JPS59159827A - 細胞毒性物質を結合した反応性重合体の製造法 - Google Patents
細胞毒性物質を結合した反応性重合体の製造法Info
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- JPS59159827A JPS59159827A JP58032955A JP3295583A JPS59159827A JP S59159827 A JPS59159827 A JP S59159827A JP 58032955 A JP58032955 A JP 58032955A JP 3295583 A JP3295583 A JP 3295583A JP S59159827 A JPS59159827 A JP S59159827A
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- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ａ、 産業上の利用分野
本発明は、側鎖のカルボ干シル基に、細胞毒性物質を多
数結合すると共に、主鎖の片末端忙チオール基又は活性
ジスルフィド結合を含む反応性基を有する、反応性にａ
んだ重合体及びその製造法に関する。そして本発明の目
的とするところは、腫瘍細胞等の標的物に結合能を有す
る抗腫瘍抗体等と、制ガン剤等の細胞毒物を結合して標
的指向型制ガン剤（抗腫瘍剤）等を製造するに際し、両
者を有効かつ効率良く結合させるために用いることがで
きる重合体を提供することにある。
数結合すると共に、主鎖の片末端忙チオール基又は活性
ジスルフィド結合を含む反応性基を有する、反応性にａ
んだ重合体及びその製造法に関する。そして本発明の目
的とするところは、腫瘍細胞等の標的物に結合能を有す
る抗腫瘍抗体等と、制ガン剤等の細胞毒物を結合して標
的指向型制ガン剤（抗腫瘍剤）等を製造するに際し、両
者を有効かつ効率良く結合させるために用いることがで
きる重合体を提供することにある。
ｂ８ 従来技術
ある種の細胞だけを選択的に殺すことを目的として、そ
の標的細胞と特異的に結合しうる免疫グロブリンを種々
の細胞毒性ｑ／ｙＪ質と結合させる試みがなされてきた
。例えば、免疫グロブリンＫｐ−ビス（２−クロロエチ
ル）アミノ−Ｌ−フェニルアラニン等を結合した複合体
（特開昭５１−６１６４０号）、免疫グルプリンにメト
トレキセート等を結合した複合体（特開昭５６−６５８
２９号）、免疫グロブリンにクロラムズシル等を結合し
た複合体（特開昭５６−６５８２８号）老役グログリン
にマイトマイシン−Ｃ等を結合した複合体（特開昭５５
−９２３２５号）、免疫グロブリンにダウノマイシンを
結合した複合体（特開昭５１−１４４７２３号）等が公
知である。
の標的細胞と特異的に結合しうる免疫グロブリンを種々
の細胞毒性ｑ／ｙＪ質と結合させる試みがなされてきた
。例えば、免疫グロブリンＫｐ−ビス（２−クロロエチ
ル）アミノ−Ｌ−フェニルアラニン等を結合した複合体
（特開昭５１−６１６４０号）、免疫グルプリンにメト
トレキセート等を結合した複合体（特開昭５６−６５８
２９号）、免疫グロブリンにクロラムズシル等を結合し
た複合体（特開昭５６−６５８２８号）老役グログリン
にマイトマイシン−Ｃ等を結合した複合体（特開昭５５
−９２３２５号）、免疫グロブリンにダウノマイシンを
結合した複合体（特開昭５１−１４４７２３号）等が公
知である。
支圧、特開昭５１−．１２６２８１号には、抗腫瘍免疫
グロブリンと、１分子当り制ガン剤を５〜５００分子共
有結合している重合体担体（例えば、ポリグルタミン酸
）を、アミド結合によって結合させて抗腫瘍剤を得たこ
とが開示されている。
グロブリンと、１分子当り制ガン剤を５〜５００分子共
有結合している重合体担体（例えば、ポリグルタミン酸
）を、アミド結合によって結合させて抗腫瘍剤を得たこ
とが開示されている。
これらの方法で得られた細胞毒性複合体は、腫瘍細胞と
選択的に結合し腫瘍細胞に毒性を発揮することが期待さ
れるものであり、非常に興味のある薬剤である。しかし
ながら細胞毒性物質を直接免疫グルプリンに結合する場
合は、免疫グロブリンに多数の細胞心性物質を結合する
と、免疫グロブリンの抗原認識活性が低下してしまうの
で、かかる内難を回避するためには、少数の細胞心性物
質を結合するにとどめざるをえな℃・。
選択的に結合し腫瘍細胞に毒性を発揮することが期待さ
れるものであり、非常に興味のある薬剤である。しかし
ながら細胞毒性物質を直接免疫グルプリンに結合する場
合は、免疫グロブリンに多数の細胞心性物質を結合する
と、免疫グロブリンの抗原認識活性が低下してしまうの
で、かかる内難を回避するためには、少数の細胞心性物
質を結合するにとどめざるをえな℃・。
一方、重合体を細胞心性物質のブ旦体として用いる場合
は、上記の帷点を改善することができると考えられる。
は、上記の帷点を改善することができると考えられる。
しかし、特開昭５１−１２６２８１号記載の方法ｉｔ、
、！合体担体に多数の細胞毒性物質を結合する反応と、
重合体−制ガン剤結合体に免疫グロブリンを結合する反
応が同一な反応のため、多数の免疫グロブリンが重合体
担体に結合してしまい、そのため得られる複合体が均一
なものとなり得ないのみならず、治療剤として用いるの
が不適当な高分子量物質も含む、といった間、スを生じ
るのである。
、！合体担体に多数の細胞毒性物質を結合する反応と、
重合体−制ガン剤結合体に免疫グロブリンを結合する反
応が同一な反応のため、多数の免疫グロブリンが重合体
担体に結合してしまい、そのため得られる複合体が均一
なものとなり得ないのみならず、治療剤として用いるの
が不適当な高分子量物質も含む、といった間、スを生じ
るのである。
Ｃ１発明の目的
不発明者等は、かかる先行技術の欠点を解決すべく鋭意
研究を行なった結果、免疫りｐプリンとの結合反応に供
する反応基をｌコだけ含有し、かつ、それとは異なる、
細胞心性物質を結合するための、反応基を多数含む重合
体担体を用意し、先づ多数の反応際だよって多数の細胞
毒性物質を該重合体担体に結合した後に、免疫グロブリ
ンとの反応基によって免疫グルプリンと結合する、とい
う手順を踏むこと（（よれば、治療剤として用いるのが
不適当な高分子物質を含まず、かつ、多数の細胞心性物
質を結合した免役グロブリン−細胞毒性物質複合体を製
造し得ることを見い出した。本発明は、かかる抗＋！、
ｉ ｒＭ剤あるいは又その他の標的指向屋薬剤を製造す
る際に最適に使用できる、細胞毒性物質を結合した反応
性重合体を提供するものである。
研究を行なった結果、免疫りｐプリンとの結合反応に供
する反応基をｌコだけ含有し、かつ、それとは異なる、
細胞心性物質を結合するための、反応基を多数含む重合
体担体を用意し、先づ多数の反応際だよって多数の細胞
毒性物質を該重合体担体に結合した後に、免疫グロブリ
ンとの反応基によって免疫グルプリンと結合する、とい
う手順を踏むこと（（よれば、治療剤として用いるのが
不適当な高分子物質を含まず、かつ、多数の細胞心性物
質を結合した免役グロブリン−細胞毒性物質複合体を製
造し得ることを見い出した。本発明は、かかる抗＋！、
ｉ ｒＭ剤あるいは又その他の標的指向屋薬剤を製造す
る際に最適に使用できる、細胞毒性物質を結合した反応
性重合体を提供するものである。
ｄ、 発明の構成
本発明は、下記式ＣＩ）
ｃｏ ｃｏｏｚ
・・・・・・・・・ＣＤ
で表わされる細胞毒性物質を結合した反応性重合体であ
る。
る。
式［１）で表わされる細胞毒性複合体において、Ｙは分
子中にアミノ基又はイミノ基を含む細胞毒性物質のアミ
ノ基又はイミノ基反応残基な表わす。本発明における細
胞毒性物質とは、そのままの状態で細胞に毒性を発揮す
る物質、あるいはそのままでは毒性を発揮しないが、生
体内で細胞疋毒性を発揮し得る物質に転換し得る物質を
いう。これらの例としては、 ｐ −［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）〕フェニレ
ンジアミン ｐ−（ビス（２−クロロエチル）アミン〕Ｌ−フェニル
アラニン（メルフ７ラン）Ｈ １−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシンまたはそ
のモノホスフェート ＮＨ。
子中にアミノ基又はイミノ基を含む細胞毒性物質のアミ
ノ基又はイミノ基反応残基な表わす。本発明における細
胞毒性物質とは、そのままの状態で細胞に毒性を発揮す
る物質、あるいはそのままでは毒性を発揮しないが、生
体内で細胞疋毒性を発揮し得る物質に転換し得る物質を
いう。これらの例としては、 ｐ −［Ｎ、Ｎ−ビス（２−クロロエチル）〕フェニレ
ンジアミン ｐ−（ビス（２−クロロエチル）アミン〕Ｌ−フェニル
アラニン（メルフ７ラン）Ｈ １−（β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシンまたはそ
のモノホスフェート ＮＨ。
１−Ｃｓ’−（，２−７ミノエチルホスホリル）−β−
Ｄ−アラビノフラノシル〕シトシンＣＨ，０Ｈ ２−７ミノーＮ−Ｃｐ−ビス（２−クロロエチル）アミ
ノコフェニル−３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル
プロピオンアミド ＯＯＨ メトトレキセート アクチノマイ゛シンＤ 。 ？ マイトマイシンＣ Ｘ＝Ｈ、ダウノマイシン Ｘ＝ＯＨ，７ドリアマイシン。
Ｄ−アラビノフラノシル〕シトシンＣＨ，０Ｈ ２−７ミノーＮ−Ｃｐ−ビス（２−クロロエチル）アミ
ノコフェニル−３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル
プロピオンアミド ＯＯＨ メトトレキセート アクチノマイ゛シンＤ 。 ？ マイトマイシンＣ Ｘ＝Ｈ、ダウノマイシン Ｘ＝ＯＨ，７ドリアマイシン。
等を挙げることができるが、これらに限られるものでは
ない。
ない。
２は水素原子又は１価の１湯イオン、例えばＮａ、に、
ＮＨ４＋である。
ＮＨ４＋である。
＋ ＋
Ｗは２価の有機基を表わし、本発明の原料として用いる
反応性重合体を得る過程で何ら反応に関与しない不活性
な基である限り特に限定されない。これらの基としては
、例えば２−７ミノブｐピオン酸残基（−ＣＨ２ＣＨ２
−）の如き直鎖の、あるいはＮ−ベンゾイルシスティ鎖
を有するフルキレン、４−メルカプト安息香酸残基ｃ
Ｒ）−）の如き置換基を有しない、あるいは置換基を有
するフェニレン基が挙げられるが、炭素数１〜４のフル
キンン基が特処好ましい。Ｒ１はα−アミノ酸のα位側
鎖又はその誘導体（但しカルボキシル基を有する基は除
く）であり、例えばα−アミノ酸がグリシンの場合はＲ
，＝Ｈ，７ラニンの場合はＲＩ＝ ＣＨ，、フェニルア
ラニンの場合はＲ，＝ ＣＨ，−Ｃ＞、セリンの場合は
Ｒ１＝ＣＨｔＯＨである。式ＣＩ）の複合体において、
かかるα−アミノ酸からなる単位は、細胞毒性物質との
結合には何ら関与しないが、複合体の脂溶性や水溶性、
あるいは細胞膜との親和性等を調節するの処役立つもの
である。従って、脂溶性や水溶性の調節が格別に必要な
い場合忙は、かかるα−７ミノ酸単位を含有しないもの
の方（式（Ｉ）においてｑ＝０）が実用的に有利である
。
反応性重合体を得る過程で何ら反応に関与しない不活性
な基である限り特に限定されない。これらの基としては
、例えば２−７ミノブｐピオン酸残基（−ＣＨ２ＣＨ２
−）の如き直鎖の、あるいはＮ−ベンゾイルシスティ鎖
を有するフルキレン、４−メルカプト安息香酸残基ｃ
Ｒ）−）の如き置換基を有しない、あるいは置換基を有
するフェニレン基が挙げられるが、炭素数１〜４のフル
キンン基が特処好ましい。Ｒ１はα−アミノ酸のα位側
鎖又はその誘導体（但しカルボキシル基を有する基は除
く）であり、例えばα−アミノ酸がグリシンの場合はＲ
，＝Ｈ，７ラニンの場合はＲＩ＝ ＣＨ，、フェニルア
ラニンの場合はＲ，＝ ＣＨ，−Ｃ＞、セリンの場合は
Ｒ１＝ＣＨｔＯＨである。式ＣＩ）の複合体において、
かかるα−アミノ酸からなる単位は、細胞毒性物質との
結合には何ら関与しないが、複合体の脂溶性や水溶性、
あるいは細胞膜との親和性等を調節するの処役立つもの
である。従って、脂溶性や水溶性の調節が格別に必要な
い場合忙は、かかるα−７ミノ酸単位を含有しないもの
の方（式（Ｉ）においてｑ＝０）が実用的に有利である
。
ｍ１ｉ１〜４の整舷を表わずが、好ましいのはｍが１又
は２の場合である。なお、式ＣＩ〕で表わされる複合体
としては、例えば、ｍ＝１のものとｍ ＝ ２のものが
混在している様な重合体も含む。
は２の場合である。なお、式ＣＩ〕で表わされる複合体
としては、例えば、ｍ＝１のものとｍ ＝ ２のものが
混在している様な重合体も含む。
式〔Ｉ〕においてｎは細胞毒性物質が結合した構成単位
の数を表わし、ｐは細胞毒性物質が結合していない構成
単位の数を表わし、ｑは側鎖にカルボキシル基を有しな
いα−アミソ酸単位（側鎖は修飾されていてもよい）の
数を表わすが、これらの単位の重合体中のｒ肥料状態は
任意である。即ち、式［０においては、便宜上ブロック
重合体の如（表わしであるが、これに限られるものでは
な（、通常の方法で得られるものはランダム配列の重合
体である。ｎ ＝ ５〜１５０ （１、好ましくはｉｔ
）〜５００であり、ｐ ＝ Ｑ〜２５００．好ましくは
Ｏ〜５（１０であり、ｑ ＝Ｏ〜１５００ 。
の数を表わし、ｐは細胞毒性物質が結合していない構成
単位の数を表わし、ｑは側鎖にカルボキシル基を有しな
いα−アミソ酸単位（側鎖は修飾されていてもよい）の
数を表わすが、これらの単位の重合体中のｒ肥料状態は
任意である。即ち、式［０においては、便宜上ブロック
重合体の如（表わしであるが、これに限られるものでは
な（、通常の方法で得られるものはランダム配列の重合
体である。ｎ ＝ ５〜１５０ （１、好ましくはｉｔ
）〜５００であり、ｐ ＝ Ｑ〜２５００．好ましくは
Ｏ〜５（１０であり、ｑ ＝Ｏ〜１５００ 。
好ましくはｑ−０〜ｓｏｏである。
Ｓは細胞毒性物質を結合した反応性重合体上の千オール
基又は活性ジスルフィド基に由来スる硫黄原子を表わす
。
基又は活性ジスルフィド基に由来スる硫黄原子を表わす
。
式〔工〕においてＸで表わされる、結合している硫黄原
子と共に活性ジスルフィド基を形成し得る１価の有機基
の具体例としては、例４−カルボキシー２−ピリジルチ
オ基 ↓ チオ基ｃ ｂＮＯｔ ）、 ４−二トｐ−２−ビリ− フェニル７ミノーＮ′−７エニルイミノメチルる。
子と共に活性ジスルフィド基を形成し得る１価の有機基
の具体例としては、例４−カルボキシー２−ピリジルチ
オ基 ↓ チオ基ｃ ｂＮＯｔ ）、 ４−二トｐ−２−ビリ− フェニル７ミノーＮ′−７エニルイミノメチルる。
式ＣＩＩ）で表わされる活性基を有している反応性重合
体と、分子中に７ミノ基又はイミノ基を含む細胞毒性物
質との反応は、通常、水又はジメチルホルムアミドやジ
メチルスルホ・キシド等の声機溶剤を反応溶媒とする均
一反応系で行なわれる。反応に際しては、例えば１−ニ
ー５−ルー ３− （３−ジメチルアミノフロビル）カ
ルボジイミド塩酸塩やジシクロヘキシルカルボジイミド
で重合体中のカルホキシル基を活性化してもよく、ある
いはカルボキシル基を混合酸無水物の形に活性化してお
いてもよＳい。反応時間は−４０−１００’Ｃ，反応時
間はｌＯ分〜１０日間が適当である。用いられろ重合体
と細胞毒性物質との割合は、通常重合体中の−ｃｏｏｚ
基の５〜２００％に相当する量が適当であ゛る。反応終
了後、反応液をグルｆ過又は透析等に付すことにより式
Ｃｌ−１）で表わされる１釧胞青性物質を結合した反応
性重合体を積取する。必要なら、凍結乾燥品として得る
こともできる。
体と、分子中に７ミノ基又はイミノ基を含む細胞毒性物
質との反応は、通常、水又はジメチルホルムアミドやジ
メチルスルホ・キシド等の声機溶剤を反応溶媒とする均
一反応系で行なわれる。反応に際しては、例えば１−ニ
ー５−ルー ３− （３−ジメチルアミノフロビル）カ
ルボジイミド塩酸塩やジシクロヘキシルカルボジイミド
で重合体中のカルホキシル基を活性化してもよく、ある
いはカルボキシル基を混合酸無水物の形に活性化してお
いてもよＳい。反応時間は−４０−１００’Ｃ，反応時
間はｌＯ分〜１０日間が適当である。用いられろ重合体
と細胞毒性物質との割合は、通常重合体中の−ｃｏｏｚ
基の５〜２００％に相当する量が適当であ゛る。反応終
了後、反応液をグルｆ過又は透析等に付すことにより式
Ｃｌ−１）で表わされる１釧胞青性物質を結合した反応
性重合体を積取する。必要なら、凍結乾燥品として得る
こともできる。
かくして得られた式［ｌ−１）で表わされる細胞毒性物
質を結合した反応性重合体をチオール化合物や水素化ホ
ウ素化合物と反応させて、重合体中のジスルフィド結合
を還元的に切断すること九よって、式［Ｉ−２］で表わ
される細胞毒性物質を結合し、チオール基を含有する反
応性重合体を得ることができる。式Ｃｌ−１１で表わさ
れる重合体とチオール化合物との反応は、通常、水又は
ジメチルホルムアミドやジメチルスルーホキシト等の有
機６剤を反応溶媒とする均一反応系で行なわれる。適当
なチオール化合物としては、例えば、ジチオスレイトー
ル。２−メルカプトエタノールがある。
質を結合した反応性重合体をチオール化合物や水素化ホ
ウ素化合物と反応させて、重合体中のジスルフィド結合
を還元的に切断すること九よって、式［Ｉ−２］で表わ
される細胞毒性物質を結合し、チオール基を含有する反
応性重合体を得ることができる。式Ｃｌ−１１で表わさ
れる重合体とチオール化合物との反応は、通常、水又は
ジメチルホルムアミドやジメチルスルーホキシト等の有
機６剤を反応溶媒とする均一反応系で行なわれる。適当
なチオール化合物としては、例えば、ジチオスレイトー
ル。２−メルカプトエタノールがある。
チオール化合物は、重合体中のジスルフィド結合に対し
１〜１００倍モル量用いられる。
１〜１００倍モル量用いられる。
反応温度は一５°〜７０℃１反応時間は５分〜１０日間
が好ましい。
が好ましい。
水素化ホウ素化合物、例えば水素化ホウ素ナトリウム、
水素化ホウ素カリウムを用いる場合忙は、重合体との反
応は通常、水溶液中で行なわれる。重合体中のジスルフ
ィド結合に対し１〜１００倍モルの還元剤が好ましく用
いられる。反応温度は一５°〜４０ ℃、反応温度は１
分〜５時間が好ましい。
水素化ホウ素カリウムを用いる場合忙は、重合体との反
応は通常、水溶液中で行なわれる。重合体中のジスルフ
ィド結合に対し１〜１００倍モルの還元剤が好ましく用
いられる。反応温度は一５°〜４０ ℃、反応温度は１
分〜５時間が好ましい。
反応終了後反応液をグルｆ過又は透ｆｒｒ等（（付すこ
とにより、式Ｃｌ−２３で表わされる重合体を積増する
ことができる。必要なら、凍結乾燥品として得ることも
できる。
とにより、式Ｃｌ−２３で表わされる重合体を積増する
ことができる。必要なら、凍結乾燥品として得ることも
できる。
か（して得られた式ＣＩ−２１で表わされる細胞毒性物
質を結合し、チオール基を含有する反応性重合体に、活
性ジスルフィド頌を反応せしめることによって、式（ｒ
−１３で表わされる活性ジスルフィド基を含有する反応
性重合体を得ることができる。好適に用（・ることかで
きる活性ジスルフィド化合物としては、例えば、２−ピ
リジルジスルフィド （２−二トロ安息香酸） シー２−ピリジルジスルフィド シー２−ピリジルジスルフィド −２−ピリジルジスルフィド ２−ペンゾイミダゾイルジスルフイト ミノ−Ｎ′−フェニルイミノメチルジスルフイド ができる。
質を結合し、チオール基を含有する反応性重合体に、活
性ジスルフィド頌を反応せしめることによって、式（ｒ
−１３で表わされる活性ジスルフィド基を含有する反応
性重合体を得ることができる。好適に用（・ることかで
きる活性ジスルフィド化合物としては、例えば、２−ピ
リジルジスルフィド （２−二トロ安息香酸） シー２−ピリジルジスルフィド シー２−ピリジルジスルフィド −２−ピリジルジスルフィド ２−ペンゾイミダゾイルジスルフイト ミノ−Ｎ′−フェニルイミノメチルジスルフイド ができる。
両者の反応は、通常、水又はンメチルホルムアミドやジ
メチルスルホキシド等の有機溶剤を反応溶媒とする均一
□反応系で行なわれる。
メチルスルホキシド等の有機溶剤を反応溶媒とする均一
□反応系で行なわれる。
あるいはまた、重合体の水溶液に活性ジスルフィド化合
物又はその７セトン溶液又はジオキサン溶液等を添加混
合した反応系で行なうこともできる。反応温度は一５′
″〜７０ ’Ｃ、反応時間は１分〜２４時間が適当であ
る。反応終了後、反応液をゲル濾過または透析などに付
すことにより式［Ｉ−１）で表わさｎる１消胞再性物質
を結合した反応性重合体を積取する。必要なら凍結乾燥
品として得ることができる。
物又はその７セトン溶液又はジオキサン溶液等を添加混
合した反応系で行なうこともできる。反応温度は一５′
″〜７０ ’Ｃ、反応時間は１分〜２４時間が適当であ
る。反応終了後、反応液をゲル濾過または透析などに付
すことにより式［Ｉ−１）で表わさｎる１消胞再性物質
を結合した反応性重合体を積取する。必要なら凍結乾燥
品として得ることができる。
本発明の原料物質である、式［Ｌｒ〕で表わされる末端
に活性基を有している反応性重合体は、例えばＬ−グル
タミン酸、Ｌ−７スバラギン酸等の重合体又は、それら
と他のアミノ酸との間の共重合体のアミン末端（Ｎ−末
端）に、チオール基又は、保護チオール基導入剤を反応
させ、しかる後に、直接又は保護基をはずして得られた
チオール含有重合体に、活性ジスルフィド化合物−を反
応させることにより、容易に得られるものである。チオ
ール基導入剤として好的に用いることができる物質とし
ては、例えばＮ−サクシンイミジル３−（２−ピリジル
ジチオ）プルビオネートシンイミノルブロヒオネ−）） 合体の製造方法は、さらに参考例で詳述する。
に活性基を有している反応性重合体は、例えばＬ−グル
タミン酸、Ｌ−７スバラギン酸等の重合体又は、それら
と他のアミノ酸との間の共重合体のアミン末端（Ｎ−末
端）に、チオール基又は、保護チオール基導入剤を反応
させ、しかる後に、直接又は保護基をはずして得られた
チオール含有重合体に、活性ジスルフィド化合物−を反
応させることにより、容易に得られるものである。チオ
ール基導入剤として好的に用いることができる物質とし
ては、例えばＮ−サクシンイミジル３−（２−ピリジル
ジチオ）プルビオネートシンイミノルブロヒオネ−）） 合体の製造方法は、さらに参考例で詳述する。
ｅ、 発明の効果
本発明で得られるｄノ冠毒性物質な結合した反応性重合
体は、分子中に反１５性に富んだチオール基又は活性ジ
スルフィド粘合を有しているので、かかる基又は結合の
反応性を利用して抗腫瘍免疫グロブリン又はそのフラグ
メントと直接又は適当な架橋剤を用いて結合させること
かできる。かくして祷られる抗体−組胞毒性物質結合体
は腫瘍細胞等に選択毒性を発揮することが期待されるも
のである。
体は、分子中に反１５性に富んだチオール基又は活性ジ
スルフィド粘合を有しているので、かかる基又は結合の
反応性を利用して抗腫瘍免疫グロブリン又はそのフラグ
メントと直接又は適当な架橋剤を用いて結合させること
かできる。かくして祷られる抗体−組胞毒性物質結合体
は腫瘍細胞等に選択毒性を発揮することが期待されるも
のである。
以下、参考例および実施例により本発明を詳述する。
参考例Ｉ
Ｎ−末端に反応性基を含有する小り−Ｌ−グルタミンｆ
ｆｌ （ナトリウム塩（）の刈造。
ｆｌ （ナトリウム塩（）の刈造。
未反応重合体
ｏｔｎ
芝
芝
１−１）Ｎ−末端にジスルフィド結合を導入した１合体
の製造。
の製造。
ポリ−ルーグルタミン詣のナトリウム塩（平均分子ｊｉ
２１，０００ ） ２２６．５Ｆ９（１）０．ＩＭリン
酸ナトリウム媛衝ｅ、（、Ｈ７，５）（１５ｍ ）中イ
容液に、Ｎ−サクシイミンル３−（２−ピリジルジチオ
）プルビオネート（以下５ＰＤＰと省略する）６８．８
〜のエタノール（６属）溶液を粘拌下、２度に分げて加
え、１．５時間室温下に反応させた。
２１，０００ ） ２２６．５Ｆ９（１）０．ＩＭリン
酸ナトリウム媛衝ｅ、（、Ｈ７，５）（１５ｍ ）中イ
容液に、Ｎ−サクシイミンル３−（２−ピリジルジチオ
）プルビオネート（以下５ＰＤＰと省略する）６８．８
〜のエタノール（６属）溶液を粘拌下、２度に分げて加
え、１．５時間室温下に反応させた。
反応液をセロファン透析チューブに入れ、０．０１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ７，５）に対して４°で２日間透析し
て低分子物質を除去すると、ポリ−Ｌ−グルタミン酸分
子のアミン末端に３−（２−ピリジルジチオ）プロピオ
ニル基がアミド結合により導入されて生成したジスルフ
ィド結合を有する重合体を含有する溶液ｓｏｍｅが得ら
れた。
ン酸緩衝液（ｐＨ７，５）に対して４°で２日間透析し
て低分子物質を除去すると、ポリ−Ｌ−グルタミン酸分
子のアミン末端に３−（２−ピリジルジチオ）プロピオ
ニル基がアミド結合により導入されて生成したジスルフ
ィド結合を有する重合体を含有する溶液ｓｏｍｅが得ら
れた。
１−２）ジスルフィド結合の導入率
参考例１−４）の結果より、生成した重合性に含有され
かつ単離できるジスルフィド基導入重合体址は３５．４
■（１５，６重量％）である。
かつ単離できるジスルフィド基導入重合体址は３５．４
■（１５，６重量％）である。
１−３）Ｎ−末端にチオール基を有する反応性重合体（
〜）の製造。
〜）の製造。
１−１）によって得られた、７ミノ末端に３−（２−ピ
リジルジチオ）プルピオニル基ヲ導入した、ジスルフィ
ド結合を有する重合体を含有する溶液５０ｄに、ジチオ
スレイトール１７１Ｑの０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐ
Ｈ６，０）緩衝液２． Ｏｍｌｌ浴溶液柳え、室温下に
８０分間反応させた。次いで塩酸酸性とし、生じた沈澱
を遠心分離した。得られたポリ−Ｌ−グルタミン酸の、
沈澱４勿（末端にチオール基を有するボ！Ｉ−Ｌ−グル
タミン酸と有しないポリ−Ｌ−グルタミン酸を含む。）
は、０．０１ ＮＨＣ／で洗浄した。
リジルジチオ）プルピオニル基ヲ導入した、ジスルフィ
ド結合を有する重合体を含有する溶液５０ｄに、ジチオ
スレイトール１７１Ｑの０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐ
Ｈ６，０）緩衝液２． Ｏｍｌｌ浴溶液柳え、室温下に
８０分間反応させた。次いで塩酸酸性とし、生じた沈澱
を遠心分離した。得られたポリ−Ｌ−グルタミン酸の、
沈澱４勿（末端にチオール基を有するボ！Ｉ−Ｌ−グル
タミン酸と有しないポリ−Ｌ−グルタミン酸を含む。）
は、０．０１ ＮＨＣ／で洗浄した。
一方、チオプロピルセファロース６Ｂゲル（Ｔｈ１ｏｐ
ｒｏｐｙｌ ５ｅｐｈａｒｓｅ■６Ｂ、ファルマシ７社
Ｈ）ｚ ｓ ｍｇを０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６
，０）−１ｍＭエチレンジアミンテトラ酢酸（以後ＥＤ
ＴＡと省略する）（ｐＨ６，０）緩衝液４０ｍに分散し
、得られた分散溶液に、前記で得られたポリ−Ｌ−グル
タミン酸を同一緩衝液ｘｏｍｔｖｃｍ解して得られる溶
液を加え、室温下、窒素雰囲気中でゆるやかに１夜攪拌
した。こオＬで末端にチオール基を有するポリ−Ｌ−グ
ルタミン酸力；樹脂に結合する。次いで樹脂を日別し、
０．０１Ｍリン酸緩衝液ＰＨ７，５で充分洗浄した。
ｒｏｐｙｌ ５ｅｐｈａｒｓｅ■６Ｂ、ファルマシ７社
Ｈ）ｚ ｓ ｍｇを０．１Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ６
，０）−１ｍＭエチレンジアミンテトラ酢酸（以後ＥＤ
ＴＡと省略する）（ｐＨ６，０）緩衝液４０ｍに分散し
、得られた分散溶液に、前記で得られたポリ−Ｌ−グル
タミン酸を同一緩衝液ｘｏｍｔｖｃｍ解して得られる溶
液を加え、室温下、窒素雰囲気中でゆるやかに１夜攪拌
した。こオＬで末端にチオール基を有するポリ−Ｌ−グ
ルタミン酸力；樹脂に結合する。次いで樹脂を日別し、
０．０１Ｍリン酸緩衝液ＰＨ７，５で充分洗浄した。
かくして得られた樹脂を０．１ Ｍ ） ’）スー塩酸
−１ｍＭＥＤＥＡ（ｐＨ８，ｓ ）緩衝液５０ｄに分散
し、２−メルカプトエタノール１．１７ｇを加え、室温
上窒素雰囲気中で１０時間ゆるやかに攪拌した。これで
末端がチオール基のポリ−Ｌ−グルタミン酸ｃ〜）が樹
脂から遊離する。
−１ｍＭＥＤＥＡ（ｐＨ８，ｓ ）緩衝液５０ｄに分散
し、２−メルカプトエタノール１．１７ｇを加え、室温
上窒素雰囲気中で１０時間ゆるやかに攪拌した。これで
末端がチオール基のポリ−Ｌ−グルタミン酸ｃ〜）が樹
脂から遊離する。
樹脂をｒ別し、０．０１Ｍトリス−頃酸−〇、 １ ｍ
ＭＥＤＴＡ （ｐＨ８，５）緩衝液テヨ＜洗浄し、次い
でＰ液を水冷下塩酸でｐＨ１，８とし、生じた末端にチ
オール基を有するポリ−Ｌ−グルタミン酸Ｃ〜）の沈澱
を遠心分離した。生成物の末端基量は参考例１−４）。
ＭＥＤＴＡ （ｐＨ８，５）緩衝液テヨ＜洗浄し、次い
でＰ液を水冷下塩酸でｐＨ１，８とし、生じた末端にチ
オール基を有するポリ−Ｌ−グルタミン酸Ｃ〜）の沈澱
を遠心分離した。生成物の末端基量は参考例１−４）。
１−５）の結果より１．９８４ ｎｍｏｌｅであった。
１−４）Ｎ−末端に活性ジスルフィド基を有する反応性
重合体Ｃ〜）の製造 １−３）で得られた末端にチオール基を有するポリ−Ｌ
−グルタミン酸の沈澱を、再び０．４Ｍリン酸ナトリウ
ム−１ｍＭＥＤＴＡ （ｐＨ７，ｓ）緩衝液１ ｍｌに
溶解し、得られた溶液を２−ピリジルジスルフィド（以
下２−ＰＤＳと省略する）２３ｒｎ９のエタ／ −ル（
４ｍｌ ）溶液を０．１Ｍリン酸ナトリウム−１ｍＭＥ
ＤＴＡ（ｐＨｓ、ｏ） １０ ｍ１ＶＣ加え−Ｃ得ら
レタ溶液ニ加え、室温下で３０分間反応させた後、（ポ
リ−Ｌ−グルタミン酸の末端が活性ジスルフィド基とな
る）反応液をセロファンチューブに入れ、０，０１Ｍリ
ン酸ナトリウム（ｐＨ７，ｓ ）緩衝液に対して６時間
、純水に対して１日透析した。回収液を減圧で３０ｍ１
Ｋ減少し、凍結乾ノ朶すると、末端に２−ピリジルジチ
オ基が導入されたポリ−Ｌ−グルタミン酸Ｃナトリウム
塩）（〜）の綿状固体３ｓ、４ｑが得られた（原料であ
る＋１１破りのＸ遺収率１５．６％）。末端基量ハ１−
５） ノ結果よりｌ、 ９８４ ｐｍｏｌｅであった。
重合体Ｃ〜）の製造 １−３）で得られた末端にチオール基を有するポリ−Ｌ
−グルタミン酸の沈澱を、再び０．４Ｍリン酸ナトリウ
ム−１ｍＭＥＤＴＡ （ｐＨ７，ｓ）緩衝液１ ｍｌに
溶解し、得られた溶液を２−ピリジルジスルフィド（以
下２−ＰＤＳと省略する）２３ｒｎ９のエタ／ −ル（
４ｍｌ ）溶液を０．１Ｍリン酸ナトリウム−１ｍＭＥ
ＤＴＡ（ｐＨｓ、ｏ） １０ ｍ１ＶＣ加え−Ｃ得ら
レタ溶液ニ加え、室温下で３０分間反応させた後、（ポ
リ−Ｌ−グルタミン酸の末端が活性ジスルフィド基とな
る）反応液をセロファンチューブに入れ、０，０１Ｍリ
ン酸ナトリウム（ｐＨ７，ｓ ）緩衝液に対して６時間
、純水に対して１日透析した。回収液を減圧で３０ｍ１
Ｋ減少し、凍結乾ノ朶すると、末端に２−ピリジルジチ
オ基が導入されたポリ−Ｌ−グルタミン酸Ｃナトリウム
塩）（〜）の綿状固体３ｓ、４ｑが得られた（原料であ
る＋１１破りのＸ遺収率１５．６％）。末端基量ハ１−
５） ノ結果よりｌ、 ９８４ ｐｍｏｌｅであった。
従って平均分子量は３５．４÷１゜９８４Ｘ１０’＝１
、７８ Ｘ １０’、平均ユニット数は１．７４ Ｘｓ
、 Ｏ’／１５１＝１１ ｓ個と計算されろ。
、７８ Ｘ １０’、平均ユニット数は１．７４ Ｘｓ
、 Ｏ’／１５１＝１１ ｓ個と計算されろ。
１−ｓ）（、ｊ）の重合体末端２−ピリジルジチオ基定
量 一定量のサンプルを精秤しく’１，８９５ｍ９）３．０
０ｍ−ｔの０．１ Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７
，２）に溶解し、ジチオスレイトールの小片を加え、遊
離した２−メルカプトピリジンに由来する吸収ｒ３４３
ｎｍ、分子吸光係数 ε＝ｇｏｇｏ）を測定した（Ａ＝
０、２ ｓ ６）。精秤されたサンプル中の末端基量は
０．１０６２μｍｏｌｅ 、従って、同サンプル中の末
端活性ンスルフィド含有ポ！Ｊ−Ｌ−グルタミン酸分子
の分子量は１７，８００．又同分子中のグルタミン酸（
ナトリウム塩）のユニツト数は、１ユニツトの質遺数が
１５１であることより、１１８と計算された。従って参
考例１−３）、！−４）で得られた末端チオール型及び
末端２−ピリジルジチ♂オ型重合体に含有される末端基
量は、 ３５．４ １．８９５Ｘ 、０．１０６２ ＝ １．９８４３ｍｏ
ｌ ｅである・実施例１ 側鎖にダウンマイシンを結合し、末端に反応性基を含有
する重合体の製造。
量 一定量のサンプルを精秤しく’１，８９５ｍ９）３．０
０ｍ−ｔの０．１ Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７
，２）に溶解し、ジチオスレイトールの小片を加え、遊
離した２−メルカプトピリジンに由来する吸収ｒ３４３
ｎｍ、分子吸光係数 ε＝ｇｏｇｏ）を測定した（Ａ＝
０、２ ｓ ６）。精秤されたサンプル中の末端基量は
０．１０６２μｍｏｌｅ 、従って、同サンプル中の末
端活性ンスルフィド含有ポ！Ｊ−Ｌ−グルタミン酸分子
の分子量は１７，８００．又同分子中のグルタミン酸（
ナトリウム塩）のユニツト数は、１ユニツトの質遺数が
１５１であることより、１１８と計算された。従って参
考例１−３）、！−４）で得られた末端チオール型及び
末端２−ピリジルジチ♂オ型重合体に含有される末端基
量は、 ３５．４ １．８９５Ｘ 、０．１０６２ ＝ １．９８４３ｍｏ
ｌ ｅである・実施例１ 側鎖にダウンマイシンを結合し、末端に反応性基を含有
する重合体の製造。
Ｃｏ Ｃｏ２Ｎａ
１
η
１−１）側鎖にダ・ウノマイシンを結合し、Ｎ −末端
に２−ピリジルジチオ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミ
ン酸（ナトリウム塩＞ （、りの製造。
に２−ピリジルジチオ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミ
ン酸（ナトリウム塩＞ （、りの製造。
参考例１−３）で得られたＮ−末端に２−ピリジルジチ
オ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリウム塩
）（分子１ｔｈ１７，８００）（：： ） ２５ｍｙ
（１，４０μｍｏｌｅ ）を５％食塩水６麻に溶解し、
これ（ｆ−ダウノマイシン塩酸塩１１．２ ｍ９と、１
−エチル−３−（ａ−ジメチルアミノプロピル）カルボ
ジイミド塩酸塩ｃ以下、ＥＤＣＩ−Ｈ’Ｃ／と省略する
）３８．１ ｍ９を加え、室温下にて一夜反応させた。
オ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリウム塩
）（分子１ｔｈ１７，８００）（：： ） ２５ｍｙ
（１，４０μｍｏｌｅ ）を５％食塩水６麻に溶解し、
これ（ｆ−ダウノマイシン塩酸塩１１．２ ｍ９と、１
−エチル−３−（ａ−ジメチルアミノプロピル）カルボ
ジイミド塩酸塩ｃ以下、ＥＤＣＩ−Ｈ’Ｃ／と省略する
）３８．１ ｍ９を加え、室温下にて一夜反応させた。
反応液をセロファン千ユープに入れ、水に対して４°で
充分透析して低分子物質を除去した。透析内液を減圧で
１ｏ、ｓｍに濃縮すると、目的物である末端に２−ピリ
ジルジオ基を含有し、側鎖にダウノマイシンを結合した
ポリ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリウム塩）Ｃ〜）の水溶
液が得られた。
充分透析して低分子物質を除去した。透析内液を減圧で
１ｏ、ｓｍに濃縮すると、目的物である末端に２−ピリ
ジルジオ基を含有し、側鎖にダウノマイシンを結合した
ポリ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリウム塩）Ｃ〜）の水溶
液が得られた。
生成物ば４９０ ｎｍにダウンマイシンに由来する吸収
極大を示したことより、側鎖にダウンマイシンを結合し
ていることが明らかとなった。４９０ ｒＨｌｌの吸光
度の測定より重合体に結合したダウンマイシンの麓は１
．１６Ｘ１０ ｍｏｌｅであった。又、ニー２）の結
果より、重合体圧含有される２−ピリジルジチオ基の量
は１．３６Ｘ １０ ｍｏｌ、ｅである。
極大を示したことより、側鎖にダウンマイシンを結合し
ていることが明らかとなった。４９０ ｒＨｌｌの吸光
度の測定より重合体に結合したダウンマイシンの麓は１
．１６Ｘ１０ ｍｏｌｅであった。又、ニー２）の結
果より、重合体圧含有される２−ピリジルジチオ基の量
は１．３６Ｘ １０ ｍｏｌ、ｅである。
従って重合体１分子に結合したダウノマイシン分子の数
は、１．１６Ｘ１０ ｍｏｌｅ／１．３６×１０ ’
ｍｏｌｅ ＝ ８．５３個と計算サレタ。
は、１．１６Ｘ１０ ｍｏｌｅ／１．３６×１０ ’
ｍｏｌｅ ＝ ８．５３個と計算サレタ。
１−２）ダウンマイシンを側鎖忙結合し、Ｎ −末端に
千オール基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリ
ウム塩）ｒ之）の製造。
千オール基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリ
ウム塩）ｒ之）の製造。
１−１）で得られた側鎖にダウノマイシンを結合し末端
に２−ピリジルジチオ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミ
ン酸（乏）の溶液１０．５Ｍに、Ｏ，Ｌ Ｍリン酸緩衝
１液（ｐＨ７，５）中１ｍＭジチオスレイトール溶液２
．０ｍｌを添加し、室温下に３０分間反応せしめた。
に２−ピリジルジチオ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミ
ン酸（乏）の溶液１０．５Ｍに、Ｏ，Ｌ Ｍリン酸緩衝
１液（ｐＨ７，５）中１ｍＭジチオスレイトール溶液２
．０ｍｌを添加し、室温下に３０分間反応せしめた。
遊離した２−メルカプトピリジンに由来する３ ４３
ｎｍにおける吸光度増加量を測定して求めた末端基量は
、１．３６Ｘ１０−６ｍｏｌｅであった。
ｎｍにおける吸光度増加量を測定して求めた末端基量は
、１．３６Ｘ１０−６ｍｏｌｅであった。
反応液を純水妊対し４°で充分透析することにより低分
子物質を除くと、側鎖にダウノマイシンを結合し、末端
がチオール基に変換したポリーＬ−グルタミン（ｅ（〜
）の水溶液が得られた。
子物質を除くと、側鎖にダウノマイシンを結合し、末端
がチオール基に変換したポリーＬ−グルタミン（ｅ（〜
）の水溶液が得られた。
１−３）ダウノマイシンを側鎖に結合し、Ｎ−末端に３
−カルボキシ−４−二トロフェニルジチオ基を含有する
ポリ−Ｌ−グルタミン酸（乏）の製造。
−カルボキシ−４−二トロフェニルジチオ基を含有する
ポリ−Ｌ−グルタミン酸（乏）の製造。
１−２）で得られた側鎖にダウンマイシンを結合し、末
：４にチオール基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（
之）（末端基量 ０．２７ＸＩ Ｏ’ ｍｏｌｅ 、グウノマイシン蛍２
．５×ｌＯ−６ｍｏｌｅ）の水溶液５ ｒｐＪに、０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，６）中１ｍＭの５．５′−
ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）溶液３．０麻を加え
た。室温下１５５′反応した後、反応液を４°で純水に
対して充分透析すると、目的物であるダウ、ノマイシン
を測鎖に結合し末端に３−カルボキシ−４−二トｂフェ
ニルジチオ基を含有する、ポリ−Ｌ−グルタミン酸（！
、）の水溶液１２Ｎが得られた。
：４にチオール基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（
之）（末端基量 ０．２７ＸＩ Ｏ’ ｍｏｌｅ 、グウノマイシン蛍２
．５×ｌＯ−６ｍｏｌｅ）の水溶液５ ｒｐＪに、０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，６）中１ｍＭの５．５′−
ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）溶液３．０麻を加え
た。室温下１５５′反応した後、反応液を４°で純水に
対して充分透析すると、目的物であるダウ、ノマイシン
を測鎖に結合し末端に３−カルボキシ−４−二トｂフェ
ニルジチオ基を含有する、ポリ−Ｌ−グルタミン酸（！
、）の水溶液１２Ｎが得られた。
水溶液の一部にジチオスレイトールを加えると、遊離し
た５−メルカプト−２−二トロ安息香酸にもとずき、４
１２ｎｍにおいて吸光度の増大が生じたことよりｃ〜）
の末端構造を確認した。
た５−メルカプト−２−二トロ安息香酸にもとずき、４
１２ｎｍにおいて吸光度の増大が生じたことよりｃ〜）
の末端構造を確認した。
実施例２
側鎖にマイトマイシンＣを結合し、末端に反応性基を含
有する重合体の製造。
有する重合体の製造。
ＣＯＣｏ２Ｎａ
Ｃｏ Ｃｏ２Ｎａ
も
Ｙ。
０
２−１）側鎖にマイトマイシンＣを結合し、Ｎ−末端に
２−ピリジルジチオ基を含有する重合体（！、）の裂造 Ｎ−末端に２−ピリジルジチオ基を含有するポリ−Ｌ−
グルタミン酸（ナトリウム塩）（発刊１ｉｔｓ、ｓｏｏ
） （〜） ２ ｏｖ、ｇ（ｘ、ｚ１２ｐｍｏｌｅ
）を５％食塩水５ｄに溶解し、これにマイトマイシンＣ
９，０９とＥＤＣＩ・（：ｌ ２５ηを加え、室温下に
１夜反応させた。反応液をセロファンチューブ中水に対
して４゛で充分透析して低分子物質を除き、目的物であ
る末端に２−ピリジルチオ基を含有し、側鎖にマイトマ
イシンＣを結合したポリーＬ−グルタミン醪（ナトリウ
ム塩）Ｃ〜）の水溶液８．５−を得た。実施例２−２）
の結果より、得られた重合体は末端基量で１．１μ、ｍ
ｏｌｅであり、９．８ ｐｍｏｌｅのマイトマイシンＣ
を結合していることが判明した。
２−ピリジルジチオ基を含有する重合体（！、）の裂造 Ｎ−末端に２−ピリジルジチオ基を含有するポリ−Ｌ−
グルタミン酸（ナトリウム塩）（発刊１ｉｔｓ、ｓｏｏ
） （〜） ２ ｏｖ、ｇ（ｘ、ｚ１２ｐｍｏｌｅ
）を５％食塩水５ｄに溶解し、これにマイトマイシンＣ
９，０９とＥＤＣＩ・（：ｌ ２５ηを加え、室温下に
１夜反応させた。反応液をセロファンチューブ中水に対
して４゛で充分透析して低分子物質を除き、目的物であ
る末端に２−ピリジルチオ基を含有し、側鎖にマイトマ
イシンＣを結合したポリーＬ−グルタミン醪（ナトリウ
ム塩）Ｃ〜）の水溶液８．５−を得た。実施例２−２）
の結果より、得られた重合体は末端基量で１．１μ、ｍ
ｏｌｅであり、９．８ ｐｍｏｌｅのマイトマイシンＣ
を結合していることが判明した。
生成物は３６０ ｎｍにマイトマイシンＣに由来する吸
収を示したことより、ポリ−Ｌ−グルタミン酸の側鎖に
マイトマイシンＣが結合していることが明らかになった
。
収を示したことより、ポリ−Ｌ−グルタミン酸の側鎖に
マイトマイシンＣが結合していることが明らかになった
。
３６０ ｎｕｎの吸光度の測定より、重合体は９．５ｘ
ｔｔ） ｍｏｌｅのマイトマイシンＣを結合している
ことが判明した。又、２−２）の結果より、重合体に含
有される２−ピリジルジチオ基の蟻は１．Ｉ Ｘ １０
−６ｍｏ１．６である。
ｔｔ） ｍｏｌｅのマイトマイシンＣを結合している
ことが判明した。又、２−２）の結果より、重合体に含
有される２−ピリジルジチオ基の蟻は１．Ｉ Ｘ １０
−６ｍｏ１．６である。
従って重合体１分子に結合したマイトマイシンＣの数は
、９，８Ｘ１０ ／１．ｌＸｌ０−６ヨ９．０個と計
算されたう ２−２） 側鎖にマイトマイシンＣを結合し、Ｎ−末
端にチオール基を含゛有するポリ＝Ｌ −グルタミン酸
（ナトリウム塩）（芝）の製実施例２−１）で得た、側
鎖にマイトマイシンＣを結合し、末端に２−ピリジルジ
チオ基を含有するポリーＬ−クルタミン酸（〜）の溶Ｅ
ｅ ８．５ ｍｌに、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，
６）中２０ｍＭ２−メルカプトエタノール溶液１．５コ
を添加し、室温下に３０分間反応せしめた。遊離した２
−メルカプトピリジンに由来する３ ４３ ｉｍにおけ
る吸光度増加量より、末端基量を求めると１．ｌ０Ｘ１
０ ｍｏｌｅであった。反応液を純水に対し４°で充
分透析して、低分子物質を除くことにより精製し、マイ
トマイシンＣを側鎖に結合し、末端Ｗチオール基を含有
するポリ−Ｌ−グルタミン酸（〜）の水溶液を得た。
、９，８Ｘ１０ ／１．ｌＸｌ０−６ヨ９．０個と計
算されたう ２−２） 側鎖にマイトマイシンＣを結合し、Ｎ−末
端にチオール基を含゛有するポリ＝Ｌ −グルタミン酸
（ナトリウム塩）（芝）の製実施例２−１）で得た、側
鎖にマイトマイシンＣを結合し、末端に２−ピリジルジ
チオ基を含有するポリーＬ−クルタミン酸（〜）の溶Ｅ
ｅ ８．５ ｍｌに、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，
６）中２０ｍＭ２−メルカプトエタノール溶液１．５コ
を添加し、室温下に３０分間反応せしめた。遊離した２
−メルカプトピリジンに由来する３ ４３ ｉｍにおけ
る吸光度増加量より、末端基量を求めると１．ｌ０Ｘ１
０ ｍｏｌｅであった。反応液を純水に対し４°で充
分透析して、低分子物質を除くことにより精製し、マイ
トマイシンＣを側鎖に結合し、末端Ｗチオール基を含有
するポリ−Ｌ−グルタミン酸（〜）の水溶液を得た。
２−３）側鎖にマイトマイシンＣを結合し、Ｎ−末端に
５−二トロー２−ピリジルジチオ基を含有するポリ−Ｌ
−グルタミン酸（ナトリウム塩）（〜）の製造。
５−二トロー２−ピリジルジチオ基を含有するポリ−Ｌ
−グルタミン酸（ナトリウム塩）（〜）の製造。
実施例２−２）で得られた、側鎖にマイトマイシンＣを
結合し、末端にチオールカニを含有するポリ−Ｌ−グル
タミン酸Ｃ〜）（末端基量０．１μｍｏｌｅ、マイトマ
イシンＣＭ。
結合し、末端にチオールカニを含有するポリ−Ｌ−グル
タミン酸Ｃ〜）（末端基量０．１μｍｏｌｅ、マイトマ
イシンＣＭ。
８、９ ｐｍｏｌｅ ）の水溶液２ｍｌに、２．２′−
ジチオビス（５−ニドルビリジン）の１．１Ｍリン酸緩
衝液（ｐｉ（７，５）中、ｔｏｍＭ俗液０．５−を加え
、室温下３０分間反応せしめた。反応液を４’ＣＫて純
水に対して光分透析し、目的物である側鎖にマイトマイ
シンＣを結合し、末端に５−二トロー２−ピリジルジチ
オ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリウム塩
）ｃ〜）の水溶液３．２ゴを得た。生成物の一部にジチ
オスレイトールを加えると、遊離した５−ニトロ−２−
メルカプトピリジンに由来する３ ８ ｉ５ｎｍにおけ
る吸光度の増大が生じたことより、Ｃ〜、）の末端構造
をＲ認した。
ジチオビス（５−ニドルビリジン）の１．１Ｍリン酸緩
衝液（ｐｉ（７，５）中、ｔｏｍＭ俗液０．５−を加え
、室温下３０分間反応せしめた。反応液を４’ＣＫて純
水に対して光分透析し、目的物である側鎖にマイトマイ
シンＣを結合し、末端に５−二トロー２−ピリジルジチ
オ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリウム塩
）ｃ〜）の水溶液３．２ゴを得た。生成物の一部にジチ
オスレイトールを加えると、遊離した５−ニトロ−２−
メルカプトピリジンに由来する３ ８ ｉ５ｎｍにおけ
る吸光度の増大が生じたことより、Ｃ〜、）の末端構造
をＲ認した。
都施例３
側鎖にメルフアランを結合し、末端に灰石性基を含有す
る重合体の一４４漬。
る重合体の一４４漬。
Ｃｏ、Ｎａ
１．１
Ｃｏ ’ Ｃｏ、Ｎａ
１
Ｙ。
１４ Ｌ；ｆ
ｌ。
ｌ。
３′−１）側鎖にメルフアランを結合し、Ｎ−末端に２
−ビリノルジチオ基な含有するＬ −グルタミン酸とＬ
−７ラニンの共重合体（ナトリウム塩）（〜）の製造 Ｎ−末端［２−ピリジルジチオ籠を含有する、Ｌ−グル
タミン酸とＬ−アラニンの共重合体（ナトリウム塩）（
格成当敗比３ ｏ−ａ ： ｔ’） （分子ｆ：ｉ １
３，９００ ） （〜）を３反の水に溶解し、４°にて
ＥＤＣＩφＨＣｌ１２．５〜を加え、２分！Ｍ１債拌し
たのち、ｐ−〔ビス（２−クロロエチル）アミン〕Ｌ−
フェニルアラニン（メルフアラン）１０ｍ２を３ｄＩＣ
溶解して得られ１こ水溶液を２１騎下し、反応液を４°
にて１２時間攪拌した。反応液をセｐ７アンチユ〜プに
入れ、水に対して４°で充分透析して低分子物質を除（
こと釦よって積装し、目的物である末端に２−ピリジル
ジチオ基を含有し、側鎖にメルク７ランを結したし一グ
ルタミン酸とＬ−アラニンの共重合体（ナトリウム塩）
（〜）の水溶液７，４ｄが得られた。
−ビリノルジチオ基な含有するＬ −グルタミン酸とＬ
−７ラニンの共重合体（ナトリウム塩）（〜）の製造 Ｎ−末端［２−ピリジルジチオ籠を含有する、Ｌ−グル
タミン酸とＬ−アラニンの共重合体（ナトリウム塩）（
格成当敗比３ ｏ−ａ ： ｔ’） （分子ｆ：ｉ １
３，９００ ） （〜）を３反の水に溶解し、４°にて
ＥＤＣＩφＨＣｌ１２．５〜を加え、２分！Ｍ１債拌し
たのち、ｐ−〔ビス（２−クロロエチル）アミン〕Ｌ−
フェニルアラニン（メルフアラン）１０ｍ２を３ｄＩＣ
溶解して得られ１こ水溶液を２１騎下し、反応液を４°
にて１２時間攪拌した。反応液をセｐ７アンチユ〜プに
入れ、水に対して４°で充分透析して低分子物質を除（
こと釦よって積装し、目的物である末端に２−ピリジル
ジチオ基を含有し、側鎖にメルク７ランを結したし一グ
ルタミン酸とＬ−アラニンの共重合体（ナトリウム塩）
（〜）の水溶液７，４ｄが得られた。
生成物は２５９ ｎｍと３０２ ｎｍにメルフアランに
由来する吸収極大を示したことより、側鎖にメルフアラ
ンを結合して℃・ることか明らかとなった。２５９ ｎ
ｍの吸光度の測定より、重合体に結合したメルフアラン
量は、４．９２Ｘ１０ ｍｏｌｅであった。又３−２
）の結果より、重合体に含有される２−ピリジルジオ基
の量は、０．７．ＯＸ １’０ ’ｍｏｌｅである。従
って、重合体１分子に結合したメルフアラン分子の数は
、４，９２Ｘ１０ １０．７０Ｘ１０ −７．０と計算
された。
由来する吸収極大を示したことより、側鎖にメルフアラ
ンを結合して℃・ることか明らかとなった。２５９ ｎ
ｍの吸光度の測定より、重合体に結合したメルフアラン
量は、４．９２Ｘ１０ ｍｏｌｅであった。又３−２
）の結果より、重合体に含有される２−ピリジルジオ基
の量は、０．７．ＯＸ １’０ ’ｍｏｌｅである。従
って、重合体１分子に結合したメルフアラン分子の数は
、４，９２Ｘ１０ １０．７０Ｘ１０ −７．０と計算
された。
３−２）側鎖にメルフ７ランを結合し、Ｎ−末端にチオ
ール基を含有するＬ−グルタミン酸とＬ−７ラニンの共
重合体（ナトリウム塩）Ｃ〜）の製造。
ール基を含有するＬ−グルタミン酸とＬ−７ラニンの共
重合体（ナトリウム塩）Ｃ〜）の製造。
実施例３−１）で得られた、ψ１ｊ鎖にメルフアランを
結合し、Ｎ−末端に２−ピリジルジチオ基を含有するＬ
−グルタミン酸とＬ−７ラニンの共重合体（太トリウム
塩） （Ｑ、）の溶液７．４ ｍｌに、０．’ ｌ Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ７，５）中１ｍＭジチオスレイトー
ル溶液２．０ｄを添加し、室温下に３０分間反応せしめ
た。遊離した２−メルカプトピリジンに由来する３ ４
３ ｎｍにおける吸光度の増加量より末端基量な定量し
た結果、０，７０Ｘ１０ ｍｏｌｅであった。
結合し、Ｎ−末端に２−ピリジルジチオ基を含有するＬ
−グルタミン酸とＬ−７ラニンの共重合体（太トリウム
塩） （Ｑ、）の溶液７．４ ｍｌに、０．’ ｌ Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ７，５）中１ｍＭジチオスレイトー
ル溶液２．０ｄを添加し、室温下に３０分間反応せしめ
た。遊離した２−メルカプトピリジンに由来する３ ４
３ ｎｍにおける吸光度の増加量より末端基量な定量し
た結果、０，７０Ｘ１０ ｍｏｌｅであった。
反応液を純水に対し４°で透析することにより生成物を
精製し、目的物である側鎖にメルフ７ランを結合し、Ｎ
−末端に千オール基を含有する共重合体（ｆト！Ｉウム
塩）（す）の水溶液を得た。
精製し、目的物である側鎖にメルフ７ランを結合し、Ｎ
−末端に千オール基を含有する共重合体（ｆト！Ｉウム
塩）（す）の水溶液を得た。
３−３）メルクアランを側鎖に結合し、Ｎ−末端に３−
カルボキシ−４−二トｐフェニルジチオ基を含有するＬ
−グルタミン酸とＬ−アラニンの共重合体（ナトリウム
塩）（セ）の製造。
カルボキシ−４−二トｐフェニルジチオ基を含有するＬ
−グルタミン酸とＬ−アラニンの共重合体（ナトリウム
塩）（セ）の製造。
３−２）で得られた、側鎖にメルフ７ランを結合し、末
端にチオール基を含有するＬ −グルタミン酸とＬ−７
ラニンの共重合体（ナトリウム塩）（２）（末端基量０
．７１ｍｏ ｌ ｅ ’、メルフアランｉ４．９２ μ
ｍｏｌｅ ）１１．７ｍＡ！に、０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐａ７． ｓ）中５ ｍ Ｍ ５．５’−ジチオビス
（２−ニド−安息香酸）溶液２ Ｆ、、／を加え、室温
下に１５分間反応させた。反応液を４°で純水に対して
充分透析すると、目的物であるメルフアランを側鎖に結
合し、末端に３−カルボキシ−４−：）ロフェニルジチ
オ基を含有スルＬ−グルタミン酸とＬ−アラニンの共電
合体（ナトリウム塩）（〜）の水溶液１６．３ｍｌが得
られた。生成物の一部にジチオスレイトールを反応せし
めたところ、遊離ある５−メルカプト−２−二トロ安息
香駿に由来する４ １２ ｎｍにおける吸光度の増大が
あったことから、末端基の構造を確認した。
端にチオール基を含有するＬ −グルタミン酸とＬ−７
ラニンの共重合体（ナトリウム塩）（２）（末端基量０
．７１ｍｏ ｌ ｅ ’、メルフアランｉ４．９２ μ
ｍｏｌｅ ）１１．７ｍＡ！に、０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐａ７． ｓ）中５ ｍ Ｍ ５．５’−ジチオビス
（２−ニド−安息香酸）溶液２ Ｆ、、／を加え、室温
下に１５分間反応させた。反応液を４°で純水に対して
充分透析すると、目的物であるメルフアランを側鎖に結
合し、末端に３−カルボキシ−４−：）ロフェニルジチ
オ基を含有スルＬ−グルタミン酸とＬ−アラニンの共電
合体（ナトリウム塩）（〜）の水溶液１６．３ｍｌが得
られた。生成物の一部にジチオスレイトールを反応せし
めたところ、遊離ある５−メルカプト−２−二トロ安息
香駿に由来する４ １２ ｎｍにおける吸光度の増大が
あったことから、末端基の構造を確認した。
実施例４
側鎖にアラ−Ｃを結合し、末端に反応性基を含有する重
合体の製造。
合体の製造。
４
υ
４−１）側鎖にアラ−Ｃ誘導体を精合し、Ｎ末端に４−
ニトロ−３−カルボキシフェニルジチオ基を含有するポ
リ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリウム塩）（〜）の製造。
ニトロ−３−カルボキシフェニルジチオ基を含有するポ
リ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリウム塩）（〜）の製造。
Ｎ−末端に４−ニドｑ −３−カルボキシフェニルジチ
オ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリ＋４７
ム＠）（分子量１３．１００ ）（〜） １０ｍ９を、
！’１．ＩＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，５） ３ ｔｒｒ
ｌに溶解し、これに５′−（２−アミノエチルホスホリ
ル） −１−。
オ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリ＋４７
ム＠）（分子量１３．１００ ）（〜） １０ｍ９を、
！’１．ＩＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，５） ３ ｔｒｒ
ｌに溶解し、これに５′−（２−アミノエチルホスホリ
ル） −１−。
（β−Ｄ−アラビノフラノシル）シトシン（アラ−Ｃ誘
導体） ４７１１号と、ＥＤＣＩ嶺ＨＣｇ５０〜を加え
て溶解し、１２時間撹拌して反応せしめた。叉応液をセ
「１フアン千ユープに入れ、′／Ｉ（Ｋ対して４°で光
分透析して、低分子物質を除くことによって情調すると
目的物質である側鎖にアラ−Ｃ誘導体を結合し、末端に
４−ニトロ−３−カルボキシフェニルジチオ基を含有し
たボ！Ｊ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリウム塩）（〜）の
水溶液４．７ｍｌが得られた。
導体） ４７１１号と、ＥＤＣＩ嶺ＨＣｇ５０〜を加え
て溶解し、１２時間撹拌して反応せしめた。叉応液をセ
「１フアン千ユープに入れ、′／Ｉ（Ｋ対して４°で光
分透析して、低分子物質を除くことによって情調すると
目的物質である側鎖にアラ−Ｃ誘導体を結合し、末端に
４−ニトロ−３−カルボキシフェニルジチオ基を含有し
たボ！Ｊ−Ｌ−グルタミン酸（ナトリウム塩）（〜）の
水溶液４．７ｍｌが得られた。
生成物は２７２ ｎｍにアラ−Ｃに由来する吸収極大を
示したことより、側鎖−アラーＣ誘導体を結合している
ことを確認した。
示したことより、側鎖−アラーＣ誘導体を結合している
ことを確認した。
２７２ ｎｍの吸光度の測定より、結合したアラ−Ｃ誘
導体の蛍は１ ｓ、 ９Ｘ１０ ｍｏｌｅ であっ
た。又、４−２）の結果より、重合体に含有される４−
ニトロ−３−カルボキシフェニルジチオ基ノｆｆｌは、
０．６８ＸｌＯ’ ｍｏｌｅである。従って、重合体１
分子に結合したアラ−Ｃ誘導体の分子の数は１５．９Ｘ
１０’１０．６８Ｘ１０−６＝ ２３．４個と計算され
た。
導体の蛍は１ ｓ、 ９Ｘ１０ ｍｏｌｅ であっ
た。又、４−２）の結果より、重合体に含有される４−
ニトロ−３−カルボキシフェニルジチオ基ノｆｆｌは、
０．６８ＸｌＯ’ ｍｏｌｅである。従って、重合体１
分子に結合したアラ−Ｃ誘導体の分子の数は１５．９Ｘ
１０’１０．６８Ｘ１０−６＝ ２３．４個と計算され
た。
４−２）側鎖にアラ−Ｃ誘導体を結合し、Ｎ−末端にチ
オール基を含有するポＩ）−Ｌ−グルタミン酸（ナトリ
ウム塩）（ｉりの製造。
オール基を含有するポＩ）−Ｌ−グルタミン酸（ナトリ
ウム塩）（ｉりの製造。
４−１）で得られた、側鎖にアラ−Ｃ誘導体を結合し、
Ｎ−末端に４−ニトロ−３−カルボキシフェニルジチオ
基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（乏）の溶液４．
７ｄに（Ｌ Ｉ Ｍ リン酸緩衝液中１ｍＭジチオスレ
イトール溶液１． Ｏｎｒｌを添加し、室温下に３０分
間反応せしめた。遊離した５−メルカプト−２−ニトロ
安息香酸に由来１−る４１２ｎｍにおける吸光度の増大
量を測定することにより、末端基はを求めた結果、０．
６８ Ｘ１ｏ ｍｏｌｅであった。反応液を純水に対
して、４°で充分透析することにより、低分子物質を除
き、側鎖にアラ−Ｃ誘導体を結合し、末端がチオール基
に変換したポリ−Ｌ−グルタミン酸ｃ〜）の水溶液を得
た。
Ｎ−末端に４−ニトロ−３−カルボキシフェニルジチオ
基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸（乏）の溶液４．
７ｄに（Ｌ Ｉ Ｍ リン酸緩衝液中１ｍＭジチオスレ
イトール溶液１． Ｏｎｒｌを添加し、室温下に３０分
間反応せしめた。遊離した５−メルカプト−２−ニトロ
安息香酸に由来１−る４１２ｎｍにおける吸光度の増大
量を測定することにより、末端基はを求めた結果、０．
６８ Ｘ１ｏ ｍｏｌｅであった。反応液を純水に対
して、４°で充分透析することにより、低分子物質を除
き、側鎖にアラ−Ｃ誘導体を結合し、末端がチオール基
に変換したポリ−Ｌ−グルタミン酸ｃ〜）の水溶液を得
た。
４−３）アラ−Ｃ誘導体を側鎖に結合し、Ｎ−末端に２
−ピリジルジチオ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸
（〜）の製造。
−ピリジルジチオ基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン酸
（〜）の製造。
４−２）で得られた、側鎖にアラ−Ｃ誘導体を結合し、
Ｎ−末端にチオール基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン
酸（末端基酸ｏ４４μｍｏｌｅ、アラ−Ｃ蓋３．２ μ
＋ｎｏｌｃ ）の水溶液２ ａｔに、０．１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７，２）中０、５ ｍ Ｍ ２．２’−ジチ
オジピリジ７２．Ｏｔｒｒｌを加え、室温下３０分間反
応せしめた。反応液を４°で純水に対して充分透析する
と、目的物であるアラ−Ｃ誘導体を側鎖に結合し、末端
に２−ピリジルジチオ基な含有するポリ−Ｌ−グルタミ
ン酸（〜）の水溶液５．４Ｎが得られた。末媚基の構造
は、生成物の一部に過剰のジチオスンイトールを反応せ
しめた時、遊離する２−ノル叉ブトピリジンに由来する
、３４３ ｒｒｍ Ｋおける吸収の増大が生ずることで
ｇ認した。
Ｎ−末端にチオール基を含有するポリ−Ｌ−グルタミン
酸（末端基酸ｏ４４μｍｏｌｅ、アラ−Ｃ蓋３．２ μ
＋ｎｏｌｃ ）の水溶液２ ａｔに、０．１Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７，２）中０、５ ｍ Ｍ ２．２’−ジチ
オジピリジ７２．Ｏｔｒｒｌを加え、室温下３０分間反
応せしめた。反応液を４°で純水に対して充分透析する
と、目的物であるアラ−Ｃ誘導体を側鎖に結合し、末端
に２−ピリジルジチオ基な含有するポリ−Ｌ−グルタミ
ン酸（〜）の水溶液５．４Ｎが得られた。末媚基の構造
は、生成物の一部に過剰のジチオスンイトールを反応せ
しめた時、遊離する２−ノル叉ブトピリジンに由来する
、３４３ ｒｒｍ Ｋおける吸収の増大が生ずることで
ｇ認した。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 Ｌ 下記式ＣＩ） Ｉ Ｃ００Ｚ ・・・・・・・・・ＣＩ） で表わされる細胞毒性物質を結合した反応性重合体。 ２ 式（Ｉ）において、Ｗが炭素ａｔ〜４のフルキンン
基である、特許請求の範囲第１項記載の細胞毒性物質を
結合した反応性重合体。 ３、 式［０においてＸが水素原子又は２−ピリジルチ
オ基、４−ピリジルチオ基、３−カルボキシ−４−二ト
ｐフェニルチオ基、４−カルボキシ−２−ピリジルチオ
Ｍ、Ｎ−オキシー２−ピリジルチオ基、２−ニトロフェ
ニルチオ基、４−二）、 Ｐ−２−ヒリジルチオ基。 ２−ベンゾチアゾイルチオ基、２−ペンゾイミタソイル
チオ基及びＮ−フェニルアミノ−Ｎ′−フェニルイミノ
メチルチオ基から成る群から選ばれた活性ジスルフィド
結合は形成しうる基である特許請求の範囲第１項又は第
２項記載の細胞毒性物質を結合した反応性重合体。 ４ 下ημ式（ＩＩ） （ＣＨＪ ｍ Ｒｒ ｏｏｚ で表わさオする反応性重合体に分子中にアミ７基又はイ
ミノ基を含む細胞毒性物質を反応させることを特徴とす
る、下記式［、Ｔ−１１・・・・・・・・・ＣＩ−］〕 匡［Ｉ−１１において、Ｓ 、 Ｗ 、Ｒｒ 、Ｙ −
ｒｒ：、 ； １で表わされる細胞毒性物質を結合した
反応性重合体の製造法。 氏 下記式ＣＣｌ−１ ）（ＣＬ） （ＣＨｔ）ｍ ＲｒＣｏ Ｃ
００Ｚ ・・・・・・・・・Ｃｌ−１） で表わされる細胞毒性物質を結合した重合体のジスルフ
ィド結合を還元的に切断することを特徴とする、下記式
（Ｉ−２） ・・・・・・・・・ Ｃｌ−２） で表わされる細胞毒性物質を結合した反応性重合体の製
造法。 ６ 下記式Ｃｌ−２］ ・・・・・・・・・（■２） で表わされる細胞毒性物質を結合した重合体と活性ジス
ルフィド化合物を反応させることを特徴とする、下記式
Ｃｌ−１〕 ・・・・・・・・・Ｃｌ−１） で表わされる細胞毒性物質を結合した反応性重合体の製
造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58032955A JPS59159827A (ja) | 1983-03-02 | 1983-03-02 | 細胞毒性物質を結合した反応性重合体の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58032955A JPS59159827A (ja) | 1983-03-02 | 1983-03-02 | 細胞毒性物質を結合した反応性重合体の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59159827A true JPS59159827A (ja) | 1984-09-10 |
| JPH0149298B2 JPH0149298B2 (ja) | 1989-10-24 |
Family
ID=12373351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58032955A Granted JPS59159827A (ja) | 1983-03-02 | 1983-03-02 | 細胞毒性物質を結合した反応性重合体の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59159827A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60172935A (ja) * | 1984-02-16 | 1985-09-06 | Green Cross Corp:The | 制癌作用物質複合体の製造方法 |
| JPH0344399A (ja) * | 1989-07-07 | 1991-02-26 | Abbott Lab | イオン捕捉試薬およびそれを用いた結合イムノアッセイ法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5731930A (en) * | 1980-08-04 | 1982-02-20 | Teijin Ltd | Production of cytotoxic substance-bound reactive polymer |
-
1983
- 1983-03-02 JP JP58032955A patent/JPS59159827A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5731930A (en) * | 1980-08-04 | 1982-02-20 | Teijin Ltd | Production of cytotoxic substance-bound reactive polymer |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60172935A (ja) * | 1984-02-16 | 1985-09-06 | Green Cross Corp:The | 制癌作用物質複合体の製造方法 |
| JPH0344399A (ja) * | 1989-07-07 | 1991-02-26 | Abbott Lab | イオン捕捉試薬およびそれを用いた結合イムノアッセイ法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0149298B2 (ja) | 1989-10-24 |
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