JPH02502022A - ソマトスタチンおよびその類縁体による癌の治療 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ソマトスタチンおよびその類縁体による癌の治療発明の背景 本出願は１９８５年９月１２日に出願されたコイ（Ｃｏｙ）らの米国特許出１１ ７７５，４８８号の一部継続出願である、１９８６年６月１７日に出願されたコ イらの米国特許量ＩＪｉ８７５，２６６号の一部継続出願である、１９８７年２ 月３日に出願されたコイらの米国特許出願８１０．３４９号の一部継続出願であ る、１９８７年７月７日に出願されたコイらの米国特許出願０７０，４００号の 一部継続出願である、１９８７年１１月１８日出願のティラー（Ｔａｙｌｏｒ） らの米国特許出願１２１．９３７号の一部継続出願である。

本発明は治療用ペプチドに関する。

ソマトスタチンは、次のアミノ酸配列を有する、天然に存在するテトラデカペプ チドである：Ｈ−Ａｌａ１−Ｇｌｙ”−Ｃｙｓ”−Ｌｙｓ’−Ａｓｎ’−Ｐｈｅ ・−Ｐｈｅ’−Ｔｒｐ”−Ｌｙｓ＠−Ｔｈｒ”−Ｐｈｅ”−Ｔｈｒ”’−５ｅｔ ”−Ｃｙｓ”−０ＨＧＨ−放出阻害活性を有する多くのソマトスタチン類縁体が 文献に記載されており、その中には、天然に存在する１４アミノ酸よりも少ない アミノ酸を含むものもある。

例えば、参照によりここに含まれるコイらの米国特許４．４８５，１０１号は、 Ｎ−末端アセチル基、Ｃ−末端ＮＨｚ、ｓ位のＤ−Ｔｒｐおよび４位のｐ−ＣＩ −Ｐｈｅを有する、ドデカペプチドを記載している（本明細書中で、コンフィギ ユレーションに関する指定がないときは、し−アイソマーが意図されている）。

発明の概要 本発明は概ね、癌にかかっている哺乳類（例えばヒト）にソマトスタチンまたは ６個もしくはそれ以上のアミノ酸を含むソマトスタチンの類縁体を、少なくとも ２５μｓ／ｋｇ／日の用量で投与して治療する方法に関する。

好ましくは、癌は固形癌の存在により特徴ずけられるものである。増殖の遅いも の（１日当たりの増殖が０゜２５１１１１以下）においては、投与量は２５０μ ｇ／ｋｇ／日であり得る。増殖の早い癌においては、ソマトスタチンまたはその 類縁体は、好ましくは少なくとも２５０μｇ／ｋｇ１日、より好ましくは、少な くとも５００μｇ／ｋｇ／日投与される。　別の観点において、本発明は、固形 癌の出現で特徴ずけられる癌に苦しむ哺乳類（例えばヒト）の癌の部位に、ソマ トスタチンまたは６またはそれ以上のアミノ酸を有するソマトスタチンの類縁体 を有効量（好ましくは、少なくとも２５μｇ／ｋｇ／日、より好ましくは少なく とも２５０μｇ／ｋｇ／日、そしてさらに好ましくは５００μｇ／ｋｇ／日）投 与することよりなる、哺乳類の治療方法に関する。

本発明の両観点における好ましい態様においては、投与はポンプ手段または徐放 性の手段によって、連続的に行われる。好ましくは、いずれの方法においても、 ソマトスタチン類縁体は、ソマトスタチンのコア領域と少なくとも２０％のホモ ロジーを持つ４個またはそれ以上のアミノ酸配列を有する（コア領域は４．５． ６．７．８．９及び１０位のアミノ酸から構成される）。より好ましくは、ソマ トスタチン類縁体は、ソマトスタチンのコア領域と少なくとも２０％のホモロジ ー、さらに好ましくは少なくとも５０％のホモロジーを持つ６または７個のアミ ノ酸配列を有する。好ましくはソマトスタチン類縁体は８位にＤ−Ｔｒｐを有す る。

本発明の癌治療方法に適するソマトスタチン類縁体の一つのクラスは、次式のオ クタペプチドまたはその薬学的に許容される塩である。

ＡＩ （式中、ＡユおよびＡ２は各々独立して、水素原子、Ｃ□１□アルキル、Ｃ？− ＸＯフェニルアルキル、Ｒ，ＣＯ（式中、ＲＸは、ｃｌ−１６アルキル、Ｃ纂− ２ｏアルケニル、ｃｓ−ｔｏアルキニル、フェニル、ナフチルまたはｃ、ｙ−１ ゜フェニルアルキルである）、またはＲ，０ＣＯ（式中、Ｒ２は、Ｃ□−８゜ア ルキルまたはＣ？−０゜フェニルアルキルである）であり、但し、Ａ１およびＡ ２の一方がＲ１ＣｏまたはＲ，ＯＣＯであるならば他方は水素原子でなければな らず、 Ａ、はＣＨｚ−Ａｓ　（ここでＡ、はペンタフルオロフェニル、ナフチル、ピリ ジル、フェニル、または０−、■−９もしくは好ましくはｐ−置換されたフェニ ルであり、その置換基はハロゲン、Ｎｌ２．　ＮＯ２，ＯＨまたはｃｏ−、アル キルである）であり、 Ａ４はＯ−、！Ｏ−，もしくは好ましくはｐ−置換されたＸ−Ｐｈｅ（ここで、 Ｘはハロゲン、水素原子、Ｎｌ２．　Ｎｏ、、　ＯＨまたはＣ□、アルキルであ る）、ペンタフルオロ−Ｐｈｅ　、またはβ−Ｎａｌであり、 Ａ、はＴｈｒ、　Ｓｅｒ、　Ｐｈｅ、　Ｖａｌ、　ａ−アミノ酪酸またはＩｌｅ であり、但し、Ａ３がフェニルでＡ１およびＡ２が水素原子であるときは、Ａｓ はＶａｌであってはならず、そしてＡｔはＴｈｒ、　Ｔｒｐまたはβ−Ｎａｌで ある）。

上記式の中で、ＡＩが結合している炭素のコンフィギユレーションは与えられて いないが、これはＡ、を置換基とするアミノ酸残基がＤ−１まはたＬ−のいずれ のコンフィギユレーションでも良いことを意味する。

上記式の好ましい化合物には次のものが含まれる。

Ｄ−ｐ−Ｃ１−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ａ−アミノ酪酸 −Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｎｌ２；了てチル−Ｄ−ｐ−Ｃ１−Ｐｈｅ−Ｃｙ、５−Ｔｙ ｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ａ−アミノ酪酸−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｎ）ｔ２： 芳香属の親油性Ｎ−末端を持つ化合物は、生体内（インビボ）の活性が長期間保 持されるという更なる利点を有する。

治療有効量の本発明の治療用化合物を、薬学的に許容される担体物質、例えば炭 酸マグネシウム、ラクトース、または本発明の治療用化合物とミセルを形成する ことができる燐脂質と共に、治療用組成物、例えばビル、タブレット、カプセル 、または患者に経口投与することの出来る液剤、塗布用クリーム、ゲル剤、ロー ション、または該化合物を必要とする患者の皮膚に塗る軟膏、滴下または噴霧し て鼻腔から投与できる液剤、または静脈、非経口、皮下、または腹腔内注射で投 与できる液剤にすることが可能である。もっとも好ましい担体物質は、マニトー ルである。ピル、タブレットまたはカプセル剤は、この組成物が分解されずに患 者の小腸に達することが出来るに十分な時間、患者の胃内の胃酸から保護するた めの物質でコートしてもよい。本発明の治療用組成物は、生体内分解性の徐放性 製剤として、筋肉内投与またはより好ましくは癌の部位に投与することもできる 。最大の効稟を得るには、０に近い放出速度が好ましい。移植可能ポンプもしく は外部ポンプ、例えばＩｎｆｕｓａｉｄ”ポンプ（Ｉｎｆｕｓａｉｄ　Ｃｏｒｐ 、、ｖサチニセッツ）を用いて、治療用組成物の投与のために、０に近い放出速 度を得ることができる。更に、治療用組成物は、バモエ酸（ｐａｍｏｉｃ　ａｃ ｉｄ）とのような親油性の塩として、油性エマルジョンまたは分散物の形で投与 することもできる。

本発明の方法は、本発明の化合物が成長ホルモンの放出を有意に阻害する量より もはるかに高用量、例えば３０倍またはそれ以上の高用量で、効果的な癌の治療 法を提供し、しかもこの高い投与量が重大な毒性副作用の原因となることがない 。

本発明の他の態様および利点は、好ましい態様に関する以下の記載および請求の 範囲の記載から明らかになろう。

ましい態　の１Ｂ 置皿 第１図−第４図は、ソマトスタチン類縁体（図面中でＢＩＭ２３０１４Ｃと呼ば れる）が、腫瘍の成長に及ぼす影響を説明するグラフである。

１盈 癌の治療のために適する化合物は、前記のソマトスタチン類縁体である。その例 は次の類縁体であり、これらはヒトの小細胞肺癌（細胞ラインＭＣＩ　Ｈ６９） の腫瘍リセブターに結合することが示されている：　（そのようなりセブターへ の結合はおそらく抗腫瘍活性に関連すると考えられるが、必ずしもこの活性に要 求されない）。

Ｄ−β−Ｎａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−丁ｈ ｒ−ＮＨ２：Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−丁ｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙ ｓ−Ｎａｌ　；Ｄ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｄ−丁ｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｃ ｙｓ−Ｔｈｒ−Ｎｌ２：　およびＤ−ｐ−ＣＩ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ− Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨｚ（Ｎａｌはナフチルアラニン を意味する）。

他の適当なソマトスタチン類縁体には、Ｖｅｂｅｒら（１９８４）　Ｌｉｆｅ　 ５ｃｉｅｎｃｅｓ、　３４：１３７１−７８ＨＢａｕｅｒらの米国特許４゜３９ ５．４０３ＨＢａｕｅｒ　らの米国特許４，４３５，３８５；　５ａｎｄｒｉｎ らの米国特許４，２９１，０２２；前記Ｃｏｙらの米国特許４，４８５，１０１ 　：およびＣａｉ　ら（１９８６）、ＰＮＡＳ　ＵＳＡ、　８３．１８９６−１ ９００に記載されたものを含み、それらも参照により本明細書に含まれる。

論」叉 ソマトスタチンの一つのオクタペプチド類縁体の合成は次のようである。この合 成法に適当な修飾を加えて、他の類縁体も当業者の能力の範囲内で合成できる。

ニルーＤ−β−ナフチルアラニン−３−メチルベンジル−Ｃｙｓ−丁ｙｒ−Ｄ− Ｔｒｐ−Ｎ　−ベンジルオキシカルボニル−−メチルベンジル−Ｃｙｓ−０−ベ ンジル−Ｔｈｒ−ベンゾヒドリルアミン樹脂を次のように合成する。

塩素イオン型のベンゾヒドリルアミン−ポリスチレン樹脂（Ｖｅｇａ　Ｂｉｏｃ ｈｅｍｉｃａｌｓ．Ｉｎｃ．）を、次の反応サイクルを行うようにプログラムさ れたベックマン９９０Ｂペプチド合成存置の反応容器中に入れる：（ａ）塩化メ チレン、伽）塩化メチレン中の３３％トリフルオロ酢酸（各１および２５分で２ 回）　、（Ｃ）塩化メチレン、（ｄ）エタノール、（ｅ）塩化メチレン、Ｕ）ク ロロホルム中の１０％トリエチルアミン。

中和された樹脂を、Ｂｏａ−０−ベンジル−スレオニンおよびジイソプロピルカ ルボジイミド（各々１．５ミリモル）と塩化メチレン中で１時間攪拌し、得られ たアミノ酸樹脂を引続き、上記（Ｊｌ）から（幻のサイクルで洗浄した。次に下 記のアミノ酸（１．５ミリモル）を次々と同じようにして結合した：ＢｏｃーＳ ーメチルベンジルーＣｙｓ，ＢｏＣ−Ｖａ　１，Ｂｏｃ−Ｎｅ−ベンジルオキシ カルボニル−樹脂、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ，Ｂｏｃ−Ｔｙｒ，Ｂｏｃ−Ｓ−メチル ベンジル−Ｃｙｓ，Ｂｏｃ−Ｄ−β−ナフチルアラニン。

樹脂を洗浄して乾燥し、そしてアニソール（４−）および無水フッ化水素（３６ ｗｉ）と０℃で混合し、４５分間攪拌した（その代わりに、チオアニソール、ト リフルオロ酢酸、およびトリフルオロメタンスルホン酸を１：９０：９の比率で 、６時間の条件を用いることも可能である）。過剰のフッ化水素を乾燥窒素気流 の下で速やかに蒸発させ、遊離ペプチドを沈澱させてエーテルで洗浄した。この 粗ペプチドを次に９０％酢酸８０Ｃ）ｄに溶解し、メタノール中の１２を褐色が 消えなくなるまで添加した。この溶液を次に１時間攪拌した後、溶媒を真空中で 除いた。得られた油状物を最少量の５０％酢酸に溶解し、セファデックスＧ−２ ５カラム（２，５Ｘ１００ば）で溶出した。ＵＶ吸収および薄層クロマトグラフ ィーで主要成分を含むとされたフラクシヨンをプールし、小量になるまで蒸発さ せて、ワットマンＬＲＰ−１オクタデシル’、ｔ５ン（１５−２０ｕＭ）（７） カラム（２，５Ｘ５０口）に導入した。

このカラムを０．　１％トリフルオロ酢酸水溶液中の１０−５０％アセトニトリ ルの勾配で溶出した。フラクシヨンを薄層クロマトグラフィーおよび分析用高性 能液体りＣマドグラフィーで検査して、最高純度を与えるようにプールし、所望 により、例えばアセテートまたはホスフェートのような別の塩に変換した。水溶 液からの凍結乾燥を繰り返して、生成物１７０ｍｇを白色綿状物として得た。

生成物はＨＰＬＣおよびＴＬＣで均一であった。酸加水分解物のアミノ酸分析に より、このオクタペプチドの組成を確認した。

上記の方法に類似の方法で、下記の本発明のオクタペプチドも合成した。

アセチル−Ｄ−ｐ−Ｃ１−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−ａ− ７ミノ酪酸−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−ＮＨａ； １ｂ九 本発明は癌、特に小細胞肺癌のような固形腫瘍癌にたいする効果的治療方法を提 供する。治療可能な他の癌には、骨癌、軟骨筋、膵臓癌（内分泌性および外分泌 性）、前立腺癌および乳癌である。

前記の化合物およびソマトスタチンおよびそのヘキサペプチドまたはヘキサより 大きいその類縁体は一般に、前記のようにして投与されると癌の治療に有効であ る。

本発明の抗癌剤は、好ましくは癌性腫瘍の部位に直接投与される；例えば経口の ような間接投与は高用量を必要とするから、直接投与にくらべると好まれない。

本発明の化合物は一般に６時間程度の生体内（インビボ）寿命を有し、そのため 、非連続投与（例えば、外部から到達困難な腫瘍で一般に必要な静脈注射の場合 ）を用いるときには一日に４回の治療が好ましい。

本発明のオクタペプチドソマトスタチン類縁体：の結果は第１図ないし第４図に 示されている。

第１図及び第２図は無胸腺マウスに移植された高増殖性腫瘍（０，３３ｍｍ／日 ）のヒト小細胞癌（ラインＮＣｌ−Ｈ６９）に対する前記類縁体の効果を示す。

類縁体を腫瘍の部位に投与すると、顕著な作用を腫瘍にたいして示した。

第３図は高増殖性癌（０，７７ｍｍ／日）のヒトのオー）（ｏａｔ）細胞癌（ラ インＬＸ−１）に対する同じ類縁体の効果を示す。

第４図は、増殖の遅い（０，１９ｍ／日）ラット前立腺癌ζ５対する同じ類縁体 の効果を示す。

他の態様は請求の範囲に記載されている。

浄書（内容に変更なし） 手続補正書（凪 平成　２年　４月ｆ日　５句

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. １．ソマトスタチンまたはアミノ酸残基を６個以上含むソマトスタチン類縁体を 、少なくとも２５ｕｇ／ｋｇ／日の用量で投与することよりなる、癌にかかった 哺乳類の治療方法。
2. ２．癌が、固形腫瘍の存在で特徴ずけられる、請求項１記載の方法。
3. ３．固形腫瘍が急速増殖性のものであり、そしてソマトスタチンまたはその類縁 体が少なくとも２５０ｕｇ／ｋｇ／日の用量で投与される、請求項２記載の方法 。
4. ４．用量が少なくとも５００ｕｇ／ｋｇ／日である、請求項３記載の方法。
5. ５．ソマトスタチンまたはアミノ酸残基を６個以上含むソマトスタチン類縁体の 有効量を、癌の存在部分に投与することよりなる、固形腫瘍の存在で特徴ずけら れる癌にかかった哺乳類の治療方法。
6. ６．投与がポンプまたは徐放手段によって行われる連続投与である、請求項１ま たは５記載の方法。
7. ７．ソマトスタチンまたはその類縁体が、少なくとも２５ｕｇ／ｋｇ／日の用量 で投与される、請求項５記載の方法。
8. ８．腫瘍が急速増殖性であり、投与用量が少なくとも２５０ｕｇ／ｋｇ／日であ る、請求項７記載の方法。
9. ９．ソマトスタチン類縁体が、ソマトスタチンのコア領域にたいして少なくとも ２０％のホモロジーをもつ４個以上のアミノ酸配列を有する、請求項１または５ 記載の方法。
10. １０．ソマトスタチン類縁体が、ソマトスタチンのコア領域にたいして少なくと も２０％のホモロジーをもつ６または７個のアミノ酸配列を有する、請求項９記 載の方法。
11. １１．該配列がソマトスタチンのコア領域にたいして少なくとも５０％のホモロ ジーをもつ、請求項１０記載の方法。
12. １２．ソマトスタチン類縁体が、８位にＤ−Ｔｒｐをもつ、請求項１または５記 載の方法。