JP6059457B2 - 分析用具および分析方法 - Google Patents
分析用具および分析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6059457B2 JP6059457B2 JP2012153787A JP2012153787A JP6059457B2 JP 6059457 B2 JP6059457 B2 JP 6059457B2 JP 2012153787 A JP2012153787 A JP 2012153787A JP 2012153787 A JP2012153787 A JP 2012153787A JP 6059457 B2 JP6059457 B2 JP 6059457B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substrate
- analysis
- oxygen permeability
- oxidative
- oxygen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims description 65
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 84
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 73
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 73
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 73
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 claims description 54
- 230000035699 permeability Effects 0.000 claims description 36
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 31
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 29
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 15
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 15
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 15
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims description 12
- -1 polyethylene Polymers 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 3
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims description 3
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 3
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 48
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 27
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 20
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 16
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 12
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 12
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 9
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 8
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 4
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013026 undiluted sample Substances 0.000 description 3
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- SVLRFMQGKVFRTB-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(3,5-dimethoxyanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].COC1=CC(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)=CC(OC)=C1 SVLRFMQGKVFRTB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 229920006248 expandable polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000002759 woven fabric Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Description
本発明は、検体中の対象物を酸化系酵素反応を用いて分析する技術に関する。
溶液中には酸素が溶け込んでいる。血液を例として挙げると、血液中にはヘモグロビンと結合した酸素の他、溶存酸素としての酸素も存在する。例えば、血液中（特に、血清または血漿中）の対象物を検出、分析するために、酸化系酵素を用いた測定系が利用される。当該測定系は、反応溶液中の酸素を利用して酵素反応が進む。この場合、外気との接触がない密閉空間内においては、反応に利用できる酸素は、試料および反応溶液中にすでに存在しているもののみであり、追加での酸素の供給はほとんど無いものと考えられる。
しかしこのような酸素の無供給状態では、対象物を分析するための試薬がドライ試薬であり、かつ反応空間が密閉空間内であり、さらには検体が無希釈のまま流入されるとなると、問題が生じる。つまり、溶存酸素のみでは目的とする濃度範囲を補足することができない可能性が高いということである。例えば、血液中の溶存酸素は、概ね０．６〜０．７ｍｍｏｌ／Ｌほどである。しかしながら、血液検体中の測定対象物として尿酸、クレアチニンを例にした場合、濃度に換算すると、それぞれ約１０ｍｇ／ｄＬまたは７ｍｇ／ｄＬである。すなわち、一般的に要求される測定範囲は、尿酸およびクレアチニンのいずれも０〜２０ｍｇ／ｄＬであり、前述したような測定系においては市場で要求される仕様を満足させることができない。そこで、このような場合には、無希釈のままの使用でなく、対象物を分析する反応に至る前に、酸化系酵素が利用可能な酸素濃度にまで検体を希釈することで酸素供給を補う手段が考えられる。
一方、密閉空間内でなく開放系で同様に酸化系酵素反応が利用される分析用具について特許文献１に記載されている。当該分析用具は、ドライ試薬層を用いており、支持体と試薬層との間に酸素供給層を備えている。また、当該酸素供給層は、発色むらの抑制のために多孔質疎水性構造を用いている。例えば、不織布、疎水性の織布・紙、金属およびナイロンメッシュ、メンブランフィルタ、表面を疎水処理したガラスフィルタ・セラミック等の多孔質疎水性構造が用いられると記載されている。
しかしながら、前述したような、酸化系酵素が利用可能な酸素濃度にまで検体を試料等で希釈することで酸素供給を補う技術は、希釈液（水、生理食塩水等）を要し、さらに希釈が手技操作の場合煩雑な操作が増え、分注に精密さを要し、定量誤差を招く可能性も生じる。また、希釈が自動操作の場合であっても、同様に希釈液は必要であり、さらに相応の機能を有する高価な装置（例えば、自動分析装置）が必要となる。
一方、酸化系酵素が利用され、多孔質疎水性構造の酸素供給層を備えている、特許文献１に記載の開放系の分析用具の場合でも、検体を密閉空間にて分析することができないため、精密さを欠く場合を生じる。
本発明は上記事情に鑑みてなされたものであり、密閉空間のセル容器内において、透過測光により、無希釈の検体内の対象物を直接分析することができる、分析用具および分析方法を提供することを目的とする。
本発明者は、密閉空間でのセル容器内の毛管力による送液、さらには分析に用いる光を透過し酸素透過性を有する基板を利用した分析システムを見出し、本発明を完成させるに至った。
本発明の第１の観点に係る分析用具は、密閉されたセル容器内に流入される検体が含有する対象物を、酸化系発色剤および酸化系酵素反応を利用して分析するための分析用具であって、
対面して配置されている上面の基板および／または下面の基板の少なくとも一部が、前記分析に用いる光を透過し、かつ、酸素透過性を有する材料から構成されていることを特徴とする。
対面して配置されている上面の基板および／または下面の基板の少なくとも一部が、前記分析に用いる光を透過し、かつ、酸素透過性を有する材料から構成されていることを特徴とする。
好ましくは、前記分析用具は、前記上面の基板および／または前記下面の基板の対面する面の少なくとも一部に塗布およびドライ化され、流入される前記検体によって溶解し、酸化系酵素を含むドライ試薬層と、
前記セル容器が密閉状態となるよう、前記上面の基板と前記下面の基板との間に設置されている止水部と、
前記検体を流動させる通気孔と、
を備えることを特徴とする。
前記セル容器が密閉状態となるよう、前記上面の基板と前記下面の基板との間に設置されている止水部と、
前記検体を流動させる通気孔と、
を備えることを特徴とする。
より好ましくは、前記分析に用いる光を透過し、かつ、酸素透過性を有する材料は、延伸性のポリスチレン、ポリエチレンまたはポリプロピレンのいずれかであることを特徴とする。
さらに好ましくは、前記酸化系発色剤は、前記ドライ試薬層に含まれることを特徴とする。
また、好ましくは、前記酸素透過性を有する材料は、酸素透過度が１００ｃｃ／ｍ２／ｈｒ／ａｔｍまたはそれ以上であることを特徴とする。
より好ましくは、前記上面の基板および／または前記下面の基板は、全面が前記分析に用いる光を透過し、かつ、酸素透過性を有する材料から構成されていることを特徴とする。
さらに好ましくは、前記分析に用いる光を透過し、かつ、酸素透過性を有する材料から構成されている、前記上面の基板および／または前記下面の基板の少なくとも一部の厚みは、０．０５ｍｍ〜０．３０ｍｍであることを特徴とする。
本発明の第２の観点に係る分析方法は、第１の観点に係る分析用具を使用する分析方法であって、
前記セル容器内が密閉状態となるよう、前記検体を流入する工程と、
前記検体によって溶解し、酸化系酵素を含むドライ試薬層を前記セル容器内の前記検体に溶解させ、前記対象物との反応に応じた前記酸化系発色剤の色素の発色を測光する工程と、
を含むことを特徴とする。
前記セル容器内が密閉状態となるよう、前記検体を流入する工程と、
前記検体によって溶解し、酸化系酵素を含むドライ試薬層を前記セル容器内の前記検体に溶解させ、前記対象物との反応に応じた前記酸化系発色剤の色素の発色を測光する工程と、
を含むことを特徴とする。
本発明の分析用具および分析方法によれば、密閉空間のセル容器内において、透過測光により、無希釈の検体内の対象物を直接分析することができる。
本発明において、「含む」、「含有する」および「有する」は、「からなる」および「から構成される」との意も含むものとする。
〈分析用具〉
本発明の実施の形態１は、酸化系発色剤と、酸化系酵素反応と、分析に用いる光を透過し酸素透過性を有する材料から構成される基板とを利用する分析用具に関する。具体的には、セル容器内に酸素を供給し、検体が含有する対象物を分析（検出、濃度または量の測定等）する用具である。図１は、実施の形態１に係る分析用具の断面図を示す図である。図１に示すように、分析用具１は、対面して配置されている上面の基板２および下面の基板３と、上面の基板２と下面の基板３とが対面する側に塗布およびドライ化され、かつ酸化系酵素を含むドライ試薬層４と、セル容器に検体と酸化系発色剤とが流入された際に密閉状態となるよう、上面の基板２と下面の基板３との間に設置されている止水部５と、検体と酸化系発色剤とを流動させる通気孔６とを備える。
本発明の実施の形態１は、酸化系発色剤と、酸化系酵素反応と、分析に用いる光を透過し酸素透過性を有する材料から構成される基板とを利用する分析用具に関する。具体的には、セル容器内に酸素を供給し、検体が含有する対象物を分析（検出、濃度または量の測定等）する用具である。図１は、実施の形態１に係る分析用具の断面図を示す図である。図１に示すように、分析用具１は、対面して配置されている上面の基板２および下面の基板３と、上面の基板２と下面の基板３とが対面する側に塗布およびドライ化され、かつ酸化系酵素を含むドライ試薬層４と、セル容器に検体と酸化系発色剤とが流入された際に密閉状態となるよう、上面の基板２と下面の基板３との間に設置されている止水部５と、検体と酸化系発色剤とを流動させる通気孔６とを備える。
本実施の形態１では、上面の基板２および下面の基板３の全体が、分析に用いる光を透過し酸素透過性を有する材料から作られており、密閉されたセル内部中、すなわち流入された検体および酸化系発色剤中に酸素を効率よく供給する。また、後述する実施例の結果から、上面の基板２および下面の基板３の厚みは、例えば、０．０５ｍｍ〜０．３０ｍｍ程度を挙げることができる。分析に用いる光を透過し酸素透過性を有する材料、特に、酸素透過性が高い材料には、例えば、延伸性のポリスチレン、ポリエチレンまたはポリプロピレン等を挙げることができる。なお、変形例としては、上面の基板２および／または下面の基板３の少なくとも一部が、分析に用いる光を透過し酸素透過性を有する材料から作られていても構わない。また、セル容器内には検体のみが流入され、酸化系発色剤は、酸化系酵素のようにドライ試薬層４として、予め塗布およびドライ化しておいても構わない。このような分析用具１の変形構成は、当業者であれば容易に想到可能である。
分析に用いる光については、セル容器内に流入された検体および酸化系発色剤が、ドライ試薬層４を溶解し、酸化系酵素による対象物の化学反応に応じた酸化系発色剤の色素の発色を測光できればよい。具体的には、上面の基板２または下面の基板３のいずれか一面の一部のみ分析に用いる光を透過する材料から構成されていればよい。また、両方の基板のいずれもが一部のみ分析に用いる光を透過する材料から構成されていても構わない。また、後述の実施例の結果から、セル光路長（測光の際のセル容器内における光路長）は、例えば、１００μｍ〜３００μｍ程度を挙げることができる。
酸素透過性については、透過測光と同様に、やはり、上面の基板２および下面の基板３の全体が酸素透過性が高い材料から構成されている分析用具１が最も好ましい。しかし、検体が含有する対象物を補足可能な程度に酸化系酵素反応が実施できるのであれば、上面の基板２および／または下面の基板３の一部のみが酸素透過性を有する材料から構成されていてもよい。酸素透過性を有するとは、後述する実施例のように、効率よくセル容器内に酸素を供給できることをいう。基板の酸素透過性（酸素透過度）の程度は、流入する検体および酸化系発色剤、ならびに対象物にとって、好ましいものを選択すればよい。例えば、１００ｃｃ／ｍ２／ｈｒ／ａｔｍまたはそれ以上の酸素透過度を挙げることができる。好ましくは、２００ｃｃ／ｍ２／ｈｒ／ａｔｍまたはそれ以上の酸素透過度を挙げることができる。
ドライ試薬層４も、それぞれの検体および酸化系発色剤、ならびに対象物にとって、好ましいものを選択すればよい。または、前述したとおり、酸化系発色剤自体をドライ試薬層の一部としてもよい。当業者であれば、これらによる酸化系酵素反応を考慮し、ドライ試薬層４の酸化系酵素等の成分を容易に想到することが可能である。また、本実施の形態１では、上面の基板２および下面の基板３の対向する側の面の両面に塗布されドライ化（乾化）されているが、いずれかの対向している面のみでも構わない。また、分析に用いる光を透過し酸素透過性を有する材料から構成されている上面の基板２および／または下面の基板３の部分的箇所のみに、ドライ試薬層４を塗布しても構わない。
止水部５は、セル内部の溶解した液体等が流出しなければ、どのような材料で、どのように形成しても構わない。通気孔６は、毛管力によって液状の検体、または試料を送液するためには必要なものである。また、バルブ操作等の機械的な動作により吸引せずに、自然送液により送液できる周知の手段である。
本発明において、「検体」とは、分析される対象物を含む可能性を有する溶液状のものならば任意である。例えば、血液、眼水晶体液、脳脊髄液、乳、腹水液、滑液、腹膜液、羊水または細胞培養液等の任意の生物学的に由来する、または由来し得るものを挙げることができる。検体は、これらから得られたままの状態において直接的に希釈せず使用することが可能である。本発明において、「対象物」とは、検体が含有し、酸化系酵素反応の分析対象となるものならば任意である。すなわち、溶解したドライ試薬層４に含まれる酸化系酵素により化学反応を起こし、その後、酸化系発色剤の発色での測光によってその量または濃度等が検出、分析できるものであればどのようなものでも構わない。例えば、前述した尿酸（ＵＡ）またはクレアチニン（ＣＲＥ）等を挙げることができる。
〈分析方法〉
本発明の実施の形態２は、前述した形状の本発明に係る分析用具１を使用する分析方法に関する。具体的には、分析用具１のセル容器内が密閉状態となるよう、検体を流入する工程と、上面の基板２および／または下面の基板３の対面する少なくとも一部に塗布およびドライ化されているドライ試薬層４を、セル容器内に溶解させ、酸化系酵素による対象物の反応に応じた酸化系発色剤の色素の発色を、透過測光により検出する工程とを含む。
本発明の実施の形態２は、前述した形状の本発明に係る分析用具１を使用する分析方法に関する。具体的には、分析用具１のセル容器内が密閉状態となるよう、検体を流入する工程と、上面の基板２および／または下面の基板３の対面する少なくとも一部に塗布およびドライ化されているドライ試薬層４を、セル容器内に溶解させ、酸化系酵素による対象物の反応に応じた酸化系発色剤の色素の発色を、透過測光により検出する工程とを含む。
前述したように、本実施の形態２の分析方法で用いる分析用具１の上面の基板２および／または下面の基板３の少なくとも一部は、酸素透過性を有する材料から作られている。好ましくは、酸素透過性が高い材料から作られている。そのため、密閉されたセル内部の検体、ならびに溶解されたドライ試薬層４の中には酸素が効率よく供給される。供給された酸素は、酸化系酵素により検体中の対象物と反応し、当該反応物により、酸化系発色剤の色素の発色に至る。さらには、前述したように、分析用具１の上面の基板２および／または下面の基板３の少なくとも一部は、分析に用いる光を透過する材料で構成されている。そのため、当該色素の発色での検体内の対象物の透過測光での分析（検出、濃度または量の測定等）が可能となる。また、密閉されたセル内部には効率よく酸素が供給され、検体中の対象物の濃度範囲の限度をつくることは無い。すなわち、検体を無希釈で分析することが可能である。
次に、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は下記の実施例により制限されない。
本実施例および比較例では、図１または図２に示す分析用具１を作成し、種々の状況にて酸素供給に関する実験を行った。
（実施例１および比較例１）
図２は、実施例１および比較例１に係る分析用具の断面図を示す図である。実施例１および比較例１では、図２の上面の基板２を、酸素透過度の異なる２種類の基材を用いて作成し、酸化系酵素反応の反応速度について検証した。
図２は、実施例１および比較例１に係る分析用具の断面図を示す図である。実施例１および比較例１では、図２の上面の基板２を、酸素透過度の異なる２種類の基材を用いて作成し、酸化系酵素反応の反応速度について検証した。
まず、共通する部分について簡単に説明する。図２において、いずれも下面の基板３はポリエステルのうち、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）である。セル光路長（測光の際のセル容器内における光路長）は、０．２８８ｍｍとなるように作成した。測光部径（測光の際のセル容器内の直径）は０．２５ｍｍである。ドライ試薬層４は、下面の基板３のみに塗布、ドライ化した。ドライ試薬層４の主たる反応成分を挙げると、ＭＯＰＳ（ｐＨ７．５）Ｂｕｆｆｅｒと、ウリカーゼと、４−アミノアンチピリンとを混合したものである。検体の対象物としては尿酸を使用し、ペルオキシダーゼと酸化系発色剤のＨＤＡＯＳと混合して流入した。すなわち、利用した酸化系酵素反応は、尿酸測定系反応スキームである。当該反応スキームでは、まず、尿酸＋Ｏ２＋Ｈ２Ｏが、ウリカーゼにより、アラントイン＋Ｈ２Ｏ２＋ＣＯ２となる。さらに、酸化系発色剤＋Ｈ２Ｏ２が、ペルオキシダーゼにより、酸化発色体となり、当該発色に係る吸光度により尿酸の濃度の経時変化を測定した。
実施例１の上面の基板２は、延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ、メーカー：旭化成ケミカルズ製）から構成され厚みは０．０５ｍｍであるものを使用した。延伸性ポリスチレンは酸素透過度が高く、約２００ｃｃ／ｍ２／ｈｒ／ａｔｍである。比較例１の上面の基板２には、下面の基板３と同様のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）から構成され、厚みは０．１５ｍｍであるものを使用した。ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）の酸素透過度は低く、約３ｃｃ／ｍ２／ｈｒ／ａｔｍである。
これらのそれぞれの上面の基板２で作成された図２の分析用具１に、前述した検体および酸化系発色剤等を適宜混合した溶液を流入した。これにより、分析用具１のセル内部ではドライ試薬層４が溶解され、前述したような尿酸測定系反応スキームが起こる。その後、反応に応じた色素の発色を透過測光によって分析した。
図３は、実施例１（ＯＰＳ）および比較例１（ＰＥＴ）に係る透過測光による吸光度の反応タイムコースを示す図である。図３において、ＵＡ１８．１ｍｇ／ｄＬ、ＵＡ１１．０ｍｇ／ｄＬまたはＵＡ０ｍｇ／ｄＬは、流入される溶液中の尿酸（ＵＡ）の濃度である。また、横軸は時間、縦軸は波長５７０ｎｍにおける吸光度である。図３に示すように、比較例１のポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）の場合、検体等を適宜混合した溶液中の溶存酸素を消費した後は、酸素供給はほとんどされず、ウリカーゼによる反応は頭打ちとなる。すなわち、流入された溶液中の尿酸（ＵＡ）の全てが反応し、補足されている結果とは限らない。一方、実施例１の延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）の場合、酸素が外部より一定速度において分析用具１のセル内部の溶液中に供給されるため、流入された溶液中の尿酸（ＵＡ）の全てが反応した状態においてエンドポイントに達した。このように、酸素の供給は基板の材料の酸素透過度に依存するため、酸素透過性を有する、つまり酸素透過度が高い材料から構成された基板を用いた方が、検体中の対象物の正確な分析ができることが確認された。
（実施例２）
実施例２では、前述の実施例１と同様に、図２の上面の基板２を延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ、メーカー：旭化成ケミカルズ製）としたが、基板の厚みおよびセル光路長を変更し、同様の実験を行い、エンドポイントに到達する時間について比較した。
実施例２では、前述の実施例１と同様に、図２の上面の基板２を延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ、メーカー：旭化成ケミカルズ製）としたが、基板の厚みおよびセル光路長を変更し、同様の実験を行い、エンドポイントに到達する時間について比較した。
本実施例２でも、図２に示す分析用具１を作成した。下面の基板３、ドライ試薬層４、検体、酸化系発色剤および反応スキームについては前述の実施例１と同様である。上面の基板２の延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）の厚みは、０．２１ｍｍおよび実施例１と同様の０．０５ｍｍであるものを使用し、セル光路長はそれぞれ０．４６３ｍｍおよび０．２８８ｍｍである。
これらのそれぞれの上面の基板２で作成された分析用具１に、前述した検体と酸化系発色剤等を適宜混合した溶液を流入した。なお、コントロールとして、尿酸（ＵＡ）を含まない検体と酸化系発色剤等を適宜混合した溶液についても実施した。これにより、分析用具１のセル内部ではドライ試薬層４が溶解され、前述したように尿酸測定系反応スキームが起こる。その後、反応に応じた色素の発色を透過測光によって分析した。
図４は、実施例２に係る透過測光による吸光度の反応タイムコースを示す図である。横軸は時間、縦軸は波長５８３ｎｍにおける吸光度である。図４に示すように、上面の基板２の延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）の厚みが０．０５ｍｍの場合の方が、０．２１ｍｍの場合よりも速くエンドポイントに到達した。このように、酸素透過性を有する材料から構成された基板の部分の厚みが薄い方が、速くエンドポイントに達する。
（実施例３）
実施例３では、図１に示す分析用具１を作成し、上面の基板２および下面の基板３のいずれもを、０．１３ｍｍの厚みの延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ、メーカー：旭化成ケミカルズ製）で構成した。下面の基板３に塗布、ドライ化されるドライ試薬層４については実施の形態１と同様であるが、上面の基板２には、酸化系発色剤のＨＤＡＯＳとペルオキシダーゼを塗布し、ドライ試薬層４とした。すなわち、検体の対象物である尿酸のみをセル容器中に流入した。
実施例３では、図１に示す分析用具１を作成し、上面の基板２および下面の基板３のいずれもを、０．１３ｍｍの厚みの延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ、メーカー：旭化成ケミカルズ製）で構成した。下面の基板３に塗布、ドライ化されるドライ試薬層４については実施の形態１と同様であるが、上面の基板２には、酸化系発色剤のＨＤＡＯＳとペルオキシダーゼを塗布し、ドライ試薬層４とした。すなわち、検体の対象物である尿酸のみをセル容器中に流入した。
その他の反応スキーム等は前述の実施例１と同様であるが、種々のセル光路長（０．２００ｍｍ、０．２７５ｍｍ、０．５３６ｍｍ）で同様の実験を行い、エンドポイントに到達する時間について検証した。
図５は、実施例３に係る透過測光による吸光度の反応タイムコースを示す図である。横軸は時間、縦軸は波長５８３ｎｍにおける吸光度である。図５に示すように、セル光路長（セル内部の深さ）が浅いほど、エンドポイントに到達する時間が短くなっていた。これは、セル光路長が浅いほど、酸素供給量および溶解酸素濃度が高くなり、酸化系酵素反応が速くなるためと考えられる。
（実施例４）
実施例４では、前述の実施例１と同様に、図２の上面の基板２を延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ、メーカー：旭化成ケミカルズ製）としたが、種々の基板の厚みおよびセル光路長でもって、同様の実験を行い、基板の厚みおよびセル光路長とエンドポイントに到達する時間との関連性について検証した。
実施例４では、前述の実施例１と同様に、図２の上面の基板２を延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ、メーカー：旭化成ケミカルズ製）としたが、種々の基板の厚みおよびセル光路長でもって、同様の実験を行い、基板の厚みおよびセル光路長とエンドポイントに到達する時間との関連性について検証した。
本実施例４でも、図２に示す分析用具１を作成した。下面の基板３、ドライ試薬層４、検体、酸化系発色剤および反応スキームについては前述の実施例１と同様である。上面の基板２の延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）の厚みは、０．０５、０．１３、０．２１または０．３０ｍｍのものを使用し、検証した。また、測光部径は全て０．２５ｍｍであるが、セル光路長は、０．１０ｍｍ（セル内部容積：０．４９μＬ）、０．２０ｍｍ（セル内部容積：０．９８μＬ）、０．２７５ｍｍ（セル内部容積：１．３５μＬ）、０．３８８ｍｍ（セル内部容積：１．９０μＬ）または０．５３８ｍｍ（セル内部容積：２．６４μＬ）のものを使用した。
これらの分析用具１のセル容器内に、実施例１と同様、検体と酸化系発色剤とを適宜混合した溶液を流入し、波長５８３ｎｍでの吸光度を測定した。ここで、それぞれの上面の基板２の厚み、およびセル光路長の違いによる酸素供給有効性を比較するため、尿酸（ＵＡ）濃度３６．２ｍｇ／ｄＬにおける溶液での、それぞれのエンドポイント到達時間を測定した。以下に、測定したエンドポイント到達時間（ｓｅｃ）の結果の表を示す。なお、セル光路長０．３８８ｍｍおよび０．５３８ｍｍのエンドポイント到達時間は、ＵＡ１８．１ｍｇ／ｄＬの溶液流入にて測定したときのエンドポイント到達時間を二倍にしたときの時間をエンドポイント到達時間としている。
また、図６は、実施例４に係る基板の厚みおよびセル光路長に関するエンドポイント到達時間の結果を示す図である。すなわち、表１をグラフ化したものである。このように、やはり、基板の厚みが厚くなるほど酸素供給の効率が悪くなると予想され、エンドポイント到達の時間が長くなる。また、セル光路長についても深くなるほどセル内部の溶液に酸素が広がる効率が悪くなると考えられるため、エンドポイント到達の時間が長くなる。
これらの結果を考慮すると、例えば、ある対象物の特定の測定範囲が判明しており、かつ、ある特定の測定時間内に測定できる分析用具１を作成する際に利用できる。例えば、尿酸（ＵＡ）やクレアチニン（ＣＲＥ）の対象物において、測定範囲上限を２０ｍｇ／ｄＬとした場合、かつ測定時間が５分間以内の仕様の分析用具１を作成するには、以下の表２（尿酸（ＵＡ））および表３（クレアチニン（ＣＲＥ））のようなパターンの仕様の分析用具１を選択すればよい。表中○印は、測定範囲上限および測定時間以内に測定可能である組合せを示す。また、これらのパターンは仕様によって取捨選択すればよく、当業者であればその他の対象物等についても容易に適切な選択をすることが可能である。
（実施例５）
実施例５では、図１に示す分析用具１を２つ作成し、いずれも上面の基板２を０．１３ｍｍの厚みの延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）で構成した。しかし、それぞれの延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）の製造メーカーを、１つの分析用具１では旭化成ケミカルズ製とし、もう１つの分析用具１では三菱樹脂製とすることにより、延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）の製造メーカーの差異による酸素供給能について確認した。
実施例５では、図１に示す分析用具１を２つ作成し、いずれも上面の基板２を０．１３ｍｍの厚みの延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）で構成した。しかし、それぞれの延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）の製造メーカーを、１つの分析用具１では旭化成ケミカルズ製とし、もう１つの分析用具１では三菱樹脂製とすることにより、延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）の製造メーカーの差異による酸素供給能について確認した。
２つの分析用具１のその他の構成およびその成分等については同様である。下面の基板３は厚み０．１５ｍｍのポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）であり、セル光路長は０．２８８ｍｍであり、測光部径は０．２５ｍｍである。上面の基板２に塗布、ドライ化されるドライ試薬層４の主たる成分は、ＭＯＰＳ（ｐＨ７．５）Ｂｕｆｆｅｒと、ウリカーゼと、ペルオキシダーゼとを混合したものである。下面の基板３に塗布、ドライ化されるドライ試薬層４の主たる成分は、酸化系発色剤ＤＡ６７である。
反応スキームについては実施例１と同様であり、検体（血清試料）の対象物の尿酸濃度２４．２ｍｇ／ｄＬにおける発色に係る波長６１０ｎｍでの吸光度測定を行った。図７は、実施例５に係る透過測光による吸光度の反応タイムコースを示す図である。図７におけるエンドポイント到達時間によって、それぞれの分析用具１（Ｎｏ．１；旭化成ケミカルズ製、Ｎｏ．２；三菱樹脂製）による酸素供給有効性を比較すると、延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）の製造メーカーが異なっていても、その酸素供給能に差がないことがわかった。従って、当該分析用具１に係る酸素供給能は、基本的に延伸性ポリスチレン（ＯＰＳ）の厚みに依存し、それに伴う酸素透過性に依存するということがわかった。
本発明は、上記発明の実施の形態および実施例の説明に何ら限定されるものではない。特許請求の範囲の記載を逸脱せず、当業者が容易に想到できる範囲で種々の変形態様もこの発明に含まれる。
本明細書の中で明示した公開特許公報の内容は、その全ての内容を援用によって引用することとする。
本発明に係る分析用具および分析方法によれば、密閉空間のセル容器内において、透過測光により、無希釈の検体内における対象物を直接分析することが可能となる。
１ 分析用具
２ 上面の基板
３ 下面の基板
４ ドライ試薬層
５ 止水部
６ 通気孔
２ 上面の基板
３ 下面の基板
４ ドライ試薬層
５ 止水部
６ 通気孔
Claims (6)
- 密閉されたセル容器内に流入される検体が含有する対象物を、酸化系発色剤および酸化系酵素反応を利用して分析するための分析用具であって、
対面して配置されている上面の基板および／または下面の基板の少なくとも一部が、前記分析に用いる光を透過し、かつ、酸素透過性を有する材料から構成されており、
前記分析用具は、前記上面の基板および／または前記下面の基板の対面する面の少なくとも一部に塗布およびドライ化され、流入される前記検体によって溶解し、酸化系酵素を含むドライ試薬層と、
前記セル容器が密閉状態となるよう、前記上面の基板と前記下面の基板との間に設置されている止水部と、
前記検体を流動させる通気孔と、
を備え、
前記分析に用いる光を透過し、かつ、酸素透過性を有する材料から構成されている、前記上面の基板および／または前記下面の基板の少なくとも一部の厚みは、０．０５ｍｍ〜０．３０ｍｍであることを特徴とする、分析用具。 - 前記分析に用いる光を透過し、かつ、酸素透過性を有する材料は、延伸性のポリスチレン、ポリエチレンまたはポリプロピレンのいずれかであることを特徴とする、請求項１に記載の分析用具。
- 前記酸化系発色剤は、前記ドライ試薬層に含まれることを特徴とする、請求項２に記載の分析用具。
- 前記酸素透過性を有する材料は、酸素透過度が１００ｃｃ／ｍ２／ｈｒ／ａｔｍまたはそれ以上であることを特徴とする、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の分析用具。
- 前記上面の基板および／または前記下面の基板は、全面が前記分析に用いる光を透過し、かつ、酸素透過性を有する材料から構成されていることを特徴とする、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の分析用具。
- 請求項１ないし５のいずれか１項に記載の分析用具を使用する分析方法であって、
前記セル容器内が密閉状態となるよう、前記検体を流入する工程と、
前記検体によって溶解し、酸化系酵素を含むドライ試薬層を前記セル容器内の前記検体に溶解させ、前記対象物との反応に応じた前記酸化系発色剤の色素の発色を測光する工程と、
を含むことを特徴とする、分析方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012153787A JP6059457B2 (ja) | 2011-10-31 | 2012-07-09 | 分析用具および分析方法 |
| US13/650,157 US8993313B2 (en) | 2011-10-31 | 2012-10-12 | Analytical instrument and analytical method |
| EP12190371.0A EP2592153B1 (en) | 2011-10-31 | 2012-10-29 | Analytical instrument and analytical method |
| CN201210437691.2A CN103091264B (zh) | 2011-10-31 | 2012-10-31 | 分析用具及分析方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2011239659 | 2011-10-31 | ||
| JP2011239659 | 2011-10-31 | ||
| JP2012153787A JP6059457B2 (ja) | 2011-10-31 | 2012-07-09 | 分析用具および分析方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2013117516A JP2013117516A (ja) | 2013-06-13 |
| JP6059457B2 true JP6059457B2 (ja) | 2017-01-11 |
Family
ID=47623785
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2012153787A Active JP6059457B2 (ja) | 2011-10-31 | 2012-07-09 | 分析用具および分析方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US8993313B2 (ja) |
| EP (1) | EP2592153B1 (ja) |
| JP (1) | JP6059457B2 (ja) |
| CN (1) | CN103091264B (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107271500A (zh) * | 2016-04-08 | 2017-10-20 | 北京德鲁伊医疗器材有限公司 | 一种尿酸生化分析干片及其制备方法和试剂盘 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4287995A (en) * | 1978-11-30 | 1981-09-08 | Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. | Container sealing member with oxygen absorbent |
| JPS60205364A (ja) | 1984-03-30 | 1985-10-16 | Kyoto Daiichi Kagaku:Kk | 酸素供給層を有する分析用具 |
| JPS6375655A (ja) * | 1986-09-19 | 1988-04-06 | Olympus Optical Co Ltd | 酵素電極装置 |
| US5654164A (en) * | 1995-01-09 | 1997-08-05 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Method and device for reducing oxygen with a reduced oxidase with color formation |
| JP3213566B2 (ja) * | 1996-04-26 | 2001-10-02 | アークレイ株式会社 | 検体分析用具およびそれを用いた検体分析方法並びに検体分析装置 |
| US6107083A (en) | 1998-08-21 | 2000-08-22 | Bayer Corporation | Optical oxidative enzyme-based sensors |
| US20040058437A1 (en) * | 2001-04-10 | 2004-03-25 | Rodgers Seth T. | Materials and reactor systems having humidity and gas control |
| CN100487442C (zh) * | 2002-12-20 | 2009-05-13 | 爱科来株式会社 | 薄型分析用具 |
| CN1456892A (zh) * | 2003-06-06 | 2003-11-19 | 浙江大学 | 全血尿酸浓度检测试纸条 |
| US7780828B2 (en) | 2004-01-07 | 2010-08-24 | Arkray, Inc. | Analytical instrument having improved arrangement of reagent section and analytical method |
| JP4888055B2 (ja) * | 2006-10-30 | 2012-02-29 | 凸版印刷株式会社 | 易酸化物質含有フィルム巻取りの酸化防止方法 |
| JP2008209130A (ja) * | 2007-02-23 | 2008-09-11 | Yamatake Corp | 発色反応検査用キット及び発色反応検査方法 |
| JP2009243965A (ja) * | 2008-03-28 | 2009-10-22 | Sumitomo Bakelite Co Ltd | 流路デバイス、外装ケース付き流路デバイス、流路デバイスの使用方法 |
-
2012
- 2012-07-09 JP JP2012153787A patent/JP6059457B2/ja active Active
- 2012-10-12 US US13/650,157 patent/US8993313B2/en active Active
- 2012-10-29 EP EP12190371.0A patent/EP2592153B1/en active Active
- 2012-10-31 CN CN201210437691.2A patent/CN103091264B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2013117516A (ja) | 2013-06-13 |
| US20130109038A1 (en) | 2013-05-02 |
| EP2592153A3 (en) | 2013-06-12 |
| CN103091264A (zh) | 2013-05-08 |
| EP2592153A2 (en) | 2013-05-15 |
| CN103091264B (zh) | 2015-09-23 |
| US8993313B2 (en) | 2015-03-31 |
| EP2592153B1 (en) | 2016-05-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6511814B1 (en) | Method and device for detecting analytes in fluids | |
| EP1621887B1 (en) | Analytical test strip with control zone | |
| US20100159611A1 (en) | Hydration/dehydration sensor | |
| US20100159599A1 (en) | Lateral-flow porous membrane assay with flow rate control | |
| EP1281960A2 (en) | Methods and devices for use in analyte concentration determination assays | |
| JPH0259648A (ja) | 液体の化学的分析のための改良可処分装置 | |
| US6602719B1 (en) | Method and device for detecting analytes in fluids | |
| CN102448602A (zh) | 微流路芯片及使用该微流路芯片的气液相分离方法 | |
| CN104777194A (zh) | 抗干扰传感电极及微流控试纸流道流速控制方法 | |
| CN103217521B (zh) | 干试剂的制造方法、干试剂、以及使用其的分析用具 | |
| WO2001069237A1 (fr) | Specimen avec capacite de separation de composant solide | |
| JP6059457B2 (ja) | 分析用具および分析方法 | |
| JP2019194622A (ja) | 光学検出によるポイントオブケア凝固アッセイのための方法及びシステム | |
| US20070259262A1 (en) | Electrochemical Sensing Method | |
| EP1717582A1 (en) | Multilayer analytical element | |
| JP2005315818A (ja) | 液体試料分析用具 | |
| CN204594918U (zh) | 抗干扰传感电极 | |
| WO2006035874A1 (ja) | 多層分析要素 | |
| JP7430798B2 (ja) | 多孔質膜センサ組立体 | |
| US12030045B1 (en) | Devices, methods, and systems for deriving ammonia gas from whole blood | |
| US20240230522A1 (en) | Devices, methods, and systems for deriving a permeate from a feed solution | |
| JP2005265838A (ja) | 多層分析要素（多孔質膜の強度） | |
| JP2005329364A (ja) | 気液反応ユニットおよび分析装置 | |
| WO2006035873A1 (ja) | 多層分析要素 | |
| Gautam et al. | Quantification of creatinine in whole blood by a paper-based device using an RGB sensor |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20141209 |
|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20141211 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150115 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20151126 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20151201 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160119 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160607 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160729 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20161206 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20161209 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6059457 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |