JPS589695A - イヌリンの加水分解プロセス - Google Patents
イヌリンの加水分解プロセスInfo
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- JPS589695A JPS589695A JP57072477A JP7247782A JPS589695A JP S589695 A JPS589695 A JP S589695A JP 57072477 A JP57072477 A JP 57072477A JP 7247782 A JP7247782 A JP 7247782A JP S589695 A JPS589695 A JP S589695A
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- inulinase
- inulin
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- enzyme
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01007—Inulinase (3.2.1.7)
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C13—SUGAR INDUSTRY
- C13K—SACCHARIDES OBTAINED FROM NATURAL SOURCES OR BY HYDROLYSIS OF NATURALLY OCCURRING DISACCHARIDES, OLIGOSACCHARIDES OR POLYSACCHARIDES
- C13K11/00—Fructose
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、フルクトースＯａ＊に対する工業的ｆａミセ
ス適した新規な微生物起源のイヌリナーヤ剤並びにイヌ
リンの糖化プロセスに関する。
ス適した新規な微生物起源のイヌリナーヤ剤並びにイヌ
リンの糖化プロセスに関する。
フルクトース社、シ昌り−−スの約１．４倍の甘味を有
する、最も甘味の、天然の滋養糖である。該フルクトー
スは、水に易溶であ）、シ為クロースよｐもよ）高い溶
解性を有する。咳フルクトースは、製造費用を実質的に
減少できる場合には食品素条、例えばソフトドリンク剤
において広範囲の適用を見出すことができる。
する、最も甘味の、天然の滋養糖である。該フルクトー
スは、水に易溶であ）、シ為クロースよｐもよ）高い溶
解性を有する。咳フルクトースは、製造費用を実質的に
減少できる場合には食品素条、例えばソフトドリンク剤
において広範囲の適用を見出すことができる。
フルクトースは、多数の果実中峰密中に存在する。フル
クトースは、シ晶クロースの５０−に達しそしてシ１ク
ロースを駿又は酵素により加水分解され続いて分離する
ことによって得られる。しかしながら、同量のグルコー
スおよびフルク）−スの分離、これは特別の結晶化技術
又はりｃ１マトダツフイー法による分離によ）行なうこ
とができるが、皺分離社ｌ＆価なものであシ、そしてそ
れはフルクトースの製造；ストが今日シ為クロースに対
するよｐも相ａＫよｐ高いものとなっている一つの原因
である。
クトースは、シ晶クロースの５０−に達しそしてシ１ク
ロースを駿又は酵素により加水分解され続いて分離する
ことによって得られる。しかしながら、同量のグルコー
スおよびフルク）−スの分離、これは特別の結晶化技術
又はりｃ１マトダツフイー法による分離によ）行なうこ
とができるが、皺分離社ｌ＆価なものであシ、そしてそ
れはフルクトースの製造；ストが今日シ為クロースに対
するよｐも相ａＫよｐ高いものとなっている一つの原因
である。
フルクトースは、甘味の点でスク■−スに匹敵できるシ
四シゾｔａｉ造するためグルロースシロ。
四シゾｔａｉ造するためグルロースシロ。
グの酵素的異性化によル多量製造される。しかしながら
、異性化シＩ、グにおいて、フルクトース含量は、グル
コースとフルクトースと間の異性化平衡ノ九め約４２−
に限定される。よ〕高いフルクトース含量、例えば５５
−又は９０１ｇを有するシロッ／は、異性化シロ、プに
対し夕！２１トゲラフイーによる分離技術を適用するこ
とにより製造上れる。
、異性化シＩ、グにおいて、フルクトース含量は、グル
コースとフルクトースと間の異性化平衡ノ九め約４２−
に限定される。よ〕高いフルクトース含量、例えば５５
−又は９０１ｇを有するシロッ／は、異性化シロ、プに
対し夕！２１トゲラフイーによる分離技術を適用するこ
とにより製造上れる。
異性化シ’ａｙｆｏｙルクトース含量を高める別の方法
は、腋シロｙ ７” ！純粋な又祉殆ど純粋なフルクト
−スジ四ｙｆとブレンドする方法である。
は、腋シロｙ ７” ！純粋な又祉殆ど純粋なフルクト
−スジ四ｙｆとブレンドする方法である。
フルクトースの可能性ある給源はイヌリンである。イヌ
リンは枝分れしていないフルクトースポリｉ−であシ、
このポリマーは天然に存する形態で、゛シ晶クロースに
おけゐ即（α−１，β−２結合によ〕フルクトースに結
合したグルコース分子を末端に有する、約３５個のβ−
フルクト７ラノース残基から構成される。” イヌリンは、種々の植物、・特にコム４ズターエ（Ｃｏ
ｍｐｏ−ロＭ’）科の植物、エルナレムちょうせんＴｏ
誉み流工、ンリア萬墓、チコリおよびたんほぼの根であ
る良好な給源において貯臓エネルギーとして存在子る。
リンは枝分れしていないフルクトースポリｉ−であシ、
このポリマーは天然に存する形態で、゛シ晶クロースに
おけゐ即（α−１，β−２結合によ〕フルクトースに結
合したグルコース分子を末端に有する、約３５個のβ−
フルクト７ラノース残基から構成される。” イヌリンは、種々の植物、・特にコム４ズターエ（Ｃｏ
ｍｐｏ−ロＭ’）科の植物、エルナレムちょうせんＴｏ
誉み流工、ンリア萬墓、チコリおよびたんほぼの根であ
る良好な給源において貯臓エネルギーとして存在子る。
イヌリンは冷水に殆ど不溶であるが熱水に溶解させるこ
とができる（ＹＩＩｌｍｏｗｖａｙａｔ ａｌ ｓ
Ｊ、Ａ−Ｃ−８−５５４（１９３Ｓ年ン、３６５８〜３
６３３員）。
とができる（ＹＩＩｌｍｏｗｖａｙａｔ ａｌ ｓ
Ｊ、Ａ−Ｃ−８−５５４（１９３Ｓ年ン、３６５８〜３
６３３員）。
イヌリンは、周知の技術例えば昇温下での植物片の向流
拡散又は液汁とする九めＯ圧搾法を用いて植物から熱水
抽出することができる。原料液汁は活性炭゛を用いた一
過法によ）又は別にてんさい加工における如く石灰でＩ
Ｉ＆通することによりて精製される。
拡散又は液汁とする九めＯ圧搾法を用いて植物から熱水
抽出することができる。原料液汁は活性炭゛を用いた一
過法によ）又は別にてんさい加工における如く石灰でＩ
Ｉ＆通することによりて精製される。
イヌリンに加えて、抽出物はよシ低い鎖長ポリマー、例
えばフルクトースポリマー並びにグルコースを末端に有
するフルクトースポリマーを、含有する。かかるポリマ
ーの平均鎖長嬬植物の給源および成長、収穫および針鼠
条件によって異なるが、ＤＰＢな込しＤＰｌ、（ＤＰは
重合度を意味するンにあるのがしばしばである。
えばフルクトースポリマー並びにグルコースを末端に有
するフルクトースポリマーを、含有する。かかるポリマ
ーの平均鎖長嬬植物の給源および成長、収穫および針鼠
条件によって異なるが、ＤＰＢな込しＤＰｌ、（ＤＰは
重合度を意味するンにあるのがしばしばである。
イヌリ／は、比較的温和な条件、ＩＪ′１１〜２゜８０
〜９０℃で１〜２時間、酸性加水分解され得る。しかし
、酸性加水分解は着色および副生物の形成、例えば約５
１１のジＺルクトースジアン？）イドライドの形成管も
たらし、これは収率を相尚に減少させる（ Ｗｈｌ＠ｔ
ｌ＠ｒ ＠ｔ ａｌ、＃ ｒ多糖−化学（１？＠１ｙｓ
ａｅｃｈａｒｌｄ Ｃｋ＠ｍ、１ｍｔｒｙ）Ｊアカデミ
ツク声版会社、二畠−曹−タ市、１９５３年、４８７負
〕。
〜９０℃で１〜２時間、酸性加水分解され得る。しかし
、酸性加水分解は着色および副生物の形成、例えば約５
１１のジＺルクトースジアン？）イドライドの形成管も
たらし、これは収率を相尚に減少させる（ Ｗｈｌ＠ｔ
ｌ＠ｒ ＠ｔ ａｌ、＃ ｒ多糖−化学（１？＠１ｙｓ
ａｅｃｈａｒｌｄ Ｃｋ＠ｍ、１ｍｔｒｙ）Ｊアカデミ
ツク声版会社、二畠−曹−タ市、１９５３年、４８７負
〕。
Ｓ胤に溶解゛したフルクトース祉、４〜６０声域におい
て最も安定であると思われるので、骸範囲において行な
われるイヌリンの加水分解のためのプロセスは、副生物
の形成および＾性化ｔａＦｆるために好都合であると信
られている。
て最も安定であると思われるので、骸範囲において行な
われるイヌリンの加水分解のためのプロセスは、副生物
の形成および＾性化ｔａＦｆるために好都合であると信
られている。
イヌリンを加水分層することのできる酵素は、植智物質
の給源（イヌリン含有の根および擁１）並び−微生物か
ら入手可能であることが文献においてすでに説明されて
いる。微生物起源１１１素は、酵母、例えばクルペａＷ
イ竜ス７ラギリス又はケフル（Ｋ働ｆｙｒ）ｍ並びに曹
類伺えばアスペルギルス（ムｓｐ＠ｒｇｉｌ１ｍｓ）
％ ７デリウム（Ｆｕｍａｒｉｕｍ）およびペニシリウ
ム（Ｐ＠ｎｌｅｌｌｌｉａｍ）種から得られる。
の給源（イヌリン含有の根および擁１）並び−微生物か
ら入手可能であることが文献においてすでに説明されて
いる。微生物起源１１１素は、酵母、例えばクルペａＷ
イ竜ス７ラギリス又はケフル（Ｋ働ｆｙｒ）ｍ並びに曹
類伺えばアスペルギルス（ムｓｐ＠ｒｇｉｌ１ｍｓ）
％ ７デリウム（Ｆｕｍａｒｉｕｍ）およびペニシリウ
ム（Ｐ＠ｎｌｅｌｌｌｉａｍ）種から得られる。
微生物起源酵素紘、４：８．５〜翫５の範囲に至遍声を
有しそして４５〜５ＢＣＫ至適温度を有する旨・説明さ
れている・＃素性６０℃で急速に失活することが報告さ
れている。
有しそして４５〜５ＢＣＫ至適温度を有する旨・説明さ
れている・＃素性６０℃で急速に失活することが報告さ
れている。
微生物イヌリナーぜは細胞内および細胞外０双方によシ
生産される。イヌリンおよびシ島り四−スＯ双方を加水
分層する丸めの酵素の能力は、あの活性を有する一種の
酵素ＫＭする（Ｎａｈｍ ＠ｔｍ１．ａ ｒＰｎｒｉ
ｆｌ＊ａｔ１ｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｅｔ＠ｒ１
ｉａｔｉｏｎｏｆ １ｎｕｌａｖｅ ｔｒｏｙｓ
ＪＣ１ｕｙｖｅｒｏｍｙａ＊ｓ ｔｒｆｉｚ１１１ｙ
ｒＪａＫｏｒ＠ａｍ引ｏ＠に＠ｍｓ ＪＬ ａ １０巻
（２）、９５〜１０８貞（１９７７年））・ エンｙｍイヌリナーヤおよびエキソ瀧イヌリナーヤの双
方ともアスペＡ−ギルスナイガ（Ａｓｐ・ｙｇｌｌｌｕ
ｓｎｌｇ・ｒンからａ襄された。エンド成分はその至適
活性ｔＰＨ５，３および４５℃に有し：エキソ成分はＰ
Ｈ５，０および５５℃に有する（中村他：「微生物イヌ
リン含有に関する研究＃！ｙ報」日本農英学会１１５２
巻（４）１５９〜１６６Ｍ（１９７８年）および水村他
「微生物イヌリン含有に関する研究第■報ＪＮ、Ｎ、Ｌ
、５２巻（６）、５８１〜５８７Ｘ（１９７８年）― イヌリナー−Ｖは比較的に溶解性が駆足されているので
、イヌリンの加水分解紘比較的に希釈した溶液中で行う
必要があル、そしてすでに指摘したように、約４〜６０
−域内が好ましい、ダリア根からの純粋なイヌリンＯｇ
Ｑ％ｖ／ｖ １１ ＩＩ ｔｅｌ：、６゜℃で１ｌｌｊ
１することができるが、かかる溶液は過飽和状態であル
、長期間放置すると沈殿する。５０〜６０ＣＯ水に溶解
するイヌリンの最大１社、フルク゛ドースポリマーの重
合度に当然依存するφ勿論、鵡理温度が低ければ低いほ
ど、イヌリンの溶解性が低ければ低い程よｐ希薄なイヌ
リン溶液が必要とされる。
生産される。イヌリンおよびシ島り四−スＯ双方を加水
分層する丸めの酵素の能力は、あの活性を有する一種の
酵素ＫＭする（Ｎａｈｍ ＠ｔｍ１．ａ ｒＰｎｒｉ
ｆｌ＊ａｔ１ｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｅｔ＠ｒ１
ｉａｔｉｏｎｏｆ １ｎｕｌａｖｅ ｔｒｏｙｓ
ＪＣ１ｕｙｖｅｒｏｍｙａ＊ｓ ｔｒｆｉｚ１１１ｙ
ｒＪａＫｏｒ＠ａｍ引ｏ＠に＠ｍｓ ＪＬ ａ １０巻
（２）、９５〜１０８貞（１９７７年））・ エンｙｍイヌリナーヤおよびエキソ瀧イヌリナーヤの双
方ともアスペＡ−ギルスナイガ（Ａｓｐ・ｙｇｌｌｌｕ
ｓｎｌｇ・ｒンからａ襄された。エンド成分はその至適
活性ｔＰＨ５，３および４５℃に有し：エキソ成分はＰ
Ｈ５，０および５５℃に有する（中村他：「微生物イヌ
リン含有に関する研究＃！ｙ報」日本農英学会１１５２
巻（４）１５９〜１６６Ｍ（１９７８年）および水村他
「微生物イヌリン含有に関する研究第■報ＪＮ、Ｎ、Ｌ
、５２巻（６）、５８１〜５８７Ｘ（１９７８年）― イヌリナー−Ｖは比較的に溶解性が駆足されているので
、イヌリンの加水分解紘比較的に希釈した溶液中で行う
必要があル、そしてすでに指摘したように、約４〜６０
−域内が好ましい、ダリア根からの純粋なイヌリンＯｇ
Ｑ％ｖ／ｖ １１ ＩＩ ｔｅｌ：、６゜℃で１ｌｌｊ
１することができるが、かかる溶液は過飽和状態であル
、長期間放置すると沈殿する。５０〜６０ＣＯ水に溶解
するイヌリンの最大１社、フルク゛ドースポリマーの重
合度に当然依存するφ勿論、鵡理温度が低ければ低いほ
ど、イヌリンの溶解性が低ければ低い程よｐ希薄なイヌ
リン溶液が必要とされる。
比較的に希薄なイヌリン溶液において微生物の感染を避
けるためには、工業的プロセスの操作温度は少なくとも
約６０℃でなけれはならず、そして好ましくは６０〜６
５℃であるべきである・この温度レベルは澱粉工業にお
ける常法のグラクチイスであル、例えは糖化グ目セスは
通常６０℃および３０ ％ ｖ／ｗ Ｄ８で２〜Ｓ日間
行なわれる。
けるためには、工業的プロセスの操作温度は少なくとも
約６０℃でなけれはならず、そして好ましくは６０〜６
５℃であるべきである・この温度レベルは澱粉工業にお
ける常法のグラクチイスであル、例えは糖化グ目セスは
通常６０℃および３０ ％ ｖ／ｗ Ｄ８で２〜Ｓ日間
行なわれる。
不幸にも、従来技術にシいてそれに関して報告され九り
＃素は６０ｍ：でＯ商業的使用に対し余ｐ適しておらず
、それらは余９に急速に失活すみ、しかし、実際問題と
して、６０Ｃ紘、イスリン０１１解性の理由および微生
物汚染の回避の双方の丸め最低の金層的な加水分解温度
である。
＃素は６０ｍ：でＯ商業的使用に対し余ｐ適しておらず
、それらは余９に急速に失活すみ、しかし、実際問題と
して、６０Ｃ紘、イスリン０１１解性の理由および微生
物汚染の回避の双方の丸め最低の金層的な加水分解温度
である。
従って、経済的な方法でイヌリンの加水分解を行うため
に、例えは１〜５日間延長された期間、６０〜６５℃で
採用しうる十分に熱安定性を有する有効なイヌリナーゼ
剤に対する要求が存在する。
に、例えは１〜５日間延長された期間、６０〜６５℃で
採用しうる十分に熱安定性を有する有効なイヌリナーゼ
剤に対する要求が存在する。
これに関して本発明者の知る限シでは、これらの性質を
有するイヌリナーゼ剤は今日まで報告されていない。
有するイヌリナーゼ剤は今日まで報告されていない。
木兄１ｊＩａ商業的実用性に関するものであるから、酸
性加水分解生成物よシも費用および品質の点においては
るかくすぐれ九酵素的に生成された氷解生成物が要求さ
れることは理解できる。というのは、シークロースの転
化から又はイソシーツブの分別分離のいずれかからの高
品質のフルクトースが利用できるからである。かくして
、イヌリン氷解物は、溶液中（乾燥）固体の９８９１
ｖ／ｖの単糖＊ｔｍえる必要がある。以下に用いられる
語句「完全加水分解」紘、乾燥固形物基準で９８−のフ
ルクトースおよびダルコースを超えるイヌリン氷解物の
製造を意味するものとする。
性加水分解生成物よシも費用および品質の点においては
るかくすぐれ九酵素的に生成された氷解生成物が要求さ
れることは理解できる。というのは、シークロースの転
化から又はイソシーツブの分別分離のいずれかからの高
品質のフルクトースが利用できるからである。かくして
、イヌリン氷解物は、溶液中（乾燥）固体の９８９１
ｖ／ｖの単糖＊ｔｍえる必要がある。以下に用いられる
語句「完全加水分解」紘、乾燥固形物基準で９８−のフ
ルクトースおよびダルコースを超えるイヌリン氷解物の
製造を意味するものとする。
本発明は、二ンド渥イヌリナーーＶ活性および工キソ凰
イヌリナーゼ活性の双方が存在し、かつこれらのイヌリ
ナーゼ成分が一定の比で、好ましくは重量比で存在する
場合、イヌリン紘最も有効に加水分解されるということ
の驚くべき知見に基づくものである。
イヌリナーゼ活性の双方が存在し、かつこれらのイヌリ
ナーゼ成分が一定の比で、好ましくは重量比で存在する
場合、イヌリン紘最も有効に加水分解されるということ
の驚くべき知見に基づくものである。
木兄ｔｐｈｏ第一の面によれば、微生物イヌリナーゼ剤
を用いイヌリンを加水分解する方法が提供されるもので
あシ、該方法拡エキソ証イヌリナーゼに対するエンド型
イヌリナーぜの割合を重量基準で１：１Ｇないし１０：
１の範囲に有するイヌリナーゼ剤の有効量の存在のもと
、３．５−７Ｃ）Ｉ！囲内の−で６０〜６５℃の温度で
水性培地中イヌリンを加水分解し、これＫよ）イヌリン
の酵素的完全加水分解を得ることを含んでなる。
を用いイヌリンを加水分解する方法が提供されるもので
あシ、該方法拡エキソ証イヌリナーゼに対するエンド型
イヌリナーぜの割合を重量基準で１：１Ｇないし１０：
１の範囲に有するイヌリナーゼ剤の有効量の存在のもと
、３．５−７Ｃ）Ｉ！囲内の−で６０〜６５℃の温度で
水性培地中イヌリンを加水分解し、これＫよ）イヌリン
の酵素的完全加水分解を得ることを含んでなる。
本発明の好ましい態様によれに、イヌリナー髪の二ンド
戴成分およびエキノｍ成分紘１ニアないし７：１％史に
好ましくは１：２ないし４：１０重量比で存在する。
・・ 本発明のイヌリナーぜ酵素剤は、その至適温度ｔ−６０
℃に有するが、３．５〜７のμ値、好筐しくは４〜６、
更に好ましくは声４．５〜５．０の一値で６５℃で用い
ることができる０本発明の酵素剤は４８時間後イヌリン
２０チη〜中６０℃でその本来の活性の約５０４ｆ保持
する。
戴成分およびエキノｍ成分紘１ニアないし７：１％史に
好ましくは１：２ないし４：１０重量比で存在する。
・・ 本発明のイヌリナーぜ酵素剤は、その至適温度ｔ−６０
℃に有するが、３．５〜７のμ値、好筐しくは４〜６、
更に好ましくは声４．５〜５．０の一値で６５℃で用い
ることができる０本発明の酵素剤は４８時間後イヌリン
２０チη〜中６０℃でその本来の活性の約５０４ｆ保持
する。
以下余白
本発明の別の見地によれば、本発明に係る方法を実施す
るのに十分適し九イヌリナーゼ剤が提供され、蚊イヌリ
ナーぜ剤は、工呼ソ渥イネリナーゼに対するエンド型イ
ヌリナーゼの割合が重量単位で１：１０ないし１０：１
の範囲にあもことを示すことを特徴とする。
るのに十分適し九イヌリナーゼ剤が提供され、蚊イヌリ
ナーぜ剤は、工呼ソ渥イネリナーゼに対するエンド型イ
ヌリナーゼの割合が重量単位で１：１０ないし１０：１
の範囲にあもことを示すことを特徴とする。
本発明に係るイヌリン氷解方法は、通常の（デキストリ
ン）糖化装置内でバッチプロセスとして行うことができ
る◎イヌリンの完全加水分解（すなわち、９ｇ５１又は
それ以上、フルクトース如慢＃ｊＬＦダルコースが該プ
ロセスで得られる。反応時間は酵素用量に依存しそして
副生成物又は着色の形成を伴うことなく酵素をよｐ有効
に用いるため２〜４日まで延長し得る・使用される全イ
ヌリナー−ＩＩ（工呼ソ麗および工／ドＩＩＯ組み合わ
せたもの）用量はイヌリンの１ダツ五に対し０．２５〜
１０ソモギ一単位、好ましく紘１〜５ノモイ一単位の範
囲内にある。
ン）糖化装置内でバッチプロセスとして行うことができ
る◎イヌリンの完全加水分解（すなわち、９ｇ５１又は
それ以上、フルクトース如慢＃ｊＬＦダルコースが該プ
ロセスで得られる。反応時間は酵素用量に依存しそして
副生成物又は着色の形成を伴うことなく酵素をよｐ有効
に用いるため２〜４日まで延長し得る・使用される全イ
ヌリナー−ＩＩ（工呼ソ麗および工／ドＩＩＯ組み合わ
せたもの）用量はイヌリンの１ダツ五に対し０．２５〜
１０ソモギ一単位、好ましく紘１〜５ノモイ一単位の範
囲内にある。
工業的プロセスにおいて、加水分解に対する基質はイヌ
リン含有枢物、例えにチコリ、エルナレムちょうせんあ
ざみ、ダリア等の抽出物又紘薄片にした種物材料の水懸
濁液のいずれかに存在する。
リン含有枢物、例えにチコリ、エルナレムちょうせんあ
ざみ、ダリア等の抽出物又紘薄片にした種物材料の水懸
濁液のいずれかに存在する。
抽出物は周知の方法により調製でき、そして該抽出物は
加水分解する前に石灰処理、炭素処理又はイオン交換に
より精製される。
加水分解する前に石灰処理、炭素処理又はイオン交換に
より精製される。
実験室スケールおよび工業的スケールの双方において、
イヌリン抽出液はしばしば比較的希薄であり、倒えば５
〜２５９ＩＯ乾燥物質でＥる。イヌリン抽出液は該処理
温度でイヌリン又はここにおけるフルクトースボリア−
の溶解性の限度の物質含量に壕で濃縮できる。すでに指
摘したように１もしも加水分解反応温度が微生物の繁殖
を妨たげるために十分に高くない場合、イヌリン抽出液
は微生物汚染を受けやすい。勿論、保存剤は添加可能で
あるが、それを使用すると、保存剤の費用並びに処理後
のそれらの除去の費用の双方の面から処理費用が加算さ
れる。
イヌリン抽出液はしばしば比較的希薄であり、倒えば５
〜２５９ＩＯ乾燥物質でＥる。イヌリン抽出液は該処理
温度でイヌリン又はここにおけるフルクトースボリア−
の溶解性の限度の物質含量に壕で濃縮できる。すでに指
摘したように１もしも加水分解反応温度が微生物の繁殖
を妨たげるために十分に高くない場合、イヌリン抽出液
は微生物汚染を受けやすい。勿論、保存剤は添加可能で
あるが、それを使用すると、保存剤の費用並びに処理後
のそれらの除去の費用の双方の面から処理費用が加算さ
れる。
以下の事実が見出され九。６０〜６５℃での工業的加水
分解ｒロセスにおｉで適用するため十分に高い熱安定性
を有する微生物起源イヌリナーゼ酵素剤がアスペルギル
スナイガ−（Ａｓｐ・ｒｇｌｌｌａｓｎ贈・ｒ）群に属
するアメペルギリー（Ａ婁ｐ＠ｒｇｌｌｌｉ）から生産
され得る。
分解ｒロセスにおｉで適用するため十分に高い熱安定性
を有する微生物起源イヌリナーゼ酵素剤がアスペルギル
スナイガ−（Ａｓｐ・ｒｇｌｌｌａｓｎ贈・ｒ）群に属
するアメペルギリー（Ａ婁ｐ＠ｒｇｌｌｌｉ）から生産
され得る。
本発明の好ましい態様において、新規なイヌリナーゼ剤
がアスバルギルスフイクウム Ｖリエ１月１↓−拝一児）菌の培養によって生産される
。新規なイヌリナーぜは本発明の実施に対し十分に熱的
に安定である・そＯ至適−は本発明の実施に適している
。上記の微生物はエンド型および工呼ノ型のイヌリナー
ぜを生産する。しかし、アスΔルギルスフイククム（Ａ
ｓｐ＠ｒｇｉｌｌｕｓｆｌｅｕｕｍ）によって生産され
たイヌリナーゼのエンド型およびエキソ飄のイヌリナー
ゼ活生の割合は菌株特異性であることが見出された。
がアスバルギルスフイクウム Ｖリエ１月１↓−拝一児）菌の培養によって生産される
。新規なイヌリナーぜは本発明の実施に対し十分に熱的
に安定である・そＯ至適−は本発明の実施に適している
。上記の微生物はエンド型および工呼ノ型のイヌリナー
ぜを生産する。しかし、アスΔルギルスフイククム（Ａ
ｓｐ＠ｒｇｉｌｌｕｓｆｌｅｕｕｍ）によって生産され
たイヌリナーゼのエンド型およびエキソ飄のイヌリナー
ゼ活生の割合は菌株特異性であることが見出された。
本発明者は以下の事実を見出した。すなわち、アス（ル
ギルス乙土り皇五（Ａ畠ｐ＠ｒｇｉｌｌｓ＋ｇｆｉｃｕ
ｕｍ）、ＩＭ２９１８８１ （我々の命名Ａ！＄２４）
と同一でらるＡＴＣＣ１６８８２と同一である菌株ＣＢ
５５５５６５によりて生産されるイヌリナーゼ酵素は、
上記重量割合の範、ｉ！１内Ｋｌるエン、ド聾およびエ
キソ型イヌリナーゼを含有する。
ギルス乙土り皇五（Ａ畠ｐ＠ｒｇｉｌｌｓ＋ｇｆｉｃｕ
ｕｍ）、ＩＭ２９１８８１ （我々の命名Ａ！＄２４）
と同一でらるＡＴＣＣ１６８８２と同一である菌株ＣＢ
５５５５６５によりて生産されるイヌリナーゼ酵素は、
上記重量割合の範、ｉ！１内Ｋｌるエン、ド聾およびエ
キソ型イヌリナーゼを含有する。
従って、イヌリナーぜを生産する丸めの上記特定の微生
物を使用するのが好ましい・しかしながら、業界におけ
る他の研究者は別々に生産したエンド型およびエキノ盤
イヌリナーゼを混合することをより好んでおシ、従って
、かかる操作は本発明の余り好ましくない態様ではある
が本発明の実施の範囲内に入ることも明らかに予期され
る。
物を使用するのが好ましい・しかしながら、業界におけ
る他の研究者は別々に生産したエンド型およびエキノ盤
イヌリナーゼを混合することをより好んでおシ、従って
、かかる操作は本発明の余り好ましくない態様ではある
が本発明の実施の範囲内に入ることも明らかに予期され
る。
図ｆｆ１Ｋついて説明すると、第１図、第２図、第３図
および第４図はＡ、フイクウム（Ａ、 ｆｌｅｕｔｒｎ
）Ａ−５２４からのエンド型およびエキノ型イヌリナー
ゼ成分について異った酵素作用を示すカラムクロマトグ
ラブイ−のチャート図である。
および第４図はＡ、フイクウム（Ａ、 ｆｌｅｕｔｒｎ
）Ａ−５２４からのエンド型およびエキノ型イヌリナー
ゼ成分について異った酵素作用を示すカラムクロマトグ
ラブイ−のチャート図である。
エンド型（細胞内）および工千ソ型（細胞外）１１を素
ａ、ｃｍ−セフ丁ロースＣＬ−６Ｂを用いたイオン交換
法により分離することができ、＃ＣＭ−セファロースＣ
Ｌ−６Ｂはダルとして引き渡されているカチオン交換体
である〔イオン−交換クロマトグラフィー、原理および
方法（Ｉｏｎ−ＩＥｘｅｈａｎｇ・Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒｍｐｈｙ、 Ｐｒ１ｎｃｉｐｌ＠ｓ ａｎｄ Ｍｓｔ
ｈｏｄｍ）、ファルアシーフィーネケミカルズ（Ｐｈａ
ｒｍａｅｉａＦｊｎｅ Ｃｈ＠ｍｉｃａ１ｍ）により編
集、１８頁参照〕・エンド戯活性は０．０１Ｍのアセテ
ート緩衝液中でｐＨ４，１で移行し、一方エキソ飄活性
はイオン交換体に固定され、しかる後エキソ型活性は緩
衝液（ＮａＣＬ ＯＭ 〜０．３ Ｍ ）中、塩の濃度
勾配法によって溶出されうる。セファクリル（Ｓ・ｐｈ
ａｅｒｙｌ）ｇ−ｚｏｏ（アリルデキストランを、Ｎ、
Ｎ’−メチレンビスアクリルア建ドで共有結合的に架橋
せしめることによって製造される、「グルー過、理論お
よび実際（Ｇ＠Ｉ Ｆｉｌｔｒａｔｌｏｎ、Ｔｈ＊ｏｒ
ｙ ａｎｄＰｒａｃｆｌｅ・）」、ファルマシーフィー
ネケミカルズ（Ｐｈａｒｍａｅｉａ Ｆｌｌｌ＠ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌｍ） Ｋよ抄−集。
ａ、ｃｍ−セフ丁ロースＣＬ−６Ｂを用いたイオン交換
法により分離することができ、＃ＣＭ−セファロースＣ
Ｌ−６Ｂはダルとして引き渡されているカチオン交換体
である〔イオン−交換クロマトグラフィー、原理および
方法（Ｉｏｎ−ＩＥｘｅｈａｎｇ・Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒｍｐｈｙ、 Ｐｒ１ｎｃｉｐｌ＠ｓ ａｎｄ Ｍｓｔ
ｈｏｄｍ）、ファルアシーフィーネケミカルズ（Ｐｈａ
ｒｍａｅｉａＦｊｎｅ Ｃｈ＠ｍｉｃａ１ｍ）により編
集、１８頁参照〕・エンド戯活性は０．０１Ｍのアセテ
ート緩衝液中でｐＨ４，１で移行し、一方エキソ飄活性
はイオン交換体に固定され、しかる後エキソ型活性は緩
衝液（ＮａＣＬ ＯＭ 〜０．３ Ｍ ）中、塩の濃度
勾配法によって溶出されうる。セファクリル（Ｓ・ｐｈ
ａｅｒｙｌ）ｇ−ｚｏｏ（アリルデキストランを、Ｎ、
Ｎ’−メチレンビスアクリルア建ドで共有結合的に架橋
せしめることによって製造される、「グルー過、理論お
よび実際（Ｇ＠Ｉ Ｆｉｌｔｒａｔｌｏｎ、Ｔｈ＊ｏｒ
ｙ ａｎｄＰｒａｃｆｌｅ・）」、ファルマシーフィー
ネケミカルズ（Ｐｈａｒｍａｅｉａ Ｆｌｌｌ＠ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌｍ） Ｋよ抄−集。
１２頁参照〕を用いた連続ｌ”Ａ−濾過法によって、実
際純粋のエキソ型活性が得られる。エンド戯活性の前方
分画が限外−過されそして、緩衝液を０、ＯＩＭのホス
フェート′緩衝液（ＰＨ７，０）と交換し丸。このエン
ド型酵素溶液をアニオン交換体ＤＥＡＥ−セファロース
（８＊ｐｈａｒｏｓ＠） ＣＬ −６Ｂにてイオン交換
し九〔「イオン−交換クロマトグラフィー、鳳凰および
実際（Ｉｏｎ−Ｅｘｅｈａｎｇ＠Ｃｈｒｏｒｎａｔｏｇ
ｒａｐｈｙ、Ｐｒ１ｎｃｌｐａｌ＠ｓ ａｎｄ Ｍ＠ｔ
ｈｏｄｓ）。
際純粋のエキソ型活性が得られる。エンド戯活性の前方
分画が限外−過されそして、緩衝液を０、ＯＩＭのホス
フェート′緩衝液（ＰＨ７，０）と交換し丸。このエン
ド型酵素溶液をアニオン交換体ＤＥＡＥ−セファロース
（８＊ｐｈａｒｏｓ＠） ＣＬ −６Ｂにてイオン交換
し九〔「イオン−交換クロマトグラフィー、鳳凰および
実際（Ｉｏｎ−Ｅｘｅｈａｎｇ＠Ｃｈｒｏｒｎａｔｏｇ
ｒａｐｈｙ、Ｐｒ１ｎｃｌｐａｌ＠ｓ ａｎｄ Ｍ＠ｔ
ｈｏｄｓ）。
ファルアシーフィーネケミカルズ（Ｐｈａｒｍａ＠ｊａ
Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｍ）により編集、１８頁参
照〕。
Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｍ）により編集、１８頁参
照〕。
これらの交換条件のもとで、エンド型酵素はイオン交換
体に固定され、引き続き、それは緩衝液（ＮａＣＬ、Ｏ
Ｍ 〜０．３Ｍ）中、塩の濃度勾配法によって溶出され
る。エンド型酵素を、ヒドロキ７アパタイトアガローズ
ダル（ＨＡ−超微ダル）を用い九吸着クロマドグ２フィ
ーにより更に精製し九。このようにして、非常に純粋な
エンド型およびエキソ型成分を得九〇 純粋なエンド型およびエキソ型活性により一、特定の抗
血清が、家兎の免疫処理により得られ九〇これらの抗血
清を基にして、エンド型およびエキソ型成分の定量的分
析は、Ｎ、Ｈ，ＡｘｅｌｍＩｎ等によって説明されてい
るように〔「定量的免疫電気泳動Ｏマユ。アル（Ａ Ｍ
ａｎｕａｌ ｏｆ ＱｕａｎｔｌｔａｔｉｖｖＩｍｍｕ
ｎｏ＠ｌ＊ａｔｒｏｐｈｏｒｓｓ１ｍ）、 １９７７年
−３７頁〕１０ケット免疫電気泳動法によりて行うこと
ができる・既知濃度（希釈系）のエンド盤およびエキソ
型成分の溶液をロケット免疫電気泳動法することによっ
て、濃度の対数とロケット下方域と関に殆ど直線関係が
存在することが見出された。対応する標準曲線を基準に
して、エンド盤およびエキソ鳳成分間の上記割合がイヌ
リナーゼ剤に対し計算できる・以下の事実が見出された
。すなわち、エンド盤およびエキソ型活性成分について
上記好ましい割合を有するイヌリン剤を使用する場合、
得ることのできる最大のイヌリン転化率（約９８−）が
、比較的短時間で達成される、というむとであるＯ しかしながら、ロケ、ト免疫電気泳動分析は活性なイヌ
リナーヤおよび不活性なイヌリナーゼを必らずしも区別
しないという事実の丸め、本発明に係る、イヌリナーゼ
剤のイヌリナーヤ活性卦よびインベルターゼ活性が下記
に示す酵素活性決定法によって決定され九〇イヌリナー
ゼ活性（エンド盤およびエキノ盤活性の双方を包含する
）は次の方法で決定される： 基質：アセテート緩衝液に溶解した５−イヌリフ （０
，１Ｍ ） ｐｉ（４，フ イ４−椿１ｗン １１１１の基質＋１ｄの酵素２０分
、５０℃ 停止剤： ４ ｄ Ｏ０，５Ｎ ＮａＯＨ分解され九
還元糖（フルクトースおよび少量のダルｊ−ス）は、ソ
モギーネルソン法（（３’ｏｕｒｎａｌｏｆ 引ｓｌｏ
ｇｉａａｌ Ｃｈ＠ｍ１ｓｔｒｙ、 １５３巻、３７５
〜３８０頁（１９４１年）〕によって定量的に決定され
る。
体に固定され、引き続き、それは緩衝液（ＮａＣＬ、Ｏ
Ｍ 〜０．３Ｍ）中、塩の濃度勾配法によって溶出され
る。エンド型酵素を、ヒドロキ７アパタイトアガローズ
ダル（ＨＡ−超微ダル）を用い九吸着クロマドグ２フィ
ーにより更に精製し九。このようにして、非常に純粋な
エンド型およびエキソ型成分を得九〇 純粋なエンド型およびエキソ型活性により一、特定の抗
血清が、家兎の免疫処理により得られ九〇これらの抗血
清を基にして、エンド型およびエキソ型成分の定量的分
析は、Ｎ、Ｈ，ＡｘｅｌｍＩｎ等によって説明されてい
るように〔「定量的免疫電気泳動Ｏマユ。アル（Ａ Ｍ
ａｎｕａｌ ｏｆ ＱｕａｎｔｌｔａｔｉｖｖＩｍｍｕ
ｎｏ＠ｌ＊ａｔｒｏｐｈｏｒｓｓ１ｍ）、 １９７７年
−３７頁〕１０ケット免疫電気泳動法によりて行うこと
ができる・既知濃度（希釈系）のエンド盤およびエキソ
型成分の溶液をロケット免疫電気泳動法することによっ
て、濃度の対数とロケット下方域と関に殆ど直線関係が
存在することが見出された。対応する標準曲線を基準に
して、エンド盤およびエキソ鳳成分間の上記割合がイヌ
リナーゼ剤に対し計算できる・以下の事実が見出された
。すなわち、エンド盤およびエキソ型活性成分について
上記好ましい割合を有するイヌリン剤を使用する場合、
得ることのできる最大のイヌリン転化率（約９８−）が
、比較的短時間で達成される、というむとであるＯ しかしながら、ロケ、ト免疫電気泳動分析は活性なイヌ
リナーヤおよび不活性なイヌリナーゼを必らずしも区別
しないという事実の丸め、本発明に係る、イヌリナーゼ
剤のイヌリナーヤ活性卦よびインベルターゼ活性が下記
に示す酵素活性決定法によって決定され九〇イヌリナー
ゼ活性（エンド盤およびエキノ盤活性の双方を包含する
）は次の方法で決定される： 基質：アセテート緩衝液に溶解した５−イヌリフ （０
，１Ｍ ） ｐｉ（４，フ イ４−椿１ｗン １１１１の基質＋１ｄの酵素２０分
、５０℃ 停止剤： ４ ｄ Ｏ０，５Ｎ ＮａＯＨ分解され九
還元糖（フルクトースおよび少量のダルｊ−ス）は、ソ
モギーネルソン法（（３’ｏｕｒｎａｌｏｆ 引ｓｌｏ
ｇｉａａｌ Ｃｈ＠ｍ１ｓｔｒｙ、 １５３巻、３７５
〜３８０頁（１９４１年）〕によって定量的に決定され
る。
ｌイヌリナーぜ活性単位は、先に示された条件のもとて
毎分１μモルの還元糖を形成し得る酵素の量として定義
される。
毎分１μモルの還元糖を形成し得る酵素の量として定義
される。
インベルターゼ活性（主にエキソ型成分を包含する）紘
次の方法で決定される： 基質：酢酸緩衝液に溶解した１０−シ飄クロース（０，
１Ｍ ） ｐＨ４，フ イ湘−憧り、ｙ：１１１１の基質＋Ｉｙｄの酵素２０分
、５０℃ 停止剤： １１１ｊｏ ０． Ｉ Ｎ ＮａＯＨ分解
されたグルコースは、ＣＯＤ −ＰＥＲＩＤ法（Ｉｎ５
ｔｒｕｃｔｉｏｎ ８ｈ＊＊ｔ＊ ｆｏｒ Ｍａ
ｎｕａｌ Ａｓｓ＠ｙｓ７ ７ ＋ Ｂｏ＠ｈｒ
ｉｎｇ＠ｒ Ｍａｎａｈ＊１ｍ ＧｍｂＨＤｌｍｇ
ａｏｓ−ｔｌｃｍ、８ｈ＊ｅｔ ２７７．４３９．６（
１）、ｌによって定量的に決定される。
次の方法で決定される： 基質：酢酸緩衝液に溶解した１０−シ飄クロース（０，
１Ｍ ） ｐＨ４，フ イ湘−憧り、ｙ：１１１１の基質＋Ｉｙｄの酵素２０分
、５０℃ 停止剤： １１１ｊｏ ０． Ｉ Ｎ ＮａＯＨ分解
されたグルコースは、ＣＯＤ −ＰＥＲＩＤ法（Ｉｎ５
ｔｒｕｃｔｉｏｎ ８ｈ＊＊ｔ＊ ｆｏｒ Ｍａ
ｎｕａｌ Ａｓｓ＠ｙｓ７ ７ ＋ Ｂｏ＠ｈｒ
ｉｎｇ＠ｒ Ｍａｎａｈ＊１ｍ ＧｍｂＨＤｌｍｇ
ａｏｓ−ｔｌｃｍ、８ｈ＊ｅｔ ２７７．４３９．６（
１）、ｌによって定量的に決定される。
イヌリナーゼを純粋な工牟ソ歴およびエンド盤成分に分
離することは先に十分説明されそしてそのように精製さ
れ九酵素製品は試験的研究（以下に説明されるいくつか
の実施例はそれから導びかれる）において用いられ良け
れども、本発明の大規模実施は、好ましい微生物の菌株
の培養によって生産祷れる工業的純度の酵素（すなわち
、高純度ではない酵素製品）を用いて正常に実施される
。
離することは先に十分説明されそしてそのように精製さ
れ九酵素製品は試験的研究（以下に説明されるいくつか
の実施例はそれから導びかれる）において用いられ良け
れども、本発明の大規模実施は、好ましい微生物の菌株
の培養によって生産祷れる工業的純度の酵素（すなわち
、高純度ではない酵素製品）を用いて正常に実施される
。
加えて、もしも大規模の設備に対し有用である特定のイ
ヌリン給源基質にマツチさせる九めに、工業的等級の酵
素剤のエンド盤およびエキソ屋イヌリナーぜの割合を作
る要求がある場合、先に述べ九如き混合イヌリナーゼ酵
素の分画は当業者の通常の選択とはなシえないであろう
。
ヌリン給源基質にマツチさせる九めに、工業的等級の酵
素剤のエンド盤およびエキソ屋イヌリナーぜの割合を作
る要求がある場合、先に述べ九如き混合イヌリナーゼ酵
素の分画は当業者の通常の選択とはなシえないであろう
。
幾分優勢なエンド盤又は工呼ソ麗イヌリナーゼの添加紘
好ましいもので６９、この場合いずれも酵素剤に対し適
当である（異った菌株を培養することによって生産され
る）。
好ましいもので６９、この場合いずれも酵素剤に対し適
当である（異った菌株を培養することによって生産され
る）。
要約すると、イヌリンは６０〜６５℃で加水分解され、
次いで加水分解はイヌリナーぜ中のエンド盤および工中
ノ屋成分比が上述の１〜７対７〜１０重量比にある場合
、最奄有効である。加水分解プロセス中殆ど剛生成物は
形成されない０生成フルクトースシロ、デは常法により
濃縮されそして精製できる。別に、可能ならばグルコー
スから分離後フルクトースは結晶化されフルクトース結
晶を与える。
次いで加水分解はイヌリナーぜ中のエンド盤および工中
ノ屋成分比が上述の１〜７対７〜１０重量比にある場合
、最奄有効である。加水分解プロセス中殆ど剛生成物は
形成されない０生成フルクトースシロ、デは常法により
濃縮されそして精製できる。別に、可能ならばグルコー
スから分離後フルクトースは結晶化されフルクトース結
晶を与える。
以下本発明を更に実施例により説明するが、本発明はこ
れに限定されるものではない・実施例１ イネリナーゼ生産微生物の増殖 アスペルギウス フィクウム（Ａｓｐｅｒ ｉｌｌｕａ
ｆｊｅｕｕｍ）（人５２４）を次の方法で増殖させた二
ａｓ材料の増殖 種子培養株を、下記の組成を有する寒天斜面上で３７℃
で７日間増殖させた：ｉＬ 酵母エキス〔ディフコ（Ｄｌｆｅｏ））・・・叫・・
〜に、ＨＰＯ４・・・・−・・・・・・・・・・四重・
・・・曲・・曲・・・・・・・・ ＩＫｇＢＯ４，７Ｈ
２０・・・四重曲・・・・・・・・・叩・・・・・・・
・０．５グルコース・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・１５
庫天〔ディフコ（Ｄｊｆ＠ｏ））・・・・・・曲・・・
・・・・・・・・ １５水で１０００１００Ｏにする。
れに限定されるものではない・実施例１ イネリナーゼ生産微生物の増殖 アスペルギウス フィクウム（Ａｓｐｅｒ ｉｌｌｕａ
ｆｊｅｕｕｍ）（人５２４）を次の方法で増殖させた二
ａｓ材料の増殖 種子培養株を、下記の組成を有する寒天斜面上で３７℃
で７日間増殖させた：ｉＬ 酵母エキス〔ディフコ（Ｄｌｆｅｏ））・・・叫・・
〜に、ＨＰＯ４・・・・−・・・・・・・・・・四重・
・・・曲・・曲・・・・・・・・ ＩＫｇＢＯ４，７Ｈ
２０・・・四重曲・・・・・・・・・叩・・・・・・・
・０．５グルコース・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・１５
庫天〔ディフコ（Ｄｊｆ＠ｏ））・・・・・・曲・・・
・・・・・・・・ １５水で１０００１００Ｏにする。
振盪フラスコの播種
イヌリナーゼ生産微生物の増殖は、刻み目および接種ゴ
ム栓を備えた５ｏｏ−のエルレンマイヤーフ２スコ中で
行なわれる。
ム栓を備えた５ｏｏ−のエルレンマイヤーフ２スコ中で
行なわれる。
１個の寒天斜面管から接種材料け、ワイヤリング（Ｗｈ
ｌｒｌｎｇ）ミキナーで連続振盪させながら寒天斜面上
に０．１−のツウィーン（Ｔｗ・・ｎ）８０を含有する
９−の滅菌水を注加することによって調製された。全懸
濁液が、１個の振盪フラスコの播種の九めに用いられ九
。
ｌｒｌｎｇ）ミキナーで連続振盪させながら寒天斜面上
に０．１−のツウィーン（Ｔｗ・・ｎ）８０を含有する
９−の滅菌水を注加することによって調製された。全懸
濁液が、１個の振盪フラスコの播種の九めに用いられ九
。
増殖
振盪フラスコ中の増殖は、以下の成分を有する基質１０
０ｄを用いて３７℃で７日間行なった：〃 コーンステイーｆ’）カー・・・・・・・・・・・・
ゝ２ＱＮＨ４Ｈ，ＰＯ４・−・・・・・回・曲・・・・
・・・・・・・・・・・・・ １２ＫＣ１・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・曲
・・・・・・・・ ０．７Ｍｇ８０４．７Ｈ２０・・・
・・・曲・・叫・・叫・・叩・・ ０．５に２ＨＰＯ４
・・・・・・・・・・・・・・・・・曲・・・叫・・・
・・・・・ １０．０Ｆ＠ＳＯ４，７Ｈ，０・・・・曲
・・・・町・・町・・・・・・・・ ０．１シ、クロー
ス・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・ ２５ＣａＣＯｊ ・・・・・・・・・・
・・・・四重・団・可曲・叫・・０．０５ｆルロ−ツ１
（ＰｌｕｒｏｎＩｅ）・・・・・・叫・団・・・°・・
・０．１オートクレーグ処理に先立ち、基質の−を４．
５に調整した◎以下の収率が得られ九二 夾施例２ 二種のイヌリナーゼ成分の作用汲 ダリャ根シダＹ（Ｓ１ｍｍ）ＡＩ−３７５４から得たイ
ヌリン（以下単にシグマイヌリンという）９０ｊｌを熱
水に溶解し全重量を４５０ｐとした。
０ｄを用いて３７℃で７日間行なった：〃 コーンステイーｆ’）カー・・・・・・・・・・・・
ゝ２ＱＮＨ４Ｈ，ＰＯ４・−・・・・・回・曲・・・・
・・・・・・・・・・・・・ １２ＫＣ１・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・曲
・・・・・・・・ ０．７Ｍｇ８０４．７Ｈ２０・・・
・・・曲・・叫・・叫・・叩・・ ０．５に２ＨＰＯ４
・・・・・・・・・・・・・・・・・曲・・・叫・・・
・・・・・ １０．０Ｆ＠ＳＯ４，７Ｈ，０・・・・曲
・・・・町・・町・・・・・・・・ ０．１シ、クロー
ス・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・ ２５ＣａＣＯｊ ・・・・・・・・・・
・・・・四重・団・可曲・叫・・０．０５ｆルロ−ツ１
（ＰｌｕｒｏｎＩｅ）・・・・・・叫・団・・・°・・
・０．１オートクレーグ処理に先立ち、基質の−を４．
５に調整した◎以下の収率が得られ九二 夾施例２ 二種のイヌリナーゼ成分の作用汲 ダリャ根シダＹ（Ｓ１ｍｍ）ＡＩ−３７５４から得たイ
ヌリン（以下単にシグマイヌリンという）９０ｊｌを熱
水に溶解し全重量を４５０ｐとした。
−を６０℃で４．５に調整し、二個のフラスコの各各を
溶液１５０Ｉで満たした。フラスコに電磁攪拌機を設置
しそして６０Ｃの湯浴中に取りつけた。
溶液１５０Ｉで満たした。フラスコに電磁攪拌機を設置
しそして６０Ｃの湯浴中に取りつけた。
第一のフラスコに、イヌリン１１当たシ２．２イヌリナ
ーゼ単位に相当する０、１７５ｗ１ｌの純粋な工牟ノ数
イヌリナーゼ成分を添加した〇他のフラスコには１４単
位／ＩイヌリンＩＪ’ＩＣ−相轟する０、７−の純粋な
エンド型成分を添加した。
ーゼ単位に相当する０、１７５ｗ１ｌの純粋な工牟ノ数
イヌリナーゼ成分を添加した〇他のフラスコには１４単
位／ＩイヌリンＩＪ’ＩＣ−相轟する０、７−の純粋な
エンド型成分を添加した。
エキソ凰およびエンド臘酵素を、実施例１で説明したよ
うにアスペルギルスフイクウム（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｆｉｃｕｕｍ） Ａ ５２４から生産し、次いで以
下にのべる如く分離した。
うにアスペルギルスフイクウム（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ
ｓ ｆｉｃｕｕｍ） Ａ ５２４から生産し、次いで以
下にのべる如く分離した。
サンプルを一定間隔の時間に取抄出し、次いで酵素を不
活にするため沸騰水中１０分間加熱した。
活にするため沸騰水中１０分間加熱した。
冷却後、サンプルを濾過し、次いでｒルクロマトグラフ
ィーによる分析を行う面に混床イオン交換樹脂（Ｂｌｏ
−Ｒａｄ Ａｇ ５０１− Ｘ ８ （Ｄ））と共に加
熱し灰分および可溶性Ｎを除去した。
ィーによる分析を行う面に混床イオン交換樹脂（Ｂｌｏ
−Ｒａｄ Ａｇ ５０１− Ｘ ８ （Ｄ））と共に加
熱し灰分および可溶性Ｎを除去した。
４時間および４８時間反応後のクロマトグラムを第１．
２．３および４図に示す。二種の酵素の作用戴は全ぐ異
るものである０ エキソ屋酵素は主にＤＰ、を形成し、ＤＰ、およびＤＰ
、４間にわずかに小ピークが見られる。このことは、イ
ヌリン分子がフルクトース端部から段階的にフルクトー
スおよびグルコースに分解している作用臘を示す。反対
にエンド截酵素は主にＤＰ、ないしＤＰ・並びにＤＰ、
およびＤＰ、のわずかな小ピークの形成をもたらす。こ
れは典臘的な細胞内攻撃パター／であるｏしかしながら
、このエンド蚤イヌリナーゼにより、明らかにＤＰ、お
よびＤＰ、グループも分裂して放出されるが、エキソ屋
酵素に見られるよシははるかに遅い速度でなされる。
２．３および４図に示す。二種の酵素の作用戴は全ぐ異
るものである０ エキソ屋酵素は主にＤＰ、を形成し、ＤＰ、およびＤＰ
、４間にわずかに小ピークが見られる。このことは、イ
ヌリン分子がフルクトース端部から段階的にフルクトー
スおよびグルコースに分解している作用臘を示す。反対
にエンド截酵素は主にＤＰ、ないしＤＰ・並びにＤＰ、
およびＤＰ、のわずかな小ピークの形成をもたらす。こ
れは典臘的な細胞内攻撃パター／であるｏしかしながら
、このエンド蚤イヌリナーゼにより、明らかにＤＰ、お
よびＤＰ、グループも分裂して放出されるが、エキソ屋
酵素に見られるよシははるかに遅い速度でなされる。
実施例３
エキソ臘およびエンド型成分の混合
シダｑ （ｓＩｇｍｍ）イヌリン１６０Ｊ’ｔ−熱水に
溶解し全重量を５ｏｏＩＩとした。−を約６０℃で４．
５に調整した。７個のフラスコの各々に溶液１００Ｆを
満たし、電磁攪拌器を装着せしめ次いで６０℃の湯浴に
取りつけた。
溶解し全重量を５ｏｏＩＩとした。−を約６０℃で４．
５に調整した。７個のフラスコの各々に溶液１００Ｆを
満たし、電磁攪拌器を装着せしめ次いで６０℃の湯浴に
取りつけた。
エンド減およびエキン臘成分を、蛋白質基準について全
酵素量を一定に保持しながらフラスコに添加し九が、エ
ンド減およびエキソ臘酵素間の割合は次の表に従って変
えた・ Ｉ Ｃ１） ０．１９２ ０ ０．
５４２ ７ ０．１６ｇ ０．０２４
０．９２３ ３ ０．１４４ ０．０４Ｂ
１．３４ １ ０．０９６ ０．０９６
２．１５ １４ ０．０４Ｂ ０．１４４
２．８６ １／７ ０．０２４ ０．１６８
３．２７ ０ ０ ０．１９２
３．６エ／ド型酵素１ｄおよびエキソ盟酵素１ｊｌｌｊ
は蛋白質基準で同量の酵素を有していた。
酵素量を一定に保持しながらフラスコに添加し九が、エ
ンド減およびエキソ臘酵素間の割合は次の表に従って変
えた・ Ｉ Ｃ１） ０．１９２ ０ ０．
５４２ ７ ０．１６ｇ ０．０２４
０．９２３ ３ ０．１４４ ０．０４Ｂ
１．３４ １ ０．０９６ ０．０９６
２．１５ １４ ０．０４Ｂ ０．１４４
２．８６ １／７ ０．０２４ ０．１６８
３．２７ ０ ０ ０．１９２
３．６エ／ド型酵素１ｄおよびエキソ盟酵素１ｊｌｌｊ
は蛋白質基準で同量の酵素を有していた。
一定間隔の時間に、サンプルを取シ出しそして酵素活性
を不活化するため熱騰水の浴中１０分間加熱した〇冷却
後、サンプルを一過し次いでＨＰＬＣで分析する前に混
合床イオン交換樹脂 （Ｂｌｏ−Ｒａｄ ＡＧ ５０１−Ｘ８（Ｄ刀で処理し
灰分および可溶性Ｎを除去した。結果を下記の表に示す
・クロマトグラムによれば、グルコースは全ての場合に
他のピーク、おそらくはジフルクトースから分離するこ
とができない。大量の線化合物が、グルコースに対して
のわずか変化した保持時間内で反射される。ＤＰ４は４
又はそれ以上の鎖長の糖類を含む。
を不活化するため熱騰水の浴中１０分間加熱した〇冷却
後、サンプルを一過し次いでＨＰＬＣで分析する前に混
合床イオン交換樹脂 （Ｂｌｏ−Ｒａｄ ＡＧ ５０１−Ｘ８（Ｄ刀で処理し
灰分および可溶性Ｎを除去した。結果を下記の表に示す
・クロマトグラムによれば、グルコースは全ての場合に
他のピーク、おそらくはジフルクトースから分離するこ
とができない。大量の線化合物が、グルコースに対して
のわずか変化した保持時間内で反射される。ＤＰ４は４
又はそれ以上の鎖長の糖類を含む。
ＤＰ１〜ＤＰ、は１（グルコースおよびフルクトースを
除く）ないし４の鎖長を有するｍ類である。
除く）ないし４の鎖長を有するｍ類である。
実施例から最も有効な加水分解は、エンド型／工中ン厘
の割合が約１である場合に行なわれることが判明する
以下余白実施例４ 基質の調製 乾燥チコリ−根の薄片２２．８ｋｌを、自然ＰＨ５，３
で約１時間７５℃で水２２７＃を用いて抽出する。
の割合が約１である場合に行なわれることが判明する
以下余白実施例４ 基質の調製 乾燥チコリ−根の薄片２２．８ｋｌを、自然ＰＨ５，３
で約１時間７５℃で水２２７＃を用いて抽出する。
混合物を濾過し、次ｉで湿潤根を３０分間７５℃で水１
５０＃を用いて再たび抽出した。二回の抽出の結果、３
．５０ブリ、クス度と測定され九乾物含量を有する抽出
物２９５ノを得た。
５０＃を用いて再たび抽出した。二回の抽出の結果、３
．５０ブリ、クス度と測定され九乾物含量を有する抽出
物２９５ノを得た。
抽出物を石灰処理して精製する。Ｃｍ （ＯＲ） ２の
各々が６８７１である２つの部分を３５〜４０℃の灘度
で連続的に加える。４０〜４５℃で一過を行なう。二酸
化炭素をろ液に添加し、これにより一を約７に減少させ
た。沈殿物は観察されない。
各々が６８７１である２つの部分を３５〜４０℃の灘度
で連続的に加える。４０〜４５℃で一過を行なう。二酸
化炭素をろ液に添加し、これにより一を約７に減少させ
た。沈殿物は観察されない。
溶液を、活性炭素（乾燥機に対し２−の炭素）を用い７
５℃で３０分間処理する・訳索を濾過法によシ除去し、
次いで溶液を真空蒸発させ約２４’ブリ、クス度の乾物
含量とした。得られたイヌリン溶液は帯褐色を有してい
た。
５℃で３０分間処理する・訳索を濾過法によシ除去し、
次いで溶液を真空蒸発させ約２４’ブリ、クス度の乾物
含量とした。得られたイヌリン溶液は帯褐色を有してい
た。
イヌリン抽出物の加水分解
約８００１１ｊＣ）上記イヌリン溶液を２０°のグリツ
ク度まで希釈し、−を４．５に調整し、次いで溶液を、
各々１００Ｊ’の溶液を用いて７個のフラスコに分割し
た。フラスコに磁気攪拌器を取りつけ、６０℃の湯浴に
置い九。
ク度まで希釈し、−を４．５に調整し、次いで溶液を、
各々１００Ｊ’の溶液を用いて７個のフラスコに分割し
た。フラスコに磁気攪拌器を取りつけ、６０℃の湯浴に
置い九。
エンド渥およびエキソ厘酵素を、蛋白質基準に対し全酵
素量を一定に保ちつつフラスコに添加したが、エンド聾
−エキノ型成分の割合は次の表に従って炭化させ九〇 エンド減酵素ＩＷ１１およびエキソ屋酵素１ｄは蛋白質
重量基準で、はぼ同量の酵素成分を有してい九〇 一定間隔の時間に、サンプルを引き出しそして酵素活性
を不活化するため沸騰水浴中１０分間加熱した。冷却後
、酵素添加していない基質のサンプルを含めて、サンプ
ルを一過し次いでＨＰＬＣによる分析の前に混参床イオ
ン交換樹脂 （Ｂｌｏ−Ｒｅｄ ＡＧ ５０１−Ｘ８（Ｄ刀にて処理
し灰分および可溶性Ｎを除去し九〇結果を第１ＩＮ表お
よび第■表に示す。
素量を一定に保ちつつフラスコに添加したが、エンド聾
−エキノ型成分の割合は次の表に従って炭化させ九〇 エンド減酵素ＩＷ１１およびエキソ屋酵素１ｄは蛋白質
重量基準で、はぼ同量の酵素成分を有してい九〇 一定間隔の時間に、サンプルを引き出しそして酵素活性
を不活化するため沸騰水浴中１０分間加熱した。冷却後
、酵素添加していない基質のサンプルを含めて、サンプ
ルを一過し次いでＨＰＬＣによる分析の前に混参床イオ
ン交換樹脂 （Ｂｌｏ−Ｒｅｄ ＡＧ ５０１−Ｘ８（Ｄ刀にて処理
し灰分および可溶性Ｎを除去し九〇結果を第１ＩＮ表お
よび第■表に示す。
「グルコース」は、グルコースおよび他の成分、多分ジ
フルクトース、これはクロマトグラムでは分離されてい
ないが、それらの合計量で示される。
フルクトース、これはクロマトグラムでは分離されてい
ないが、それらの合計量で示される。
ＤＰ４＋は４又はそれ以上の鎖長を有する糖類に加えて
該サンプル中不純物例えば塩および蛋白質、を有する糖
類である。
該サンプル中不純物例えば塩および蛋白質、を有する糖
類である。
ＤＰｌないしＤＰ、はグルコースおよびフルク） −ス
を除いて、工ないし４の鎖長を有する糖類である。
を除いて、工ないし４の鎖長を有する糖類である。
本実験における最終グルコース収率は、相当に高く、低
い平均鎖長のフルクトースｆリマーを示すＯ しかし、ここで４又最も有効な加水分解は、エンドｍ／
エキソ屋酵素比が１に近い場合に行なわれることが分か
る〇 第１表 イヌリン基質の組成 フルクトース ・・・・・・・・・・・・・・・・・・
０．７−グルコース ・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・ ０．２％シュクロース・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・５．５％ＤＰ、 ・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・９０．４チＤＰＩ−ＤＰ、・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・ ３．２５１以下余白 実施例５ 各フラスコが−４，５の２０−のシダｗ （ｇｉｇ（Ｂ
ｍ）イヌリン溶液１００ＩＩを含有するフラスコを６個
準備した。フラスコＫａ気攪拌器を装着せしめついで６
０℃の湯浴中に取りつけ九〇 エンド屋および工中ソ鳳イヌリナーぜ酵素を、実施例３
におけるよ抄もより狭い範ｓＫ酵素活性を保持したフラ
スコに添加したが、工／ド盟および工中ソ屋酵素の割合
を、次表に従って重量単位で決められ九如く変えた〇 ａｏ ψ ０，６７４・１
０．６ ０．９０２．７
０．４ ０．８Ｂ１．３５ ０．２
０．９５０．４５ ０．０？
１．０００ ０ １．０９
一定間隔の時間に、サンプルを引き出し、酵素を不活化
するため沸騰水浴中１０分間加熱した。
い平均鎖長のフルクトースｆリマーを示すＯ しかし、ここで４又最も有効な加水分解は、エンドｍ／
エキソ屋酵素比が１に近い場合に行なわれることが分か
る〇 第１表 イヌリン基質の組成 フルクトース ・・・・・・・・・・・・・・・・・・
０．７−グルコース ・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・ ０．２％シュクロース・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・５．５％ＤＰ、 ・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・９０．４チＤＰＩ−ＤＰ、・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・ ３．２５１以下余白 実施例５ 各フラスコが−４，５の２０−のシダｗ （ｇｉｇ（Ｂ
ｍ）イヌリン溶液１００ＩＩを含有するフラスコを６個
準備した。フラスコＫａ気攪拌器を装着せしめついで６
０℃の湯浴中に取りつけ九〇 エンド屋および工中ソ鳳イヌリナーぜ酵素を、実施例３
におけるよ抄もより狭い範ｓＫ酵素活性を保持したフラ
スコに添加したが、工／ド盟および工中ソ屋酵素の割合
を、次表に従って重量単位で決められ九如く変えた〇 ａｏ ψ ０，６７４・１
０．６ ０．９０２．７
０．４ ０．８Ｂ１．３５ ０．２
０．９５０．４５ ０．０？
１．０００ ０ １．０９
一定間隔の時間に、サンプルを引き出し、酵素を不活化
するため沸騰水浴中１０分間加熱した。
冷却後、サングルを一過し、次いでＨＰＬＣで分析する
前に混合床イオン交換樹脂（ＢＩｏ−Ｒａｄ ＡＧ５０
１−Ｘ８ （Ｄ））で処理し灰分および可溶性Ｎを除去
し九〇結果を第ＭＩＮＫ示す。
前に混合床イオン交換樹脂（ＢＩｏ−Ｒａｄ ＡＧ５０
１−Ｘ８ （Ｄ））で処理し灰分および可溶性Ｎを除去
し九〇結果を第ＭＩＮＫ示す。
グルコースは、グルコースおよび他Ｏ成分、多分ジフル
クトース、これ拡りロｉトゲラムで分離できないパ線両
者の合量である。ＤＰ４ は４又はそれ以上の鎖長を
有する糖類であるｏＤＰ、ないシＤＰＩはグルコースお
よびフルクトースを除いて１なＺｌ、、４の鎖長含有す
る糖類である０この実験においては、約１単位の用量に
対し最も有効な加水分解線、重量的に決定された比が４
．１である場合Ｋｌ！められる。 以下余白実
施例６ 各々が−４，５の２６ ＠ Ｗ／Ｗのシグマ（８１１ｍ
ｍ）身ヌリン溶液１０（ｌを含有する２個のフラスコを
調製した０両フラスコに電磁攪拌器を装着せしめ、それ
ぞれ６０℃および６５℃の湯浴に取りつけた〇 人、フイクウム（Δ、ｆｉａｕｗｍ）ム、５２４０生産
するイヌリナーセ酵素を、２．８単位／イＸリン１１の
用量で添加したＯＡ、フイクウム（４，ｆｌａｕｔｒｍ
）の生産するイヌリナーぜはエンド臘／工呼ソ朦の割合
ｌを有していた。
クトース、これ拡りロｉトゲラムで分離できないパ線両
者の合量である。ＤＰ４ は４又はそれ以上の鎖長を
有する糖類であるｏＤＰ、ないシＤＰＩはグルコースお
よびフルクトースを除いて１なＺｌ、、４の鎖長含有す
る糖類である０この実験においては、約１単位の用量に
対し最も有効な加水分解線、重量的に決定された比が４
．１である場合Ｋｌ！められる。 以下余白実
施例６ 各々が−４，５の２６ ＠ Ｗ／Ｗのシグマ（８１１ｍ
ｍ）身ヌリン溶液１０（ｌを含有する２個のフラスコを
調製した０両フラスコに電磁攪拌器を装着せしめ、それ
ぞれ６０℃および６５℃の湯浴に取りつけた〇 人、フイクウム（Δ、ｆｉａｕｗｍ）ム、５２４０生産
するイヌリナーセ酵素を、２．８単位／イＸリン１１の
用量で添加したＯＡ、フイクウム（４，ｆｌａｕｔｒｍ
）の生産するイヌリナーぜはエンド臘／工呼ソ朦の割合
ｌを有していた。
一定間隔の時間に、サンプルを取り出しそして酵素を不
活化するため沸騰水中１０分間加熱した。
活化するため沸騰水中１０分間加熱した。
冷却後、サンプルを濾過しそして１ｌＰＬｃで分析する
前に混會床イオ／交換樹脂（引ｏ−Ｒａｄ ＡＧ５０１
−Ｘ８（Ｄ刀を用いてｌ＆還し灰分および可溶性Ｎを除
去した。
前に混會床イオ／交換樹脂（引ｏ−Ｒａｄ ＡＧ５０１
−Ｘ８（Ｄ刀を用いてｌ＆還し灰分および可溶性Ｎを除
去した。
次の結果を得た： 以ト余白上記
表よシ９９−を超える完全に加水分解したフルクトース
および「グルコース」含量が咳酵素剤および用量を用い
ることによって得られることが分かる。
表よシ９９−を超える完全に加水分解したフルクトース
および「グルコース」含量が咳酵素剤および用量を用い
ることによって得られることが分かる。
第１図および第３図は、工呼ソ鳳酵素の酵素活性を示す
クロマトグラムを示す図表であり、第２図および第４図
はエンド臘酵素の酵素活性を示す図表である。 特許出願人 ノゲ インダストリ アクテイーゼルスカプ特許出願代
理人 弁理士 青 木 朗 弁理士西舘和之 弁理士 内 １）幸 男 弁理士 山 口 昭 之 １）Ｐ。
クロマトグラムを示す図表であり、第２図および第４図
はエンド臘酵素の酵素活性を示す図表である。 特許出願人 ノゲ インダストリ アクテイーゼルスカプ特許出願代
理人 弁理士 青 木 朗 弁理士西舘和之 弁理士 内 １）幸 男 弁理士 山 口 昭 之 １）Ｐ。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、微生物イヌリナー餐剤でイヌリンを加水分解すゐプ
ロセスでｈり、て、エキソ蓋イヌリナーゼに対するエン
Ｐ履イヌリナーーｗｅ割舎を重量基準で１：１０ないし
１０：１０ｍ１ｍ１に有するイヌリナーぜ剤の有効量の
存在下、６０〜ｓ ｓ ＣＯ＠囲Ｏ温皮で−３，ｓな−
Ｌ？０水性場地中イヌリン會加水分解すること１＊＊と
し、これによ〕イヌリンが酵素的に完全に加水分解され
る、前記プロセスリ λ 前記割合が７＝１ないし１：ＴＯ＠囲内にある、特
許請求の範囲第１項記載婚ｆｕセス。 龜 前記割合がｌ：２なｈＬ４ ： １０ｍ１ｌｌ内に
６！、４１Ｎ１１１１求４Ｄ＠１Ｉｊ１１項ｌｅ＠ｏｆ
ａ竜ｘ。 本 前記イヌリナーぜ剤が、アスベにギルスフィタクム
（Ａｓ ＠ｒ ｌｌｌｗｎ ｆｉｇ＋＋ｎｍ） ０曹株
によりて生態されるイヌソナー１８合物を培養すること
によって得られるイ）Ｎｌナーゼを含んでなる、特許請
求ｏｍｖａ第１項記載Ｏｆａ＊ｘ。 翫 イヌリナー臂剤Ｏ用量がイヌリン１ｊに対しａ、２
８ Ｎ１０）”Ｉギ一単位の範囲にある、特許請求０１
ｍ８ＪＩＥＩＩＩ記載０：１１セス。 ＆ エキノ臘イヌ曹ナー−４１１１に対するエンド皺イ
ヌリナーゼの割合を重量基準で１＝１０ないし１０：１
０ｍ！ＩＩＫ有するイヌリナーぜ剤Ｏ有効量Ｏ存畿下、
６０〜ｌｌ＄’ｃＯ＠ｌＩＯ温度で−３，５す−し７の
水性場地中イヌリンを加水分解すること１０黴とし、こ
れによルイヌリンが酵素的に完全に加水分解されゐ、黴
虫物イヌリナーぜでイヌリンを加水−公簿するプロセス
を行なうためのイヌリナーぜ剤であって、諒イヌリナー
ぜ剤がエキソ臘イヌリｔ−ヤ活性に対する工ｙｙｘｎイ
ヌリナーゼ活性七重量基準で１：１Ｇないし１０：ＩＣ
）＠棚内で示すことｔ４Ｉ像とする、前記イヌリｔ−ヤ
剤。 ７、前記イヌリｔ−ぜ剤が、イヌリナー髪生産菌株アス
ペルギルス７゛イクウム（Ａｓｐ＊ｒｇｌｌ１ｍｉｆｌ
ｅｍ＠ｍ）！培養すゐことによりて得られる、特許請求
Ｏ範囲第６項記載Ｏイヌリナーゼ剤。 ＆ 前記イヌリナーゼ剤が、アスペルギルスフイタクム
（Ａｓｐ＊ｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌ＠ｕｕｎｓ）菌株ｃＢ
ｓａｓｓａｓ會培費することによりて得られる、特許請
求の範囲第７項記載のイヌリナーぜ剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK189181A DK147409C (da) | 1981-04-29 | 1981-04-29 | Fremgangsmaade til hydrolysering af inulin ved hjaelp af et aspergillus ficuum-inulinasepraeparat |
| DK1891/81 | 1981-04-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS589695A true JPS589695A (ja) | 1983-01-20 |
Family
ID=8108848
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57072477A Pending JPS589695A (ja) | 1981-04-29 | 1982-04-28 | イヌリンの加水分解プロセス |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS589695A (ja) |
| BE (1) | BE893013A (ja) |
| CA (1) | CA1184519A (ja) |
| DK (1) | DK147409C (ja) |
| FR (1) | FR2504939A1 (ja) |
| NL (1) | NL8201763A (ja) |
| YU (1) | YU42763B (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3508387C1 (de) * | 1985-03-08 | 1986-07-17 | Günter Prof. Dr.-Ing. 1000 Berlin Bärwald | Verfahren zur Herstellung eines glukosearmen Aufschlussproduktes aus inulinhaltigen Pflanzenteilen |
| JPS62208277A (ja) * | 1986-03-07 | 1987-09-12 | Meiji Seika Kaisha Ltd | イヌリナ−ゼの製造法 |
| EP0429077A3 (en) * | 1989-11-24 | 1991-11-13 | Mitsui Toatsu Chemicals, Incorporated | Process for producing inulooligosaccharides |
| BE1010450A3 (nl) * | 1996-08-01 | 1998-08-04 | Tiense Suikerraffinaderij Nv | Werkwijze voor het maken van een fructosestroop rijk aan fructose. |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL7811389A (nl) * | 1978-11-18 | 1980-05-20 | Stamicarbon | Bereiding van fructose. |
| NL8003723A (nl) * | 1980-06-27 | 1982-01-18 | Stamicarbon | Inulinase. |
-
1981
- 1981-04-29 DK DK189181A patent/DK147409C/da not_active IP Right Cessation
-
1982
- 1982-04-26 YU YU896/82A patent/YU42763B/xx unknown
- 1982-04-28 FR FR8207341A patent/FR2504939A1/fr active Granted
- 1982-04-28 BE BE6/47647A patent/BE893013A/fr not_active IP Right Cessation
- 1982-04-28 NL NL8201763A patent/NL8201763A/nl not_active Application Discontinuation
- 1982-04-28 JP JP57072477A patent/JPS589695A/ja active Pending
- 1982-04-28 CA CA000401901A patent/CA1184519A/en not_active Expired
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MEMOIRS OF OSAKA KYOIKU UNIVERSITY,SER.3=1980 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| YU89682A (en) | 1984-10-31 |
| DK189181A (da) | 1982-10-30 |
| FR2504939A1 (fr) | 1982-11-05 |
| DK147409B (da) | 1984-07-23 |
| BE893013A (fr) | 1982-10-28 |
| NL8201763A (nl) | 1982-11-16 |
| YU42763B (en) | 1988-12-31 |
| DK147409C (da) | 1985-03-11 |
| FR2504939B1 (ja) | 1985-03-01 |
| CA1184519A (en) | 1985-03-26 |
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