JPS5951797A - セルロマイシンの製造法および微生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、セｌｖロマイシン（Ｃａｅｒｕｌｏｍｙｃｉ
ｎ　）の新規な製造法および微生物に関する。

セルロマイシンは、カナディアン・ジャーナμ・オブ・
マイクロビオロジイ（Ｃａｎａｄｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａ
ｌｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　）　ｆｆ、５巻、
：３１７〜３２１頁（１９５９年）およびカナディアン
・ジャーナル・オプ・ケミストリイ（Ｃａｎａｄｉａｎ
　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＣｈｅｍｉ８ｔｒ３’　）第４
５巻、　１２１５〜１２２３頁（１９６７年）Ｋ、スト
レプトミセス・セルレウス（Ｓｔｒｅ−ｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ　ｃａｅｒｕｌｅｕｓ　）により生産され、以下に示
す構造式を有することがそれぞれ報告されている。

本発明者らは、抗結核菌作用を示す抗生物質の探索を目
的として、多数の土壌試料から放線菌を分離し、）れら
の生産する抗生物質について研究を重ねた結果、ノカル
ディオプシス属に属するある種の微生物がセルロマイシ
ンを生産すること、そして該微生物を適宜の培地に培養
することによシセルロマイシンを培養物中に蓄積させ、
か＼る培養物から該抗生物質を効率よ〈産業的有利に採
取しうろことを知見し、これに基づいてさらに研究した
結果、本発明を完成した。

本発明は、（１）ノカルディオプシス属に属しセルロマ
イシンを生産する能力を有する微生物を培地に培養し、
培養物中にセルロマイシンを生成蓄積せしめ、これを採
取することを特徴とするセルロマイシンの製造法、およ
び（２）培地上で巻きひげないし蔓状の菌束糸を形成し
、グリセロ−！。

アスバフギン寒天培地上およびグルコース・アスバフギ
ン寒天培地上で白色の気菌糸を着生し、生育温度範囲は
約９ないし３６℃であるノカルディオプシス・シリエフ
イシエンスでアル。

本発明で使用されるノカルディオプシス属に属しセルロ
マイシン生産能を有する微生物としては、たとえば新菌
種ノカルディオプシス・シリエフイシエンス（Ｎｏｃａ
ｒｄｉｏｐｓｉｓ　ｃｉｒｒｉｅｆｆｉｃｉｅｎｓ　）
が挙げられる。その具体例としては、滋賀県大津市の土
壌から分篩されたノカルディオプシス・シリエフイシエ
ンスＣ−３９１４８株（以下、「Ｃ−３９１４８株」と
略称することもある。）が挙げられる。

Ｃ−３９１４８株の形態学的特徴、培養および生理学的
性質は以下に示す通りである。

１）形態学的特徴 合成寒天培地上では生育は中程度であり、共生菌糸はよ
く伸長し、分校も見られる。気菌糸の形成は貧弱である
。一方、複合寒天培地上では、生育は中程度であり、コ
ロニーはしわのあるや＼隆起した形状を呈する。なお、
２週間以上の培養で短稈画状のＩＶｒ裂細胞が観察出来
る場合もある。気菌糸の着生は一般に貧弱であり、直線
状ないしや一屈曲した形状を示し、ｕ子顕微鏡的観察で
は長楕円形の長い胞子の連鎖（５０個以上）が認められ
る。胞子の大きさは０．５１〜０．７３ｐｍｘ０．７５
〜１．７４μｍで、それらの表面は平滑である。

又、合成もしくは複合の各種寒天培地上で巻きひげない
し蔓状の長い菌束糸を形成し、極端な場合、その長さは
数ｍｍに達する。その他、運動性細胞。

菌核、胞子のう等は形成されない。

２）培養性状 ２８℃、１４日間培養後の各種培地上での性状は第１表
に示す通りである。

第１表　Ｃ−３９１４８株の分類用培地上の性質＊　Ｇ
：生育、ＡＭ：気菌糸、ｓｐ：可溶性色素なお色調の記
号はカラー・ハーモニー・マニュアｙＶ　（Ｃｏ１ｏｒ
　Ｈａｒｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ　）　、第４版（Ｃｏ
ｎ−ｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ
ｍｅｒｉｃａ　、　１９５８年発行）による。

３）生理学的性質 Ｃ−３９１４８株の生理的諸性質は第２表に示す通シで
ある。

プリーダム・ゴトリープの方法〔ジャーナル・オブ・バ
クテリオロジイ（Ｊｏｕｚｎａｌ　ｏｆ　’Ｂａｃｔｅ
ｒｉ−ｏ１ｏｇｙ　）第５６巻、１０７頁、１９４８年
〕に記載されている培地を用いて、各種炭素源の利用性
をしらべ、それらの結果を第３表に示した。

第３表 Ｄ−グルコース　　　■　　　可溶性でん粉　　　十柑
：非常によく利用する 廿：よく利用する ＋：利用する 土：利用が疑わしい ｍ：利用しない ４）全細胞分解物の性質 ｅ−３９１４８株を酵母エキス（１％）・グルコース（
１％）からなる液体培地に接種して得た菌体をベラカー
（Ｂｅａｋｅｒ　　）らの方法〔アプライド・ミクロビ
オロジイ（Ａｐｐ１１ｅｄＭｉｃｒｏｂｉ’ｏｌｏｇｙ
）第１２巻、４２１〜４２３頁（１９６４））に準拠し
て、２．６−ジアミノピメリン酸の異性体について調べ
た結果、メソ型であった。又、同菌体を用い、ルシエバ
リｘ　（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　）の方法〔ジャーナ
ル・オブ・ラボラトリ−・アンド・クリニカμ・メデイ
ンン（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔ、ｏｒｙ
　＆　Ｃ１ｉ−ｎｉｃａ］、　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　）第
７１巻、　９３４〜９４４頁（１９６８年）〕に従い、
菌体の酸加水分解物をペーパー・クロマトグラフィによ
り分析を行った結果、ガラクトース。マンノース、リボ
ース、ラムノースがそれぞれ明瞭に認められたが、アラ
ビノース及びキシロースは認められなかった。以上の結
果から、Ｃ−３９１４８株は細胞壁タイプ■、糖パター
ンＣに帰属する。又、ミニキン（Ｍｉｎｎｉｋｉｎ　）
らの方法〔ジャーナル・オプ・ジェネラル・ミクロビオ
ロジイ（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｍｉ
ｃｒｏ　−ｂｉｏｌｏｇｙ　）第８８巻、　２００〜２
０４頁（１９７５）〕に準拠し、ミコール酸の分析を行
ったが、全く認められなかった。

以上の諸性質から、Ｃ−３９１４８株をノカルディオプ
シス属（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ　）に属する１菌株
と考えるのが妥当である。

ノカルディオプシス属は放線菌目の１属である。

ノカルディオプシス属についての菌学的性質はメヤー（
Ｍｅｙｅｒ　）によジインターナショナル・ジャーナル
・オプ・システマチック・バタテリオロジイ（Ｉｎｔｅ
ｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔ
ｅｍａｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第２６巻、
　４８７−４９３頁（１９７６年）に掲載されている。

セルロマイシン生産菌株の菌学的研究で用いられた方法
はインターナショナル・ストレプトマイセス・プロジェ
クト（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｓｔｒｅｐｔｏ−
ｍｙｃｅａ　Ｐｒｏｊｅｃｔ　（工ＳＰ）〕により推奨
される方法〔インターナショナル・ジャーナル）オプ・
システマチック・バクテリオロジイ　第１６巻、３１３
〜３４０頁（１９６６年）〕ならびに分類学で通常使用
されている方法と同様なものである。

ところで、ノカルディオプシス属の公知の菌種としては
、ノカルディオプシス・ダッソンビレイ（Ｎ、　ｄａｓ
ｓｏｎｖｉｌｌｅｉ　）　（インターナショナ／ｌ’・
ジャーナル・オプ・システマチック・バタテリオロジイ
　第２６巻、４８７〜４９３頁（１９７６年）〕。

ノカルディオプシス・シリンジェ（Ｎ、　ｓｙｒｉｎｇ
ａｅ　）〔アンテイビオティキ（Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｋ
ｉ　）第２２巻、４８３〜４８６頁（１９７７年）〕、
ノカルディオプシス・アトラ（Ｎ、　ａｔｒａ　）　　
（米国特許４，２１２．９４４（１９８０年７月１５日
）〕およびノカルディオプシス・トレハロセイ（Ｎｏｃ
ａｒｄｉｏｐａｉｓ　ｔｒｅ−ｈａｌｏｓｅｉ　）　（
米国特許４，３０６，０２８　（１９８１年１２月１５
日）〕が知られている。Ｃ−３９１４８株の性質を上記
の公知菌種に関する文献記載事実あるいは標準菌株と比
較すると、ノカルディオプシス・ダッソンビレイは固型
培地上、長期間の培養で球菌様の断裂細胞が観察される
。又、培養性状、特に各種寒天培地上でのコロニーの端
が一般に不明瞭である。又、生理的な性質として、でん
粉の加水分解およびキサンチンの分解はいずれも陽性で
ある。しかし、Ｃ−３９１４８株は長期の培養によって
桿菌様の断裂細胞を観察出来ることもあるが顕著ではな
い。各種寒天培地上でのコロニーの端が非常に明瞭であ
る。さらに、でん粉およびキサンチンの分解はいずれも
陰性であり、ノカルディオプシス・ダッソンビレイとは
異なる。

ノカルディオプシス・シリンジエは、シュークロース・
硝酸塩寒天、グルコース・アスパラギン寒天およびオー
トミール寒天などの合成もしくは複合培地において淡紫
色ないし暗いすみれ色の気菌糸を着生し、肉桂色ないし
褐色の可溶性色素を生成する。しかし、Ｃ−３９１４８
株は白色粉状の気菌糸を着生し、シュークロース・硝酸
塩寒天でわずかに淡桃色の可溶性色素を生成するが、グ
ルコース・アスパラギン寒天およびオートミール寒天培
地では全く可溶性色素の生成は認められない。

ノカルディオプシス・アトラはベネット寒天。

エマーソン寒天培地上で黒色の生育を示すとともに、黒
色の可溶性色素を生成し、オートミール寒天、無機塩で
ん粉寒天、シュークロース・硝酸塩の各寒天培地で緑色
を帯びた可溶性色素を生成する。又、生理的にはでん粉
の加水分解能は陽性であり、２０℃での生育は極めて貧
弱である。以上の性質はＣ−３９１４８株とは特に異な
る性質である。ノカルディオプシス・トレハロセイハ１
８〜４５℃で生゛育し、でん粉およびキサンチンの分解
は陽性、ゼラチンの液化は陰性、さらにＤ−フラクトー
スおよびシュークロースの資化性は陰性、Ｄ−マンニト
ールの利用性は陽性である。以上の生理的性質は、Ｃ−
３９１４８株のそれらとは明らかに異なる性質である。

他方、セルロマイシン生産に関しては、上記のノカルデ
ィオプシス属の４菌種はいずれも本抗生物質を生産しな
い。又、セｐロマイシン生産菌として知られているスト
レプトミセス・セルレウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
　ｃａｅ　−ｒｕｌｅｕｓ　　）はストレプトミセス属
に属する菌株であり、その培養性状〔インターナショナ
ル・ジャ−ナル・オプ・システマテイク・バクテリオロ
ジー　第２２巻、２７９〜２８０頁、　１９７２年〕、
特に、各種合成および複合培地において黒青色ないし暗
青紫色の可溶性色素を生成するが、それらの色調はＣ−
３９１４８株では全く観察されない。

したがって、Ｃ−３９１４８株は、公知のノカルディオ
プシス属の種（５ｐｅｃｉｅｓ　）のいずれとも異なシ
、新菌種に属するものと考えられる。

以上のように、Ｃ−３９１４８株は公知のノカルディオ
プシス属菌およびセルロマイシン生産菌のいずれとも異
なる新しい菌種であることが明らかにされたので、本菌
の特徴的な形態とみられる巻きひげないし蔓様の１種の
菌束糸の形成にちなみ、Ｃ−３９１４８株の属する種を
ノカルディオプシス・シリエフィシェンス（Ｎｏｃａｒ
ｄｉｏｐｓｉｓｃｉｒｒｉｅｆｆｉｃｉｅｎｓ　）と命
名した。

ノカルディオプシス・シリエフイシェンスＣ−３９１４
８株は、財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）に昭和５７年８
月３日に工ＦＯ１４２００として寄託され、また本微生
物は、通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（Ｆ
ＲＩ）に昭和５７年８月２７日にＦＥＲＭ　　Ｐ−６６
９２として寄託されている。

ノカルディオプシス属に属する菌株は他の放線菌と同様
に、その性質が変化しやすく、例えば紫外線やＸ線、薬
品などを用いる人工変異手段を適用することによシ容易
に変異し得る。しかし、これらの変異株であってもセル
ロマイシンを生産する性質を有する限り本発明方法に使
用することが出来る。勿論、か！る変異株が自然の原因
に由来するものであっても、人工的に行われたものであ
ってもさしつかえない。

本発明方法においては、ツカ〜デイオプシス属に属する
セルロマイシン生産菌が培地に培養されるが、培地とし
ては通常の微生物が利用し得る栄養物を含有するものを
使用すれば良い。すなわち、栄養源として、たとえばグ
ルコース、でん粉、グリセロール、テキストリン、シュ
ークロース、水飴、糖蜜などＯ脚素源、また窒素源とし
て、たとえば脱脂大豆粉および生大豆粉、コーン・スチ
ープ・リカー、小麦胚芽、綿実粉、６ｖ母エキス、硫酸
アンモニウム、硝酸アンモニウムなどの有機および無機
窒素化合物がいずれも有効に利用される。

また、必要に応じて炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、
塩化カリウム、リン酸塩など無機塩類を添加しても良い
。また菌の発育を助け、セルロマイシンの生産を促進す
るような適宜の有機物や無機物を添加しても良い。

培養法としては一般の抗生物質生産方法と同様に行なえ
ば良く、液体培養法とくに深部通気培養法が好ましい。

培養に適するｐＨは約６〜８．温度は約２４〜３５℃で
あシ、多くの場合２８℃付近で培養される。また培養日
数は通常約２〜７日間、好ましくは約３〜５日間である
。なおセルロマイシンは培養液中に生成、蓄積される。

培養の経過にともなって培養液中に生産されるセルロマ
イシンの力価は、キャンデイダ・アルビカンス（Ｃａｎ
ｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　）　Ｉ　ＦＯ０５３３を
被検菌とするペーパー・ディスク法の常法によって定量
される。通常４〜５日間の培養でセルロマイシンの生産
量は最高に達する。

本発明においてはか−る培養物からセルロマイシンを採
取するが、採取法としては脂溶性抗生物質の採取に通常
用いられる手段が利用される。すなわち、たとえば濾過
、濃縮、各種溶媒による抽出、沈澱、シリカゲルなどに
よる吸着クロマトグツフィー、溶媒に対する溶解度の差
を利用した不純物との分離沈澱法、乾燥、再結晶などの
手段が単独にあるいは組み合せて利用される。

たとえば本発明によって得られるセルロマイシンは培養
物中主としてｐ液中に含まれるため、培養物を濾過し、
得られた炉液に水と混和しない有機溶媒（例、酢酸エチ
ル、１−ブタノール、メチル　イソブチルケトン等）を
加えて攪拌抽出し、抽出溶媒層を水洗後濃縮するとセル
ロマイシンの粗結晶が得られる。これを戸数して更にシ
リカゲルを用いる吸着クロマトグツフィーにより精製し
、酢酸エチルよシ結晶化、さらに再結晶を行い、セルロ
マイシンを得ることが出来る。

このようにして得られたセρロマイシンの理化学的性状
を示すと下記の通シである。

１、無色針状晶：融点１７０〜１７２Ｃ２元素分析値（
ロ）： 実験値　Ｃ６２，７５ｉ　１１４．７７；　Ｎ　１Ｂ、
　２３Ｃ１２”１１０２Ｎ３として 計算値　Ｃ６２，８７ｉ　Ｈ４，８４；　Ｎ　１８．３
３３、紫外線吸収スペクト／Ｉ／： λ“’　”　２３８（ε３３４３４）　、２８４ｓｈ（
１２２７０）。

ｍａｘ　　ｎｍ ２９７（６８７０） λ　””０Ｈ””　　”　　２４３（ε３２７４７）、
２７５ｓｈｍａｘ　　ｎｍ （１２８２４）　、　３１２（１２７３２）Ｉ　Ｖ′０
ＯＮａＯ）ｌニー７’タノー／′２３）〜２４８（ε２
０１５２）。

ｍａｘ　　ｎｍ ２７６（２５１４４） ４、マススペクト／’：ｍ／Ｚ　　２２９．１９９，１
８６，１５５＆赤外線吸収スペクトｌｖ： ＠叡的ど−ク： ３２００、３１２０−３０９０．　３０１０．２９５０
．２８５５゜２７７０、　１６０５．１５９０．１５６
５．　１４７０．　１４５０゜１４３０、　１３６０．
　１２５７．　１２２３．１２００．　１１６５゜１１
５２．１１０５，９５５，８８０，８５５，７９０゜７
４０．７３０，６６２，６３０ ６、核磁９ｆＣ共１！１ｍスペクトル（ｄ６−シメチル
スルホキシド）δ３−９５ｐ１）ｆｌｌ（ｓ）、７．３
５（ｄ、Ｊ＝２．５）　、７．４３（ｍ。

Ｊ＝７．３．４．７．１．４）、７．９３（ｍ、Ｊ＝７
．８，７．３゜１．８）、７．９２（ｄ、Ｊ＝２．５）
、８．１７（ｓ）、８．４５（ｂａ　、　Ｊ＝７．８　
、１．４）、８．７２（ｂｄ、、Ｔ＝４．７，１．８）
、１１．６７（ｓ） 上記の性質は、カナディアン・ジャーナル・オブ・マイ
クロビオロジイ　第５巻、３１７〜３２１頁（１９５９
年）およびカナディアン・ジャーナル・オプ・ケミスト
ソイ　第４５巻、１２１５〜１２２３頁（１９６７年）
に記載のセルロマイシンの物性値とよく一致する。

尚本物質の生物学的性状は次に示す通りである。

各種微生物に対する最小阻止濃度（Ｍ工Ｃ）は第４表に
示す通りである。Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂ
ｅ−ｒｃｕｌｏｓｉｓ　Ｈ３７ＲＶおよびＭｙｃｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ　１ｎｔ−ｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ　Ｐ
−４８の場合は５９６牛血清添加キルヒナ−培地を使用
した稀釈法によル、３７′ｃで２週間培養後に、その他
のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　の場合には３％グリセ
ロール添加トリプチケース・ソイ寒天（ＴＳＡ、パμテ
ィモア・バイオロジカルズ社製、米国）を用いた稀釈法
によって３７℃。

４２時間後にそれぞれ判定した。また一般細菌に対して
はＴＳＡを用いた寒天稀釈法によって３７し、１８時間
後、また、かび、酵母に対しては１％グμコース添加Ｔ
ＳＡを用いた寒天稀釈法によシ２８′ｃ、４２時間後に
それぞれ□判定した。

第４表 被　　験　　菌　　　　　　　　　　Ｍ工Ｃ（μｇ／Ｒ
／）Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｖａｃｃａｅ　ＡＴ
ＣＣ１５４８３６，２５Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　
ｐｈｌｅｉ　ＩＦＯ１９２４９６，２５Ｍｙｃｏｂａｃ
ｔｅｒｉｕｍ　ｓｍｅｇｍａｔｉｃｓ　ＡＴＣＣ６０７
１２，５Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｂｅｒｃｕ
ｌｏａｉｓ　Ｈ３７ＲＶ　　　　＜１−２５Ｍｙｃｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ　１ｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ　Ｐ
−４８２，５Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　５ｕｂｔｉｌｉａ　
ＰＣＩ　２１９　　　　　　　　　２５Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ　ｃｅｒｅｕｓ　　ＩＦＯ３５１４１２，５Ｓｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕａ　２０９Ｐ　　　
　　＞１００Ｍ１ｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　１ｕｔｅｕｓ　
ＩＦＯ１２７０Ｂ　　　　　　　１２．５Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　Ｋ１２　　　　　　　　　　　
　５ＱＰｒｏｔｅｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ　ＩＦ’０３
０４５　　　　　　　１２．５Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｍ１ｒ
ａｂｉｌｉｓ　ＩＦＯ３８４９１２，５Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏａａ　ＩＦ’０３０８０　
　　５０Ｓａ１ｍｏｎｅｌｌａ、　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉ
ｕｍ　ＩＦＯ１２５２９２５Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉ
ｃａｎｓ　　ＩＦＯ０５８３１２，５８ａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ＩＦＯ０２０９６
，２５Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　ＩＦＯ４
０６６２５Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｈｒｙｓｏｇｅ
ｎｕｍ　　　　　　　　　　　５．２５また、種々の微
生物に対する抗菌作用について、カナディアン・ジャー
ナル・オブ・マイクロビオロジー　第５巻、３１７頁（
１９５９年）に記載されている。

マウスに対してセルロマイシン４００　解ｙ／ｋｇｔ−
腹腔内投与したが、死亡例は全くみられなかった。

したがって、セルロマイシンの毒性は低いと考えられる
。

このように、セルシロマイシンは、抗菌作用を有し毒性
も低いので、抗菌剤として使用できる。

さらに、セルロマイシンは除草作用を有するので、除草
剤としても利用出来る〔チャンドフン等ザ・ジャーナル
・オブ・アンチビオティクス（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　）第２１巻、２４３
頁、　１９６８年参照〕。

以下に実施例を挙げて、本発明をさらに詳しく説明する
。なお、培地におけるパーセントは重量／容量パーセン
トを示す。

実施例／ りｙｖコース２％、可溶性でん粉３％、コーン・ヌチー
プ・リカー１％、生大豆粉１％、ペプトン０．５９６．
食塩０．３％、　ＣａＣＯ３ｏ　、　５　％　（ｐＨ７
，０）からなる培地４Ｃ）ｘｉを２００ｘｌ容三角フフ
スコに分注し、１２０℃で２０分間滅菌したのチ、ノカ
ルディオプシス・シリエフィシェンスＣ−３９１４８（
工１’ｏ　　１４２００．ＦＥＲＭＰ−６６９２）を接
種し、２８℃で３日間回転振繰機上で培養した。得られ
た培養物を１０％の割合でグリセロール５％、コーン・
スチーデ・リカー２％、ドフィイースト２％　、　Ｍｇ
Ｃｌ２　０．　５％、　ＫＨ２ＰＯ４２’Ｍ　、　Ｃａ
ＣＯ３０−１％（ｐＨ７，０）からなる培地４０ｔｎｌ
を含有する２００＃Ｉ／容三角フラスコに移植し、２８
℃で５日間回伝振借機上で培養した。

このようにして得られた多数のフラスコから培養液を集
め、その培養液２．７ｇにハイフロスーパーセ／Ｌ／（
ジミンズ・マンビル・プロダクト社製、米国）６０ｇを
加えてかきまぜた。混和物を吸引濾過して菌体ケーキと
培養炉液に分けた。菌体ケーキ２５０ｇに７０％アセト
ン水１５００ｇｌを加え１１１間攪拌し、抽出後、瀘過
した。得られた抽出液を減圧下濃縮してアセトンを留去
し、水性液６００耐を得た。この水性液と共に得られた
ろ液（２，５５４）とを合ぜた液（３，ｘ５１）に酢酸
エチ）ｖｌＯＯＯ＃Ｉｌを加えて（・１ｙ拌抽出し、こ
の操作を２回くり返した。酢酸エチル層を合せて水洗し
、硫酸す）ＩＪウムで乾燥した後、酢酸エチルを減圧濃
縮して３０＊／とした。これにシリカゲ！（０，０５〜
０．２ｍｍ）（メμり社、西独）２ｇを加えまぜ合せた
後、溶媒を留去し、あらかじめ用意したシリカゲル・カ
ラム５０　ｖｒｌの上端に付し、ｎ−ヘキｔン、酢酸−
ｃ−Ｆ−／Ｌ／（３：　１　）を３００＃ｌｊ、（２：
ｌ）を３００ｇ１．（１：１）を３００ｘｌの順で溶出
した。１５＊／ずつ分画し、フラクション４１５〜３０
までを集めて減圧濃縮し、溶媒を殆んど留去した後に酢
酸エチ／’　３　ｍｌを加えて溶解後、室温下放置した
。析出した結晶をＦ−増し乾燥すると１６５Ｗｆのセル
ロマイシンＡが得うした。

ｍ、ｐ、１７０〜１７２℃。

１

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　ノカルディオプシス属に属し七μロマイシン
   を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培養物
   中にセμロマイシンを生成蓄積せしめ、これを採取する
   ことを特徴と与るセμロマイシンの製造法。
2. （２）培地上で巻きひげないし蔓状の菌束糸を形成し、
   グリセロール・アスパラギン寒天培地上およ−びグルコ
   ース・アスパラギン寒天培地上で白色の気菌糸を着生し
   、生育温度範囲は約９ないし３６℃であるノカルディオ
   プシス・シリエフイシエンス。