JPS60188091A - ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの還元法 - Google Patents
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの還元法Info
- Publication number
- JPS60188091A JPS60188091A JP4619684A JP4619684A JPS60188091A JP S60188091 A JPS60188091 A JP S60188091A JP 4619684 A JP4619684 A JP 4619684A JP 4619684 A JP4619684 A JP 4619684A JP S60188091 A JPS60188091 A JP S60188091A
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- adenine dinucleotide
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（以
下ＮＡＤと略記する。）の還元法に関するものである。
下ＮＡＤと略記する。）の還元法に関するものである。
近年、酵素反応を各種の物質の合成に利用すると、 １
ｌｌｌ常の化学的手段では合成困難な物質が容易に得ら
れる場合のあることがわかってきている。
ｌｌｌ常の化学的手段では合成困難な物質が容易に得ら
れる場合のあることがわかってきている。
したがっ゛ζ、酵素反応の利用は化学的手段による合成
の壁を打ち破るものとしてその将来に大きいＸ１待がも
たれている。
の壁を打ち破るものとしてその将来に大きいＸ１待がも
たれている。
酵素反応には種々の型の反応があるが、その一つに酸化
還元反応がある。酸化還元反応を酵素的に行う場合、そ
の多くは補酵素としてＮＡＤあるいはＮＡＤＨにコチン
アミドアデニンジヌクレオチド還元型）を必要とする。
還元反応がある。酸化還元反応を酵素的に行う場合、そ
の多くは補酵素としてＮＡＤあるいはＮＡＤＨにコチン
アミドアデニンジヌクレオチド還元型）を必要とする。
しかし、、 ＮＡＤやＮＡＤＨは極めて高価な物質であ
るので、これを使い捨て的に使用することは実用的でな
く、酸化還元反応を酵素的に行う場合の最大の問題点に
なっていた。
るので、これを使い捨て的に使用することは実用的でな
く、酸化還元反応を酵素的に行う場合の最大の問題点に
なっていた。
ＮＡＤ、 ＮＡＤ）ｌを補酵素として使用するとＮＡＤ
はＮＡＤＩＩに、 ＮＡＤＩＩはＮＡＤに？自費される
。したがって、 ＮＡＩ）をＮ Ａ Ｄ Ｉ＋から、
ＮＡＤＨをＮＡＤから再生することが可能になれば上に
述べた問題点は回避できることになる。
はＮＡＤＩＩに、 ＮＡＤＩＩはＮＡＤに？自費される
。したがって、 ＮＡＩ）をＮ Ａ Ｄ Ｉ＋から、
ＮＡＤＨをＮＡＤから再生することが可能になれば上に
述べた問題点は回避できることになる。
このような観点から、 ＮＡＤやＮＡＤＨの再生につい
て研究が行われており、電気化学的な方法や、酵素的な
方法が提案されている。しかし、電気化学的な方法では
ＮＡＤやＮＡＤＨ以外の化合物への変換反応も併発する
ので好ましくない。酵素的な方法は各種デヒドロゲナー
ゼを使用するものであるが。
て研究が行われており、電気化学的な方法や、酵素的な
方法が提案されている。しかし、電気化学的な方法では
ＮＡＤやＮＡＤＨ以外の化合物への変換反応も併発する
ので好ましくない。酵素的な方法は各種デヒドロゲナー
ゼを使用するものであるが。
この場合、別に副原料（暴質）を必要とするので。
副原料６未反応物、副原料からの生成物、などから目的
物のＮＡＤやＮＡＤｌｌを分離、精製するという面倒な
工程を必要とするので、これも好ましいものではなかっ
た。
物のＮＡＤやＮＡＤｌｌを分離、精製するという面倒な
工程を必要とするので、これも好ましいものではなかっ
た。
本発明者らは、特にＮＡＤｌｌの再生について、上述の
観点から、工業的に利用可能な方法について鋭意研究を
重ねた結果、水素高圧下で水素産生微生物をＮＡＤに作
用させると、従来の方法にみられた問題点を克服したず
くれた方法となることを見出し１本発明に到達した。
観点から、工業的に利用可能な方法について鋭意研究を
重ねた結果、水素高圧下で水素産生微生物をＮＡＤに作
用させると、従来の方法にみられた問題点を克服したず
くれた方法となることを見出し１本発明に到達した。
すなわち２本発明は、水素高圧下で水素産生微生物をＮ
ＡＤに作用させることを特徴とするＮＡＤの還元法であ
る。
ＡＤに作用させることを特徴とするＮＡＤの還元法であ
る。
以下９本発明につき詳細に説明する。
本発明によりＮＡＤを還元するには９例えばＮＡＤを含
有した緩衝液に水素産生微生物を懸濁させて。
有した緩衝液に水素産生微生物を懸濁させて。
水素を導入し水素高圧下で反応させればよい。このよう
な簡単な操作でＮＡＤが還元されＮＡ１１８へ再生され
る。この場合、副生成物は生成せず、介入してくるのは
未反応の水素だけであり、この水素も特に手段を講する
必要はなく自然に除去されるので、工業上極めて有利で
ある。通常、このような生物的反応は常圧下で行うのが
常識であるが１本反応は常圧下ではほとんど進行せず、
高圧下で初めて進行するものであって、従来の常識をく
つがえす驚くべきことであった。
な簡単な操作でＮＡＤが還元されＮＡ１１８へ再生され
る。この場合、副生成物は生成せず、介入してくるのは
未反応の水素だけであり、この水素も特に手段を講する
必要はなく自然に除去されるので、工業上極めて有利で
ある。通常、このような生物的反応は常圧下で行うのが
常識であるが１本反応は常圧下ではほとんど進行せず、
高圧下で初めて進行するものであって、従来の常識をく
つがえす驚くべきことであった。
本発明に使用する水素産生微生物としては１例えばクロ
ストリジウム・ブチリカム、クロストリジウム・アセド
ブチェカム、クロストリジウム・ベリフリンジェンス、
海洋性水素産生菌ＮＫＩＩ ００７などがあげられ、こ
れらは培養菌体のまま使用してもよいし、また適当な担
体に固定化して使用してもよい。本発明を手軽に実施す
るには培養菌体のままでもよいが、担体に固定して使用
した方が再生変換率が高く、また長時間の運転に耐える
といった利点がある。固定化を行うに当たっては公知の
方法が支障なく利用される。担体としては。
ストリジウム・ブチリカム、クロストリジウム・アセド
ブチェカム、クロストリジウム・ベリフリンジェンス、
海洋性水素産生菌ＮＫＩＩ ００７などがあげられ、こ
れらは培養菌体のまま使用してもよいし、また適当な担
体に固定化して使用してもよい。本発明を手軽に実施す
るには培養菌体のままでもよいが、担体に固定して使用
した方が再生変換率が高く、また長時間の運転に耐える
といった利点がある。固定化を行うに当たっては公知の
方法が支障なく利用される。担体としては。
例えば寒天、アルギン酸、ゼラチン、カラギーナンとい
った天然物、ポリアクリルアミドゲルのような合成物な
どが好ましく使用される。
った天然物、ポリアクリルアミドゲルのような合成物な
どが好ましく使用される。
木発意は、水素高圧下で行うことが必要である。
水素圧は高い程好ましいが、特に１０気圧以上、 ３０
気圧以上、５０気圧以上、 ８０気圧以上、さらには１
００気圧以上が好ましい。
気圧以上、５０気圧以上、 ８０気圧以上、さらには１
００気圧以上が好ましい。
使用する緩衝液には特に制限はなく、一般によく使われ
ているトリス緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、
トリシン緩衝液などを利用すればよい。ｐｌ＋は（ｊ〜
９．好ましくは７〜Ｂの範囲で設定すればよい。菌体量
は多ければ反応が速く、少なければ反応が遅くなるだけ
であって５特定の範囲内でないと本発明が実施できない
というものではない。ＮＡＤ？ＪｔＡ度も特定の範囲内
である必要はなく２反応系に投入しただけ還元すること
が可能である。反応温度は２０’Ｃないし５０’Ｃ，好
ましくは３゜°Ｃないし４０℃が適用される。反応時間
は１条件により異なるが、おおむね１時間ないし１０時
間程度でよい。
ているトリス緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、
トリシン緩衝液などを利用すればよい。ｐｌ＋は（ｊ〜
９．好ましくは７〜Ｂの範囲で設定すればよい。菌体量
は多ければ反応が速く、少なければ反応が遅くなるだけ
であって５特定の範囲内でないと本発明が実施できない
というものではない。ＮＡＤ？ＪｔＡ度も特定の範囲内
である必要はなく２反応系に投入しただけ還元すること
が可能である。反応温度は２０’Ｃないし５０’Ｃ，好
ましくは３゜°Ｃないし４０℃が適用される。反応時間
は１条件により異なるが、おおむね１時間ないし１０時
間程度でよい。
以上のように１本発明の方法によれば、補酵素として重
要なＮＡＤＩＩをＮＡＤより極めて容易に短時間で製造
し、再生することが可能である。
要なＮＡＤＩＩをＮＡＤより極めて容易に短時間で製造
し、再生することが可能である。
次に本発明を実施例により具体的に説明する。
実施例１
水素産生微生物クロストリジウム・ブチリカムＩＦ０３
８５８を、グ）Ｉｉコースｌｌ’？、ヘプトン０．４ｇ
。
８５８を、グ）Ｉｉコースｌｌ’？、ヘプトン０．４ｇ
。
酵母エキス０．４ｇ、肉エキス０．２ｇ、リン酸二カリ
ウム１２．５ｇ及び硫酸第一鉄０．０５ｇを含有する培
地（ｐＨ７，０） １０（１ｍｌを使用して、嫌気条件
下で３７℃、９時間培養した。
ウム１２．５ｇ及び硫酸第一鉄０．０５ｇを含有する培
地（ｐＨ７，０） １０（１ｍｌを使用して、嫌気条件
下で３７℃、９時間培養した。
このようにして得られた菌体６ｍ８を２ｍｌの０．１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ７，８）に懸濁したせのを０．８ｍ
ＭのＮＡＤを含有する０、１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，
８）８ｍｌに加え、水素圧１００気圧のオートクレーズ
中で３７℃５時間反応させた。３４０ｎｍの吸光度から
ＮＡＤＨの生成−を測定したところ、６３％の変換率で
ＮＡＩＩからＮＡＤｌｌの得られることが認められた。
リン酸緩衝液（ｐＨ７，８）に懸濁したせのを０．８ｍ
ＭのＮＡＤを含有する０、１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，
８）８ｍｌに加え、水素圧１００気圧のオートクレーズ
中で３７℃５時間反応させた。３４０ｎｍの吸光度から
ＮＡＤＨの生成−を測定したところ、６３％の変換率で
ＮＡＩＩからＮＡＤｌｌの得られることが認められた。
なお、生成したＮＡＤＨの量はアルコールデヒドロゲナ
ーゼに対する活性測定値と一致することも確認した。
ーゼに対する活性測定値と一致することも確認した。
また、比較のため、同条件下で水素圧１気圧（常圧）下
で行うと、 ＮＡＤＨはほとんど生成しなかった。
で行うと、 ＮＡＤＨはほとんど生成しなかった。
実施例２
実施例１で得たクロストリジウム・ブチリカムの菌体６
Ｂを１ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐｌ＋ ７．８）
に懸濁させた。この懸濁液を１ｍｌの４％寒寒天液液」
−と同じリン酸緩衝液使用）と急速に混合、冷却（１０
℃）シ、固定化菌体を得た。
Ｂを１ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐｌ＋ ７．８）
に懸濁させた。この懸濁液を１ｍｌの４％寒寒天液液」
−と同じリン酸緩衝液使用）と急速に混合、冷却（１０
℃）シ、固定化菌体を得た。
このようにして得た固定化菌体を小片（約５ｍｍ”）に
細断し、生理食塩水で洗浄したのぢ、実施例１と同様に
してＮＡｌ１を含有するリン酸緩衝液に加えて１反応を
行った。変換率はぼ１００％でＮＡＤＩ＋が得られた。
細断し、生理食塩水で洗浄したのぢ、実施例１と同様に
してＮＡｌ１を含有するリン酸緩衝液に加えて１反応を
行った。変換率はぼ１００％でＮＡＤＩ＋が得られた。
上記反応終了後、同じ固定化菌体を再使用してＮＡＤの
還元反応を行った。同条件下で５時間反応を行ったとこ
ろ、変換率がほぼ１００％でＮ五〇〇が得られた。ずな
わち、ＮＡＤ−＋ＮＡＤＩＩの変換を連続的に運転でき
ることがわかった。
還元反応を行った。同条件下で５時間反応を行ったとこ
ろ、変換率がほぼ１００％でＮ五〇〇が得られた。ずな
わち、ＮＡＤ−＋ＮＡＤＩＩの変換を連続的に運転でき
ることがわかった。
実施例３
実施例１の培養条件に従って水素産生微生物クロストリ
ジウム・アセトフ゛チリカムＩＡＭ １９０１１の菌体
をＩＩトだ。この菌体を実施例２と同様にして固定化し
、同条件下でＮＡＤの還元を行ったところ。
ジウム・アセトフ゛チリカムＩＡＭ １９０１１の菌体
をＩＩトだ。この菌体を実施例２と同様にして固定化し
、同条件下でＮＡＤの還元を行ったところ。
７６％の変換率でＮＡＤＩＩが得られた。
また２同様にして水素産生微生物クロストリジウム・ア
セトフ゛チリカムＩＡＭ １９０１２及びＩＡＭ １９
０１３も行ったところ、上記と同様な結果が得られた。
セトフ゛チリカムＩＡＭ １９０１２及びＩＡＭ １９
０１３も行ったところ、上記と同様な結果が得られた。
特許出願人 ユニチカ罹式会社
Claims (1)
- （１１水素高圧下で水素産生微生物をニコチンアミドア
デニンジヌクレオチドに作用させることを特徴とするニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチドの還元法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4619684A JPS60188091A (ja) | 1984-03-09 | 1984-03-09 | ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの還元法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4619684A JPS60188091A (ja) | 1984-03-09 | 1984-03-09 | ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの還元法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60188091A true JPS60188091A (ja) | 1985-09-25 |
| JPH0449399B2 JPH0449399B2 (ja) | 1992-08-11 |
Family
ID=12740314
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4619684A Granted JPS60188091A (ja) | 1984-03-09 | 1984-03-09 | ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの還元法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60188091A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015039686A (ja) * | 2013-08-23 | 2015-03-02 | 内山 俊一 | 水素活性化触媒 |
-
1984
- 1984-03-09 JP JP4619684A patent/JPS60188091A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015039686A (ja) * | 2013-08-23 | 2015-03-02 | 内山 俊一 | 水素活性化触媒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0449399B2 (ja) | 1992-08-11 |
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