JPS60199830A - モノクロ−ナル抗体 - Google Patents
モノクロ−ナル抗体Info
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- JPS60199830A JPS60199830A JP5558884A JP5558884A JPS60199830A JP S60199830 A JPS60199830 A JP S60199830A JP 5558884 A JP5558884 A JP 5558884A JP 5558884 A JP5558884 A JP 5558884A JP S60199830 A JPS60199830 A JP S60199830A
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- JP
- Japan
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- cancer
- human
- antibody
- react
- antigen
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- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、
[1] ヒト肺扁平上皮癌に含まれる分子量22万の抗
原及び分子量9.5万の抗原と抗原抗体反応をし、(1
)ヒト肺扁平上皮癌と反応し、■ヒト肺腺癌と反応しな
い、■腺癌型のヒトの大腸癌、胃癌。
原及び分子量9.5万の抗原と抗原抗体反応をし、(1
)ヒト肺扁平上皮癌と反応し、■ヒト肺腺癌と反応しな
い、■腺癌型のヒトの大腸癌、胃癌。
直腸癌、甲状腺癌、乳癌、胆管癌、唾液l1g1癌と反
応しない及び(4)ヒトの肺胞、気管支粘膜、、甲状腺
。
応しない及び(4)ヒトの肺胞、気管支粘膜、、甲状腺
。
腎11FFI膵、直腸、大腸、胃、牌、脳、末梢血リン
パ球の正常組織と反応しない性質を有するIgG1亜群
に属するモノクローナル抗体1−uCa3、[2] ヒ
ト肺扁平上皮癌に含まれる分子ω15万の抗原と抗原抗
体反応をし、(1)ヒト肺扁平上皮癌と反応し、■ヒト
肺腺癌と反応しない、(3)腺癌型のヒトの大腸癌、胃
癌、直腸癌、甲状腺癌、乳癌。
パ球の正常組織と反応しない性質を有するIgG1亜群
に属するモノクローナル抗体1−uCa3、[2] ヒ
ト肺扁平上皮癌に含まれる分子ω15万の抗原と抗原抗
体反応をし、(1)ヒト肺扁平上皮癌と反応し、■ヒト
肺腺癌と反応しない、(3)腺癌型のヒトの大腸癌、胃
癌、直腸癌、甲状腺癌、乳癌。
胆管癌、唾液腺癌と反応しない及び(It)ヒトの肺胞
。
。
気管支粘膜、甲状腺、腎、肝、膵、直腸、大腸。
胃、n、脳、末梢血リンパ球の正常4f7mと反応しな
い性質を有するICIG、亜群に属するモノクローナル
抗体1−uCa4、 [3] ヒト肺腺癌に含まれる抗原と抗原抗体反応をし
、(1)ヒト肺扁平上皮癌、ヒト肺腺癌、ヒト肺小細胞
癌と反応し、■腺癌型のヒトの大腸癌。
い性質を有するICIG、亜群に属するモノクローナル
抗体1−uCa4、 [3] ヒト肺腺癌に含まれる抗原と抗原抗体反応をし
、(1)ヒト肺扁平上皮癌、ヒト肺腺癌、ヒト肺小細胞
癌と反応し、■腺癌型のヒトの大腸癌。
胃癌、直腸癌、乳癌、胆管癌、niu液腺癌及び扁平上
皮癌型の舌癌と反応し及び■ヒトの肺胞、気管支粘膜、
甲状腺、腎、肝、胃、脳の正常組織と反応しない性質を
有するItl1M亜群に属するモノクローナル抗体1u
Ca6、 [4] ヒト肺腺癌に含まれる抗原と抗原抗体反応をし
、(1)ヒト肺扁平上皮癌と反応しない、■ヒト肺腺癌
と反応し及び(3)ヒトの肺胞、気管支粘膜。
皮癌型の舌癌と反応し及び■ヒトの肺胞、気管支粘膜、
甲状腺、腎、肝、胃、脳の正常組織と反応しない性質を
有するItl1M亜群に属するモノクローナル抗体1u
Ca6、 [4] ヒト肺腺癌に含まれる抗原と抗原抗体反応をし
、(1)ヒト肺扁平上皮癌と反応しない、■ヒト肺腺癌
と反応し及び(3)ヒトの肺胞、気管支粘膜。
甲状腺、腎、皮崩、肝、膵、直腸、大腸、胃、脳。
牌、子宮頚部の正常組織と反応しない性質を有するI(
IG、亜群に属するモノクローナル抗体LUCa7、 に関−4るものである。
IG、亜群に属するモノクローナル抗体LUCa7、 に関−4るものである。
肺癌は近年増加傾向にあるにもかかわらず、確たる早期
診断法は確立され′Cいない。本発明者等は客観的でし
かも確瓜の高い組織及び細胞診の開発と早期診断への応
用を意図し、肺癌関連抗原に対するモノクローナル抗体
について種々検討を行なった結果、本発明を完成した。
診断法は確立され′Cいない。本発明者等は客観的でし
かも確瓜の高い組織及び細胞診の開発と早期診断への応
用を意図し、肺癌関連抗原に対するモノクローナル抗体
について種々検討を行なった結果、本発明を完成した。
なお、以下の説明において述べる細胞9組織等は特にこ
とわりのない限り全てヒ1−の細胞9組織等である。
とわりのない限り全てヒ1−の細胞9組織等である。
肺癌の特徴の1つはそれが多様な細胞型1組織型からな
ることである。現在肺癌の組織型は大きく4つに分類さ
れている。即ち扁平上皮癌、腺癌。
ることである。現在肺癌の組織型は大きく4つに分類さ
れている。即ち扁平上皮癌、腺癌。
小細胞癌及び大細胞癌である。肺癌の多様な組織型は臨
床的に極めて重要な意味を持つ。即ち肺癌の進行、転移
及び化学療法、放射線療法などの治療効果はその組織型
に依存するのである。このため肺癌組織型の正確な決定
はその治療計画を考える上で大きな比重を占めている。
床的に極めて重要な意味を持つ。即ち肺癌の進行、転移
及び化学療法、放射線療法などの治療効果はその組織型
に依存するのである。このため肺癌組織型の正確な決定
はその治療計画を考える上で大きな比重を占めている。
しかしながら、1ili癌組織型の決定は病理学者の主
観的、形態学的判断に頼っているのが現状であり、客観
的な診断法2診断薬の開発が望まれている。
観的、形態学的判断に頼っているのが現状であり、客観
的な診断法2診断薬の開発が望まれている。
本発明において、本発明者等は客観的な組織型決定のた
めの診断薬としてのモノクローナル抗体を新しく開発し
た。
めの診断薬としてのモノクローナル抗体を新しく開発し
た。
本発明のモノクローナル抗体1−uCa3及び1uCa
4は、後述する実施例に示すように、肺扁平上皮癌とは
反応するが肺腺癌とは反応せず、又腺癌型の大腸癌、胃
癌、直腸癌、甲状腺癌、乳癌、胆管癌、唾液腺癌とも反
応せず、更に肺(肺胞、気管支粘膜)、甲状腺、腎、肝
、膵、直腸、大腸。
4は、後述する実施例に示すように、肺扁平上皮癌とは
反応するが肺腺癌とは反応せず、又腺癌型の大腸癌、胃
癌、直腸癌、甲状腺癌、乳癌、胆管癌、唾液腺癌とも反
応せず、更に肺(肺胞、気管支粘膜)、甲状腺、腎、肝
、膵、直腸、大腸。
胃、牌、脳、末梢血リンパ球の正常組織とも反応しない
。又、1−uCa3抗体は、扁平上皮癌組織である食道
癌及び舌癌とわずかに反応する。更に、1uCa3と1
−uCa4抗体は正常皮唐2食道、子宮頚部の扁平上皮
組織とも弱く反応する。
。又、1−uCa3抗体は、扁平上皮癌組織である食道
癌及び舌癌とわずかに反応する。更に、1uCa3と1
−uCa4抗体は正常皮唐2食道、子宮頚部の扁平上皮
組織とも弱く反応する。
1、uCa3に反応する抗原は分子量22万と9.5万
の2つのタンパク分子であり、一方1uCa4に反応す
る抗原は15万のタンパク分子である。
の2つのタンパク分子であり、一方1uCa4に反応す
る抗原は15万のタンパク分子である。
1−uca3及び1uCa4に反応する抗原はタンパク
質であり、1−uCa3及び1−uQa4が認識する抗
原決定基はシアル酸を含んでいない。
質であり、1−uCa3及び1−uQa4が認識する抗
原決定基はシアル酸を含んでいない。
1−uCa3及び1uCa4はいずれもJOG、亜群に
属するものである。
属するものである。
これらの抗体1u Ca3. lu Ca4を利用づれ
ば、得られた肺癌組織が扁平上皮癌か否かをほぼ100
%の確率で決定できる。また肺癌はしばしば真水により
細胞診断を行なうが、真水中の癌細胞は遊離細胞のため
、一定の形態をとらず、その[1m型の決定は困難を極
める。しかしながら、本抗体1−uCa3及び1−uC
a4を用いれば、真水中の癌細胞の組織型が扁平上皮癌
か否かを客観的に決定可能であり、真水の細胞診に画期
的な進歩をもたらした。
ば、得られた肺癌組織が扁平上皮癌か否かをほぼ100
%の確率で決定できる。また肺癌はしばしば真水により
細胞診断を行なうが、真水中の癌細胞は遊離細胞のため
、一定の形態をとらず、その[1m型の決定は困難を極
める。しかしながら、本抗体1−uCa3及び1−uC
a4を用いれば、真水中の癌細胞の組織型が扁平上皮癌
か否かを客観的に決定可能であり、真水の細胞診に画期
的な進歩をもたらした。
本発明の1−uCa6抗体はヒト肺扁平上皮癌、ヒト帥
腺癌、ヒト肺小細胞癌と反応づるが正常組織とは反応し
ない。又、1uCa7抗体は一部の肺腺癌と反応するが
他の組織型の肺癌及び正常肺組織とは反応しない。
腺癌、ヒト肺小細胞癌と反応づるが正常組織とは反応し
ない。又、1uCa7抗体は一部の肺腺癌と反応するが
他の組織型の肺癌及び正常肺組織とは反応しない。
LuCae抗体を用いれば、得られた肺組織に癌細胞が
存在するか否かを判定でき、LuCa7抗体により腺癌
の存在を判定できる。更【5luca6を用いれば真水
中の癌細胞の有無を判定でき、1−uCa7を用いれば
真水中の腺癌細胞の存在を!l’l定できる。1−uC
a6に反応する抗原はト1ノブシン及びプロナーゼに非
感受性で、しかも1−uCa6の認識する抗原決定基に
はシアル酸が含まれて(Xな0゜1uCa7に反応づる
抗原はタンパク質で1−uCa7の認識する抗原決定基
にシアル酸【よ含まれて(Xない。また、LIJCa6
抗体はIOM亜群に属し、LuCa7抗体は[1lIG
、亜群に属する。
存在するか否かを判定でき、LuCa7抗体により腺癌
の存在を判定できる。更【5luca6を用いれば真水
中の癌細胞の有無を判定でき、1−uCa7を用いれば
真水中の腺癌細胞の存在を!l’l定できる。1−uC
a6に反応する抗原はト1ノブシン及びプロナーゼに非
感受性で、しかも1−uCa6の認識する抗原決定基に
はシアル酸が含まれて(Xな0゜1uCa7に反応づる
抗原はタンパク質で1−uCa7の認識する抗原決定基
にシアル酸【よ含まれて(Xない。また、LIJCa6
抗体はIOM亜群に属し、LuCa7抗体は[1lIG
、亜群に属する。
本発明のモノクローナル抗体は例え(5次のようにして
製造することができる。即ち、ヒトIh1i癌細胞等で
マウス又はラット等の動物を免疫し、免疫された動物か
ら抗体産生細胞を得、これと骨髄腫細胞を融合し、得ら
れた融合細胞を91−」−ン化し、ヒト肺癌に対する抗
体を産生ずる融合細胞を選択し、これを培養し抗体を回
収づる。免疫法、融合法、融合細胞の選択等は公知の通
常の方法によって行なうことができる。
製造することができる。即ち、ヒトIh1i癌細胞等で
マウス又はラット等の動物を免疫し、免疫された動物か
ら抗体産生細胞を得、これと骨髄腫細胞を融合し、得ら
れた融合細胞を91−」−ン化し、ヒト肺癌に対する抗
体を産生ずる融合細胞を選択し、これを培養し抗体を回
収づる。免疫法、融合法、融合細胞の選択等は公知の通
常の方法によって行なうことができる。
更に詳しくは、例えば次のようにして本発明のモノクロ
ーナル抗体を製造することができる。
ーナル抗体を製造することができる。
先ず、マウスを肺癌細胞で免疫する。免疫する動物はマ
ウスに限らず、ラット等のネズミ科の動物又はその他の
動物を使用してもよいが、通常はマウスを用いるのが好
ましい。又、肺癌細胞の代りにその小モジネート又はそ
れから採取された抗原を用いてもよい。例えばBAL、
B/cマウスに肺癌細胞又はそのホモジネート又はそれ
から採取された抗原を数日〜数週間おきに数回接種する
。
ウスに限らず、ラット等のネズミ科の動物又はその他の
動物を使用してもよいが、通常はマウスを用いるのが好
ましい。又、肺癌細胞の代りにその小モジネート又はそ
れから採取された抗原を用いてもよい。例えばBAL、
B/cマウスに肺癌細胞又はそのホモジネート又はそれ
から採取された抗原を数日〜数週間おきに数回接種する
。
接種量は11!!!当り1回につき10 〜10 個の
細胞を使うのが好ましい。その後マウスより稗臓を摘出
し、遠心分離により抗体産生細胞を得る。この細胞は増
殖していく能力を持たないのぐ、自己増殖能力を有づる
細胞と融合さゼる。自己増殖能力を有する細胞としては
骨髄腫細胞が特に好ましい。
細胞を使うのが好ましい。その後マウスより稗臓を摘出
し、遠心分離により抗体産生細胞を得る。この細胞は増
殖していく能力を持たないのぐ、自己増殖能力を有づる
細胞と融合さゼる。自己増殖能力を有する細胞としては
骨髄腫細胞が特に好ましい。
骨髄腫細胞としては、同種の動物のものを用いるのが好
ましい。又、骨髄腫細胞としては、抗体を産生じないも
のを選択するのが好ましい。抗体産生細胞と骨髄腫細胞
をポリエチレングリコール等の細胞融合剤と混合し、細
胞融合を行なう。抗体産生細胞と骨髄腫細胞の使用割合
は、細胞数比で2:1〜10:1とするのが好ましい。
ましい。又、骨髄腫細胞としては、抗体を産生じないも
のを選択するのが好ましい。抗体産生細胞と骨髄腫細胞
をポリエチレングリコール等の細胞融合剤と混合し、細
胞融合を行なう。抗体産生細胞と骨髄腫細胞の使用割合
は、細胞数比で2:1〜10:1とするのが好ましい。
得られた融合細胞は限界希釈法により分離し、分離した
融合細胞は増殖させたのら、各穴(ウェル)において産
生される。抗体は公知の方法、例えば螢光抗体法又は酵
素抗体法等により、各種細胞組織等と反応さけ、その結
果から所望の抗体を産生Jるハイブリドーマを選択する
。選択したハイブリドーマをin VitrO培養法又
(よ in vivo移植法により増殖させ抗体を得る
。in vitro培養法としCは、例えば次のように
行なうことができる。即ち、ハイブリドーマを適当な培
養液(例えば完全RPMI培地)で増殖限界になるまで
培養し、その培養上清を回収する。上清中に分泌された
七ツクLl−ノ・ル抗体は一般には精製しないで用いら
れるが、例えば以下の方法によりI(IG分画、1(I
M分画等にしても使用できる。即ち、培養上清を40%
飽和硫安で沈澱させた後、pH7,8の20mMリン酸
!!J衝液で平衡化したジエチルアミノエヂルセルロー
ス力ラム又はセファデックス0200ノコラムを通過さ
せ不純物を除去して用いる。
融合細胞は増殖させたのら、各穴(ウェル)において産
生される。抗体は公知の方法、例えば螢光抗体法又は酵
素抗体法等により、各種細胞組織等と反応さけ、その結
果から所望の抗体を産生Jるハイブリドーマを選択する
。選択したハイブリドーマをin VitrO培養法又
(よ in vivo移植法により増殖させ抗体を得る
。in vitro培養法としCは、例えば次のように
行なうことができる。即ち、ハイブリドーマを適当な培
養液(例えば完全RPMI培地)で増殖限界になるまで
培養し、その培養上清を回収する。上清中に分泌された
七ツクLl−ノ・ル抗体は一般には精製しないで用いら
れるが、例えば以下の方法によりI(IG分画、1(I
M分画等にしても使用できる。即ち、培養上清を40%
飽和硫安で沈澱させた後、pH7,8の20mMリン酸
!!J衝液で平衡化したジエチルアミノエヂルセルロー
ス力ラム又はセファデックス0200ノコラムを通過さ
せ不純物を除去して用いる。
又、 目+ vivo移植法としては、例えば次のにう
に行なうことができる。即ち、生体内、例えばヌードマ
ウス腹腔内にハイブリドーマを注入し、ヌードマウス体
内で腫瘍として生育させ、メートマウス血清あるいは腹
水から抗体を回収する。更に詳しくは、ハイブリドーマ
を移植するBALB/Cマウスにあらかじめ(5〜10
日前) 2,6,10.14−1トラメヂルペンタデカ
ンを腹腔内に0.57注射しく゛おき、次にハイブリド
ーマ5×10 〜107個を腹腔内に移植する。移植さ
れたマウスを適当な時間飼育づると、腹腔内にハイブリ
ドーマの腫瘍が形成され、腹部が肥大してくる。この結
果′、腹水及び血清中に高濃度のモノクローナル抗体が
生成され、それらを採取する。この腹水及び血清中には
目的のモノクローナル抗体以外に、マウス自身に由来す
る多クローン性抗体が含まれているが、それらはヒトの
組織とは反応しないために、1:Jに分離しないC゛用
いられる。又、in vttroj6養法の場合と同様
に、in vivo移植法においてもlX10分画、+
<JM分画等にして使用リ−ることもできる。
に行なうことができる。即ち、生体内、例えばヌードマ
ウス腹腔内にハイブリドーマを注入し、ヌードマウス体
内で腫瘍として生育させ、メートマウス血清あるいは腹
水から抗体を回収する。更に詳しくは、ハイブリドーマ
を移植するBALB/Cマウスにあらかじめ(5〜10
日前) 2,6,10.14−1トラメヂルペンタデカ
ンを腹腔内に0.57注射しく゛おき、次にハイブリド
ーマ5×10 〜107個を腹腔内に移植する。移植さ
れたマウスを適当な時間飼育づると、腹腔内にハイブリ
ドーマの腫瘍が形成され、腹部が肥大してくる。この結
果′、腹水及び血清中に高濃度のモノクローナル抗体が
生成され、それらを採取する。この腹水及び血清中には
目的のモノクローナル抗体以外に、マウス自身に由来す
る多クローン性抗体が含まれているが、それらはヒトの
組織とは反応しないために、1:Jに分離しないC゛用
いられる。又、in vttroj6養法の場合と同様
に、in vivo移植法においてもlX10分画、+
<JM分画等にして使用リ−ることもできる。
本発明のモノクローナル抗体を作るために免疫原として
使用する細胞としては、1IIb扁平上皮癌等の肺癌細
胞が使用できるが、肺癌#l胞は特定の株のものに限定
されす”、ll+癌11抱であればいずれも使用可能で
ある。なお、七ツク〔1−ナル抗体しUCa3及びLu
Ca4を作る場合は、肺扁平上皮癌細胞株が使用ぎれる
。
使用する細胞としては、1IIb扁平上皮癌等の肺癌細
胞が使用できるが、肺癌#l胞は特定の株のものに限定
されす”、ll+癌11抱であればいずれも使用可能で
ある。なお、七ツク〔1−ナル抗体しUCa3及びLu
Ca4を作る場合は、肺扁平上皮癌細胞株が使用ぎれる
。
本発明のモノクローナル抗体を作るために用いる抗体産
生細胞はB細胞であり、B細胞は体内を循環するが牌臓
等に蓄積するので婢臓を摘出して使用するのが好ましい
が、必ずしも碑臓でなくてもよく、B細胞が多く存在す
る部分を使用すればよい。
生細胞はB細胞であり、B細胞は体内を循環するが牌臓
等に蓄積するので婢臓を摘出して使用するのが好ましい
が、必ずしも碑臓でなくてもよく、B細胞が多く存在す
る部分を使用すればよい。
本発明のモノクローナル抗体は、肺癌の診断薬として使
用することができ、又、本発明の七ツクローナル抗体と
抗癌剤を組合Uてミリノイル療法に用いることができる
。
用することができ、又、本発明の七ツクローナル抗体と
抗癌剤を組合Uてミリノイル療法に用いることができる
。
X1(MJ 1
1)免疫
8週令のII Bへ1B/cマウスを9×10 個の肺
扁平」−皮癌山来の細胞株(以下SK−MES 1とい
う)で皮下に免疫し、その後2週間の間隔で2回腹腔内
に 1.4X 10 個の細胞を注入した。
扁平」−皮癌山来の細胞株(以下SK−MES 1とい
う)で皮下に免疫し、その後2週間の間隔で2回腹腔内
に 1.4X 10 個の細胞を注入した。
2)細胞融合
最終免疫より3日後に牌臓を取り出し、ステンレスメツ
シュを通ずことにより細胞懸濁液を作製した。この2,
6x 10 個の牌細胞とg、ox io 個の8アザ
グアニン耐性骨髄腫細胞P3−NSr−A(14/1
(NSI)を混合し、遠沈後沈渣に 1−の45%ポリ
エチレングリコール(平均分子ff16000)を加え
、2分間ゆるやかに撹拌した。洗浄後、細胞混合液を1
0%牛脂児血清を含むRPMIja地(完全RPMI培
地)に懸濁し、96穴マイクロ培養プレートに1穴当り
10 個の割合でo、i#!i!ずつまいた。24時間
後、ヒボキサンチン 100μM、アミノプテリン0.
4μM、チミジン16μMを含む完全RPMI培地(1
」A T培地)を0.1d加えた。
シュを通ずことにより細胞懸濁液を作製した。この2,
6x 10 個の牌細胞とg、ox io 個の8アザ
グアニン耐性骨髄腫細胞P3−NSr−A(14/1
(NSI)を混合し、遠沈後沈渣に 1−の45%ポリ
エチレングリコール(平均分子ff16000)を加え
、2分間ゆるやかに撹拌した。洗浄後、細胞混合液を1
0%牛脂児血清を含むRPMIja地(完全RPMI培
地)に懸濁し、96穴マイクロ培養プレートに1穴当り
10 個の割合でo、i#!i!ずつまいた。24時間
後、ヒボキサンチン 100μM、アミノプテリン0.
4μM、チミジン16μMを含む完全RPMI培地(1
」A T培地)を0.1d加えた。
JR養開始後20目、 3日目、5し1目、 7日日、
10日口に培養上清0.1/d、を捨C1+1 A
T J1’i地0.1蔵を加えた。12日後に全Cの穴
にハイブリドーマを増殖するのが観察された。
10日口に培養上清0.1/d、を捨C1+1 A
T J1’i地0.1蔵を加えた。12日後に全Cの穴
にハイブリドーマを増殖するのが観察された。
3)ハイブリドーマの選択
SK−MESI細胞に対して抗体を産生じているハイブ
リドーマを酵素抗体法により選択した。
リドーマを酵素抗体法により選択した。
酵素抗体法は以下の如く行なった。
SK−MESI細胞を96穴マイクロ培養プレートに増
殖限界に達するまで培養し、0.25%グルタルアルデ
ヒドで5〜7分間固定し、5回洗浄した。
殖限界に達するまで培養し、0.25%グルタルアルデ
ヒドで5〜7分間固定し、5回洗浄した。
ハイブリドーマの培養上清0.1−を加え、室温で1時
間反応さゼた。5回洗浄した後、第2抗体どし”U30
dの西洋ワサビペルオキシダーゼ標識A7ギ抗マウス免
疫グロブリンを加え、1時間反応さけた。6〜7回洗っ
た後、1.1%過酸化水素水と150埒/mのアジノー
ビス(3−エチルベンゾチアゾリン−6−6−スルフォ
ン酸)(八〇TS)を含む50mMクエン酸緩衝液を1
00鱈加え、10分間室温で発色させた。停止液とし−
U10%シュウ酸を50成加え、405nIllの吸光
度をマイクロプレート用の分光光度晶1により測定し、
0.02以上吸光度のあるハイブリドーマを選択した。
間反応さゼた。5回洗浄した後、第2抗体どし”U30
dの西洋ワサビペルオキシダーゼ標識A7ギ抗マウス免
疫グロブリンを加え、1時間反応さけた。6〜7回洗っ
た後、1.1%過酸化水素水と150埒/mのアジノー
ビス(3−エチルベンゾチアゾリン−6−6−スルフォ
ン酸)(八〇TS)を含む50mMクエン酸緩衝液を1
00鱈加え、10分間室温で発色させた。停止液とし−
U10%シュウ酸を50成加え、405nIllの吸光
度をマイクロプレート用の分光光度晶1により測定し、
0.02以上吸光度のあるハイブリドーマを選択した。
選択されたハイブリドーマはあらかじめBALB/Cマ
ウスの胸腺細胞(フィーダー細胞)をまかれた24穴培
養プレートに移され、100μMヒボキザンチンと16
μMチミジンを含む完全RPMI培地(]」T培地)で
培養した。増殖限界に達した後、再び酵素抗体法により
SK−MES1111胞に対して抗体産生を行なってい
るハイブリドーマを選んだ。
ウスの胸腺細胞(フィーダー細胞)をまかれた24穴培
養プレートに移され、100μMヒボキザンチンと16
μMチミジンを含む完全RPMI培地(]」T培地)で
培養した。増殖限界に達した後、再び酵素抗体法により
SK−MES1111胞に対して抗体産生を行なってい
るハイブリドーマを選んだ。
次に、選択されたハイブリトーンを限界希釈法によりク
ローニングした。即I〕、細胞を50個/mflあるい
は10個/dに希釈し、あらかじめフィーダー細胞をま
かれた9G穴マイク1」J8養プレー1−に0.1dず
つ分注し、]−11−培地により 2週間培養した。1
穴に 1個のハイブリトーマコ1ニに一が形成された場
合をクローンとしで取り出した。酵素抗体法によりSK
−MES1細胞に対し゛(反応し、正常ヒト線紐刀細胞
に対して反応しない1iL(Aを分泌しているハイブリ
ドーマクローンを選択した。
ローニングした。即I〕、細胞を50個/mflあるい
は10個/dに希釈し、あらかじめフィーダー細胞をま
かれた9G穴マイク1」J8養プレー1−に0.1dず
つ分注し、]−11−培地により 2週間培養した。1
穴に 1個のハイブリトーマコ1ニに一が形成された場
合をクローンとしで取り出した。酵素抗体法によりSK
−MES1細胞に対し゛(反応し、正常ヒト線紐刀細胞
に対して反応しない1iL(Aを分泌しているハイブリ
ドーマクローンを選択した。
更に、これらのクローンのうら、ヒト肺扁平上皮癌組織
にのみ反応づるクローンを凍結切片の免疫パーAキシタ
ーゼ染色により選択した。つまり、ヒトの肺・癌、その
他の臓器癌及び正常組織を手術材れによりi&、その4
JJM凍結切片を作製した。アセトン固定後、ハイブリ
ドーマクローンの培養上清を加え、室温30分反応させ
た。よく洗った後、ビオチン標識抗マウスIgG抗体(
γ鎖、λ鎖。
にのみ反応づるクローンを凍結切片の免疫パーAキシタ
ーゼ染色により選択した。つまり、ヒトの肺・癌、その
他の臓器癌及び正常組織を手術材れによりi&、その4
JJM凍結切片を作製した。アセトン固定後、ハイブリ
ドーマクローンの培養上清を加え、室温30分反応させ
た。よく洗った後、ビオチン標識抗マウスIgG抗体(
γ鎖、λ鎖。
に鎖と反応する)と室温30分反応させた。更に洗浄後
、アビジンとビオチン標識西洋ワザビバーオ手シダーゼ
を加え室温1時間反応させ、よく洗ったtm質として0
.5IIIg/IR1のジアミノベンチジン(!: 0
、01 % l−120,ヲ含む50111M トリ
ス−塩酸緩衝液(l1l−37,0)を加え発色させた
。
、アビジンとビオチン標識西洋ワザビバーオ手シダーゼ
を加え室温1時間反応させ、よく洗ったtm質として0
.5IIIg/IR1のジアミノベンチジン(!: 0
、01 % l−120,ヲ含む50111M トリ
ス−塩酸緩衝液(l1l−37,0)を加え発色させた
。
このようにして、ヒト肺扁平上皮癌とは反応するが、肺
腺癌とは反応せず、又、腺癌型の大腸癌胃癌、直腸癌、
甲状腺癌、乳癌、胆管癌、唾液腺癌及び肺(帥胞、気管
支粘膜)、甲状腺、腎、肝。
腺癌とは反応せず、又、腺癌型の大腸癌胃癌、直腸癌、
甲状腺癌、乳癌、胆管癌、唾液腺癌及び肺(帥胞、気管
支粘膜)、甲状腺、腎、肝。
膵、直腸、大腸、胃、牌、脳、末梢血リンパ球の正常組
織と反応しないモノクローナル抗体を産生りるハイブリ
ドーマクローン2つが(りられ、これを1−uCa3’
及び1−uCa4’と名句けた。そして、これらハイブ
リドーマ1−uCa3’及び1uCa4が産生りるモノ
クローナル抗体をそれぞれLuQa3及び1uCa4と
命名した。後述づるように、1uca3は分子822万
と9.5万の2つの抗原と反応するが、1uCa4は分
子量15万の抗原と反応するものである。
織と反応しないモノクローナル抗体を産生りるハイブリ
ドーマクローン2つが(りられ、これを1−uCa3’
及び1−uCa4’と名句けた。そして、これらハイブ
リドーマ1−uCa3’及び1uCa4が産生りるモノ
クローナル抗体をそれぞれLuQa3及び1uCa4と
命名した。後述づるように、1uca3は分子822万
と9.5万の2つの抗原と反応するが、1uCa4は分
子量15万の抗原と反応するものである。
3ンモノクロー)“ル抗体の作製
(a) in vitro培養法
10 個/dのハイブリドーマを培養液(完全RPMI
培地)で増殖限界(2X106個/Irdl)になるま
で培養し、その培養上清を回収した。上清中に分泌され
たモノクローナル抗体は精製しないで用いた。(但し、
以下の方法によりEgG分画にして使用することもでき
る。即ち、培養上清を40%飽和硫安で沈澱させた後、
pH7,8の20mMリン酸緩衝液で平衡化したジエチ
ルアミノエチルセルロースカラムを通過させ不純物を除
去して用いる。ン (b) in vivo移植法 ハイノリドーマを移植するBALB/cマウスにあらか
じめ(5〜10日前) 2,6,10゜14−テトラメ
チルペンタデカンを腹腔中に0.5m注射しておく。次
にハイブリドーマ5×10 個を腹腔内に移植づる。移
植されたマウスを3週間餌育すると、腹腔内にハイブリ
ドーマの腫瘍が形成され、腹部が肥大しでくる。この結
果、腹水及び血清中に^濃庶のモノクローナル抗体が生
成され、それらを採取した。この腹水及び血清中には目
的モノクロ−プル抗体以外に、マウス自身に由来覆る多
クローン性抗体が含まれCいるが、それらはヒトの組織
とは反応しないために、特に分離しないで用いた。
培地)で増殖限界(2X106個/Irdl)になるま
で培養し、その培養上清を回収した。上清中に分泌され
たモノクローナル抗体は精製しないで用いた。(但し、
以下の方法によりEgG分画にして使用することもでき
る。即ち、培養上清を40%飽和硫安で沈澱させた後、
pH7,8の20mMリン酸緩衝液で平衡化したジエチ
ルアミノエチルセルロースカラムを通過させ不純物を除
去して用いる。ン (b) in vivo移植法 ハイノリドーマを移植するBALB/cマウスにあらか
じめ(5〜10日前) 2,6,10゜14−テトラメ
チルペンタデカンを腹腔中に0.5m注射しておく。次
にハイブリドーマ5×10 個を腹腔内に移植づる。移
植されたマウスを3週間餌育すると、腹腔内にハイブリ
ドーマの腫瘍が形成され、腹部が肥大しでくる。この結
果、腹水及び血清中に^濃庶のモノクローナル抗体が生
成され、それらを採取した。この腹水及び血清中には目
的モノクロ−プル抗体以外に、マウス自身に由来覆る多
クローン性抗体が含まれCいるが、それらはヒトの組織
とは反応しないために、特に分離しないで用いた。
(また、4)の(a)に示した方法により1(IG分画
にして使用できる。) 5)モノクローナル抗体LuCa3及び1uCa4の特
性 (a)肺癌組織との反応性 肺癌手術により得られた癌組織の凍結切片18例との反
応性を免疫パーΔ4−シダーゼ染色により調べた。第1
表に示ずように、LuCa3抗体は肺扁平上皮1¥J8
例中7例と1uCa4抗体は8例中6例と反応した。し
かし、これらの抗体は肺腺癌や小細胞癌とは全く反応し
なかっに0また、扁平上皮癌と腺癌の混合型である腺扁
平上皮癌では扁平上皮癌の部分とのみ反応した。
にして使用できる。) 5)モノクローナル抗体LuCa3及び1uCa4の特
性 (a)肺癌組織との反応性 肺癌手術により得られた癌組織の凍結切片18例との反
応性を免疫パーΔ4−シダーゼ染色により調べた。第1
表に示ずように、LuCa3抗体は肺扁平上皮1¥J8
例中7例と1uCa4抗体は8例中6例と反応した。し
かし、これらの抗体は肺腺癌や小細胞癌とは全く反応し
なかっに0また、扁平上皮癌と腺癌の混合型である腺扁
平上皮癌では扁平上皮癌の部分とのみ反応した。
(b)他の癌組織との反応性
1uCa3及びLuCa4と線以外の種々の臓器の癌組
織(10例)との反応性を凍結切片の免疫パーオキシダ
ー1染色により調べた。m2表に示すように1−uca
3抗体は扁平上皮癌組織である食道癌及び苦痛とわずか
に反応するのみで、他の癌とは全く反応しなかった。L
uCa4抗体は調べた全ての癌と反応しなかった。
織(10例)との反応性を凍結切片の免疫パーオキシダ
ー1染色により調べた。m2表に示すように1−uca
3抗体は扁平上皮癌組織である食道癌及び苦痛とわずか
に反応するのみで、他の癌とは全く反応しなかった。L
uCa4抗体は調べた全ての癌と反応しなかった。
(c)正常組織との反応性
1−uCa3及び1−uCa4抗体と様々の正常組織(
15例)の凍結切片との反応性を免疫パーAキシダーゼ
染色により調べた。第3表に示すように、LuCa3及
び1uCa4抗体は正常肺や多くの正常組織とは反応し
ないが、正常皮膚2食道、子富頚部の扁平上皮組織に対
して、弱陽性を示すことが判つIこ 。
15例)の凍結切片との反応性を免疫パーAキシダーゼ
染色により調べた。第3表に示すように、LuCa3及
び1uCa4抗体は正常肺や多くの正常組織とは反応し
ないが、正常皮膚2食道、子富頚部の扁平上皮組織に対
して、弱陽性を示すことが判つIこ 。
(d)モノクローナル抗体LuCa3及び1−uCa4
と反応する可溶化抗原 1−uCa3及びLuCa4に反応する抗原を’946
S−メヂオニン或いは+*g Iにより細胞表面タン
パク質を標識して調べた。 S−メチオニンによる標識
はSK−MISI細胞をah s−メチオニン0.51
11キユリーとともにメチオニン不含イーグル培地(1
0%牛脂児血清を含む)で20時間培養した。0.02
%EDTAで細胞をはがし、よく洗った。 ■による標
識はE D T AではがしたSK−MES1細胞をよ
く洗った後、0.5mキュリー(7)”51 ト−y’
y トム−1r*シ’J−セ0.1+11(l及び0.
003%H2O2を加え、30℃4分間、更に室温10
分間反応させ、よく洗つl〔。
と反応する可溶化抗原 1−uCa3及びLuCa4に反応する抗原を’946
S−メヂオニン或いは+*g Iにより細胞表面タン
パク質を標識して調べた。 S−メチオニンによる標識
はSK−MISI細胞をah s−メチオニン0.51
11キユリーとともにメチオニン不含イーグル培地(1
0%牛脂児血清を含む)で20時間培養した。0.02
%EDTAで細胞をはがし、よく洗った。 ■による標
識はE D T AではがしたSK−MES1細胞をよ
く洗った後、0.5mキュリー(7)”51 ト−y’
y トム−1r*シ’J−セ0.1+11(l及び0.
003%H2O2を加え、30℃4分間、更に室温10
分間反応させ、よく洗つl〔。
細胞沈渣に0.5mの0.5%ノニデートP−40を加
え、氷上で10分間放置することにより細胞膜を可溶化
した。この混合液を27.0OOG、 20分間遠心し
、上清を集めた。
え、氷上で10分間放置することにより細胞膜を可溶化
した。この混合液を27.0OOG、 20分間遠心し
、上清を集めた。
酉S或いは125Iで標識された可溶化タンパク質にL
uCa3或いは1uCa4の腹水を加え氷上で1時間反
応させ、その後ヤギ抗マウスIoG抗体を加え、更に1
時間反応させた。対照群としてlu Ca3. Lu
Ca4の代わりに正常マウス血清より得られたIgG1
を用いた。この混合液にスタフィロコッカスアウレウス
の死菌を加え、30分間反応後よく洗い、菌に結合した
抗原をソデイウムードデシルースルフオネートーポリア
クリルアミドゲル電気泳動で還元条件下で分析した。
uCa3或いは1uCa4の腹水を加え氷上で1時間反
応させ、その後ヤギ抗マウスIoG抗体を加え、更に1
時間反応させた。対照群としてlu Ca3. Lu
Ca4の代わりに正常マウス血清より得られたIgG1
を用いた。この混合液にスタフィロコッカスアウレウス
の死菌を加え、30分間反応後よく洗い、菌に結合した
抗原をソデイウムードデシルースルフオネートーポリア
クリルアミドゲル電気泳動で還元条件下で分析した。
1uCa3に反応する抗原は Iで標識されず、 S−
メチオニンにより標識され、分子団22万と9.5万の
2つのタンパク分子である。LLICa4に反応づる抗
原は Iにより標識され15万のタンパク分子であるこ
とがわかった。このことは1−uCa3と1−uCa4
がSK−MES1細胞上の異なるタンパク抗原と反応す
ることを示している。
メチオニンにより標識され、分子団22万と9.5万の
2つのタンパク分子である。LLICa4に反応づる抗
原は Iにより標識され15万のタンパク分子であるこ
とがわかった。このことは1−uCa3と1−uCa4
がSK−MES1細胞上の異なるタンパク抗原と反応す
ることを示している。
6)モノクローナル抗体による肺癌組織型の診断法
5)で示したように1uCa3及びLUCa4抗体は肺
扁平上皮癌と強く反応づるモノクローナル抗体である。
扁平上皮癌と強く反応づるモノクローナル抗体である。
このことは肺癌の組織型の診断にこれら2つのモノクロ
ーナル抗体が応用できることを示している。
ーナル抗体が応用できることを示している。
正常の扁平上皮組織にわずかに交叉反応を示1が、肺癌
の組織診断にはほとんど障害とならない。具体的な診断
法としては凍結切片の免疫パーAキシダーL染色と真水
中の癌細胞の免疫螢光染色の2つがある。
の組織診断にはほとんど障害とならない。具体的な診断
法としては凍結切片の免疫パーAキシダーL染色と真水
中の癌細胞の免疫螢光染色の2つがある。
(a)凍結切片による診断法
肺癌或いはリンパ節転移組織が外科的手術により切除さ
れると、それをできるだけ早く凍結する。凍結は組織を
包埋剤に入れ、ドライアイスで冷7il+されたイソペ
ンクンの中で瞬時に行なう。こうしC凍結された組織は
一80℃で少なくとも1年は保存可能である。組織は凍
結切片(4岬)にされ、アセトンで一20℃、10分間
固定する。順1乾の後、非特異的染色を防ぐためにウマ
血清で20分室温処理する。5埒/dの1−uCa3或
いは[uCa4抗体を加え、室温30分反応さける。よ
く洗った後、3)で述べた免疫パー71キシダーゼ法で
染色する。第1表に承りように、肺扁平十皮癌は90%
以上の確率で1uCa3或いは1−uCa4のどちらか
に反応7る。一方、他の組織型の肺癌で1uCa3或い
は1uCa4のどちらかに染色される確率は0%である
。従つで、90%以上のMC率で扁平上皮癌を判定でき
る。
れると、それをできるだけ早く凍結する。凍結は組織を
包埋剤に入れ、ドライアイスで冷7il+されたイソペ
ンクンの中で瞬時に行なう。こうしC凍結された組織は
一80℃で少なくとも1年は保存可能である。組織は凍
結切片(4岬)にされ、アセトンで一20℃、10分間
固定する。順1乾の後、非特異的染色を防ぐためにウマ
血清で20分室温処理する。5埒/dの1−uCa3或
いは[uCa4抗体を加え、室温30分反応さける。よ
く洗った後、3)で述べた免疫パー71キシダーゼ法で
染色する。第1表に承りように、肺扁平十皮癌は90%
以上の確率で1uCa3或いは1−uCa4のどちらか
に反応7る。一方、他の組織型の肺癌で1uCa3或い
は1uCa4のどちらかに染色される確率は0%である
。従つで、90%以上のMC率で扁平上皮癌を判定でき
る。
(b)真水による診断法
忠当より真水を採取し、抗凝固剤を加える。マクロファ
ージは非特異的に免役グロブリンを結合するために除去
づることが望ましい。真水にシリカを加え、37℃で・
1時間反応させる。この混合液の下にフィー1−ルーハ
イバーク(比重1.077i: 0.001)を重層し
、400Gで30分速心りる。中間細胞層を集め、よく
洗った後、間接免疫螢光法で染色する。即ち真水細胞5
×10 個に0.5Inflの1uCa3或いは1uC
a4抗体(5巧/d)を加え、氷上で1時間反応さける
。
ージは非特異的に免役グロブリンを結合するために除去
づることが望ましい。真水にシリカを加え、37℃で・
1時間反応させる。この混合液の下にフィー1−ルーハ
イバーク(比重1.077i: 0.001)を重層し
、400Gで30分速心りる。中間細胞層を集め、よく
洗った後、間接免疫螢光法で染色する。即ち真水細胞5
×10 個に0.5Inflの1uCa3或いは1uC
a4抗体(5巧/d)を加え、氷上で1時間反応さける
。
よく洗った後、ノルAレッセインイソヂAシアネート標
識iアギ抗マウスIgGを加え、更に氷上で30分間反
応させる。よく洗った後、螢光顕微鏡で観察する。診断
例を第4表に示す。細胞診クラスVの腺癌及び小細胞癌
とはLU Ca3. LLI Ca4とも一例も反応し
Cいない。一方、細胞診クラスVの扁平上皮癌−例と反
応し、クラス1の扁平上皮癌とは反応し−Cいない。こ
のようにLLICa3及び1−uCa4は真水において
も肝癌組織と全く同様の特異性を示し、真水による組織
型の診断に有効であることが証明されlこ。
識iアギ抗マウスIgGを加え、更に氷上で30分間反
応させる。よく洗った後、螢光顕微鏡で観察する。診断
例を第4表に示す。細胞診クラスVの腺癌及び小細胞癌
とはLU Ca3. LLI Ca4とも一例も反応し
Cいない。一方、細胞診クラスVの扁平上皮癌−例と反
応し、クラス1の扁平上皮癌とは反応し−Cいない。こ
のようにLLICa3及び1−uCa4は真水において
も肝癌組織と全く同様の特異性を示し、真水による組織
型の診断に有効であることが証明されlこ。
真水の螢光染色を定量化Jるためにセルソーターによる
測定が試みられた。セルソーターはFAC8420(ベ
タ1−ンデツキンソン社)が用いられた。第1図は細胞
診クラス■の扁平上皮癌を1−uCa3及びLIJCa
4で染色したものである。対照群(非免疫マウスfil
l G)に比してイj意に高い螢光強度が観察された。
測定が試みられた。セルソーターはFAC8420(ベ
タ1−ンデツキンソン社)が用いられた。第1図は細胞
診クラス■の扁平上皮癌を1−uCa3及びLIJCa
4で染色したものである。対照群(非免疫マウスfil
l G)に比してイj意に高い螢光強度が観察された。
即ち、第1図はヒルソーターを用いた
1uCa3及びl−u Ca4ニJ、る1性胸水(扁平
上皮癌)の診断結果を示したものであり、contro
lとし′では正常マウスIgGを用いた。真水は思考番
号UPL7(第4表)、扁平上皮癌、クラスVを用いた
。第1図(a)は1uCa3による螢光染色、第1図(
b)は1uCa4による螢光染色結果である。
上皮癌)の診断結果を示したものであり、contro
lとし′では正常マウスIgGを用いた。真水は思考番
号UPL7(第4表)、扁平上皮癌、クラスVを用いた
。第1図(a)は1uCa3による螢光染色、第1図(
b)は1uCa4による螢光染色結果である。
友1」[と
1)免疫
8週令の雌BALB/cマウスに4×10 個のヒト肺
腺癌由来の細胞株(以下F erriansという)を
皮下に注入し、2週間後2×10 個、更に 1り月後
1,5X 10 個の細胞が腹腔内に注入された。
腺癌由来の細胞株(以下F erriansという)を
皮下に注入し、2週間後2×10 個、更に 1り月後
1,5X 10 個の細胞が腹腔内に注入された。
2)細胞融合
実施例1において、SK−MESlで免疫された2、6
X 10”個の牌細胞の代わりLL F errlan
s テ免疫された1、5x io 個の牌細胞を用い、
8.0×7 10 個のNSIの代わりに5×10 個のNSIを用
いた以外は実施例1と全く同様にして細胞融合を行なっ
た。実施例1の場合と同様に12日後に全ての穴にハイ
ブリドーマが増殖するのが観察されIこ 。
X 10”個の牌細胞の代わりLL F errlan
s テ免疫された1、5x io 個の牌細胞を用い、
8.0×7 10 個のNSIの代わりに5×10 個のNSIを用
いた以外は実施例1と全く同様にして細胞融合を行なっ
た。実施例1の場合と同様に12日後に全ての穴にハイ
ブリドーマが増殖するのが観察されIこ 。
3)ハイブリドーマの選択
「errialls細胞に対して抗体を産生じているハ
イブリドーマの選択を実施例1の場合と全く同様にして
行なった。
イブリドーマの選択を実施例1の場合と全く同様にして
行なった。
次に実施例1と全く同様にして、選択されたハイブリド
ーマを限界希釈法によりクローニングした。そして、酵
素抗体法によりF errians細胞に対して反応し
、正常ヒトフィブロブラストに対して反応しない抗体を
分泌しているハイブリドーマクローンを選択した。
ーマを限界希釈法によりクローニングした。そして、酵
素抗体法によりF errians細胞に対して反応し
、正常ヒトフィブロブラストに対して反応しない抗体を
分泌しているハイブリドーマクローンを選択した。
更に、これらのクローンのうちヒト肺癌組織及び他のヒ
ト癌組織と反応し、正常組織とはと/υど反応しないク
ローンを実施例1と同様にして選択した。
ト癌組織と反応し、正常組織とはと/υど反応しないク
ローンを実施例1と同様にして選択した。
このようにして、ヒト肺扁平上皮癌、ヒト肺腺癌、ヒト
肺小細胞癌、腺癌型の大胆癌、胃癌、直賜癌、乳癌、胆
管癌、唾液腺癌及び扁平上皮癌型の苦痛と反応し、肺胞
、気管支粘膜、甲状腺、腎。
肺小細胞癌、腺癌型の大胆癌、胃癌、直賜癌、乳癌、胆
管癌、唾液腺癌及び扁平上皮癌型の苦痛と反応し、肺胞
、気管支粘膜、甲状腺、腎。
肝、胃、脳の正常組織と反応しないモノクローナル抗体
を産生ずるバイブリド−マク[]−ンL0CaM<得ら
れた。このハイブリドーマ1−uCa6が産生するモノ
クロ−プル抗体を1−uCa6と命名した。
を産生ずるバイブリド−マク[]−ンL0CaM<得ら
れた。このハイブリドーマ1−uCa6が産生するモノ
クロ−プル抗体を1−uCa6と命名した。
又、ヒト肺扁平上皮癌どは反応せず、ヒ1−肺腺癌と反
応し、肺胞、気管支粘膜、甲状腺、腎、皮膚、肝、膵、
直腸、大腸、胃、脳、牌、子宮頚部の正常組織と反応し
ないモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマクロ
ーン1−uCa7が得られ、このハイブリドーマが産生
Jるモノクローナル抗体をLuCa7と名付【プた。
応し、肺胞、気管支粘膜、甲状腺、腎、皮膚、肝、膵、
直腸、大腸、胃、脳、牌、子宮頚部の正常組織と反応し
ないモノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマクロ
ーン1−uCa7が得られ、このハイブリドーマが産生
Jるモノクローナル抗体をLuCa7と名付【プた。
4)モノクローナル抗体の作製
in VitrO培養及び in vivo移植ににる
増殖と抗体産生を実施例1と同様にして行なった。(尚
、in VitrO培養において、1uCa6抗体(1
(JM)の場合は、培養上清を40%飽和硫安で沈澱さ
Uた後セファデックス0200カラムを通過さu1最初
に流出りる分画を回収して用いることもできる。)こう
し゛(得られたモノクローナル抗体1−uCa6はIu
MdkJ!Yに、1−uCa7はI(IG、亜群に属り
る。
増殖と抗体産生を実施例1と同様にして行なった。(尚
、in VitrO培養において、1uCa6抗体(1
(JM)の場合は、培養上清を40%飽和硫安で沈澱さ
Uた後セファデックス0200カラムを通過さu1最初
に流出りる分画を回収して用いることもできる。)こう
し゛(得られたモノクローナル抗体1−uCa6はIu
MdkJ!Yに、1−uCa7はI(IG、亜群に属り
る。
5)モノクローナル抗体の特性
(a)肺癌組織との反応性
1uCa6抗体は肺癌組織18例中16例と反応し、組
織型に対す−る特異性は見出せなかった。LuCa7は
肺腺癌8例中4例と反応したが、肺扁平J−皮癌及び小
細胞癌とは反応しなかった。
織型に対す−る特異性は見出せなかった。LuCa7は
肺腺癌8例中4例と反応したが、肺扁平J−皮癌及び小
細胞癌とは反応しなかった。
(b)伯の癌組織との反応性
LuCa6抗体は甲状腺癌を除く調べた全ての癌と反応
している。又、LUCa7抗体は腺癌である胃癌、乳癌
、唾液腺癌と反応しているが他の癌とは反応していない
。
している。又、LUCa7抗体は腺癌である胃癌、乳癌
、唾液腺癌と反応しているが他の癌とは反応していない
。
(C)正常組織との反応性
1uCa6抗体は、直腸及び大腸の粘膜上皮に対して微
陽性、子宮頚部及び食道の扁平上皮組織に対して陽性を
示した。更に、LLICa7抗体は食道の扁平上皮に対
してのみ弱陽性を示した。
陽性、子宮頚部及び食道の扁平上皮組織に対して陽性を
示した。更に、LLICa7抗体は食道の扁平上皮に対
してのみ弱陽性を示した。
6)モノクローナル抗体による肺癌の組織診断法5)で
示しICように1uCa6はほとんどの肺癌組織と、1
uCa7は一部の腺癌と反応するモノクローナル抗体C
゛ある。−プj、これらの抗体は正常肺組織と反応しな
い。
示しICように1uCa6はほとんどの肺癌組織と、1
uCa7は一部の腺癌と反応するモノクローナル抗体C
゛ある。−プj、これらの抗体は正常肺組織と反応しな
い。
このことは肺癌の組織診断にこれらの抗体が応用できる
ことを示している。これらの抗体は、他の正常組織とわ
ずかに反応するが、肺癌の組織診断にはほと/vど障害
にならない。具体的な診断法としては、肺癌組織凍結切
片の免疫パーオキシダーゼ染色と真水中の癌細胞の免疫
螢光染色の2つである。
ことを示している。これらの抗体は、他の正常組織とわ
ずかに反応するが、肺癌の組織診断にはほと/vど障害
にならない。具体的な診断法としては、肺癌組織凍結切
片の免疫パーオキシダーゼ染色と真水中の癌細胞の免疫
螢光染色の2つである。
(a)凍結切片による診断法
肺癌或いはリンパ節転移組織が外科的に切除されると、
それを速かに凍結する。凍結は組織を包埋剤に入れ、ド
ライアイスで冷Mlされたイソペンタンの中で瞬時に行
なう。こうして凍結込れた組織は一80℃で少なくとも
1年は使用可能である。組織は凍結切片(4〜6岬)に
され、アセトンで一20℃、 10分間固定する。風乾
の後、非特異的染色を防ぐために 1%ウマ血清で20
分間室温処理する。5N / mllの1uCa6或い
はLuCa7抗体を加え、室温30分反応さける。よく
洗った後、3)で述べた免疫パーオキシダーゼ法で染色
する。第1表に示すように、肺癌は約90%の確率でl
t+Ca6抗体に染色されるので、得られた肺組織が癌
か否かを決定できる。更に、1uCa7は約50%の肺
腺癌と反応するが、他の組織型で1uCa7によって染
色された組織は1例もない。従って、1qられた肺癌組
織が1uCa7に反応すれば腺鶴と決定でさる。しかし
、逆に1uCa7に染色されない場合には、その組織が
腺癌ではないと結論Jることはできない。
それを速かに凍結する。凍結は組織を包埋剤に入れ、ド
ライアイスで冷Mlされたイソペンタンの中で瞬時に行
なう。こうして凍結込れた組織は一80℃で少なくとも
1年は使用可能である。組織は凍結切片(4〜6岬)に
され、アセトンで一20℃、 10分間固定する。風乾
の後、非特異的染色を防ぐために 1%ウマ血清で20
分間室温処理する。5N / mllの1uCa6或い
はLuCa7抗体を加え、室温30分反応さける。よく
洗った後、3)で述べた免疫パーオキシダーゼ法で染色
する。第1表に示すように、肺癌は約90%の確率でl
t+Ca6抗体に染色されるので、得られた肺組織が癌
か否かを決定できる。更に、1uCa7は約50%の肺
腺癌と反応するが、他の組織型で1uCa7によって染
色された組織は1例もない。従って、1qられた肺癌組
織が1uCa7に反応すれば腺鶴と決定でさる。しかし
、逆に1uCa7に染色されない場合には、その組織が
腺癌ではないと結論Jることはできない。
(b)真水による診断法
患者より真水を採取し、抗凝固剤(3%り上ン酸ソーダ
)を加える。肺マクロファージは非特異的に免疫グロブ
リンを結合するために除去する。真水にシリカ粒子を加
え、37℃で1時間反応さぼる。この混合液の下層にフ
ィコール−ハイバーク(比重1.077±0.001)
を重層し、400Gで30分遠心する。上清を集め、よ
く洗った後、間接免疫螢光法で染色する。即ち真水細胞
5×105個にしuCa6及びLuCa7(5N/d)
をそれぞれ0.5rdの加え、氷上で1時間反応させる
。よく洗った後、フルオレン[インイソチオシアネート
標識ヤギ抗マウスIUGを加え、更に氷上で30分間反
応させる。よく洗った後、螢光顕微鏡で観察ジーる。現
在までの診断例を第4表に示す。
)を加える。肺マクロファージは非特異的に免疫グロブ
リンを結合するために除去する。真水にシリカ粒子を加
え、37℃で1時間反応さぼる。この混合液の下層にフ
ィコール−ハイバーク(比重1.077±0.001)
を重層し、400Gで30分遠心する。上清を集め、よ
く洗った後、間接免疫螢光法で染色する。即ち真水細胞
5×105個にしuCa6及びLuCa7(5N/d)
をそれぞれ0.5rdの加え、氷上で1時間反応させる
。よく洗った後、フルオレン[インイソチオシアネート
標識ヤギ抗マウスIUGを加え、更に氷上で30分間反
応させる。よく洗った後、螢光顕微鏡で観察ジーる。現
在までの診断例を第4表に示す。
1−uCa6は細胞診クラスv7例中4例と反応してい
るが、クラスIとは1例も反応していない。また、Lu
Ca7抗体はクラスVの腺癌5例中3例と反応している
が、クラスVの扁平上皮癌及び小細胞癌とは反応してい
ない。興味深いのは(JPL5 (クラス■)の例であ
る。この患者は真水の形態学的な細胞診によって癌と確
定できなかったにもかかわらず、1uCa6及び1uC
a7により染色された。4ケ月後試験切除により肺腺癌
であることが判明した。
るが、クラスIとは1例も反応していない。また、Lu
Ca7抗体はクラスVの腺癌5例中3例と反応している
が、クラスVの扁平上皮癌及び小細胞癌とは反応してい
ない。興味深いのは(JPL5 (クラス■)の例であ
る。この患者は真水の形態学的な細胞診によって癌と確
定できなかったにもかかわらず、1uCa6及び1uC
a7により染色された。4ケ月後試験切除により肺腺癌
であることが判明した。
このようにtツクa−ナル抗体しuCa6゜1uCa7
は真水中の癌細胞においても腫瘍組織と同様の特異性を
示し、真水による肺癌の細胞診及び組織型の診断に有効
であることが証明された。特にtJPL5の例は従来の
形態学的診断で見逃されるような場合でもこれらのモノ
クローナル抗体により癌細胞が発見できることを意味し
ている。
は真水中の癌細胞においても腫瘍組織と同様の特異性を
示し、真水による肺癌の細胞診及び組織型の診断に有効
であることが証明された。特にtJPL5の例は従来の
形態学的診断で見逃されるような場合でもこれらのモノ
クローナル抗体により癌細胞が発見できることを意味し
ている。
真水細胞の螢光染色を定量化するためにセルソーターに
よる測定が試みられた。セルソーターはFAC8420
(ベクトンデツキンソン社)が用いられた。第2図は、
細胞診クラス■の腺癌(第4表UPL5)をLLICa
6で染色したものである。非常に強い螢光強度が観察さ
れた。
よる測定が試みられた。セルソーターはFAC8420
(ベクトンデツキンソン社)が用いられた。第2図は、
細胞診クラス■の腺癌(第4表UPL5)をLLICa
6で染色したものである。非常に強い螢光強度が観察さ
れた。
第1表
免疫パーオキシダーゼ染色法による七ツクロープル抗体
の肺癌組織に対りる反応竹S4 + 十 → − 扁平上皮癌 C3−+ →−− 07十千十十− 85W −−−− 89+−−−1−1−−− 812++ →−−1−十− 82 − −− −+、 − LI32 −− − −− 腺 癌 IJ26 −’ −十− 1J64 − 〜 →−」− 014−−−(−十− U12 − −〜 ト W (注) a)扁平上皮癌の部分を染色している。
の肺癌組織に対りる反応竹S4 + 十 → − 扁平上皮癌 C3−+ →−− 07十千十十− 85W −−−− 89+−−−1−1−−− 812++ →−−1−十− 82 − −− −+、 − LI32 −− − −− 腺 癌 IJ26 −’ −十− 1J64 − 〜 →−」− 014−−−(−十− U12 − −〜 ト W (注) a)扁平上皮癌の部分を染色している。
第2表
免役パーAキシター1染色法による[ツクU−ナル抗体
の種々の11;U械【こ対する反1芯1j[−−1−+
− 大腸癌 腺 癌 − 胃癌一一一トW 11IIl瀞θ −’ −+−1−− 甲状腺癌 − 乳癌 −++( 口1]’7てr、#i; →−− −+−+−W 唾11kllIJl癌 − 3癌 扁平−L皮癌 l−−十十− 子宮頚部癌 −−W− 」単W T−−−−一一色−−二−− ト+°強陽性 1−;陽性 W:弱陽性 T;微陽性
−:陰性第3表 免疫パーAキシダーL染色払にJ、るLツク1.l−ノ
ル抗体の止常絹械に対づる反応性 気風支粘膜 −−−一一一 甲状腺 −−−−一 肝 −−一−−− 膵 −−m= 直腸 ] − 大腸 −−−’l’ − 胃 −−−一−− 脳 −−−=− (注)a)扁平上皮組織が陽性 第4表 免疫螢光染L2仏にJ、るしツクローノル抗体の真水細
胞に対U反応性UI)12 n”) y − −十 W ()l)tJ 、、61 ■ − −++ W U))lft 、/’ン V − 1JPLI2 l+”l y − LJPLi3 lI ■ − (注)a)IIllI癌絹織型は組織後のリンパ節生検
・剖検・手術料オ′MにJ二り決定されlこ1゜b )
真水細胞診断により決定された。
の種々の11;U械【こ対する反1芯1j[−−1−+
− 大腸癌 腺 癌 − 胃癌一一一トW 11IIl瀞θ −’ −+−1−− 甲状腺癌 − 乳癌 −++( 口1]’7てr、#i; →−− −+−+−W 唾11kllIJl癌 − 3癌 扁平−L皮癌 l−−十十− 子宮頚部癌 −−W− 」単W T−−−−一一色−−二−− ト+°強陽性 1−;陽性 W:弱陽性 T;微陽性
−:陰性第3表 免疫パーAキシダーL染色払にJ、るLツク1.l−ノ
ル抗体の止常絹械に対づる反応性 気風支粘膜 −−−一一一 甲状腺 −−−−一 肝 −−一−−− 膵 −−m= 直腸 ] − 大腸 −−−’l’ − 胃 −−−一−− 脳 −−−=− (注)a)扁平上皮組織が陽性 第4表 免疫螢光染L2仏にJ、るしツクローノル抗体の真水細
胞に対U反応性UI)12 n”) y − −十 W ()l)tJ 、、61 ■ − −++ W U))lft 、/’ン V − 1JPLI2 l+”l y − LJPLi3 lI ■ − (注)a)IIllI癌絹織型は組織後のリンパ節生検
・剖検・手術料オ′MにJ二り決定されlこ1゜b )
真水細胞診断により決定された。
C)真水中の細胞について
V:確実に悪性
m:疑陽性1.たたし悪性の確徴はない。
1:陰性;全く異形性を認めず。
d)癌細胞が非1tに少ない。
友1」しL
ILI(::a3及び1uCa4に反応Jる抗原の性状
抗原としC用いl:s S K −M E S 1 m
+胞を1〜リブシン或いはブUノーUで処理づるど1−
uca3及びLuCa4抗体はSK−MESIMIJ胞
とは結合しなくなることが間接螢光抗体法により証明さ
れた。
抗原としC用いl:s S K −M E S 1 m
+胞を1〜リブシン或いはブUノーUで処理づるど1−
uca3及びLuCa4抗体はSK−MESIMIJ胞
とは結合しなくなることが間接螢光抗体法により証明さ
れた。
即ち、10 個のSK−MES1細胞を1n+g/+i
の1〜リプシン又はブロナーげで37℃、 30分間処
理した。よく洗った後、LuCa3或いは1−uCa4
抗体を加え、氷上で30分間反応した。洗浄後、フルΔ
レッセインイソチAシアネート標識A7ギ抗マウス10
Gを加え、更に氷上30分間反応させ、洗浄後螢光顕微
鏡で観察した。1〜リブシン或いはプロナーゼ非処理群
は強い螢光染色が観察されたが、トリプシン或いはプロ
ナーゼ処理すると全く螢光染色されないことが判った。
の1〜リプシン又はブロナーげで37℃、 30分間処
理した。よく洗った後、LuCa3或いは1−uCa4
抗体を加え、氷上で30分間反応した。洗浄後、フルΔ
レッセインイソチAシアネート標識A7ギ抗マウス10
Gを加え、更に氷上30分間反応させ、洗浄後螢光顕微
鏡で観察した。1〜リブシン或いはプロナーゼ非処理群
は強い螢光染色が観察されたが、トリプシン或いはプロ
ナーゼ処理すると全く螢光染色されないことが判った。
更ニ、10 (rjJ(DSK−MESI細mG o、
2:L二ツ]へのノイラミニダーゼで処理しても、l−
11Ca3゜1Uca4に対づ−る反応性は全く減弱し
ないことが間接螢光抗体法により証明された。
2:L二ツ]へのノイラミニダーゼで処理しても、l−
11Ca3゜1Uca4に対づ−る反応性は全く減弱し
ないことが間接螢光抗体法により証明された。
以上のことは、1−uCa3或いは1uCa4に反応7
る抗原がタンパク質であり、その抗原決定基にシアル酸
がaまれていないことを示し−Cいる。
る抗原がタンパク質であり、その抗原決定基にシアル酸
がaまれていないことを示し−Cいる。
実施例4
1uCa6及び1uCa7に反応する抗原の性状抗原と
して用いたFerrians細胞をトリプシン或いはプ
ロナーゼでLu Ca3. Lu Ca4の項で述へた
方法(実施例3)と同様の方法で処理すると、しuCa
6に対4°る反応性は全く減少しないが、しuCa7に
対する反応性は消失リ−ることか間接螢光抗体法により
証明された。
して用いたFerrians細胞をトリプシン或いはプ
ロナーゼでLu Ca3. Lu Ca4の項で述へた
方法(実施例3)と同様の方法で処理すると、しuCa
6に対4°る反応性は全く減少しないが、しuCa7に
対する反応性は消失リ−ることか間接螢光抗体法により
証明された。
F errians細胞をノイラミニダーゼ処理しても
、Lu Ca6. l、−u Ca7に対りる反応性は
全く減少しなかった。
、Lu Ca6. l、−u Ca7に対りる反応性は
全く減少しなかった。
以上の事実は、1Uca7抗体【、二及応りる抗原はタ
ンパク質C,イの抗原決定基にシアル酸は含まれでいな
いごとを示しくいる。、 i /、二11Ca6に反応
Jる抗原は1−リゾシン及び111ノーげに非感受性で
その抗原決定基にはシ)フル酸が含J:れていないこと
を示し−Cいる。
ンパク質C,イの抗原決定基にシアル酸は含まれでいな
いごとを示しくいる。、 i /、二11Ca6に反応
Jる抗原は1−リゾシン及び111ノーげに非感受性で
その抗原決定基にはシ)フル酸が含J:れていないこと
を示し−Cいる。
実施例5
LuCa3及び1Uca4抗体のイムノグロブリン亜群
の決定: 1−uCa3及び1−UCa4抗体ど\7ギ抗マウスI
(IG、亜群、I(IG、、IIL亜群、IgG、、亜
f!T、IgM亜群との反応11をアガロースゲル内免
疫)ん陪反応により調べた。1−uCa3及びしuca
4抗体はいずれも抗マウスIgGイ亜群抗体と反応し沈
降線をつくったが、他の抗体とは全く沈降線を作らなか
った。
の決定: 1−uCa3及び1−UCa4抗体ど\7ギ抗マウスI
(IG、亜群、I(IG、、IIL亜群、IgG、、亜
f!T、IgM亜群との反応11をアガロースゲル内免
疫)ん陪反応により調べた。1−uCa3及びしuca
4抗体はいずれも抗マウスIgGイ亜群抗体と反応し沈
降線をつくったが、他の抗体とは全く沈降線を作らなか
った。
1uca6及び1−uCa7抗体のイムノグロブリン亜
群の決定: 1uCa6及び1−uCaγ抗体とヤギ抗マウス1gG
、!In群、1(IO2,亜群、ItlG2b亜群、[
(IM亜BYとの反応性をアカロースグル内免疫沈降反
応により調べた。1−uCa6抗体は抗マウス[M亜群
抗体と、1uCa7抗体は抗マウスI(IG1亜群抗体
と反応し沈ll?線をつくったが、他の抗体とは全く沈
降線を作らなかった。
群の決定: 1uCa6及び1−uCaγ抗体とヤギ抗マウス1gG
、!In群、1(IO2,亜群、ItlG2b亜群、[
(IM亜BYとの反応性をアカロースグル内免疫沈降反
応により調べた。1−uCa6抗体は抗マウス[M亜群
抗体と、1uCa7抗体は抗マウスI(IG1亜群抗体
と反応し沈ll?線をつくったが、他の抗体とは全く沈
降線を作らなかった。
第1図は、レルソーターを用いた1−uQa3及び1−
uCa4による癌性真水(扁平上皮癌)の診断結果を示
したしので、< a>は1uCa3による螢光染色結末
を、(b)は1uCa4による螢光染色結末を示したも
のぐある。 第2図は、レルソーターを用いた1uCa6による癌v
1胸水(腺癌)の診断結果を示したものである2゜ 第1図 螢ff151屓→
uCa4による癌性真水(扁平上皮癌)の診断結果を示
したしので、< a>は1uCa3による螢光染色結末
を、(b)は1uCa4による螢光染色結末を示したも
のぐある。 第2図は、レルソーターを用いた1uCa6による癌v
1胸水(腺癌)の診断結果を示したものである2゜ 第1図 螢ff151屓→
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 (1) ヒト肺扁平上皮癌に含まれる分子量22万の抗
原及び分子量9.5万の抗原と抗原抗体反応をし、次の
性質を有するNG、亜群に属するモノクローナル抗体し
1Ica3゜ (1)ヒト肺扁平上皮癌と反応する。 ■ヒト肺腺癌と反応しない。 (3)腺癌型のヒトの大腸癌、胃癌、直腸癌、甲状腺癌
、乳癌、胆管癌、唾液腺癌と反応しない(4)ヒトの肺
胞、気管支粘膜、甲状腺、腎、肝。 膵、直腸、大腸、胃、牌、脳、末梢血リンパ球の正常組
織と反応しない。 (2) ヒト肺扁平上皮癌に含まれる分7子量15万の
抗原と抗原抗体反応をし、次の性質を有づるIgG、亜
群に属するモノクローナル抗体[uCa4゜(1)ヒト
肺扁平上皮癌と反応する。 ■ヒト肺腺癌と反応しない。 (3)腺癌型のヒトの大腸癌、胃癌、直腸癌、甲状腺癌
、乳癌、胆管癌、唾液腺癌と反応しない。 (4)ヒトの肺胞、気管支粘膜、甲状腺、腎、肝。 膵、直腸、大腸、胃、牌、脳、末梢血リンパ球の正常組
織と反応しない。 (3) ヒト肺腺癌に含まれる抗原と抗原抗体反応をし
、次の性質を有する[QM亜群に属するモノクローナル
抗体LuCa6ゎ (1)ヒト肺扁平上皮癌、ヒト肺腺癌、ヒl−肺小細胞
癌と茨応づる。 ■腺癌型のヒ1への大腸癌、胃癌、直腸癌、乳癌。 胆管癌、唾液Jl*癌及び扁平上皮癌型の舌癌と反応す
る。 ■ヒトのIIra胞、気管支粘膜、甲状腺、腎、肝、゛
胃、脳の正常組織と反応しない。 (4) ヒト肺腺癌に含まれる抗原と抗原抗体反応をし
、次の性質を有するIgG、亜群に属するモノクローナ
ル抗体しuCa7゜ (1)ヒト肺扁平上皮癌と反応しない。 ■ヒト肺腺癌と反応する。 (3)ヒトの肺胞、気管支粘膜、甲状腺、腎、皮膚。 肝、膵、直賜、大腸、胃、脳、牌、子宮頚部の正常組織
と反応しない。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5558884A JPS60199830A (ja) | 1984-03-23 | 1984-03-23 | モノクロ−ナル抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP5558884A JPS60199830A (ja) | 1984-03-23 | 1984-03-23 | モノクロ−ナル抗体 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS60199830A true JPS60199830A (ja) | 1985-10-09 |
Family
ID=13002907
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP5558884A Pending JPS60199830A (ja) | 1984-03-23 | 1984-03-23 | モノクロ−ナル抗体 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS60199830A (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61103837A (ja) * | 1984-10-26 | 1986-05-22 | Wakunaga Seiyaku Kk | 抗ヒト癌モノクロ−ナル抗体 |
JPS61104783A (ja) * | 1985-09-10 | 1986-05-23 | Wakunaga Seiyaku Kk | 抗ヒト癌モノクロ−ナル抗体生産性ハイブリド−マ |
JPS63243760A (ja) * | 1987-03-31 | 1988-10-11 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ヒト肺腺癌単クロ−ン性抗体 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60190722A (ja) * | 1984-03-12 | 1985-09-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ヒト肺癌単クロ−ン性抗体 |
-
1984
- 1984-03-23 JP JP5558884A patent/JPS60199830A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS60190722A (ja) * | 1984-03-12 | 1985-09-28 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ヒト肺癌単クロ−ン性抗体 |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61103837A (ja) * | 1984-10-26 | 1986-05-22 | Wakunaga Seiyaku Kk | 抗ヒト癌モノクロ−ナル抗体 |
JPS61104783A (ja) * | 1985-09-10 | 1986-05-23 | Wakunaga Seiyaku Kk | 抗ヒト癌モノクロ−ナル抗体生産性ハイブリド−マ |
JPS63243760A (ja) * | 1987-03-31 | 1988-10-11 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ヒト肺腺癌単クロ−ン性抗体 |
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