JPS59138959A

JPS59138959A - 診断用モノクロナル抗体製剤

Info

Publication number: JPS59138959A
Application number: JP59008372A
Authority: JP
Inventors: カール・アーネ・ルントブラツド
Original assignee: MONOKAABU AB
Current assignee: MONOKAABU AB
Priority date: 1983-01-21
Filing date: 1984-01-20
Publication date: 1984-08-09
Anticipated expiration: 2009-07-20
Also published as: EP0115476A2; US4618486A; DE3485289D1; JPH0654316B2; SE434680B; SE8300320L; EP0115476B1; EP0115476A3; ATE69891T1; SE8300320D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は例えばヒト赤血球抗原などに対して活性を示す
モノクロナル抗体を含む水性製剤に係る。

型通シのＡＢＯ血液型判定において従来のポリクロナル
抗体にモノクロナル抗体が取って代る可能性はこれまで
にも研究されてきたが（１）、近年この種の抗体を産出
する試みが幾つか報告された（２−６）。これらの試み
ではヒト結腸癌からの組織培養細胞（２）、全赤血球（
４，６）並びに天然（３）及び合成（５）血液型活性グ
リコプロティンを免疫原として釉々の免疫法が使用され
ている。これらの報告によれば得られた抗体には臨床的
使用に十分適したものもあった（７）が、多くの場合は
タイターが低く、従って剥いサブグループとの反応が王
道１当であった。

本発明の目的はヒト赤血球抗原に対して活性を示すモノ
クロナル抗体を含む水性製剤を提供することにあるが、
この製剤は臨床的使用において血液型判定用試薬として
用いると従来のポリクロナル抗体よシ大きい効果を示す
。

種々の研究及び実験を重ねた結果、この水性抗体製剤中
に約５０ｍモル／１以上のｔ／一度で可溶塩を存在させ
ると、該製剤使用時によシ高いタイターとより顕著な反
応とが得られることが判明した。このようにすれは本発
明のモノクロナル抗体試薬は手動式血液型判定でも自動
式血液型判定でも極めて有効に使用される。

製剤中の可溶塩湿度は約２５０ｍモル／ｌ乃至約６５０
ｍモル／ｌであるのが好ましく、特に約３５０乃至約５
５０ｍモル／ｌが好ましい。この可溶塩としてはアルカ
リ金属又はアルカリ土類金属の塩を使用するのが好まし
い。特に好ましいのはアルカリ金属であシ、中でも塩化
物の如きハロダン化物を対イオンとして有しているもの
が望ましい。塩化ナトリウムと塩化カリウムとはこのよ
うな可溶塩として使用するのに最も適しており、塩化す
）　ＩＪウムは特に好せしい。他にも塩化カリウム、塩
化カルシウム、ヨウ化カリウム、塩化マグネシウム、硫
酸マグネシウム、等が適切な橋として挙げられる。

本発明は特に、モノクロナル抗体を血液型Ａ。

Ｂ又はＡ、Ｈの抗原に対抗させる血液型判定に使用し得
る。該製剤は好まし、くけ水溶液の形態で使用される。

本発明の製剤はモノクロナル抗体と可溶塩との他に当業
界で従来よシ使用されている別の成分、特に培地に由来
するもの、を含み得る。但し本発明はこのような従来成
分に関する細かい変化とは関係なく臨床的に用いられる
全てのモノクロナル抗体含有水性製剤に適用される。

本明細書中の括弧内の数字は添付の参考文献リストの番
号を示す。

以下実験に基づく特定実施例を挙けて本発明をよシ詳細
に説明する。但し本発明はこれら実施例には限定されず
特許請求の範囲によってのみ規定される。

実験では血液型Ａ４．Ａ、Ｂ又はＡ２Ｂのヒトから得た
全赤血球（Ｗｈｏｌｅ　ｒｅｄ　ｃｅｌｌｓ）、赤血球
細胞膜、又は可溶性血液型物質を免疫原として使用し、
且つ多くの場合は高投与量ブースタープロトコル（ｈｉ
ｇｈ　ｄｏｓｅ　ｂｏｏｓｔｅｒ　ｐｒｏｔｏｃｏｌ）
（８）を採用した。多数のマウス−マウスハイブリドー
マが抗−人。

抗−Ｂ及び抗−Ａ、Ｂ特異性をもつ抗体を分泌したが、
これら抗体の一部は手動式血液型判定でも自動式血液型
判定でもヒトのホリクロナルテスト血清よシ秀れている
ことが判明した。

実　　験マウスＧＩ　ＢｏｍｈｏｌｔｇａａｒｃＬＲｙ、デンマークか
ら通交Ｂａ　ｌｂ／　ｃＡＢｏｍ系雌マウスを入手した
。最初に抗原を与えた（プライムした）時これらマウス
は生後５乃至９週間であった。標準的ペレット食で飼育
し任意に水を与えた。

抗　　原Ｗ、Ｍ、　Ｗａｔｋｌｎｓ及びＥ、Ａ、　Ｋａｂａｔ両
博士よシ寄贈された血液型Ａ４．Ａ２及びＢのヒトの精
製した卵巣嚢胞液グリコゾロティンを使用した。血液型
Ａ　、＋　Ａ　２及びＡ２Ｂの正常な血液ドナーから得
た赤血球を、サリーン（ｓａｌｉｎｅ）中の１０％（Ｖ
／Ｖ　）懸濁液か又はサリーン中に）躍′ｐＩＡ（１０
％Ｗ／りされた膜（９）として使用した。

性血液型物質を抗原として使用した時は通常最終高投与
量ブースタスケジュール（ｆｉｎａｌ　ｈｌｇｈ−ｄｏ
ｓｅ　ｂｏｏｓｔｅｒ　５ｃｈｅｄｕｌｅ）（８）に従
った。赤怖球−の抗原注射を用いて実施した。

ハイブリドーマ技術標準的手順（１０−１２）に従い細胞融合とハイブリド
ーマセルラインのクローニング慢゛培養とを行った。Ｓ
エローマ（骨髄肺）セルライン５Ｐ２１０　、　Ｐ　３
−　ＮＳＩ　Ａｇ−４又はＰ　３　Ｘ　６３　Ａｇ　−
８−６５３、１を使用した。Ｐｒ１ａｔａｎｅ■（Ａｌ
ｄｒｉｃｈ。

Ｂｅｅｒｓｅ＋ベルギー）で処理したマウスの体内で腹
水液を産出した。

抗体の選択及び試薬の製造成育するハイブリドーマからの培地をｆΦ々のＡＢＯ式
ｔｆｎ液塑の赤血球と共にマイクロタイタープレー）　
（Ｌｊｎｂｒｏ＋Ｈａｍｄｅｎ、コネチヵット、　ＵＳ
Ａ）に入れて赤血球凝集抗体テストにかけ、且つ血液型
活性グリコプロティンで被機テれたマイクロタイターシ
レー）　（Ｍｉｃｒｏｅ１１ａａ■ｉｍｒｎｕｌｏｎ＋
Ｄｙｎａｔｅｃｈ　ＧｍｂＨ，Ｐ１ａｃｈｉｎｇｅｎ＋
西ドイツ）を用いてＥＬＩＳＡ　（１３でテストした。

腹水液と増量培養（ｅｘｐａｎｄｅｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ
　）からの組織培養基とを遠心分離にかけて細胞組織片
を除去した。組織培養上清をチャーコールカラムに通し
て脱色した。

塩化ナトリウム（後述の結果も参照のこと）とアジ化ナ
トリウム（０，１％）とを加えた。炎光分析によジナト
リウムを測定し、凝固点降下にょシ浸透圧を求めた。溶
液を濾過によって滅菌処理し、４℃で保存した。

米国インディアナ州のＭｌ　１ｅｓ＋Ｅ１ｋｈａｒｔよ
り入手したウサギの抗マウスＩｇＧ１．ＩｇＧ２ａ、Ｉ
ｇＧ２ｂ及び１ｇＭ抗血清を用い二重拡散法０４）によ
って抗体アイソタイプを決定した。

凝集テスト希釈してない培地又は０．９％ＮａＣ１に希釈した腹水
液と、室温でインキ−ベートした５％赤血球懸濁液とを
用いて、タイル上で２０分間又は試験管内で１時間手動
式にテストを行った。十分な明かシを背景（明視野）に
反応を読取シ、陽性反応採取した赤血球試料をテストし
た。滴定検査ではサリーンによる二重段階希釈（ｔｗｏ
ｆｏｌｄ　ｓｅｒ量ａｌｄＩ　１ｕｔｌｏｎ）を行った
。インキュベーションＦ試験管内で１時間行う技術を使
用した。親和性テストをスライド上とタイル上とで、夫
々同種血清中の４０〜５０チ赤血球懸濁液とサリーン中
の５％赤血球懸γ蜀液とを用いて実施した。凝集反応の
強さを３０．６０．９０及び１２０秒の時点で記録した
。特異性テストを大パネル（３５人のドナー）の広範囲
の表現型の細胞を用いて行った。試１候管内でインキュ
ベートする技術には標準的ツーステップ・（パインープ
ロメロン法とサリーンテスト法とを用い、４．．２２及
び３７℃でインキュベートした。反応を顕微鏡で読取っ
た。比較のために、市販されている２０種のヒト由来の
ポリクロナルテスト血清（以後ポリクロナル血清と称す
る）も分析した。サリーン中に希釈した抗体とブロメリ
ン処理したＩＷｌ胞とを用い、標準的方法でＧｒｏｕｐ
ａｍａｔｌｃ３６０システムによシ自動的にテストを行
ったαυ。

自動式Ａ型判定にはＨｅ１ｉｘ　ｐｏｍａｔｉａ抽出物
（Ｂｉｏｔｅｓｔ、フランクフルト、ドイツ）を使用し
た。

自動式テストによる評価の他に、全ての反応に関して視
覚チェックも行った。

した後に行い、ｓ／ｌｉは赤血球又は赤血球膜を抗原と
して用いて行った。殆んどの融合操作でＡＢＯ特異抗体
を産出する数種のノ・イブリドーマが生じたが、これら
抗体の大部分は凝集作用を全く又は殆んど示さなかった
。そのような場合には特異性をＥＬＩＳＡで測定した。

これらの結果は何らかの機会に公表することにする。Ａ
又はＢ物質による免疫処理が夫々抗−Ａ又は抗−Ｂ抗体
を発生せしめたにすぎないのに対し、赤血球免疫処理で
は抗−Ａ、Ｂ抗体と、抗−Ｎ抗体と、これまで知られて
いない特異性をもつ数種の抗体との発生もみられた。

実験中驚くべき発見として、塩濃度が上昇すると４＋反
応を得るだめの時間によって測定した時の抗体親和性が
増大した。これは可溶塩として塩化ナトリウムを用いた
場合に観察された現象であるが、ＫＣｔ、ＣａＣｌ２．
に工、ＭｇＣ２２，ＭｇＳＯ４等他の塩を用いても同様
の効果が見られた。しかし乍らこれら他の塩はいずれも
塩化ナトリウムよシ良いわけではないため、塩化す）　
ＩＪウムを添加剤として選択した。

添付図面には、完全な赤血球凝集反応を得るに心安な時
間を塩化ナトリウム濃度に対してプロットしたグラフが
示されている。このグラフは種々の塩濃度における抗−
８６，１１の反応を示すものである。上清は最初に０．
１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ＰＨ７，５）に刻して透
析した０塩を添加しない場合最適ＰＨは６，５乃至７．
５でるることが判明したが、塩を添加するとこの最適Ｐ
Ｈの範囲が広くなり、完全な反応はナトリウムイオン濃
度が７００乃至１１００ｍｏｓｍの浸透圧を与える３５
０乃至５５０ｍモル／ｌの時に最も短時間で達成された
。

更に検査を行うべく合計７種のハイプリドーマを選択し
た。そのうち３種は抗−Ａを産生じ、２種は抗−Ｂ１残
シの２種は抗−Ａ、Ｂを産生した。

これらは７種ともＩｇＭ抗体であシ、その特異性をＥＬ
ＩＳＡで測定した。これらハイプリドーマセルライン中
１つ（５，１，２，抗−Ａ、Ｂ産生）は感染によシ損失
されたためいずれのテストにも含まれていない。この検
査では組織培養の上清と、これらハイプリドーマによシ
産生された腹水液とを双方に示されている。

ナル試薬がポリクロナル血清に比較し得る強い反用いた
凝集テストの結果を示している。このタイプの赤血球に
関してはモノクロナル抗−Ａ血清も抗−Ａ、Ｂもテスト
した号？リクロナル血清より明らかに秀れていた。モノ
クロナル抗−ＢとＩリクロナル抗−Ｂとに関する反応は
双方共強さが同じている。２つのモノクロナル抗−Ａ試
薬はいずれも２２℃で２０分間インキュベートした後２
つのＡＸ試料に対し陽性反応を生じた。試験管内で１時
間インキュベートするとポリクロナル血清もＡｘ細胞に
対しくト）乃至１＋の反応を生じたが、同−乗件下のモ
ノクロナル血清は１＋乃至２＋の反応を生じた。モノク
ロナル抗−人試薬は双方共ＡｅＡ試料の一方に対しては
弱い反応を生じたが、他方とは反応しなかった。ポリク
ロナル試薬はいずれもこれらの細胞とは反応しなかった
。Ｂ、試料（Ｒａｃｅ　ａｎｄ　Ｓａｎｇｅｒα時によ
る分類）と反応する唯一の抗−Ｂ試薬は４℃で１時間イ
ンキュベートして遠心分離にかけた（５００ｇ、６０秒
）後のモノクロナル試薬６．１．１であった。モノクロ
ナル抗−Ａ、ＢはＡ、Ｂ試料とＡｘ以外のＡサブグルー
プに対してポリクロナル血清より強い反応を示しいる。

各試料パッチは先ず通常の試薬を用いて分析し、次にモ
ノクロナル抗血清を用いて再テストした。弱い反応に起
因する除外（ｒｅｆｕｓａｌ）数は全ての試薬に関して
同程度であった。

テストした試薬は抗−Ａ、Ｂ５．Ｌ２を除いて全て完全
に特異的でめった。抗−Ａ、Ｂ５．１．２だけは酵素で
処理した０型細胞に対し弱い反応（（ト）乃至１＋）を
示したが、他のモノクロナル試薬はいずれもこれらの細
胞に対して陰性であった。

４０乃至５０％赤血球懸濁液を用いた親和性テストでは
抗体２．３．２が特にＡ２Ｂ赤血球に対してはポリクロ
ナル抗−Ａよシ強い親和性を示し、且つ抗−Ｂ抗体６．
１．１が特にＡ、Ｂ赤血球に対してはポリクロナル抗−
Ｂよシ強い親和性を示した。モノクロナル抗体１．４．
１及び３．１．１はポリクロナル血清よシ緩慢に反応し
たが、４＋反応が得られるまでの時間はＥｕｒｏｐｅａ
ｎ　Ａｇｒｅｅｍｅｎｔαηで決定され用いてタイル上
でテストすると親和性は一般にモノクロナル血清の方が
ポリクロナル血清よシ高かった０各特異性（Ａ；Ｂ；Ａ、Ｂ）をもつモノクロナように、
モノクロナル試薬にはネズミの細胞と反応したものが１
つもなかったのに対し、ポリクロナル抗−Ｂ及び抗−Ａ
、Ｂは弱い陽性反応を示した。

幾つかの免疫及び融合プロトコルと多数の潜在疫ルート
と、３つの異なるミエローマセルラインと、３種の異な
る抗原（表■）との使用が最適融合スケジュールの規定
を妨げている。しかし乍ら、成る程度の観察はなし得る
。免疫スケジュール３を用いる４つの融合操作では比較
的少ない陽性ノイブリドーマが得られたが、いずれのハ
イツｌ−マも赤血球凝集活性（ＡＢＯ式）に欠けていた
。

しかし乍らこのスケジュールを使用する４つの融合操作
中３つではＮ５ＩＩエローマ細胞が使用され、その場合
は６５３又はＳＰ２／Ｑ細胞のいず−れか一方よシ少な
い収率でハイツリドーマが得られたことに留意されたい
。

血液型物質を用いる免疫スヶジー−ル１も赤血球を用い
るスケジュール２も多数の陽性ハイブリドーマを生成せ
しめ、６５３細胞も５Ｐ２１０細胞も同じように効果的
であった。しかし乍ら赤血球凝集陽性ハイブリドーマの
数はこれら２つの細胞タイプ（／（よってかなシ異なっ
ていた。得られた８つの「有用」クローン中５つは６５
３細胞との融合の結果化じたものであり、２つは５Ｐ２
１０細胞との融合から、残シの１っはＮＳＩ＠胞から生
じたものである。最後の１つはこれらの細胞との５つの
融合操作の結果得られた２つの赤血球凝集陽性ハイブリ
ドーマの１つである。

Ｍｉ織培養上清と各ハイブリドーマよシ得た腹水液とを
調べた。腹水液抗体の利点はこの液体中の該抗体濃度が
高いため高い希釈度で使用できることにある。この希釈
度はヒトの胎児に表出される決定因子及び他のグリコプ
ロティン０・と反応することが判明したマウス生来の抗
体を希釈する効果も有している。この実験では腹水液か
らの抗体の濃度が低すぎて所望の希釈度は実現できなか
ったが、これは恐らくハイブリドーマ細胞αつによシ形
成されｆｃ１ｇＭ分子のｌｎ　ｖｌｖ６分解に起因して
いると思われる。組絨培養の上清は型通シの血液型判定
に使用するに足る十分な効力を有していたため大部分の
赤血球−＝　ｍｌ集テストで好んで使用されたＯ血液型物質で免疫処理したマウスを使用する各融合操作
から得られた赤血球凝集抗体の特異性は予想通り特定血
液型に対して特異的なものであった。但し融合１，４か
ら有られた未知の特異性をもつ１ａ類の抗体と、血液型
Ａ２物質を用いる融合２．３から得られた抗−Ａ（Ａ、
）とは例外である。

後者はＡ２物質中のＡ、領域、１２＋１ち正常の密度よ
シ高い密度のＡ決定因子を有するグリコプロティン中の
小領域の存在にょシ説明し得る。

赤血球で免疫するとより複雑な赤血球凝集抗体合成図が
得られた。Ａ２．Ａ２Ｂ又はＡ、＋Ａ２赤血球を用いる
どの融合操作も抗−Ａの生成には到らな抗−Ａ、Ｂと、
未知の特異性をもつ２つの抗体と知でｉあるが抗−Ａで
はない抗体との形成も注目に値した。

マウス体内での抗−Ｂ抗体の産生は興味深い現象である
。伺故なら、大部分のマウス系はＢ！Ｌｌｂ／ｃ系も含
めて赤血球上に血液型Ｂに似た抗原を有していると考え
られており、従って抗−Ｂを産生ずとでテストした結果
、ポリクロナル抗−Ｂ及び抗−Ａ、Ｂに対しては弱い反
応を示すが、抗−人とは反応しないことが判明した＠対
応するモノクロナル試薬はいずれもネズミ細胞とは反応
しなかった。これはこれら抗体がマウス体内で産生され
得る週１山を説明するものである。マウスの「Ｂに似た
」抗原は従って、モノクロナル試薬には明らかに存在し
ないポリクロナル抗−Ｂ血清中の他の抗体により認識さ
れる。

以下余白モノクロナル抗体に塩を加えると凝集反応の速度が増大
し、この速度は比較的広範囲に亘って一定の値を維持す
るが一定の限界を越えると親和性を劇的に減少させる。

等張すリーン（０，１５Ｍ）は通常血液型判定の目的で
使用されるが、イオン強度を０．１５Ｍから０．０３Ｍ
まで低下させると？リクロナルＩｇＧ抗体と抗原との間
の反応速度が増大することは良く知られている（２０．
２１＞。

これに反し、精製されたポリクロナルＩｇＧ抗−ＡとＡ
赤血球との間の反応は低イオン強度の媒質中で増大され
ることはない（２２）。イオン強度の差異に応じ媒質中
で変化する会合率のメカニズムは知られておらず、抗原
又は抗体のいずれかが作用され得ると思われる。本発明
は如何なる理論にも拘束されるものではないが、恐らく
は壌の添加によって抗原結合部位への結合を促進する立
体配座変化が生じるためであろうと考えることはできる
。

抗体はＡ１．　Ａ２　＋　ＡＩＢ　＋　Ｂ及び０細胞と
Ａ及びＢコード細胞とでテストすると全てポリクロナル
試−Ａ、抗体の特性を有する。Ａ２Ｂ細胞を使用すると
一方抗−Ｂ試薬はいずれも完全な反応を生じた。

応に於いてもモノクロナル抗−Ａ及び抗−Ｂ試薬の方が
多少優れていることが判明した。抗−人。

Ｂ血清の反応は多少可変的であった。

ポリクロナル抗−人試薬がＡ２Ｂ細胞に対し弱すぎると
いう理由から通常自動式血液型判定に使用されるＨｅ１
ｉｘ抽出物と同じ位優れた効力を示した（１５）。特異
性テストで酵素処理した０型赤血球とモノクロナル抗−
Ａ、Ｂ試薬との間に生じるりｆｃ１１０００以上の試料
の自動式血液型判定では見られなかった。

４０乃至５０％赤血球懸濁液を使用するとモノクロナル
試薬中の成るものはポリクロナル試薬より低い親和性を
示したが、この問題はモノクロナル抗体の上清を５乃至
１０倍濃縮することで容易に解決し得た。但しこれは通
常の用途では不要である（７）。

これまでのところ前記モノクロナル試薬は４℃で最低１
年又は室温で２ケ月以上保存した場合にタイターの損失
を全く示していない。

本発明は以上説明してきた操作法、抗体、抗原又は手１
１に限定されるものではなく、当業者には明らかなよう
に種々の変形及び等価物が可能であシ、従って等価物の
教理の使用も含め特許請求の範囲全項によりてのみ限定
されると理解されたい。

表　　■ １，４　　ｔｔ　　　１　　６５３１．５　　　　　　／ｌ　　　　　　　　Ｉ　　　　　
　　５Ｐ２１０１．５　　ＩＩ　　　１　　６５３５、Ｉ　　　　Ａ２赤血球　　　　　２６５３６・１．
　　　、Ａ２Ｂ赤匍球　　　　２６５３本　表Ｉ参照＊＊絹織培養で消失融　　合　結　果９２　　　　　　　　２　　　　　　抗−Ａ（Ａ、）　
　　　　　１．１．１１　　　　未知７３　　　　　　　　１　　　　　　抗−Ａ（ＡＩ）−
＊幸７０２　　　　未知１９２１　　　　　未知３８４　　　　　　　　１　　　　　　抗−Ｎ　　　　
　　　　５．３．１３８７　　　　　　　　　１０　　
　　　　　杭−Ｂ　　　　　　　　６．１．１１　　　
　　　抗−Ａ、Ｂ　　　　　　　６・１・５１２　　　
　　未知１７５　　　　　　−＊＊００表■　　Ｂａｔｂ／Ｃマウス赤血球との凝集反応抗−Ａ１．２．１　　　　　　　− ポリクロナルＩ−− 抗−Ｂ３．１．１　　　　　− ポリクロナルＩ　　ｉ　＊＋　　１＊　　　ｉ　＊　　
　ｉ　＊　　　１　＊抗−Ａ、Ｂ６．１．５　　　　　　　　− ポリクロナルｒ　　　２　＊　　　２　＊　　　２　＊
　　　２　＊　　　２　＊＊混合領域の出現参考文献１、　アンスティー、ディー・ジェ−（Ａｎｓｔｅｅ　
＊Ｄ、Ｊ、）：ヒト血液型アロ抗原の特性決定。臨床医
学におけるモノクロナル抗体。（Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ
ｚａｔｉｏｎｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｂｌｏｏｄ　ｇｒｏｕ
ｐ　ａｌｌｏａｎｔｉｇｅｎａ。

Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　　ｉ
ｎ　　ａｌｉｎｌｃａｌｍｅｄｉａｉｎｅ　０）　（？
クマイケル、ニーＯジェー（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ　＋　
Ａ、Ｊ、）；フェーパー、ジェー・ダブル、　（Ｆａｂ
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Ｅ、）；ジャービス。

ジェー（Ｊａｒｖｉｓ、　Ｊ、）：ミルスタインヨシ−
（Ｍｉｌａｔｅｉｎ、　Ｃ，）；グーンホロ、ジェー（
Ｄａｒｎｂｏｒｏｕｇｈ＋　Ｊ、）：　ハイブリッドミ
エローマからのモノクロナル抗−Ａ；血液型判定試薬と
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ｆｒｏｍ　ａｈｙｂｒｉｄ−ｒｎｙｅｌｏｍａ　：　　
Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　　ａｓ　　ａ　　ｂｌｏｏｄｇ
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ａ　ｎｅｗ　ｂｌｏｏｄ−ｔｙｐｌｎｇ　ｒｅａｇｅｎ
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　Ｃｈ、）；　ガーション。

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！　　’エフ（Ｂａｃｋ、　Ｊ、Ｆ、）：リパイロン、
ジｘ　　（Ｒｅ　Ｙ　１　ｒ　Ｏｎ　ｒＪ、）；サーモ
ン、シーエッチ（Ｓａｌｍｏｎ、　ＣＨ，）　：ヒト血
液型Ａに対するモノクロナル抗体の熱力学的及び免疫学
的特性（ＴｈｅｒｍｏｄＬｙｎａｍｉｃ　ａｎｄｌｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｉａａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　
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　レイサーラーマン、ニー・エフ（Ｒａ１ｓｕｒ　Ｒａ
ｈｍａｎ＋Ａ、Ｆ、）：炭水化物に対して特異的なハイ
ンリノドーマ；血液型判定用モノクロナル試薬の製造、
選択及び特徴付けを行うための合成ヒト血液型抗原（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ　５ｐｅｃｉｆｉｃ　ｆｏｒ　
ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ＋：５ｙｎｔｈｅｔｉｃ　
ｈｕｍａｎ　ｂｌｏｏｄ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｔｉｇｅｎ
ｓｆｏｒ　ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ＋　５ｅｌｅ
ｃｔｉｏｎ、　ａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏ
ｎ　ｏｆ　ｒｎｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ｔｙｐｉｎｇｒｅ
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ツプ、ダブル（Ｋｎａｐｐ、Ｗ、）：　　ヴエッターラ
インーエム（Ｖｅｔｔｅｒｌａｉｎ、　Ｍ、　）　；　
　メイヤー、ダブル・アール（Ｍａｙｒ、Ｗ、Ｒ，）ニ
スバイザー、ビー（５ｐｅｉａｅｒ、Ｐ、）　：　　ヒ
ト血液型Ａ赤血球に対するハイプリドーマ分泌モノクロ
ナル抗体（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ　　ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ　ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｔｏ　Ｈｕｒ
ｎａｎ　ｇｒｏｕｐ　Ａ　ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ）
。

イミュノパイオロジー（Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ）
　１５６　：２２６−２２７（１９７９年）。

７、　ヴオーク、デ４−（Ｖｏａｋ　、　Ｄ　−）　：
　レノックス、イー（Ｌｅｎｎｏｘ、　Ｅ、）；サック
ス、ニス（５ａｃｋｓ、Ｓ、）：ミルスタインウシ−（
Ｍｉｌｓｔｅｉｎ。

Ｃ０）；　ダーンボロ、ジェ−（Ｄａｒｎｂｏｒｏｕｇ
ｂ、　Ｊ、　）：モロクロナル抗−Ａ及び抗−Ｂ：費用
効果試薬としての発達（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔ
ｉ−Ａ　ａｎｄ　ａｎｔｉ−３３：Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅ
ｎｔ　ａｓ　ｃｏｓｔ−ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｒｅａｇ
ｅｎｔｓ）。

メト、ラブ、サイｘ７ス（Ｍｅｄ、Ｌａｂ、Ｓｃｉ、）
　３旦：１０９−１２２（１９８２年）。

８、　スターリ、シー（５ｔａｈｌｉ、Ｃ，）：　スタ
イヒリン、ティー　（５ｔａｅｈｅｌｉｎ、Ｔ、）；　
　ミッジアーノ。

ゲイ（Ｍｉｇｇｉａｎｏ、Ｖ、）ニジ−ミツト、ジェー
（Ｓｃｈｍｉｄｔ、　Ｊ、）　：　ヘリング、ビー（Ｈ
ａｒｉｎｇ　。

Ｐ、）：　高頻度の抗原特異的・・イブリドーマ；免疫
パラメータへの依存及び牌臓細胞分析による予測（Ｈｉ
ｇｈ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｇｅｎ
−ｓｐｅｃｉｆｉｃｈｙｂｒｉｄｏｍａａ：　Ｄｅｐｅ
ｎｄｅｎｃｅ　　ｏｎ　　ｌｒｎｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ
ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　　ａｎｄ　　ｐｒｅｄｉｃｔｉ
ｏｎ　　ｂｙ　　５ｐｌｅｅｎｃｅｌｌ　ａｎａｌｙｓ
ｉｓ　）、ジェー、イミュノロ、メソ。

（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔｈ、）３２　：　２９７
−３０４（１９８０年）。

９、　ドッジ、ジェー・テ４−　（Ｄｏｄｇｅ、　Ｊ、
Ｔ、）；ミツチェルウシー（ＭＩｔｃｈｅｌｌ＋Ｃ，）
：ハナハン。

ディー・ジｚ　−（Ｈａｎａｈａｎ、　Ｄ、Ｊ、）：　
　ヒト赤血球のヘモグロビンフリーゴーストの製造及び
化学的特性（Ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ
　ｃｈｅｍｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　
ｏｆ　ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ−ｆｒｅｅｇｈｏｓｔｓ　
ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｇ　）、ア
ーク。

バイオケミ、バイオフィシ、　（Ａｒｃｈ、　１３ｉｏ
ｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙａ、）　　１旦利：１１９−１３０（１９
６３年）。

１０、ノウインスキー、アール・シー（Ｎｏｗｉｎｓｋ
ｉ　。

Ｒ，Ｃ，）：　０ストロム、エム、イー（Ｌｏｓｔｒｏ
ｍ。

Ｍ、Ｅ、）：タム、エム・アール（Ｔａｍ、Ｍ、Ｒ，）
；ストーン、エム・アール（５ｔｏｎｅ　、　Ｍ、Ｒ−
）　；　　バーネット、ダブル・エム（Ｂｕｒｎｅ　ｔ
　ｔｅ　、　Ｗ、Ｍ、　）　：イーコトロビックネズミ
科動物白血病のｐ１５（６）プロティンに対するモノク
ロナル抗体を産生ずるノ・イブリッドセルラインの単離
（Ｔｈｅ　１ｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆｈｙｂｒｉｄ　ｃ
ｅｌｌ　１ｉｎｅｓ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｍｏｎｏｃ
ｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｔ
ｈｅ　ｐ１５（Ｅ）　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆｅｃｏｔｒ
ｏｐｉｃ　ｍｕｒｉｎｅ　ｌｅｕｋｅｍｉａ）、ヴアイ
ｏｏジー（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ）　９３　：　１１１−１
２６（１９７９年）。

１１、ケネット、アール・エッチ（Ｋｅｎｎｅｔｔ　＋
Ｒ，）Ｔ、）：モノクロナル抗体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａ
ｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　）　（ケネット、アー／ｌ／
　・ｘ　、テ（Ｋｅｎｎｅｔｔ、　Ｒ，Ｈ，：マｙカー
ン、ティー・ジェー（ＭｃＫｅａｒｎ、　Ｔ、Ｊ、）：
　　ベクトル、ケー・ビー（ｎｅｃｈｔｏｔ、に、ｎ）
ｍ）ｆリーナムプレス（ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ　）−
ニー−ヨーク（Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　）　１９８０年、３
６５−３６７ページ。

１２、ファゼカスドセントグロス、ニス（Ｆａｚｅｋａ
ａ　ｄｅ　５ｔ−Ｇｒｏｔｈ＋Ｓ−）：シャイブツガ−
。

テ４−（Ｓｃｈｅｉｄｅｇｇｅｒ、Ｄ、）；　モノクロ
ナル抗体の産生：戦略と戦術（Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　
ｏｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　
：　　Ｓｔｒａｔｅｇｙ　　ａｎｄｔａｃｔｉｃｓ）、
　　ジェー、イミュノロ・メン、（Ｊ。

ＩｍｍｕｎｏｌＪ’１ｅｔｈ、　）　３５　：　１−２
１　（１９８０年）。

１３、イングウォール、イー（Ｅｎｇｗａｌｌ、Ｅ、）
　：パールマン、ビー（ｐｅｒ１ｍａｎ＋　Ｐ、）：　
　酵素結合形免疫吸着剤ア、セー、エリサ■、酵素で標
識された抗免疫グロブリン抗原で被覆された試験管によ
る特異抗体の定量（Ｅｎｚｙｍｅ−１ｉｎｋｅｄｉｍｍ
ｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ、　ＥＬＩＳＡ　Ｉ
［１，Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆ　５ｐｅｃｉｆｉ
ｃ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　　ｂｙ　ｅｎｚｙｍｅｌａ
ｂｅｌｅｄａｎｔｉ−ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　
ａｎｔｉｇｅｎ−ｃｏａｔｅｄｔｕｂｅｓ）、　　イミ
ーノロジー誌（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ　、　）１０９：
１２９−１３５（１９７２年）。

１４、アウチターロニー、オー（０ｕｃｈｔｅｒｌｏｎ
ｙ＋０、）：免疫学的分析のためのグル内拡散法■（Ｄ
ｉｆｆｕｓｉｏｎ−１ｎ−ｇｅｌ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆ
ｏｒｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　
ｌ　）、プロブレ０ア中フリー（Ｐｒｇｒ、Ａｌｌｅｒｇｙ　）５　：　１−７
８　（１９５８年）。

１５、メセッター、エル（Ｍｅｓｓｅｔｅｒｙ　Ｌ、）
；　Ｏ−＋ビー（Ｌ’ＯＷＩ　Ｂ　、）　’グルーパフ
チック３６０Ｓと別個のミニコンピユータとを用いる病
人及び血液ドナーの自動式血液型判定法（Ａｕｔｏｍ’
ａｔｅｄ　ｂｌｏｏｄｇｒｏｕｐｌｎｇｏｆ　ｐａｔｌ
ｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ｄｏｎｏｒａｕｓｉｎ
ｇ　Ｇｒｏｕｐａｒｎａｔｌｃ　３６０Ｓａｎｄ　ａ　
ｓｅｐａｒａｔｅｍｊｎｉｃｏｍｐｕｔｏｒル　ヴオッ
クスサング（Ｖｏｘ　Ｓａｎｇ、）ま３：１１６−１２
３（１９７７年）。

１６、　　レース、アール・アー／ｌ／　（Ｒａｃｅ　
＋　Ｒ，Ｒ−）　：サンガー、アール（Ｓａｎｇｅｒ＋
　Ｒ，）：ヒトの血液型（Ｂｌｏｏｄ　Ｇｒｏｕｐｓ　
Ｉｎ　Ｍａｎ）、　　第５版（ブラックウェル、オック
スフォード（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ　、０ｘｆｏｒｄ）１
９６８年）、２３ページ。

１７、　　血液型判定試薬の交換に関する欧州協定（Ｅ
ｕｒｏｐｅａｎ　Ａｇｒｅｅｍｅｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　
ｅｘｃｈａｎｇｅｓｏｆ　ｂｌｏｏｄ−ｇｒｏｕｐｉｎ
ｇ　ｒｅａｇｅｎｔｓ）、　欧州条約シリーズ（Ｅｕｒ
ｏｐｅａｎ　Ｔｒｅａｔｙ　５ｅｒｉｅｓ　）Ａ３９（
Ｅ　−０ッｉ’？会議（Ｃｏｕｎｃｉｌ　ｏｆ　Ｅｕｒ
ｏｐｅ）　、ストラスプルグ（Ｓｔｒａａｂｏｕｒｇ）
　＋　１９６２年）。

１８、ゴオイ、エッチ・シー（Ｇｏｏｉ　、　Ｈ−Ｃ，
）　：フェイジ、ティー（Ｆｅ１ｚｉ、　Ｔ、）ニ　ハ
イブリドーマ産生物の汚染物質としての天然抗体（Ｎａ
ｔｕｒａｌａｎｔｉｂｏｄｌｅｓ　ａｓ　ｃｏｎｔａｍ
ｉｎａｎｔａ　ｏｆ　ｈｙｂｒｉｄｏｍａｐｒｏｄｕｃ
ｔｓ）　、　　バイオケミ・バイオフィシ・レス・コム
、　（Ｂｉｏｅｈｅｍ、　Ｂｌｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、
　Ｃｏｍｍ、　）１０６：５３９−５４５（１９８２年
）。

１９、　　レノックス、　ｘ　ス（Ｌｅｎｎｏｘ、　ｓ
、）　：パーソナルコミュニケーション（Ｐｅｒｓｏｎ
ａｌｅｏｍｍｕｎｉｃａｔｌｏｎ　）　。

２０、　　ヒユーズ・ジョンズ、エフ・シー（Ｈｕｇｈ
ｅｓ−Ｊｏｎｅａ　、　Ｎ、Ｃ，）　：　　ポーリー、
エム・ジｘ　　（Ｐｏｌｌｅｙ＋Ｍ、Ｊ−）：テルフォ
ード、アール（Ｔｅ１ｆｏｒｄ、Ｒ，）；　　ガードナ
ー、ビー（Ｇａｒｄｎｅｒ　。

Ｂ、）；　フライ／シーミツト、ジー（Ｋｌｅｉｎｓｃ
ｈｍｉｄｔ。

Ｇ、）：抗グロブリンテストによる血液型抗体検出の最
適条件（Ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｌｏｎｓ　ｆｏ
ｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｂｌｏｏｄ　ｇｒｏｕｐ　ａｎ
ｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｂｙ　ｔｈｅａｎｔｉｇｌｏｂｕｌ
ｉｎ　ｔｅｓｔ）、　　ヴオックスサング（ＶｏｘＳａ
ａｇ、）９：３８５−３９５（１９６４年）。

２１、エリオツド、エム（Ｅｌ目ｏｔ、Ｍ、）；ボッサ
ム−イー（Ｂｏｓｓｏｒｒ＋、　Ｅ−）　；　　デュビ
ュイ、エム。

イー（Ｄｕｐｕｙ、　Ｍ、Ｅ、　）　：　　マスールデ
ィ、ニス・ビー　（Ｍａ＠ｏｕｒｅｄｉａ＋　Ｓ、Ｐ−
）　：　赤血球同種抗体の血清学的性質に対するイオン
力の影＠’　（Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆ　ｔｏｎｉｃ　
ｓｔｒｅｎｇｔｈ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓａｒｏｌｏｇｉｃ
ｂｅｈａｖｉｏｕｒ　ｏｆ　ｒｅｄ　ｃｅｌｌ　１ｓｏ
ａｎｔｉｂｏｄｉｅａ　）。

グオックスサング（ＶＯＸ　Ｓａｎｇ、　）　　９　：
　３９６−４１４（１９６４年）。

２２、　　ムーア、エッチ・シー（Ｍｏｏｒｓ、Ｈ，Ｃ
，）　：サイブス、ビー・アール（５ｉｐｅｓ、　Ｂ、
Ｒ，）　：　抗グロブリンテストと特定の関係をもつ抗
体とシとみへのイオン力の効果（Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ
ｓ　ｏｆ　Ｉｏｎｌｃｓｔｒｅｎｇｔｈ　ｏｎ　ａｎｔ
ｉｂｏｄｙ　ｕｐｔａｋｅ　ｗｉｔｈｓｐｅｃｉａｌ　
ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｇｌｏｂ
ｕｌｉｎｔｅｓｔ）。「補体活性化の性質と意義」に関
するオルトセカンドインターナショナルシンポジウム（
０ｒｔｈｏ　５ｅｃｏｎｄ　ｉｎｔｅｒｎａｔｌｓｙｍ
ｐ、ｏｎ　−Ｔｈｅｎａｔｕｒｅ　ａｎｃｌ　５１ｇｎ
１ｆｉｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｃｔ
ｉｖａｔｉｏｎ　’　）、　　ラリタン、エフ・ジェー
（Ｒａｒｉｔａｎ、　Ｎ、Ｊ−）　１９７６年。

【図面の簡単な説明】

添付図面は完全な赤血球凝集反応を得るに必要な時間（
分）と塩化ナトリウム濃度との関係を示すグラフである
。ｔｌ・、願人　　　　　　モノ号−ブ　アー　へ゛−代
浬人弁理士川用　口　　義　雄代理人弁廂士今　　村　　　元

Claims

【特許請求の範囲】

（１）細胞粘合抗原、特にヒト赤血球抗原に対し活性な
モノクロナル抗体と、約２００ｍモに／１す、上の＃度
の可溶塩とを含んでいる水性製剤の血液型判定試薬とし
ての使用。
（２）前記の濃度が約２５０ｍモル／ｌ乃至約６５０ｍ
モル／１３の範囲内にある特許請求の範囲第１項に記載
の使用。
（３）前記の湿度が約３５０ｍモル／ｌ乃至約５５０ｍ
モル／ｌの範囲内にある特許請求の範囲第２項に記載の
使用。
（４）前記可溶塩がアルカリ金属又はアルカリ土類金属
の塩より選択されている特許請求の範囲第１項に記載の
使用。
（５）前記の塩がアルカリ金属、好ましくはハロゲン化
物対イオンをもつアルカリ金属よシ避択されている特許
請求の範囲第４項に記載の使用。
（６）前記の塩が塩化ナトリウム又は塩化カリウムであ
る特許請求の範囲第５項に記載の使用。
（７）モノクロナル抗体を血液型Ａ、Ｂ又はＡ。Ｂ抗原に対抗させる特許請求の範囲第１項に記載の使用
。
（８）前記製剤が水溶液の形態を有している特許請求の
範囲第１狛に記載の使用。
（９）前記製剤が血液型判定試薬として使用される水ｉ
液の形態を有しておシ、且つ前記可溶塩が塩化ナトリウ
ムである特許請求の範囲第８項に記載の使用。