酸化酵素を含む系が空気と接触す
ることにより直接５酸素を利用しているためであること
が明らかになった。
と血清中尿酸のように極めて低濃度の被検物質であって
も、正常域を超える高い濃度の場合充分な酸化が不可能
となり、その他の血清中被検物質の場合は正常域でも酸
化が不充分となる。 以Ｈの検討結果から溶存酸素が微
量であること及び酸素の溶解速度はかなり遅く実質利用
されないことがわかった。しかしながら、酸化酵素を含
む系を最外層にもってくると不充分ではあるが、かなり
の効果を示し、これは酸化酵素を含む系が空気と接触す
ることにより直接５酸素を利用しているためであること
が明らかになった。
このような状況を踏まえて本発明者らは固相試薬の構造
について鋭意研究を重ねた結果、試薬層と支持体の間に
隙間を設は試薬層が支持体側からも空気と接触できるよ
うにすれば上記課題が解決できることを見いだした。
について鋭意研究を重ねた結果、試薬層と支持体の間に
隙間を設は試薬層が支持体側からも空気と接触できるよ
うにすれば上記課題が解決できることを見いだした。
本発明の目的は、酸化酵素により基質を酸化するのに必
要な酸素を試薬層の支持体側からも供給することにより
、迅速月つ正確な測定のできる分析用具を１１供するこ
とであって、特に高濃度の被検物質の測定においても充
分な酸化反応のおこなえる分析用具を提供することにあ
る。
要な酸素を試薬層の支持体側からも供給することにより
、迅速月つ正確な測定のできる分析用具を１１供するこ
とであって、特に高濃度の被検物質の測定においても充
分な酸化反応のおこなえる分析用具を提供することにあ
る。
本発明の分析用具は支持体と酸化酵素を含む試薬層の間
に多孔質疎水性である酸素供給層を有する。
に多孔質疎水性である酸素供給層を有する。
本発明に基づく多孔質疎水性の酸素供給層は。
あらかじめ空気を含み、かつその流通も可１１＠なので
１反応系の下部からも酸素を供給することができ５上記
目的を達成することができる。
１反応系の下部からも酸素を供給することができ５上記
目的を達成することができる。
以下１本発明の理解を助けるため図面を用いて説明する
。
。
第１図は単に支持体上にフィルム形成重合体をバインダ
ーとする試薬を塗布し、乾燥して作成した分析用具であ
り、ｌは試薬層、２は支持体である。第２図は本発明に
おける分析用具の一例で、第１図の支持体のにに多孔質
疎水性物質を貼り（酸素供給層３）、さらにこのトに試
薬を塗布し、乾燥して作成した分析用具である。
ーとする試薬を塗布し、乾燥して作成した分析用具であ
り、ｌは試薬層、２は支持体である。第２図は本発明に
おける分析用具の一例で、第１図の支持体のにに多孔質
疎水性物質を貼り（酸素供給層３）、さらにこのトに試
薬を塗布し、乾燥して作成した分析用具である。
両者の試薬層には酸化酵素の伯に過酸化水素検出用試薬
等を含んでいる。
等を含んでいる。
これらの分析用具に試料を滴下すると、試料はどちらも
液滴をつくる。この状態で発色状態を１〜２分間観察す
ると、第１図に示す従来の分析用具では液滴の付着した
部分の周囲から発色しはじめ、徐々に中心に向かうが最
終的には中心部が所望の強度で発色しない。第２図の分
析用具では、液滴の付着した部分全体で均一に発色がは
じまり所望する充分な強度で均一な発色が得られる。こ
れは試料中に溶解している酸素量だりでは酸化反応をほ
とんど行わせることができないうえに、液滴が反応系へ
の酸素の溶解を妨害しているためで、第１図の分析の場
合は空気と反応系とが直接接触している液滴の周辺部で
は充分に反応が進行するが中心部では不充分となる。第
２図の分析用具の場合は酸素供給層を備えているので反
応系における酸素が供給され、はぼ均一に酸化反応が進
行するからである。
液滴をつくる。この状態で発色状態を１〜２分間観察す
ると、第１図に示す従来の分析用具では液滴の付着した
部分の周囲から発色しはじめ、徐々に中心に向かうが最
終的には中心部が所望の強度で発色しない。第２図の分
析用具では、液滴の付着した部分全体で均一に発色がは
じまり所望する充分な強度で均一な発色が得られる。こ
れは試料中に溶解している酸素量だりでは酸化反応をほ
とんど行わせることができないうえに、液滴が反応系へ
の酸素の溶解を妨害しているためで、第１図の分析の場
合は空気と反応系とが直接接触している液滴の周辺部で
は充分に反応が進行するが中心部では不充分となる。第
２図の分析用具の場合は酸素供給層を備えているので反
応系における酸素が供給され、はぼ均一に酸化反応が進
行するからである。
実際の検査においては試料滴下後、適当な反応時間（１
〜２分）を待って試料を除去し１発色の状態を肉眼また
は機器によって観測する。
〜２分）を待って試料を除去し１発色の状態を肉眼また
は機器によって観測する。
したがって、第１図の分析用具は不均一で低い反応率に
基づく不正確な成績が得られ、第２図の分析用具では充
分に満足できる成績が得られる。
基づく不正確な成績が得られ、第２図の分析用具では充
分に満足できる成績が得られる。
第４図は本願出願人による特開昭５８−１２２６０号に
記載した多層一体化分析用具の基本構造で。
記載した多層一体化分析用具の基本構造で。
光反射性支持体（９）５液体試料中の目的成分と反応し
て光学的検出可能な変化を生しる試薬を含み、且つ試料
液の溶媒によりそれ自身溶解またはゾル状となる試薬１
ｉ！ （７）と、受は入れた液体試料を該試薬層に移行
させるとともに試薬層で生成または減少した光学的検出
可能な物質を均一に拡散させる機能を有する検出層（６
）とを一体化したものである。そして第５図は。
て光学的検出可能な変化を生しる試薬を含み、且つ試料
液の溶媒によりそれ自身溶解またはゾル状となる試薬１
ｉ！ （７）と、受は入れた液体試料を該試薬層に移行
させるとともに試薬層で生成または減少した光学的検出
可能な物質を均一に拡散させる機能を有する検出層（６
）とを一体化したものである。そして第５図は。
第４図の試薬層（７）と支持体（９）の間に酸素供給層
（８）を設けたものである。これらの多層一体化分析用
具は種々の項目の測定に利用できるが、ここでは試薬層
に酸化酵素と過酸化水素検出用試薬を含んだ例について
、酸素供給層の効果を説明する。第４図、第５図の多層
一体化分析用具に試料を滴下すると、試料は検出層で幾
分、拡がりながら試薬層に到達し、試薬層との界面で横
方向に広がり、更に試薬層を熔解する。試薬層を熔解し
た試料は反応しながら検出層に拡散し、よって試薬層の
構成物すべてを含む反応混合液が検出層に移行される。
（８）を設けたものである。これらの多層一体化分析用
具は種々の項目の測定に利用できるが、ここでは試薬層
に酸化酵素と過酸化水素検出用試薬を含んだ例について
、酸素供給層の効果を説明する。第４図、第５図の多層
一体化分析用具に試料を滴下すると、試料は検出層で幾
分、拡がりながら試薬層に到達し、試薬層との界面で横
方向に広がり、更に試薬層を熔解する。試薬層を熔解し
た試料は反応しながら検出層に拡散し、よって試薬層の
構成物すべてを含む反応混合液が検出層に移行される。
検出層における反応の様子を観察するとどちらも均一な
発色が起きるが第４図の多層一体化分析用具より第５図
の多層一体化分析用具の方が反応が速く発色が強かった
。発色速度の違うのは第４図の多層一体化分析用具では
反応系の片面（支持体と反対側）しか空気と接触できな
いのに対し、第５図の多層一体化分析用具では反応系の
両面で空気と接触しているので反応系への酸素の供給が
極めて円滑に行われているためである。
発色が起きるが第４図の多層一体化分析用具より第５図
の多層一体化分析用具の方が反応が速く発色が強かった
。発色速度の違うのは第４図の多層一体化分析用具では
反応系の片面（支持体と反対側）しか空気と接触できな
いのに対し、第５図の多層一体化分析用具では反応系の
両面で空気と接触しているので反応系への酸素の供給が
極めて円滑に行われているためである。
本発明の酸素供給層は、多孔質疎水性構造である。酸素
供給層には不織布５疎水性の織布・紙、金属及びナイロ
ンメツシュ、メンブランフィルタ、表面を疎水処理した
ガラスフィルタ・セラミ、りなどの多孔質疎水性物質が
用いられる。また酸素供給層と支持体を兼ねる場合には
ポリエステル、アクリル、ナイロン、ポリスチレン、ポ
リウレタン、メタクリル、フェノールなどの各種樹脂を
多孔構造となるよう成型したものの地表面を疎水処理し
た七メンＩ−・セラミック・ガラスフィルタなどで多孔
質疎水（Ｉｔのものが用いられる。尤もはじめから多孔
質疎水性でなり°（も、有機溶媒に熔かした常温で固体
の疎水性高分子物質であれば、この溶媒に不溶性で且つ
該有機溶媒より沸点の高い溶媒を分散させた懸濁液を支
持体に塗布して１両溶媒を乾燥すれば多孔質疎水性層を
形成でき、これが酸素供給層となる。このような峠水個
高分子物質として酢酸セルロース、エチルセルロース、
ポリビニルブチラール、ポリスチレン、ポリウレタン、
ポリエステル、アクリル、ナイロン、ポリフェノール、
ポリメタクリル、ポリ酢酸ビニル。
供給層には不織布５疎水性の織布・紙、金属及びナイロ
ンメツシュ、メンブランフィルタ、表面を疎水処理した
ガラスフィルタ・セラミ、りなどの多孔質疎水性物質が
用いられる。また酸素供給層と支持体を兼ねる場合には
ポリエステル、アクリル、ナイロン、ポリスチレン、ポ
リウレタン、メタクリル、フェノールなどの各種樹脂を
多孔構造となるよう成型したものの地表面を疎水処理し
た七メンＩ−・セラミック・ガラスフィルタなどで多孔
質疎水（Ｉｔのものが用いられる。尤もはじめから多孔
質疎水性でなり°（も、有機溶媒に熔かした常温で固体
の疎水性高分子物質であれば、この溶媒に不溶性で且つ
該有機溶媒より沸点の高い溶媒を分散させた懸濁液を支
持体に塗布して１両溶媒を乾燥すれば多孔質疎水性層を
形成でき、これが酸素供給層となる。このような峠水個
高分子物質として酢酸セルロース、エチルセルロース、
ポリビニルブチラール、ポリスチレン、ポリウレタン、
ポリエステル、アクリル、ナイロン、ポリフェノール、
ポリメタクリル、ポリ酢酸ビニル。
二ｉ・ロセルロース、ポリアミノ酸の低重合体などが等
が挙げられる。要は多孔性であり、かつ試薬層を形成さ
せる塗工液及び試料が完全には浸透しなければ酸素供給
層の役割をもたせることができる。
が挙げられる。要は多孔性であり、かつ試薬層を形成さ
せる塗工液及び試料が完全には浸透しなければ酸素供給
層の役割をもたせることができる。
本発明による酸素供給層を有する分析用具についてより
一層理解を深めるため以下に実施例を挙げるが本発明は
これによって限定されるものではない。
一層理解を深めるため以下に実施例を挙げるが本発明は
これによって限定されるものではない。
実施例 １゜
厚さ０．１２５ａ＋ｍの白色ポリエステルフィルム〔束
し■製〕自体と、これの上面に多孔質疎水性膜である酸
素供給層（積木化学ａｌ製、商品名：セルボア（材質：
ポリエチレン；厚さ２１５０μｍ））を両面テープで貼
ったものの２種を用意し、更にこれらの上にグルコース
量に応じて発色する試薬層を構成するため下記塗工液を
塗布厚０．２ｍｍで塗布し、乾燥して試薬層を形成した
。
し■製〕自体と、これの上面に多孔質疎水性膜である酸
素供給層（積木化学ａｌ製、商品名：セルボア（材質：
ポリエチレン；厚さ２１５０μｍ））を両面テープで貼
ったものの２種を用意し、更にこれらの上にグルコース
量に応じて発色する試薬層を構成するため下記塗工液を
塗布厚０．２ｍｍで塗布し、乾燥して試薬層を形成した
。
これらを裁断し、１片の長さを１０ｍｍｘ １０ｍｍに
したものの中央にグルコース水溶液９０＋ｘｇ／ｄｌ
（５００μｍｏｌ ／ ｄｉ） ５０μｍを試料として
滴下した。
したものの中央にグルコース水溶液９０＋ｘｇ／ｄｌ
（５００μｍｏｌ ／ ｄｉ） ５０μｍを試料として
滴下した。
滴下された試料は一部試薬層に含浸しているが。
大部分は試薬層の表面に液滴を形成した。発色状況は、
ポリエステルフィルムに直接試薬層を形成したもの（以
下ｔｙｐｅＡと紀ず）では液滴の周辺部から徐々に発色
しはじめ１反応終了時には中心部も発色してはいたが周
辺部のほうがはるかに濃い発色であった。多孔性膜に試
薬層を形成したもの（以下ｔｙｐｅｎと記す）では全体
が均一に発色しはじめ９反応終了時にもやはり均一な発
色であった。更に１反応の速度もｔｙｐｅＩ３のほうが
早かった。
ポリエステルフィルムに直接試薬層を形成したもの（以
下ｔｙｐｅＡと紀ず）では液滴の周辺部から徐々に発色
しはじめ１反応終了時には中心部も発色してはいたが周
辺部のほうがはるかに濃い発色であった。多孔性膜に試
薬層を形成したもの（以下ｔｙｐｅｎと記す）では全体
が均一に発色しはじめ９反応終了時にもやはり均一な発
色であった。更に１反応の速度もｔｙｐｅＩ３のほうが
早かった。
（ｔｙｐｅＡ及びｔｙｐｅＢの
試薬層形成用塗工液の組成）
酢酸セルロース ８．Ｏｇ
ｌ、２−ジクロルエタン ７０１
グルコースオキシダーゼ ２００ｓ＋ｇパーオキシダー
ゼ ２０ｏＩｎｇ ポリビニルピロリＦ７ （Ｋ−９０） −１５０ｓ＋ｇ
４−アミノアンチピリン １２ｍｇ １．７ジヒドロキジナフタレン ７０ｍｇエタノール
−８，０１ ０、ＩＭリン＃Ｉ緩衝液（ａｌｌ ７．５＞ ｌｈｌ実
施例 ２゜ 実施例１のｔｙｐｅＢにおける酸素供給層としての多孔
性膜を貼る代わりに下記酸素供給層形成用塗工液を塗布
厚０．２ｎｖ＋で白色ポリエステルフィルムに塗布、乾
燥して多孔質疎水性構造を形成した分析用具（ｔｙｐｅ
Ｃ）により実施例Ｉと同じ実験をおこなった。結果は発
色の均一性についてはｔｙｐｅＢとほぼ同じ効果が認め
られたが。
ゼ ２０ｏＩｎｇ ポリビニルピロリＦ７ （Ｋ−９０） −１５０ｓ＋ｇ
４−アミノアンチピリン １２ｍｇ １．７ジヒドロキジナフタレン ７０ｍｇエタノール
−８，０１ ０、ＩＭリン＃Ｉ緩衝液（ａｌｌ ７．５＞ ｌｈｌ実
施例 ２゜ 実施例１のｔｙｐｅＢにおける酸素供給層としての多孔
性膜を貼る代わりに下記酸素供給層形成用塗工液を塗布
厚０．２ｎｖ＋で白色ポリエステルフィルムに塗布、乾
燥して多孔質疎水性構造を形成した分析用具（ｔｙｐｅ
Ｃ）により実施例Ｉと同じ実験をおこなった。結果は発
色の均一性についてはｔｙｐｅＢとほぼ同じ効果が認め
られたが。
速度はｔｙｐｅｎよりもやや遅かった。ｔｙｐｅＣの場
合形成した酸素供給層に試薬層形成用塗工液が少し浸透
するが、完全には浸透しないために酸素供給層の特徴を
備えていることがわかる。
合形成した酸素供給層に試薬層形成用塗工液が少し浸透
するが、完全には浸透しないために酸素供給層の特徴を
備えていることがわかる。
（酸素供給層形成用塗工液の組成）
ポリビニルブヂラール樹脂 ５ｇ
（重合度７００）
アセｌ−ン −＝５０１
精製水 １０ｎ＋１
界面活ｔ１Ｆ剤（Ｔ紳ｅｅｎ２０）＝５ｏｏＩ１ｇ実施
例 ３゜ 実施例１のｔｙｐｅＡにおりる白色ポリエステルフィル
ムの代わりに表面を疎水処理したセラミックの板を用い
て作成した。これは酸素供給層が支持体を兼ねている分
析用具（ｔｙｐｅＤ ）であり、実施例１と同じ実験を
おこなったとごろ。
例 ３゜ 実施例１のｔｙｐｅＡにおりる白色ポリエステルフィル
ムの代わりに表面を疎水処理したセラミックの板を用い
て作成した。これは酸素供給層が支持体を兼ねている分
析用具（ｔｙｐｅＤ ）であり、実施例１と同じ実験を
おこなったとごろ。
発色の均一性・強度１発色速度ともｔｙｐｅＢと同様で
あった。
あった。
実施例 ４゜
本発明による酸素供給層の効果を調べるため。
実施例１．で作成したｔｙｐｅＡとｔｙｐｅＢの分析用
具の区名タイムコースを光反射率針〔■日立製作所製反
射率測定用積分球付２２０Ａ分光光度針〕を用いて、グ
ルコース濃度既知の血清ａ、ｂそれぞれを試料として呈
色させた際の反射率を５５０ｎｍで測定した。
具の区名タイムコースを光反射率針〔■日立製作所製反
射率測定用積分球付２２０Ａ分光光度針〕を用いて、グ
ルコース濃度既知の血清ａ、ｂそれぞれを試料として呈
色させた際の反射率を５５０ｎｍで測定した。
測定方法は以下の通りである。
１ ） ｔｙｐｅＡとｔｙｐｅＢの分析用具に血清ａ
（グルコース濃度３２＋＊ｇ／ ｄｌ ： ４５６／ｊ
＋ａｏｌ ／ ｄｌ）及び血清ｂ（グルコース濃度３
２０ｎ＋ｇ／ ｄｌ ： １７７８μｍｏｌ／ｄｉ）を
滴下し１反応を開始させる。
（グルコース濃度３２＋＊ｇ／ ｄｌ ： ４５６／ｊ
＋ａｏｌ ／ ｄｌ）及び血清ｂ（グルコース濃度３
２０ｎ＋ｇ／ ｄｌ ： １７７８μｍｏｌ／ｄｉ）を
滴下し１反応を開始させる。
このとき、試料を試薬面に載せて反応させる時間を、０
〜４分間において３０秒毎に変える。
〜４分間において３０秒毎に変える。
２）それぞれの反応時間に達したら、余剰試料を脱脂綿
でふき取り除去（酸化反応は試料が除かれたためほぼ停
止する）シ、それからどの反応時間の場合も１分間待っ
て呈色を完了させ、酸化反応の進行の様子をその反射率
を測定することによって計測する。
でふき取り除去（酸化反応は試料が除かれたためほぼ停
止する）シ、それからどの反応時間の場合も１分間待っ
て呈色を完了させ、酸化反応の進行の様子をその反射率
を測定することによって計測する。
なお８測定して得た反射率を下式により計算してに／Ｓ
値をめ、に／Ｓ値の時間的変動の様子（酸化反応のタイ
ムコース）をｒｎｔｉａの場合第６図に、血清すの場合
第７図にしめした。
値をめ、に／Ｓ値の時間的変動の様子（酸化反応のタイ
ムコース）をｒｎｔｉａの場合第６図に、血清すの場合
第７図にしめした。
Ｋ／Ｓ＝ （１−Ｒ） ２／２ｘＲ
〔式中には定数であり、Ｓは特定の反射媒体の散乱係数
であり、Ｒは反射率である。〕で定義される。
であり、Ｒは反射率である。〕で定義される。
この関係はクベルカームンク（Ｋｕｂｅｌｋａ−Ｍｕｎ
ｋ）の式（グスタフ−コルチュム（ＧｕｓＬａｖＫｏｒ
ｔｕｍ ） 著ｒリフレクタンス・スペクトロスコピー
（１？ｅｆｌｅｃｔａｎｃｅ ５ｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐ
ｙ） Ｊ １０６〜１１１頁：スプリンガー・バーラズ
（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｚ ） ；１９６９年
〕の簡略形であり、に／Ｓ値は１モル濃度と一次的に比
例する。
ｋ）の式（グスタフ−コルチュム（ＧｕｓＬａｖＫｏｒ
ｔｕｍ ） 著ｒリフレクタンス・スペクトロスコピー
（１？ｅｆｌｅｃｔａｎｃｅ ５ｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐ
ｙ） Ｊ １０６〜１１１頁：スプリンガー・バーラズ
（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｚ ） ；１９６９年
〕の簡略形であり、に／Ｓ値は１モル濃度と一次的に比
例する。
第６図及び第７図より明らかに、酸素供給層を有する分
析用具の場合、酸化反応の進行が速く２〜３分でほぼ反
応が終点に達しているが。
析用具の場合、酸化反応の進行が速く２〜３分でほぼ反
応が終点に達しているが。
酸素供給層を有しない分析用具の場合は１反応の進行が
遅く、迅速（迅速でないと試料も乾燥するし２時間も無
駄である）かつ正確に定量することができない。
遅く、迅速（迅速でないと試料も乾燥するし２時間も無
駄である）かつ正確に定量することができない。
実施例 ５゜
本願出願人による特願昭５８−１２２６００号に記載の
多層一体化分析用具に通用した例を示す。
多層一体化分析用具に通用した例を示す。
厚さ０．１２５ｍｍの白色ポリエステルフィルム（東し
■製）自体と、これに酸素供給層であるメンプランフィ
ルタ〔住人電気工業（Ｉ零製〕を両面テープを用いて貼
ったものの２種を用意し、さらにこれらの上に下記のト
リグリセライド用塗Ｔ液を塗布厚０．２ｅ＋＋１１で均
一に２０ｍｍ幅で塗布した後、４０℃で２時間乾燥して
試薬層を形成する。
■製）自体と、これに酸素供給層であるメンプランフィ
ルタ〔住人電気工業（Ｉ零製〕を両面テープを用いて貼
ったものの２種を用意し、さらにこれらの上に下記のト
リグリセライド用塗Ｔ液を塗布厚０．２ｅ＋＋１１で均
一に２０ｍｍ幅で塗布した後、４０℃で２時間乾燥して
試薬層を形成する。
次いで試薬層の表面を軽く湿らして２ＣＩＩ幅の綿ブロ
ード〔東洋紡績■製〕を試薬層に圧着して積層し、検出
層を形成した。これらを塗布方向に沿って試薬部分を２
に切断し１次いで塗布方向に直角に５ｍｍ幅に切断する
。こうして検出層及び試薬層の部分が５ｍｍＸ ｌＯｍ
ｎ＋のトリグリセライド測定用多層一体化分析用具並び
に酸素供給層を有する多層一体化分析用具を作成した。
ード〔東洋紡績■製〕を試薬層に圧着して積層し、検出
層を形成した。これらを塗布方向に沿って試薬部分を２
に切断し１次いで塗布方向に直角に５ｍｍ幅に切断する
。こうして検出層及び試薬層の部分が５ｍｍＸ ｌＯｍ
ｎ＋のトリグリセライド測定用多層一体化分析用具並び
に酸素供給層を有する多層一体化分析用具を作成した。
白色ポリエステルフィルムに直接試薬層を形成した多層
一体化分析用具（以下ｔｙｐｅＥと記す）及びメンブラ
ンフィルタに試薬層を形成した酸素供給層を有する多層
一体化分析用具（以下ｔｙρｅＦと記す）に血清Ｃ（）
リグリセライド濃度１５７ｍｇ ／ ｄｌ−１７６８ｕ
ｍｏｌ ／ ｄｌに相当）を１０μ１滴下したときの
反応曲線を第８図に示す。
一体化分析用具（以下ｔｙｐｅＥと記す）及びメンブラ
ンフィルタに試薬層を形成した酸素供給層を有する多層
一体化分析用具（以下ｔｙρｅＦと記す）に血清Ｃ（）
リグリセライド濃度１５７ｍｇ ／ ｄｌ−１７６８ｕ
ｍｏｌ ／ ｄｌに相当）を１０μ１滴下したときの
反応曲線を第８図に示す。
（ｔｙｐｅＤおよびｔｙｐｅＥの試薬層形成用塗工液の
組成） リボプロティンリパーゼ ３００ｍｇ グリセロールキナーゼ ５０町 グリセロール〜３リン酸 １００ｍｇ オキシダーゼ パーオキシダーゼ ］０００ｍ ｇアデノシン−３−リン酸 ６００ｍｇ４−アミノアン
チピリン ３５０ｍｇ ３．５ジメトキシ−Ｎ−エチル−３１５ｗｒＢ（２−ヒ
ドロキシ−３−スルホプロ ピル）アニリン・すトリウ ム塩 塩化マグネシウム ０，２餉ｇ アルギン酸すトリウム １６００ｍｇ ０，２Ｍリン酸緩ｉｈ液（ｐＨ８，０） −−−’ｌ０
０ｍ１第８図より、ＬｙｐｅＦの方がｔｙｐｅＥより反
応速度が大きく、試薬層の両面で酸素が利用でき。
組成） リボプロティンリパーゼ ３００ｍｇ グリセロールキナーゼ ５０町 グリセロール〜３リン酸 １００ｍｇ オキシダーゼ パーオキシダーゼ ］０００ｍ ｇアデノシン−３−リン酸 ６００ｍｇ４−アミノアン
チピリン ３５０ｍｇ ３．５ジメトキシ−Ｎ−エチル−３１５ｗｒＢ（２−ヒ
ドロキシ−３−スルホプロ ピル）アニリン・すトリウ ム塩 塩化マグネシウム ０，２餉ｇ アルギン酸すトリウム １６００ｍｇ ０，２Ｍリン酸緩ｉｈ液（ｐＨ８，０） −−−’ｌ０
０ｍ１第８図より、ＬｙｐｅＦの方がｔｙｐｅＥより反
応速度が大きく、試薬層の両面で酸素が利用でき。
酸素供給層の効果が顕著である。
以」二本発明の好適な実施例について述べたが。
本発明の技術思想の範囲内で種々の変更が加え得る。
酸素供給層として多孔質疎水性のものが用いられる。疎
水性の多孔質膜、不織布、疎水性の織布・紙、金属及び
ナイロンメソシュ、多孔性の樹脂１表面を疎水処理した
セラミック・多孔性ガラス・多孔性金属膜が好適である
が、その地条孔質親水性の材料の片面を疎水化して、こ
の面を試薬層とあわせることもできる。また。
水性の多孔質膜、不織布、疎水性の織布・紙、金属及び
ナイロンメソシュ、多孔性の樹脂１表面を疎水処理した
セラミック・多孔性ガラス・多孔性金属膜が好適である
が、その地条孔質親水性の材料の片面を疎水化して、こ
の面を試薬層とあわせることもできる。また。
多孔質であれば試薬層を形成するときに、試薬層形成用
塗工液が完全には浸み込まなければよい。
塗工液が完全には浸み込まなければよい。
以」二詳述したように１本発明の酸素供給層を有する分
析用具は固相試薬の反応系における酸化反応に必要な酸
素を支持体側からも供給できるので酸化反応を円滑に進
行できる。このため。
析用具は固相試薬の反応系における酸化反応に必要な酸
素を支持体側からも供給できるので酸化反応を円滑に進
行できる。このため。
迅速で精確な酸化酵素を有する固相試薬を提供できる。
第１図は支持体に直接試薬層を形成した従来の分析用具
、第２図は支持体と試薬層の間に酸素供給層を有する本
発明の分析用具の１例、第３図は酸素供給層が支持体を
兼ねた分析用具の１例、第４図は本願出願人による特願
昭５８−１２２６００号記載の分析用具、第５図は多層
一体化分析用具に本発明の酸素供給層を備えた例、第６
図及び第７図は実施例４で作成した分析用具ＬｙｐｅＡ
及びｔｙｐｅ１３の反応タイムコースを表したもので第
６図は血清ａを試料としたもの、第７図は血清すを試料
としたものである。また第８図は実施例５で作成した分
析用具の反応タイムコースである。 １．９−− 支持体 ２．４．Ｌ−−−−試薬層 ３．８ 酸素供給層 ５ 酸素供給層兼支持体 ６− ＝−検出層 特許出願人 株式会社京都第一科学 ＣＱ ＜ ト ト １＼−【 Ｃｏわ寸ｃｏ ｃｑ −１ 厳 謳 報
、第２図は支持体と試薬層の間に酸素供給層を有する本
発明の分析用具の１例、第３図は酸素供給層が支持体を
兼ねた分析用具の１例、第４図は本願出願人による特願
昭５８−１２２６００号記載の分析用具、第５図は多層
一体化分析用具に本発明の酸素供給層を備えた例、第６
図及び第７図は実施例４で作成した分析用具ＬｙｐｅＡ
及びｔｙｐｅ１３の反応タイムコースを表したもので第
６図は血清ａを試料としたもの、第７図は血清すを試料
としたものである。また第８図は実施例５で作成した分
析用具の反応タイムコースである。 １．９−− 支持体 ２．４．Ｌ−−−−試薬層 ３．８ 酸素供給層 ５ 酸素供給層兼支持体 ６− ＝−検出層 特許出願人 株式会社京都第一科学 ＣＱ ＜ ト ト １＼−【 Ｃｏわ寸ｃｏ ｃｑ −１ 厳 謳 報
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 ■ 支持体及び酸化酵素を含む試薬層を有する乾式液体
分析用具において、該支持体と該試薬層の間に多孔質疎
水性である酸素供給層を有することを特徴とする分析用
具 ■ 酸素供給層が支持体を兼ねることを特徴とする特許
請求の範囲第１項記載の分析用具
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59064211A JPS60205364A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | 酸素供給層を有する分析用具 |
| US06/714,185 US4931387A (en) | 1984-03-30 | 1985-03-20 | Analysis implement having an oxygen supplying layer |
| DE19853510992 DE3510992A1 (de) | 1984-03-30 | 1985-03-27 | Analysengeraet mit einer eine oxidase enthaltenden reagenzschicht |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59064211A JPS60205364A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | 酸素供給層を有する分析用具 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60205364A true JPS60205364A (ja) | 1985-10-16 |
| JPH0476679B2 JPH0476679B2 (ja) | 1992-12-04 |
Family
ID=13251517
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59064211A Granted JPS60205364A (ja) | 1984-03-30 | 1984-03-30 | 酸素供給層を有する分析用具 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4931387A (ja) |
| JP (1) | JPS60205364A (ja) |
| DE (1) | DE3510992A1 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63210664A (ja) * | 1987-02-25 | 1988-09-01 | ジェネシス・ラブス・インコ−ポレ−テッド | 酸素要求検出系を用いる装置のための乾燥試験片及び被検流体中の分析成分の検出方法 |
| EP0371513A2 (en) | 1988-12-01 | 1990-06-06 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Device and method for assay of liquid sample |
| JP2009016853A (ja) * | 2008-08-08 | 2009-01-22 | Tdk Corp | 希土類焼結磁石の製造方法 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991011507A1 (en) * | 1990-01-30 | 1991-08-08 | Institut Khimicheskoi Fiziki Imeni N.N.Semenova Akademii Nauk Sssr | Indication and test device for determining concentrations of substrates of fermentation reactions |
| CA2156226C (en) * | 1994-08-25 | 1999-02-23 | Takayuki Taguchi | Biological fluid analyzing device and method |
| JP6059457B2 (ja) * | 2011-10-31 | 2017-01-11 | アークレイ株式会社 | 分析用具および分析方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3983005A (en) * | 1974-03-25 | 1976-09-28 | Eastman Kodak Company | Integral element for the analysis of cholesterol |
| US4318985A (en) * | 1981-01-29 | 1982-03-09 | Miles Laboratories, Inc. | Method and device for detecting glucose concentration |
| DE3247608A1 (de) * | 1982-12-23 | 1984-07-05 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Teststreifen |
| US4484987A (en) * | 1983-05-19 | 1984-11-27 | The Regents Of The University Of California | Method and membrane applicable to implantable sensor |
| JPS6082859A (ja) * | 1983-10-13 | 1985-05-11 | Fuji Photo Film Co Ltd | 一体型多層化学分析要素 |
-
1984
- 1984-03-30 JP JP59064211A patent/JPS60205364A/ja active Granted
-
1985
- 1985-03-20 US US06/714,185 patent/US4931387A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-27 DE DE19853510992 patent/DE3510992A1/de active Granted
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63210664A (ja) * | 1987-02-25 | 1988-09-01 | ジェネシス・ラブス・インコ−ポレ−テッド | 酸素要求検出系を用いる装置のための乾燥試験片及び被検流体中の分析成分の検出方法 |
| EP0371513A2 (en) | 1988-12-01 | 1990-06-06 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Device and method for assay of liquid sample |
| JP2009016853A (ja) * | 2008-08-08 | 2009-01-22 | Tdk Corp | 希土類焼結磁石の製造方法 |
| JP4692783B2 (ja) * | 2008-08-08 | 2011-06-01 | Ｔｄｋ株式会社 | 希土類焼結磁石の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4931387A (en) | 1990-06-05 |
| DE3510992A1 (de) | 1985-10-10 |
| DE3510992C2 (ja) | 1993-04-01 |
| JPH0476679B2 (ja) | 1992-12-04 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |