JPS5876762A - 診断試薬用ラテツクスの製造方法 - Google Patents
診断試薬用ラテツクスの製造方法Info
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- JPS5876762A JPS5876762A JP17509481A JP17509481A JPS5876762A JP S5876762 A JPS5876762 A JP S5876762A JP 17509481 A JP17509481 A JP 17509481A JP 17509481 A JP17509481 A JP 17509481A JP S5876762 A JPS5876762 A JP S5876762A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は主として免疫血清学的し断に用いて好適な診断
試薬用ラテックスの製造方法に関する。
試薬用ラテックスの製造方法に関する。
従来、ラテックス粒子を担体とし、抗原又は抗体を感作
させ、血清中の抗体もしくは抗原と特１− 異的に起る抗原、抗体反応によりラテックス粒子の凝集
反応、沈降反応、溶解反応、補体結合反応を生じさせ、
その結果により各種疾患の診断を行うことが免疫血清学
的診断法として臨床検査の分野において行なわれており
、例えばリウマチ因子、１４ Ｂ ｓ抗原、ＨＢｓ抗体
、抗ストレプトリジン−〇（ＡＳＯ）、Ｃ−反応性蛋白
質＜ ＣＲＰ ）、α−フェトプロティン、癌胎児性抗
原（ＣＥＡ）等の検査にも診断試薬用ラテックスが用い
られている。
させ、血清中の抗体もしくは抗原と特１− 異的に起る抗原、抗体反応によりラテックス粒子の凝集
反応、沈降反応、溶解反応、補体結合反応を生じさせ、
その結果により各種疾患の診断を行うことが免疫血清学
的診断法として臨床検査の分野において行なわれており
、例えばリウマチ因子、１４ Ｂ ｓ抗原、ＨＢｓ抗体
、抗ストレプトリジン−〇（ＡＳＯ）、Ｃ−反応性蛋白
質＜ ＣＲＰ ）、α−フェトプロティン、癌胎児性抗
原（ＣＥＡ）等の検査にも診断試薬用ラテックスが用い
られている。
かかる診断試薬用ラテックスとして、０．０５〜１μｍ
の粒径のポリスチレン粒子が分散されたラテックスが一
般的であり、通常は乳化重合によって製造されている。
の粒径のポリスチレン粒子が分散されたラテックスが一
般的であり、通常は乳化重合によって製造されている。
しかしながら、か＼るラテックスにおける乳化剤の狙が
多い場合は、ポリスチレン粒子は抗体又は抗原で感作後
も非常に安定であり、陽性血清中の対応する抗原もしく
は抗体との間で鎖敏な凝集反応等を示さないものとなり
、ときには全く凝集反応を示さないこともある。文通に
乳２− 他剤の急が少ない場合は、抗体又は抗原で感作したボリ
ア、チレン粒子が保存中にしばしば凝集反応を起し、対
応する抗原もしくは抗体を含まない陰性血清と混合した
場合でも凝集反応を起すことがあり、このような場合は
、誤った診断結果を招くことになる。
多い場合は、ポリスチレン粒子は抗体又は抗原で感作後
も非常に安定であり、陽性血清中の対応する抗原もしく
は抗体との間で鎖敏な凝集反応等を示さないものとなり
、ときには全く凝集反応を示さないこともある。文通に
乳２− 他剤の急が少ない場合は、抗体又は抗原で感作したボリ
ア、チレン粒子が保存中にしばしば凝集反応を起し、対
応する抗原もしくは抗体を含まない陰性血清と混合した
場合でも凝集反応を起すことがあり、このような場合は
、誤った診断結果を招くことになる。
通常の乳化重合により得られるラテックスを用いる場合
は乳化剤が多すぎるか少なずきるかのいずれかの状態と
なっているのが殆んどの場合であり、このため陽性血清
と接触した際に凝集反応等を鋭敏に示し、保存中に凝集
反応を生ずることがなく、陰性血清と接触した場合に凝
集反応を起すことのない診断用ラテックスは得られてい
なかった。
は乳化剤が多すぎるか少なずきるかのいずれかの状態と
なっているのが殆んどの場合であり、このため陽性血清
と接触した際に凝集反応等を鋭敏に示し、保存中に凝集
反応を生ずることがなく、陰性血清と接触した場合に凝
集反応を起すことのない診断用ラテックスは得られてい
なかった。
本発明はかぎる欠点のない診断用ラテックスを得ること
を目的としてなされたものであり、その要旨とするとこ
ろは、フェニル基を有する重合性単量体と、スルホン化
されたフェニル基を有する重合性単量体もしくはその金
属塩とを乳化重合し、遊離の乳化剤を除去し、緩衝液に
分３− 散させることを特徴とする、診断試薬用ラテックスの製
造方法に存する。
を目的としてなされたものであり、その要旨とするとこ
ろは、フェニル基を有する重合性単量体と、スルホン化
されたフェニル基を有する重合性単量体もしくはその金
属塩とを乳化重合し、遊離の乳化剤を除去し、緩衝液に
分３− 散させることを特徴とする、診断試薬用ラテックスの製
造方法に存する。
次に本発明診断試薬用ラテックスの製造方法について更
に詳細に説明する。
に詳細に説明する。
フェニル基を有する重合性単量体としては、スチレン、
ジビニルベンゼン、エチルスチレン、α−メチルスザレ
ン等が存Ｊる。スルホン化されたフェニル基を有Ｊ゛る
重合性単量体としてはスチレンスルポン酸、ジビニルベ
ンセンスルホン酸、エチルスチレンスルホン酸、α−メ
チルスチレンスルホン酸等が存する。スルホン化された
フェニル基を有する重合性単量体の金属塩としては、ス
チレンスルホン酸、ジビニルベンゼンスルホン酸、エチ
ルスチレンスルホン酸、α−メチルスチレンスルホンＭ
ｅのナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等が存する
。
ジビニルベンゼン、エチルスチレン、α−メチルスザレ
ン等が存Ｊる。スルホン化されたフェニル基を有Ｊ゛る
重合性単量体としてはスチレンスルポン酸、ジビニルベ
ンセンスルホン酸、エチルスチレンスルホン酸、α−メ
チルスチレンスルホン酸等が存する。スルホン化された
フェニル基を有する重合性単量体の金属塩としては、ス
チレンスルホン酸、ジビニルベンゼンスルホン酸、エチ
ルスチレンスルホン酸、α−メチルスチレンスルホンＭ
ｅのナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩等が存する
。
フェニル基を有する重合性単量体と、スルホン化された
フェニル基を有する重合性単量体もしくはその金属塩と
の使用割合は、全単量体１００重量部中にスルホン化さ
れたフェニル基を有す４− る重合性単量体もしくはその金属塩が１０重量部以下含
有されるのが好適であり、最適には０゜００１重量部乃
至５重量部とされる。この場合においてスルホン化され
たフェニル基を有する重合性単量体とその金属塩とが共
存されていてもよい。
フェニル基を有する重合性単量体もしくはその金属塩と
の使用割合は、全単量体１００重量部中にスルホン化さ
れたフェニル基を有す４− る重合性単量体もしくはその金属塩が１０重量部以下含
有されるのが好適であり、最適には０゜００１重量部乃
至５重量部とされる。この場合においてスルホン化され
たフェニル基を有する重合性単量体とその金属塩とが共
存されていてもよい。
フェニル基を有する重合性単量体と、スルホン化された
フェニル基を有する重合性単量体もしくはその金属塩と
が乳化重合される。
フェニル基を有する重合性単量体もしくはその金属塩と
が乳化重合される。
この場合の乳化剤としては、アニオン系界面活性剤又は
非イオン系界面活性剤が使用に適する。
非イオン系界面活性剤が使用に適する。
アニオン系界面活性剤としては、高級アルコールの硫酸
エステルソーダ、ナフタレンスルホン酸ソーダ、ドデシ
ルベンゼンスルホン酸ソーダ等が使用され、又非イオン
系界面活性剤としては、ポリエチレングリコールアルキ
ルフェニルエーテル、ポリエチレングリコールアルキル
フェニルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリエ
チレングリコールソルビタン脂肪酸エステル等が使用さ
れる。乳化剤の使用量は、全軍＝５− 坦体１００重量部当り０．５ｉｉｉ部以下とされる導 のが好適であり、最適に０．０１乃至０．１重量部とさ
れる。
エステルソーダ、ナフタレンスルホン酸ソーダ、ドデシ
ルベンゼンスルホン酸ソーダ等が使用され、又非イオン
系界面活性剤としては、ポリエチレングリコールアルキ
ルフェニルエーテル、ポリエチレングリコールアルキル
フェニルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリエ
チレングリコールソルビタン脂肪酸エステル等が使用さ
れる。乳化剤の使用量は、全軍＝５− 坦体１００重量部当り０．５ｉｉｉ部以下とされる導 のが好適であり、最適に０．０１乃至０．１重量部とさ
れる。
乳化重合を行なわせるために、水溶性のラジカル重合開
始剤が使用される。ラジカル重合開始剤としては、過硫
酸アンモニウム、過硫酸ナトリウム等の過硫酸塩、２．
２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）鉱酸塩、アゾ
ビスシアツブアレリン酸及びそのアルカリ金属塩及びア
ンモニウム塩等のアゾ化合物、酒石酸−過酸化水素、ロ
ンガリットー過酸化物、アスコルビン酸−過酸化物等の
レドックス系開始剤等があげられ、これらのうぢで過硫
酸塩が最適である。ラジカル重合開始剤の使用量は全軍
坦体ｉｏｏ重量部当り０．０１乃至１重量部とされるの
が好適である。
始剤が使用される。ラジカル重合開始剤としては、過硫
酸アンモニウム、過硫酸ナトリウム等の過硫酸塩、２．
２’−アゾビス（２−アミジノプロパン）鉱酸塩、アゾ
ビスシアツブアレリン酸及びそのアルカリ金属塩及びア
ンモニウム塩等のアゾ化合物、酒石酸−過酸化水素、ロ
ンガリットー過酸化物、アスコルビン酸−過酸化物等の
レドックス系開始剤等があげられ、これらのうぢで過硫
酸塩が最適である。ラジカル重合開始剤の使用量は全軍
坦体ｉｏｏ重量部当り０．０１乃至１重量部とされるの
が好適である。
乳化重合を行なうには、水が仕込まれた反応器内に、Ｊ
フェニル基を有する重合性単量体、スルホン化されたフ
ェニル基を有する重合性単量体もしくはその金属塩、乳
化剤、ラジカル重合６− 開始剤を加えて攪拌しながら加熱すればよい。
フェニル基を有する重合性単量体、スルホン化されたフ
ェニル基を有する重合性単量体もしくはその金属塩、乳
化剤、ラジカル重合６− 開始剤を加えて攪拌しながら加熱すればよい。
この際の加熱温度は通常５０乃至１００℃であり、好適
には６０乃至８５℃の範囲とされるのかよい。又重合に
要する時間は単量体の種類、組成、濃度、ラジカル重合
開始剤の濃度等によって変るが、通常は５乃至５０時間
の範囲とされる。
には６０乃至８５℃の範囲とされるのかよい。又重合に
要する時間は単量体の種類、組成、濃度、ラジカル重合
開始剤の濃度等によって変るが、通常は５乃至５０時間
の範囲とされる。
このようにして、フェニル基を有する単量体とスルホン
化されたフェニル基を有する単４１体もしくはその金属
塩との共重合体（フェニル基を有する単量体とスルホン
化されたフェニル基を有する単量体とその金属塩との三
元共重合体の場合を含む。以下同じ）であって、平均粒
径が０．０５乃至２μｍで、粒径のばらつきが変動係数
（粒径の標準偏差／平均粒径）で表わして０゜０５以下
である、粒径が非常によく揃った単分散ラテックスを得
ることが！きる。
化されたフェニル基を有する単４１体もしくはその金属
塩との共重合体（フェニル基を有する単量体とスルホン
化されたフェニル基を有する単量体とその金属塩との三
元共重合体の場合を含む。以下同じ）であって、平均粒
径が０．０５乃至２μｍで、粒径のばらつきが変動係数
（粒径の標準偏差／平均粒径）で表わして０゜０５以下
である、粒径が非常によく揃った単分散ラテックスを得
ることが！きる。
しかしながら前記のラテックスは遊間トの乳化剤を含有
しているので、透析又はイオン交換により除去する。透
析により遊離の乳化剤を除去す７− るには、セロファン紙等の半透膜の袋体、チューブ等を
用い内部に前記のラテックスを導入し蒸溜水等を外側に
配し、蒸溜水を新鮮なものと置換えることによりラテッ
クス中の乳化剤を除去することができる。またイオン交
換により遊離の乳化剤を除去する番こは、イオン交換樹
脂、例えばアミノエチル基やジエチルアミノエチル基を
有するセルローズゲルを充填した筒内に前記のラテック
スを通過させ、ラテックス中の乳化剤を除去するもので
あり、アニオン系の界面活性剤を使用した場合に特に有
効である。ラテックス中の遊離の乳化剤が除去された後
のものは、前記共重合体粒子のスルホン基に由来する電
荷及び前記共重合体粒子に吸着されている乳化剤によっ
て単分散状熱が安定に保持される。
しているので、透析又はイオン交換により除去する。透
析により遊離の乳化剤を除去す７− るには、セロファン紙等の半透膜の袋体、チューブ等を
用い内部に前記のラテックスを導入し蒸溜水等を外側に
配し、蒸溜水を新鮮なものと置換えることによりラテッ
クス中の乳化剤を除去することができる。またイオン交
換により遊離の乳化剤を除去する番こは、イオン交換樹
脂、例えばアミノエチル基やジエチルアミノエチル基を
有するセルローズゲルを充填した筒内に前記のラテック
スを通過させ、ラテックス中の乳化剤を除去するもので
あり、アニオン系の界面活性剤を使用した場合に特に有
効である。ラテックス中の遊離の乳化剤が除去された後
のものは、前記共重合体粒子のスルホン基に由来する電
荷及び前記共重合体粒子に吸着されている乳化剤によっ
て単分散状熱が安定に保持される。
このようにして得られた、遊離の乳化剤が除去されたラ
テツク−Ｖは適宜洗滌された後、緩衝液に分散される。
テツク−Ｖは適宜洗滌された後、緩衝液に分散される。
ラテックスを緩衝液に分散させるのは、前記共重合体粒
子を再分散させると共に、前記共重合体粒子に血清学的
活性物質を８− 感作さぜるに適したＰＨ値を付与し、更にラテックスを
診断試薬用として適した濃度に調整するためである。
子を再分散させると共に、前記共重合体粒子に血清学的
活性物質を８− 感作さぜるに適したＰＨ値を付与し、更にラテックスを
診断試薬用として適した濃度に調整するためである。
緩衝液としてはクエン酸−Ｎａ２ＨＰＯａ綬衝液、クエ
ン酸ソーダー苛性ソーダ緩衝液、ＫＨ２ＰＯ４−Ｎａ２
ＨＰＯ４緩衝液、ベロナールソーダーｔＭ鯉綬制波、ホ
ウ酸−ホウ砂緩衝液、グリシン−苛性ソーダ緩衝液、Ｂ
ｒ１ｆｌｏｎ −Ｒｏｂｉｎｓｏｎ Ｒ制波、Ｊ。
ン酸ソーダー苛性ソーダ緩衝液、ＫＨ２ＰＯ４−Ｎａ２
ＨＰＯ４緩衝液、ベロナールソーダーｔＭ鯉綬制波、ホ
ウ酸−ホウ砂緩衝液、グリシン−苛性ソーダ緩衝液、Ｂ
ｒ１ｆｌｏｎ −Ｒｏｂｉｎｓｏｎ Ｒ制波、Ｊ。
ｈｎｓｏｎ −Ｌｉｎｄｓａｙ 緩衝液、Ｔｅｏｒｅｌ
ｌ−８１−８ｔｅｎｈａ綬衝液等が使用に適する。緩
衝液としてはＰＨ値が６．５乃至８．５の範囲とされる
のが好適である。また緩衝液に分散されたラテックスの
固形分濃度は、分散液の全量１００Ｍ量部当り５重量部
以下とされるのが好適であり、最適には０゜５乃至３重
量部の範囲とされる。
ｌ−８１−８ｔｅｎｈａ綬衝液等が使用に適する。緩
衝液としてはＰＨ値が６．５乃至８．５の範囲とされる
のが好適である。また緩衝液に分散されたラテックスの
固形分濃度は、分散液の全量１００Ｍ量部当り５重量部
以下とされるのが好適であり、最適には０゜５乃至３重
量部の範囲とされる。
緩衝液に分散されている前記共重合体粒子に血清学的活
性物質が感作される。ここでいう血清学的活性物質とは
、臨床検査において血清学的診断の対象となる抗体又は
抗原に対応する抗原又は抗体という。
性物質が感作される。ここでいう血清学的活性物質とは
、臨床検査において血清学的診断の対象となる抗体又は
抗原に対応する抗原又は抗体という。
９−
血清学的活性物質により前記共重合体粒子を感作させる
には、例えば緩衝液に前記共１合体粒子が分散されたラ
テックスと、緩衝液で希釈された血清学的活性物質を混
合し、２０乃至３７℃で撹拌すれはよい。更に血清学的
活性ｖ／ｊ質が吸着されない前記共重合体粒子を飽和さ
せるために血清学的に不活性な生化学物質、例えはウシ
血清アルブミン等を吸着させておくことができる。
には、例えば緩衝液に前記共１合体粒子が分散されたラ
テックスと、緩衝液で希釈された血清学的活性物質を混
合し、２０乃至３７℃で撹拌すれはよい。更に血清学的
活性ｖ／ｊ質が吸着されない前記共重合体粒子を飽和さ
せるために血清学的に不活性な生化学物質、例えはウシ
血清アルブミン等を吸着させておくことができる。
本発明により得られる診断試薬用ラテックスにおいては
遊離の乳化剤が除去されでいるが、前記共重合体粒子の
スルホン基に由来する電荷及び前記共重合体粒子に吸着
されている乳化剤によって前記共重合体粒子の単分散状
態が安定に保持されたものとなり、保存中に凝集反応を
生じたりしないものとなる。そしてか＼るラテックスは
、これに抗原又は抗体を感作されて診断試薬とされるの
であるが、臨床検査における免疫血清学的診断に供され
た際に非特異的な＆ｉ反応を起すおそれがないばかりで
なく、診島の１０− 対象となる抗原又は抗体に対して鋭敏な凝集反応を示し
、感度がすぐれたものとなる。
遊離の乳化剤が除去されでいるが、前記共重合体粒子の
スルホン基に由来する電荷及び前記共重合体粒子に吸着
されている乳化剤によって前記共重合体粒子の単分散状
態が安定に保持されたものとなり、保存中に凝集反応を
生じたりしないものとなる。そしてか＼るラテックスは
、これに抗原又は抗体を感作されて診断試薬とされるの
であるが、臨床検査における免疫血清学的診断に供され
た際に非特異的な＆ｉ反応を起すおそれがないばかりで
なく、診島の１０− 対象となる抗原又は抗体に対して鋭敏な凝集反応を示し
、感度がすぐれたものとなる。
以下に本発明の実施例を記す。実施例中単に部とあるの
は重量部を示す。
は重量部を示す。
実施例１
（１−１＞診断試薬用ラテックスの製造スチレン１単量
体９９部、スチレンスルホン酸ソーダ１部、過硫酸カリ
ウム１０５部、ドデシルベンゼンスルホン酸ソータ０．
１６１＜、イオン交換水５００部を反応容器に仕込み、
窒素気流中で反応温度７０℃で２４時間をかけて重合さ
せた。このようにして得られたスチレン−スチレンスル
ホン酸ソーダ共重合体粒子の平均粒径は帆３５μｍであ
り、変動係数は０．０４であった。
体９９部、スチレンスルホン酸ソーダ１部、過硫酸カリ
ウム１０５部、ドデシルベンゼンスルホン酸ソータ０．
１６１＜、イオン交換水５００部を反応容器に仕込み、
窒素気流中で反応温度７０℃で２４時間をかけて重合さ
せた。このようにして得られたスチレン−スチレンスル
ホン酸ソーダ共重合体粒子の平均粒径は帆３５μｍであ
り、変動係数は０．０４であった。
上記により得られたラテックスを透析装置にかけセルロ
ーズチューブ内にラテックスを入れて室温で２４時間を
かけて透析し、ドデシルベンゼンスルホン酸ソーダを除
去した。
ーズチューブ内にラテックスを入れて室温で２４時間を
かけて透析し、ドデシルベンゼンスルホン酸ソーダを除
去した。
次いで０．５モルのＮａＨ２Ｐ９４５０ｍｌに０．５モ
ルのＮａ ２ ＨＰＯａを４１．１ｍｌを加え、更に蒸
溜水を加えて２００ｍｌに希釈して得られたＰＨ７，４
のリン酸緩衝液に、前記のラテックスを固形分濃度が２
重量％になる様に分散させた。
ルのＮａ ２ ＨＰＯａを４１．１ｍｌを加え、更に蒸
溜水を加えて２００ｍｌに希釈して得られたＰＨ７，４
のリン酸緩衝液に、前記のラテックスを固形分濃度が２
重量％になる様に分散させた。
（１−２）診断試薬の調整
ＨＢｓ抗原を、フロイント完全アジュバントの中に分散
させたものを３週問おきに３回モルモットの皮下に注射
し、３回目の注射終了後、３週間後暴こ心臓より採血し
た。
させたものを３週問おきに３回モルモットの皮下に注射
し、３回目の注射終了後、３週間後暴こ心臓より採血し
た。
次にセファローヌ４ＢにＨＢｓ抗原を固定したカラムを
用いたアフィニティークロマトグラフィーにより精製し
た。この際上記の全血から血清を採取し、血清をＰ Ｈ
８，０のトリス−塩酸緩衝液（０，２モルのトリスヒド
ロキシメチルアミノメタン２５ｍ１に０．１モルの塩酸
２８．１ｍｌを加え、蒸溜水で１００ｍ１になるように
希釈したもの）に溶がしたものを２回流通させた。その
後４．５モルの塩化マグネシウム又はチオシアン酸アン
モニウムで溶離シ、溶離液を抗体量が４０μｙ／ｍｌに
なるように前記のリン酸緩衝液に溶解させた。
用いたアフィニティークロマトグラフィーにより精製し
た。この際上記の全血から血清を採取し、血清をＰ Ｈ
８，０のトリス−塩酸緩衝液（０，２モルのトリスヒド
ロキシメチルアミノメタン２５ｍ１に０．１モルの塩酸
２８．１ｍｌを加え、蒸溜水で１００ｍ１になるように
希釈したもの）に溶がしたものを２回流通させた。その
後４．５モルの塩化マグネシウム又はチオシアン酸アン
モニウムで溶離シ、溶離液を抗体量が４０μｙ／ｍｌに
なるように前記のリン酸緩衝液に溶解させた。
（１−１）により得られたラテックスをリン酸緩衝液に
分散させたものと、上記により得られた抗体をリン酸緩
衝液に溶解させたものを等量混合し、３７℃で３時間を
かけて前記共重合体粒子に抗体を感作させた。
分散させたものと、上記により得られた抗体をリン酸緩
衝液に溶解させたものを等量混合し、３７℃で３時間を
かけて前記共重合体粒子に抗体を感作させた。
次いで１．５０ （ｌ Ｏ回転／分で１５分間遠心分離
し、前記共重合体粒子に感作されなかった抗体を除去し
た。尚抗体は９９．５％以上が前記共重合体粒子に感作
された。遠心分離により沈降した前記共重合体粒子をリ
ン酸緩衝液で十分洗滌後、正常なモルモットの血清を０
゜２重量％含有するリン酸緩衝液を加えて、抗体が感作
されている共重合体粒子を再分散させ３７℃で１０分間
攪拌した。このリン酸緩衝液中にＨＢ ｓ抗体が３０μ
ｙ／ｍｌ含まれていた。
し、前記共重合体粒子に感作されなかった抗体を除去し
た。尚抗体は９９．５％以上が前記共重合体粒子に感作
された。遠心分離により沈降した前記共重合体粒子をリ
ン酸緩衝液で十分洗滌後、正常なモルモットの血清を０
゜２重量％含有するリン酸緩衝液を加えて、抗体が感作
されている共重合体粒子を再分散させ３７℃で１０分間
攪拌した。このリン酸緩衝液中にＨＢ ｓ抗体が３０μ
ｙ／ｍｌ含まれていた。
更に、１２０００回転／分で遠心分離し、上清を捨て沈
降した処理後の抗体が感作されている前記共重合体粒子
をＰＨ７のリン酸緩衝１３− 液に再分散して診断試薬を調整した。
降した処理後の抗体が感作されている前記共重合体粒子
をＰＨ７のリン酸緩衝１３− 液に再分散して診断試薬を調整した。
（１−３）評 価
保存安定性
上記の診断試薬を２０℃で保存し、製造直後、１０日後
、２０日後、３０日後、５０日後の凝集状態を観察した
。その結果を表１の実施例１の欄に示す。
、２０日後、３０日後、５０日後の凝集状態を観察した
。その結果を表１の実施例１の欄に示す。
感度
種々の濃度のＨＢｓ抗原を含むヒト血清と、上記の診断
試薬をプレート上で混合し、凝集の強さを判定した。そ
の結果を表２−１の実施例１の欄に示す。
試薬をプレート上で混合し、凝集の強さを判定した。そ
の結果を表２−１の実施例１の欄に示す。
非特異的凝集反応
血清中のＨＢｓ抗原が帆４ｎｇ／ｍ＋である事が判明し
ている１０００人の正常人血清について偽陽性の件数を
みた。その結果を表３−１の実施例１の桐に示す。
ている１０００人の正常人血清について偽陽性の件数を
みた。その結果を表３−１の実施例１の桐に示す。
上記の評価結果より本発明により得られる診断試薬用ラ
テックスは保存安定性にすぐれ、又このラテックスを用
いた診断試薬は感度が１４− すぐれ、非特異的凝集反応を生じないものであることが
判明した。
テックスは保存安定性にすぐれ、又このラテックスを用
いた診断試薬は感度が１４− すぐれ、非特異的凝集反応を生じないものであることが
判明した。
実施例２
（２１）＃断試薬用ラテックスの製造
スチレン単量体７０部、ジビニルベンゼン単ｍ体２８ｍ
＜、スチレンスルホン酸ソーダ２部、ポリエチレンクリ
コールノニルフェニルエーテル０．２部、過硫酸カリウ
ムＯ，ＯＳ部、イオン交換水５００部を反応容器に仕込
み、窒素気流中で反応温度７０’Ｃで２４時間をがけて
重合させた。このようにして得られたスチレン−ジビニ
ルベンゼン−スチレンスルホン酸ソーダ共重合体粒子は
平均粒径が０．４０μｍであり変動係数は０．０３であ
った。
＜、スチレンスルホン酸ソーダ２部、ポリエチレンクリ
コールノニルフェニルエーテル０．２部、過硫酸カリウ
ムＯ，ＯＳ部、イオン交換水５００部を反応容器に仕込
み、窒素気流中で反応温度７０’Ｃで２４時間をがけて
重合させた。このようにして得られたスチレン−ジビニ
ルベンゼン−スチレンスルホン酸ソーダ共重合体粒子は
平均粒径が０．４０μｍであり変動係数は０．０３であ
った。
上記により得られたラテックスを透析装置にかけ、セル
ローズチーブ内にラテックスを入れて室温で２４時間を
かけて透析し、ポリエチレンクリコールノニルフェニル
エーテルを除去した。次いでＰＨ８・５のグリシン−苛
性ソーダ緩衝液に前記のラテックスを固形分湯１５− （２−２）！断試薬の調整 上記により得られたラテックスと、グリシン緩衝故中に
０．１ｉｉ％含有されるように希釈したヒトｒ−グロブ
リン溶液を等量配合し、３０℃で１５分間保持した後、
２６０００Ｇで遠心力ｍｌ、前記共重合体粒子に感作さ
れなかったヒトｒ−グロブリンを除去し、沈降した共重
合体粒子をグリシンＭ＆ｒ液で洗浄した。次いでこの共
Ｍ合体粒子をグリシン緩衝故に再分散して診断試薬とし
た。
ローズチーブ内にラテックスを入れて室温で２４時間を
かけて透析し、ポリエチレンクリコールノニルフェニル
エーテルを除去した。次いでＰＨ８・５のグリシン−苛
性ソーダ緩衝液に前記のラテックスを固形分湯１５− （２−２）！断試薬の調整 上記により得られたラテックスと、グリシン緩衝故中に
０．１ｉｉ％含有されるように希釈したヒトｒ−グロブ
リン溶液を等量配合し、３０℃で１５分間保持した後、
２６０００Ｇで遠心力ｍｌ、前記共重合体粒子に感作さ
れなかったヒトｒ−グロブリンを除去し、沈降した共重
合体粒子をグリシンＭ＆ｒ液で洗浄した。次いでこの共
Ｍ合体粒子をグリシン緩衝故に再分散して診断試薬とし
た。
（２−３）評価
保存安定性
実施例１と同様にして行った。その結果を表１の実施例
２の欄に示す。
２の欄に示す。
感度
グリシンＭＬｆＪ液で種々の倍率に希釈したｉ、ＩＩＪ
リウマチ因子を含む血清１滴と前記診Ｎ）試薬１滴と
をガラスプレート上で混合して凝集状態を観察した。そ
の結果を表２−２の実施例２１６− の欄に示す。
リウマチ因子を含む血清１滴と前記診Ｎ）試薬１滴と
をガラスプレート上で混合して凝集状態を観察した。そ
の結果を表２−２の実施例２１６− の欄に示す。
非特異的凝集反応
リウマチ因子を含まない血清をグリシン絃衛液で２０倍
に希釈したものを用いて、診断試薬との凝集状態を観察
した。その結果を表３−２の実施例２の欄に示す。
に希釈したものを用いて、診断試薬との凝集状態を観察
した。その結果を表３−２の実施例２の欄に示す。
比較例１
実施例１において、スチレンスルホン酸ソーダ１部を使
用しないものとし、ドデシルベンゼンスルホン酸ソーダ
の使用量を１．０部とし、又透析を行なわないこととし
た以外は実施例１と同様にして平均粒径０．３５μｍ１
変動係数０．０７のポリスチレン粒子が分散された診断
試薬用のラテックスを製造した。次いで実施例１と同様
にして診断試薬の’ｆＪＭＮを行った。
用しないものとし、ドデシルベンゼンスルホン酸ソーダ
の使用量を１．０部とし、又透析を行なわないこととし
た以外は実施例１と同様にして平均粒径０．３５μｍ１
変動係数０．０７のポリスチレン粒子が分散された診断
試薬用のラテックスを製造した。次いで実施例１と同様
にして診断試薬の’ｆＪＭＮを行った。
更に実施例１と同様・にして保存安定性、感度、非特異
的凝集反応の評価を行なった。
的凝集反応の評価を行なった。
表１，２−１．３−１の比較例１の欄の結果より、実施
例１に比して保存安定性が悪く、又感度かや＼劣り、非
特異的凝集反応を起し１７− 易いことが判明した。
例１に比して保存安定性が悪く、又感度かや＼劣り、非
特異的凝集反応を起し１７− 易いことが判明した。
比較例２
＄ｍ例１において、スチレンスルホン酸ソーダ１ｓを使
用しないものとし、ドデシルベンゼンスルホン酸ソーダ
の使用量を２，０部とし、又透析を行なわないこととし
た以外は実施例１と同様にして平均粒径０．３０μｍ１
変動係数０．０５のポリスチレン粒子が分数された診ｗ
１試薬用ラテックスを製造した。次いで実施例１（！：
同様にして診断試薬の調整を行なった。
用しないものとし、ドデシルベンゼンスルホン酸ソーダ
の使用量を２，０部とし、又透析を行なわないこととし
た以外は実施例１と同様にして平均粒径０．３０μｍ１
変動係数０．０５のポリスチレン粒子が分数された診ｗ
１試薬用ラテックスを製造した。次いで実施例１（！：
同様にして診断試薬の調整を行なった。
更に実施例１と同様にして保存安定性、感度、非特異的
１Ｍ反応の評価を行なった。
１Ｍ反応の評価を行なった。
表１．２−１１３−１比較例２の欄の結果より、実施例
１に比して感度が非常に悪く、又非特異的凝集反応を生
じやすいものであることが判明した。
１に比して感度が非常に悪く、又非特異的凝集反応を生
じやすいものであることが判明した。
比較例３
実施例２において、スチレンスルホン酸ソーダ２部を使
用しないものとし、ジビニルベンゼン単量体の使用量を
３０部、ポリエチレン１８− クリコールノニルフェニルエーテル（７）使用ｆｆｉを
０．５部とし、又透析を行なわないこととした以外は実
施例２と同様にして平均粒径０．３５μｍ、 変動係数
ｏ、ｏ ５のスチレン−ジビニルベンセン共重合体粒子
が分散された診断試葵用ラテックスを製造した。次いで
実施例２と同様にして診断試薬の調整を行なった。更に
実施例２と同様にして保存安定性、感度、非特異的凝集
反応の評価を行なった。表１．２−２．３−２の比較例
３の欄の結果より、実施例２に比して保存安定性が悪く
、感度がやや劣り、非特異的凝集反応を起し易いことが
判明した。
用しないものとし、ジビニルベンゼン単量体の使用量を
３０部、ポリエチレン１８− クリコールノニルフェニルエーテル（７）使用ｆｆｉを
０．５部とし、又透析を行なわないこととした以外は実
施例２と同様にして平均粒径０．３５μｍ、 変動係数
ｏ、ｏ ５のスチレン−ジビニルベンセン共重合体粒子
が分散された診断試葵用ラテックスを製造した。次いで
実施例２と同様にして診断試薬の調整を行なった。更に
実施例２と同様にして保存安定性、感度、非特異的凝集
反応の評価を行なった。表１．２−２．３−２の比較例
３の欄の結果より、実施例２に比して保存安定性が悪く
、感度がやや劣り、非特異的凝集反応を起し易いことが
判明した。
比較例４
実施例２においてスチレンスルホン酸ソーダ２部を使用
しないものとし、ジビニルベンゼン単短体の使用景を３
０部、ポリエチレングリコールノニルフェニルエーテル
の使ＪｆＨｆｔヲ２．０部とし、又透析を行なわないこ
ととした以外は実施例２と同様にして平均粒径０．３０
μｍ、 変動係数０．０６のスチレン−ジビニルベンゼ
ン共重合体粒子が分散された診断試薬用ラテックスの製
造を行ない、又診断試薬の調整を行なった。
しないものとし、ジビニルベンゼン単短体の使用景を３
０部、ポリエチレングリコールノニルフェニルエーテル
の使ＪｆＨｆｔヲ２．０部とし、又透析を行なわないこ
ととした以外は実施例２と同様にして平均粒径０．３０
μｍ、 変動係数０．０６のスチレン−ジビニルベンゼ
ン共重合体粒子が分散された診断試薬用ラテックスの製
造を行ない、又診断試薬の調整を行なった。
更に実施例２と同様にして保存安定性、感度、非特異的
凝集反応の評価を行なった。表１．２−２．３−２の比
較例４の欄の結果より実施例２に比して感度が悪く、非
特異的凝集反応を起し易いことが判明した。
凝集反応の評価を行なった。表１．２−２．３−２の比
較例４の欄の結果より実施例２に比して感度が悪く、非
特異的凝集反応を起し易いことが判明した。
表１ 保存安定性
一：凝柴せず
士：弱い凝集
＋：明らかな凝集
十＋：強い凝集
表２−１感度
一：１０分経過後も凝集せず
±：１０分以内に起る明らかな凝集
十：３分以内に起る明らかな凝集
十＋：３分以内に起る極めて強い凝集
−：１０分経過後も凝集せず
±：１０分以内に起る明らかな凝集
＋：３分以内に起る明らかな凝集
＋＋：３分以内に起る極めて強い凝集
表３−１ 非特異的凝集反応
表３−２ 同 上
特許出願人
積水化学工業株式会社
代表者 藤 沼 基利
２２−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 フェニル基を有する重合性単量体と、スルホン化
されたフェニル基を有する重合性単量体もしくはその金
属塩とを乳化重合し、遊離の乳化剤を除去し、緩衝液に
分散させることを特徴とする、診断試薬用ラテックスの
製造方法２、遊離の乳化剤を透析により除去することを
特徴とする特許請求の範囲第１項記載の診断試薬用ラテ
ックスの製造方法 ３、遊離の乳化剤をイオン交換により除去することを特
徴とする特許請求の範囲第１項記載の診断試薬用ラテッ
クスの製造方法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17509481A JPS5876762A (ja) | 1981-10-31 | 1981-10-31 | 診断試薬用ラテツクスの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17509481A JPS5876762A (ja) | 1981-10-31 | 1981-10-31 | 診断試薬用ラテツクスの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5876762A true JPS5876762A (ja) | 1983-05-09 |
| JPH0157688B2 JPH0157688B2 (ja) | 1989-12-07 |
Family
ID=15990141
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17509481A Granted JPS5876762A (ja) | 1981-10-31 | 1981-10-31 | 診断試薬用ラテツクスの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5876762A (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004325416A (ja) * | 2003-04-28 | 2004-11-18 | Sekisui Chem Co Ltd | 測定試薬用担体粒子ラテックス及び測定試薬 |
| WO2012133771A1 (ja) * | 2011-03-31 | 2012-10-04 | 積水メディカル株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| WO2014051098A1 (ja) * | 2012-09-27 | 2014-04-03 | 積水メディカル株式会社 | 粒子凝集測定用ラテックス粒子 |
| JP2017105906A (ja) * | 2015-12-08 | 2017-06-15 | 株式会社日本触媒 | 有機ナノ微粒子及び複合粒子 |
| JP2024052454A (ja) * | 2022-09-30 | 2024-04-11 | 積水メディカル株式会社 | ラテックス粒子の製造方法、及び測定試薬の製造方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55131008A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-11 | Sekisui Chem Co Ltd | Preparation of latex |
-
1981
- 1981-10-31 JP JP17509481A patent/JPS5876762A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS55131008A (en) * | 1979-03-30 | 1980-10-11 | Sekisui Chem Co Ltd | Preparation of latex |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004325416A (ja) * | 2003-04-28 | 2004-11-18 | Sekisui Chem Co Ltd | 測定試薬用担体粒子ラテックス及び測定試薬 |
| WO2012133771A1 (ja) * | 2011-03-31 | 2012-10-04 | 積水メディカル株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| JP5170806B2 (ja) * | 2011-03-31 | 2013-03-27 | 積水メディカル株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| US10048268B2 (en) | 2011-03-31 | 2018-08-14 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Latex particle for measurement reagent, coated latex particle, and measurement reagent for immunoturbidimetric method |
| WO2014051098A1 (ja) * | 2012-09-27 | 2014-04-03 | 積水メディカル株式会社 | 粒子凝集測定用ラテックス粒子 |
| JP5566557B1 (ja) * | 2012-09-27 | 2014-08-06 | 積水メディカル株式会社 | 粒子凝集測定用ラテックス粒子 |
| US9383356B2 (en) | 2012-09-27 | 2016-07-05 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Latex particles for particle agglutination assay |
| JP2017105906A (ja) * | 2015-12-08 | 2017-06-15 | 株式会社日本触媒 | 有機ナノ微粒子及び複合粒子 |
| JP2024052454A (ja) * | 2022-09-30 | 2024-04-11 | 積水メディカル株式会社 | ラテックス粒子の製造方法、及び測定試薬の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0157688B2 (ja) | 1989-12-07 |
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