JPS62134096A - Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 - Google Patents
Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法Info
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- JPS62134096A JPS62134096A JP60275162A JP27516285A JPS62134096A JP S62134096 A JPS62134096 A JP S62134096A JP 60275162 A JP60275162 A JP 60275162A JP 27516285 A JP27516285 A JP 27516285A JP S62134096 A JPS62134096 A JP S62134096A
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
ム呈上二且貝立国
本発明は、母乳中に含まれているオリゴ塘の一種である
Ｎ−アセチルラクトサミンを、複合酵素系による同一系
内での反応により短時間で合成するための方法に関する
。
Ｎ−アセチルラクトサミンを、複合酵素系による同一系
内での反応により短時間で合成するための方法に関する
。
皿米坐狭±
Ｎ−アセチルラクトサミン（以下ＬａｃＮＡＣと略記す
る）は、人乳オリゴ糖あるいは糖タンパク賞、糖脂質の
１！鎖中に含まれる、ガラクトースとＮ−アセチルグル
コサミンがβ１．４結合した２糖類であって、腸内にお
けるビフィズス菌の増殖活性を有していて優れた整腸作
用を示すことから、育児用調製粉乳のような高度栄養食
品への利用上重要視されている。
る）は、人乳オリゴ糖あるいは糖タンパク賞、糖脂質の
１！鎖中に含まれる、ガラクトースとＮ−アセチルグル
コサミンがβ１．４結合した２糖類であって、腸内にお
けるビフィズス菌の増殖活性を有していて優れた整腸作
用を示すことから、育児用調製粉乳のような高度栄養食
品への利用上重要視されている。
ところで、従来、ＬａｃＮＡＣの合成法については、Ｂ
ｒｅｗ ｅｔ ａｌ、の輻告 プロシーデングス・オブ
・ザ・ナショナル・アカデミ−・オプ・サイエンス・オ
ブ・ニー・ニス・エイ （Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａ
ｄ、Ｓｃｉ。
ｒｅｗ ｅｔ ａｌ、の輻告 プロシーデングス・オブ
・ザ・ナショナル・アカデミ−・オプ・サイエンス・オ
ブ・ニー・ニス・エイ （Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａ
ｄ、Ｓｃｉ。
Ｕ、Ｓ、 、５９．４９１．１９６Ｂ ）がある。この
方法は、ウリジンジリン酸ガラクトースとＮ−アセチル
グルコサミンを基質として、これに牛乳由来の牛乳ガラ
クトシルトランスフェラーゼを作用させてＬａｃＮＡＣ
を合成することから成る。
方法は、ウリジンジリン酸ガラクトースとＮ−アセチル
グルコサミンを基質として、これに牛乳由来の牛乳ガラ
クトシルトランスフェラーゼを作用させてＬａｃＮＡＣ
を合成することから成る。
しかし、この合成法は、基質として用いるウリジンジリ
ン酸ガラクトースが高価であるため、工業的規模での合
成法としては実用性に乏しい。
ン酸ガラクトースが高価であるため、工業的規模での合
成法としては実用性に乏しい。
一方、基質であるウリジンジリン酸ガラクトースの製造
法として、ウリジンモノリン酸とガラクトースを含む反
応液に、サツカロミセス属、キャンデイダ属、トルロプ
シス属もしくはプレタノマイセス属に属する微生物の菌
体もしくは乾燥菌体等を作用させることにより、ウリジ
ンジリン酸ガラクトースを比較的で高収率で合成する方
法（特公昭４７−１８３７号）が提案されている。
法として、ウリジンモノリン酸とガラクトースを含む反
応液に、サツカロミセス属、キャンデイダ属、トルロプ
シス属もしくはプレタノマイセス属に属する微生物の菌
体もしくは乾燥菌体等を作用させることにより、ウリジ
ンジリン酸ガラクトースを比較的で高収率で合成する方
法（特公昭４７−１８３７号）が提案されている。
しかし、上記方法を利用してＬａｃＮＡＣを合成するに
は、該方法で得られたウリジンジリン酸ガラクトースと
Ｎ−アセチルグルコサミンを基質とし、これに牛乳ガラ
クトシルトランスフェラーゼを作用させて反応させると
いう２工程の組合わせが必要となり、各工程毎での作業
管理を別々に行うことも必要となるので工業上有利な合
成法とは言えない。
は、該方法で得られたウリジンジリン酸ガラクトースと
Ｎ−アセチルグルコサミンを基質とし、これに牛乳ガラ
クトシルトランスフェラーゼを作用させて反応させると
いう２工程の組合わせが必要となり、各工程毎での作業
管理を別々に行うことも必要となるので工業上有利な合
成法とは言えない。
明が解ンしようとする問題点
本発明者らは、ＬａｃＮＡＣを工業的に−そう効率よく
合成するための方法について検討した結果、ＬａｃＮＡ
Ｃを１工程で効率よく合成し得る方法を達成し、本発明
をなすに至った。
合成するための方法について検討した結果、ＬａｃＮＡ
Ｃを１工程で効率よく合成し得る方法を達成し、本発明
をなすに至った。
すなわち、本発明の目的は、複合酵素系を用いてウリジ
ンジリン酸ガラクトースの合成反応とＬａｃＮＡＣの合
成反応を同一系内で行うことにより、ＬａｃＮＡＣを１
工程で極めて短時間で効率よ（合成するための方法を提
供することにある。
ンジリン酸ガラクトースの合成反応とＬａｃＮＡＣの合
成反応を同一系内で行うことにより、ＬａｃＮＡＣを１
工程で極めて短時間で効率よ（合成するための方法を提
供することにある。
因に、従来の２工程力式では、ウリジンリン酸ガラクト
ースを反応液からイオン交換樹脂を用いて精製する必要
があり、反応開始からウリジンリン酸ガラクトースを得
るのに１０日間以上を要する。
ースを反応液からイオン交換樹脂を用いて精製する必要
があり、反応開始からウリジンリン酸ガラクトースを得
るのに１０日間以上を要する。
以下本発明の詳細な説明する。
ユ更鬼盪底
本発明の特徴は、５′−ウリジンモノリン酸、ガラクト
ースおよびＮ−アセチルグルコサミンを含む基質に、ト
ルロプシス属に属するウリジンジリン酸ガラクトース産
生能を有する微生物と牛乳ガラクトシルトランスフェラ
ーゼを同時的に作用させてＮ−アセチルラクトサミンを
合成することにある。
ースおよびＮ−アセチルグルコサミンを含む基質に、ト
ルロプシス属に属するウリジンジリン酸ガラクトース産
生能を有する微生物と牛乳ガラクトシルトランスフェラ
ーゼを同時的に作用させてＮ−アセチルラクトサミンを
合成することにある。
間 点を７°するための手段
本発明において用いる微生物は、トルロプシス属に属す
る酵母であって、菌体自体、菌体磨砕物、菌体抽出物も
しくは乾燥菌体等の形態で使用し得る。ここで利用する
微生物としてはトルロプシス・ホルミイ−（Ｔｏｒｕｌ
ｏｐｓｉｓ Ｈｏ１ｍ１ｉ）にＹ−５（微工研寄第５７
６６号）、トルロプシス・キャンプイタ（Ｔｏｒｕｌｏ
ｐｓｉｓ ｃａｎｄｉｄａ） ＩＦＯ０７６８を例示で
きる。
る酵母であって、菌体自体、菌体磨砕物、菌体抽出物も
しくは乾燥菌体等の形態で使用し得る。ここで利用する
微生物としてはトルロプシス・ホルミイ−（Ｔｏｒｕｌ
ｏｐｓｉｓ Ｈｏ１ｍ１ｉ）にＹ−５（微工研寄第５７
６６号）、トルロプシス・キャンプイタ（Ｔｏｒｕｌｏ
ｐｓｉｓ ｃａｎｄｉｄａ） ＩＦＯ０７６８を例示で
きる。
これらの微生物の培養はその特性に応じて行われるが、
通常の微生物の培養に用いられる培地中で行われる。例
えば、炭素源として可溶性デンプン、乳糖、グルコース
、ガラクトース、ショ糖等、窒素源としてペプトン、肉
エキス、酵母抽出物を含む培地を用いることができる。
通常の微生物の培養に用いられる培地中で行われる。例
えば、炭素源として可溶性デンプン、乳糖、グルコース
、ガラクトース、ショ糖等、窒素源としてペプトン、肉
エキス、酵母抽出物を含む培地を用いることができる。
また、本発明で用いられる牛乳ガラクトシルトランスフ
ェラーゼは、牛乳から採取、精製したものが用いられる
が、必ずしも高度に精製したものでなくてもよく、部分
精製したものでも有効に用い得る。
ェラーゼは、牛乳から採取、精製したものが用いられる
が、必ずしも高度に精製したものでなくてもよく、部分
精製したものでも有効に用い得る。
本発明では、上記微生物および牛乳ガラクトシルトラン
スフェラーゼを、５′−ウリジンモノリン酸、ガラクト
ースおよびＮ−アセデルグルコサミンを含む反応基質に
同時的に添加して作用させる。
スフェラーゼを、５′−ウリジンモノリン酸、ガラクト
ースおよびＮ−アセデルグルコサミンを含む反応基質に
同時的に添加して作用させる。
この場合、反応基質のｐＨを４〜９、温度５〜４０℃に
保持して２〜６日間作用させることが好ましい。また、
反応基質における各原料物質は、ウリジンモノリン酸を
０．５〜４ｇ％、ガラクトースを３〜６ｇ％、リン酸緩
衝液２〜４ｇ％及びＮ−アセチルグルコサミンを１００
〜３００ｍＭ？ＥＢ度となし、上記酵母（乾燥菌体とし
て）を１０〜２０ｇ％および牛乳ガラクトシルトランス
フェラーゼ１〜５ｇ％の割合の組成にすることが好まし
い。なお、基質にはリン酸供与体（リン酸として＞ ２
００〜４００ｍモル濃度および酵母の生育促進物質とし
てマグネシウム塩（ＭｇＳＣとして）１０〜３０ ｍモ
ル濃度の割合で添加する。ここでＭｇ−は酵母のエネル
ギー生成反応に関与する酵素を活性化する。
保持して２〜６日間作用させることが好ましい。また、
反応基質における各原料物質は、ウリジンモノリン酸を
０．５〜４ｇ％、ガラクトースを３〜６ｇ％、リン酸緩
衝液２〜４ｇ％及びＮ−アセチルグルコサミンを１００
〜３００ｍＭ？ＥＢ度となし、上記酵母（乾燥菌体とし
て）を１０〜２０ｇ％および牛乳ガラクトシルトランス
フェラーゼ１〜５ｇ％の割合の組成にすることが好まし
い。なお、基質にはリン酸供与体（リン酸として＞ ２
００〜４００ｍモル濃度および酵母の生育促進物質とし
てマグネシウム塩（ＭｇＳＣとして）１０〜３０ ｍモ
ル濃度の割合で添加する。ここでＭｇ−は酵母のエネル
ギー生成反応に関与する酵素を活性化する。
上記基質に酵母と牛乳ガラクトシルトランスフェラーゼ
を同時的に添加して作用させると、酵母の作ｍによるウ
リジンモノリン酸とガラクトースとからのウリジンジリ
ン酸ガラクトースの合成反応と、牛乳ガラクトシルトラ
ンスフェラーゼによるウリジンジリン酸ガラクト〜スと
Ｎ−アセチルグルコサミンとからのＬａｃＮＡＣの合成
反応が同一系内で行われ、Ｌ ａ ｃ １Ｖ Ａ Ｃが
従来の２工程の組合わせから成る方法に比べて非常に短
時間で合成される。
を同時的に添加して作用させると、酵母の作ｍによるウ
リジンモノリン酸とガラクトースとからのウリジンジリ
ン酸ガラクトースの合成反応と、牛乳ガラクトシルトラ
ンスフェラーゼによるウリジンジリン酸ガラクト〜スと
Ｎ−アセチルグルコサミンとからのＬａｃＮＡＣの合成
反応が同一系内で行われ、Ｌ ａ ｃ １Ｖ Ａ Ｃが
従来の２工程の組合わせから成る方法に比べて非常に短
時間で合成される。
このような複合酵素系を同時的に作用させることにより
、上記再反応が同一系内で効率釣行われるのは、本発明
で利用する微生物の特性に因るものと推定されるが、Ｌ
ａｃＮＡＣ合成上の従合成波術水準からは予期し得ない
ことである。
、上記再反応が同一系内で効率釣行われるのは、本発明
で利用する微生物の特性に因るものと推定されるが、Ｌ
ａｃＮＡＣ合成上の従合成波術水準からは予期し得ない
ことである。
上述のようにして得られたＬａｃＮＡＣは、必要に応４
じてイオン交換樹脂および活性炭で処理して分離、
精製される。
じてイオン交換樹脂および活性炭で処理して分離、
精製される。
以下に実施例を示して本発明を更に具体的に説明する。
実施例
莫１１戸穀■肌鼠
トルロプシス・ホルミイ−ＫＹ−５株（Ｔｏｒｕ １ｏ
ｐｓ ｉｓｈｏｌｍｉｉ ＫＹ−５）ａｔｋ工研菌寄第
５７６６号を、ガラクトース５０ｇ、ペプトン５ｇ、酵
母エキス５ｇ、リン酸−１−カリウム２ｇ１リン酸−２
−アムモニウム２ｇ、および硫酸マグネシウム７水和物
１ｇを含む培養液１！に接種して、３０℃で７２時間振
とぅ培養した。培養終了後に、８０００Ｇで３０分間遠
心分離して集菌し、１ｉの水を加えて数回洗浄した後、
凍結乾燥して乾燥酵母３０ｇを調製した。
ｐｓ ｉｓｈｏｌｍｉｉ ＫＹ−５）ａｔｋ工研菌寄第
５７６６号を、ガラクトース５０ｇ、ペプトン５ｇ、酵
母エキス５ｇ、リン酸−１−カリウム２ｇ１リン酸−２
−アムモニウム２ｇ、および硫酸マグネシウム７水和物
１ｇを含む培養液１！に接種して、３０℃で７２時間振
とぅ培養した。培養終了後に、８０００Ｇで３０分間遠
心分離して集菌し、１ｉの水を加えて数回洗浄した後、
凍結乾燥して乾燥酵母３０ｇを調製した。
牛 ガラクトシルトランスフェラーゼの調製４１の脱脂
乳に４０１！の蒸留水を加えて、これに乾燥Ｃトセファ
デックスＣ−５０２０ｇを加えて酢酸でｐｌ＋ ６．５
に工周整した。
乳に４０１！の蒸留水を加えて、これに乾燥Ｃトセファ
デックスＣ−５０２０ｇを加えて酢酸でｐｌ＋ ６．５
に工周整した。
次に、上記混合液を濾過して得たゲルを２１の０．０２
モル濃度食塩で洗浄後、カラム（φ１０ Ｘ ４０ｍｍ
）に充填し、０．１モル濃度ジメチルグルタル酸ナトリ
ウム（ｐＨ８，０）で溶出した。この溶出により得られ
た活性を有する両分を集め、これに等容の硫安飽和溶液
を加えて生した沈澱を８ 、０ＯＯＧで１５分間遠心分
離して集めた。沈澱物に少量の水を加えて溶解して透析
した後、凍結乾燥して牛乳ガラクトシルトランスフェラ
ーゼ２００ｍｇを調製した。
モル濃度食塩で洗浄後、カラム（φ１０ Ｘ ４０ｍｍ
）に充填し、０．１モル濃度ジメチルグルタル酸ナトリ
ウム（ｐＨ８，０）で溶出した。この溶出により得られ
た活性を有する両分を集め、これに等容の硫安飽和溶液
を加えて生した沈澱を８ 、０ＯＯＧで１５分間遠心分
離して集めた。沈澱物に少量の水を加えて溶解して透析
した後、凍結乾燥して牛乳ガラクトシルトランスフェラ
ーゼ２００ｍｇを調製した。
ＬａｃＮＡＣの合成反応
５′−ウリジンモノリンＭ １．９ｇ ％、ガラクトー
ス３．６ｇ％、リン酸緩衝液２ｇ％、硫酸マグネシウム
０．１４８％、Ｎ−アセチルグルコサミン３．４ｇ％、
上記の方法で調製した乾燥酵母Ｌｏｇ％および牛乳力゛
；／７＋−・’ｙＬｌ−４′／１フ丁石−Ｊ １ 戸ｎ
ｏｘ ｆ−、外す・混液Ｉｏｎ ｇを、３０℃で５日
間反応させた。反応により反応液１００１１１１当り、
１．５ｇ％のＬａｃＮＡＣが合成された。
ス３．６ｇ％、リン酸緩衝液２ｇ％、硫酸マグネシウム
０．１４８％、Ｎ−アセチルグルコサミン３．４ｇ％、
上記の方法で調製した乾燥酵母Ｌｏｇ％および牛乳力゛
；／７＋−・’ｙＬｌ−４′／１フ丁石−Ｊ １ 戸ｎ
ｏｘ ｆ−、外す・混液Ｉｏｎ ｇを、３０℃で５日
間反応させた。反応により反応液１００１１１１当り、
１．５ｇ％のＬａｃＮＡＣが合成された。
分遣ｕｖ擬
前記の条件で反応させて得られた反応混合液１０ｍｊ！
を、０．４５μｍメンプランで濾過して菌体成分を除い
た後、ダウエックスｌＸ２（ＣＩ型）カラム（φ１０
Ｘ １０ｃｍ）に通じて核酸を除いた。
を、０．４５μｍメンプランで濾過して菌体成分を除い
た後、ダウエックスｌＸ２（ＣＩ型）カラム（φ１０
Ｘ １０ｃｍ）に通じて核酸を除いた。
次に得られた液を活性炭：ゼオライｔ−（２：１）カラ
ム（φ１０ Ｘ ３０ｃｍ）に１ｆｆｉして十分量の水
を流して未反応のガラクト−スルＮ−アセチルグルコサ
ミンを除いた後、５０％アルコール２Ｉｔを通じてＬａ
ｃＮＡＣを溶出させた。溶出液を濃縮乾燥して白色粉末
１３０ｍｇを得た。この標品中のＬａｃＮＡＣ純度は９
２％であった。
ム（φ１０ Ｘ ３０ｃｍ）に１ｆｆｉして十分量の水
を流して未反応のガラクト−スルＮ−アセチルグルコサ
ミンを除いた後、５０％アルコール２Ｉｔを通じてＬａ
ｃＮＡＣを溶出させた。溶出液を濃縮乾燥して白色粉末
１３０ｍｇを得た。この標品中のＬａｃＮＡＣ純度は９
２％であった。
Claims (2)
- （１）５′−ウリジンモノリン酸、ガラクトースおよび
Ｎ−アセチルグルコサミンを含む基質に、トルロプシス
属に属するウリジンジリン酸ガラクトース産生能を有す
る微生物と牛乳ガラクトシルトランスフエラーゼを同時
的に作用させて上記微生物による５′−ウリジンモノリ
ン酸とガラクトースとからのウリジンジリン酸ガラクト
ースの合成反応と、牛乳ガラクトシルトランスフエラー
ゼによるウリジンジリン酸ガラクトースとＮ−アセチル
グルコサミンとからのＮ−アセチルラクトサミンの合成
反応とを同一系内で行うことを特徴とするＮ−アセチル
ラクトサミンの合成法。 - （２）同一系内での上記両合成反応を、ｐＨ４〜９、温
度５〜４０℃において２〜６日間行う特許請求の範囲第
（１）項記載の合成法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60275162A JPS62134096A (ja) | 1985-12-09 | 1985-12-09 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60275162A JPS62134096A (ja) | 1985-12-09 | 1985-12-09 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62134096A true JPS62134096A (ja) | 1987-06-17 |
| JPH0582200B2 JPH0582200B2 (ja) | 1993-11-17 |
Family
ID=17551536
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60275162A Granted JPS62134096A (ja) | 1985-12-09 | 1985-12-09 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62134096A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0414171A2 (de) * | 1989-08-23 | 1991-02-27 | Hoechst Aktiengesellschaft | Verfahren zur enzymatischen Synthese galactosylierter Glycoprotein-Bausteine |
| WO1998012343A1 (fr) * | 1996-09-17 | 1998-03-26 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Procedes de production de nucleotides de sucre et de glucides complexes |
-
1985
- 1985-12-09 JP JP60275162A patent/JPS62134096A/ja active Granted
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0414171A2 (de) * | 1989-08-23 | 1991-02-27 | Hoechst Aktiengesellschaft | Verfahren zur enzymatischen Synthese galactosylierter Glycoprotein-Bausteine |
| WO1998012343A1 (fr) * | 1996-09-17 | 1998-03-26 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Procedes de production de nucleotides de sucre et de glucides complexes |
| US6821756B2 (en) | 1996-09-17 | 2004-11-23 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Processes for reproducing sugar nucleotides and complex carbohydrates |
| US6964858B2 (en) | 1996-09-17 | 2005-11-15 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Processes for producing sugar nucleotides and complex carbohydrates |
| CN100342025C (zh) * | 1996-09-17 | 2007-10-10 | 协和发酵工业株式会社 | 糖核苷酸类及复合糖类的制备方法 |
| CN100436593C (zh) * | 1996-09-17 | 2008-11-26 | 协和发酵工业株式会社 | 复合糖类的制备方法 |
| US8435763B2 (en) | 1996-09-17 | 2013-05-07 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Processes for producing sugar nucleotides and complex carbohydrates |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0582200B2 (ja) | 1993-11-17 |
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Legal Events
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| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |