JPS59102389A - 微生物代謝物質および酵素の生物学的製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明け、先駆物質化合物の発酵反応による微生物代謝
物質の生物学的製造方法ならびに細菌類、酵母類捷た＆
′ｉ閉系体系体形成菌類うな生きている微生物からなる
生物体量（Ｂｉｏｍａｓθｅ）を用いエフェクター化合
物の添加による酵素の製造方法に関する。

本発明は、所望の物質の収量を高めることそしてこれら
の物質を直接にそのまま使用しうるかまたはそれから同
様に簡単な方法で分離しそして精製しうるような形で上
記物質を生産することを目的としている。

微生物を用いて先駆物質化合物を反応せしめて半合成生
成物を得ることは公知となっている。

ここに、先駆物質とは、適当な微生物によって若干の酵
素的変化段階を経て次の生成物へと反応せしめられるよ
うな化合物を意味する。これらの副次生成物は、好まし
くは、薬物学的に使用しうる貴重な物質であり、化学的
合成法によっては得ることが困難であるか、または従来
はとんどできなかったものである。

ドイツ特許第５４８，４５９号によれば、例えば、ベン
ズアルデヒドは、フェニルアセチルカルカルビノールへ
と発酵的に変換されることができ、それから更に化学的
変換により薬物学的に貴重なエフェドリンが得られる。

米国特許第３、２８１．４０７号によれば、ンステイン
、グルタミン酸およびグリシンの発酵的結合によって荒
物学的に＠要なペブナドであるグルタチオンを製造しう
る。特公昭５０−３１５４６号公報によねげ、５′−シ
チジル酸およびコリンから酵母？用いて薬物ンチジンジ
ホスホルコリンを製造することができる。

生物体計に適当なエフェクター化合物を添加することに
より、酵素反応の反応速度を高めそしてそれによって生
物体量中の所望の化合物の濃度をより大にすることがで
きる。

上記の、そしてその他の対応する反応は、通常希薄な水
性相中で水中発酵として実施される。

微生物の物質代謝生理学においては、代謝物質および酵
素の生産度は、一般に使用された先駆物質またけエフェ
クターの濃度に著しく左右され、しかも大抵の場合生産
度は濃度と共に増大する。

水中発酵の場合、反応バッチは、大抵９０チ以上まで水
からなっている。従って、この場合先駆物質重／こけエ
フェクターは、−生物体量に関して□先駆物質またはエ
フェクター〇十分に大きなＭＵが、そしてそれによって
所望の代謝物質または酵素の増大しうる収量が得られる
ように、比較的多量に使用されなければならない。

従って、微生物が水中発酵の場合よりもより犬なる濃度
で存在し、しかもその際微生物が置かれている諸や件を
、物質代謝の過程が所望の方向に進行せしめるという要
請ニ合致せしめ得るという、代謝物質および酵素の生物
学的製造法を見出すという課題があった。

この課題け、本発明によれば、流動可能粒子の形の生き
ている生物体ｉｔ先駆物質またはエフェクターと一緒に
し、そして流動床反応器内で培養するという方法によっ
て解決される。生物体計は、細菌、酵母または菌糸体形
成菌がらなり−それぞれ粒状で一５℃ないし８０℃の温
度のガス流中で運動されうる。先駆物質またはエフェク
ターは、粒状化の前に生物体量に加えられるかまたは懸
濁液または溶液として、流動床中に存在する粒子上にス
プレーされるか、あるいけこれらの物′ｍがガス状であ
る限りガス流に添加されうる。流動床反応器中における
流動しうる粒子の滞留時間は、１０分ないし１０時間で
ある。

反応終了後、生物体量は、粒状化粒子の形で更に加工さ
れることなくそのまま使用されうるか、または防腐剤の
添加により湿潤状態で貯蔵可能にされうるか、または流
動床中で引続き乾燥することにより貯蔵可能にされうる
か、捷たｔ口 は分動の方法で処理して、生産された代謝物質または酵
素を生物体計から分離しそして場合によっては純粋な形
で得ることができる。

本発明による方法においては、微生物をを巻く水の情け
、水中発酵の場合よりもかなり少ない。例えば、乾燥物
質３５チを有する粒状ｌ！ｉ￥母を使用する場合にｊｒ
Ｉｊ、酵母の細胞以外には、はとんど水が存在しない。

それによって生物体素上、に先駆物質またはエフェクタ
ーの比較的高い濃度が達成きれ、それによって多くの発
酵曲尺Ｌｅ７、が促イｔされあるいけ初めて可能になる
。

生きている生物体素首）ら流動可能の粒子を製造するた
めには、公知の水中法に従って培養を０７７号に記載さ
れている方法に従って流動可能粒子へと修正される微生
物が使用される。その際、粒状化を容易にするかまたは
可能にする添加物質または相体物質を添加しうる。先駆
物質またはエフェクターは、この場合、溶解された形、
懸濁された形または固体の形で生物体量に合体されうる
。

流動可能粒子は、流動床反応器内でガス流によりそして
場合によっては機械的運動によって流動化てれる。嫌気
性条件が保たれるならば、流動床は、９素、二酸化炭素
またはその仲の不活性ガスを用いて操作される。好気性
条件が要求される場合にｌｄ、流動床は、酸素捷たけ酸
素含有ガス例えば空気を用いて操作される。

生きている生物体量中の物質代謝を妨げないために、流
動化に用いられるガス流が生物体９を乾燥はせないよう
にする。それ故、上記ガス流は、有利には水で飽和せし
められ、そして場合によっては、流動床中に存在する粒
子上・に更に若干の水をスプレーする。このスプＶ−水
と共に、同時に先駆物質またはエフェクターを粒子上に
もたらすことができる。場合によっては、エネルギーを
消費する反応の際に必要なエネルギーを微生物に追加的
に付与する栄養素成分の限定量を炉に上記スプレー水に
添加しうる。

この本発明による発酵的反応の際に用台によってＶｉ遊
離する熱耽け、僅少である。何故ならば、成長過程は、
進行せず、そして実際と新たな生物体量は生産されない
からである。流動床反応器中の所望の温度は、それぞれ
の用台に、流動化に用いられるガスの適当な温度全選択
することによって維持芒れる。

本発明による方法ｄ１下記の利点を有するニー製浩芒れ
た代謝物質および酵素は、それらが巷物学的用途に直接
適した形で得られる。

−それらが−有Ｔｐであるかまたは生理学的に融和性の
ないものである限り一生産された代謝物質または酵素か
ら分離されなければならないような化学的触媒をいかな
る場合にも使用しない。

流動可能な形の生物体量には、細胞壁の透過性を通常著
しく高めるとしても、生物体量の活性を変化させないよ
うな物質を添加してもよい。水中発酵の場合には、その
ような物質は、細胞内容物が周囲の水性媒質中に流出さ
れるので微生物を不可逆的に損傷を与えるであろう。

先駆物質は、ある場合には、水中発酵の場合よりもよく
反応する。

この方法は、特に経済的である。何故ならば、必要な微
生物を本発明の方法に依存せずにその上池の目的に最適
の生長条件下に工秦的規模で培養し、そしてこれによっ
て必要な量を流動可能な粒子に修正する目的で分けるこ
とができるからである。

代謝物質および酵素がすでに存在する生物体量において
生産される。そのために必要な物質代謝過程にとって、
生物体量の培養の際の生長条件とは無関係な最適の条件
が選択芒れうる。

−この方法は、従来純粋に化学的方法では得られなかっ
たような代謝物質および酵素をもまた許容しうる収量で
製造することを可能にする。

一本発明の方法に従って、水中光１グにおいては全く従
属的な範囲でのみ進行するような反応もまた可能となる
。

一本方法は、装置およびエネルギーについて中程度の大
きさの豊川しか必要としない。

本発明による方法を以下の例によって説明するが、そり
、に限定をれるものではない。

６°１１１：酵母中におけるグルタチオンの富有化トリ
ペプチドグルタチオンは、なかんずく薬物学的調合物に
おいて使用される。酵母に先駆物質化合物たるＬ−ンス
ティン、グリシン、Ｌ−グルタミン酸ならびにＬ−乳酸
アンモニウムを添加することによって、グルタチオンハ
、酵母中で富有化される。

混合し、そしてＯ，Ｓ、のメツシュ巾を有する金網布に
よって圧縮した。粒状物を流動床反応器に充填し、そし
て湿潤空気の流れを用いて運動せしめた（速度０．８　
＠　／　８：温度２５℃）。

酵母（湿損したもの）１ゆ当シ溶液０．２　ｔの全量の
先駆物質溶液を流動化でれた粒子上に１時間以内に数個
の部分に分けて噴霧した。水性溶液は、以下のものを含
有していた： Ｌ−システィン・ＨＣｌ２０　ｆ／ｌ グリシン　　　　　　　　　　１０ｆ／ｌＬ−グルタミ
ン酸　　　　　　１ａｙ／を乳酸アンモニウム　　　　
　３ａｔ／を次に、更に１時間の間に空気流中で２５℃
において培養した。この時間内に酵母（湿潤したもの）
１．ｋｇ当り全部で約０．２１の水を流動化された粒子
にスプレーした。

流動床反応器中で全部で２時間の滞留時間の後に、（Ｉ
′ｆ母の乾燥物質の割合は、３３％から４５５％へと１
村しｔｏ 分析のためＶＣ酵母を抽出した。僅か１チのリン酸中に
酵母１１１！濁させ、次いで１０ｒｎｅとなる寸で満し
た。この懸濁液を水浴中で６０’Ｃに５分間加熱し、そ
して酵母の細胞を、遠心分離にかけた。透明な上澄み中
のグルタチオン含量ヲヘルント（Ｂｅｒｎｔ　）　オよ
びベルクマイヤー（Ｂθｒｇｍθｙｅｒ　）の方法によ
りグリオキサラーゼを用いて酵素的に測定した〔ベルク
マイヤー：酵素分析法；　ｑｖ　３版（１９７４年）第
１６８７〜１６９２頁（Ｈ，Ｕ、　Ｂｅｒｃ（ｍｅｙｅ
ｒ　：　Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　ｄｅｒｅｎｚｙｍａｔｉｓ
ｃｈｅｎ　Ａｎａｌｙｓｅ　、　Ｖｅｒｌａｇ　Ｃ！ｈ
ｅｍｉｅ　。

Ｗｅｉｎｈｅｉｍ　）　　参照〕。

酵母中のグルタチオンの合計け、酵母の乾燥物質に関し
てそれぞれ０．４５憾から２４係まで、すなわち通常の
含量の約５倍まで上昇していた。

１’Ｖｌ＋２：酵母によるアセトインの生成芳香物質ア
セトインは、先駆物質化合物アセトアルデヒドから生成
される。

粒状化酵母を例１と同様にして調製し、流動床反応器に
充填しそして湿潤空気を用いて流動化した（速度０．８
　ｍ／　ｓ　：温度２５℃）。

流動化された粒子上に（湿潤）酵母１ｋｇ当り溶液０．
２１の全景の先駆物質溶液を１時間内に数個の部分に分
けてスプレーした。この水溶液は、次のものを含有して
いた： アセトアルデヒド　　　　　１００ｆ／ｌグルコース（
栄養素成分として）　　　　３ｏｏｔ／を次に、更に１
時間の間２５℃の空気中で培養した：この時間中（湿潤
）酵母１ｋｇ当り全部で約ｒＪ、２ｔの水をスプレーし
念。

ｒ＆動床反応器中で全部で２時間の滞留時間の後に、酵
母の乾燥物質の割合は、３３チから５８ｑｂまで上昇し
た。

分析のために酵母を例１と同様に抽出した。

透明な上澄みについてアセトイン含量をウェスターフイ
ールド（Ｗ＠５ｔｅｒｆｉθ１ａ　）の方法に従って測
定した〔ジャーナル・オブ・バイオ°ロジカル・　　　
ケ　ミ　ス　ト　　リ　−（Ｊｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　
　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ　）　第１
ｂ　１巻（１９４５年）　第４９５頁珍重）６］。

酵母中のアセトインの含ｉｌＥ＃′ｉ、酵母の乾燥物質
に関してそれぞれ検出限界以下（＜１０ｐｐｍ）の値か
ら１３０　ｐｐｍまで上昇していた。

酵母（５ａｃｃｈ、ｃｅｒｅｖｉｅｉａｅ　）　　ｌ’
Ｉ、ケトンをアルコールに還元することができる。

粒状化された酵母を例１と同様に調製し、流動床反応器
に充填しそして２５℃の湿潤窒素を用いて流、勧化した
。

流動化された粒子の上に、（湿潤）酵母１ｋｇ当り乳濁
液０．２ｔの全量の先駆物質乳濁液を１時間［１に数回
に分けてスプレーした。この水性乳濁液は、次のものを
含有していた： ブタノールー（２）　　　　　　１５０　ｔ／を乳化剤
（Ｂｒ１ｊ　３５　）　　　　　　１１！／Ｌ流動床反
応器中で全部で１時間の滞留時間の後に、酵母の乾燥物
質の割合は、３６％から３７％まで上昇した。

分析のために酵母の一部を例１と同様に抽出した。透明
な上澄みを気−液クロマトグラフイーを用いて検査を行
なった。

処理前にはブタノン−（２）もブタノール−（２）も含
有していなかった酵母中に、処理後では酵母の乾燥物質
に門してそれぞれブタノン−（２１１，１係およびブタ
ノール−ｒｚ）　１．２％が検出きれた。

すなわち、ケトンの大部分け、対応するアルコールに還
元されていた。

セレンは、有梼、的に結合した形（蛋白質中のセレン含
有アミノ酸）で薬物学的１ｃ４？に有利に作用する必須
的痕跡元素である。酵母は、無機的に結合したセレンが
存在するアミノ酸を生成することができる。

例１による酵母顆粒の調製前に、酵母に（湿潤した酵母
の塊シに関して） 二酸化セレン（Ｓｅ０，１）　　　　　　０．０２１と
共に捏和しそしてスクリーンを通して圧縮した。粒状化
された酵母を流動床反応器に充填しそして２５℃の湿ｎ
空気を用いて流動化した。

流動化てれた粒子上に、（湿潤）酵母１ｋｇ当り溶液約
Ｏ，Ｓ　ｔの全列の１０％グルコース（栄養素成分とし
て）の水溶液を数回に分けて２時間内にスプレーした。

流動床反応器内で全部で２時間の７１１チ留時間の後に
、乾燥物質の割合は、３３％から５９チまで上昇した。

分析のために酵母１０２を１係のリン酸６０ゴ中に懸濁
し、６０℃に５分間加熱しそして遠心分離にかけた。透
明な上澄を注ぎ出し、残渣を更に２回１％のリン酸と共
に攪拌しそして遠心分離しｔＯＮ製した透明な上澄みに
ついて、患 リン酸で抽出された無機的に存在する二酸セレンを分光
分析にかけ（Ｈ，Ａｒ１ｙｏＦ３ｈｉ　ｅｔ　ａｌ　。

Ｔａ１ａｎｔａ　５　；　Ｐｅｒｇａｍｏｍ　Ｐｒｅｓ
ｓ　　（１９６０）、ｐ、１１２参照）あるいは開示に
よれば非抽出性の形で存在する有機的に結合されたセレ
ンを分析した。

流動床反応器における処理的においては、酵母顆粒は、
−乾燥物質に関して−（０，００２チの有機的に結合さ
れたセレン（５ｅ０２　　として計算して）を含有して
いた。処理後においては、次のようにｄ用穴された： 無機的に存在するセレン （Ｓｅ０２として計算して）　　　　　　　０．００９
８％有機的に結合されたセレン （ｓｅｏ２として計算して）　　　　　　　ｌ］、０５
１２％すなわち、使用をれたセレンは、主として有機的
に結合された形で存在した。

オニンの製造 先駆物質Ｌ−メチオニンは、酵母によるアデノンル化に
よって細胞内Ｓ−アゾノンルーＬ−メチオニンの形で貯
蔵される。

例１による酵母顆粒の製造前ｔて、酵母をまず（湿潤酵
母の塊りに関して） Ｌ−メチオニン　　　　　　１係 および疎水性シリカゲル　　２係 と共に捏和した。粒状化された酵母を流動床反応器中に
充填しそし−Ｃ湿潤空気を用いて２５℃において２時間
流動化した。この時間の間、流動化きれた粒子に（湿潤
した）酵母１ｋｇ当り水約０．５　ｔをスプレーした。

流動床反応器中で全部で２時間の滞留時間後に、乾燥物
質の割合は、３３チから３９．５％まで上昇した。

分析のためπ酵母を例１と同様に抽出した。

抽出物中のＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニンを陰イオン
交換体への吸収、洗滌、および続いての溶離および２６
　Ｑ　ｎｍにおける光度測定にかケタ〔シュレンク（Ｆ
、　５ｃｈｌｅｎｋ　）　Ｉｃよる論文（Ｆｏｒｔｓｃ
ｈｒ、　ｄ、　Ｏｈｅｍｉｅ　ｏｒｇ、　Ｎａｔｕｒｅ
ｔｏｆｆｅ　。

Ｂａｎｄ　２５　；　Ｓｐｒｉｎｇθｒ−Ｖｅｒｌａｇ
、　　Ｅｅｒｌｉｎ　、　　ＮｅｗＹｏｒｋ（１９６５
）、８ｓｉｔｅ　８７　）参照〕。

本発明の処理によって酵母の日−アプツシルーＬ−メチ
オニン含量は、６０　ｐｐｍから３６０ｐｐｍまで上昇
している（乾燥物質に関して）。

例６：酵母中のＮＡＤの富有化 ニコチン酸アミド−アデニン−ジヌクレオチド（ＮＡＤ
　）は、生化学分析における重要な試薬であり、通常酵
母から単離される。

例１に従って酵母顆粒を製造する前に、酵母にまず（湿
潤酵母の塊りに関して） アデニン　　　　　　　　　　　　０．５％ニコチン酸
アミド　　　　　　　１％ 第１級リン酸カリウムＫＨ２ＰＯ４０，５％疎水性シリ
カゲル　　　　　　　２チ と共に捏和した。粒状化きれた酵母を流動床反応器に充
填し、湿潤空気を用いて２５℃において４時間流動化し
た。この時間の間、流動化でれた粒子に、（湿潤した）
酵母１ｋｇ当り水約０．６ｔをスプレーした。

流動床反応器中で全部で４時間の滞留時間の後に、乾燥
物質の割合は、３３％から４１％に上昇していた。

分析のために酵母を水中に懸濁させ、８５℃に５分間加
熱しそして抽出した。透明な上澄みＷ４−　中のＮＡＤ
ｆクリンゲンベルク（Ｋ１１ｎ＋４０ｎｂθｒｇ）の方
法による酵素還元によって測定した〔ベルクマイヤー（
Ｈ，Ｕ、　Ｂｅｒｇｍｅｙｅｒ　）著酵累分析法１第５
版第２巻第２０９４頁（Ｍｅｔｈｏｃｌｅｎ　ｄｅｒｅ
ｎｚｙｍａｔｉｅｃｈｅｎ　Ａｎａｌｙｓｅ　、　　Ｖ
ｅｒｌａｇ　Ｏｈｅ＋ｎｉｅ　。

Ｗｅｉｎｈｅｉｍ　　（１９７４）、ｌ　　Ａｕｆｌ、
Ｂｄ、　　２、Ｓ。

２０９４）参照〕。

処理の後、酵母のＮＡＤ含量は、［１０４９チから０．
１９６　％まで（乾燥物質に関して）、すなわち最初の
値の豪！Ｊ４倍まで上昇している。

インベルターゼＩｄ　、主として細胞内で酵母およびそ
の他の微生物中に現われる酵素であり、サッカロースを
グルコースおよびフルクトースに加水分解する。布板の
酵母中に存在する酵素の量は、エフェクター化合物サッ
カロースで酵母を処理することによって増大されうる。

粒状化された酵母（５ａｃｃｈ、ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
　）　　ｋ例１と同様に調製し、流動床反応器中に充填
しそして湿部空気を用いて２５℃において流動化した。

流動化さｔまた粒子上に、（湿潤した）酵母１ゆ当シ溶
液０．３ｔの全量のエフェクター溶液を２時間内にスプ
レーした。この水溶液は、２０１／ｌのサッカロースを
含有していた。

流動床反応器中で２時間の滞留時間の後に、酵母の乾燥
物質の割合は、３３チから３６係へ上昇していた。

インベルターゼ含量の分析のために、酵母甲自粒１ｏｒ
ｔ海砂１０１と共に磨砕し、００１ｍの酢酸ナトリウム
緩街液（ｐＨ４，５）２０−中に入れそして１０．００
０　ｒｐｍの回転数で２０分間遠心分離にかけた。透明
な細胞抽出物の蛋白質含量をローリ−ら（Ｌｏｗｒｙ　
ｅｔ　ａｌ　）の方法（０，Ｈ，Ｌｏｗｒｙ　、　　Ｎ
、　Ｊ、　Ｒｏｓｅｂｒｏｕｇｈ　、　　Ａ、　Ｌ、　
Ｆａｒｒ　。

Ｒ，Ｊ、　Ｒａｎｄａｌｌの論文Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃ
ｈｅｍ、　１９”＋　（１９５１）　。

５ｅｉｔｅ　２６５参照）に従って測定し、またインベ
ルターゼ活性は、ンモギーーネルンノ （Ｓｏｍｏｇｙｉ　−Ｎｅ１日ｏｎ　）　　の方法に従
って測定された（　Ｍ、　Ｓｏｍｏｇｙｉ　、　　Ｊ、
　Ｂｉｏｌ、　Ｏｈｅｍ、　１９５　（１９５２）　。

ｐ、１９Ｑ照）。インベルターゼ単位は、１ミクロモル
の→Ｊフッカースを３０℃において１分間に加水分解す
るような酵素量として定義される。

流動床反応器中における酵母の処ＴＩｊ３によって、イ
ンベルターゼ酵素の合成け、蛋白質１ミリグラム当り３
６単位から６６単位まで、すなわち１・１とんど２倍の
値まで上昇した。

ウレアーゼ日１、多くの有機体に存在する、原素を加水
分解する酵素である。細胞中のこの酵素の砕け、若干の
有機体においては１司化しつる窒素化合物の処分可能日
（てよって調節きれる。

肉汁３２／ｌおよびペプトン５２／ｌからなる栄養溶液
中における閑株ンユードモーナス・フローレス七ンス（
Ｐ８ｅｕｄｏｍｏｎａｇ　ｆｌｕｏｒｅＦＩｃｅｎｚ）
の細菌の生長曲線の対数的に増殖する時期の間に、この
イ（ｌ菌群の一部を採取した。この債？洗滌し、そ［７
て２倍の看１の自然に湿潤したトウモロコシ殿粉を混合
し、そしてＱ、５ｗｎのメツシュ巾を有する１ｉｉｉに
よって粒状化した。この粒状物（乾燥物質６０％を含有
する）を流動床反応器に充填し、湿潤空気を用いて３０
℃において流動化した。この粒状物を機械的に強化する
ために、湿潤した粒状物１　ｋｇ当クシ２０の５％ポリ
エチレンイミン溶液をスプレーし次いで湿潤粒状物１ｋ
ｇ当シ２０−の１係のゲルタールジアルデヒド溶液をス
プレーした。次に、この粒状物を空気流中で２時間流動
化し、この間に湿潤粒状物１ｋｇ当り０．６１の水をス
プレーした。

ウレアーゼの活性を測定するために、流動床反応器から
の粒状物の一部を水の中に懸濁し、そして超音波Ｖこよ
って均一化した。細胞を遠心分離にかけた後に、透明な
上澄みの中のウレアーゼ活性をゲートマン（Ｇｕｔｍａ
ｎｎ　）およびベルクマイヤー（Ｂｅｒｇｔｏｅｙｅｒ
　）の方法（Ｈ，Ｕ、　Ｂｅｒｇ−ｍｅｙｅｒ　　：　
　Ｍｅｔｈｏｄｅｎ　　ｄｅｒ　　ｅｎｚｙｍａｔｉｓ
ｃｈｅｎ　　Ａｎａｌｙｓｅ。

ＶｅｒｌａｇＣｈｅｍｉｅ　、　Ｗｅｉｎｈｅｉｍ　；
　　第２巻第３版（１９７４年）第１８４２〜１８４４
頁参照）に従って測定した。ウレアーゼの単位は、３０
℃においてＮＨ４１；クロモルを遊離するウレアーゼの
計として定義される。

流動床反応器中で細菌を処理することによって１．？ｎ
ｕ包中で生成したウレアーゼ酵素の量り１、蛋白質１２
当り毎分０８単位から１１中位まで、すなわちω初の値
の約３／１０　　倍まで増大した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　無機および／または有機の先駆物質−またはエフェ
   クター化合物を用いて細菌類、酵母類またけ菌糸体形成
   菌類の生きている生物体量中で微生物代謝物質および酵
   素を生物学的に製造、する方法において、 （イ）生物体量を先駆物質またはエフェクターと一緒に
   し、そして （ａ）　　流動床反応器内で流動可能の生物体量をガス
   流中で５℃ないし８０℃の温度および１０分間ないし１
   ０時間の滞留時間にて流動化することを特徴とする、上
   記微生物代謝物質および酵素の生物学的製造方法。 ２、　流動化さハ５た生物体量に先駆物質またはエフェ
   クターの懸濁液または溶液をスプレーする、特許請求の
   範囲＠１項記載の方法。 五　粒状化の前に生物体量中に先駆物質またはエフェク
   ターを合体させる特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、　ガス状先駆物質またはエフェクターを含有しまた
   はそれからなるガス流中で流動可能生物体量と流動化す
   る、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ５、　（イ）処理された生物体量を反応の終了後に更に
   処理を行なうことなく使用するが、（ロ）防腐剤を添加
   することにより湿潤状態で生物体ｔを保存するか、 ｅ→　乾燥することにより生物体量を保存するか、また
   は に）　生物体量から代謝物質またｉ−ｉ、酵素を特徴す
   る特許請求の範囲第１項〜第４項のいずれかに記載の方
   法。 ６　先駆物質としてＬ−システィン、Ｌ−グルタミン酸
   およびグリシジの使用下に酵母サツカロミセス・セレビ
   シェ−（Ｅｌａｃｃｈ、　ｃｅｒｅｖｉｅ−１ａｅ　）
   によシグルタテオン１を製造するにあたリ、 （イ）酵屹ｌ′ｉ状化し、 （ロ）　流動床反応器内で２０℃ないし４５℃の温度お
   よび３０分間ないし５時間の滞留時間において空気を用
   いて酵母を流動化し、そして Ｈ流軸化てれた酵母Ｚ先駆物質の水溶液を方法。 ２　酵母（８ａｃｃｈ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　）　
   　によりセＬ／７含有有機化合物を製造するにあたり、 （イ）　酵母を無機セレン化合物と共にド、１和し、（
   ロ）酵母を粒状化し、そして ←］　流動床反応器内で２０℃ないし４５℃の温度およ
   び３０分間ないし５時間の滞留時間において空気を用い
   て酵母を特徴とする特許請求の範囲第１項〜′？Ｐ、５
   項のいずれかに記載の方法。 ＆　先駆物質としてＬ−メチオンの使用下に酵母（日ａ
   ｃｃｈ、ｃｅｒｅｖ１．ｅｉａｅ　）　　によりＳ−ア
   ゾノンルーＬ−ノチオニンを製造するにあたり、（イ）
   酵母ＱＬ−メチオニンと共に捏和し、（ロ）　酵母を粒
   状化し、そして （／→　流動床反応器内で２０℃ないし４５℃の温度お
   よび３０分間ないし５時間の滞留時間で空気を用いて酵
   母を特徴とする特許請求の範囲第１項〜第５項のいずれ
   かに記載の方法。 ？、　先駆物質としてアデニンおよびニコチンの使用下
   に酵母（５ａｃｃｈ、　ｃｅｒｅｖｉｅｉａｅ　）　　
   中でニコチン酸アミド−アデニン−ジヌクレオチド？富
   有化するにあたり、 （イ）酵母をアデニンおよびニコチン酸アミドと共に捏
   和し、 （ロ）酵母を粒状化し、そして Ｐ）　　流動床反応器内で２０℃ないし４５℃の温度お
   よび３０分間ないし５時間の滞留時間で空気を用いて酵
   母を特徴とする 特許請求の帥１囲第１項〜第５項のいずれかに記載の方
   法。 １［′ｌ　　エフェクターとしてサッカロースを使用し
   て酵母（５ａｃｃ）１．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　）　　
   中でインベルターゼを富有化するにあたり、 （イ）酵母を粒状化し、 （ロ）流動床反応器内で２０℃ないし４５℃の温度およ
   び６０分間ないし５時間の滞留時間で空気を用いて酵母
   を流動化し、そして（ハ）　流動化された酵母にエフェ
   クターの水溶液を特徴とする 特許請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記載の方法
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