JPS5950680B2

JPS5950680B2 - 抗悪性新生物作用を有するニ−ム樹皮抽出物

Info

Publication number: JPS5950680B2
Application number: JP55131669A
Authority: JP
Inventors: 正樹清水; 忠志首藤; 武男野村
Original assignee: Terumo Corp
Current assignee: Terumo Corp
Priority date: 1980-09-24
Filing date: 1980-09-24
Publication date: 1984-12-10
Also published as: JPS5756493A

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、抗悪性新生物作用を有するニーム樹皮抽出物
に関するものである。

本発明者等は、ニーム樹皮の抽出物について種種検討し
た結果、ニーム樹皮を特定の方法で抽出・精製して得ら
れたものに抗悪性新生物作用があることを知り本発明を
完成した。

ニームに薬理効果を有する成分が含まれていることは知
られており、現在までに、皮膚機能改善’作用を有する
成分、抗菌作用を有する成分、胃腸および肝臓の機能改
善作用を有する成分、抗リユーマチ作用を有する成分が
知られている（特公昭５２−２８８５３、同５２−２
８８５４、同５３一１０１２４、同５３一１０１２５、
同５３一１３６８９）。

しかし、抗悪性新生物作用を有する成分が含まれている
ことは知られていない。従つて本発明の目的は、悪性新
生物の治療に有用な新規二ーム樹皮抽出物を提供するこ
とにある。

本発明は、ニーム樹皮を誘電率１０以下の有機溶媒で抽
出処理し、抽出残渣を誘電率１５乃至３５の親水性有機
溶媒で抽出し、抽出液から溶媒を除去し、残渣を低級ア
ルコールに溶解し、得られた溶液を非極性吸着クロマト
グラフイ一用樹脂と接触させ、該吸着樹脂を１０％メタ
ノール水溶液で処理した後、３０〜５０％メタノール水
溶液で溶離し、溶離液から溶媒を除去することによつて
得られる抗悪性新生物作用を有する二ーム樹皮抽出物か
らなる。

ニームは学名をメリア・アザジラクタ（Ｍｅｌｉａａｚ
ａｄｉｒａｃｈｔａ）といい、熱帯地域に自生する高さ
１０ｍ以上に達する木本植物である。

本発明においては、その樹皮を原料として使用する。樹
皮は乾燥・細断したものが好適に使用される。本発明で
は、有効成分を抽出する前処理として、先ず二ーム樹皮
を誘電率１０以下の有機溶媒で抽出処理する。

このような溶媒の例としては、ベンゼン、トルエン、キ
シレン、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、四塩化炭素、酢
酸エチル等があげられる。抽出処理は常法により、数時
間〜１昼夜行なわれる。かくして得られた抽出残渣を誘
電率１５乃至３５の親水性有機溶媒で抽出する。本工程
で使用される溶媒の例としては、メタノール、エタノー
ル、プロパノール、ｎ−ブタノールのような低級アルコ
ール、ピリジン、アセトン等があげられる。抽出は常法
により、数時間行われる。抽出液から蒸留等により溶媒
を除去し、得られる残渣を低級アルコール、例えばメタ
ノール、エタノールの水溶液に溶解し、得られる溶液を
非極性吸着クロマトグラフイ一用樹脂、例えばアンバー
ライトＸＡＤ−２、同ＸＡＤ−４（ローム・アンド・ハ
ース社）、バイオ・ビーズＳＭ−Ｌ同ＳＭ−２（バイオ
ラット社）、ダイアイオンＨＰ−１０、同ＨＰ−２０、
同ＨＰ−３０（三菱化成（株））などと接触させ、次い
で該吸着樹脂を１０％メタノール水溶液で処理した後、
被吸着物質を３０〜５０％メタノール水溶液で溶離する
。溶離液から蒸留等により溶媒を留去すると所望の二ー
ム樹皮抽出物が得られる。本発明における二ーム樹皮抽
出物の特性は次の通りである。（１）色と形状４．褐色、粉末（２）赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。

ＩＲｖ翫暑（Ｃｍ−１：３４００、１６００、１４３５
（３）紫外線吸収スペクトル第２図に示す通りである。

溶媒はメタノールを使用した。

ＵＶＸｎｌａｘ：２７９ｎｍＵＶＸｍ，ｎ：２５９ｍｎ（４）溶解性水約４０ｍｇ／ｍ１メ
タノール５０ｍｇ／ｍｌ以上エタノ
ール約２０ｍｇ／ｍ１アセトン
約１．５ｍｇ／ｍｌベンゼン、ク
ロロホルム、酢酸エチル、ｎヘキサンにはほとんど或は
全く溶けない。

（５）ＩｆＩ処理本抽出物は、ＰＨ２、７、９の水溶液中６０℃で３０分
間処理しても抗悪性新生物作用を失わない第１図および
第２図の赤外線吸収スペクトルおよび紫外線吸収スペク
トルはそれぞれ公知のニム抽出物のものと異なつており
、本発明の二ーム樹皮抽出物が新規な物質であることを
示している。

本発明の二ーム樹皮抽出物は、常法に従つて製剤化され
投与される。

例えは、本抽出物の乾燥粉末をバイアル等の容器にいれ
、別にアンプル等の容器に生理食塩水、ブドウ糖液ある
いはカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）懸濁液を用
意し、用時粉末を懸濁溶解して注射する。その他、エマ
ルジヨンにして注射してもよい。例えば油中水（Ｗ／Ｏ
）型エマルジヨンの場合は流動パラフイン等の鉱物油、
ゴマ油、ピーナツツ油等の植物油にゾルビタン脂肪酸エ
ステル等の界面活性剤を組み合せて用いる。次に実施例
、製剤例および試験例をあげて本発明をさらに具体的に
説明する。

実施例１ニーム乾燥樹皮細片１００ｇに１１のベンゼンを加え、
ときどき振盪しながら約５時間抽出操作を行つた。

その後これを淵過して抽出残渣に１１のベンゼンを加え
て同様の操作を加え、合計３回ベンゼンによる抽出操作
を繰り返した。かくして得られた抽出残渣に１１のメタ
ノールを加え、上記と同様に３回の抽出操作を行つた。
抽出液を合し、ロータリーエバポレーターによつて溶媒
を除き、乾燥粉末として３．９ｇの抽出物を得た。かく
して得られた粉末抽出物２．１ｇを１０％メタノール水
溶液１１に溶解し、アンバーライトＸＡＤ−２３００ｍ
１とよく混合した後、混合物を３．０×４０ｃｍのカラ
ムに充填した。該カラムに１０％メタノール水溶液、５
０％メタノール水溶液および１００％メタノール液を順
次通液し、各流出液をそれぞれロータリーエバポレータ
で濃縮乾固して粉末０．８１ｇ（１０％メタノール画分
）、０．８４ｇ（５０％メタノール画分、本発明抽出物
）および０．２２ｇ（１００％メタノール画分）をそれ
ぞれ得た。実施例２実施例１において、抽出液として１１のメタノールを使
用する代りに１１のエタノールを使用する以外は、実施
例１と全く同様に操作して、粉末抽出物０．６９ｇ（１
０％メタノール画分）、０．８０ｇ（５０％メタノール
画分、本発明抽出物）および０．３３ｇ（１００％メタ
ノール画分）をそれぞれ得た。

実施例３実施例１において、抽出処理液として１１のベンゼンを
使用する代りに１１の酢酸エチルを使用する以外は、実
施例１と全＜同様に操作して粉末抽出物０．７８ｇ（１
０％メタノール画分）、０．８２ｇ（５０％メタノール
画分、本発明抽出物）および０．２４ｇ（１００％メタ
ノール画分）を得た。

製剤例１実施例１で得られたニーム樹皮抽出物１００
ｍｇを無菌５％注射用ブドウ糖溶液１００ｍ１中に懸濁
し、この液を１ｍ１ずつバイアルに無菌的に分注し、凍
結乾燥した。

このようにして１バイアル中に１ｍｇのニーム樹皮抽出
物を含む製剤を得た。用時、注射用蒸留水に懸濁して使
用する。製剤例２上記１と同様にしてバイアルに製剤をつくつた。

ただし、無菌５％注射用ブドウ糖溶液１００ｍ１の代り
に薬局法ＣＭＣの０．５％注射用生理食塩水懸濁液１０
０ｍ１を使用した。用時、注射用蒸留水に懸濁して使用
する。上記各実施例で得られた抽出物について抗悪性新
生物作用の効果を測定した。

試験例１ザルコーマ１８０腹水ガンに対する効果（試料調製）リン酸緩衝食塩水（キブコ杜製、リン酸９．５ｍＭを含
む：ＰＢＳ）に０．５％カルボキシメチルセルロース（
ＣＭＣ）を懸濁させた溶液に所定濃度になるように各画
分試料を懸濁または溶解させた。

（ザルコーマ１８０ガン細胞移植）ＩＣＲマウス腹腔中
で継代培養したザルコーマ１８０ガン細胞を腹水ととも
にとり出し、生理食塩水で適当に希釈して細胞数が１．
０×１０゜個／ｍｌとなるように調整した。

この細胞懸濁液の０．１ｍ１を４週令雄ＩＣＲマウス腹
腔へ注射器を用いて移植した。従つて１匹あたりの移植
細胞数は１．０×１０７個である。（試料投与）ザルコーマ１８０ガン細胞を移植した次の日より１日１
回連続４日間、上に調製した試料を注射器を用いて腹腔
に０．１ｍ１投与した。

ｌ試料１濃度につき６匹のマウスを使用した。対照は試
料の溶剤として用いた上記ＣＭＣ入りＰＢＳを同様に投
与したものとした。投与量の表示はマウス体重１ｋｇあ
たりのＭｇ数とした。（効果の判定法）ガン細胞移植後７日目にそれぞれのマウスの体重を測定
した。

次に腹腔に貯まつた腹水を全量とり出した後のマウスの
体重を測定した。腹水採取前後の体重の差を腹水量とす
る。採取した腹水をへマトクリツト管に吸い込ませ、へ
マトクリツトフ測定用ローターを用いて、低温で遠心分
離し、血液のへマトクリツト値に相当するアサイトクリ
ツト値を得た（腹水中に占めるガン細胞の割合）。腹水
量にこの値を乗ずれば全腹水中の細胞の容量が得られる
。これを全細胞容量（トータル・パツ・クト・セル・ポ
リユウム；ＴＰＣＶ）とする。対照では、全腹水量は６
〜１０ｍ１，．ＴＰＣＶは、１．６〜２．５ｍ１とな
つた。試料投与マウスのＴＰＣＶと対照投与マウスのＴ
ＰＣＶの比（Ｔ／Ｃ）をとつて１００〜６６％のものＪ
をガンに対する効果なし（−）、６５〜４１％のもの
をやや有効（＋）、４０〜１１％のものを有効（廿）、
１０〜０％のものを著効（ＪｔＦ）とする。

結果を表１に示す。試験例２ザルコーマ１８０固型ガンに対する効果（ザルコーマ１８０ガン細胞移植）試験例１と同様にして１．０Ｘ１０８個／ｍ１の細胞懸
濁液を調製した。

この懸濁液の０．１ｍ１を４週令、雄１ＣＲマウス背部
皮下に注射器を用いて細胞を移植した。（試料投与）試験例１と同様に行なつた。

（効果判定法）ガン細胞移植後１５日目に成長したガン組織を摘出し、
その重量を測定した（１群６匹の平均値）。

この重量と対照のものとの比（Ｔ／Ｃ）をとつて効果判
定を行つた。対照のガン組織重量は１．５〜３．５ｇで
あつた。比の値が１００〜７１％のものを無効（−）、
７０〜５１％のものをやや有効（＋）、５０〜２１％の
ものを有効（廿）、２０〜０％のものを著効（Ｊｔ）と
した。結果を表１に示す。試験例３Ｌ−５１７８Ｙ細胞に対する効果（細胞調製）１０％ウシ胎児血清入りＲＰＭＩ−１６４０培地で４日
間培養したマウスのＬ − ５１７８Ｙ細胞を１．０×
１０゜個／ｍｌとなるように調整し、これを９６穴Ｕ底
マイクロプレートに１穴（２５０μｌ容）当り５０μｌ
入れた。

（効果判定方法）上記マイクロプレートに、培地に溶力化た試料を１穴当
り５０μｍ入れ、３７℃炭酸ガス培養器中で４８時間培
養した。

培養後、各穴の細抱数を数え、試料を入れない対照のも
のと数を比較し、５０％の細胞を死滅させるに必要な濃
度を算出し、ＩＤ５Ｏとした。結果を表２に示す。表１
および表２から５０％メタ，ノール画分（本発明の抽出
物゛）が優れた抗悪性新生物作用を有していることが明
らかである。

本発明の抽出物は、腹水ガン：こ対する最小有効濃度は
３０ｍｇ／Ｋｇ（マウス）、固型ガンに対する最小有効
濃度は２５ｍｇ／Ｋｇ（マウス）である。

また、マウス雄に対する急性毒性（ＬＤ５Ｏ）は３９０
ｍｇ／Ｋｇ（１．ｐ．）であつた。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の二ーム樹皮抽出物の赤外線吸収スペク
トル、第２図（ま同物質の紫外線吸収スペクトルを示す
。

Claims

【特許請求の範囲】１ニーム（Ｍｅｌｉａａｚａｄｉｒａｃｈｔａ、メ
リア・アザジラクタ）の樹皮を誘電率１０以下の有機溶
媒で抽出処理し、抽出残渣を誘電率１５乃至３５の親水
性有機溶媒で抽出し、抽出液から溶媒を除去し、残渣を
低級アルコールに溶解し、得られた溶液を非極性吸着ク
ロマトグラフィー用樹脂と接触させ、該吸着樹脂を１０
％メタノール水溶液で処理した後３０〜５０％メタノー
ル水溶液で溶離し、溶離液から溶媒を除去することによ
つて得られる抗悪性新生物作用および下記の物理化学的
特性を有するニーム樹皮抽出物。（１）色と形状褐色、粉末（２）赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。ＩＲν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１：３４０
０、１６００、１４３５（３）紫外線吸収スペクトル第
２図に示す通りである。溶媒はメタノールを使用した。ＵＶλ＿ｍ＿ａ＿ｘ：２７９ｎｍＵＶλ＿ｍ＿ｉ＿ｎ：２５９ｎｍ（４）溶解性水約４０ｍｇ／ｍｌメタノール５０ｍｇ／ｍｌ以上エタノール約２０ｍｇ／ｍｌアセトン約１．５ｍｇ／ｍｌベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、ｎ−ヘキサンに
はほとんど或は全く溶けない。２誘電率１０以下の有機溶媒がベンゼンである特許請
求の範囲第１項記載のニーム樹皮抽出物。３誘電率１０以下の有機溶媒が酢酸エチルである特許
請求の範囲第１項記載のニーム樹皮抽出物。４誘電率１５乃至３５の親水性有機溶媒がメタノール
である特許請求の範囲第１項乃至第３項のうちいずれか
に記載のニーム樹皮抽出物。５誘電率１５乃至３５の親水性有機溶媒がエタノール
である特許請求の範囲第１項乃至第３項のうちいずれか
に記載のニーム樹皮抽出物。