JPS59120097A - ７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸の製造法 - Google Patents
７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸の製造法Info
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- JPS59120097A JPS59120097A JP22748682A JP22748682A JPS59120097A JP S59120097 A JPS59120097 A JP S59120097A JP 22748682 A JP22748682 A JP 22748682A JP 22748682 A JP22748682 A JP 22748682A JP S59120097 A JPS59120097 A JP S59120097A
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- keto
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はケノデオキシコール酸（正しくは３α、７α−
ジヒドロキシ−５β−コランＭ）（ＣＤＣ）から利胆剤
ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣ）の合成原料として有
用な製造中間体である７−ケドー ３ ｏニーヒドロキ
シ−５β−フラン酸（以下、本明細書において７−ケト
コール酸又は７−ケト体と略称することがある）を微生
物を用いて製造する方法に関する。
ジヒドロキシ−５β−コランＭ）（ＣＤＣ）から利胆剤
ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣ）の合成原料として有
用な製造中間体である７−ケドー ３ ｏニーヒドロキ
シ−５β−フラン酸（以下、本明細書において７−ケト
コール酸又は７−ケト体と略称することがある）を微生
物を用いて製造する方法に関する。
従来、ケノデオキシコール酸を原料としてＵＤＣを合成
する方法として、ケノデオキシコール酸の７位のα−ヒ
ドロキシル基をβ−ヒドロキシル基とするために、ケノ
デオキシコール酸を選択的に酸化して７−ケト体とした
後水素化する方法などが知られている。しかしながら、
これらの方法は当然の事乍ら各反応段階において反応性
や選択性の問題があり、収率や得られる製品の純度など
の点で必ずしも満足出来るものではなかった。
する方法として、ケノデオキシコール酸の７位のα−ヒ
ドロキシル基をβ−ヒドロキシル基とするために、ケノ
デオキシコール酸を選択的に酸化して７−ケト体とした
後水素化する方法などが知られている。しかしながら、
これらの方法は当然の事乍ら各反応段階において反応性
や選択性の問題があり、収率や得られる製品の純度など
の点で必ずしも満足出来るものではなかった。
本発明者等はかかる現状に鑑み、ケノデオキシコール酸
からその７−ケト体を微生物を用いて製造する方法の可
能性について鋭意研究を進めた結果、シュードモナス属
に属する微生物が７一ケト体生産能を有することを見出
し本発明をするに至った。
からその７−ケト体を微生物を用いて製造する方法の可
能性について鋭意研究を進めた結果、シュードモナス属
に属する微生物が７一ケト体生産能を有することを見出
し本発明をするに至った。
即ち、本発明に従えば、シュウトモナス属に属する７−
ケドー３α−ヒドロキシコラン酸生産能を有する微生物
をケノデオキシコール酸を含む栄養培地で培養して培養
物中に７−ケドー３α−ヒドロキシコラン酸を生成せし
め、これを採取することから成る７−ケドー３α−ヒド
ロキシコラン酸の製造法が提供される。
ケドー３α−ヒドロキシコラン酸生産能を有する微生物
をケノデオキシコール酸を含む栄養培地で培養して培養
物中に７−ケドー３α−ヒドロキシコラン酸を生成せし
め、これを採取することから成る７−ケドー３α−ヒド
ロキシコラン酸の製造法が提供される。
本発明者等は神奈用県綾瀬市内の土壌よりケノデオキシ
コール酸を含む培地で７−ケト体を生産する能力を有す
る菌を分離することに成功し、この菌株をシュウトモナ
ス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ） Ｓ Ｄ −１０２と
命名し、昭和５７年１２月１７日工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託（微工研菌寄第６８４２号）した。
コール酸を含む培地で７−ケト体を生産する能力を有す
る菌を分離することに成功し、この菌株をシュウトモナ
ス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ） Ｓ Ｄ −１０２と
命名し、昭和５７年１２月１７日工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託（微工研菌寄第６８４２号）した。
土壌中よりの菌の分離は次の方法によった。
土壌を１％のケノデオキシコール酸ナトリウムを含む肉
汁液体培地に少量懸濁し、３５°Ｃ１４８時間集積培養
を行ない、得られた培養液の１白金耳量を１％のケノデ
オキシコール酸ナトリウムを含む肉汁寒天平板培地に画
線培養し、菌株を純粋分離した。これらの菌株を、各々
１％のケノデオキシコール酸ナトリウムを含む肉汁液体
培地で８〜７２時間培養し、その培養液中の７−ケト体
の定量を行ない、７−ケト体の変換能の高い菌株を得た
。
汁液体培地に少量懸濁し、３５°Ｃ１４８時間集積培養
を行ない、得られた培養液の１白金耳量を１％のケノデ
オキシコール酸ナトリウムを含む肉汁寒天平板培地に画
線培養し、菌株を純粋分離した。これらの菌株を、各々
１％のケノデオキシコール酸ナトリウムを含む肉汁液体
培地で８〜７２時間培養し、その培養液中の７−ケト体
の定量を行ない、７−ケト体の変換能の高い菌株を得た
。
この菌の菌学的性質は以下の通りであり、これらの試験
及び分類方法ばバージエイズ・マニュアル・オブ・ディ
ターミネイティブ・ハタテリオロジー第７版及び第８版
に準拠し、既知の菌株の菌学的性質との対比からシュウ
トモナス属に属する菌株であると同定した。更にこの菌
の菌学的性質を既知の菌株の中で最も近似するシュウト
モナス・ストソツエリ （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ５
ｔｕｔｚｅｒｉ） Ｉ ＡＭ１２０９７の菌学的性質
と比較すると次表の通りである。この表に示した菌学的
性質に基づき、シュウトモナス５Ｄ−１０２の菌株は、
その形態、ダラム染色、培養所見及び生理学的性質など
から、バージエイズ・マニュアル・オブ・ディターミネ
イティブ・バタテリオロジー第７版及び第８版に基づき
、シュウトモナス・ス１〜ソツェリに近縁の菌株である
と同定された。しかしながら、シュウトモナス・ストソ
ツェリＩＡＭ１２０９７とシュウトモナス５Ｄ−１０２
とは、コール酸の資化性、デンプンの加水分解性、ＯＦ
テスト並びに糖類の酸化性の点で相違するので新菌株で
あると断定した。
及び分類方法ばバージエイズ・マニュアル・オブ・ディ
ターミネイティブ・ハタテリオロジー第７版及び第８版
に準拠し、既知の菌株の菌学的性質との対比からシュウ
トモナス属に属する菌株であると同定した。更にこの菌
の菌学的性質を既知の菌株の中で最も近似するシュウト
モナス・ストソツエリ （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ５
ｔｕｔｚｅｒｉ） Ｉ ＡＭ１２０９７の菌学的性質
と比較すると次表の通りである。この表に示した菌学的
性質に基づき、シュウトモナス５Ｄ−１０２の菌株は、
その形態、ダラム染色、培養所見及び生理学的性質など
から、バージエイズ・マニュアル・オブ・ディターミネ
イティブ・バタテリオロジー第７版及び第８版に基づき
、シュウトモナス・ス１〜ソツェリに近縁の菌株である
と同定された。しかしながら、シュウトモナス・ストソ
ツェリＩＡＭ１２０９７とシュウトモナス５Ｄ−１０２
とは、コール酸の資化性、デンプンの加水分解性、ＯＦ
テスト並びに糖類の酸化性の点で相違するので新菌株で
あると断定した。
ダラム染色：陰 性
形 態：桿菌
大 き さ：０．７５〜０．８０ Ｘ １．２５〜２．
００μｍ 多形性：なし 運動性：あり 鞭 毛：単鞭毛 （極鞭毛と思われる） 胞 子：な し 集合形態 ：単一で存在。
００μｍ 多形性：なし 運動性：あり 鞭 毛：単鞭毛 （極鞭毛と思われる） 胞 子：な し 集合形態 ：単一で存在。
２、培養所見
肉汁寒天平板：３日間の培養で３ ｍ＋ｎ径程のコロニ
ー。白色はぼ円 形。平坦で湿っており光 沢あり。周縁は波状。
ー。白色はぼ円 形。平坦で湿っており光 沢あり。周縁は波状。
肉汁寒天斜面：白色で湿り気が多い。
肉汁液体 ：うすく白濁。白色の沈渣。
肉汁ゼラチン穿刺：表面でよく生育。
液化しない。
ＢＣＰミルク：アルカリ性。ミルクは
変化なし。
３、生理学的性質
硝酸塩の還元；＋
脱窒反応 ：＋
ＭＲテスト ニー
ＶＰテスト ニー
インドールの生成ニー
硫化水素の生成（クリグラ−培地）：±デンプンの加水
分解ニー クエン酸の利用（コーザー培地）：＋ 〃 （グリステンＸセン培地）二十 硝酸（Ｎべ）の利用：＋ アンモニア（ＮＨ４）の利用：＋ 色素の生成ニー ウレアーセニー オキシダーゼニ＋ カタラーゼ：＋ 生育の範囲（ｐＨ） ：５〜１１ （温度）＝１０℃〜４０°Ｃ 酸素に対する態度：好気的 ＯＦテストニー コール酸の資化能：＋ グリセリン −− Ｌ−アラビノース ± − Ｄ−キシロース ± − リボース ± − Ｄ−グルコース − − Ｄ−マンノース −− Ｄ−フラクトース −− Ｄ−ガラクトース −− マルトース − − シュクロース ± − ラクトース − − トレハロース − − セロビオース −− 糖 顕 酸 ガ スＤ−ソルビト
ール −− Ｄ−マニトール − − イノシトール −− ラフィノース − − スターチ − − ダラム染色：陰 性 形 態：桿 菌 人 さ さ：０．５〜１． ＯＸ １． Ｏ〜１．８μ
ｍ多形性：なし 運動性：あり 鞭 毛：単極鞭毛 胞 子：な し 集合形態 二車−で存在。
分解ニー クエン酸の利用（コーザー培地）：＋ 〃 （グリステンＸセン培地）二十 硝酸（Ｎべ）の利用：＋ アンモニア（ＮＨ４）の利用：＋ 色素の生成ニー ウレアーセニー オキシダーゼニ＋ カタラーゼ：＋ 生育の範囲（ｐＨ） ：５〜１１ （温度）＝１０℃〜４０°Ｃ 酸素に対する態度：好気的 ＯＦテストニー コール酸の資化能：＋ グリセリン −− Ｌ−アラビノース ± − Ｄ−キシロース ± − リボース ± − Ｄ−グルコース − − Ｄ−マンノース −− Ｄ−フラクトース −− Ｄ−ガラクトース −− マルトース − − シュクロース ± − ラクトース − − トレハロース − − セロビオース −− 糖 顕 酸 ガ スＤ−ソルビト
ール −− Ｄ−マニトール − − イノシトール −− ラフィノース − − スターチ − − ダラム染色：陰 性 形 態：桿 菌 人 さ さ：０．５〜１． ＯＸ １． Ｏ〜１．８μ
ｍ多形性：なし 運動性：あり 鞭 毛：単極鞭毛 胞 子：な し 集合形態 二車−で存在。
２、培養所見
肉汁寒天平板：４８時間で４Ｍ＋１１程のコロニーにな
る。白色で中心 部は微褐色。平坦な円形 で波状の周縁。光沢あり 湿潤。
る。白色で中心 部は微褐色。平坦な円形 で波状の周縁。光沢あり 湿潤。
肉汁寒天斜面：白色。
肉汁液体 ：うす（白濁。白色の沈渣肉汁ゼラチン穿
刺；糸状に生育、ゼラチンを液化せず。
刺；糸状に生育、ゼラチンを液化せず。
ＢＣＰミルク：アルカリ性。ミルクは
変化なし。
３、生理学的性質
硝酸塩の還元２＋
脱窒反応 ２＋
ＭＲテスト ニー
ｖＰテスト −一
インドールの生成ニー
硫化水素の生成（クリグラ−培地）ニーデンプンの加水
分解：＋ クエン酸の利用（コーザー培地）；＋ 〃 （クリステンセン培地）二十 硝酸（Ｎ−）の利用：＋ アンモニア（Ｎ）卯の利用：＋ 色素の生成ニー ウレアーゼニー オキシダーゼ：＋ カタラーセ：＋ 生育の範囲（ｐＨ） ：６〜１０ （ａＬ度）二１０℃〜４０℃ 酸素に対する態度：好気的 ＯＦテスト：０ コール酸の資化能ニー グリセリン 十 − Ｌ−アラビノース − − Ｄ−キシロース ＋ − リボース ± Ｄ−グルコース 十 − Ｄ−マンノース − − Ｄ−フラクトース ± − Ｄ−ガラクトース ± 糖類なと 酸 化 ガ ス マルトース − − シュクロース −− ラクトース −− トレハロース − − セロビオース −− Ｄ−ソルビトール − − Ｄ−マニトール ± − イノシトール −− ラフィノース − − スクーチ 十 一 本発明方法に従えば、シュウトモナス属に属する７−ケ
ドー３α−ヒドロキシコラン酸生産能を有する微生物を
ケノデオキシコール酸を含む栄養培地で培養することに
より７−ケドー３α−ヒドロキシコラン酸を生成せしめ
る。栄養培地中のケノデオキシコール酸濃度には特に限
定はないが、目的７−ケト体の収量、培養条件及び経済
的観点から一般には５〜５００ ｇ／β、好ましくは４
０〜３００ ｇ／βの濃度とする。
分解：＋ クエン酸の利用（コーザー培地）；＋ 〃 （クリステンセン培地）二十 硝酸（Ｎ−）の利用：＋ アンモニア（Ｎ）卯の利用：＋ 色素の生成ニー ウレアーゼニー オキシダーゼ：＋ カタラーセ：＋ 生育の範囲（ｐＨ） ：６〜１０ （ａＬ度）二１０℃〜４０℃ 酸素に対する態度：好気的 ＯＦテスト：０ コール酸の資化能ニー グリセリン 十 − Ｌ−アラビノース − − Ｄ−キシロース ＋ − リボース ± Ｄ−グルコース 十 − Ｄ−マンノース − − Ｄ−フラクトース ± − Ｄ−ガラクトース ± 糖類なと 酸 化 ガ ス マルトース − − シュクロース −− ラクトース −− トレハロース − − セロビオース −− Ｄ−ソルビトール − − Ｄ−マニトール ± − イノシトール −− ラフィノース − − スクーチ 十 一 本発明方法に従えば、シュウトモナス属に属する７−ケ
ドー３α−ヒドロキシコラン酸生産能を有する微生物を
ケノデオキシコール酸を含む栄養培地で培養することに
より７−ケドー３α−ヒドロキシコラン酸を生成せしめ
る。栄養培地中のケノデオキシコール酸濃度には特に限
定はないが、目的７−ケト体の収量、培養条件及び経済
的観点から一般には５〜５００ ｇ／β、好ましくは４
０〜３００ ｇ／βの濃度とする。
本発明方法において使用することのできる培地としては
、前記微生物が培養により増殖し得るものであれば任意
のものでよく、例えば、炭素源としては、ケノデオキシ
コール酸塩、グルコース、フラクトース、マンノース、
マルトース、シュクロース、エチルアルコール、グリセ
リン、酢酸すど、窒素源としては、ペプトン、肉エキス
、酵母エキス、コーンステイープリカー等の有機窒素、
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリウム
等の無機窒素が用いられる。また、このほかにリン酸２
水素カリウム、リン酸水素２カリウム、硫酸第一鉄、硫
酸マンガンなどの無機塩が添加される。
、前記微生物が培養により増殖し得るものであれば任意
のものでよく、例えば、炭素源としては、ケノデオキシ
コール酸塩、グルコース、フラクトース、マンノース、
マルトース、シュクロース、エチルアルコール、グリセ
リン、酢酸すど、窒素源としては、ペプトン、肉エキス
、酵母エキス、コーンステイープリカー等の有機窒素、
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリウム
等の無機窒素が用いられる。また、このほかにリン酸２
水素カリウム、リン酸水素２カリウム、硫酸第一鉄、硫
酸マンガンなどの無機塩が添加される。
本発明方法における培養は好気的条件下に、例えば通気
攪拌や往復振盪方法によって培養することができる。培
養条件は、特に限定はないが、一般的に言えば、温度２
５〜４０°ｃ、ｐＨ６，０〜９．０及び２０〜９６時間
程度の条件で実施する。
攪拌や往復振盪方法によって培養することができる。培
養条件は、特に限定はないが、一般的に言えば、温度２
５〜４０°ｃ、ｐＨ６，０〜９．０及び２０〜９６時間
程度の条件で実施する。
培養液又は培養物からの目的の７−ケト体の採取方法は
慣用方法に従って行うことができる。例えば、培養液を
遠心分離し、上清を希塩酸で酸性にしたのち、酢酸エチ
ルで抽出する。溶媒を留去して生成物を集め、メチルア
ルコールに熔解後加熱還流してメチルエステル化し、冷
却して結晶化、再結晶化して精製し、これを加水分解し
て目的物を得る。
慣用方法に従って行うことができる。例えば、培養液を
遠心分離し、上清を希塩酸で酸性にしたのち、酢酸エチ
ルで抽出する。溶媒を留去して生成物を集め、メチルア
ルコールに熔解後加熱還流してメチルエステル化し、冷
却して結晶化、再結晶化して精製し、これを加水分解し
て目的物を得る。
以下に本発明の詳細な説明するが、本発明の範囲をこれ
らの実施例に限定するものでないことはいうまでもない
。
らの実施例に限定するものでないことはいうまでもない
。
実施例１
シュウトモナス５Ｄ−１０２を下記の方法で培養した。
ケノデオキシコール酸１０ｇ、水酸化ナトリウム１．２
ｇ、酵母エキス１ｇ、硫酸マグネシウム・７水和物０．
５ｇ、リン酸水素２カリウム５ｇ、リン酸２水素カリウ
ム２ｇ及び硝酸アンモニウム４ｇに水１０００ ｍ （
ｌを加え、培地とした。この培地３１を５βジヤーフア
ーメンクーに入れ、１２１°Ｃで６０分間上記殺菌を行
なった。
ｇ、酵母エキス１ｇ、硫酸マグネシウム・７水和物０．
５ｇ、リン酸水素２カリウム５ｇ、リン酸２水素カリウ
ム２ｇ及び硝酸アンモニウム４ｇに水１０００ ｍ （
ｌを加え、培地とした。この培地３１を５βジヤーフア
ーメンクーに入れ、１２１°Ｃで６０分間上記殺菌を行
なった。
あらかじめ５００ｍ１坂ロフラスコに上記培地と同一組
成の培地１００ｍ１を入れて３０℃で２日間振盪培養し
て増殖させた培養液２００ ｍ ｌを無菌的に遠心分離
して得たシュウトモナス５Ｄ−１０２菌体を上記ジャー
ファーメンタ−に接種し、４００ ｒｐｍ、３０℃及び
通気量０．５β／ｍｉｎの培養条件下で５日間培養した
。このようにして得た培養液１βを遠心分離し、菌体を
沈澱させ、上清を得た。この上清に希塩酸（１： １）
を加えて塩酸酸性としケノデオキシコール酸の酸化生成
物及びケノデオキシコール酸の固形物を析出させ、濾集
した。
成の培地１００ｍ１を入れて３０℃で２日間振盪培養し
て増殖させた培養液２００ ｍ ｌを無菌的に遠心分離
して得たシュウトモナス５Ｄ−１０２菌体を上記ジャー
ファーメンタ−に接種し、４００ ｒｐｍ、３０℃及び
通気量０．５β／ｍｉｎの培養条件下で５日間培養した
。このようにして得た培養液１βを遠心分離し、菌体を
沈澱させ、上清を得た。この上清に希塩酸（１： １）
を加えて塩酸酸性としケノデオキシコール酸の酸化生成
物及びケノデオキシコール酸の固形物を析出させ、濾集
した。
濾液を酢酸エチル３００ｍ６で３回抽出し、酢酸エチル
抽出液を合せ、４０°Ｃ以下で減圧濃縮した。得られた
固形物と先に濾集した固形物との合計量は１０．１７
ｇであった。
抽出液を合せ、４０°Ｃ以下で減圧濃縮した。得られた
固形物と先に濾集した固形物との合計量は１０．１７
ｇであった。
この固形物の一部をとり、１％酢酸溶液としＫｉｅｓｅ
ｇｅ１６０ Ｆを用いて薄層クロマトグラフィーを行な
い生じたスポ゛ソトを標品３−ヒドロキシ−７−ケドー
５β−コラン酸及びケノデオキシコール酸のスポットと
比較したところ、同一の位置に同色の発色を示した。ま
た、３−ヒドロキシ−７−ケドー５β−コラン酸の部分
に相当する化合物を分取し、この化合物を下記の方法で
３α−ヒドロキシ′−７−ケトー５β−フラン酸と同定
した。
ｇｅ１６０ Ｆを用いて薄層クロマトグラフィーを行な
い生じたスポ゛ソトを標品３−ヒドロキシ−７−ケドー
５β−コラン酸及びケノデオキシコール酸のスポットと
比較したところ、同一の位置に同色の発色を示した。ま
た、３−ヒドロキシ−７−ケドー５β−コラン酸の部分
に相当する化合物を分取し、この化合物を下記の方法で
３α−ヒドロキシ′−７−ケトー５β−フラン酸と同定
した。
（イ）薄層クロマトグラフィーによる同定（Ａ）１％酢
酢酸液液３ｐｌＫｉｅｓｅｇｅ１６ ＯＦにスポットし
、風乾後ヘンゼン：ジオキサン：酢酸（７５：２０：２
）の組成の展開溶剤を用いてｌＱｃｍ展開した。乾燥後
、５％硫酸水／８液を噴霧し、１２０℃で１０分間加熱
したところ、標品３α−ヒドロキシ−７−ケドー５β−
コラン酸と同一位置に、同色のスポットがみられた。
酢酸液液３ｐｌＫｉｅｓｅｇｅ１６ ＯＦにスポットし
、風乾後ヘンゼン：ジオキサン：酢酸（７５：２０：２
）の組成の展開溶剤を用いてｌＱｃｍ展開した。乾燥後
、５％硫酸水／８液を噴霧し、１２０℃で１０分間加熱
したところ、標品３α−ヒドロキシ−７−ケドー５β−
コラン酸と同一位置に、同色のスポットがみられた。
（Ｂ）展開溶媒としてイソオクタン：酢酸エチル：酢酸
（１０： １０ ： ２）を用い（Ａ）と同様に展開、
発色させたところ、標品３α−ヒドロキシ−７−ケドー
５β−コラン酸と同一位置に同色のスポットがみられた
。
（１０： １０ ： ２）を用い（Ａ）と同様に展開、
発色させたところ、標品３α−ヒドロキシ−７−ケドー
５β−コラン酸と同一位置に同色のスポットがみられた
。
（ロ）液体クロマトグラフィーによる同定ショーデ・ノ
クス０ＤＳ−Ｆ４１１カラム（昭和電工＠製）を備えた
高速液体クロマトグラフィーに、上記抽出液を１５μβ
注入し、移動相としてメタノール／ Ｈ２Ｏ／ Ｈ３Ｐ
０４（７５／ ２５１０．０２Ｍ重量比）の混合液を
流速ｌ ｍ ｌＩ ／ ｍｉｎで流し、検出をＲ１で行
なった。
クス０ＤＳ−Ｆ４１１カラム（昭和電工＠製）を備えた
高速液体クロマトグラフィーに、上記抽出液を１５μβ
注入し、移動相としてメタノール／ Ｈ２Ｏ／ Ｈ３Ｐ
０４（７５／ ２５１０．０２Ｍ重量比）の混合液を
流速ｌ ｍ ｌＩ ／ ｍｉｎで流し、検出をＲ１で行
なった。
得られた結果を標品３α−ヒドロキシ−７−ケドー５β
−コラン酸と比較したところ、同一のリテンションタイ
ムを示した。また、１％酢酸溶液に標品３α−ヒドロキ
シ−７−ケドー５β−コラン酸７ｃ、０．５％となる様
に加えて熔解させ、前記と同様にして高速液体クロマト
グラフィーに注入し展開させたところ、標品３α−ヒド
ロキシ−７−ケドー５β−コラン酸が示すリテンション
タイムの位置に一つのピークが得られた。
−コラン酸と比較したところ、同一のリテンションタイ
ムを示した。また、１％酢酸溶液に標品３α−ヒドロキ
シ−７−ケドー５β−コラン酸７ｃ、０．５％となる様
に加えて熔解させ、前記と同様にして高速液体クロマト
グラフィーに注入し展開させたところ、標品３α−ヒド
ロキシ−７−ケドー５β−コラン酸が示すリテンション
タイムの位置に一つのピークが得られた。
液体クロマトグラムの面積比から得られた３α−ヒドロ
キシ−７−ケドー５β−コラン酸及びケノデオキシコー
ル酸の相対比を等比したところ以下の通りであった。
キシ−７−ケドー５β−コラン酸及びケノデオキシコー
ル酸の相対比を等比したところ以下の通りであった。
以下余白
面積百分率（％）
３α−ヒドロキシ−７−ケトー
５β−フラン酸 ３０．５ケノ
デオキシコール酸 ６９，５その他の
ケノデオキシコール酸の酸化 ０生底物の合計 実施例２ シュウトモナス５Ｄ−１０２を下記の方法で培養した。
デオキシコール酸 ６９，５その他の
ケノデオキシコール酸の酸化 ０生底物の合計 実施例２ シュウトモナス５Ｄ−１０２を下記の方法で培養した。
ケノデオキシコール酸Ｌｏｇ、水酸化ナトリウム１．２
ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス５ｇ、硫酸マグネシウム
・７水和物０．５ｇ、リン酸水素２カリウム５ｇ及びリ
ン酸２水素カリウム２ｇに、水１０００ｍ＋２を加えて
、これを培地とした。この培地ＩＱｍｊ！を２４龍φ試
験管に分注し、１２１°Ｃで１５分間蒸気殺菌を行なっ
た。
ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス５ｇ、硫酸マグネシウム
・７水和物０．５ｇ、リン酸水素２カリウム５ｇ及びリ
ン酸２水素カリウム２ｇに、水１０００ｍ＋２を加えて
、これを培地とした。この培地ＩＱｍｊ！を２４龍φ試
験管に分注し、１２１°Ｃで１５分間蒸気殺菌を行なっ
た。
あらかじめ、ケノデオキシコール酸５ｇ、水酸化ナトリ
ウム０．６ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス５ｇ及び寒天
１５ｇに水１０００ｍβを加え、１２１℃で１５分間蒸
気殺菌を行ない、無菌的に準備した平板培地上に生育さ
せたシュウトモナス３１）−１０２菌を、上記の２４ｙ
ａｍψ・試験管中の培地に１白金耳接種し、３０°Ｃで
３日間振盪培養を行なった。培養後、得られた培養液を
遠心分離機にかけ、菌体を沈澱させ、上清と分離した。
ウム０．６ｇ、ペプトン５ｇ、酵母エキス５ｇ及び寒天
１５ｇに水１０００ｍβを加え、１２１℃で１５分間蒸
気殺菌を行ない、無菌的に準備した平板培地上に生育さ
せたシュウトモナス３１）−１０２菌を、上記の２４ｙ
ａｍψ・試験管中の培地に１白金耳接種し、３０°Ｃで
３日間振盪培養を行なった。培養後、得られた培養液を
遠心分離機にかけ、菌体を沈澱させ、上清と分離した。
上清に希塩酸を加えることにより白色沈澱として析出し
たケノデオキシコール酸の酸化生成物及びケノデオキシ
コール酸を酢酸エチルｌＱｍ／で抽出した。この抽出液
をそのまま実施例１に述べた薄層クロマトグラフィー及
び液体クロマトグラフィーと、同様の方法で分析したと
ころ、結果は以下の通りであった。
たケノデオキシコール酸の酸化生成物及びケノデオキシ
コール酸を酢酸エチルｌＱｍ／で抽出した。この抽出液
をそのまま実施例１に述べた薄層クロマトグラフィー及
び液体クロマトグラフィーと、同様の方法で分析したと
ころ、結果は以下の通りであった。
以下余白
高速液体
薄層クロマト クロマト
３α−ヒドロキシ−７−
ケドー５β−コラン酸 ＋ ＋ ２３．
４ケノデオキシコール酸 ＋ ＋ ４１
．３その他のケノデオキシコール酸 の酸化生成物 ＋ ＋ ３５．
３特許出願人 昭和電工株式会社 特許出願代理人 弁理士 青 木 朗 弁理士西舘和之 弁理士 石 １） 敬 弁理士 山 口 昭 之
４ケノデオキシコール酸 ＋ ＋ ４１
．３その他のケノデオキシコール酸 の酸化生成物 ＋ ＋ ３５．
３特許出願人 昭和電工株式会社 特許出願代理人 弁理士 青 木 朗 弁理士西舘和之 弁理士 石 １） 敬 弁理士 山 口 昭 之
Claims (1)
- １、シュウトモナス属に属する７−ケト−３αヒドロキ
シコラン酸生産能を有する微生物をケノデオキシコール
酸を含む栄養培地で培養して培養物中に７−ケドー３α
−ヒドロキシコラン酸を生成せしめ、これを採取するこ
とを特徴とする７−ケドー３α−ヒドロキシコラン酸の
製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22748682A JPS59120097A (ja) | 1982-12-28 | 1982-12-28 | ７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22748682A JPS59120097A (ja) | 1982-12-28 | 1982-12-28 | ７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59120097A true JPS59120097A (ja) | 1984-07-11 |
| JPS6225356B2 JPS6225356B2 (ja) | 1987-06-02 |
Family
ID=16861636
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22748682A Granted JPS59120097A (ja) | 1982-12-28 | 1982-12-28 | ７−ケト−３α−ヒドロキシコラン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59120097A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107980060A (zh) * | 2017-01-09 | 2018-05-01 | 深圳市邦泰绿色生物合成研究院 | 一种3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸的制备方法及其制备用酶2 |
-
1982
- 1982-12-28 JP JP22748682A patent/JPS59120097A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107980060A (zh) * | 2017-01-09 | 2018-05-01 | 深圳市邦泰绿色生物合成研究院 | 一种3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸的制备方法及其制备用酶2 |
| WO2018126467A1 (zh) * | 2017-01-09 | 2018-07-12 | 深圳市邦泰绿色生物合成研究院 | 一种3α-羟基-7氧代-5β-胆烷酸的制备方法及其制备用酶2 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6225356B2 (ja) | 1987-06-02 |
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