JPS603476B2 - 抗生物質組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はプソィドノカルジアフアスチジオサ新種ルー
チェン（ＰｓｅｕｄｏｎＭａｒｄｉａｆａｓｔｉｄｉｏ
ＳａＳｐ．ｎｏｖ．Ｒｏｍｅｎ）ＡＴＣＣ３１１８１（
微工研菌寄第４０９５号（ＦＥＲＭ−Ｐ Ｍ．４０９５
））の深部好気条件下の培養によって生産した大二環状
べプチド抗生物質である化合物４１ＭＢおよび化合物４
１４嬰からなる組成物に関する。

土壌微生物によって生産される新規な抗生物質の種々の
属の細菌、高等な菌、かびの各属内の多くの種および各
種内の多くの菌株についてスクリーニングを行うことに
よって開発されてきた。

多くの注意を払われていなかった微生物のうちにプソイ
ドノカルジア属（ｔｈｅ 群ｎ船Ｐｓｅ町ｏｍにａｒｄ
ｉａ）に属するものがある。

この属と／カルジア属（ｔｈｅｇｅｎｕｓＮＭａｒｄｉ
ａ）はアクチ ノ マ イ セ タ レ ス 網（ ｔ
ｈｅ ＯｒｄｅｒＡｃｔｉｍｍｙｃｅｔａｌｅｓ）に属
し、プソイドノカルジア属は求頂的成長による側鎖を有
しない長い胞子鎖からなる好気的菌子体の生産およびい
くつかの菌系のジグザグ型の生育によってノカルジア属
（ｔｈｅ度ｎ瓜Ｎｗａｒｄｉａ）と異なる。この発明の
抗生物質の製造に有用な上記微生物はエジプトからの土
壌試料から単機された。この培養物（ファイザー（Ｐｆ
ｉｚｅｒ）Ｆ．Ｄ．２５０２８）はブソィドノカルジア
フアスチジオサ新種ルーチェン （ ＰＳｅｕｄｏｎ
○Ｃａｒｄｉａ ｆａｓｔｉｄｉｏＳａ Ｓｐ．ｎ。ｖ
．タＲｏｕｔｉｅｎ）と命名されメリーランド州ロック
ブイルのアメリカンタイプ力ルチヤーコレクシヨンにＡ
ＴＣＣ３１１８１の番号で寄託された。特許が与えられ
た場合には寄託の永久性と公衆へのすみやかな分譲が実
現する。この培養物の分穣はこの出願がＺＯルール（Ｒ
山ｅ）１４と３５ＵＳＣ１１２にもとづいて係属してい
る間可能である。寄託された培養物の公衆への分穣につ
いての制限は特許が与えられると同時に取り除かれ逆行
することはない。又、この微生物は工業技術院の微生物
工業技術研究所に微Ｚ工研菌寄第４０９５号（ＦＥＲＭ
−Ｐ Ｍ．４０９５）として寄託されてもいる。この培
養物は特に断らない限り２ぴ０でインキュベートされ、
適当なインキュベート時間の後結果を記録した。

色は一般的用語およびリッジウェイ２（ Ｒｉ増ｗａｙ
）箸 Ｃｏｉｏｒ Ｓねｎ地ｒｃｌｓ ａｎｄＮｏｍ
ｅｎｃｌａ山ｒｅ，１９１２による命名に従って記録し
た。培地または試験および適当な参考文献は次のとおり
である： ２１ 水道水寒天
寒天２％ブラス水道水 ２ ばれし、しよ−にんじん寒天 Ｍ．Ｐ．Ｌｅｃｈｅｖａｌｌｉｅｒ，Ｊｒ．Ｌａｂ．ａ
ｎｄ ＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄ．７１：９３４一嬰４，
１９斑．１リットル当り３０３のまれし、しよ２５夕の
にんじんおよび２０夕の寒天のみ使用。

＄ ばれし、しよＤーグルコース寒天（ディフコ（Ｄｉ
にｏ））紬 １リットル当り皮をむいたばれし、しよ１
００夕３および１０夕のグルコースの浸出液から調製し
たばれし、しよＤーグルコース寒天、ｐＨ７．０＄ 紬
におけるようにして調製したが３のｐＨと類似の柵５．
５のばれし、しよＤーグルコース寒天４ グリセリン・
アスバラギン寒天 生Ｗａｋｓｍ岬ｎ，Ｓ，
ＡＴｈｅ Ａｃｔｉ血ｍｙＣｅｔ６Ｓ，ＶｏｌＤ，ｐ３
２８ １９６１のｍｅｄｉ皿ｍ ３５ 酵母エキス−麦
芽エキス寒天Ｔ．Ｇ．Ｐｒｉ地ａｍ等、Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃｓＡｎｎ．１９５６／５７ｐｐ処７−９球６ ば
れし、しよ片 ７ 好気生活試験 Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃ山ｔｍｅ Ｃａねｌｏ
ｇｕｅ １爪ｈｅｄ．，１９７２ｐ２３５のＡＴＣＣｍ
ｅｄｉｍｍ １７２８ 二倍希釈（ＨａｌｆＳｔｒｅｎ
亀ｈ）スキムミルク寒天（デイフコスキムミルク（Ｄｉ
ｆｃｏＳｋｉｍＭｉｌｋ））９ ツアベツクー藤糖寒夫 ＷａｋＳｍａｎ，Ｓ，Ａ，Ｔｈｅ Ａｃｔｉ肌ｍｙＣｅ
ｔｅＳ，Ｖｏｌ ０，ｐ２３２，１９６１のｍｅｄｉ山
ｍ １１０ グルコース酵母エキス寒天ＷａｋＳｍａｎ
，Ｓ，ＡＴｈｅ Ａｃｔｉ血ｍｙＣｅｔｅＳ，ＶｏｌＤ
，ｐ３３１，１９６１のｍｅｄｉｍｍ２９１１ゼラチン
Ｒ．Ｅ．Ｇｂｒｄｏｎ ａｎｄ Ｊ．Ｍ．Ｍｉｈｍ，Ｊ
ｒ．Ｂａｃｔ．７３：１５−２７，１９５７１２ でん
ぷん寒天 １１の文献と同じ。

１３ 無機塩でんぷん寒天 ＩＳＰ塔地軸．４ １４ スキムミルク １５ セルロース ａ 日．Ｌ．Ｊｅｎｓｅｎ，Ｐｒｏｃ．Ｌｉｎｎｅａ
ｎ Ｓｏｃ．Ｎ．Ｓ．Ｗａｌｅｓ５５：２３１−２４８
１９３０ｂ Ｍ．Ｌｏｖｉｎｅ ａｎｄ 日．Ｗ．Ｓ
ｃｈｏｅｎｌｅｉｎ，ＡＣｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ ｏｆ
ＣＭｔＷｒｅ Ｍｅｄｉａ，ｍｅｄｉ山ｍＮｏ．２５
１１，１９３０ｈ６ 温度範囲 Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｍｅ Ｃａｔａ
ｌｏｇ肥 ，１のｈｅｄ．ｐ２３５ １９７２のＡＴＣ
Ｃｍｅｄｉｕｍ１７２１Ｌ７ トリプトン・酵母エキス
ブロスＴ．Ｇ．Ｐｒｉｄ舷ｍ ａｎｄ Ｄ．Ｃ℃ｔｔ
Ｌｉｅｂ，Ｊｒ．Ｂａｃｔ．５６：１０７一１１へ１９
４８ｍ８ 酢酸鉛小片含有べプトン・鉄寒天（ディフコ
（Ｄｉにｏ））順 オートミール寒天 ＩＳＰ培地３ ２０ 硝酸塩還元 ａ Ｄーグルコース硝酸塩プロス ｗａｋｓｍａｎ，Ｓ．ＡＴｈｅ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅ
ｔｅｓ，Ｖｏｌｏ，ｍｅｄｉｕｍＮｏｌ，ｐ３２＆１９
６１ただし３０夕の藤糖の代りに３夕のＤ−グリコース
を使用し、寒天を除いた。

ｂ 有機硝酸塩ブロス 上記ａと同一の文献ｐ斑２のｍｅｄｉｍｍＭ．３７２１
菌糸についての研究Ｇ．Ｍ．Ｌ雌ｄｏｍ損ｎｎ ａｎｄ
Ｂ．Ｃ．ＢｒぴＳｋｙ，Ａｎ０ｍｉｃｒｏｂｉａＩ
Ａ鉾ｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，ｐ４
７−５２，１９鼠ああ 炭水化物資化性 ＩＳＰ塔地肌．９ ２沙 炭水化物資化性 でんぷん代りに種々の炭素源についてＩＳＰ培地帆．４
プソイドノカルジア フアスチジオサ新種ルーチェン（
ＰｓｅｕｄｏｎＭａｒｄｉａｆａｓｔｉｄｉｏＳａＳｐ
．ｎｏｖ．Ｒｏｍｅｎ）についての説明：無機塩・でん
ぷん寒天 生育中庸、わずかに表面がでこぼこし平坦；色は黄色（
リツジウェィの命名法ではメィズ（Ｍａｉｚｅ）イエロ
ーないしバフ（Ｂｕｆｆ）イエロー）で淡いピンクの気
菌糸体（２週間白色で４週間の終りにはピンク）を伴な
う：裏面黄色；淡黄色の可溶性色素産生：無臭。

ツアベツク茂糠 生育良好な、わずかに隆起、いく分でこぼこしている：
色は黄色くメィズイェロ−ないしバフイェロー）で４週
間後には縁に沿って白色ないし淡いピンクの気菌糸体を
伴う；裏面黄色；黄色の可溶溶性生産；弱い悪臭。

グリセリン・アスパラギン寒天 生育貧弱、薄く、平坦、なめらか、黄色（ＩＪツジウエ
イのベールカルセドニーイエｏ−（ＰａｌｅＣｈａｌｃ
ｅｄｏｎｙＹｅｌｌｅｗに近い）；気菌糸体なし；裏面
淡黄色；非常にうすし、淡黄色可溶性色素生産；鰻臭（
四週間後）ゼラチン 生育良好、表面がいく分隆起してでこぼこしている、薄
黄色；気菌糸体なし；裏面茶色がかった黄色；黄色色素
生産；無臭（四週間後）でんぷん寒天 生育すぐれ、隆起、でこぼこしており、燈黄色；気菌糸
体なし；髪面濃燈黄色ないし澄色；茶色がかった黄色の
可溶性色素生産；無臭（四週間後）グルコース・酵母エ
キス寒天 生育中庸、薄く平坦でわずかにでこぼこしている；光沢
があり、黄色：生育物の縁に沿って小さな扇形の白色気
菌糸体あり：裏面黄色；黄色可溶性色素生産：無臭（四
週間後）酵母エキス−麦芽エキス寒天 生育良好、いく分隆起、細かいしわがあり、縁がくすん
だ黄色ないし淡い鮭色（オクラシアウスバフ（Ｍｈねｃ
ｅｏｕｓＢ心ｆ）ないしアンチモニーイェロー（Ａｎｔ
ｉｍｏｎｙＹｅｌｌｏｗ）：気菌糸体なし；裏面くすん
だ黄色；わずかに茶色がかった黄色の可溶性色素生産；
弱い悪臭（四週間後）ばれし、しよＤ−グルコース寒天 デイフコの培地には生育しないが培地紬および＄には良
好な生育を示し、クリーム色で縁なし：裏面クリーム色
；可溶性色素生なし。

オートミール寒天 生育中庸、平坦、淡黄色ないしクリーム色；気菌糸体な
し；裏面淡黄色：淡黄色の可溶性色素生産；無臭（四週
間後）。

水道水寒天 生育乏しく、薄く、平坦、；非常に薄い黄色；気菌糸体
なし：裏面ほとんど無色；可溶性色素なし；無臭（四週
間後）。

ばれし、しよ−にんじん寒天 「生育乏しく、薄く、平坦、生育物の厚い部分が非常に
淡い黄色；緑に沿って外に向って気菌糸体生育；裏面非
常に淡い黄色；淡黄色の可溶性色素生産；無臭（四週間
後）。

二倍希釈（Ｈａｌｆ−Ｓｔｒｅｎｇｈ）スキムミルク寒
天生育中庸、平坦、緑がいく分しわになっている以外は
なめらか、茶色（シナモンブラウンないしラシツト（Ｒ
ｕｓｓｅｔ））：気菌糸体なし；袋面茶色；茶色の可溶
性色素生産；悪臭（四週間後）。

生化学的性質でんぷん加水分解（３日）；ゼラチン液化
（３日）：トリブトン・酵母エキスブロスまたはべプト
ン・鉄寒天においてメラニン生成せず；比Ｓ生成せず；
Ｄ−グリコース硝酸塩ブロスと無機硝酸塩ブロスの両方
で硝酸塩をすみやかに（３日）に亜硝酸塩に還元し；ジ
ェンセン（Ｊｅｍｅｎ）のセルロース塔地で融解するこ
とないこ生育（１４一２１日）するが、Ｌｅｖｉ肥ａＭ
Ｓｃｈ肥Ｎｅｉｎの培地では生育せず：ミルクを部分的
に凝固させわずかにべプトン化させる（１４−２１日）
；好気的：ＩＳＰ培地Ｍ．９を使用した場合試験したい
かなる炭水化物をも資化しないが、ＩＳＰ塔地Ｍ．４か
らでんぷんを除し、た培地上ではグルコース、アラビノ
ース、フラクトース、ラフイノース（弱に）、でんぷん
、およびキシロースを資化し、イノシトツト、マンニツ
トおよびラムノースは資化しない。

栄養生育 基質菌糸０．５一１．０山中、いまいまジグザグの形を
呈し、直角または鋭角に枝分れしており、前者はいまし
ば末端に卵型または西洋なし型のふくらみ（１．６−２
．０ム中）を有し、これはさらに生育するとそのふくら
みの部分から外に拡がった薄い菌糸となり節間隆起を形
成する。

気菌糸体 新しく単離した生産菌は、後で等しいサイズの２つの胞
子に分かれる長鏡の胞子様体部を有する白色気菌糸体の
平たい魂を生じる。

体部は求頂的出芽によって形成され、ときには明らかに
体部のほとんど先端から薄い枝分れを生じる。ときどき
上記長鎖はわずかにジグザグ型に見える。長い体部は杵
状で、ほとんど真直ぐで、９〜１０×１．０山である。
生産菌が加令するに従って各体部は２つの小さな部分に
分かれ、約４．５×１．２ムもとの体部よりわずかに中
広の胞子を生じる。走査電子顕微鏡による研究によると
上記胞子はなめらかな表面を有する。この生産菌はすで
に報告されているプソイドノカルジァ種とは多くの点で
性質が異なっているので新種であると考えられた。

通常放射菌の培養に使用される無機塩借地上では生育し
なかったのでプソイドノカルジア フアスチジオサ（Ｐ
ｓｅＭｏ肌ｃａｒｄｉａｆａｓｔｉｄｉｏｓａ）と命名
した。

このプソィドノカルジア菌の培養は栄養培地中約２８〜
３６ｑｏの温度で好気的深部条件下に縄伴しながら行う
のが好ましい。そのような目的に有用な栄養塔地は砂糖
、でんぷん、グリセリン「 および糖みつのうな資化性
炭素源、魚粉、カゼイン、カゼイン酵素消化物、肉粉、
小麦グルテン、綿実粉、大豆粉および落花生粉のような
有機窒素源を含有する。蒸留残澄可溶性物質および／ま
たは酵母エキスのうな生長物資源ならびに塩化ナトリウ
ム、酢酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、燐酸カリウ
ムのような塩および鉄、マグネシウム、亜鉛、コバルト
およびマンガンのようなこん跡量のミネラルを使用する
と有利な結果を生じる。醗酵の間に過剰の泡立ちが生じ
た場合、植物油またはシリコンのような消泡剤を醗酵塔
地に加えることができる。醗酵の岬はむしろ一定になっ
ているが、変化したら炭酸カルシウムのような緩衝剤を
加えてもよい。深部生育用タンク中の倍地の通気は、１
分当りプロス１容量に対し新鮮な空気約１／２なし、し
２容量の割合を維持するのが好ましい。縄伴は醗酵工業
において一般によく知られた蝿伴手段によって行なわれ
る。もちろん上記微生物の輸送およびその生育の過程を
通してずっと無菌的０条件を維持しなければならない。
抗生物質の生産のための種母は前述のＡＴＣＣ培地１７
２のような寒天培地上プソイドノカルジア・フアスチジ
オサの斜面培養すなわちルーボトル（Ｒｏ似ｂｏ地ｅｓ
）から得た生育物を使用する。

この生育物は振とうフラスコまたは種母タンクのどちら
にも接種するのに使用でき、あるいは種母タンクに糠と
うフラスコから接種してもよい。この微生物の生育は通
常２日または３日で最高に達する、しかし、使用する装
置、通気、濃伴速度等が変化すれば最高の生育に達する
速度に影響を及ぼす。一般に、醗酵は充分な抗微生物活
性が培地に付与されるまで行うが、この目的には約２餌
時間ないし約４日間で充分である。抗生物質の生産工程
は醗酵の間黄色ブドウ球菌’（ＳｔａｐｈｙＩＭＭｃｕ
ｓａｕｒｅｕｓ）の感受性菌株を使用してブロスの生物
学的検定により追跡するのが好都合である。

標準平板分折検定法を使用し、この’検定法においては
ブロスで飽和させたロ紙ディスク周囲の阻止帯を抗生物
質効力の目やすとして使用する。シリカゲルを使用した
薄届クロマトグラフィーは醗酵塔地においてプソィドノ
カルジアフアスチジオサによって生産された抗生物質お
よび醗酵ブロスより抽出した粗製材料および精製材料の
組成物を分析するのに有用な手段である。

シリカゲルプレートにクロロホルム：エタノール（容量
比８５：１５）の展開剤を使用して２私ｎｍの光の下で
プレートを観察する。２つの抗生物質、すなわち化合物
４１０４３（主成分、極性小）と化合物４１４９４（幅
成分、極性大）がこの方法により明示される。

所望ならば、抗生物質成分のバイオオートグラフィーに
よる検出は黄色ブドウ球菌の感受性菌株または他の感受
性試験菌を接種した寒天薄層で展開剤済みのシリカゲル
クロマトグラムを被うことによつて行うことができる。
この発明の抗生物質は巨大二濠式べブチドであって、前
述の一般的抗生物質群に属している：ムルチオマイシン
（Ｍ肌ｈｉｏｍｙｃｉｎ）、ＴｈｅＪｏ町Ｍ１ｏｆ畑ｔ
ｉｂｉｏｔｉｃｓ，２３Ｍ．５２３１（１９７０）：チ
オベプチ ン（ ｍｉｏｐｅｐｔｉｎ ），ｍｅ Ｊｏ
ｕｍａｌ ｏｆＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２３，Ｍ．３
１１３（１９７０）：チオストレプト（Ｔｈｉｏｓｔｒ
ｅｐｂｎ），ＡｍｔｉｂｉｏｔｉｃｓＡｎｎｕａｌ，５
６０（１９５５一１９５６）；シオマイシン（Ｓｉｏｍ
ｙｃｉｎ），ＴｈｅＪｏｕｍａｌ ｏｆ Ａｈｔｉｂｉ
ｏｔｉｃｓ，Ｓｅｒ．Ａ，１４，２５５（１９６１）；
およびＡ−５９，ｍｅＪｏｕｍａｌ ｏｆＡｎｄｂｉｏ
ｔｉｃｓ，Ｓｅｒ．Ａ １４ １処（１９６１）。

化合物４１０４３および４１４９４は他の巨大二環式べ
プチドについて報告された溶媒抽出、カラムクロマトグ
ラフィーまたはそれらの組合せを包含する方法によって
回収し精製できる。ｎ−ブタノール、メチルィソブチル
ケトン、酢酸エチルおよび塩素化炭化水素のような有機
溶媒を使用してｐＨ４．０ないし１０．０の全醐醗酵ブ
ロスまたは透明醗酵ブロスから抗生物質を抽出できる。
他の方法としては、分離した菌糸体をメタノールで抽出
し、メタ／ール抽出物を真空濃縮し、メタノール濃縮物
を水でもとの１／１０の容量にまで希釈し、１／３容量
のメチルイソブチルケトンで２回抽出する。この溶媒を
うすいシロップ状に濃縮し、ヘブタンで抗生物質を沈澱
させる。この粗製抗生物質をアセトンに溶解し、ヘキサ
ン、クロロホルム、クロロホルム：エタノール（容量比
斑：２なし、し９０：１０％）およびアセトン：クロロ
ホルム（容量比５０：５０％）を展開剤としてシリカゲ
ルカラム上でクロマトグラフイーにかける。この発明は
抗生物質混合物の希釈物および粗製濃縮物および粗製お
よび精製各抗生物質成分を包含する。

これらの生成物はすべて肺炎連鎖球菌（ＳＵｅｐｔ肌ｏ
ｃｃ船 Ｐｎｅｍｍｏｎｉａｅ）、化濃連鎖球菌（ＳＰ
ｅｐｔｏｃＭｃ船Ｐ如ｇｅｍ）、および黄色ブドウ球菌
（Ｓｔａｐｈｙ’比Ｍｃ船ａｍｅ瓜）のような微生物を
阻止するのに有用である。さらに、これらの生成物はそ
のような微生物に対する殺菌剤としておよび医学的、診
断用および生物学的研究目的のための混合培養物の精製
の助剤として有用である。表１は各抗生物質成分の抗菌
スペクトルである。これらの試験は純粋な抗生物質の濃
度が除々に大となる栄養ブロスの各誌験管を調製し、こ
のプロスに特定の試験管を接種することによって行なっ
た。表１に示された最小阻止濃度は微生物の生育を阻止
する抗生物質の最小濃度（ｗ３／凧【）である。これら
の試験はＰｒ比．Ｓ比．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，
１２，１１０７（１９６６）に報告された標準化された
条件下に行なった。表 １ 微生物 化合物 ｏ黄色ブドウ球菌 ４１，４９４ ４１０４
３（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）０
１ＡＯ０５ ０７８ ０２００１Ａ０５２ 〃 ０３９
０１ＡＩＯ９ ″０１ＡＩｌＯ ″ ０１ＡＩｌＩ 〃 ０２０ ５ ０１Ａ０８７
〃 ０．３９０１Ａ４００ 〃ストレフ。

トコツカス フアエカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕ
ｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）０２ＡＯ０６＜０．１０ ０３
９溶血性れんさ球菌ひ（Ｓｔｒｅｐｔ。

Ｃ。ＣＣｕｓｐｙ。ｇｅｎｅｓ）０２０２０３＜○．１
び＜０．１○ミコバクテリウム スミグマテイス■岬ｃ
ｏｂａｃｔｅｒｍｎｓ順ｇｈａｔｉｓ）０５Ａｏｏｌ
ｌｏｏ ５０枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌ
ｉｓ） ０６ＡＯＯＩＯ．２０＜０．１０大腸菌夕
（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ） ５１Ａ２２
９＞２００＞２００５１Ａ２６６ 〃５１ＡＩ２５
″ 緑膿菌 （Ｐｓｅｕｄｍｍｎａｓ ａｅｒｕｇｌｎｏｓ幻 ５２
ＡＩ０４＞２ｏｏ＞２ｏｏ０肺 炎 梓 菌
５２Ａ４４０ ″瓜ｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｎｐ
ｎｉａｅ）５３Ａ００９＞２００＞２００５３Ａ０３１
″プロテウスミラビリス （Ｐｒ。

ｔｅｕｓｍｉｒａｂｉｌｌｉｓ） ５７００６４＞２
００＞２００５モルガン菌（ｐｒ。

ｔｅｕｓｎ肌ｇａｎｉ） ５７ＧＯＯＩ＞２００
＞２００ブタコレラ菌（Ｓａｉ肌ｏｎｅｌｌａｃｈｏｌ
異蛸ｉＳ）５８Ｂ２４２＞２００＞２００ネズミチフス
菌。

（Ｓａー肌ｎｅーーａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｍ）５８Ｄ
Ｏ。９＞２００＞２００５８ＤＯ１３−○ ′′ ′
′パスツレラ ムＪレトシ〆 （Ｐａｓｔｅｍｅｌｌａｍｍｌｔｏｃｉｄａ）５９ＡＯ
ＯＩ＞２００＞２００セラチア マ州ッリス（Ｓｅｒｒ
ａｔーａ皿ｒＣｅＳＣｅｎＳ） ６３Ａ。

Ｉ７＞２００＞２００エンテロバクターエラロゲネス（
粒ｔｅｒｏｂａｃｔｅｒａｅｒｏｇｅｎｅｓ）６７Ａ０
４０＞２００＞２０ｏェンテ口／汐タクロアカェ（Ｅｎ
ｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ） ６７Ｂｏｏ
３＞２ｏｏ＞２ｏｏナィセリア ゾツカ（Ｎｅｉｓｓｅ
ｎａｓ，ｃｃａ） ６６０００び＜０．１０＜０
．１０黄色ブドウ球菌０１ＡＯ０５を実験的に感染させ
たマウスに対して化合物４１０４３によって与えられる
ィンビボでの保護を表０１こ示す。

表０ 化合物 ４１０４３ 投与量（帆／【９） 保護（％）４００
（皮下） ８０２００（皮
下） ６０１００（皮下）
４０４００（経口）
０この発明の抗生物質は人間
を含む動物の肺炎菌、連鎖球菌、ぶどう球菌、結核菌お
よび他の抗生物質感受性菌による感染症の治療のために
経口または非経口投与できる。

一般に、これらの抗生物質は経口投与では１日０．５−
１夕、非経口注射では１００−５００のｏを投与するの
がもっとも望ましく、感染のタイプおよび重症度および
治療される患者の体重に依存される。この発明の化合物
は単独で、あるいは医薬として適当な担体と組合せて投
与できるが、そのような投与は単一回投与および複数回
投与の両方で行うことができる。

経口投与のために、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウ
ム、燐酸二カルシウムのような種々の補助剤を含有しで
んぷん、アルギン酸および特定の珪酸塩銭体のような崩
壊剤およびポリビニルピロリドン、茂糖、ゼラチンおよ
びアラビアゴムのような結合剤とともに使用した錠剤を
使用できる。

さらに、錠剤化のためにステアリン酸マグネシウム、ラ
ウリル硫酸ナトリウムおよびタルクのような糟剤をいま
いま使用する。同様のタイプの固体組成物は軟および硬
充填ゼラチンカプセルの充填剤としても使用でき、好適
材料は乳糖および高分子ポリエチレングリコールである
。経口投与用に水性懸濁液および／またはェリキシルが
望ましい場合は、不可欠活性成分を種々の甘味剤、付香
剤、着色物質すなわち色素、および所望ならば、乳化剤
および／または懸濁化剤を水、ェタ／−ル、プロピレン
グリコール、グリセロールおよびそれらの種々の組合せ
とともに使用する。非経口投与の目的には、ごま油また
は落花生油または水性プロピレングリコール中にこれら
の抗生物質を溶解させた溶液を使用できる。

下記実施例はこの発明をより詳細に説明するものであっ
て限定するものではない。

例１ 下記組成を有する滅菌水性塔地を調製した：成分
タノリツトルグルコース
１０でんふミん
２０酵母エキス
５‐ カゼインの酵素分解物
５肉粉 ５Ｋ２ＨＰ０４
０．５ＣｄＣ１２・母ＬＯ
Ｏ．００２ＣａＣＱ
４ＰＨ７．１−７．２プソ
イドノカルジア・フアスチジオサ ＡＴＣＣ３１１８１の斜面培養物の菌体を各々上記培地
５０泌を入れた多くの３００のとェルレンマイヤーフラ
スコに接種し、２洋０で回転振という器上３〜４日間振
とうさせた。

下記組成を有する滅菌水性培地を調製した：成分
タノリツトルグルコース
１０カゼインの酵素分解物
５酵母エキス ５で・ん
ふミん ２
０ＣａＣＱ ＩＣ
。

ＣＩ２・母Ｌ〇 ０．００
２ＰＨ７．１土０．１・ 上記減菌培地２リットルを含
有する醗酵槽に５容量％の生育した種母を接種した。

温度を２８〜３６℃に維持し、フロスを１７０び．ｐ．
ｍで蝿伴し、毎分ブロス１容量当り空気約１容量の割合
で通気した。４０〜６ｑ時間後、透明になったブ。

スすなわち全ブロスを１／３ないし１／２容量ずつのメ
チルイソブチルケトンで２回抽出し、抽出した溶媒を真
空濃縮して抗生物質をｎーヘプタンの添加によって沈澱
させた。例２ 例１の醗酵工程を繰返した。

全ブロスより菌糸体を分離してメタノールでスラリー化
した。メタノール抽出物を１／１泣き量以下に真空濃縮
した。この濃縮物を水でもとの容量の１／１０なし、し
１／５に希釈し、ｐＨを６．０に調整し１／群容量ずつ
のメチルィソプチルケトンで二回抽出した。溶媒抽出物
を真空濃縮してシロップ状とし、抗生物質をｎ−べブタ
ンの添加により沈澱させた。例３ 例１の醗酵工程を繰返した。

約１０％の生育したＺ種母を使用して各々例１の培地３
７８．５リットル（１００ガロン）を入れた２つの９４
６．３リットル（２５０ガロン）醗酵槽を接種した。こ
れらのタンクを２〜４日間醗酵させて、各々例１の塔地
３７８５リットル（１０００ガロン）を入れた２つの５
６７８リットルＺ（１５００ガロン）醗酵槽に１０％の
種母を供給するに充分量のブロスを使用した。醗酵は３
ぴ０の温度で行ない、毎分１容量のブロスに対して１容
量の空気の割合で通気した。充分な抗生物質活性が得ら
れた後（約４８〜７幼時間後）、全醗酵ブロスを５０％
２硫酸で−６．０に調整し、１５１４リットル（４００
ガロン）のメチルイソブチルケトンでボードベルニアー
ク回転抽出装置で抽出した。溶媒を真空除去し、濃縮物
内に含有する抗生物質を４容量のｎーヘプタンの添加に
よって沈澱した。沈澱した固体（４２０夕）をロ取し、
ｎ−へブタンで洗い、真空乾燥した。抗生物質混合物（
１００夕）を最４・容量のアセトン中に溶解し、５００
夕のシリカゲルＰＦ２鼠（エー．メルク社（Ｅ．Ｍｅｒ
ｃｋ）、西ドイツ，ダルムシュタット）で処理した。

溶媒を真空除去し、銭笹をへキサンで処理し、流動性ス
ラリーとし、頂上を約１００夕のシリカゲルＰＦ湊４床
で被った約１００夕のシリカゲル６０（ェー・メルク社
、西ドイツ、ダルムシュタツト）床を入れた半融ガラス
漏斗に加えた。次いで抗生物質をへキサン、クロロホル
ム、クロロホルムとエタノールの混合物（容量比９８：
２ないし９０：１０％）およびアセトンとクロロホルム
の混合物（容量比５０：５０％）で抽出した。すべての
カットを薄層クロマトグラフィーおよび生物検定によっ
て検査し、適当なフラクションを集めた。化合物４１０
４３に富んだこれらのフラクション（クロロホルムとエ
タノール−９５：５ないし９３：７％の容量比の混合物
、５９のをさらにシリカゲルＰＦ２５４でクロマトグラ
フィーにかけクロロホルムとエタノールの混合物（容量
比９０：１０％）で溶出した。この化合物５夕ずつを２
．払弧のシリカゲルカラム上で容易に処理できた。すべ
てのフラクションを薄層クロマトグラフィーで検査し、
適当なフラクションをいつしよにして真空蒸発させ化合
物４１０４３（２．０２夕）の無定形固体とした。この
材料は結晶化することができなかった。化合物４１０４
３元素分折（試料は室温で五酸化燐によって一晩乾燥し
た。

）Ｃ，５０．１０； 日，４．８８； Ｎ，９．１５；
Ｓ，８４０： ○，２７．４７（差による）旋光度
ｑｏ＋７７（Ｃ＝１．Ｑアセトン）紫外線吸収極大＾
幕＆Ｈ 松５２７０３０伍ｈ ３５肌伽Ｅ機４４４２１
７１８３９１ 特徴的赤外線スペクトル（ＫＢｒディスク）−第１図に
図示した−３．００、３．４５、５７２、５．８０、５
．９０、６．００、６．４５、６．５２、７．２２、７
．６０、８．００、８．３０、８．６０、８．９５、９
．３５ ９．９＆１０．１ふ１１．００、１２．６８お
よび１３．３５山溶解性アセトン、クロロホルム、メチ
ルイソブチルケトン、酢酸エチル、エタノール、ジメチ
ルスルホキシドおよびジメチルホルムアミドに可溶性へ
キサン、ヘプタン、水およびジヱチルェープルに不溶性
化合物４１４９４に富んだ材料（最初にクロマトグラフ
ィーにかけられた１００夕の抗生物質混合物より得られ
た）２．５夕ずつを２．５４×９２弧のシリカゲルＰＦ
２５４カラムに適用しクロロホルムとエタノールの混合
物（容量比９０：１０％）で溶出した。

すべてのフラクションを薄層クロマトグラフィーで検定
し、適当なカラムカットを集めて０．６７夕の化合物４
１４班を無定形固体として得た。この材料は結晶化でき
なかった。化合物４１４嬰 元素分折（試料は室温で五酸化燐によって一晩乾燥した
。

）Ｃ，４９．９４； 日，４．８０； Ｎ，９．２９：
Ｓ，８．４６： ○，２７．５２（差による）旋光
度 Ｑｏ十２９ｏ（Ｃ＝０．５アセトン）特徴的赤外
線吸収スペクトル（ＫＢｒディスク）−第２図に示した
−３．００、３．４５、５．７２、５７８、６．００、
６．５５、６７５、７．２５、７．６０、８．０２、８
．４０、８．６０、９．００、９．２５、１０．１７、
１０．４０１１．１５１２．６０および１３．３５仏紫
外線吸収極大入幕き宴日 ２７０２９＄ｈ３５仇ｍ Ｅ三瀦２４１２２４１１４ 溶解性 アセトン、クロロホルム、メチルイソブチルケトン、酢
酸エチル、エタノール、ジメチルスルホキシドおよびジ
メチルホルムアミドに可溶性へキサン、ベプタン、水お
よびジエチルェーテルに不溶性

【図面の簡単な説明】

第１図は化合物４１０４３の赤外線吸収スペクトルであ
り、第２図は化合物４１４９４の赤外線吸収スペクトル
である。 孔を〆−Ｚ 打歌Ｚ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ プソイドノカルジア フアスチジオサ新種ルーチエ
   ン（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ ｆａｓｔｉｄｉｏ
   ｓａ ｓｐ．ｎｏｖ．Ｒｏｕｔｉｅｎ）ＡＴＣＣ３１１
   ８１（微工研菌寄第４０５９号（ＦＥＲＭ−Ｐ Ｎｏ．
   ４０９５））を資化性炭素源源および窒素源を含有する
   水性栄養倍地中で充分な抗生物質活性が得られるまで深
   部好気条件下に培養し、抗生物質混合物を分離すること
   によって生産した化合物４１０４３および化合物４１４
   ９４からなる抗生物質混合物。