JPS60149599A - ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は治療用ペプチドに関する。

数多くの、生長ホルモン放出阻害活性を示すソマトスタ
チン同族体が報告されてきた。例えば、ヴエイル（Ｖａ
ｌｅ）外の米国特許第４，１３３，７８２号には、第８
アミノ酸が天然に産するＬ−Ｔｒｐ　よりむしろＤ−Ｔ
ｒｐであることができ、しかも第１４アミノ酸がＣｙｓ
Ｏ代りにＤ−Ｃｙｓであることができる種々のソマトス
タチン同族体が記載されている。以下、配置が指示され
ていないときはＬ−形を意味している。

バーストＣＨｉｒｓｔ）外（１９８０）、レギュラトリ
イ・ペブタイズ（Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ　）１．９７には、第８アミノ酸が（ＬまたはＤ）
−５、Ｆ−Ｔｒｐであることができ、第１４アミノ酸が
Ｄ−Ｃｙｓで゛あることができるソマトスタチン同族体
が記載されている。

メイヤーズＣＭｅｙｅｒｓ　）外、米国特許第４．２２
４，１９９号には、第８アミノ酸が（ＬまたはＤ）−５
Ｘ−Ｔｒｐ（ただしＸはＦまたはＢｒである）であるこ
とができるソマトスタチン同族体が記載されている。

一般に、一つの観点においては、本発明は式：％式％ （１） のドデカペプチド、その環状１−１２ジスルフィド同族
体：またはその薬学的に受容できる塩を提供する。式中
、Ａはｐｈｅまたは４−Ｘ−Ｐｈｅ（ここでＸはＣ１，
Ｂｒ、またはＦである）であり、ＢはＣｙｓまたはＤ−
Ｃｙｓである。

他の観点では、本発明は式： ％式％ （２） のテトラデカペプチド（式中ＸはＣ１，Ｂｒ、またはＦ
である）；その環状３−１４ジスルフィド同族体：また
はその薬学的に受容できる塩、を提供する。

このドデカペプチドの好ましい具体化では、Ａが４−　
Ｃ１−Ｐｈｅであり、ＢがＣｙｓであるか；またはＡが
４ＣＩ−ＰｈｅでありＢがＤ−Ｃｙｓである。

テトラデカペプチドの好ましい具体化では、ＸはＣＩ！
である。

その他の好ましい具体化においては、治療上有効な量の
治療用化合物と薬学的に受容できろキャリヤー物質（例
えば炭酸マグネシウムまたは乳糖）とを−緒にして治療
用組成物、例えば人聞の患者に経口投与するための丸剤
、錠剤、カプセル剤、または液体、本化合物の必要な人
間の患者の皮層に施用するための塗布できろクリーム、
ゲル、ローション、または軟膏、滴剤または噴霧剤とし
て鼻に投与することのできる液体、または静脈内、腸管
外、皮下、または腹腔内投与することのできる液体、を
形成させる。丸剤、錠剤、またはカプセル剤はこの組成
物が患者の小腸まで分解されずに通過するに十分な時間
、患者の胃の中で胃酸からこの組成物を保護することが
できろ物質で被覆することができる。

本発明の化合物は、生長ホルモン（ＧＨ）、インシュリ
ン、およびグルカゴンの分泌を阻害するのに有効である
。さらに、ドデカペプチドの構造は標的のホルモン、グ
ルカゴンおよびインシュリンに対して多少特異的な阻害
活性を与えるように調節ずろことができろ。例えば、１
２位のＣｙＳは３つのホルモンのすべてに対して高い阻
害活性を与え、一方１２位のｐ−ｃｙｓはグルカゴンお
よびインシュリンについて選択的により大きい抑制を与
える。４−位に４Ｃ１−Ｐｈｅを有するドデカペプチド
は、ソマトスフチンよりも長い生物学的半減期を有する
。

本発明のその他の特徴および利点は、以下のその好まし
い具体化についての記述および特許請求の範囲から明ら
かであろう。

ここで、本発明の好ましい具体化の記述に移る。

構造 本発明の化合物は、先に挙げた２つの一般式のどちらか
を有している。これらの化合物は、式１および２に示し
た直鎖状ペプチドまたは相当する１−１２または３−１
４ジスルフィド環状同族体のどちらかとして存在するこ
とができる。これらの一般式の範囲内の好ましい化合物
の例は先に好ましい具体化として言及したものである。

ドデカペプチド類はすべて、アミン基末端にアセチル基
を有し、カルボキシ基末端にＮ１］２を有している。そ
の上、これらはすべて６位にＤ−Ｔｒｐを有し、４位の
Ｐｈ、ｅはハロゲン化されている。

ある。

これらの化合物は薬学的に受容できる塩の形で得ろこと
ができろ。好ましい塩の例は、タンニン酸またはカルボ
キシメチルセルロースのようなり合体酸並びに治療上受
容できる有機酸、例えば酢酸、乳酸、マレイン酸、クエ
ン酸、りんご酸、アスコルビン酸、こはく酸、安息香酸
、サリチル戒、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸
、またはパモエ酸（Ｐａｍｏｉｃ　ａｃｉｃｌ　）、　
との塩、およびハロゲン酸、例えば塩酸、硫酸、または
燐酸のような無機酸との塩、である。

合成 Ｎ−アセチル−Ｃｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ａｓｎ　−４−Ｃ
１−Ｐｈ、ｅ　−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ
−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−８ｅｒ−Ｄ−Ｃ？／５−ＮＨ２の合
成を次に示す。

本発明の他のドデカペプチドおよびテトラデカペプチド
は、次の合成法を当分野において通常の技術を有する人
の能力の範囲内で適当な変更を行なうことによって製造
することができる。

第一段階は、次の通りの、Ｎ−アセチル−Ｓ−メチルベ
ンジル−Ｌ−Ｃｙｓ−Ｎε−４−１０ルベンジルオキシ
力ルボ＝　／ｌ／　−Ｌｙｓ−Ａｓｎ　−４−Ｃ１−Ｐ
ｌｂａ−ＰノＬｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｎε−４−クロルベン
ジルオキシカルボニル−Ｌｙｓ−０−ベンジ／ｌ／　−
Ｔｈｒ　−Ｐｈ、ｅ　−０−ベンジル−Ｔｈｒ　−０−
ベンジ／ｌ／−８ｅｒ−８−４−メチルペンジルーＣｙ
ｓ−ベンズヒドリルアミン樹脂の製造である。

塩化物イオン形のベンズヒドリルアミンポリスチレン樹
脂〔カリフォルニア州、トランス、バッチエム社（Ｂａ
ｃｈｅｍ、　Ｉｎｃ、　）　）　（１，５８ｇ、０．５
０ミリモル）を以下の加ニー洗浄サイクル：（ａ）　Ｃ
Ｈ２Ｃｌ２；（ｂ）ＣＨ２Ｃ１２中の３３％トリフルオ
ル酢酸（各々１時間２５分づつ２回）；（ｃ）ＣＨ２Ｃ
ｌ２　：　（ｄ）Ｃ２Ｈ５０Ｈ；　（ｇ）ＣＨ２Ｃ１２
；（ｆ）ＣＦＣｌ２中の１０％（Ｃ２Ｈ５）３Ｎ　（各
々２分間づつ２回）；および（ｇ）ＣＨ２Ｃ１２、を実
施するようにプログラムしたベックマン（Ｂｅｃｋηｕ
Ｌｎ）９９０型９９０自動ペプチド合成装置の反応容器
中に入れろ。

中和した樹脂をＣＨ２Ｃｌ２中でアルファー１−ブチル
オキシカルボニル（ＢＱＣ）−８−４−メチルベンジル
−システィン〔ＢＯＣ−ＣｙＳ（ＭＣＢｚｌ）〕および
ジイソプロピルカルボジイミド（３ミリモル）とともに
１時間かくはんして生ずるアミノ酸樹脂を次に上記の洗
浄プログラムの段階（ａ）から（ｇ）まで通して循環さ
ぜる。次に、以下のアミノ酸（３ミリモル）を同じ反応
サイクルによってひき続き結合させる：　Ｂｏｃ　−Ｓ
ｅｒ　（Ｂｚｌ　）、Ｂｏｃ　−Ｔｈｒ（Ｂｚｔ）、Ｂ
ｏｃ−Ｐｈｅ　、　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ　）、’
Ｊ３ｏｃ−Ｌｙｓ　ＣＣＩ−Ｚ　）、Ｂｏｃ　−Ｄ−Ｔ
ｒｐ、　Ｂｏｃ−４−Ｃ１−Ｐｈｅ　、Ｂｏｃ−Ｐんｅ
、Ｂｏｃ−Ａｓｎ、　ｆ３ｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＪ−Ｚ）、
Ｂｏ　ｃ　−Ｃｙｓ　（ＭｅＢｚ　ｌ　）。

ただし、Ｂｏｃ−Ａｓｎはジメチルホルムアミド層液と
して１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（３ミリモル）
の存在において結合させろ。

Ｎ−末端のｆ３ｏｃ基を除去した完成されたペプチド−
ベンズヒドリルアミン樹脂を、ＣＨ２ＣＪ２　中の１０
％無水酢酸−（Ｃ２Ｈ５）３Ｎで１５分間処理して遊離
のＮ−アミン基をアセチル化する。次にこの樹脂をＣＨ
３０Ｈで洗浄して空気乾燥させる。

上記の樹脂から次のようにして、所望のドデカペプチド
生成物、すなわち、Ｎ−アセチル−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ　−
Ａｓｎ−４−Ｃ１−Ｐ／ｂｅ　−ＰＡｅ　−Ｄ−Ｔｒｐ
　−Ｌｙｓ−Ｔノ′Ｌｒ　−ｐｈｅ　−Ｔｈｒ　−Ｓｅ
ｒ　−Ｃｙｓ　−ＮＨ２の環状１−１２ジスルフイド、
を製造する。

上記のＦデカペプチド樹脂（１，０４ｇ）と、弗化水素
（３７１Ｔｄ）中の１０係アニソールおよびジチオスレ
イトール１００７１Ｌ！−の溶液、との混合物を０℃で
１時間かくはんする。過剰な弗化水素を乾燥窒素流下で
迅速に蒸発させ、樹脂と遊離ペプチドとを大量の酢酸エ
チルで洗浄してアニソールを除去する。

次に、このペプチドを９０％酢酸／水５００ｅｇ中に抽
出し、不変の褐色が得られるまでメタノール中の１０係
沃素を滴加することによりシスティン残基によって環化
させる。次いで、この混合物を１時間かくはんし、亜鉛
粉末の添加によって過剰な沃素を除去する。

Δ、・ト過した溶液を真空中で容量を減少させて、セフ
ァデツクスＧ−１５のカラム（２，５Ｘ９５ぼ）上に載
せ、これを５０％の酢酸水溶液で溶離する。

２８０　ｎｍで観測されろ主ピークを含む分画をプール
し、これを受容量となるまで真空蒸発させろ。

この溶液をオクタデシルシラン−シリカ〔ワ気ノド７　
ン（Ｗｈａｔｍａｎ　）　ＬＲＰ　−１，１１５−２０
ｔｔ　メツシュサイズ〕のカラム（２，５Ｘ　４５ｃｍ
　）　ＤＣ適用して、これを２０係酢酸−水中の１５−
３５％アセトニｌ−ＩＪルの直線勾配で溶離する。主ピ
ークを含む分画を高圧液体クロマトグラフィー及び薄層
クロマトグラフィーにより検査し、最高純度を得るよう
にプールする。この溶液を凍結乾燥させろと、綿毛状の
白色粉末が２５ｍ：％得られる。

アセトニトリル１０．１％トリフルオル酢鈑−水系で溶
離するオクタデシルシラン−シリカ〔ビダツク（Ｖｙｄ
ａｃ　）　５　ｔｔＭ、Ｏ−４Ｘ　２５　ｃｍ　Ｅ上の
分析高圧液体クロマトグラフィー（ｈｐｌｃ）およびシ
リカゲル板上の４溶媒系中の薄層クロマトグラフィー（
ｔｉｃ）により、この物質は均質であることがわかる。

酸水解物のアミノ酸分析は、次のとうり予想と一致する
アミノ酸比率を与える”Ｃ２／ｓ＋１．７８　ｉ　′Ｌ
８Ｉｓ、　１．８２　；　Ａｓｐ、　１．０５　ｉ　Ｐ
ｈｅ。

１．９４　ｉ　Ｔｒｐ、　０．８８　；　４−Ｃ１−Ｐ
ｈｅ、　０．９１　；Ｔｈｒ、　２．１１　ｉ　Ｓｅｔ
、　０．８３゜上述したように、本発明の他のペプチド
類は、上記の方法を適当に変更することによって製造す
ることができる。例えば、４位に４−Ｃ１−Ｐｈｅでは
なく　Ｐｈｅを有する本発明のドデカペプチドを製造す
るには、４Ｃ１−Ｐｈｅ　をＰｈｅで置き換えて上記の
ようにしてベンズヒドリルアミン樹脂を製造し、そして
この樹脂を上述のようにして弗化水素で処理すると式：
Ｎ−アセチル−Ｃｙｓ　−Ｌｙｓ　−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−
Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−ＬｌｌＢ　−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ　−
Ｔｈｒ−８ｅ、ｒ−、Ｃｙｓ＝　ＮＨ−２，を、有する
均質な綿毛状の白色粉末生成物が得られるが、このもの
の酸水解物のアミノ酸分析は次のとうり予想と一致する
アミノ酸比率を与える：　Ｃｙｓ、１．７８　；　Ｌｙ
ｓ。

１．８７　；　Ａｓｐ、１．０４　；　Ｐｈｅ、　２．
８５　；　Ｔｒｐ。

０．９０　；ＴＡｒ、　２．０９　；　Ｓｅｒ、　０．
８２゜１２位にＣｙｓではなくＤ−Ｃｙｓ　のある別の
ドデカペプチドでは、第一段階ではＣｙｓ　（ＭｅＢｚ
ｌ）てはなく　Ｄ−Ｃｙｓ　（ＭｇＢｚｌ）を用いて上
述したようにしてベンズヒドリルアミン樹脂を製造する
。次にこうして得られる樹脂ペプチドを弗化水素処理し
てドデカペプチド生成物を製造する。この生成物は式：
Ｎ−アセチル−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−ｋｓｎ−４−Ｃ１−Ｐ
ｈｅ−Ｐｈｅ　−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌ？／５−Ｔｈｒ−ｐｈ
ｅ−Ｔ／ｂｒ−８ａｒ−Ｄ　−Ｃｙｓ　−ＮＨ２を有す
る均質な綿毛状白色粉末であって、次の予想と一致する
アミノ酸比率を与える：Ｃ１１ｓ、１．８０　ｉ　Ｌｙ
ｓ、　２．０３　：　Ａｓｐ、　１．０５　；Ｐｈｅ、
２．０６　ｉ　Ｔｒｐ、０．９１　：　４−Ｃ１−Ｐｈ
ｅ。

０．９１　；　Ｔｈｒ、　２．１２；　Ｓｅｒ、　０．
９２゜用　法 哨乳動物に投与したとき（例えば経口的、局所的、静脈
内、腸管外、鼻に、または生薬として）これらの化合物
はインシュリンおよびグルカゴンを抑制し、並びｖＣＧ
Ｈの解放を阻害するのに有効である。

これらの化合物は、ソマトスタチンについて用いられる
用量で哺乳動物、例えば人間、に投与することができる
。本発明の化合物はガン（例えば骨、軟骨、＃）臓、前
立腺、または乳癌）、先端巨大症および関連する内分泌
過多状態の治療、または救急患者および肺炎または下痢
に苦しんでいる患者の出血性潰瘍の治療に使用オろこと
ができる。

これらの化合物はまた、糖尿病の処置および硬変症また
は肝炎に苦しむ患者の肝豚を保穫するものにも使用する
ことかで゛きる。

これらの化合物は哺乳動物、例えば人間に、０．０１な
いし１０００　ｍｃｇ／Ｋｇ／日、好ましくは０．１な
いし１００　ｍｃｇ　／　Ｋｇ／日の用量で投与するこ
とができる。

その他の具体化は前記の特許請求の範囲の範囲内にある
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）式： Ｎ−アセチル−Ｃｙｓ　Ｌｙｐ　Ａ、５ｎ−ＡＰｈｅ−
   Ｄ　Ｔｒｐ　ＬｙＳＴｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　５ｅｒＢ
   　Ｈ２ 〔式中、ＡはＰ輪または４−Ｘ　Ｐｈｅ　（ここでＸは
   Ｃｊ？、ＢＴ、またはＦである〕であり、ＢはＣ，Ｓま
   たはＤ−Ｃ，ｓである］のドデカぜプチド；その環状１
   −１２ジスルフィド同族体；またはその薬学的に受容で
   きる塩。 （２）Ａが４−　Ｃ１−Ｐｈ４であり、ＢがＣ，である
   、特許請求の範囲第１項に記載のドデカペプチド；その
   環状１−１２ジスルフィド同族体；またはその薬学的に
   受容できる塩。 （３）Ａが４−ＣＩ　ＰｈｅであってＢがＤ　Ｃｙｓで
   ある、特許請求の範囲第１項に記載のドデカペプチド；
   その褒状１−１２ジスルフィド同族体；またはその薬学
   的に受容できる塩。 （４）治療上有効な量の特許請求の範囲第１項に記載の
   化合物ならびに薬学的に受容できろキャリヤー物質より
   成る、生長ホルモン、イン７ュリン、またはグルカゴン
   の放出を阻害することのできる治療用組成物。 （５）　生長ホルモン、インシュリン、またはグルカゴ
   ンの分泌を阻害するのに有用な特許請求の範囲第１項に
   記載の化合物。 （６）治療上有効な量の特許請求の範囲第１項に記載の
   化合物を下記の哨乳動物に投与ずろことより成る、生長
   ホルモン、インシュリン、またはグルカゴンの分泌を減
   少させろことが必要な哺乳動物の治療法。 （７）上記の化合物を必要とする人間の患者に経口投与
   するための丸削、錠剤、またはカブ−ヒル剤の形である
   、特許請求の範囲第４項に記載の治療用組成物。 （８）上記化合物を必要とする人間の患者に・蛇口投与
   するための液体の形である、特許請求の範囲第４項と記
   載の治療用組成物。 （９）下記組成物を上記の人間の患者の小腸まで分解さ
   れないまま通過させるに十分な時間、この人間の患者の
   胃中の胃酸から保護することのできる物質で被覆されて
   いる、特許請求の範囲第７項に記載の治療用組成物。 （１０）　上記化合物を必要とする人間の患者の皮膚に
   施用するためのクリーム、ゲル、噴霧剤、または軟膏の
   形である、特許請求の範囲第４項に記載の治療用組成物
   。 （１１〕　上記化合物を必要とする人間患者に、滴剤ま
   たは噴霧剤として鼻に投与することのできる液体の形で
   ある、特許請求の範囲第４項に記載の治療用組成物。 （１２）　上記化合物を必要とする人間患者に静脈内、
   皮下、非経口または腹腔内投与するための液体の形であ
   る、特許請求の範囲第４項に記載の治療用組成物。