JPS58223064A - 液体試料導入装置 - Google Patents

液体試料導入装置

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JPS58223064A
JPS58223064A JP10563682A JP10563682A JPS58223064A JP S58223064 A JPS58223064 A JP S58223064A JP 10563682 A JP10563682 A JP 10563682A JP 10563682 A JP10563682 A JP 10563682A JP S58223064 A JPS58223064 A JP S58223064A
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boric acid
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gel column
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JP10563682A
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Yasuo Ishida
泰夫 石田
Morimasa Hayashi
守正 林
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Shimadzu Corp
Shimazu Seisakusho KK
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Shimadzu Corp
Shimazu Seisakusho KK
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02Column chromatography
    • G01N30/04Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/16Injection
    • G01N30/20Injection using a sampling valve

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  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
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  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
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  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 仁の発明はカテコールアミン類の分析法とその   −
装置に関する。
血漿、尿などの生体試料中のカテコールアミン類の分析
法としては、従来、試料をアルミナカラムを通過させて
蛋白を除去するとともにカテコールアミン類を吸着させ
、次いでこの吸着されたカテコールアミン類を脱着させ
力2ムクロマトグラフイに付して分析する方法が一般に
行われている。
しかしこの方法におけるアルミナカラムの再生処理操作
は著しく煩雑であって、その上カテコールアミン類の安
定した回収率が得られないという欠点を有している。
この発明は上記の欠点を解消するためになされたもので
ある。仁の発明の発明者らはカテコールアミン類が中性
〜弱塩基性条件下でホウ酸と安定な錯体を形成する仁と
に着目し、後記ごときホウ酸ゲルに試料中のカテコール
アミン類を吸着させ。
次いでこれを脱着させて高速液体クロマトグラフィに付
して安定した回収率でカテコールアミン類を分析しうろ
こととしかもこのホウ酸ゲルの再生処理が極めて簡単な
操作で行いうろことを見出しこの発明をなすに至ったも
のである。
かくしてこの発明は、カテコールアミン類のホウ酸ゲル
カラムへの吸着用移動相の供給槽、2種のホウ酸ゲル再
生処理液供給槽、これらの槽からの液を切換えるための
第1切、換えバルブおよびカテコールアミン含有試料導
入部が第2切換えバルブを介してホウ酸ゲルカラムと排
液放出路にこの順に接続され、かつカテコールアミン類
のホウ酸ゲルカラムからの脱着用と高速液体クロマトグ
ラフの分離カラムによる分離用とを兼ねる移動相の供給
槽を第2切換えバルブを介してホウ酸ゲルカラムに接続
するとともにホウ酸ゲルカラムの出口を高速液体クロマ
トグラフの分離カラムに接続し喝上記カテコールアミン
含有試料導入部が第1切換えバルブから延びる第1抵抗
流路およびその出口側に連結した試料注入口を備え第2
切換えバルブに延びる主直列流路と、第1抵抗流路より
抵抗の小さい第2抵抗流路を備え前記直列流路に対して
並列に連結したバイパス流路からなシ、これらの構成に
よってカテコールアミン類のホウ酸ゲ〃カラムへの吸着
、次いでその脱着後に高速液体クロマトグラフでの分析
ならびにホウ酸ゲルカラムの再生処理を可能とするカテ
コールアミン類の分析装宜を提供するものである。
この発明によれば生体試料などに含有されるノルアドレ
ナリン、アドレナリン、ドーパミンなどのごときカテコ
ールアミン類を安定した高い回収率で自動連続分析する
ことができ、その上カテコールアミン類を吸着させるホ
ウ酸ゲルの再生処理が極めて簡単な操作で行うことがで
きる。
この発明に用いられるホウ酸ゲルとしては、適当な担体
、たとえばポリメタクリル樹脂、セルロースなどにジヒ
ドロキシボリル基を化学結合させたものが用いられる。
このホウ酸ゲルをステンレス鋼製などのクロマト管に高
圧下で充填されたものなどがホウ酸ゲルカラムとして用
いられる〇カテコールアミン類の上記ホウ酸ゲルへの吸
着用移動相としてはpH6,8〜7.4の酢酸アンモニ
ウム水溶液、トリス塩酸水溶液などが挙げられるが、p
H’がほぼ7.0のEDTA−2Na含有のリン酸ナト
リウム水溶液が好ましい。一方脱着用移動相としては強
酸性の塩酸水溶液、酢酸水溶液などが挙げられるが、リ
ン酸にてpHがほぼ2.0に調整された硫酸ナトリウム
水溶液が好ましいもので、この脱着用移動相はそのまま
高速液体クロマトグラフィの移動相として用いられる。
また高速液体クロマトグラフ用のカラムとしてはゾルパ
ックス0D8(デュポン社製)などが用いられ、試料の
種類によって適宜選択される。また高速液体クロマトグ
ラフで分離されたカテコールrミ/は一般にトリヒドロ
キシインドール体に誘導化し螢光光度計で検出される。
ホウ酸ゲルの再生処理は最初にリン酸水溶液を通過させ
次いで、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどの゛ア
ルカリ水溶液を通過させそ行われる。
このような簡単な方法で再生処理することによって安定
した回収率でカテコールアミン類を分析することができ
る。
次に図に示すこの発明の装置の実施例に基いてこの発明
を詳述する。なおこれによってこの発明が限定をうける
ものではない。
第1図に示したこの発明のひとつの実施例のカテコール
アミン類分析装置(1)は、ホウ酸ゲルカラム;2)に
、カテコールアミン類を吸着させるための移動相13)
と2種のホウ酸ゲルカラムの再生処理液(4)と(5)
とを第1切換えバルブ(6)を切換えてポンプ(7)に
よって供給する液相供給部(8)と試料導入部としての
試料注入口(9)とが連結された液相・試料供給路01
と、ホウ酸ゲルカラム(2)と、カテコールアミン類の
ホウ酸ゲルからの脱着用と高速液体クロマトグラフィ分
析用とを兼ねる移動相aIJをポンプ02で送る流路囮
と、高速液体クロマトグラフの分離カラム0Φと検出部
四を有するカテコールアミン類分析路aeと、分析排液
放出路aηと、これらの多路を連結する第2切換えバル
ブ囮と、ホウ酸ゲルカラム(2)と分離カラムα(との
加熱定温保持手段(図示せず)とから構成されている。
次に上記の分析装置を用いてカテコールアミン類を分析
する操作法を述べる。
まず第2切換えバルブQlを第1図に示す位置に固定し
、ホウ酸ゲルカラム+21ヘカテコールTミン類を吸着
させるための移動相(3)を第1切換えバルブ(6)を
切換えてポンプ(7)にてホウ酸ゲ〜カラム(2)へ送
シ平衡状態とする。次に試料液を試料注入口(9)から
注入して試料中のカテ゛□コールアミン類をホウ酸ゲル
カラム(2)に吸着させる。次に第2切換えバルブ0(
至)を第2図に示す位置に切換える。次いで移動相aυ
をポンプ0りによって第2切換えバルブa(至)を介し
てホウ酸ゲルカラム(2)に送って吸着されていたカテ
コールアミン類を脱着させ、さらに仁の脱着液を切換え
バルブ0■を介して高速液体クロマトグラフの分離カラ
ムOQと検出部aりに送ってカテコールアミン類の分析
が行われる。一方ホウ酸ゲルカラム(2)の再生処理は
、第2切換えバルブαaを第1図に示す位置に切換え、
該力2ムの再生処理液(4)と(5)とを、第1切換え
弁(6)を切換えてポンプ(7)によって所定の順序で
、第2切換えバルブ0梯を介してホウ酸ゲルカラム(2
)に送って行われる。
次に第1図に示す分析装置を用いてヒト血漿を分析した
実施例を示す。
(1)試料注入 1)試料 ヒト血液をEDTム−2Naを用いて採取しこれよシ常
法によって得九血漿900plにピロ亜硫酸ナトリウム
の1哄水溶液50μIと1規定の塩峻so#t:とをl
RK加え4℃で24時間放置したものの500plを分
析1回分の試料とした。
I)試料導入部 高滓 8 I L−人形 (2)  カテコールアミン類のホウ酸ゲルカラムへの
吸着 I)ホウ酸ゲルカラム ホウ酸ゲ/L/(粒径0.1−0.4闘)(アルド。
リッチ社製) を41TITll内径X5cm長のステンレス鋼製円筒
形カラムに充填したもの。
11)移動相 0、1 Mリン峻ナトリウム水溶液(o、を哄gDTA
−2Na含有)、piiy−。
111)移動相流量       2.0d/分+V)
  カラム温度       40゛C(3)ホウ酸ゲ
ルカラムに吸着されたカテコールアミン類の脱着と高速
液体クロマトグラフによる分離と分析 1)高速液体クロマトグラフの分離カラムゾルバックx
  0D8(4,6mm内径X15cm長) 11)移動相 0.2M硫酸ナトリウム水溶液(Q、 l mMドデシ
ル硫峻ナトリウム含有、リン酸にてpH2,0Kg1!
I整) 111)移動相流I¥       0.5 d/分+
V)  力2ム温度       40℃■)検出器 
高滓 化学反応検出器(試薬送液ポンプ:PRR−2A
ア反応槽: CRB−21。
及び螢光分光光度計 RF−5QQLOムを含む。) (4)  ホウ酸ゲμカラムの再生処理条件40℃のホ
ウ酸ゲルカラムに、まず0.1Mリン酸水溶液を流J1
2. OrIll/分で約6分送シ、次いでo、 t 
Mの水酸化ナトリウム水溶液を流量2、0 W//分で
約10分送り再生処理する。
上記の分析をホウ酸ゲルカラムの再生処理を行わずに行
った場合のクロマトグラムを第3図に示したが(hずれ
も左側がノル′アドレナリン、右側がアドレナリンのピ
ークを示す)、分析の回数を重ねるとカテコールアミン
類の回収率が著しく低下することが分かる。
また第4図に該カラムの再生処理を1回分析毎に行った
場合のクロマトグラムを示したが、カテコールアミンの
ピークが一定で正確な分析のでき、ることか分かる。
また試料導入部が第5図に示す構成を備えると流路(1
)およびその出口側に連結した試料注入口(社)を備え
第2切換えバルブに延びる主直列流路と、第4抵抗流路
(イ)よシ抵抗の小さい第2抵抗流路(支)を備え前記
直列流路に対して並列に連結したバイパス流路から構成
されている□。・試料中のカテコールアミンをホウ峻ゲ
ルに吸着させる際は、pH6,s〜7.4の移動相を用
いて吸着させるが、特に試料容積が大きい場合には試料
のpHが6.8以下罠なシやすく、カテコールアミンを
正確に分析できなくなる傾向がある。このような場合で
も上記のととき流路抵抗比l:3を有するバイパス経路
で構成された試料導入部を有するこの発明の分析装置は
、試料全体のpHを十分6.8以上に保持することがで
きる。
【図面の簡単な説明】
第1図と第2図はこの発明を具体的に実施する分析装置
の概略系統図、第3図と第4図はその装置を用いてヒト
血漿中のカテコールアミンを分析して得たクロマトグラ
ム、第5図は好ましい具体的構造を有する試料導入部の
概略図である。 fl)・・・この発明の一実施例のカテコールアミン類
の分析装置、(2)・・・ホウ酸ゲルカラム、(3)・
・・カテコールアミン類のホウ酸ゲルカラムへの吸着用
移動相、 +41 、15)、*つ酸ゲ8カ、7.。再生処理液、
        3.′lT6+ 、 118)・・・
第1および第2切換えバルブ、(71、[12・・・ポ
ンプ、 (8)・・・移動相・試料供給部、 +91 、 (21)・・・試料注入口、04)・・・
高速液体クロマトグラフの分離カラム、(]51・・・
検出部、     (4)、@・・・抵抗流路。 f−−f 1回目 10口回目200目      10目 10
口回目200目第5図 手続ン11正書(h式) %式% 1、事件の表示 昭和57年特許願第105636号 、発明の名称 カブコールアミン類の分析装置 3、補正をする者 事件との関係  特許出願人 住 所 京都市中京区河原町通二条下ルーツ船人町37
8番地名 称  (199)株式会社島津製作所代表者
横地 節男 4、代理人 〒530 住 所 大阪市北区西天満5丁目1−3クォーター・ワ
ン ビル、補正命令の日付  昭和57年9月28日(
発送日)別紙のとおり 1回目 10回目 20回目 1回目 10回目 20回目

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1、 カテコールアミン類のホウ酸ゲルカラムへの吸着
    用移動相の供給槽% 2種のホウ酸ゲル再生処理液供給
    槽、これらの槽からの液を切換える・ための第1切換え
    バルブおよびカテコールアミン含有試料導入部が第2切
    換えバルブを介してホウ酸ゲルカラムと排液放出路にこ
    の順に接続されSかつカテコールアミン類のホウ酸ゲ〃
    カラムからの脱着用と高速液体クロマトグラフの分離カ
    ラムによる分離用とを兼ねる移動相の供給槽を第2切換
    えバルブを介してホウ酸ゲルカラムに接続するとともに
    ホウ酸ゲルカラムの出口を高速液体クロマトグラフの分
    離カラムに接続し、上記カテコールアミン含有試料導入
    部が第■切換えバルブから延びる第1抵抗流路およびそ
    の出口側に連結した試料注入口を備え第2切換えバルブ
    に延びる主直列流路と、第1抵抗流路よシ抵抗の小さい
    第2抵抗流路を備え前記直列流路に対して並列に連結し
    たバイパス流路からなシ、 これらの構成によってカテコールアミン類のホウ酸グル
    カラムへの吸着、次いでその脱着後に高速液体クロマト
    グラフでの分析ならびにホウ酸ゲルカラムの再生処理を
    可能とするカテコールアミン類の分析装置。
JP10563682A 1982-06-18 1982-06-18 液体試料導入装置 Granted JPS58223064A (ja)

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JPS58223064A true JPS58223064A (ja) 1983-12-24
JPH0142380B2 JPH0142380B2 (ja) 1989-09-12

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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5551354A (en) * 1978-10-11 1980-04-15 Toyo Soda Mfg Co Ltd Method and device for catechol amine analysis

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5551354A (en) * 1978-10-11 1980-04-15 Toyo Soda Mfg Co Ltd Method and device for catechol amine analysis

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JPH0142380B2 (ja) 1989-09-12

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