JPS5823788A - 新抗生物質ｓｆ−２１０３ｂおよびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質ＳＦ　−２１０３Ｂ及びその塩
並びにその製造法に関する。

本発明者らは先に％新規なβ−ラクタム抗生物質である
８Ｆ　−２１０３ム及びその製造法を見出し、それらを
開示した（４Ｉ願昭５５−１１２９９６号及び特許＠　
５５−１５７６３１号）。その後本発明者らは、抗生物
質８Ｆ　−２１０５ム生童薗の培養液中に抗生物質８Ｆ
　−２１０３ムとは明瞭に異なる新規な抗生物質を見出
し、これを抗生物質８Ｆ　−２１０３Ｂと命名し九本発
明者らは抗生物質８Ｆ　−２１０３Ｂを単離してその理
化学的並びに生物学的性状を確定することくよって本発
明を完成させた。

抗生物質ＩＦ　−２１０５Ｂは抗生物質８Ｆ　−２１０
３ムと近縁なβ−ラクタム抗生物質であるが、これとは
明らかに異なシ、又公知のβ−ラクタム抗生物質のいず
れとも異なる化学構造を有する。一方本物質はダラム陽
性並びＫｌｋ性の細菌に対して抗菌活性を有すると同時
に優れたβ−２クタマーゼ囚害活性を示し、ペニシリン
系並びにセファ四スＩリン系薬剤と併用することによシ
相乗効果を発揮し、各種β−２クタム耐性薗に対し強い
抗菌作用を示す優れた性質を具備する。

抗生物質ＳＦ　−２１０５Ｂの製造は、まず微生物醗酵
に依夛、次いでその培養物から精製単離するととＫある
。

本発明に使用される抗生物質８Ｆ　−２１０！５　Ｂ生
産菌の一例としては、紀伊半島勝浦の土壌よ）新たに分
離された一放曽曹８Ｆ　−２１０５株がある。８Ｆ−２
１０５株の菌学的性状は下記の通シである。

Ｌ　形態的性質 気菌糸および胞子の形成はスターチ寒天、オートミール
寒天、イースト麦芽寒天勢の培地上で認められる。

気菌糸の分枝轄単純分枝で、車軸分校ｕ認められず、気
菌糸Ｏ先端にはほぼ直線的に胞子が連鎖する。

菌核、胞子のうなどの特殊構造Ｆｉ認められない。

電子顯黴鏡での観察による胞子の表面は平滑型であり、
胞子の１１−長円形ないし卵形で、大きさは０・７〜０
・８Ｘ１・０〜１・５ミクロンであり、通常１０個以上
連頗する。

■　各種培地上の生育状態 ８Ｆ　−２１０３株の各種培地上での生育状態は次表に
示すとおシである。培養は２８０Ｃ，観察は１４〜２１
日培養後に行なった。色の記載の（）内に示す標準はコ
ンテイナー・コーＩレージＷ／・オツ・アメリオ社製の
カラー・ハーモニー・マニユアルを用いえ。

なおスターチ寒天、オートミール寒天およびイースト麦
芽寒天培地上の気菌糸の淡いピンク色の着色は継代によ
る胞子形成能の低下に伴って消失し中すい。ま九気菌糸
は培養が一定時間以上進行するとともに溶菌し消失する
傾向が強い。

Ｉ　生理的性質 ｉｌ＋　　生育温度ａｍ：スメスターチにおいて１５０
Ｃ〜４２０Ｃ（Ｄ＠度１１Ｎ”ｔ’４ｔｌ　ｔ、、２５
°Ｃ〜５５０Ｃで東好に生育する。

（イ　ゼラチンの液化：陽性 ｌ）　スターチの加水分解：陽性 （４１脱脂乳のａｍ：陰性 脱脂乳の４ｆトン化：陽性 （６）硝酸塩の還元：陰性 （−耐環性：　５５ｋ　ＮａＣｌ添加培地で生育するが
５−では生育しない。

４７１　　メラニン様色素の生成：陰性■　炭素源の利
用性（ｆリードハム・プツトリプ寒天培地２８’Ｃ） （１１ｆｌ用する糖：Ｄ−グルコース、　Ｌ−ツムノー
ス、　Ｄ−マンニトール、　Ｌ−アラビノース、　シュ
ークー−ス、　Ｄ−７２クトース、　Ｄ−キシロース （２！　　利用しない糖：ラフィノース、　Ｉ−イノシ
トール。

■　細胞壁組成 ペラカー（Ｂｅａｋｅｒ　）らの方法〔アブライド・マ
イクロバイオロジー（ムｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌｏｇｙ　）１５巻、　２５６頁、　１９６５頁〕に
よ）分析した結果、細胞壁組成成分中のシア建ノピメリ
ン酸はＩ、Ｌｉ１ｌであつ九。

以上の性状を要約すると、８Ｆ−２１０３株はストレフ
トζセス属に所属し、気菌糸先端は直線型で胞子表ｍＳ
造は平滑である。

成熟し九気菌糸の色調はトレスナー及びパックス［Ｈ，
Ｄ、Ｔｒｅｓｎ＠ｒ　ａｎｔ　Ｅ、Ｊ、Ｂａｅｋｕｓ　
：　　アｆ２イド・マイクルバイオ誼ジー（ムｐｐｌｉ
＠ｄ　Ｍｌｅｒｏｂｉｏｌｏ−ｊｒＦ）　１１　％　、
　３！ｉ５頁、　１９４５年〕　のいわゆゐ０レツ）Ｐ
（Ｒ＠櫨）”シリーズに属し、裏函の生育色調は淡いペ
ージエ色となる。メラニン様色素の生成は認められない
。

■、同定 上記に得られ九分類学的賭性状をストレプ）＜セス属の
既知菌種の性状と比較し、ＩＩＦ−２１０５株の種の同
定を行った。

既知菌種の中で８Ｆ　−２１０５株と一致するＩＭｌｌ
は見い出せないが比較的近似する種として、ストレノト
ミセス・アルボルビメス（ｓｔｒ＠ｐｔｏｍｙｃ＠５ａ
ｌｂｏｒｕｂｉｄｕａ　）　［インターナショナル・ジ
ャーナル・オプ・システｉティック・）４クテリオ四ジ
ー（Ｉｎｔ＠ｒｎａｔ１ｏｎａｌ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　
　ｏｆ　　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　　Ｉｌａｃｔ−ｅｒ
ｉｏｌｏｇｙ　）　２２巻、２７１頁、　１９７２年〕
がある。

そコテ、そｏ標阜株Ｉ８Ｐ　Ａ　５４６５　トＩＩＦ　
−２１ｐ５株を並べて直接比較してみた。その結果両者
は気菌糸色調および棚の利用性で比較的よく一致してい
たが番種庫天培地上での生育状−に於て明瞭に異なって
い丸。即ちシス−クロース硝酸寒天培地およびグルコー
ス・アスパラギン寒天培地上での生育が、ストレグ）ｌ
ｋス・アルボルビメス社嵐好で気菌状の着生も旺盛であ
るが％　８Ｆ　−２１０５株の両培地上での生育は極め
て微弱であ夛、気菌糸の着生も認められなかった。また
逆にオートンール嘩天培地上でｌ１ｉＦ　−２１０３株
はよく生育し気菌糸も着生するが、ストレノトミセス・
アルボルビメスＯ生育は微弱であった。さらにストレプ
トζセス・アルボルビメスの気菌糸先端は、彎−するも
のがしばしば観察され、一方８Ｆ　−２１０！ｌ株では
常に直線状であ）、両者は一致しない。

更に１細胞壁組成成分中のシア２ノピメリン酸は、前者
がメソ蓋であシ、後者がＬＬ型で明瞭に異なっていえ。

その他託知薗種において気菌糸色調レッド・シリーズ、
気曹糸形態直纏蓋、胞子表面平滑型の性状を示し、８Ｆ
　−２１０５株と一致する−のはなかつ九〇 以上の結果よ）　、ＳＦ　−２１０３株はこれまで報告
され友ストレ！トンセス属のいかなる種とも異なる新菌
種と判断され、ストレプトζセス・スルホノファシェン
ス（８ｔｒｅｐｔａｍｙｃ＠ｓ　ｓｕｌｆｏｍｏｆａｅ
ｉ＠ｎ５）ＳＦ　−２１０５と命名Ｌ＆。

＆シ本薗株は工業技＊＊黴生物工業技術研究所に黴工研
壷寄第り号（ＦＩＩＩＭ　！ＩＦ　−５＞とじて寄託さ
れている。

８Ｆ　−２１０３株は、他のストレグ）＜セス属の菌株
の場合にみられるように、その性状が変化しやすく、例
えば紫外線、エックス線、放射線、薬品等を用いる人工
的変異手段で変異しうるものであシ、いずれの変異株で
あっても抗生物質５Ｆ−２１０５Ｂの生産能を有するス
トレノトミセス・スルホノ７アシエンスの種に属する菌
株はすべて本発明の範ＷＩＡＫ書まれる。

抗生物質８Ｆ　−２１０５Ｂ　（以下８Ｆ　−２１０３
Ｂ物質と称す）Ｋ関する本発明の方法では、前記菌株を
通常の微生物が利用しうる栄養物を含有する培地で培養
する。栄讐源としては、従来放纏曹の培養に利用されて
いる公知のものが使用できる。

例えば炭素源として、グルコース、　ダリ七四−ル、　
澱粉、　デキストリン、　水あめ、＄１蜜、　大豆油等
を使用しうる。又窒素源として大夏粉―　小麦胚芽、Ｊ
ｌ夷かす、　肉エキス。

４ｆトン、＃母エキス、　コーンステイーグリカー、　
硫安、　硝酸ソーダ等を使用しうる。その他必ｌ！に応
じて炭酸カルシウム、　塩化ナトリウム、　硫酸マダネ
シウム、　硫酸ナトリウム。

塩化コバルト、　硫酸第一鉄、　燐酸塩等の無機塩類を
添加する他、菌の発育を助け、８Ｆ−２１０５１１瞼質
の生産を助長、促進する有機及び無機物を適当に添加す
ることができる。また必要によ）消泡剤を添加すること
も可能である。

培養法としては、一般抗生物質生産の公知の方法と同じ
く、好気的条件下での液体培養法、特に深部培養法が最
も適している。培養に適嶋な温度は２０°Ｃ〜３５°Ｃ
であるが、多くの場合２３°Ｃ〜３０°Ｃの範囲で培養
する仁とが好ましい。

８Ｆ　−２１０！ｌ　Ｂ物質の培讐生産は使用する培地
中培養方法によってもＪ％なるが、振盪培養法あるいは
培養夕／りを用いる深部培養法では通常１〜１０日の間
でその蓄積が最高に達する。

ＳＦ　−２１０３Ｂ物質の検定方法は本物質が抗菌性物
質であシ、グラ＾陽性並びに陰性細菌に対し抗菌活性を
有するので、一般の抗生物質に用いられるごとく適当な
検定曹を用いるバイオアッセイによって抗菌活性を一定
し、その定量をＩＩ施することができる。本物質は抗菌
活性以外に強力なβ−２クタマーせ阻害活性を有する特
徴的な性質を持つているので、本発明者らが考案し九以
下に述べるβ−２クタマーゼ阻書活性検定法を用いると
極めて鋭敏に精度嵐〈定量することができる。即ちβ−
ラクタマーぜと′してはグロテウス・ブルガリス（Ｐｒ
ｏｔ＠ｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ　）　Ｍ　−８２４５の
生産する菌体内β−ラクタマーゼを用いる。その調・側
方法であるが、本膳を培地として２Ｓ＆東ツイ目ン溶液
（ＩＲ曹前−７）に接種して、５２°Ｃで培養する。

培養開始時と培養開始２時間後および４時間後に１それ
ぞれβ−ラクタマーゼ誘導愉質をしてベンジルペニシリ
ンカリウム塩を２５０μｔ／ａｔ　ｏ＠変になるように
添加して培養を続け、培養開始７〜８時間俵に培養を止
め、遠心分離にて集菌する。

得られ九ｍ＃１菌体を菌体蓋の２倍量の−７，０゜口・
１Ｍ憐酸緩衝液Ｋｌｌ濁し、細胞破砕機（例えばフレン
チブレス）で細胞を破砕し、遠心分離（１００００ｒｐ
ｍ、　１０分）で沈毅する細胞破片を除去する。得られ
九上澄液を５ＱＣでＰ！（７，０，０，１Ｍ燐酸緩ｌＩ
液で一晩透析し、透析内液をβ−フクタマーゼ粗酵素液
として得る。このようＫして得られる酵素液のｌ−ラク
タｉ−ゼ活性は、セファロチン・ナトリウムを基質とし
、ナージエントの改良方法で辱素活性を測定しくＭ、Ｇ
、８ａｒｇ＠ｎｔ　：　Ｊｏｕｒ−ｎａｌ　ｏｆ　Ｂａ
ｃｔ＠ｒｉｏｌｏｇｙ、　９５．１４９３（１９６８）
　）　、通常５ｏｏｏ　〜６ｏｏｏ単位（ｕ／ｄ）を有
する。次に上述の方法で得られたβ−ラクタｉ−ゼを用
い検定用平板を調製するのであるが、２・３１Ｇニエー
トリエント・アガー（ディフコ社製）溶液をオートクレ
ーブ殺菌し、４５ｏｃＫ冷却し九後七〇２５０ｍｇＫ。

予めシード培養したバチルス・ズｔチリスＡＴＣＣ６６
３５の種母０・５ａｅｇおよび前述のβ・−ラクタマー
′４＃溶液を１２５単位量加えて混合し、２５０■×３
２０−の千１［Ｋ流し込み固化する。検定に当ってはペ
ーノダー・ディスク（径８ｓｗ）−＄予めセファ−チン
・ナトリウム塩の５０　ｓｒ　／−の５０−アセトン水
溶液を２０μ付しえものに、被検波２０μｔを付し風乾
したべ一一一ディスクを検定シャーレに置龜、５７０Ｃ
セ１５〜１７時間保つトａＦ−２１０３１物質の一度に
応じ阻止円が現われる。

この検定方＠ＫＴｈｈ”ｔ”、ｉｉＦ　−２１０！Ｓ物
質の濃度１μｔ／ｄ〜２５μｍ　／　ＩＩｌの範囲で濃
度の対数と阻止円直径がダッ７上直纏関係を示し、精度
爽〈定量できる。

ＳＦ　−２１０５ｌ物質は主として培養ｖ液中に８Ｆ−
２１０３ム物質と共に蓄積される。培養液中の８Ｆ　−
２１０３１物質は、後記する理化学性状を有するのでそ
の性状に従って抽出、精製することが可能であり、以下
に示す方法が効率的である。すなわち、有効成分を會む
培養物から固形分をＦ去し、−波を活性炭に吸着させ、
５０％アセトン水で溶出させる。有効成分を會む画分を
鎖線してアセトｙｔ留去後ベンジルジメチルセチルアン
峰ユウムクμライドあるいはペンゾルジメチルテトラデ
シルアン峰ニウムクロ２イドのような菖四級アン毫二り
ム塩を會むハロｌノアルヵン例えばジク冒ルメタンで有
効成分を抽出後、曹つ化ナトリウムを含む水で再抽出し
凍結乾燥して８Ｆ　−２１０５ｌ物質とＩＦ　−２１０
５ム物質の拠金粗精製物を得る。さらに精製するにはＤ
ＩＡＩ−セ７アデックスム−２５、ＱＡｚ−セ７アデツ
クスム−２５、ＤＢＡＢ−セルロース、ダウエックス１
×２のような陰イオン交換担体を用いたクロマトグラフ
ィーをくりかえずことによｆｉ　ＳＦ　−２１０５ＩＩ
ｌ物質８Ｆ　−２１０３ム物質と分離して得ることがで
きる。このほか、バイオビルＰ−２のようなｆ　ｋｆｌ
過剤、アンバー２−イトん山のような多孔性樹脂あるい
はセルロースカラ五等を適宜使用するととＫよ）更に高
度な精製が可能である。かくして得られ九ＢＦ　−２１
ｏｓ　ｌ物質の粉末を各種の溶剤系でＯ薄層りｐマトグ
クフイー並びにその他の分析手段（例えば高圧−紙電気
泳動ヤ高速液体り曹マトダ２フィー）を用いて検討し九
ところ、いずれの分析手法においても単一であることが
認められ九。８Ｆ　−２１０５ｌ物質は以下に示すとと
〈型温以上の高温及び酸、アルカリ性では極度に不安定
なため、培養液から単離するに轟っでは溶液中の−が酸
又はアルカリ性にならないよう細心の注意をはらい、溶
液操作はすべて低温でかつ迅速に行なうことが肝要であ
る。

また、８Ｆ　−２１０５１物質は酸性では極めて不安定
な丸め遊離酸の形で単一することは実質的に困難である
。このため８Ｆ　−２１０３Ｂ　物質は最終的に中性水
溶液を凍結乾燥することによって淡黄色ないし白色無定
１１１１１１Ｉ末状の塩として得られる。その純度は培
養力価によシ左右されることがある。塩の種類は精製に
使用される陽イオンによって規定され、例えばＤＩＡＥ
−セファデックス人−２５のりＷマＦダツフイーで食塩
水を溶離液として用いればナトリウム塩として得られる
。ナトリウム塩以外の医薬的に受容可能な塩としてカリ
ウムのごときアルカリ金属塩、カルシウムのごときアル
カリ土ＳＷ壷Ｘ塩、アルｉニウム、アンモニｆ）Ａｍ等
の無機塩、もしくは置換アンモニウム塩等の有機塩を上
記ナトリウム塩と同様な方法で調製することができる。

また、ナトリウム塩から他の塩への変換は！ウエックス
５０Ｗのような陽イオン交換樹脂をあらかじめ交換すゐ
陽イオンで置換した後、ナトリウム塩の水溶液を通過さ
せることによっても可能である◎ 次に、これまでに得られた最純品と思われる８Ｆ　−２
１０３１物質のナトリウム塩の理化学的性状について述
べる。但し、凍結乾燥粉末として得られる九め水ｉ九は
他の不純物が含まれることもめシうる〇 抗生物質−８Ｆ　−２１０５Ｂおよびその塩類の性状は
次の通プである。こ＼ではそのジナトリウム塩が下記の
性状を有する。

（１）物質の色と形状：白色粉末 （２！　　融　点：明確な融点を示さず、１５８°Ｃで
発泡分解する。

悼１　元素分析：　Ｃ，Ｈ，０４Ｎ８Ｎ＆、−Ｈ，Ｏと
して計算値■：　Ｃ３５，６４，Ｈ２，８０，Ｎ　４．
５６゜０５４．８？、　８　？、９７　、　Ｈａ　１４
．３３夷測値■：　Ｃ５５，Ｂ１．　Ｈ２，５６，Ｎ　
４．５０゜０３４．３４（差）　、　８１０．１２．　
ＮＡｌ４．８７　　（原子吸光分析による）（滲　紫外
部吸収スペクトル二ｐＨ７−２，８−０２Ｍ燐酸緩衝液
中で測定するとき第１図に示される過シで＃）夛、吸収
極大は２３０Ｈｍ及び５１０ＨｍＫ存在する。

（四　赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤中で測
定したスペクトルは第２図に示す通シであるＯ ＋６１　　核磁気共鳴スイクトル＝ｆμトンＮＭＢデー
タ（ＤＢＳ外部基準）は下記の通シである。

Ｊ、　ｐｐｍ　（Ｄ２０）　　：　１．８６　（３Ｈ，
ｄ、　Ｊ＝　８　Ｈｚ）。

３．１０　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ＝９Ｈｚ）、　４．９４　
（Ｉ　Ｈ，ｔ。

Ｊ＝９１ｈ＞、６−６２　（Ｉ　Ｈ，ｑ、　Ｊ＝８Ｈｚ
）＋７１　　薄層クロマトグラフイｍ： （＆）　　セルロース薄層（Ｃ＠１ｌｕｌｏｓｅ　Ｆｘ
ｓａ　ｅ　　メルク社製）を用い、下記の各展開溶媒系
にて５゜Ｃで展開するとき、下記のＲｆ　　値を示す。

Ｒ４値 ｎ−ツタノール：メタノール：水＝４：１：２　　０．
４１８０−アセトニトリル　　　　　　　　　　　　　
０．４０７０嘩エタノール　　　　　　　　　　　　　
　　　０，６２７０慢ｎ−プ’ｊイノール　　　　　　
　　　　　　　　　０，４５（ｂ）　　ＤＩＡＥ−セル
ロ−ス薄層（Ｐｏｌｙｇｒａｍ　ＣＫＬ３００　ＤＫＡ
Ｅ、マーチエリ−・ナーｙル社製）を用い、０・１Ｍ塩
イヒナトリウムを含有する−７−２．０−０２Ｍ燐酸緩
衝液にテ５ｏＣテ展開するとき、Ｒｆ　　値は０・５４
である。

＋８７　　高圧Ｖ紙電気泳動：高圧Ｖ紙電気泳動装皺（
サ−）４７ト・インスツルメント社製、＾圧電源ＨＶ　
５０００　Ａ、　　泳動４％１１　モテルＬＴ　４８　
Ａ　）　ｔ”用い、東洋Ｐ紙ム５１　（東洋Ｐ紙社製）
、ｖ紙中１５ｃＨＩ上で下記の緩衝液を用い、定電圧２
８００　Ｖ　で１５分泳動を実施するとき、対照の８Ｆ
　−２１０５Ａ物質が陽極側に１５．５ｃｗＩ移動する
のに対し、本物質は陽極側にＱ２ｃＩＭ移動する０ 緩衝液：ビリジン２００−と酢酸８ａｇを全容量５ＬＫ
なるよう精製水に溶解したもので、この時の−は６．４
であった。

慣　高速液体クロマトグラフィー：本物質を下記の条件
下で高速液体クロマトグラフィーを実施するとき、その
保持時間は、対照のＳＦ−２１０３ム物質が２０分に対
し、本物質は４分１０秒である・ 条　件：高速液体りｐ、マドグラフィー装置はウォータ
ース社製ルＣ／ＧＰＣ、２４４１１１，力２ムはＺＩＰ
ＡＩＸ　８ｍ　（チェ４フ社製、内１１７９ｍ。

最さ５０菌）を用い、溶出液は−７，２、０・０５Ｍ燐
酸緩衝液に硝酸ナトリウムを０．０５ＭＫなるよう溶解
したものを用い、流速は３−／分二紫外部吸収検出波畏
は５１３　ｍｍおよび２５４腺を用い麿温で実施した。

舖　溶解性工水に易溶、メタノールに可溶、酢酸エチル
、りａロホルム、ベンゼンなどの溶媒には不溶である。

１１　　呈色反応：し電ニー試薬には陽性、エールリッ
ヒ試薬には陽性であシ、ニンヒドリン試薬には陰性であ
る。

以上の物理化学性状よ）本物質のジナトリウム塩は下記
の揃定構造式を有する。

構造式 したがって遊離Ｃ）　８Ｆ　−２１０５Ｂ物質は下記の
構造式を有テるものと推定される。

８Ｆ　−２１０３Ｂ物質は抗菌活性並びに特徴的と云え
るβ−ラクタマーゼ阻害活性を有し、その結果β−ラク
タ！−ゼを産生する耐性病原曹に対し無効であるペニシ
リン系及びセファロス−リン系抗生物質とＳ金して用い
ることによ〉相乗的に抗菌作用を発揮する。以下にそれ
らＯＩＩ験例を示す。

８Ｆ　−２１０５ＩＩ物質ナトリクム塩の抗菌活性を、
次表に示す。検定はペーパーディスク・寒天拡散法に依
った。

！！＠ｂ Ｎ） Ｖ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　啼拳地（
！）　　　　培地（２） β−ラクタム系薬剤に対し耐性である臨床分離株につい
て、　８ＩＰ−２１０３１ｍ物質と数種のβ−ラクタム
抗曹剤との併用による抗菌活性を調べ九夷験例を第２１
！に示す。方法は、直径８ｓｍ＋０メーパーディスクに
適轟濃度のそれぞれの薬剤溶液をマイク−ピペットを用
いて付し、イーノーディスク・痺天拡散鉄で當法過シ（
検定シャーレ培地は前述の２の培地）行なつ九〇 表に示される結果よｆｉ、　８Ｆ−２１０３Ｂはペニシ
リンＭＡびセファロスＩリン系薬剤と併用することによ
シ、抗菌活性において優れた相乗効果を発揮する有用な
性質を持つことは明白である。

以下に本発明の実施例を示すが、これらは単なる例示で
あって何んら本発明を限定するものではない。

実施例１ ５０口―容坂口フラスコにグルコース１％。

可溶性澱粉１％、　　ポリペグトン０・５−１　酵母エ
キス（）３１　、　　大豆粉０・２９１．　崗エキス０
・２−及び炭酸カルシクム０・１−からなる培地（滅菌
前−７，０）８０−を加えｌｓ＠を施し、オートクレー
ｆ殺菌（１２０’Ｃ，１５分）後、８Ｆ　−２１０５株
（黴工研条寄ｔＩＩｉｓ号）を−白金罵植薗し、２８’
Ｃで２日間振盪培養する。次に上記殺菌培地５００ｄを
含む２Ｌ容三角フラスコＫ、先に得九種母培養物を礼５
−接種し、２８’ｅで１日振盪培養すると十分に曹Ｏ威
冑が見られる。これを種母として次の種母培養タンクで
培養する、即ち１５０Ｌ容の種母培養タンクに、上記の
培地５０ｔを仕込み、１２０°Ｃ９２０分間蒸気殺菌後
、先の種母２−量を接種し丸。種母培養タンクでの培養
条件は攪拌回転数２５　Ｏｒｐｍ、通気量１００襲で２
８°Ｃ１２４時間培養であった。生産培養は２Ｋｔ　タ
ンクを用い、培地は水飴１・８−、ナラメ油０．２７チ
、大豆粉１・０８チ、小麦胚芽１・０８−１硫酸ナトリ
ウム０・０１９−１炭駿カルシウム０．０９％、塩化コ
バルト０．０００９１及び硫酸第一鉄０．０００４５　
％から成り（殺菌前−，６，０）、これを１，０５０を
仕込み、殺菌は１２０’Ｃ、５０分蒸気殺菌を行なつ九
。これに種母タンク培養物２０１（２−量）を接種し培
養を行なった。培養条件は攪拌間転数１５Ｏｒｐｍ、通
気量８０チで２８０Ｃ、４９時間培養で番つ九。培１１
１Ｍ了後、フィルタープレスで一過し、−液９８０ｔを
＊＊＊　コＯＦ液はＩＳＦ　−２１０３１及びＳＦ　−
２１０５ム物質を會み、両者の会計力価は７−５　ｖａ
　／　ｄであつ九＠ 実施例２ Ｉ）上記のようにしてｌＩえ培養−液９８０Ｌを６規定
塩酸でｐ）１６−４に調節し、このＦ液に０．２チ（Ｗ
／ν）のペンゾルジメチルナト２デシルアンモニウムク
ロライドを含有するジクロルメタン３５０ｔを加え、１
時間攪拌し有効成分を抽出する。この抽出液Ｋｏ、７＊
（ｗ／マ）の口つ化ナトリウム水溶液３５ｔを加え、１
５分攪拌して有効成分を水層に転溶する０この水層を減
圧下で濃縮し、ジクロルメタンを留去し九のち、あらか
じめ水で充填した活性炭素（和光紙薬製）１．２Ｊ！の
塔を通過させ、さらに２ｔの水で活性炭素を洗浄する。

通過液と洗液を合併した３７１の溶液を、あらかじめ−
ス４の燐酸緩衝波で緩衝化した〇ＫＡＥ−セファデツク
スＡ−２５（ファルマシア社製）の３ｔの塔Ｋかけ、有
効成分を吸着させる。２０−燐酸緩衝液（＄７−４）Ｋ
溶解した０、２Ｍｔ）食塩水２０１で予洗し、さらに同
緩衝Ｉ！に溶解し九〇−！ｓＭ食塩水で有効成分をｓｍ
する。５００Ｉｄずつ分画し、フックシ画ン１８から４
８１でに活性が認められ、この区分（１５ｔ）を会併し
、あらかじめ水で充填しえ活性炭素（ト０の塔Ｋかけ、
有効成分を吸着させる。この塔を５ｔの水で洗浄後、５
０チアセトン１２Ｌで有効成分を溶出させる。この溶出
液を減圧下で鎖線し、濃縮液を凍結乾燥する゛と８Ｆ　
−２１０３Ｂ及びム物質の混合粗粉末１２．４Ｆが得ら
れえ。

［）　ｌ）で得られた粗粉末１０ｆを５０−の水に溶解
し、予めｐＨ７，４の燐酸緩衝液で緩衝化したＤＩＡＩ
−セフ７デツクスＡ−２５の３００１ｄの塔に付し、有
効成分を吸着させる。２０ｍＭ燐酸緩衝液（ＰＨ７−４
）１．５ｔで洗浄した後、さらに同緩衝液で溶解し九〇
、ＩＭ食塩水で有効成分を溶離する。

１５０−分画でフラクシ田ン１２〜１５にかけて’ＳＦ
　−２１０！Ｓ　Ｂ物質が溶出され、後続する５ｒ−２
１ｏｊＡ物質と分離される。前者の活性７２クシ冒ンを
金併し、活性炭素１２０４０搭にかけ、有効成分を吸着
させる。この活性炭素を２４０ｄＯ水で洗浄後、５Ｏｖ
Ｉアセトン水５００−で有効成分を溶出させる。

この溶出液を減圧下で―纏し、′ｌＩＫ＃乾燥する七８
Ｆ　−２１０！Ｓ　１物質のす）！？ム塩が淡黄色粉末
として２５０ダ（純度約５０優）得られた。

次いでこの粗粉末２５０ηｔ−１０Ｍｔめ水に溶解し、
予め−７−４の＃１−に漬液で緩衝化したＤＥＡｇ−セ
ファデックスム−２５の５０−の塔に付し、有効成分を
吸着させ、２０ｍＭ１ｌ＄酸緩僑液２５〇−で洗浄した
後、さらに同緩衝液で溶解し九〇、０５Ｍ食塩水で有効
成分を溶離する。２〇−分画で７ラクシ目ン４２〜５８
にかけて活性フラクションが得られる。この活性フラク
ションを合併し、活性炭素６０ｄの塔にかけ有効成分を
吸着させる。

この活性炭素を１２０−の水で洗浄後、５０−アセトン
水３００５ｇで有効成分を溶出させる。この溶出液を減
圧下で濃縮し、凍結乾燥するとＳＦ　−２１０３１物質
のナトリウム塩が白色粉末として８８＊（純度約６５優
）得られた。

１ｉＤＩＤで得た８Ｆ　−２１０３Ｂ物質８ＥＩＦを２
−の水Ｋｌｌ解し、セファデックスＧ−１０（７アルマ
シア社ＩＩ）　２４０　ｍｏｊｌＫかけ、水で展−すゐ
。

５ｄ分画でフックシ曹ン１６〜２０に活性フラクション
が得られるが、フラクション１７と１８を合併し、減圧
下で濃縮、凍結乾燥すると８Ｆ−１１０３Ｂ物質のナト
リウム塩の純品が白色粉末として２９〜得られ丸。

なお以上の操作（１〜ｍ）は全て低温条件下（４°Ｃ）
で実施し丸。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質８Ｆ−２１０５Ｂ　（？）ナトリウム
塩）の紫外部吸収スペクトルであ）、第２図は抗生物質
ＳＦ　−２１０５Ｂ　（ジナトリウム塩）の赤外吸収ス
ペクトルである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　ジナトリウム塩として次の特性を有する水溶性酸
   性新抗生物質ＳＦ　−２１０３Ｂおよびその塩。 （１）物質の色と形状：白色粉末 （２）融　点：明確な融点を示さず、１５８０Ｃで発泡
   分解する。 １８１　　元素分析：　Ｃ，Ｈ，０，Ｎ５Ｎａ２・Ｈ，
   ０として計算値■：　Ｃ５５，６４，Ｈ２，８０，Ｎ　
   ４．５６０５４．８９．　Ｓ　９．９７．　Ｎａ　１４
   ．５３＊ｓｇ＋値（至）：　Ｃ３３，８１，Ｈ２，５６
   ，Ｎ　４．３００５４．５４■、　８１０．１２゜ Ｎａ　１４．８７　（原子吸光分析による）１滲　紫外
   部吸収スペクトルニー７・２，０．０２Ｍ燐酸緩衝液中
   で測定するとき第 １図に示される通〕であ）、徴 収極大は２５０　ｎｍ及び３１０ Ｕに存在する。 １６）　　赤外部吸収スペクトル：　臭化カリクム錠剤
   中で測定し九スペクトルは第２図 に示す通〕である。 −被磁気共鳴スペクトルニア”ｔ−）ンＮＭ！データは
   下記の過多である。 δ、ｐｐｍ　（Ｄ２０）　　：　１．８６　（３Ｈ。 ｄ、　Ｊ−８Ｈｚ）、　３．１０　（２１（。 ｄ、　Ｊ＝９Ｈｚ）、　４．９４　（Ｉ　Ｈ。 ｔｔ　Ｊ＝？ＨＩＩ）、　６．６２　（Ｉ　Ｈ。 ９１１ｗＭ８Ｈ１） け（薄層クロｉトダラフイー： （＆）　　セル胃−ス薄層（Ｃ＠１１ｍ１ａｓｅ　１２
   ａｍ、　／ルク社１１）を用い、下記の各展−嬉謀系に
   て５°Ｃで展開するとき、下記Ｃ）Ｂｉ　　値を示す。 Ｒｆ値 ８０１Ｊｌアセトニトリル　　　　　　　　　０．４０
   ７０　＊ｘｌ／−ル０．６２ ７０−ｎ−プＨｔ４ノール　　　　　　　　　０．４５
   （ｄ　　Ｉ）ＥＡＥ−セルロース薄層（Ｐ）ｌｙｇｒａ
   ｍＣＥＬ　５００　ＤＥＡＥ、マーチエリ−・ナーｌル
   社製）を用い、０．１Ｍ塩化ナトリクムを含有する−７
   ．２’、８．０２Ｍ燐酸緩衝液にて５０Ｃで展開すると
   き、Ｒｆ　値は０・５４である。 に）　高圧Ｐａ電気泳動：高圧ｒ紙電気泳動装置（サー
   Δント・インスツルメント社製、高圧電源ＨＶ　５００
   ０ム、泳動槽モデルＬ”ｌ’４８ｍ）を用い、東洋Ｐ紙
   ム５１（東洋Ｆ紙社１４’）　、Ｆ紙中１５国土で下記
   の緩衝液を用い、定電圧２８００　Ｖ　で１５分泳動を
   実施するとき、対照の８Ｆ　−２１（１５ム物質が陽極
   側に１５・５ｃｍ移動するのに対し、本物質は陽極側に
   ％２ａ＋移動する。、 緩衝液ニーリジン２０Ｇ−と酢酸８−を全容量ＳｔＫな
   るよう精製水に溶解し喪もので、この時ＯＰＭ紘６・４
   であった。 −高速液体り四マトダラフイー二本物質を下記の条件下
   で高速液体クロマトグラフイーを実施するとき、その保
   持時間は、対照の８Ｆ　−２１０５Ａ物質が２０分に対
   し、本物質は４分１０秒である。 条件：高速液体りシｉトダラフイー装置はウオータース
   社製ムＬＣ／　ＧＰＣ、２４４型、力９　Ａ　ＺＩＰＡ
   Ｘ　ＳＡＸ　（デュＩン社製、内径７、９　ｓｍ　、長
   さ５ＯｃＩＩ）を用い、溶出波は−７−２，０，０５Ｍ
   燐酸緩衝液に硝酸す）　ＩＪウムを０・０５Ｍになるよ
   う溶解したものを用い、流速は５１４７分で、紫外部吸
   収検出波長は５１　Ｓ　ｎｍおよび２５４　ｎｍ　を用
   い重置で実施した。 −溶解性：水に易溶、メタノールに可嬉、酢酸エチル、
   りＩ２−ホルム、ベンゼンなどのｉｌｍＫは不溶である
   。 ＋１１　　ｊｉ色反応ニレミニ−試ＩＮＫは陽性、エー
   ルリッヒ試薬には＊＊であ夛、ニンヒドリン試薬には陰
   性である。 シ　ストレフトきセス属に属する抗生物質８Ｆ−２１０
   ５Ｂ　生産菌を栄養培地中で培養し、その培養物から新
   抗生物質８Ｆ　−２１０３Ｂ又はその塩を採堆すること
   を特徴とする新抗生物質８Ｆ　−２１０５Ｂ又はその塩
   の製造法。 ＆　抗生物質ＳＦ　−２１０５Ｂ生産菌がストレグトン
   セス・スルホノファシェンス・ＳＦ　−２１０３である
   特許請求の範■第２項記載の製造法。