JPS59210027A - Ｃｓｆの製造法 - Google Patents
Ｃｓｆの製造法Info
- Publication number
- JPS59210027A JPS59210027A JP58083507A JP8350783A JPS59210027A JP S59210027 A JPS59210027 A JP S59210027A JP 58083507 A JP58083507 A JP 58083507A JP 8350783 A JP8350783 A JP 8350783A JP S59210027 A JPS59210027 A JP S59210027A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- csf
- peritoneal
- dialyzate
- human
- cerebrospinal fluid
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- Pending
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＣＳ Ｆ （Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔ
ｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）の新規な製造法、より詳しくは
、腎不全患者の連続式携行式腹膜透析（ＣＡＰＤ）と呼
ばれる腹膜透析療法における廃棄物として得られる腹膜
透析液からＣ５Ｆを製造する方法に関する。
ｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）の新規な製造法、より詳しくは
、腎不全患者の連続式携行式腹膜透析（ＣＡＰＤ）と呼
ばれる腹膜透析療法における廃棄物として得られる腹膜
透析液からＣ５Ｆを製造する方法に関する。
Ｃ３Ｆは骨髄白血球前駆細胞（以下、ＣＦＵ−Ｃとする
）に作用して、この細胞の顆粒球又はマクロファージへ
の分化増殖を促進する物質であり、・「１髄細胞をｉｎ
ｖｉｔｒｏで培養するときＣ：ＦＵ−Ｃが分化と同時
に増殖してコロニーを形成するために必須な因子である
。（Ｉｃｈｉｋａｗａ、Ｙ、 ； Ｐｒｏｃｅｅｄｉ
ｎｇｓ ｏｆｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄ
ｅｍｙ ｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅ ５６イ８、 ｐ
、４８８゜１９６６年、 Ｍｅｔｃａｌｆ、Ｉ）、 ；
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｌｌｅｍａｔｏｌｏｇｙ
１巻、 Ｐ、１８５，１！１７３年） Ｃ３Ｆは抗癌剤、放射線照射による白血球減少症或いは
種々の感染症の治療剤として医薬への応用の他、白血球
減少症、再生不良性貧血等の診１１１ｉ薬としての用途
が期待される。（ＭｏＬｏｙｏｓｌ＋ｉ Ｋ、（！Ｌａ
１．．Ｊａｐ、 、１． Ｍａｄ、２１ｉ Ｐ、１８７
．１９８２年〕Ｃ８Ｆはマウス肺培養液、吉川肉腫細胞
培養液、ＣＳ Ｆ産生腫瘍細胞移植マウスの尿く特開昭
−５８−５９９２４）に合宿されることが知られている
が、医薬品として利用する場合には免疫的副作用の少な
いヒト由来のＣＳ Ｆが好ましい。
）に作用して、この細胞の顆粒球又はマクロファージへ
の分化増殖を促進する物質であり、・「１髄細胞をｉｎ
ｖｉｔｒｏで培養するときＣ：ＦＵ−Ｃが分化と同時
に増殖してコロニーを形成するために必須な因子である
。（Ｉｃｈｉｋａｗａ、Ｙ、 ； Ｐｒｏｃｅｅｄｉ
ｎｇｓ ｏｆｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄ
ｅｍｙ ｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅ ５６イ８、 ｐ
、４８８゜１９６６年、 Ｍｅｔｃａｌｆ、Ｉ）、 ；
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｌｌｅｍａｔｏｌｏｇｙ
１巻、 Ｐ、１８５，１！１７３年） Ｃ３Ｆは抗癌剤、放射線照射による白血球減少症或いは
種々の感染症の治療剤として医薬への応用の他、白血球
減少症、再生不良性貧血等の診１１１ｉ薬としての用途
が期待される。（ＭｏＬｏｙｏｓｌ＋ｉ Ｋ、（！Ｌａ
１．．Ｊａｐ、 、１． Ｍａｄ、２１ｉ Ｐ、１８７
．１９８２年〕Ｃ８Ｆはマウス肺培養液、吉川肉腫細胞
培養液、ＣＳ Ｆ産生腫瘍細胞移植マウスの尿く特開昭
−５８−５９９２４）に合宿されることが知られている
が、医薬品として利用する場合には免疫的副作用の少な
いヒト由来のＣＳ Ｆが好ましい。
従来、報告されているヒ１−山来のＣＳ Ｆとしζは、
（１）ヒト尿ＣＳ Ｆ （ＳＬａｎｌｅｙ Ｅ、Ｉ７．
ｅＬ ８〕ｌ ； Ｆｅｄ。
（１）ヒト尿ＣＳ Ｆ （ＳＬａｎｌｅｙ Ｅ、Ｉ７．
ｅＬ ８〕ｌ ； Ｆｅｄ。
Ｐｒｏｃ、、 ３４ Ｓ Ｐ、２２７２．１９７５年）
、（２）ヒト胎ｆＪｔ （Ｎｉｃｏｌａ Ｎ、Ａ、 ｅ
ｔ ａｌ ； Ｂｌｏｏｄ ５４巻ｐ、６１４．１９
７９年）、（３）白血球の培養上清（Ｐｉｋｅ Ｂ、Ｌ
、 ｅｔ ａｌ ； Ｊ、Ｃｃｌｌ。
、（２）ヒト胎ｆＪｔ （Ｎｉｃｏｌａ Ｎ、Ａ、 ｅ
ｔ ａｌ ； Ｂｌｏｏｄ ５４巻ｐ、６１４．１９
７９年）、（３）白血球の培養上清（Ｐｉｋｅ Ｂ、Ｌ
、 ｅｔ ａｌ ； Ｊ、Ｃｃｌｌ。
Ｐｈｙｓｉｏｌ、、７６巻Ｐ、７７．１９７０年） 、
（４］ヒト痣；細胞から樹立した株化細胞Ｇ ＣＴ （
ＤｉＰｅｒｓｉｏ Ｊ、ｌ’、ｃＬ ａｌ； Ｆｅｄ、
、Ｂｌｏｏｄ ５１巻Ｐ、５０７．１９７８年） 、Ｔ
３１１−５（Ｏｋａｂｅ Ｔ、ｅｔ ａｌ、 ； Ｊ、
Ｃｅ１１．Ｐｂｙｓｉｏｌ、、１１０巻、＋１．／１１
３．１９８２年）の培養上清などが知られているが、（
」）についてはヒト尿の採集に際して微生物による汚染
、汚物や塵芥の混入等のため、Ｃ３Ｆを含む蛋白性の物
質が変性を受しノる危険性が大きいこと、（２）につい
ては産生源か限られていること、（３）については培養
効率が低く、更に培養上清を得る際に、動物の血清を用
いるために高（ｉｌ［ｉとなり、精製に細心の注意を要
すること、（４）については（３）の問題点に加うるに
、癌細胞由来という点で医薬品として用いる際に不安感
が残ること、等の問題点があった。
（４］ヒト痣；細胞から樹立した株化細胞Ｇ ＣＴ （
ＤｉＰｅｒｓｉｏ Ｊ、ｌ’、ｃＬ ａｌ； Ｆｅｄ、
、Ｂｌｏｏｄ ５１巻Ｐ、５０７．１９７８年） 、Ｔ
３１１−５（Ｏｋａｂｅ Ｔ、ｅｔ ａｌ、 ； Ｊ、
Ｃｅ１１．Ｐｂｙｓｉｏｌ、、１１０巻、＋１．／１１
３．１９８２年）の培養上清などが知られているが、（
」）についてはヒト尿の採集に際して微生物による汚染
、汚物や塵芥の混入等のため、Ｃ３Ｆを含む蛋白性の物
質が変性を受しノる危険性が大きいこと、（２）につい
ては産生源か限られていること、（３）については培養
効率が低く、更に培養上清を得る際に、動物の血清を用
いるために高（ｉｌ［ｉとなり、精製に細心の注意を要
すること、（４）については（３）の問題点に加うるに
、癌細胞由来という点で医薬品として用いる際に不安感
が残ること、等の問題点があった。
本発明者らはヒト由来のＣＳ Ｆの製造法つき種々検討
し、連続式携行式腹膜透析（ＣＡＰＤ）といわれる腹膜
透析療法において廃棄ｑｒ；とじて得られる腹膜透析液
中にＣ３Ｆが含まれ、且つこの腹膜透析液がＣ３Ｆ原料
として優れていることを見出し、本発明を完成するに至
った。
し、連続式携行式腹膜透析（ＣＡＰＤ）といわれる腹膜
透析療法において廃棄ｑｒ；とじて得られる腹膜透析液
中にＣ３Ｆが含まれ、且つこの腹膜透析液がＣ３Ｆ原料
として優れていることを見出し、本発明を完成するに至
った。
ＣＡＰＤは、透析成約２βを患者の腹腔内に無菌的に注
入し、一定時間後にこれを回収する操作を反復して行い
、腹膜を通して透析液中に血中老廃物を排出する方法で
あり、自宅で行うことかできるため、軽症の腎不全患者
の血液透析療法に代わる簡便な治療法として優れている
。
入し、一定時間後にこれを回収する操作を反復して行い
、腹膜を通して透析液中に血中老廃物を排出する方法で
あり、自宅で行うことかできるため、軽症の腎不全患者
の血液透析療法に代わる簡便な治療法として優れている
。
腹膜透析液は何よりも先ずヒト由来物質であるという安
心感の他、腹膜透析は厳しい無菌条件下で行われるため
、ヒト尿に比して発熱性物質による汚染がなく、腹膜透
析液中の蛋白性の物質は安定であり、Ｃ３Ｆの変性が少
なく、更に大量に入手できることからＣ３Ｆ源として極
めて優れている。本発明により得られたＣ８Ｆは医薬品
として用いる際にはヒト尿由来ＣＳ Ｆに比して物質と
しての信頼性が高い。
心感の他、腹膜透析は厳しい無菌条件下で行われるため
、ヒト尿に比して発熱性物質による汚染がなく、腹膜透
析液中の蛋白性の物質は安定であり、Ｃ３Ｆの変性が少
なく、更に大量に入手できることからＣ３Ｆ源として極
めて優れている。本発明により得られたＣ８Ｆは医薬品
として用いる際にはヒト尿由来ＣＳ Ｆに比して物質と
しての信頼性が高い。
腹膜透析液中に含まれるＣ３Ｆ量は患者及び採取時間に
より異なるが５〜４０ｕｎｉｔｓ ／ｍｌであった。
より異なるが５〜４０ｕｎｉｔｓ ／ｍｌであった。
各患者から得たＣ８Ｆ量を第１表に示す。
なお、第１表及び以下に記載するＣ３Ｆ活性は下記の方
法により測定した。
法により測定した。
直径３５ｍｍのプラスチック培養皿に２０％牛脂児血清
、２％、５％、１０％の各サンプル、０．３％の寒天及
び１×１０″′−個のマウス骨髄細胞を含むＭｃＣｏｙ
ｓ５Ａ培地１ｍｌを加え５％Ｃ０２通気、飽和水蒸気下
３７℃で７日間培養した。培養後倒立顕微鏡下で検鏡し
、５０個以上の細胞集塊をコロニーとした。Ｃ３Ｆ活性
はコロニー１ （［ｌｌｌを形成させる活性を１単位と
した。
、２％、５％、１０％の各サンプル、０．３％の寒天及
び１×１０″′−個のマウス骨髄細胞を含むＭｃＣｏｙ
ｓ５Ａ培地１ｍｌを加え５％Ｃ０２通気、飽和水蒸気下
３７℃で７日間培養した。培養後倒立顕微鏡下で検鏡し
、５０個以上の細胞集塊をコロニーとした。Ｃ３Ｆ活性
はコロニー１ （［ｌｌｌを形成させる活性を１単位と
した。
又、蛋白濃度の定量はブランドボール１′法団。
Ｍ、Ｂｒａｄｆｏｌｄ ； 八ｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｂｉｏｃｌ−＋ｅｍｉｓＬｒｙ ７２巻、 ｐ。
Ｂｉｏｃｌ−＋ｅｍｉｓＬｒｙ ７２巻、 ｐ。
２４８１９７６年〕によった。
腹膜透析液中のＣ３Ｆは更に積悪することによって純度
を上げることができる。すなわち、腹膜透析液を限り搏
、！！過濃縮後、塩析、透析、イオン交換クロマ１〜グ
ラフイー法、等重点電気泳動法及びゲル濾過法により約
２００倍の比活性を有するＣ５Ｆ（Ｐ−Ｃ３Ｆ）を得た
。
を上げることができる。すなわち、腹膜透析液を限り搏
、！！過濃縮後、塩析、透析、イオン交換クロマ１〜グ
ラフイー法、等重点電気泳動法及びゲル濾過法により約
２００倍の比活性を有するＣ５Ｆ（Ｐ−Ｃ３Ｆ）を得た
。
１ｌ−Ｃ３Ｆの平均分子量（ゲル濾過法）は約６０．０
００、等電点は３．６〜４．２７ヒト尿由来Ｃ３Ｆの平
均分子ｆｆｌ １１７，０００、等重点３．２と明らか
に異なっていた。又、１ｗ離剤存在下での平均分子量は
共に約３０，０００であった。したがって、Ｐ−Ｃ３Ｆ
は腹膜透析液中では２分子会合して存在するが、他の蛋
白質と会合状態をとっているものと考えられる。
００、等電点は３．６〜４．２７ヒト尿由来Ｃ３Ｆの平
均分子ｆｆｌ １１７，０００、等重点３．２と明らか
に異なっていた。又、１ｗ離剤存在下での平均分子量は
共に約３０，０００であった。したがって、Ｐ−Ｃ３Ｆ
は腹膜透析液中では２分子会合して存在するが、他の蛋
白質と会合状態をとっているものと考えられる。
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
実施例
第１表に示す患者Ｃの腹膜透析液４０００ｍ１を限外濾
過（濾過膜ＰＭ−１０；アミコン社歴）、濃縮〔ＰＭ−
１０ＣｏｎｃｅｎｔａＬｅ）後、更に８０％飽和硫安に
て塩析後沈緻物を０．０５％ポリエチレングリコール含
イＪ５ｍＭリン酸す′トリウムハソフｙ −（ｐ Ｈ７
，４） Ｌこ熔解〔８０％（Ｎ １１４ ）２ Ｓ ０
４ ｐｐｔ） シ、更に、同バッファーに対し１１１間
透析した。
過（濾過膜ＰＭ−１０；アミコン社歴）、濃縮〔ＰＭ−
１０ＣｏｎｃｅｎｔａＬｅ）後、更に８０％飽和硫安に
て塩析後沈緻物を０．０５％ポリエチレングリコール含
イＪ５ｍＭリン酸す′トリウムハソフｙ −（ｐ Ｈ７
，４） Ｌこ熔解〔８０％（Ｎ １１４ ）２ Ｓ ０
４ ｐｐｔ） シ、更に、同バッファーに対し１１１間
透析した。
透析液をＩ） Ｅ Ａ Ｅ−セルロース（ＩＩＥ−３２
；フナコシ薬品′Ｍ）に吸着させ、ＮａＣ］ｉ１度０．
２Ｍにて溶出される画分（Ｉ ｓｔ ＤＢ−３２）を得
た。次いでその両分を再度１月２Δ■３−セルロースに
吸、ｉｑさせ、ＮａＣ１濃度０．０５〜［１，５Ｍの直
線濃度勾配により溶出させ、ＮａＣｌ１度０．１（ｉ
〜０．２７Ｍの範囲に溶出した画分（２ｎｄ ＤＥ−３
２）を１１０ ｍｌカラム（ＬＫＢ社製、等重点電気泳
動装置）により等電点分離を行い、ｐＨ３．６〜４．２
の画分ＣＩＥＦ ｐｌ ３．６〜４．２〕を分取した。
；フナコシ薬品′Ｍ）に吸着させ、ＮａＣ］ｉ１度０．
２Ｍにて溶出される画分（Ｉ ｓｔ ＤＢ−３２）を得
た。次いでその両分を再度１月２Δ■３−セルロースに
吸、ｉｑさせ、ＮａＣ１濃度０．０５〜［１，５Ｍの直
線濃度勾配により溶出させ、ＮａＣｌ１度０．１（ｉ
〜０．２７Ｍの範囲に溶出した画分（２ｎｄ ＤＥ−３
２）を１１０ ｍｌカラム（ＬＫＢ社製、等重点電気泳
動装置）により等電点分離を行い、ｐＨ３．６〜４．２
の画分ＣＩＥＦ ｐｌ ３．６〜４．２〕を分取した。
以上の精製結果を第２表に示す。
ＩＥｌｉ ｐｌ ３．６〜４．２画分を更にケル濾過（
ｌＪｌｔｒｏ−ｇｅｌ八ｃへｌ ３４ ； ＬＫＢ社製
）によりオ青製し、４７３０ｕｎｉｔｓ ７ｍｇ蛋白の
比活性を有する標品（Ｐ−Ｃ３Ｆ〕を得た。ｐ−Ｃ３Ｆ
の等重点は３．６〜４．２で、ケル濾過法による平均分
子量の値は約６０，０００で解離剤（６Ｍ−グアニジン
）が存在すると約３０； ｏｏｏであった。同条件下で
ヒト尿由来Ｃ３Ｆにつき測定した結果、平均分子量は約
１１７，０００ 、解離剤が存在すると約３０．００
０であり、等電点ば３．２であった。
ｌＪｌｔｒｏ−ｇｅｌ八ｃへｌ ３４ ； ＬＫＢ社製
）によりオ青製し、４７３０ｕｎｉｔｓ ７ｍｇ蛋白の
比活性を有する標品（Ｐ−Ｃ３Ｆ〕を得た。ｐ−Ｃ３Ｆ
の等重点は３．６〜４．２で、ケル濾過法による平均分
子量の値は約６０，０００で解離剤（６Ｍ−グアニジン
）が存在すると約３０； ｏｏｏであった。同条件下で
ヒト尿由来Ｃ３Ｆにつき測定した結果、平均分子量は約
１１７，０００ 、解離剤が存在すると約３０．００
０であり、等電点ば３．２であった。
第 １ 表
第 ２ 表
Claims (1)
- ヒト腹膜透析液を精製して、Ｃ３Ｆを採取することを特
徴とするＣ３Ｆの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58083507A JPS59210027A (ja) | 1983-05-14 | 1983-05-14 | Ｃｓｆの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58083507A JPS59210027A (ja) | 1983-05-14 | 1983-05-14 | Ｃｓｆの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59210027A true JPS59210027A (ja) | 1984-11-28 |
Family
ID=13804392
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58083507A Pending JPS59210027A (ja) | 1983-05-14 | 1983-05-14 | Ｃｓｆの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59210027A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61186327A (ja) * | 1985-02-08 | 1986-08-20 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 感染防禦剤 |
| JPH01175995A (ja) * | 1987-12-29 | 1989-07-12 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | 生理活性物質の農縮・脱塩方法 |
| JPH02225418A (ja) * | 1989-02-28 | 1990-09-07 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | 抗悪性腫瘍剤 |
-
1983
- 1983-05-14 JP JP58083507A patent/JPS59210027A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61186327A (ja) * | 1985-02-08 | 1986-08-20 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 感染防禦剤 |
| JPH01175995A (ja) * | 1987-12-29 | 1989-07-12 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | 生理活性物質の農縮・脱塩方法 |
| JPH02225418A (ja) * | 1989-02-28 | 1990-09-07 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | 抗悪性腫瘍剤 |
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