JPS6012982A - 親水性高分子に生体高分子を結合させる方法 - Google Patents
親水性高分子に生体高分子を結合させる方法Info
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- JPS6012982A JPS6012982A JP12063983A JP12063983A JPS6012982A JP S6012982 A JPS6012982 A JP S6012982A JP 12063983 A JP12063983 A JP 12063983A JP 12063983 A JP12063983 A JP 12063983A JP S6012982 A JPS6012982 A JP S6012982A
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- Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はセルロース等の炭水化物系の親水性高分子に、
酵素、蛋白質等のアミン基を有する生体高分子を結合さ
せる方法に関する。
酵素、蛋白質等のアミン基を有する生体高分子を結合さ
せる方法に関する。
従来よね、酵素や蛋白質を担体である高分子物質に化学
的に結合させて固定化した固定化酵素等をバイオリアク
ターや液体クロマトグラフィー用カラム充賽剤として利
用することが行われている。例えば多糖類などの高分子
に好ましくはＰ ＩＩ ８〜１３のアルカリ件条件下で
ハロゲン化シアンを作用させることにより活性化し、次
にこれに、アミノ基を有する生体高分子を弱アルカリ性
条件で反応させて結合させる方法が知られており、又、
担体として用いられる多孔性ガラスないしはシリカのア
ルキルアミン誘導体に、ダルタルアルデヒドなどのα、
ω−ジオキシアルカンを介して１級又は２級アミン基を
有するｒ′ｔ￥、素等′の生体高分子を共有結合により
結合し不溶化することも、酵素反応を用いた生体物質分
析のための酵素固定化担体の調整に採用されている。
的に結合させて固定化した固定化酵素等をバイオリアク
ターや液体クロマトグラフィー用カラム充賽剤として利
用することが行われている。例えば多糖類などの高分子
に好ましくはＰ ＩＩ ８〜１３のアルカリ件条件下で
ハロゲン化シアンを作用させることにより活性化し、次
にこれに、アミノ基を有する生体高分子を弱アルカリ性
条件で反応させて結合させる方法が知られており、又、
担体として用いられる多孔性ガラスないしはシリカのア
ルキルアミン誘導体に、ダルタルアルデヒドなどのα、
ω−ジオキシアルカンを介して１級又は２級アミン基を
有するｒ′ｔ￥、素等′の生体高分子を共有結合により
結合し不溶化することも、酵素反応を用いた生体物質分
析のための酵素固定化担体の調整に採用されている。
しかしながら、上記のうちハロゲン化シアンを用いる方
法におい℃は、該ノ・ロゲン化シアンは猛毒であるので
取扱いに注意を要し、使用後の廃水の処理にも手間がか
＼るという欠点がち９、又、後者の場合については、多
孔性ガラスないしはシリカは非常で簡便で有用な担体で
あるが、アルカリに対する耐久性が低く、高Ｐ Ｒ領域
で高い活性を示す酵素等を固定化して用いるには不適西
であり、さらに、該担体中に含まれるシリカが蛋白質等
に対して非特異的吸着をするので、この様な酵素固定化
担体を用いる場合は分析試料の前処理等を細心の注意を
払って行う必要があり、分析操作の作票性や信頼性に問
題がある。
法におい℃は、該ノ・ロゲン化シアンは猛毒であるので
取扱いに注意を要し、使用後の廃水の処理にも手間がか
＼るという欠点がち９、又、後者の場合については、多
孔性ガラスないしはシリカは非常で簡便で有用な担体で
あるが、アルカリに対する耐久性が低く、高Ｐ Ｒ領域
で高い活性を示す酵素等を固定化して用いるには不適西
であり、さらに、該担体中に含まれるシリカが蛋白質等
に対して非特異的吸着をするので、この様な酵素固定化
担体を用いる場合は分析試料の前処理等を細心の注意を
払って行う必要があり、分析操作の作票性や信頼性に問
題がある。
本発明は上述の如き現状にかんがみ、ハロゲン化シアン
の如き有毒な試薬を用いずともよく、さらに、生体成分
１対する非特異的吸着の少ないセルロース等の炭水化物
系層、水性高分子に酵素等の生体高分子を簡単−かつ確
実４（結合させることが出来、しかもＦｌ！された酵素
固定化担体等の生体高分子結合物が核生体高分子の特性
に応じたＰ ＩＩ領領域使用され得るように、広範囲な
Ｐ■領領域くにアルカリｆＱ域での使用に耐え得るよう
な担体索材等としての高分子材料を用いた生体高分子の
結合法を提Ｕ（することを目的として匁されたものであ
り、その要旨１．１級又は２級アミノ基を含有する生体
高分子を共有結合により炭水化物系の親水性高分子に結
合させる方法において、上記親水性高分子を塩化スル７
リルと、次いでイミダゾールと反応させた後、α、ω−
ジアミノアルカンと反応させて該親水性高分子に１級ア
ミノ基を導入し、この親水性高分子中に導入されたｔｉ
アミノ基と上記生体高分子における１級又は２級アミノ
基とをα、ω−ジオキシアルカンを作用させることによ
って結合させることを特徴とする親水性高分子に生体高
分子を結合させる方法に存する。
の如き有毒な試薬を用いずともよく、さらに、生体成分
１対する非特異的吸着の少ないセルロース等の炭水化物
系層、水性高分子に酵素等の生体高分子を簡単−かつ確
実４（結合させることが出来、しかもＦｌ！された酵素
固定化担体等の生体高分子結合物が核生体高分子の特性
に応じたＰ ＩＩ領領域使用され得るように、広範囲な
Ｐ■領領域くにアルカリｆＱ域での使用に耐え得るよう
な担体索材等としての高分子材料を用いた生体高分子の
結合法を提Ｕ（することを目的として匁されたものであ
り、その要旨１．１級又は２級アミノ基を含有する生体
高分子を共有結合により炭水化物系の親水性高分子に結
合させる方法において、上記親水性高分子を塩化スル７
リルと、次いでイミダゾールと反応させた後、α、ω−
ジアミノアルカンと反応させて該親水性高分子に１級ア
ミノ基を導入し、この親水性高分子中に導入されたｔｉ
アミノ基と上記生体高分子における１級又は２級アミノ
基とをα、ω−ジオキシアルカンを作用させることによ
って結合させることを特徴とする親水性高分子に生体高
分子を結合させる方法に存する。
本発明に用いられる親水性高分子は単ｍ類を含む高分子
、多糖類、これらのｔす導体等水酸基を含む炭水化物系
の高分子であり、具体的には例えばデキストラン、セル
ロース、テンフン、テキストリン、アガロースなとの多
ｍ類やヒドロキシエチルセルロースの様な多糖類誘導体
が挙げもれる。
、多糖類、これらのｔす導体等水酸基を含む炭水化物系
の高分子であり、具体的には例えばデキストラン、セル
ロース、テンフン、テキストリン、アガロースなとの多
ｍ類やヒドロキシエチルセルロースの様な多糖類誘導体
が挙げもれる。
本発明にもとづいて、１級又は２級アミノ基を有する生
体高分子を炭水化物系のれ水性高分子に結合させるには
、まず親水性高分子を塩化スル７リルと反応さｂて該高
分子の水酸基を式（１）の如く変化させ、 塩化スル７リル Ｒ−Ｏｆｔ Ｒ−Ｏ５Ｏｔ ＃ＣＪ （Ｉ）次いで、こ
れにイミダゾールを加えて反応して、式（川の如く１−
イミダゾリル−スルホナート誘導体を形成させ、 高分子の水酸基を活性化させる。（Ｒは親水性高分子残
基） なお弐〇）の反応は通常、水分を十分除いた親水性高分
子を、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド等の適宜な有機媒
質に懸濁若しくは溶解させ、−４０〜−５０℃に冷却さ
せた状態で塩化スル７リルを滴下して行うのが好ましい
。
体高分子を炭水化物系のれ水性高分子に結合させるには
、まず親水性高分子を塩化スル７リルと反応さｂて該高
分子の水酸基を式（１）の如く変化させ、 塩化スル７リル Ｒ−Ｏｆｔ Ｒ−Ｏ５Ｏｔ ＃ＣＪ （Ｉ）次いで、こ
れにイミダゾールを加えて反応して、式（川の如く１−
イミダゾリル−スルホナート誘導体を形成させ、 高分子の水酸基を活性化させる。（Ｒは親水性高分子残
基） なお弐〇）の反応は通常、水分を十分除いた親水性高分
子を、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド等の適宜な有機媒
質に懸濁若しくは溶解させ、−４０〜−５０℃に冷却さ
せた状態で塩化スル７リルを滴下して行うのが好ましい
。
又、式（川の反応は、上記において塩化スルフリルを滴
下したのち、大過剰のイミダゾールを加えて、徐々に温
度を室温まで上列させながら行うのが好ましい。
下したのち、大過剰のイミダゾールを加えて、徐々に温
度を室温まで上列させながら行うのが好ましい。
上記により得られた１−イミダゾリルスルホナート誘導
体を戸別、水洗したのち、該誘導体を例えばＮ、Ｎ−ジ
メチルホルムアミド等の適宜な媒質に分１ｔｔさゼにれ
にα、ω−ジアミノアルカン、すなわちアルカンの両端
にアミン基を有する化合物、例えばエチレンジアミンを
式（■）の如くに作用させて、親水性高分子にアミノ基
を導入する。
体を戸別、水洗したのち、該誘導体を例えばＮ、Ｎ−ジ
メチルホルムアミド等の適宜な媒質に分１ｔｔさゼにれ
にα、ω−ジアミノアルカン、すなわちアルカンの両端
にアミン基を有する化合物、例えばエチレンジアミンを
式（■）の如くに作用させて、親水性高分子にアミノ基
を導入する。
なお、式（１１Ｄの反応は、室温で、ゆるやかな攪拌下
に２０時間前後の反応時間で行うのが好ましい。
に２０時間前後の反応時間で行うのが好ましい。
次に、上記反応後、該反応により１級アミノ某が導入さ
れた親水性高分子をｆ別等により取り出し、洗浄後、こ
れにα、ω−ジオキシアルカン、例えばグルタルアルデ
ヒドを作用させて、好ましくはＰＨ７０に’ｃ Ｐ液中
で式（１＼９の如くに反応させ、 Ｒ−ｘｉ ＋ ｃｎｔ４．ｙＨｚ−ト ＨＣＯ＋ ｃｎ
ｘ→ｎ Ｃｌ０−〉Ｒ−Ｎ（−ＣＩｌｔ＋−Ｎ＝ＣＨ
＋ＣＨｔ＋ｎＣＨＯｔｌＭ（ｎは、＃数） 該式（（〜りで得られたジオキシアルカン付加物を取り
出し、これを親水性高分子に結合せんとする生体高分子
の緩衝７＋！溶液に加えると、■ Ｒ−Ｎ イーＣＨ２→）１Ｎ＝ ＣＩ ４ （：１１
２−）。 Ｃｌｌ０ −１ 夏１ｔＮ −■Ｉ（ 一→ Ｒ−Ｎ ＋Ｃｌ１ｔ ＋−Ｎ ＝ ＣＨ（−ＣＩ
２＋ｎＣ＋１＝Ｎ−■ＴＶ）（（Ｅｌは生体高分子残基
を示す） の如くに反応して、共有結合によって安定に結合した肩
、水性高分子−生付高分子結合物が得られる。
れた親水性高分子をｆ別等により取り出し、洗浄後、こ
れにα、ω−ジオキシアルカン、例えばグルタルアルデ
ヒドを作用させて、好ましくはＰＨ７０に’ｃ Ｐ液中
で式（１＼９の如くに反応させ、 Ｒ−ｘｉ ＋ ｃｎｔ４．ｙＨｚ−ト ＨＣＯ＋ ｃｎ
ｘ→ｎ Ｃｌ０−〉Ｒ−Ｎ（−ＣＩｌｔ＋−Ｎ＝ＣＨ
＋ＣＨｔ＋ｎＣＨＯｔｌＭ（ｎは、＃数） 該式（（〜りで得られたジオキシアルカン付加物を取り
出し、これを親水性高分子に結合せんとする生体高分子
の緩衝７＋！溶液に加えると、■ Ｒ−Ｎ イーＣＨ２→）１Ｎ＝ ＣＩ ４ （：１１
２−）。 Ｃｌｌ０ −１ 夏１ｔＮ −■Ｉ（ 一→ Ｒ−Ｎ ＋Ｃｌ１ｔ ＋−Ｎ ＝ ＣＨ（−ＣＩ
２＋ｎＣ＋１＝Ｎ−■ＴＶ）（（Ｅｌは生体高分子残基
を示す） の如くに反応して、共有結合によって安定に結合した肩
、水性高分子−生付高分子結合物が得られる。
なお、上式（■では第１級丁ミノ基（−Ｎｕｔ ）を有
する生体高分子を親水性高分子に結合する機＼ 樽を示したが、第２級アミノ基（ｙ ｓ ｔｔ ）を有
する生体高分子についても上式（％Ｊ）と同様の機構で
親水性高分子と結合することが可能である。
する生体高分子を親水性高分子に結合する機＼ 樽を示したが、第２級アミノ基（ｙ ｓ ｔｔ ）を有
する生体高分子についても上式（％Ｊ）と同様の機構で
親水性高分子と結合することが可能である。
上記の如くして本発明にもとづいて用意された多糖類等
の民水化物系の親水性高分子と酵素や蛋白質等の生体高
分子との結合物ｔよ、固定化酵素等としてバイオリアク
ターや、胆汁酸等の生体物質分析用の液体クロマトグラ
フィーに用いられる固定化酵素による反応カラムの充填
剤として使用出来るのであり、この使用に際して酵素等
生体高分子は高分子担体に共有結合によって強固に結合
しているので簡単に分解されず、広いＰＲ範囲において
も安定に使用され得るのである。
の民水化物系の親水性高分子と酵素や蛋白質等の生体高
分子との結合物ｔよ、固定化酵素等としてバイオリアク
ターや、胆汁酸等の生体物質分析用の液体クロマトグラ
フィーに用いられる固定化酵素による反応カラムの充填
剤として使用出来るのであり、この使用に際して酵素等
生体高分子は高分子担体に共有結合によって強固に結合
しているので簡単に分解されず、広いＰＲ範囲において
も安定に使用され得るのである。
本発９１方法１上述の通りの方法であり、と＜Ｋ。
炭水化物系の親水性高分子を塩化スル７リルと、次いで
イミダゾールと反応させて活性化し、さらにα、 ６＞
−ジアミノアルカンと反応させて核親水性高分子中にｌ
Ｎアミノ基を導入し、これにα、０）−ジオキシアルカ
ンを作用させることＫより、該親水性高分子と生体高分
子における１級又は２級アミノ基とを結合させる方法で
あるので、不発Ｅ３１方法によれば従来法の如く毒性の
高いハロゲン化シアンなどの試薬を用いずともよく、安
全に反応を行うことが出来、しかも高い活性固定化率で
セルロース等親水性高分子担体に酵素等の生体高分子を
結合させることが出来るという効果を奏するのであり、
さらに１生体高分子が結合した親水性高分子は広いＰＩ
Ｔ領域において安定であるので、該生体高分子が最も＾
い活性を示し得る様なｆ’Ｈ領域を適宜選定して使用す
ることが出来るのである。
イミダゾールと反応させて活性化し、さらにα、 ６＞
−ジアミノアルカンと反応させて核親水性高分子中にｌ
Ｎアミノ基を導入し、これにα、０）−ジオキシアルカ
ンを作用させることＫより、該親水性高分子と生体高分
子における１級又は２級アミノ基とを結合させる方法で
あるので、不発Ｅ３１方法によれば従来法の如く毒性の
高いハロゲン化シアンなどの試薬を用いずともよく、安
全に反応を行うことが出来、しかも高い活性固定化率で
セルロース等親水性高分子担体に酵素等の生体高分子を
結合させることが出来るという効果を奏するのであり、
さらに１生体高分子が結合した親水性高分子は広いＰＩ
Ｔ領域において安定であるので、該生体高分子が最も＾
い活性を示し得る様なｆ’Ｈ領域を適宜選定して使用す
ることが出来るのである。
以下本発明につき、′ｆＡ施例にもとづいて説明する。
実施例
担体の活性化：セルロースビーズ（商品名セルロファイ
ン７００Ｍ、生化学工条社製）を蒸留水で洗浄後、脱水
したＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で平杏
化したものから、セルロースビーズ２．６５１ ｆ、取
り出し、ＤＭＦ６０ｎイに攪拌・門濁し、ドライアイス
−エタノール浴で一４０℃に冷却した。ゆるやかに攪拌
しながらこれＶＣ塩化スルフリル１６づを滴下すると反
応液は淡へ色になった。３０分後、イミダゾール１０．
８７を添加し、撹１’ｌ’ Ｌながら室温Ｋｐ。
ン７００Ｍ、生化学工条社製）を蒸留水で洗浄後、脱水
したＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で平杏
化したものから、セルロースビーズ２．６５１ ｆ、取
り出し、ＤＭＦ６０ｎイに攪拌・門濁し、ドライアイス
−エタノール浴で一４０℃に冷却した。ゆるやかに攪拌
しながらこれＶＣ塩化スルフリル１６づを滴下すると反
応液は淡へ色になった。３０分後、イミダゾール１０．
８７を添加し、撹１’ｌ’ Ｌながら室温Ｋｐ。
し、セルローズビーズをｐ別して取り出し、 ＤＭＦ。
蒸留水、ＤＭＦのＪ４に洗浄し、吸引脱水を十分に行っ
て活性化セルロースビーズを用意した。
て活性化セルロースビーズを用意した。
上記活性化セルロースビーズ１．９ ｆｆ Ｉ３ Ｍ
Ｆ２０ｍｔに加え、攪拌、懸濁し、これにエチレンジア
ミンｏ、 ｓ ７ ｍｌを滴下し、室温でゆるやかに攪
拌した。２４時間後、ｐ別し、蒸留水で充分洗浄した。
Ｆ２０ｍｔに加え、攪拌、懸濁し、これにエチレンジア
ミンｏ、 ｓ ７ ｍｌを滴下し、室温でゆるやかに攪
拌した。２４時間後、ｐ別し、蒸留水で充分洗浄した。
かくして用意したα、ω−ジアミノセルロースビーズ１
．３９を、Ｐ Ｉ！ ７．０の０．１Ｍリン（ｈｌｔｌ
ｉ衝液２．７ ｍｌ及び２５％グルタルアルデヒド０、
３ ｍｌとの混合液Ｃ（加え、室温でゆるやかＫｉ拌し
ながら反応させた。反応後い刑し、脱イＡン水で充分洗
浄した。
．３９を、Ｐ Ｉ！ ７．０の０．１Ｍリン（ｈｌｔｌ
ｉ衝液２．７ ｍｌ及び２５％グルタルアルデヒド０、
３ ｍｌとの混合液Ｃ（加え、室温でゆるやかＫｉ拌し
ながら反応させた。反応後い刑し、脱イＡン水で充分洗
浄した。
酵素の固定化二次番乞、３α−ヒドロギシステロイドデ
ヒドロゲナーゼ（３α−Ｈ４Ｆ）２０ｍ７を氷冷したＰ
１１７．０のＯ１λ（リン酸緩衝液２ ｍｌにとかし
、このうちｏ、 ｓ ｍｌ−を採取してｐ １１９．５
の２０ｍ、Ｍピロリ／Ａ・２緩侑液中（２５Ｃ）で、補
１１￥凧ニコチンアミドアデニンヌクレオチド（０，５
ｒｒＬＭ）、基質としてコール１代（０゜５ｍＭ）を用
い活性を測定した。残りの酵諧溶欣（１，９ｍｌ ）に
グルアルデヒドを作用後のセルロースビーズエ０ノを加
え、氷冷しながら時々ゆるやかに攪拌しで固定化反応を
行った。１ＦＩＳ間半後にい別し、ｐ液のｏ、 １ｍｌ
を採取して上記と同様にしてＦ液の残存ＩＩ￥索活性′
ｆ、がｔべた。又、ｐコ員されたセルロースビーズは、
０．１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸及び００５％の２
−メルカグトエタノールを含むＰ Ｈ７，０の０．１
Ｎτリン＋１２緩衝液で洗浄し、保存した。
ヒドロゲナーゼ（３α−Ｈ４Ｆ）２０ｍ７を氷冷したＰ
１１７．０のＯ１λ（リン酸緩衝液２ ｍｌにとかし
、このうちｏ、 ｓ ｍｌ−を採取してｐ １１９．５
の２０ｍ、Ｍピロリ／Ａ・２緩侑液中（２５Ｃ）で、補
１１￥凧ニコチンアミドアデニンヌクレオチド（０，５
ｒｒＬＭ）、基質としてコール１代（０゜５ｍＭ）を用
い活性を測定した。残りの酵諧溶欣（１，９ｍｌ ）に
グルアルデヒドを作用後のセルロースビーズエ０ノを加
え、氷冷しながら時々ゆるやかに攪拌しで固定化反応を
行った。１ＦＩＳ間半後にい別し、ｐ液のｏ、 １ｍｌ
を採取して上記と同様にしてＦ液の残存ＩＩ￥索活性′
ｆ、がｔべた。又、ｐコ員されたセルロースビーズは、
０．１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸及び００５％の２
−メルカグトエタノールを含むＰ Ｈ７，０の０．１
Ｎτリン＋１２緩衝液で洗浄し、保存した。
酵素固定化率の３？出：かくして用意された３α−Ｈ５
Ｐ固定化セルロ〜スのｉ１７ 素固定化率についてｔよ
、固定化前の酵素活（（Ｌが０４２７ユニツト／ ｏ、
ｔ ｍｔ、固定化後のｆ液のダ２存ｒ孝素活性が０、
１０３ユニツト／ ０．１ ｍｌと測定された所からし
て、該固定化率７５９％と看出されたり固定化酵素の活
性Ｆｌｌ定： ｐ Ｈ９，５の２０ｍＭビロリン酸緩衝
＋ｉＩ （２ｓ Ｃ）中で、補酵素ニコチンアミドアデ
ニンヌクレオチド１ｓＭ及び基質（コール酸）１ｍＭの
存在下に、精秤した固定化ｒｆ￥素を添加攪拌して反応
させ、活性をｈｌｌべ九所、１１当り７．２２ユニツト
の比活性値が測定された。
Ｐ固定化セルロ〜スのｉ１７ 素固定化率についてｔよ
、固定化前の酵素活（（Ｌが０４２７ユニツト／ ｏ、
ｔ ｍｔ、固定化後のｆ液のダ２存ｒ孝素活性が０、
１０３ユニツト／ ０．１ ｍｌと測定された所からし
て、該固定化率７５９％と看出されたり固定化酵素の活
性Ｆｌｌ定： ｐ Ｈ９，５の２０ｍＭビロリン酸緩衝
＋ｉＩ （２ｓ Ｃ）中で、補酵素ニコチンアミドアデ
ニンヌクレオチド１ｓＭ及び基質（コール酸）１ｍＭの
存在下に、精秤した固定化ｒｆ￥素を添加攪拌して反応
させ、活性をｈｌｌべ九所、１１当り７．２２ユニツト
の比活性値が測定された。
特許出願人
徂水化学工泰株式会社
代表者 藤 沼 基 利
手続ネ市正１外（自発）
昭和５８年１０月１４日
１、事件の表示
昭和 ５８年 特 許 願 第 １２０６３９号２、発
明の名称 親水性高分子に生体高分子を結合させる方法３、補正を
する者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ５３０ 住 所 大阪市北区西天満二丁目４番４号特許部 Ｔｌ
１Ｌ東京（０３） ４３４−９５５２４、補正の対象 ５、補正の内容 （夏）特許請求の範囲を別紙の通りに補正する。
明の名称 親水性高分子に生体高分子を結合させる方法３、補正を
する者 事件との関係 特許出願人 郵便番号 ５３０ 住 所 大阪市北区西天満二丁目４番４号特許部 Ｔｌ
１Ｌ東京（０３） ４３４−９５５２４、補正の対象 ５、補正の内容 （夏）特許請求の範囲を別紙の通りに補正する。
（２）明＃ｌ書第２頁第１２〜１３行、第４頁第１２行
、第７頁第２〜３行及び第９頁第１行に１゛α、ω−ジ
オキシアルカン」とあるのを「アルカンジアール」と訂
正する。
、第７頁第２〜３行及び第９頁第１行に１゛α、ω−ジ
オキシアルカン」とあるのを「アルカンジアール」と訂
正する。
（３）明細書第４頁第８行、第６頁第９〜ｌＯ行及び第
８真下から２行目に 「α、ω−ジアミノアルカ／」とあるのを「α、ω−ア
ルキレンジアミン」と訂正する。
８真下から２行目に 「α、ω−ジアミノアルカ／」とあるのを「α、ω−ア
ルキレンジアミン」と訂正する。
（４）明細書第７頁第９行に
［ジオキシアルカンイ１加物」とあるのを［アルカンジ
アール付加物」とｉｌ圧する。
アール付加物」とｉｌ圧する。
（５）明＃Ｉ書８ｒｔ、ｌｏ頁下から７〜６行に「α、
ω−ジアミノセルロースビーズ」とあるのを ［２−アミノエチルアミノセルロースピース］と訂正す
る。
ω−ジアミノセルロースビーズ」とあるのを ［２−アミノエチルアミノセルロースピース］と訂正す
る。
（６）明細書第４頁第８行及び同頁下から４〜３行に
［３α−ＩＩ Ｓ Ｐ Ｊとあるのを
［３α−ｎ ｓ Ｄ Ｊと訂正する。
６、添付書類の目録
（１１補正後の特許請求の範囲を記載した書面１通
以
補正後の特許請求の範囲
１．１級又Ｌ２級アミノ基を含有する生体高分子を。
共有結合によシ炭水化物系の親水性高分子に結合させる
方法において、上記親水性高分子を塩化スルフリルと、
次いでイミダゾールと反応さセタ後、α、ω−アルキレ
ンジアミンと反応さ上 せて該親水性高分子１ｃ１級ア
ミン基を導入し、この親水性高分子中に導入された１級
アミノ基と上記生体高分子における１１Ｉｉ又は２級ア
ミノ基とをアルカ／ジアールを作用させるととＫよって
結合させることを特徴とする親水性高分子に生体高分子
を結合させる方法。
方法において、上記親水性高分子を塩化スルフリルと、
次いでイミダゾールと反応さセタ後、α、ω−アルキレ
ンジアミンと反応さ上 せて該親水性高分子１ｃ１級ア
ミン基を導入し、この親水性高分子中に導入された１級
アミノ基と上記生体高分子における１１Ｉｉ又は２級ア
ミノ基とをアルカ／ジアールを作用させるととＫよって
結合させることを特徴とする親水性高分子に生体高分子
を結合させる方法。
Claims (1)
- １、 １級又は２級アミノ基を含有する生体高分子を共
有結合により炭水化物系の親水性高分子に結合させる方
法において、上記親水性高分子を塩化スルフリルと、次
いでイミダゾールと反応させた後、α、ω−ジアミノア
ルカンと反応させて該親水性高分子に１級アミノ基を導
入し、この親水性高分子中に導入された１級アミノ基と
上記生体高分子における１級又は２級アミノ基とをα、
ω−ジオキ／アルカンを作用させることＫよって結合さ
せることを特徴とする親水性高分子に生体高分子を結合
させる方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12063983A JPH0249712B2 (ja) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Shinsuiseikobunshiniseitaikobunshioketsugosaseruhoho |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12063983A JPH0249712B2 (ja) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Shinsuiseikobunshiniseitaikobunshioketsugosaseruhoho |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6012982A true JPS6012982A (ja) | 1985-01-23 |
| JPH0249712B2 JPH0249712B2 (ja) | 1990-10-31 |
Family
ID=14791195
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12063983A Expired - Lifetime JPH0249712B2 (ja) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Shinsuiseikobunshiniseitaikobunshioketsugosaseruhoho |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0249712B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0194578A2 (en) * | 1985-03-13 | 1986-09-17 | Miles Inc. | Proteins immobilised on polyamides or cellulose hydrate and the use thereof for the preparation of biocatalysts, test strips or chromatography materials |
| JP2016098313A (ja) * | 2014-11-21 | 2016-05-30 | セイコーエプソン株式会社 | セルロース系材料、液状組成物、造形物および造形物の製造方法 |
-
1983
- 1983-07-01 JP JP12063983A patent/JPH0249712B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0194578A2 (en) * | 1985-03-13 | 1986-09-17 | Miles Inc. | Proteins immobilised on polyamides or cellulose hydrate and the use thereof for the preparation of biocatalysts, test strips or chromatography materials |
| JP2016098313A (ja) * | 2014-11-21 | 2016-05-30 | セイコーエプソン株式会社 | セルロース系材料、液状組成物、造形物および造形物の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0249712B2 (ja) | 1990-10-31 |
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