JPS5878596A - 新規な酸性ヘテロ多糖類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規、な酸性へテロ多糖類に関する。

従来、粘質多糖類は粘着性、粘稠性などの性質からその
利用範囲は広（１食料品、化粧品への添加剤として、さ
らに接着剤、被覆剤、凍結安定剤。

潤滑剤、ドリリングマッド添加剤及び油田における石油
回収用剤等として各方面への用途が開発されつつある。

また近年、ある種の多糖類の抗腫瘍性作用、血圧降下作
用等の薬理作用が認められるに至り、医薬としての利用
範囲の拡大も期待されている。

そしである種の微生物が多糖類を生産することは公知で
あり、たとえばアルカリ土類金属、バチルス属、キサン
トモナス属、アセトバクター属。

アゾトバクタ−属、シュードモナス属、ロイコノストッ
ク属あるいはオーレオバシジウム属等の菌株の生産する
ものが知られている。

多糖類を生産することも公知である。即ちアセトバクタ
ー・キシリナムが生産するセルロースが著名であり（Ｊ
、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　’１９　＊　／　７λ（］ｇｇ
ｔ）；　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、ｓ　／Ｌ１．　３１１３
（／　９　、ｔ４ｔ）　）、　サらにアセトイぐフタ−
・レバニカムがレバｙ　（Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｊ、Ｊ７．４１１０（／９１ｔ３）〕を、そしてアセト
バクター・カブシュレイタムがデキヌトラン〔Ｃａｒｂ
ｏｈｙｄｒ、　Ｒｅｓ、、−乙ｊ、２７１（１９７り〕
〕を生産することが知られており、そしてまた、アセト
バクター・キシリナムの自然変異株からグルコース。

マンノース、ラムノース、グルクロンｌｌ構成成分とす
る含窒素多糖類が分離されたことも報告されている（　
Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、λ２．！ワタｔ
ＯＪ（１９ｇ／）〕。

本発明者らは、微生物による安全性の高い高粘性の多糖
類の生産を意図し、古ぐから人類の食料に供され歴史的
にその安全性が確かめられている各種発酵食品の醸造過
程に関与する微生物の多糖類の生産能を広く検索した結
果１食酢の発酵醪から分離した酢酸菌であるアセトバク
ター属の菌株がグルコース、ガラクトース、マンノース
、グルクロン酸を主要構成成分とする多糖類を生産する
こと、そしてこの多糖類が従来知られている微生物の生
産する多糖類とは異なる新規な酸性へテロ多糖類である
ことを見出し、これに基いて本発明を完成した。

すなわち、本発明はグルコース、ガラクトース。

マンノース、およびグルクロン酸を主構成成分とし、そ
の構成糖比がグルコース：ガラクトース：マンノース：
グルクロン酸＝ｉｏ＝ａ〜ｔ　：　Ｏ，Ｓ〜−二〇、！
〜−である酸性へテロ多糖類であって、その目的とする
ところは有用な新規な酸性へテロ多糖類を提供すること
にある。

以下１本発明について詳細に説明する０本発明の多糖類
は、ｚＮ硫酸で１ｏｏＣ，ａ時間加水分解した後、アセ
トン：イソプロノ（ノール：０．１Ｍ乳酸（−二コニア
）の展開溶媒を用いて薄層クロマトグラフィーな行ない
、アニリン＝ジフェニールアミン：アセトン：燐酸試薬
で呈色させると、グルコース、ガラクトース、マンノー
ス。

グルクロン酸が検出される。更に本発明の多糖類のガス
クロマトグラフィーによる分析結果からも。

少な（ともグルコース、ガラクトース、マンノース、グ
ルクロン酸が主構成糖であることが確認され、そのグル
コース：ガラクトース：マンノース：グルクロン酸の構
成比は約１０：Ｊ〜１　：　０．．１〜コニＯ０ｓ〜−
であることが認められる。

また本発明の多糖類は、セチルトリメチルアンモニウム
ブロマイドあるいはセチルピリジウムクロライドを酢加
すると白色沈殿が生じるので、酸性である。

すなわち、本発明の多糖類は、グルコース、ガラクトー
ス、マンノース、およびグルクロン酸を主構成成分とし
、その構成糖比がグルコース：ガラクトース：マンノー
ス：グルクロン酸＝ｌＯ：３〜”乙：　ｏ　、ｚ〜コニ
０．！〜λである酸性へテロ多糖類である。

そして本発明の多糖類は次の理化学的性質を有する。

■赤外吸収スペクトル 脱塩前の赤外吸収スペクトルは第１図に示す通りであり
、脱塩後の赤外吸収スペクトルは第一図に示す通りであ
る。

■呈色反応 アンスロン反応：陽性、カルバゾール反応：陽性、エル
ソンーモルガン反応：陰性、ヨード反応：陽性 ■溶剤に対する溶解度 水に可溶で、エタノール、エーテル、アセトン等に不溶
である。

０色及び形状 精製品は白色綿状または繊維状である。

■粘度 水溶液は無色透明で粘性を有し、その／ｉ浴溶液粘度は
ｚｏｏ〜ｌコＯｏ　ｃｐ　（λｊ７：、３０ｒｐｍ、東
京計器製Ｂ型粘度計による）である。

、−なお、粘度に与えるｐＨの影響蒼試料濃度ノ係（Ｗ
／Ｖ　）で調べた結果はＷ、３図に示すとおりで。

ＰＨＶＣよる粘度変化は認められないＯまた。粘度に与
えるＣａＣ１ｔとＮａＣ１の影響を試料濃度ｉ　％　（
Ｗ／Ｖ　）で調べた結果は第９図に示すとお−９で、本
多糖類はコ価および１価のカチオンに対して安定である
。

また、粘度に与える温度の影響を試料濃度／４（Ｗ／Ｖ
）で調べた結果は第５図に示すとおりで、１ａｏＣまで
の温度変化に対して大きな粘度変化は示さない。

■元素分析値 Ｃ＝４ｔ０．６３±／４；Ｈ＝ご、２ダ±ｌ嗟：Ｈ＝ｏ
憾；灰分＝／　、０７土０．ｇ４■比旋光度 〔α〕２γニー４４．０〜＋コ００Ｏ（Ｃ＝０．３３．
水溶液）■分子量 ウベローデ温粘度計を用いて測定した極限粘度値（溶媒
：水）をシュタウデインガー（Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ）
の式にあてはめて計算した分子量は約／、４１Ｘ、□・
５・１ １Ｏ？からコ、λ×ＩＯ？であり、また東洋盲達工業裂
高速液体クロマトグラフィーな用い、林原製プルランを
標準にして測定した分子量はｊ　Ｘ　／　０”から／　
、　ｊ　Ｘ　／　０６である。したがって分子量は約ｌ
０１１以上である。

■融点 １９０Ｃで黒褐色が始まり、２ｊＯＣで分解する。

［相］核磁気共鳴、スペクトル １３Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは第６図に示すとおりで
あり（溶媒：Ｄ２０、チューブＨｉｏｔｒａｎ、内部標
準ニジオキサン）、主要ピークは１０３．７ｐｐｍ、　
７　ｔ　、り１）Ｐｍ、　？　”　、　／　Ｐｐｍ％　
７θ、　２ｐｐｍ　ｓ６り、ｔ　ｐｐｍ、　ｇλ、　／
　Ｐｐｍである０■その他の性質 本多糖類の水溶液はローカストビーンガム及びグアガム
などのガラクトマンナン類と相溶してゲル化あるいは高
粘性化を示す０本多糖類とローカストビーンガムとの相
溶作用の関係は第７図に示すとおりである。

従来、アセトバクターに属する細菌が生産するヘテロ多
糖類としては、アセトバクター・キシリナムの自然変異
株がグルコース、ラムノース、マンノース、グルクロン
酸の構成糖比がＪ：／：／：ｌでかつ炭素原子と窒素原
子のモル比が／６１（蛋白質としてｉ、ａ重量係）であ
る含窒素の酸性へテロ多糖類を生産することが報告され
ているが（Ｃａｎ、ＪｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ、　２７　
、　、ｔｑｑ−ｔｏ３（ｉｑｇｔ）〕、本発明で得られ
る上記多糖類は主要構成糖としてガラクトースを含有す
ること、ラムノースを検出しなＡこと、および窒素を含
有しない点で上記の多糖類とは明らかに異なる。

マタ、グルコース、ガラクトース、マンノース、グルク
ロン酸を主要な構成成分とする多糖類としては、コリネ
バクテリウム拳フミフエルム・バール・ミクソゲネス（
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｈｕｍｉｆｅｒｕｍ
ｖａｒ、　ｍｙｘｏｇｅｎｅｓ）の生産する多糖類〔特
開昭１０−／：ＩＪざ９０号公報〕、バチルス・ポリミ
キサ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｐｏｌｙｍｙｘａ）コ２ノの
生産する多糖類〔農芸化学会誌ヨ、りｇｏｃ　／９６り
）〕、クレブシェラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌ
ｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の生産する多糖類〔特開
昭７４’−９３７９−号〕などが知られているが、これ
らはいずれも構成糖の比率が本多糖類と明らかに異なる
０ すなわち、コリネバクテリウム・フミフェルムΦバール
拳ミクソゲネスの生産する多糖類はグルクロン酸を多量
に含有する点で本多糖類とは明らかに異なり、バチルス
・ポリミキサー７ノの生産する多糖類は１．グルコース
：ガラクトース：マンノース：グルクロン酸の比率が３
二ｌ：３：コであり、本多糖類とは構成糖の比率が明ら
かに異なる。またクレブシェラ・ニューモニエの生産ス
る多糖類は、グルコース：ガラクトース：マンノース：
グルクロン酸の比率がコロ〜３２：１９〜コ３二３０〜
３７：／ｊ、３〜／ｇ１ｇであり、さらにｊ、／〜６．
３係のアセチル基と４＜、ｊ〜１．４を優のピルビン酸
を同時に含有する点で本多糖類とは明らかに異なってい
る。

上述したことから、本発明の酸性へテロ多糖類は従来得
られたことのない新規な酸性へテロ多糖類であるといえ
る。

本発明の酸性へテロ多糖類は、例えば次のような方法で
製造することができる。

すなわち、酢酸菌に属し、グルコース、ガラクトースと
し、その構成糖比がグルコース：ガラクトース°：マン
ノース：グロクロンＨ＝１０：Ｊ〜ｔ　：Ｏ，Ｓ〜ユニ
ｏ、３〜−である酸性へテロ多糖類を生産する能力を有
する菌株を培地に培養し、培養物から上記酸性へテロ多
糖類を採取することにより製造することができ゛る。

酢酸菌に属し上記酸性へテロ多糖類を生産する能力を有
する菌株としては、自然界から分離した菌株、寄託機関
から入手可能な菌株、これらを変異した菌株など、これ
らの菌株が酢酸菌に属し上記酸性へテロ多糖類を生産す
る能力を有する限り、すべて使用することができる。

このような菌株の具体例としては、本発明者らが食酢の
発酵醪から新たに分離したアセトバクター属に属する細
菌であるアセトバクター・ボリサツカロゲネス（Ａｃｅ
ｔｏｂａｃｔｅｒ　ｐｏｌｙａａｃｃｈａｒｏｇｅｎｅ
ｓ　）ＭＴ−／／−−１、アセトバクター・ボリサツカ
ロゲネスＭＦ−ｆｆ、アセトバクター・パストリアヌス
（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｓ
）　ＩＦＯ／Ｊりｊｌ、グルコノバクタ−１カブシユレ
イタス（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒｃｕｐｓｕｌａｔ
ｕａ）　ＩＡＭ　／　ｇ　／　Ｊ、グＡ／　コ／　ハ／
　ｐ　−＊　、／ンオキシグルコニクス（Ｇｌｕｃｏｎ
ｏｂａｃｔｅｒｎｏｎｏｘｙｇｌｕｃｏｎｉｃｕａ）　
ＩＦＯＪコアＪなどが挙げられる０ なお、アセトバクター・ボリサツ力ロゲネスＭＴ−／／
−コは微工研条寄第１／コ号（ＦＥＲＭ　ＢＰ−／ｌコ
〕〔微工研菌寄第４／７４４号、ＦＥＲＭｐ−４／７４
’）として、アセトバクター・ポリサ−ツ力ロゲネスＭ
Ｆ−４は微工研条寄第１／Ｊ号（ＦＥＲＭ　ＢＰ−／／
、７）（微工研菌寄第、４　／　７　ｊ　、ＦＥＲＭｐ
−４／７ｊ）として工業技術院微生物工業技術研究所に
寄託されている。

また、上記ＩＦＯおよびＩＡＭは日本微生物株保存機関
連盟（ＪＦＣＣ）に加入している保存機関の略号であ、
り、ＩＦＯは財団法人発酵研究所の略号、ＩＡＭは東京
大学応用微生物研究所の略号であって、上記のＩＦＯお
よびＩＡＭの番号を附した菌株はこれら保存機関から入
手することができる０上記ＭＴ−／／−コおよびＭＰ−
ｆの菌学的性質は下記の如くである（特に菌株別に記載
されていなｈものは各菌共通の性質および生育状態であ
る）０なお“菌学的性質に関する実験方法は、／　？７
ｊ年６月−〇日東京大学出版会発行、長谷用武治編著「
微生物の分類と同定」、［ザ・ジャーナル・オプ・ジェ
ネラル・アンド・アプライド・マイクロバイオロジー（
Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　ａｎ
ｄＡｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）第１０
巻、第一号、第９！〜／　ｕ　４頁（／９４＜’年）」
のｒ　Ｔｈｅ　Ｆｌａｇｅｌｌａｔｉｏｎａｎｄ　Ｔａ
ｘｏｎｏｍ）ｒ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｙａ　Ｇｌｕｃｏｎｏ
ｂａｃｔｅｒ　ａｎｄＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｗｉｔ
ｈ　Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　Ｅｘｉｓｔｅ
ｎｃｅｏｆ　Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ　５ｔｒａｉｎ
ｓ　（中間菌株の存在に僕達してのグルコノバクタ−属
およびアセトバクター属のフラゲレーションおよび分類
学）」および「ザ・ソサエティー・フォー・アプライド
・バクテリオロジー・テクニカル・シリーズ・Ｎｏ、　
２　（Ｔｈｅ　５ｏｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ａｐｐｌｉｅ
ｄ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　ＴｅｃｈｎｉｃａｌＳ
ｅｒｉｅｓ　Ｎｏ、２　）アイデンテイフイケイション
・メソツズ・フォー・マイクロバイオロジーツ（Ｉｄｅ
ｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　Ｍ
ｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｓｔｓ）／９ｄｇ年」の第１−
８頁のｒ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒＩｄｅｎｔｉｆ７ｉ
ｎｇ　Ａｃｅｔｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　　
（酢酸菌の同定法）」に従った。

また酵母エキス−ブドウ糖寒天培地は酵母エキスＪノ、
ブドウ、糖、３０９．ポリペプトン、３ｉＰ、寒天／ｊ
ノを蒸留水ｌ！に溶解しＰＨをｊ、ｔ［調節したもの、
酵母エキス−ブドウ糖液体培地は酵母エキス、ｊｔ？、
ブドウ糖ａｏｙ、ポリペプトン３９を蒸留水ｌ！に溶解
しｐＨを６．３に調節したもの、エタノール含有酵母エ
キス−ブドウ糖液体培地は酵母エキスｊｉＩ−、ブドウ
糖、３Ｑｆ、ポリペプトン３）を蒸留水ノ！に溶解しｐ
Ｈをｔ、ｊＫ調節して滅菌後、エタノールを３４ＣＶ／
Ｖ）無菌的に添加したもの、ＭＹ平板培地はブドウ糖Ｉ
ＱｉＰ、ポリペプトン！ノ、酵母エキス３ｆ、モルトエ
キス３ノ、寒天ｌＪｔを蒸留水／Ｊに溶解しｐＨを６Ｊ
に調節したもの、肉汁液体培地は肉エキス／　Ｏｊ’　
ｓポリペプトン１０ｆを蒸留水ｌ！に溶解しｐＨを４、
ｊに調節したもの、加楯肉汁液体培地はブドウ糖１ｏｙ
１肉エキスｌθｔ１ポリペプトン１０のである。

そしてまた、ユビキノンの同定は１紙クロマトグラフィ
ー、薄層クロマトグラフィー、赤外部および紫外部吸収
スペクトラムおよび質量分析法で行なった。

■、形態的所見 形状　　　　短稈状 大きさ　　　０．Ｊ〜０．７Ｘｉ、０〜／、−μｍ集団
　　　　単独あるＡは連鎖状 運動性　　　無し 胞子形成　　形成せず ダラム染色　　　陰性 抗酸性　　　陰性 ＩＩ、培養的所見 ■酵母エキスーブドウ糖寒天平板培養（ＪＯＣでダ日間
培養） 形状　　　　　円形 辺縁　　　　　平滑で金縁 隆起　　　　　隆起状（Ｒａ１ｓｅｄ　）光沢　　　　
　有り 表面　　　　　平滑 色調　　　　　　　ＭＴ−１１−コは淡黄色で光沢あり
ＭＦ−ｇはうす桃色で光沢あシ ■炭酸カル、シウム含有酵母エキスーブドウ糖斜面培養
（３０７：で３日間培養） 生育の良否　　良好 隆　起　　　　中程度 表　面　　　　平滑 辺　縁　　　　平滑で金縁 色　調　　　　　ＭＴ−／／−一は淡黄色で光沢あシＭ
Ｆ−ｇはうす桃色で光沢あり ■エタノール含有酵母エキスーブドウ糖液体静置培養（
ＪＯＣでｑ日間培養） よく生育する。湿潤でもろい 菌膜を形成する。混濁し、一 部は底に沈殿する。セルロー スからなる厚膜を形成しない。

■肉汁液体静置培養（、ｉｏＣで２日間培養〕生育乏し
い。セルロースカラ なる厚膜な形成しない ＭＴ−／ｌ−コはリング状に生育する◇ＭＦ−ｇは極め
て薄い菌膜を形成する。

■ブドウ糖含有内エキス液体静置培養（、？ＯＣで２日
間培養］ 生育良好。セルロースからな る厚膜な形成しない。

ＭＴ　−／　／−コの培養液は混濁し、一部は沈殿する
。薄い菌膜を形成する。

ＭＦ−ｇの培養液はよく混濁し、沈殿 する０もろい菌膜を形成する。

■ＭＹゼラチン高層培養（−０Ｃで２日間培養） 生育良好。液化性無し。

■リドマスミルク（３０Ｃで２日間培養）凝固性無し。

ＩＩＩ　、生理学的性質 ■硝酸塩の還元：無し ■脱窒反応：無し ■ｖｐテスト：陰性 ■インドールの生成：無し ■硫化水素の生成：無し ■デンプンの加水分解：無し ■クエン酸の利用： Ｃｈｒｉｓｔｅｎ、ｓｅｎの培地：無し■無機窒素源の
利用： 硝酸塩：無し アンモニウム塩：無し ■培地中への色素の生成：無し ［相］ウレアーゼ活性：無し オキシダーゼ活性：無し ０カタラーゼ活性：有９ ＠生育ｐＨ範囲：ａ、ｏ〜り、！ 最適ｐＨ範囲ニゲ、θ〜！、！ ０生育源度範囲Ｈｉｄ〜３ｒＣ 最適温度範囲：ユ０〜２ｇ’Ｃ ■酸素に対する態度：好気的 ［相］！−ケトグルコン酸め生成：有り［相］ジヒドロ
キシアセトンの生成：有り０エタノール資化性：エタノ
ールを弱（資化し酢酸を生成する ［相］酢酸の資化性：無し ０乳酸の資化性：無し ［相］ビタミン要求性：有り ■酢酸の分解性：有り ■乳酸の分解性：有り ［相］塩化第一鉄反応：陰性（グルコース培地）ＩＶ、
炭素源の資化性およびそれらからの酸およびガスの生成 第１表のとおりである。

■、電子伝達系の補酵素の種類 補酵素の主要成分：ユビキノン−ＩＯ Ｏ２０諸性質に従い、本菌の分類学的地位を「バージイ
ズ・マニュアル・オブ・デターミネイティブ・バクテリ
オロジ−（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆＤｅ
ｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ
）第３版」１．ならびに［ザ・ジャーナル・オブ・ジェ
ネラル−アンドｅアプライド・マイクロバイオロジー第
１Ｏ巻、？３〜／、２を頁（／９．（１年）」のｒ　Ｔ
ｈｅ　Ｆｌａｇｅｌｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔａｘｏ二
匙ｏｆＧｅｎｅｒａ　Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　ａ
ｎｄ　Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｗｉｔｈ　Ｒｅｆｅｒ
ｅｎｃｅｔｏ　ｔｈｅ　Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ　ＩＪｉ　
Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ　５ｔｒａｉｎｓ　（中間菌
株の存在に関連してのグルコノバクタ−属およびアセト
バクター属のフラゲレーションおよび分類学）」、およ
び「ザ・ジャーナル・オブ・ジェネラル・アンド・アプ
ライドｅマイクロバイオロジー第１！巻、Ｉｇ／〜／９
ｊ頁（１２６９年〕」の［Ｅｎｚｙｌｌｌａｔｉｃ　５
ｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　０ｘｉｄａｔｉｏｎ　ｏ
ｆＳｕｇａｒ　ａｎｄ　Ｓｕｇａｒ　ａｌｃｏｈｏｌ　
（糖および糖アルコールの酸化に関する酵素的研究）、
Ｖ、　Ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ　ｏｆＡｃｃｔｉｃ　ａｃ
ｉｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｎｄ　　ｉｔｓ　Ｒｅ１ａ
ｔｉｏｎ　ｔ。

Ｃ１ａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａ
　Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　　ａｎｄＡｃｅｔｏｂ
ａｃｔｅｒ＋　　ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ｏｆ　　ｔｈ
ｅ　　ｓｏ　　−ｃａｌｌｅｄｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔ
ｅ　５ｔｒａｉｎｓ　（酢酸菌のユビキノンおよびその
グルコノバクタ−属およびアセトバクター属、特に所謂
中間菌株の分類との関係）」に従って求めた。

即ち本菌はダラム陰性の好気性桿菌でエタノールを酸化
して酢酸を生成し、またｐＨ、？　、０でも増殖できる
ことから、一般に酢酸菌と呼ばれるアセトバクター属も
しくはグルコノバクタ−属に属する菌株であることは明
らかである。

本菌は主たるユビキノンタイプがＱ＋ｏでビタミンが生
育に必須であり、またジヒドロキシアセトンの生成能を
有する点ではグルコノバクタ−属としての性質を有する
が、一方酢酸および乳酸の分解性を示す点ではアセトバ
クター属としての性質を示し、アセトバクター属または
グルコノバクタ−属のいずれとも断定し難いが、酢酸お
よび乳酸の分解性を示すこと、および培地中にグルコー
ス、ｌｊ　５　／ドース、マンノース、グルクロン酸を
主構成成分とする上記した新規な酸性へテロ多糖類を蓄
積する能力があることによフ、本菌はアセトバクター属
に属する新菌種と認定するのが妥当であり、アセトバク
ター拳ポリサツカロゲネス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ　
ｐＤｌｙｓａｃｃｈａｒｏｇｅｎｅｓ　）と命名した０
そして上記したＭＴ　−／　／　−ｕとＭＦ　−ｇとは
類似の性質が多いが、酵母エキス−ブドウ糖培地での色
調、ソルビトールの資化性が異なり、それぞれアセトバ
クター・ポリサツカロゲネスＭＴ−／／−Ｊおよびアセ
トバクター・ポリサラ力ロゲネスＭＦ−ｇと命名した０ 上記の酸性へテロ多糖類を生産する能力を有する菌株の
培養に使用する培地の炭素源としては、たとえばグルコ
ース、ガラクトース、フラクトース、シュクロース、グ
リセロール、マンニトール、エタノール、クエン酸、リ
ンゴ酸、糖蜜、各種澱粉質含有穀類の糖化液などが単独
または混合して用いられる。

また窒素源としては、酵母エキス、ペプトン、コーンス
テイープリカー、硫酸アンモニウムなどの有機および無
機窒素源が用いられる０さらにカリウム、カルシウム、
マグネシウム、ナトリウムなどの塩類やパントテン酸、
ニコチン酸、Ｆｅ　、　Ｃｏ　、　Ｍｏなどの微量要素
が上記酸性へテロ多糖類の生産および粘性を高めるため
に有効に使用される。

培養は、−〇〜３ＩＣ１好ましくは２３〜１ｇＣ１培地
のｐＨ３〜ｇ、好ましくは！〜２において好気的条件下
で、通常振盪培養あるいは通気攪拌培養で行なわれる。

培養時間は種々の条件によって異なるが、通常１４１〜
９６時間の範囲で行なわれる。

このようにして培養物中に得られた上記酸性へテロ多糖
類〔以下、′上記多糖類という〕の回収は公知の方法を
用いて行うことができる０たとえば、培養液をそのまま
、または適量の水で希釈後、遠心分離、ｒ過などによっ
て菌体を分離し、メタノール、エタノール、プロノ（ノ
ールあるいはアセトンなどの沈澱剤を加え繊維状の上記
多糖類を沈澱せしめた後、アセトン洗滌して乾燥を行う
ことにより回収することができる。

また上記多糖類は酸性物質であるのでζ菌体を除いた培
養液にセチルトリメチルアンモニウムブロマイドなどを
添加して上記多糖類を沈澱させることにより回慇するこ
とができる。

粗製の上記多糖類は多糖類の精製法にしたがって精製す
ることができる。例えば粗製の上記多糖類を水に再溶解
し、熱処理後、遠心分離して不溶物を完全に除去し、ア
セトンなどの沈澱剤で再沈澱な（り返すことにより純度
の高い白色綿状の精製された上記多１：；が得られる０
また、セチルトリメチルアンモニウムブロマイドによル
沈澱（ｃＴＡＢ処理）、透析、およびイオン交換樹脂な
どを併用して高純度の精製品を得ることもできる。

次に、上記多糖類の展進の具体例を示す。

具体例　１ リン酸１カリ０．ｌｆ、リン酸２カリ０．ｌｆ、硫酸マ
グネシラムク水塩Ｏ，コｊｆ、塩化第２鉄ｏ　、ｏｏｚ
ノ、酵母エキスコノ、およびシュクロース３０ノを／７
の純水に溶解して培地とした。

ｊ！容のジャーファーメンタ−に注入し、ｌコＯＣで４
０分間殺菌した。

上記と同一組成の培地を用い、坂ロフラスコで前培養し
たアセトバクター−ポリサラ力ロゲネスＭＴ　−／　／
−コを上記のジャーファーメンタ−に接種し、培養温度
３０Ｃ，通気量ｏ　、ｓＶＶＭで９６時間培養した。培
養終了液のｐＨは、ｙ、４ｔ、　Ｂ型粘度計による粘度
はｌコＯＱｐであった。

９６時間の培養の後、培養終了液に水を加えてノＯ！と
じ、／　０　、０００　ｒｐｒｎで一〇分間遠心分離し
て菌体および固形物を除去したのち、ｊｊｌのエタノー
ルを徐々に加えると白色の繊維状沈澱が得られた。沈澱
を採取し、アセトンで洗浄し、減圧乾燥した。このよう
にして得た白色繊維状の粗製の上記多糖類の収量は一一
、！ノ（収率コＪ憾〕であった。

このようにして得た粗製の上記多糖類λ０９を再び水λ
！に溶解し、これにセチルトリメチルアンモニウムブロ
マイドを加え上記多糖類をセチルトリメチルアンモニウ
ムブロマイドとの複合体として沈澱させた。この複合体
を水およびエタノールで十分洗浄して過剰のセチルトリ
メチルアンモニウムブロマイドを除いた後、飽和塩化ナ
トリウム水溶液を加えて複合体を溶解した。この溶液に
３倍量のエタノールを加えて上記多糖類を沈澱させた。

沈澱を分離し、減圧乾燥後、再び水に溶解した。得られ
た溶液を透析用セロハンチューブに入れ３日間流水中で
透析を行なった後、３倍量のアセトンを加えて上記多糖
類を沈澱させ、沈澱物を分取、減圧乾燥を行い精製され
た上記多糖類／ｇ、ｊノを得た。

具体例　２ リン酸１カリ０．ｌｆ、　　リン酸２カリＯ，７ノ、硫
酸マグネシラムク水塩Ｏ，コ！ノ、塩化第２鉄０．００
１ｉＰ、酵母エキスコノ、クエン酸！ノおよびマンニト
ール２１１！−をｌｆの純水に溶解して培地とした０こ
の培地３！を調製し、ＰＨ’　−’としたのチ、！！容
のジャーファーメンタ−に注入しｌλｏＣで２０分間殺
菌した０ 上記と同一組成の培地を用い坂ロフラスコで前培養した
アセトバクター・ポリサラ力ロゲネスＭＴ−／／−一を
上記ジャーファーメンタ−に接種し、培養源［３０Ｃ，
ｈ気量０　、ｊＶＶＭでｇｏ時間培養した。培養終了液
のｐＨは！、乙、Ｂ型粘度計による粘度は／　／　００
　ｃｐであった。

この培養終了液を具体例１と同様に処理して粗製の上記
多糖類をｑ！）（収率６θ係）得た。

具体例　３ リン酸１カリｏ、ｉノ、リン酸２カリ０　、　ｌｆ。

硫酸了グネシウム・２水塩０．２ｊｆ、コーンステイー
プリカーｌｆ、および廃糖蜜（シュクロース３０ノを含
む＞ｊｊｌ−を７！の純、水に溶解して培地とした。こ
の培地ｌＯｉを調製し、ＰＨ６，０としたのち、２０７
答のジャーファーメンタ−に注入し／２０Ｃで１０分間
殺菌した。

上記と同一組成の培地を用い、坂ロフラスコで前培養し
たアセトバクター・ポリサツカロゲネスＭＦ　−１：を
上記のジャー７アーメンターに接種し、培養温度ＪＯＣ
，通気量ｏ　、ｚＶＶＭでざＯ時間培養した。なお、水
酸化す）　ＩＪウムと塩酸の水溶液を用い培養中のｐＨ
は６．０前後に調節した。培養終了液のＢ型粘度計によ
る粘度はコｊ　００　（！Ｐであった。

この培養終了、液を具体例１と同様に処理して粗製の上
記多糖類を一６ｏ）（収率ｇ　ｔｔｉｒ）得た。

具体例　４ リン酸１カリｌノ、リン酸２カリ７ノ、硫酸マグネシウ
ム・２水塩ｏ、コｊノ、コーンスチープリカーλノ、ペ
プトンユ？、およびグルコース２０ｔをｌ！の純水に溶
解して培地とした。この培地１０．１．を調製し、ＰＨ
６、０としたのち、２０ｉのジャーファーメンタ−に注
入しｌλｏＣで２０分間殺菌した。

上記と同一組成の培地を用い、坂ロフラスコで前培養し
たアセトバクター・ボリサッカロゲネスＭＦ−ｆｆを上
記のジャーファーメンタ−に接種し、培養温度、３０Ｃ
，通気量ｏ、ｊＶＶＭでｇｏ時間培養した。なお水酸化
す）　ＩＪウムと塩酸の水溶液を用贋培養中のｐＨは１
６０前後に調節した。培養終了液のＢ型粘度計による粘
度は／−１００（！ｐであった。

この培養終了液を具体例１と同様に処理して粗製の上記
多糖類を）６コｙｃ収率＆／、（７％）得た０ 具体例　５ リン酸１カリｉｐ、リン酸２カリｌｔ、硫酸マグネシウ
ム・７水塩Ｏ，ユｉｆ、塩化第２鉄０．０９ノ、酵母エ
キスコノ、コーンスチープリ力−ｌ？、コハク酸ｇノ、
およびグリセロール３０９をｌ！の純水に溶解して培地
とした。この培地３！を調製し、ｐＨ６，Ｏとしたのち
１．ｔ！容のジャーファーメンタ−に注入し、ｌコｏＣ
で２０分間殺菌した０ 上記と同一組成の培地を用い、坂ロフラスコで前培養し
たアセトバクター・ポリサッカロゲネスＭＴ　−／　／
−コを上記のジャーファーメンタ−に接種し、培養温度
ユｔＣ１通気量０．４’ＶＶＭでりを時間培養した０培
養終了液のｐＨは！、り！、Ｂ型粘度計による粘度は／
　９００　Ｃｐであった。

この培養終了液を具体例１と同様に処理して粗製の上記
多糖類をｔ／、ｄｉ（収率５ｕｅｓ）を得たＯ 具体例　６ リン酸１カリ、ラム／ｆ、リン酸２カリウムコノ、硫酸
マグネシウム・り水塩０．λ！ノ、酵母エキスコｔ、ク
エンＨｚｙ、およびシュークロース３０ノを／ｌｊｔの
純水に溶解して培地とした。この培地３！を調製し、ｐ
Ｈ６，０としたのち、！！容のジャーファーメンタ−に
注入し、ｌλＯＣで２０分間殺菌した。

上記と同一組成の培地を用い、坂ロフラスコで前培養し
たアセトバクター・バストリアヌスエ■／３７１／を上
記のジャーファーメンタ−に接種し、３０Ｃ１通気量ｏ
　、ｔＶＶＭで７２０時間培養した。なお、水酸化ナト
リウムと塩酸の水溶液を用Ａ培養中のｐＨは１．０前後
に調節した。培養終了液のＢ型粘度計による粘度は一３
ｃｐであつらに精製して精製された上記多糖類６．Ｏｆ
（収率６．７憾）を得た。

発明−明の多糖類は、古来から食酢醸造に使用され、歴
史的にその安全性が確かめられている酢酸菌が生産する
高粘性多糖類であり、その安全性と高粘性を生かして食
品工業における添加剤として、特に増粘安定剤として有
効に用いることができる。

すなわち、本発明の多糖類は、例え、ばドレッシング、
アイスクリーム、ジャム、ネクター、ヨーグルト、チョ
コレート、ペースト、ソーセージ、シロップ、ゼリー、
菓子、マヨネーズ、ホイツピングクリーム、ケチャツプ
、ソース、スープ、ビール、酒類、圧油、食酢、漬物な
どの液体食品や固体食品に増粘安定剤として添加配合す
ることができる。

各種食品への本発明の多糖類の配合量は使用目的などを
考慮して適宜決定すれば良贋が、通常は最終製品に対し
て０，０／−コＯ憾（Ｗ／Ｖ）程度の範囲で加えるのが
よい０ 従来、食品に用いられる増粘・乳化安定剤としては、ロ
ーカストビーンガム、グアガム、ペクチンなどの植物質
多糖類、カラギーナン、寒天、アルキン酸などの海藻質
多糖類、およびキサンタンガム、プルラン、デキストラ
ンなどの微生物多糖類が知られてい、る。

しかし、植物質多糖類や海藻質多糖類は天然物であるの
で、その生産量は天候、その他の要因に大き（左右され
て供給が不安定になるのが大きな問題であり、また同時
に食品中での安定性とぐに耐酸性や耐熱性の点で欠陥が
多い。

一方、微生物多糖類は安定した供給が可能な点で優れて
いるが、従来公知の微生物多糖類は人畜、植物に対して
病原性を示すいわゆる病原性微生物が生産するものであ
り、大量に生産する場合には環境に与える危険な影響は
もとより、安全性が最も重視されるべき食品に使用する
増粘・乳化安定剤としては基本的に重大な、欠陥を有し
ているのである。

これに対し、本発明の多糖類は、古来から食酢醸造に使
用され歴史的にその安定性が確かめられてｒる酢酸菌が
生産するものであり、かつ耐酸性、耐熱性、ｐＨ安定性
、耐塩性に優れた新規な多糖類であり１、従来知られて
いる多糖類に比べて食品用の増粘・乳化安定剤として非
常に有用である。

この点について具体例を示して説明する。

従来、分離タイプのドレッシングには安定剤としてロー
カストビサ僑ム、グアガム、カラギーナン、トラガント
ガムなどが使用されているが、これらのガム類は低ｐ）
（Ｋ不安定、冷水に可溶化しない等の欠点がある。これ
に対し、本発明の多糖類は、耐塩性、ｐＨ安定性などの
特性があり、しか゛も冷水に可溶であることから、分離
タイプのドレッシングに用いる安定剤〔最終製品に対し
０．０２〜ｌ、０１（Ｗ／Ｖ）添加〕として上記ガム類
に比べすぐれている。

例えば本発明の多糖類及びローカストビーンガ経日的に
測定した結果を示すと、下記第２表のとおりである。

第２表 第２表から、本発明の多糖類は粘性をほとんど失なわず
、しかも分離までの時間が３０日後でも＃１とんど変化
しない極めて有効な多糖類であることがわかる。

サラＦｃ本発明の多糖類とローカストビーンガムをそれ
ぞれ添加して作成したドレッシングヲ室温ｖｃｔｏ日保
存した後、サラダを試作し、嗜好についてパネル数４Ｉ
Ｏ゛で官能検査を行った結果は、本発明の多糖類を添加
して作成したドレッシングを好むとしたものλ９、ロー
カストビーンガムを添加して作成したドレッシングを好
むとしたものＩＩであって、危険率／４で有意差が認め
られた。

また従来、ヨーグルト類には、増粘安定剤としてキサン
タンガム、カラギーナン、グアガム、トラガントガムな
どが使用されているが、これらのガム類は乳蛋白（特に
カゼインコと結合して離漿したり、低ｐＨに不安定で粘
性の消失があるなどの欠点がある。これに対し本発明多
糖類は、上述した様に低ｐＨ域でも極めて安定であり、
しかも乳蛋白と結合して離漿するといった現象が全（認
められないことから、ヨーグルト類に用いる増粘安定剤
〔最終製品に対して０．Ｏｊ−ユ、０４（Ｗ／Ｖ　）程
度添加〕として上記ガム類に比べてすぐれている。

例えば本発明の多糖類及びキサンタンガムなそれぞれ市
販のプレーンヨーグルトの総量に対してｉ、ｏｉ添加し
た場合の保存（４’Ｃ）試験結果を示すと、第３表のと
おりである０ 第　　　　　　３　　　　　　表 第３表から、明らかなように、本発明の多糖類を添加し
たヨーグルトでは６０日の保存後も全（粘性を失なわず
、しかも全（離漿が認められないのに対し、キサンタン
ガムを添加したヨーグルトでは３日の保存で早くも離漿
が認められる０また本発明の多糖類は、その安全性と高
粘性を生かして医薬品用としての用途が十分期待できる
とともに、潤滑剤、被覆剤、糊料、懸濁補助剤、化粧品
素材、石油を回収する際の増粘剤などの工業用の用途に
も充分利用することが可能である０

【図面の簡単な説明】

第１−図および第２図は本発明の酸性へテロ多糖類の赤
外吸収スペクトルで、第１図は脱塩前のもの、第２図は
脱塩後のものであり、第３図は本発明の酸性へテロ多糖
類の粘度に与えるｐＨの影響を示す図であり、＄ｑ図は
本発明の敵性へテロ多糖類の粘度に与えるＣａＣｌ２と
ＮａＣ１の影響を示す図であり、第５図は本発明の酸性
へテロ多糖類の粘度に与える温度の影響を示す図であり
、第を図は本発明の酸性へテロ多糖類の核磁気共鳴スペ
クトルであり、第７図は本発明の酸性へテロ多糖類とロ
ーカストビーンガムとの相溶作用の関係を示す図である
。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）／ル：＋−、Ｘ、ｉ５り）−ス、マンノース。 およびグルクロン酸を主構成成分とし、その構成糖比が
   グルコース：ガラクトース：マンノース：グルクロン酸
   ＝ｉｏ＝３〜ｔ：ｏ、ｓ〜コニ０．！〜コである酸性へ
   テロ多糖類。
2. （２）酸性へテロ多糖類が下記の理化学的性質■赤外吸
   収スペクトル 脱塩前の赤外吸収スペクトルは第１図に示す通りであり
   、脱塩後の赤外吸収スペクトルは第一図に示す通りであ
   る ■呈色反応 アンスロン反応：陽性、カルバゾール反応：陽性、エル
   ソンーモルガン反応：陰性、ヨード反応：陽性 ■溶剤に対する溶解度 水に可溶で、エタノール、エーテル、アセトン等に不溶
   である ０色及び形状 一精製品は白色綿状または繊維状である。 ■粘度 水溶液は無色透明で粘性を有し、その／％水溶液の粘度
   はＪＦ　ｏ　ｏ　、　ｔ　２　ｏ　ｏ　ｅｐ　（λ、ｔ
   ｃｔ、？Ｏｒｐｍ、東京計器製東京計器製圧型粘度計あ
   る■元素分析値 ｃ＝ｔｔｏ、ｔＪ±／ｑｂ：Ｈ＝６，７１ｔ：ｌ：ｌ嗟
   ；Ｎ：１７４；灰分＝ｌ−０２士ｏ、ｇｔｓ■比旋光度 〔α”Ｄ’　　＋ｇ、０．＋ユｏ、ｏ（Ｃ＝ｏ、３３゜
   水溶液） ■分子量 １約ＩＯ５以上である ■融点 ／９．０７：で黒褐色化が始まり、コ−ｔＯＣで分解す
   る ［相］核磁気共鳴スペクトル ｌ５Ｃ−核磁気共鳴スペクトルは第６図に示す通りであ
   る を有する特許請求の範囲第１項記載の酸性へテロ多糖類
   。