JPS6015310B2 - ポリヌクレオチドホスホリラ−ゼの処理方法 - Google Patents
ポリヌクレオチドホスホリラ−ゼの処理方法Info
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- JPS6015310B2 JPS6015310B2 JP949377A JP949377A JPS6015310B2 JP S6015310 B2 JPS6015310 B2 JP S6015310B2 JP 949377 A JP949377 A JP 949377A JP 949377 A JP949377 A JP 949377A JP S6015310 B2 JPS6015310 B2 JP S6015310B2
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- polynucleotide phosphorylase
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はポリヌクレオチドホスホリラーゼの処理方法に
関する。
関する。
ポリヌクレオチドホスホリラーゼ
（ｐｏｌ飢ｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｈｏｓｐｈｏひｌａ
ｓｅ）は、以下の反応に触媒反応を有する酵素であり、
この酵素が動植物及び微生物から得られることは良く知
られている。
ｓｅ）は、以下の反応に触媒反応を有する酵素であり、
この酵素が動植物及び微生物から得られることは良く知
られている。
■ 重合（ｐｏ１Ｍｍｅｒｉｚａｔｊｏｎ）■ 加リン
酸分解（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｌｙｓｉｓ）■ 交換反応
（Ｅｘｃｈａｎｇｅ）ＮＤＰ：ヌクレオシドジリン酸 ＮＭＰ：ヌクレオシドモノリン酸 Ｐｉ ：無機リン酸 Ｐｉぞ：３２Ｐｉ ＮＤＰ×：〔６−３２Ｐ〕ヌクレオシドジリン酸しかし
従来知られているポリヌクレオチドホスホリラーゼは一
般的に他の酵素と同じく熱に対し不安定である。
酸分解（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｌｙｓｉｓ）■ 交換反応
（Ｅｘｃｈａｎｇｅ）ＮＤＰ：ヌクレオシドジリン酸 ＮＭＰ：ヌクレオシドモノリン酸 Ｐｉ ：無機リン酸 Ｐｉぞ：３２Ｐｉ ＮＤＰ×：〔６−３２Ｐ〕ヌクレオシドジリン酸しかし
従来知られているポリヌクレオチドホスホリラーゼは一
般的に他の酵素と同じく熱に対し不安定である。
そこで本発明者等は熱安定性を有するポリヌクレオチド
ホスホリラーゼの検索をおこなった結果、さきに、９０
ｏ０を超える高温の温泉に生育する細菌、高度好熱細菌
ＨＢ−８から非常に熱安定性の高にポリヌクレオチドホ
スホリラーゼを得た。本発明者等は、更にこのポリヌク
レオチドホスホリラーゼのおこなう反応について検討し
た結果、この酵素をトリプシン処理することにより加リ
ン酸分解活性がほとんどなくポリリポヌクレオチドを合
成する酵素として有用なポリヌクレオチドホスホリラー
ゼを得ることができ本発明を達成した。
ホスホリラーゼの検索をおこなった結果、さきに、９０
ｏ０を超える高温の温泉に生育する細菌、高度好熱細菌
ＨＢ−８から非常に熱安定性の高にポリヌクレオチドホ
スホリラーゼを得た。本発明者等は、更にこのポリヌク
レオチドホスホリラーゼのおこなう反応について検討し
た結果、この酵素をトリプシン処理することにより加リ
ン酸分解活性がほとんどなくポリリポヌクレオチドを合
成する酵素として有用なポリヌクレオチドホスホリラー
ゼを得ることができ本発明を達成した。
すなわち、本発明の要旨は、高度好熱細菌ＨＢ−８より
得られるポリヌクレオチドホスホリラ−ゼをトリプシン
処理し、加リン酸分解活性がほとんぼないポリヌクレオ
チドホスホリラーゼを得ることを特徴とするポリヌクレ
オチドホスホリラーゼの処理方法に存する。
得られるポリヌクレオチドホスホリラ−ゼをトリプシン
処理し、加リン酸分解活性がほとんぼないポリヌクレオ
チドホスホリラーゼを得ることを特徴とするポリヌクレ
オチドホスホリラーゼの処理方法に存する。
本発明で用いられるポリヌクレオチッホスホリフ ーゼ
は、高度好熱細菌（Ｔｈｅｒｍｕｓ比ｅｎｎｏｐｈｉｌ
ｕｍ）ＨＢ−８（ＡＴＣＣ ２７６３４）から公知の方
法で分離精製することにより得ることができるが、でき
るだけ生釆のままの（ｎａｔｉｖｅ）ポリヌクレオチド
ホスホリラーゼを得るように注意深く分離精製する。
は、高度好熱細菌（Ｔｈｅｒｍｕｓ比ｅｎｎｏｐｈｉｌ
ｕｍ）ＨＢ−８（ＡＴＣＣ ２７６３４）から公知の方
法で分離精製することにより得ることができるが、でき
るだけ生釆のままの（ｎａｔｉｖｅ）ポリヌクレオチド
ホスホリラーゼを得るように注意深く分離精製する。
例えば、高度好熟細菌ＨＢ−８（ＡＴＣＣ ２７６３４
）を適当な培地、例えばポリベプトン５夕、酵母エキス
４夕、グルコースｌｙ、塩化ナトリウム２夕及び水ｌ０
００の【からなる培地で６０〜８５ｏｏで通気蝿梓下に
培養し、得られた菌体を、アルミナ暦砕し、１のＭ８ー
メルカプトヱタノールを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液
（ＰＨ８．０）３００私で抽出し、抽出液にプロタミン
硫酸を加えて生成させた沈澱を０．２Ｍ硫酸アンモニウ
ム液に懸濁させ、遠心分離後その上清を取る。次いで硫
安分画により０〜５５％飽和させた際の沈澱を集め、上
記緩衝液に溶解し、ＤＥＡＥーセルロース商標、Ｗｈａ
ｔｍａｎ社製陰イオン交換体）のカラムに吸着させ、０
〜０．９ Ｍ塩化ナトリウムで溶出したものを、ＡＤＰ
−セファローズの（後記の方法で調製したもの）のカラ
ムに吸着させ、０．８の塩化ナトリウムで溶出すること
により、目的の未変性ポリヌクレオチドホスホリラーゼ
の酵素液を得る。
）を適当な培地、例えばポリベプトン５夕、酵母エキス
４夕、グルコースｌｙ、塩化ナトリウム２夕及び水ｌ０
００の【からなる培地で６０〜８５ｏｏで通気蝿梓下に
培養し、得られた菌体を、アルミナ暦砕し、１のＭ８ー
メルカプトヱタノールを含む２０ｍＭトリス塩酸緩衝液
（ＰＨ８．０）３００私で抽出し、抽出液にプロタミン
硫酸を加えて生成させた沈澱を０．２Ｍ硫酸アンモニウ
ム液に懸濁させ、遠心分離後その上清を取る。次いで硫
安分画により０〜５５％飽和させた際の沈澱を集め、上
記緩衝液に溶解し、ＤＥＡＥーセルロース商標、Ｗｈａ
ｔｍａｎ社製陰イオン交換体）のカラムに吸着させ、０
〜０．９ Ｍ塩化ナトリウムで溶出したものを、ＡＤＰ
−セファローズの（後記の方法で調製したもの）のカラ
ムに吸着させ、０．８の塩化ナトリウムで溶出すること
により、目的の未変性ポリヌクレオチドホスホリラーゼ
の酵素液を得る。
すなわち、このようにして得られたポリヌクレオチドホ
スホリラーゼは、後記実施例に示されているように、重
合及び加リン酸分解の比活性が、それぞれ、１９．４単
位／雌蛋白、１３．９単位／のタ蛋白であり、生来のま
ま（ｎａｔｉｖｅ）であることが判る。
スホリラーゼは、後記実施例に示されているように、重
合及び加リン酸分解の比活性が、それぞれ、１９．４単
位／雌蛋白、１３．９単位／のタ蛋白であり、生来のま
ま（ｎａｔｉｖｅ）であることが判る。
本発明方法は、このようにして得られたポリヌクレオチ
ドホスホリラーゼを、トリプシンで処理することを骨子
とする。
ドホスホリラーゼを、トリプシンで処理することを骨子
とする。
処理は、ポリヌクレオチドホスホリラーゼを、適当な緩
衝液例えば、ｌｍＭ８−メルカプトェタノール、ｌｍＭ
塩化マグネシウムを含む２０肌Ｍトリス塩酸緩衝液、に
加え、更にトリプシンを加えて反応させることにより行
なわれる。
衝液例えば、ｌｍＭ８−メルカプトェタノール、ｌｍＭ
塩化マグネシウムを含む２０肌Ｍトリス塩酸緩衝液、に
加え、更にトリプシンを加えて反応させることにより行
なわれる。
トリプシンの添加量はとくに制限はないが、ポリヌクレ
オチドホスホリラーゼに対し重量比で０．１〜１雌庁ま
し〈は０．５〜３、反応液中の濃度で０．０５〜５のｐ
／の‘好ましくは０．１〜１の９／叫でよい。反応され
る際の温度も通常のトリプシンの反応温度でよく、好ま
しくは３７０付近でよい。反応時間は、１０分間〜２時
間程度で十分である。反応終了後、トリプシン阻害剤を
加えて、トリブシンを不活性化する。以上のようにして
処理されたポリヌクレオチドホスホリラーゼは、ポリヌ
クレオチドホスホリラーゼについて従来知られている触
媒作用（前示反応式‘１１及び‘２｝）のうち、加リン
酸分解（前示反応式‘１’の■）の触媒作用をほとんど
有さずに重合（前示反応式（１’の■）の触媒作用を有
する酵素である。具体的には後記実施例に示した（加リ
ン酸分解／重合）の活性比が１以下、好ましくは０．５
以下となるように処理される。そして本発明方法によっ
て得られたポリヌクレオチドホスホリラーゼは、重合（
ｐｏｌＭｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を触媒し、その逆反応
である加リン酸分解（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｌ侭ｉｓ）の
活性をほとんぼ有しないため、核酸合成の触媒として有
用である。以下本発明を実施例によって説明する。
オチドホスホリラーゼに対し重量比で０．１〜１雌庁ま
し〈は０．５〜３、反応液中の濃度で０．０５〜５のｐ
／の‘好ましくは０．１〜１の９／叫でよい。反応され
る際の温度も通常のトリプシンの反応温度でよく、好ま
しくは３７０付近でよい。反応時間は、１０分間〜２時
間程度で十分である。反応終了後、トリプシン阻害剤を
加えて、トリブシンを不活性化する。以上のようにして
処理されたポリヌクレオチドホスホリラーゼは、ポリヌ
クレオチドホスホリラーゼについて従来知られている触
媒作用（前示反応式‘１１及び‘２｝）のうち、加リン
酸分解（前示反応式‘１’の■）の触媒作用をほとんど
有さずに重合（前示反応式（１’の■）の触媒作用を有
する酵素である。具体的には後記実施例に示した（加リ
ン酸分解／重合）の活性比が１以下、好ましくは０．５
以下となるように処理される。そして本発明方法によっ
て得られたポリヌクレオチドホスホリラーゼは、重合（
ｐｏｌＭｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）を触媒し、その逆反応
である加リン酸分解（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｌ侭ｉｓ）の
活性をほとんぼ有しないため、核酸合成の触媒として有
用である。以下本発明を実施例によって説明する。
実施例 、
｛１’ポリヌクレオチドホスホリラーゼの分離精製及び
トリピシン処理：１そ当りポリベプトン５夕、酵母エキ
ス４夕、グルコース１夕を含む液体塔地（ｐＨ７．０）
で一夜７５℃で激しく振糧培養した高度好熱細菌ＨＢ−
８（ＡＴＣ２７６３４）２そをジャーファーメンター中
の８０その培地に植え、３０仇．ｐ．ｍ．の燈梓と１分
間当り２０その通気をしながら７ず○で培養した。
トリピシン処理：１そ当りポリベプトン５夕、酵母エキ
ス４夕、グルコース１夕を含む液体塔地（ｐＨ７．０）
で一夜７５℃で激しく振糧培養した高度好熱細菌ＨＢ−
８（ＡＴＣ２７６３４）２そをジャーファーメンター中
の８０その培地に植え、３０仇．ｐ．ｍ．の燈梓と１分
間当り２０その通気をしながら７ず○で培養した。
対数増殖後期に集菌し湿重量で約７００夕の菌体を得た
。次に４℃の低温室にて得られた菌体１００夕当り２０
０夕のアルミナを加え乳鉢にて１時間暦砕した。これり
３００の‘の１のＭ８−メルカプトェタノールを含む２
０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）（以下、これを
緩衝液Ａと略す。）を加え、更に３０分間抽出した。破
砕液を８００の、１０分間遠心分離してその上清を更に
１７００めで２０分間遠心分離し、その上清を粗酵母素
液とした。この粗酵素液に対し０．３客の２％プロタミ
ン硫酸（ｐＨ７．０）を燭拝しながら徐々に滴下し、生
じた沈澱物を遠０分離により集めた。
。次に４℃の低温室にて得られた菌体１００夕当り２０
０夕のアルミナを加え乳鉢にて１時間暦砕した。これり
３００の‘の１のＭ８−メルカプトェタノールを含む２
０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）（以下、これを
緩衝液Ａと略す。）を加え、更に３０分間抽出した。破
砕液を８００の、１０分間遠心分離してその上清を更に
１７００めで２０分間遠心分離し、その上清を粗酵母素
液とした。この粗酵素液に対し０．３客の２％プロタミ
ン硫酸（ｐＨ７．０）を燭拝しながら徐々に滴下し、生
じた沈澱物を遠０分離により集めた。
次にこのプロタミン沈澱を７０の‘の０．２Ｍ硫酸アン
モニウム液に懸濁後遺心分離して上清を得、上情１００
叫当り３２．６夕のよく砕いた硫安粉末を燈拝しながら
徐々に加え更に１８分間鷹洋後遠心分離により沈澱を集
めた。沈澱は少量の緩衝液Ａに溶かし同じ緩衝液に対し
て一夜透析した。透析した酵素液を緩衝液Ａで平衡化し
たＤＥＡＥ−セルロース（商標、Ｗｈａｔｍａ叫生製陰
イオン交換体）のカラムに吸着させ０．１〜０．９ Ｍ
の塩化ナトリウムの直線濃度勾配により溶出した。約０
．２３Ｍ付近に溶出した活性画分を硫安沈澱により濃縮
し透析後、ＡＤＰ−セファローズ岬（後記の方法で調製
したもの）のカラムをおこなった。すなわち、酵素液に
塩化マグネシウム、システィンを各々ｌｍＭ、０．２ｍ
Ｍになるように加え、カラムにかけ、１肌Ｍ塩化マグネ
シウムを含む緩衝液Ａ（以下、これを緩衝液Ｂと略す。
）で洗浄後、０．８Ｍ塩化ナトリウムを含む緩衝液Ｂで
溶出した。活性画分を硫安沈澱法で濃縮し、緩衝液Ｂに
対し一夜透析した。透析した酵素液０．１の‘（蛋白質
３９１Ａ夕を含む）に対し、緩衝液Ｂに溶かしたトリプ
シン（１雌／のと）０．５の‘、緩衝液ＢＯ．４叫を加
え、全量１．０机とし３で０１５分間反応させ、大豆の
トリプシンィンヒビタ‐（１０のタノの【）を１泌加え
て反応をとめた。次に前記したＤＥＡＥーセルロースを
用いトリプシンインヒビタ一を除き精製し凍結乾燥によ
り本酵素を得た。なお、上記操作において用いたＡＤＰ
−セファローズ蟹は、ＣＨ−セファローズ姫（商標、Ｐ
ｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ社製担体
）２夕、ァデノシンジリン酸０．蟹へ及び１−エチル−
３−（ジメチルアミノブロピル）カルボジイミドハイド
ロクロリド０．２６８夕をｐＨ５．１で２０℃、２４時
間反応させることにより調製したものを使用した ‐【
２｝ 重合及び加リン酸分解活性の測定｛１｝の分離精
製、トリプシソ処理の各段階での活性を測定した。
モニウム液に懸濁後遺心分離して上清を得、上情１００
叫当り３２．６夕のよく砕いた硫安粉末を燈拝しながら
徐々に加え更に１８分間鷹洋後遠心分離により沈澱を集
めた。沈澱は少量の緩衝液Ａに溶かし同じ緩衝液に対し
て一夜透析した。透析した酵素液を緩衝液Ａで平衡化し
たＤＥＡＥ−セルロース（商標、Ｗｈａｔｍａ叫生製陰
イオン交換体）のカラムに吸着させ０．１〜０．９ Ｍ
の塩化ナトリウムの直線濃度勾配により溶出した。約０
．２３Ｍ付近に溶出した活性画分を硫安沈澱により濃縮
し透析後、ＡＤＰ−セファローズ岬（後記の方法で調製
したもの）のカラムをおこなった。すなわち、酵素液に
塩化マグネシウム、システィンを各々ｌｍＭ、０．２ｍ
Ｍになるように加え、カラムにかけ、１肌Ｍ塩化マグネ
シウムを含む緩衝液Ａ（以下、これを緩衝液Ｂと略す。
）で洗浄後、０．８Ｍ塩化ナトリウムを含む緩衝液Ｂで
溶出した。活性画分を硫安沈澱法で濃縮し、緩衝液Ｂに
対し一夜透析した。透析した酵素液０．１の‘（蛋白質
３９１Ａ夕を含む）に対し、緩衝液Ｂに溶かしたトリプ
シン（１雌／のと）０．５の‘、緩衝液ＢＯ．４叫を加
え、全量１．０机とし３で０１５分間反応させ、大豆の
トリプシンィンヒビタ‐（１０のタノの【）を１泌加え
て反応をとめた。次に前記したＤＥＡＥーセルロースを
用いトリプシンインヒビタ一を除き精製し凍結乾燥によ
り本酵素を得た。なお、上記操作において用いたＡＤＰ
−セファローズ蟹は、ＣＨ−セファローズ姫（商標、Ｐ
ｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ社製担体
）２夕、ァデノシンジリン酸０．蟹へ及び１−エチル−
３−（ジメチルアミノブロピル）カルボジイミドハイド
ロクロリド０．２６８夕をｐＨ５．１で２０℃、２４時
間反応させることにより調製したものを使用した ‐【
２｝ 重合及び加リン酸分解活性の測定｛１｝の分離精
製、トリプシソ処理の各段階での活性を測定した。
ポリリボヌクレオチド（ｐｏとｙＮ）と滋Ｐのリン酸か
ら生成する３４のヌクレオシドジリン酸の量を測定する
ことによった。
ら生成する３４のヌクレオシドジリン酸の量を測定する
ことによった。
反応液は５０ｍＭトリス塩酸（ｐＨ８．０）、０．５ｍ
Ｍ ＥＤＴＡ４ｐＨ８．０）、２５０一夕／私ゥシ血清
了ルブミン、１ｍＭボリリボヌクレオシド、ｌｏｗＭの
３やのリン酸カリウム、５のＭの塩化マグネシウム及び
酵素液（０．００５〜０．０９単位）を加え、全量を０
．１泌とした。
Ｍ ＥＤＴＡ４ｐＨ８．０）、２５０一夕／私ゥシ血清
了ルブミン、１ｍＭボリリボヌクレオシド、ｌｏｗＭの
３やのリン酸カリウム、５のＭの塩化マグネシウム及び
酵素液（０．００５〜０．０９単位）を加え、全量を０
．１泌とした。
７０℃で２０分間反応させたのち、Ａｎａｌ．Ｂｊ比ｈ
ｅｍ．３８、３８３〜（１９７０）に記載された方法に
従い、Ｗｈａｔｍａｎ乳ＭＭ（商標、Ｗｈｔｍａｎ社製
炉紙）の原点に活性炭をつけた炉紙に反応液２５ムそを
活性炭の上にスポットした。
ｅｍ．３８、３８３〜（１９７０）に記載された方法に
従い、Ｗｈａｔｍａｎ乳ＭＭ（商標、Ｗｈｔｍａｎ社製
炉紙）の原点に活性炭をつけた炉紙に反応液２５ムそを
活性炭の上にスポットした。
これを水：ギ酸：アンモニア水（９０：４：０．５）で
約１０分間展開したのち、活性炭の部分を切り取り乾燥
したのち、ガイガーミュラー計数管により放射能を測定
した。
約１０分間展開したのち、活性炭の部分を切り取り乾燥
したのち、ガイガーミュラー計数管により放射能を測定
した。
なお、１時間にｌｒｍｏｌｅのヌクレオシドジリン酸を
生成する酵素量を１単位とした。
生成する酵素量を１単位とした。
１４Ｃのヌクレオシドジリン酸から生成する１℃のポリ
リボヌクレオチド（ｐｏｌｙＮ）の量を測定することに
よった。
リボヌクレオチド（ｐｏｌｙＮ）の量を測定することに
よった。
反応液は０．１Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．０）、１
机Ｍ塩化マグネシウム、０．１ｍＭエチレンジアミン四
酢酸、ｌｍＭ１４Ｃのヌクレオシドジリン酸（３０００
に．ｐ．ｍ．）、２５０ムタ／ｍｃゥシ血清ァルブミン
、１０ムＭ〔アデニルイル−（３′→５）〕２ アデノ
シン（ＡｐＡｐＡ）、酵素液０．００５〜０．０３単位
を加え全量を０．１の‘とした。
机Ｍ塩化マグネシウム、０．１ｍＭエチレンジアミン四
酢酸、ｌｍＭ１４Ｃのヌクレオシドジリン酸（３０００
に．ｐ．ｍ．）、２５０ムタ／ｍｃゥシ血清ァルブミン
、１０ムＭ〔アデニルイル−（３′→５）〕２ アデノ
シン（ＡｐＡｐＡ）、酵素液０．００５〜０．０３単位
を加え全量を０．１の‘とした。
７０℃で２０分間放置したのち、反応液２５仏〆をＷｈ
ａｔｍａｎ小皿（商標、Ｗｈａｔｍａｗ生製炉紙）にス
ポットしエタノール：ＩＭ酢酸アンモニウム（ｐＨ５．
５）１：１で２時間ペーパークロマトグラフィ−をおこ
なった。
ａｔｍａｎ小皿（商標、Ｗｈａｔｍａｗ生製炉紙）にス
ポットしエタノール：ＩＭ酢酸アンモニウム（ｐＨ５．
５）１：１で２時間ペーパークロマトグラフィ−をおこ
なった。
次に紙を乾燥し、原点の部分を切り取り、４夕の２，５
ジフェニルオキサゾール、０．１夕の１，４ビスー〔２
一（５−フエニルオキサゾリル）〕−ベンゼンをＩＺの
トルェンに溶解したシンチレーターを用いて放射能を測
定した。なお、ｌＡｍｏｌｅのヌクレオシドジリン酸を
１時間に重合する酵素量を１単位とした。
ジフェニルオキサゾール、０．１夕の１，４ビスー〔２
一（５−フエニルオキサゾリル）〕−ベンゼンをＩＺの
トルェンに溶解したシンチレーターを用いて放射能を測
定した。なお、ｌＡｍｏｌｅのヌクレオシドジリン酸を
１時間に重合する酵素量を１単位とした。
‘３１‘１１で得られた酵素によるボリヌクレオチドの
合成【１１でトリプシン処理後の酵素を用いてアデンノ
シンジリン酸（ＡＤＰ）シチジンジリン酸（ＣＤＰ）、
ウリジンジリン酸（ＵＤＰ）、グアノシンジリン酸（Ｇ
ＤＰ）より各ホモポリマ−を合成した。
合成【１１でトリプシン処理後の酵素を用いてアデンノ
シンジリン酸（ＡＤＰ）シチジンジリン酸（ＣＤＰ）、
ウリジンジリン酸（ＵＤＰ）、グアノシンジリン酸（Ｇ
ＤＰ）より各ホモポリマ−を合成した。
反応液は５０机Ｍグリシンーカセィソーダ緩衝液、塩化
マグネシウム、１机Ｍヌクレオシドジリン酸、ｌＯＡＭ
〔アデニルイル−（３′→５′）〕３ アデノシン（Ａ
ｐＡｐＡｐＡ）及び０．６単位／叫のｍで得られた酵素
液からなり全量を１の【とし１時間反応させた。
マグネシウム、１机Ｍヌクレオシドジリン酸、ｌＯＡＭ
〔アデニルイル−（３′→５′）〕３ アデノシン（Ａ
ｐＡｐＡｐＡ）及び０．６単位／叫のｍで得られた酵素
液からなり全量を１の【とし１時間反応させた。
‘２｝の〔重合活性測定法〕に記載した方法に従い、ペ
ーパークロマトグラフィーを行い収率を以下の式により
求めた。収率＝ス建毒害弓残し享隼室放放額篭能 緩衝液のｐＨ、塩化マグネシウムの濃度、反応温度の最
適条件及び収率は次の通りであった。
ーパークロマトグラフィーを行い収率を以下の式により
求めた。収率＝ス建毒害弓残し享隼室放放額篭能 緩衝液のｐＨ、塩化マグネシウムの濃度、反応温度の最
適条件及び収率は次の通りであった。
Claims (1)
- １ 高度好熱細菌ＨＢ−８より得られるポリヌクレオチ
ドホスホリラーゼをトリプシン処理し、加リン酸分解活
性がほとんどないポリヌクレオチドホスホリラーゼを得
ることを特徴とするポリヌクレオチドホスホリラーゼの
処理方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP949377A JPS6015310B2 (ja) | 1977-01-31 | 1977-01-31 | ポリヌクレオチドホスホリラ−ゼの処理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP949377A JPS6015310B2 (ja) | 1977-01-31 | 1977-01-31 | ポリヌクレオチドホスホリラ−ゼの処理方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5396383A JPS5396383A (en) | 1978-08-23 |
| JPS6015310B2 true JPS6015310B2 (ja) | 1985-04-18 |
Family
ID=11721750
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP949377A Expired JPS6015310B2 (ja) | 1977-01-31 | 1977-01-31 | ポリヌクレオチドホスホリラ−ゼの処理方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6015310B2 (ja) |
-
1977
- 1977-01-31 JP JP949377A patent/JPS6015310B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5396383A (en) | 1978-08-23 |
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