JPS63277628A

JPS63277628A - 抗腫瘍剤

Info

Publication number: JPS63277628A
Application number: JP62100061A
Authority: JP
Inventors: Takeo Nomura; 武男野村; Shigehiro Yamamoto; 山本　茂博; Hiroshi Suzuki; 宏鈴木; Itaro Kokuni; 小國　伊太郎; Setsuko Kanetani; 金谷　節子; Keiko Nasu; 那須　恵子
Original assignee: SHIZUOKA PREF GOV CHIYAGIYOU KAIGISHIYO; Terumo Corp
Current assignee: SHIZUOKA PREF GOV CHIYAGIYOU KAIGISHIYO; Terumo Corp
Priority date: 1987-04-24
Filing date: 1987-04-24
Publication date: 1988-11-15

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野コ本発明は抗腫瘍剤に関する。特に茶葉より抽出した新規
な抗腫瘍剤に関する。

［従来の技術］茶（ＣａＩｌｅｌｌｌａ　５ｌｎｅｎｓｌｓ　Ｌ、）　
、特に緑茶中に薬理効果を有する成分が含まれているこ
とは知られており、それらの成分としてビタミンＣ１カ
フエイン、キサンチン、タンニン、ゲラニオール、クロ
ロフィル、サポニン等が挙げられる。

抗腫瘍作用を有する成分としては、茶、タンニン混合物
及びその主成分である（−）−ｅｐｌｇａｌ　ｌｏ　−
ｅａｔｅｃｈｉｎ　ｇａｌｌａｔｅ　（Ｅ　Ｇ　Ｃｇ　
）が原征彦らによって報告されている（第４３回日本癌
学会総会記事、昭和５９年１０月、９．２８０’講演？
！１．９９３＞。

〔発明の目的］本発明者らは茶葉について種々研究した結果、前記の（
−）　・ｅｐｌｇａｌ　ｔｏ　−ｃａｔｅｃｈｌｎ　ｇ
ａｌ　ｌａｔｅ（ＥＧＣｇ）以外にも、茶葉を低級アル
コールによって抽出し、該抽出物からクロロホルム可溶
分と酢酸エチル可溶分とをそれぞれ除去したものに抗腫
瘍作用を有する別の成分が含まれていることを知り、本
発明を完成させた。

従って、本発明の目的は抗腫瘍作用を有する新規な茶葉
抽出成分を提供することを目的とする。

［発明の目的を達成するための手段］上記の目的は以下の構成を有する本発明によって達成さ
れる。

１）茶葉を低級アルコールで抽出し、得られた抽゛出物
から溶媒を留去し、残留物を水に溶解し、得られた水溶
液からクロロホルム可溶物および酢酸エチル可溶物をそ
れぞれ除去し、次いで乾燥することによって得られ、か
つ、下記の物理化学的特性を有する抗腫瘍剤。

（１）　　色と形状褐色、粉末状（２）赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。

ＫＢｒ　　−１−１１Ｒνａｍ　　：　３４００ｃｍ　　、　２９３０ｃｍ
−１゜ａＸ１０７０　ｃｍ　　、　１０４０　ｃｍ　−’　。

８１０ｃｍ−１（３）紫外線吸収スペクトル第２図に示す通りである。

溶媒はメタノールを使用した。

（４）高速液体クロマトグラフィー第３図に示す通りである。

溶離液は、０．０５Ｍリン酸緩衝液とアセトニトリルの
混合物（８０：　２０）を使用し、流速は１．０ｍｌ／
分とした。

保持時間２３．９分、４．６分、５．２分、５．７分、
８．２分、７．１分、及び８．１分にピークを認めた。

（５）溶解性水　：溶は易いメタノール：溶は易いエタノール：やや溶は易いアセトン：きわめて溶けにくいクロロホルム及び酢酸エチルにはほとんどあるいは全く
溶けない。

２）茶葉を低級アルコールで抽出し、得られた抽出物か
ら溶媒を留去し、残留物を水に溶解し、得られた水溶液
からクロロホルム可溶物および酢酸エチル可溶物をそれ
ぞれ除去し、得られた水溶液をブタノールで抽出精製し
て得られる第１項記載の抗ｌｆ１瘍剤。

３）低級アルコールがメタノールである第１項または第
２項に記載の抗腫瘍剤。

茶は学名をカメリア・シネンシス（Ｃａｍｅｌｌｉａｓ
ｉｎｅｎｓｉｓ）といい、ツバキ科の常緑低木である。

この植物の葉から飲料がつくられる。飲料に供される茶
を大別すると緑茶、紅茶、烏竜茶の３種類がある。本発
明においては、緑茶を原料として使用する。好適には、
無農薬で栽培した緑茶生葉を乾燥したものを使用する。

本発明による抗腫瘍剤は、以下のようにして得ることが
できる。

最初に茶葉の凍結乾燥品を低級アルコールで抽出処理す
る。このような低級アルコールの例としては、メタノー
ル、エタノール、プロパツール等があげられる。抽出処
理は常法により、室温下で数時間〜数月行なわれる。

かくして得られたメタノール抽出物を蒸発乾固させ、そ
れを水中に溶解し、水溶液を得、それをクロロホルムに
より処理する。クロロホルム処理は、室温で、３０分〜
１０数時間行なわれる。この処理によって得られたクロ
ロホルム層即ちクロロホルム可溶物を含む層を除く。こ
のクロロホルム可溶物には、茶の成分であるクロロフィ
ル、カフェインがある。残りの水層を採り、クロロホル
ム臭が消失するまで水分を蒸発させ、次いで酢酸エチル
により処理する。この酢酸エチル処理は、室温で、３０
分〜１０数時間数回行なわれる。この処理によって得ら
れた酢酸エチル層、即ち酢酸エチル可溶物を含む層を除
く。茶葉中の酢酸エチル可溶物には、前記したθ・ｅｐ
ｉｇａｌ　ｔｏ　−ｃａｔｅｃｈｌｎ　ｇａｌ　ｌａｔ
ｅ（ＥＧＣｇ）が含まれる。前記ＥＧＣｇを含まない残
りの水層を採り、酢エチ臭が消失するまで水分を蒸発さ
せ、ブタノールにより抽出処理する。

抽出は、室温で、３０分〜１０数時間数回行なわれる。

かくして得られた抽出液から蒸留等により溶媒を留去し
、次いで種々の方法によって乾燥することによって所望
の抗腫瘍作用を有する茶葉抽出物が得られる。

本発明の抗腫瘍剤である茶葉抽出物の特性は次のとおり
である。

１（１７０ｃｍ　　、　ｌ０４０ｃｍ−１゜８１０ｃｍ
−１（３）紫外線吸収スペクトル第２図に示す通りである。

溶媒はメタノールを使用した。

ＵＶλ　　：　２８８ｎｔｘｇａｌＵＶλ　　：　２４９ｒ１ｍ ■ａｘ（４）高速液体クロマトグラフィー第３図に示す通りである。

条件は以下の通りとした：ポンプ　：センシュー科学■製　３．１００型カラム：
　ＵＮＩＳＩＬ　ＰＡＫ　Ｃ１ｇ（ガスクロ工業■製）溶離液　：　０．０５Ｍリン酸緩衝液とアセトニトリル
の混合物（８０：　２０）流　　速：　１．Ｏｍ１７分検　　出：Ｕｖモニター　２８０ｎｍ（日本分光■製ＵＮＩＤＥＣ１００−Ｃ）試　　料：各
１００ｐｐａ＋　　２Ｑｕｌ導入保持時間二３．９分、
４．８分、５．２分、５．７分、８．２分、７，１分、
及び８．１分にピークを認めた。

（５）溶解性水　：溶は易いメタノール：溶は易いエタノール：やや溶は易いアセトン：きわめて溶けにくいクロロホルム、酢酸エチルにはほとんど或は全く溶けな
い。

（６）急性毒性経口投与　１０００ａ＋ｇ／ｋｇ　（体重＞（ＩＣＲマ
ウス雄）で毒性なし。

参考のために、公知の茶葉抽出物である０・ａｐｌｇａ
ｌ　ｔｏ　−ｃａｔｅｅｈｌｎ−ｇａｌ　１ａｔｅ　（
Ｅ　Ｇ　Ｃｇ　）の特性を示す。

（１）　　色と形状微褐色粉末（２）　　赤外線吸収スペクトル第４図に示す通りである。

（３）紫外線吸収スペクトル第５図に示す通りである。

溶媒はメタノールを使用した。

ＵＶλ　　：　２７７　ｎ＋ｓ ■ａｘＵＶλｍ　１　ｎ　’　２５０　ｎｍ（４）高速液体クロマトグラフィー第６図に示す通りである。

条件は、本発明の抗腫瘍剤の場合と同じにした。

保持時間：４．２分、５．８分、６．３分、及び１０．
４分にピークを認めた。

（５）溶解性水　　：やや溶けにくいメタノール：溶は易いエタノール：溶は易いアセトン：溶は易い酢酸エチル：やや溶は易いクロロホルムにはほとんど或は全く溶けない。

以上の特性より明らかなように、本発明による茶葉抽出
物は、（−）　・ｅｐｉｇａｌ　Ｉｏ　−ｃａｔｅｃｈ
ｌｎ　ｇａｌ　ｌａｔｅ（ＥＧＣｇ）と種々の物理化学
的特性を異にしている。従って、本発明の茶葉抽出物は
新規な物質であることが明らかである。

本発明の茶葉抽出物は、常法に従って製剤化され投与さ
れる。例えば、本抽出物の乾燥粉末をバイアル等の容器
にいれ、別にアンプル等の容器に生理食塩水、ブドウ糖
液あるいはカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）懸濁
液を用意し、用時粉末を懸濁溶解して注射する。その他
、エマルジョンにして注射してもよい。例えば油中水（
Ｗ／　０　）型エマルジョンの場合は流動パラフィン等
の鉱物油、ゴマ浦、ビーナツツ油等の植物油にソルビタ
ン脂肪酸エステル等の界面活性剤を組み合せて用いる。

以下本発明を実施例、製剤例及び試験例によりさらに詳
しく説明する。

実施例　１無農薬で栽培した緑茶生葉の凍結乾燥物７５ｇを室温下
でメタノール各１．２ｇにより３回抽出した。

得られたメタノール抽出液を蒸発乾固させ、それを水３
００　ｍｌ中に溶解した。この水溶液を室温下でクロロ
ホルム各３００　ｍｌにより４回処理し、クロロホルム
層５．４ｇを除いた。

クロロホルム臭がなくなるまで、水層を蒸発させ約３０
０ｍ１とした。次いで酢酸エチル各３００　ｍｌにより
４回処理し、得られた酢酸エチル層８．７ｇを除き、酢
酸エチル臭がなくなるまで残った水層を蒸発させ約３０
０　ｍｌとした。ブタノール溶液各３００ｍＩにより３
回処理した。

得られたブタノール層を蒸発させ、次いで凍結乾燥させ
たところ乾固物２．３ｇが得られた。

製剤例　１実施例１で得られた茶葉抽出物１００　ａ＋ｇを無菌５
％注射用ブドウ糖溶液１００　ｍｌ中に懸濁し、この液
を１ｍｌずつバイアルに無菌的に分注し、凍結乾燥した
。このようにして１バイアル中にｌｌｌ１ｇの茶葉抽出
物を含む製剤を得た。用時、注射用蒸留水に懸濁して使
用する。

製剤例　２上記１と同様にしてバイアルに製剤をつくった。

ただし、無菌５％注射用ブドウ糖溶液１００　ｍｌの代
りに薬局法ＣＭＣの０．５％注射用生理食塩水懸濁液１
００　ｍｌを使用した。用時、注射用蒸留水に懸濁して
使用する。

上記実施例１で得られた抽出物について抗腫瘍作用の効
果をｎ１定した。

（以下余白）試験例　１ザルコーマ１８０固形ガンに対する効果（試料調製）リン酸緩衝食塩水（ギブコ社製、リン酸９．５ｍＭを含
む、ＰＢＳ）に０．５％カルボキシメチルセルロース（
ＣＭＣ）を懸濁させた溶液に所定濃度になるように実施
例１の抽出物を溶解させた。

（ザルコーマ１８０ガン細胞移植）ＩＣＲマウス腹腔中で継代堵養したザルコーマ１８０ガ
ン細胞を腹水とともにとり出し、生理食塩水で適当に希
釈して細胞数が１．０　ＸＩＯ３個／ｍｌとなるように
調製した。この懸濁液の０．１ｍｌを４週令、雄ＩＣＲ
マウス背部皮下に注射器を用いて細胞を移植した。

（試料投与）ザルコーマ１８０１１１ｉ瘍細胞を移植したマウスに移
植後１日目より連日５日間上記試料を経口的に４００　
ｍｇ／ｋｇ投与した。１試料につき８匹のマウスを使用
した。対照は、何も投与しないものとした。

（効果の判定法）ガン細胞移植後３５ロチにそれぞれのマウスの固形腫瘍
の重量をｎ１定した。

腫瘍抑制率は以下の式により求めた。

腫瘍抑制率（％）（結　果）上記の方法によって測定した本発明の茶葉抽出物の腫瘍
抑制率は、５４．２％であった。

［発明の効果］以上説明したように、本発明によれば、茶葉を低級アル
コールで抽出したものからクロロホルム可溶分と酢酸エ
チル可溶分とを除去することにより新規な抗腫瘍剤を得
ることができる。

本発明の抗腫瘍剤は、ザルコーマ１８０移植後のマウス
に経口投与することにより、著しい腫瘍抑制効果を示す
。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の抗腫瘍剤の赤外線吸収スペクトルを
示し、第２図は紫外線吸収スペクトルを示し、第３図は
高速液体クロマトグラフィーを示す。第４図は、公知の抗腫瘍作用を有する茶葉抽出物の赤外
線吸収スペクトルを示し、第５図は紫外線吸収スペクト
ルを示し、第６図は高速液体クロマトグラフィーを示す
。

Claims

【特許請求の範囲】１）茶葉を低級アルコールで抽出し、得られた抽出物か
らクロロホルム可溶物および酢酸エチル可溶物をそれぞ
れ実質的に除去し、次いで水層を乾燥することによって
得られる抗腫瘍剤。２）低級アルコールがメタノールである特許請求の範囲
第１項に記載の抗腫瘍剤。３）残留物を水に溶解し、得られた水溶液からクロロホ
ルム可溶物および酢酸エチル可溶物をそれぞれ除去した
のち更に、得られた水溶液をブタノールで抽出精製して
得られる特許請求の範囲第１項記載の抗腫瘍剤。４）下記の物理化学的特性を有する特許請求の範囲第１
項記載の抗腫瘍剤。（１）色と形状褐色、粉末状（２）赤外線吸収スペクトル第１図に示す通りである。ＩＲν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ＿ｘｃｍ＾−＾１：３４０
０ｃｍ＾−＾１、２９３０ｃｍ＾−＾１、１０７０ｃｍ
＾−＾１、１０４０ｃｍ＾−＾１、８１０ｃｍ＾−＾１（３）紫外線吸収スペクトル第２図に示す通りである。溶媒はメタノールを使用した。（４）高速液体クロマトグラフィー第３図に示す通りである。溶離液は、０．０５Ｍリン酸緩衝液とアセトニトリルの
混合物（８０：２０）を使用し、流速は１．０ｍｌ／分
とした。保持時間：３．９分、４．６分、５．２分、５．７分、
６．２分、７．１分、および８．１分にピークを認めた。（５）溶解性水：溶け易いメタノール：溶け易いエタノール：やや溶け易いアセトン：きわめて溶けにくいクロロホルム及び酢酸エチルにはほとんどあるいは全く
溶けない。