JPH0142380B2 - - Google Patents
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- JPH0142380B2 JPH0142380B2 JP57105636A JP10563682A JPH0142380B2 JP H0142380 B2 JPH0142380 B2 JP H0142380B2 JP 57105636 A JP57105636 A JP 57105636A JP 10563682 A JP10563682 A JP 10563682A JP H0142380 B2 JPH0142380 B2 JP H0142380B2
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
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Description
【発明の詳細な説明】
(イ) 産業上の利用分野
この発明は、高速液体カラムクロマトグラフイ
などの分析装置の移動相流路に介接して用いられ
る液体試料の導入装置に関する。
などの分析装置の移動相流路に介接して用いられ
る液体試料の導入装置に関する。
従来の液体試料導入装置としては第２および３
図に示すようなものがある。
図に示すようなものがある。
第２図に示す試料導入装置３０では、試料注入
口３１から試料液を注入して試料保持コイル３２
に保持させておいて、６方バルブ３３を点線のよ
うに切換えることによつて移動相流路３４に試料
が導入される。また第３図に示す試料導入装置４
０は、第２図の装置に抵抗バイパス流路４５が付
加された構成のもので、この流路４５と並列して
いる移動相流路の抵抗の10倍〜20倍の抵抗を有す
る。この装置も第２図の装置と同様に操作される
が、このバイパス流路４５は、バルブを切換える
瞬間に移動相の圧力が急激に変動するのを緩和す
るため切換時でも少量の移動相を流すための流路
である。
口３１から試料液を注入して試料保持コイル３２
に保持させておいて、６方バルブ３３を点線のよ
うに切換えることによつて移動相流路３４に試料
が導入される。また第３図に示す試料導入装置４
０は、第２図の装置に抵抗バイパス流路４５が付
加された構成のもので、この流路４５と並列して
いる移動相流路の抵抗の10倍〜20倍の抵抗を有す
る。この装置も第２図の装置と同様に操作される
が、このバイパス流路４５は、バルブを切換える
瞬間に移動相の圧力が急激に変動するのを緩和す
るため切換時でも少量の移動相を流すための流路
である。
しかし上記のいずれの試料導入装置も、導入す
べき試料の量が大きいとか、試料に含有される他
の物質などが原因で移動相の性質（例えばPHな
ど）を変化させて、高速液体クロマトグラフイな
どによる導入試料の分離・分析に支障をきたして
正確な分析ができない場合がある。
べき試料の量が大きいとか、試料に含有される他
の物質などが原因で移動相の性質（例えばPHな
ど）を変化させて、高速液体クロマトグラフイな
どによる導入試料の分離・分析に支障をきたして
正確な分析ができない場合がある。
この発明は上記の問題点を改善するためになさ
れたもので、分析機器の移動相流路に介接される
液体試料導入装置であつて、試料注入口を備えた
主直列流路と、この主直列流路に対して並列に接
続されたバイパス流路とからなり、主直列流路が
バイパス流路に比して大きな流路抵抗を有するこ
とを特徴とする液体試料導入装置を提供するもの
である。
れたもので、分析機器の移動相流路に介接される
液体試料導入装置であつて、試料注入口を備えた
主直列流路と、この主直列流路に対して並列に接
続されたバイパス流路とからなり、主直列流路が
バイパス流路に比して大きな流路抵抗を有するこ
とを特徴とする液体試料導入装置を提供するもの
である。
この発明の液体試料導入装置の一実施例を第１
図に示す。第１図の装置は、第１抵抗部２０およ
び出口側に連結した試料注入口２１を備えた主直
列流路２３と、第１抵抗部２０より抵抗の小さい
第２抵抗部２２を備え主直列流路２３に対して並
列に接続したバイパス流路２４から構成されてい
る。また試料注入口２１は主直列流路２３の入口
側に設けてもよい。なお上記の各抵抗部は流路の
全体または一部の内径の異なるパイプとすると
か、抵抗部材を取付けることによつて形成され
る。
図に示す。第１図の装置は、第１抵抗部２０およ
び出口側に連結した試料注入口２１を備えた主直
列流路２３と、第１抵抗部２０より抵抗の小さい
第２抵抗部２２を備え主直列流路２３に対して並
列に接続したバイパス流路２４から構成されてい
る。また試料注入口２１は主直列流路２３の入口
側に設けてもよい。なお上記の各抵抗部は流路の
全体または一部の内径の異なるパイプとすると
か、抵抗部材を取付けることによつて形成され
る。
この装置を矢印で示す移動相流路に取付ける
と、第２抵抗部２２の方が第１抵抗部２０より抵
抗が小さいため、主直列流路２３よりもバイパス
流路２４の方に多量の移動相が流れる。したがつ
て注入された液体試料はそのままカラムに送られ
ることなく、試料と移動相が混合されつつカラム
に送られることになる。それ故試料導入後の移動
相の性質（例えばPHなど）に対する試料の影響が
小さくなるので、試料導入移動相の性質を分析に
支障のない範囲内におさめることができ、正確な
分析が可能になる。なお両流路の抵抗の比率は試
料の種類と分析法に対応して最適の比率が選択さ
れる。またバイパス流路を２本以上設けて移動相
の流路を微調整することも考えられる。
と、第２抵抗部２２の方が第１抵抗部２０より抵
抗が小さいため、主直列流路２３よりもバイパス
流路２４の方に多量の移動相が流れる。したがつ
て注入された液体試料はそのままカラムに送られ
ることなく、試料と移動相が混合されつつカラム
に送られることになる。それ故試料導入後の移動
相の性質（例えばPHなど）に対する試料の影響が
小さくなるので、試料導入移動相の性質を分析に
支障のない範囲内におさめることができ、正確な
分析が可能になる。なお両流路の抵抗の比率は試
料の種類と分析法に対応して最適の比率が選択さ
れる。またバイパス流路を２本以上設けて移動相
の流路を微調整することも考えられる。
次に第１図に示すこの発明の装置を備えたカテ
コールアミンの分析装置の分析試験例を示す。
コールアミンの分析装置の分析試験例を示す。
第４図に示したカテコールアミン類の分析装置
１は、ホウ酸ゲルカラム２に、カテコールアミン
類を吸着させるための移動相３と２種のホウ酸ゲ
ルカラムの再生処理液４と５とを第１切換えバル
ブ６を切換えてポンプ７によつて供給する液相供
給部８と前記第１図に示す試料導入装置９とが連
結された液相・試料供給路１０と、ホウ酸ゲルカ
ラム２と、カテコールアミン類のホウ酸ゲルから
の脱着用と高速液体クロマトグラフイ分析用とを
兼ねる移動相１１をポンプ１２で送る流路１３
と、高速液体クロマトグラフの分離カラム１４を
検出部１５を有するカテコールアミン類分析路１
６と、分析排液放出路１７と、これらの各路を連
結する第２切換えバルブ１８と、ホウ酸ゲルカラ
ム２と分離カラム１４との加熱定温保持手段（図
示せず）とから構成されている。
１は、ホウ酸ゲルカラム２に、カテコールアミン
類を吸着させるための移動相３と２種のホウ酸ゲ
ルカラムの再生処理液４と５とを第１切換えバル
ブ６を切換えてポンプ７によつて供給する液相供
給部８と前記第１図に示す試料導入装置９とが連
結された液相・試料供給路１０と、ホウ酸ゲルカ
ラム２と、カテコールアミン類のホウ酸ゲルから
の脱着用と高速液体クロマトグラフイ分析用とを
兼ねる移動相１１をポンプ１２で送る流路１３
と、高速液体クロマトグラフの分離カラム１４を
検出部１５を有するカテコールアミン類分析路１
６と、分析排液放出路１７と、これらの各路を連
結する第２切換えバルブ１８と、ホウ酸ゲルカラ
ム２と分離カラム１４との加熱定温保持手段（図
示せず）とから構成されている。
次に上記の分析装置を用いてカテコールアミン
類を分析する操作法を述べる。
類を分析する操作法を述べる。
まず第２切換えバルブ１８を第４図に示す位置
に固定し、ホウ酸ゲルカラム２へカテコールアミ
ン類を吸着されるための移動相３を第１切換えバ
ルブ６を切換えてポンプ７にてホウ酸ゲルカラム
２へ送り平衡状態とする。次に試料液を試料導入
装置９の試料注入口２１から注入して試料中のカ
テコールアミン類をホウ酸ゲルカラム２に吸着さ
せる。次に第２切換えバルブ１８を第５図に示す
位置に切換える。次いで、移動相１１をポンプ１
２によつて第２切換えバルブ１８を介してホウ酸
ゲルカラム２に送つて吸着されていたカテコール
アミン類を脱着させ、さらにこの脱着液を切換え
バルブ１８を介して高速液体クロマトグラフの分
離カラム１４と検出部１５に送つてカラコールア
ミン類の分析が行われる。一方ホウ酸ゲルカラム
２の再生処理は、第２切換えバルブ１８を第４図
に示す位置に切換え、該カラムの再生処理液４と
５とを、第１切換え弁６を切換えてポンプ７によ
つて所定の順序で、第２切換えバルブ１８を介し
てホウ酸ゲルカラム２に送つて行われる。
に固定し、ホウ酸ゲルカラム２へカテコールアミ
ン類を吸着されるための移動相３を第１切換えバ
ルブ６を切換えてポンプ７にてホウ酸ゲルカラム
２へ送り平衡状態とする。次に試料液を試料導入
装置９の試料注入口２１から注入して試料中のカ
テコールアミン類をホウ酸ゲルカラム２に吸着さ
せる。次に第２切換えバルブ１８を第５図に示す
位置に切換える。次いで、移動相１１をポンプ１
２によつて第２切換えバルブ１８を介してホウ酸
ゲルカラム２に送つて吸着されていたカテコール
アミン類を脱着させ、さらにこの脱着液を切換え
バルブ１８を介して高速液体クロマトグラフの分
離カラム１４と検出部１５に送つてカラコールア
ミン類の分析が行われる。一方ホウ酸ゲルカラム
２の再生処理は、第２切換えバルブ１８を第４図
に示す位置に切換え、該カラムの再生処理液４と
５とを、第１切換え弁６を切換えてポンプ７によ
つて所定の順序で、第２切換えバルブ１８を介し
てホウ酸ゲルカラム２に送つて行われる。
次に第４図に示す分析装置を用いてヒト血漿を
分析した結果を示す。
分析した結果を示す。
(1) 試料注入
(i) 試料
ヒト血液をEDTA―2Naを用いて採取し
これより常法によつて得た血漿900μにピ
ロ亜硫酸ナトリウムの１％水溶液50μと１
規定の塩酸50μとを順に加え４℃で24時間
放置したものの500μを分析１回分の試料
とした。
これより常法によつて得た血漿900μにピ
ロ亜硫酸ナトリウムの１％水溶液50μと１
規定の塩酸50μとを順に加え４℃で24時間
放置したものの500μを分析１回分の試料
とした。
(ii) 試料導入装置
第１図に示す試料導入装置
（但し第１抵抗部と第２抵抗部の抵抗比率は
３：１） (2) カテコールアミン類のホウ酸ゲルカラムへの
吸着 (i) ホウ酸ゲルカラム ホウ酸ゲル（粒径0.1−0.4mm）（アルドリ
ツチ社製） を４mm内径×５cm長のステンレス鋼製円筒形
カラムに充填したもの。
３：１） (2) カテコールアミン類のホウ酸ゲルカラムへの
吸着 (i) ホウ酸ゲルカラム ホウ酸ゲル（粒径0.1−0.4mm）（アルドリ
ツチ社製） を４mm内径×５cm長のステンレス鋼製円筒形
カラムに充填したもの。
(ii) 移動相
0.1Mリン酸ナトリウム水溶液（0.1％
EDTA−2Na含有）、PH7.0 (iii) 移動相流量 2.0ml／分 (iv) カラム温度 40℃ (3) ホウ酸ゲルカラムに吸着されたカテコールア
ミン類の脱着と高速液体クロマトグラフによる
分離と分析 (i) 高速液体クロマトグラフの分離カラム ゾルバツクス ODS（4.6mm内径×15cm長） (ii) 移動相 0.2M硫酸ナトリウム水溶液（0.1mMドデ
シル硫酸ナトリウム含有、リン酸にてPH2.0
に調整） (iii) 移動相流量 0.5ml／分 (iv) カラム温度 40℃ (v) 検出器 島津 化学反応検出器（試薬送液
ポンプ；PRR―2A、反応槽：CRB―2A、
及び蛍光分光光度計 RF―500LCAを含
む。） (4) ホウ酸ゲルカラムの再生処理条件 40℃のホウ酸ゲルカラムに、まず0.1Mリン
酸水溶液を流量2.0ml／分で約５分送り、次い
で0.1Mの水酸化ナトリウム水溶液を流量2.0
ml／分で約10分送り再生処理する。
EDTA−2Na含有）、PH7.0 (iii) 移動相流量 2.0ml／分 (iv) カラム温度 40℃ (3) ホウ酸ゲルカラムに吸着されたカテコールア
ミン類の脱着と高速液体クロマトグラフによる
分離と分析 (i) 高速液体クロマトグラフの分離カラム ゾルバツクス ODS（4.6mm内径×15cm長） (ii) 移動相 0.2M硫酸ナトリウム水溶液（0.1mMドデ
シル硫酸ナトリウム含有、リン酸にてPH2.0
に調整） (iii) 移動相流量 0.5ml／分 (iv) カラム温度 40℃ (v) 検出器 島津 化学反応検出器（試薬送液
ポンプ；PRR―2A、反応槽：CRB―2A、
及び蛍光分光光度計 RF―500LCAを含
む。） (4) ホウ酸ゲルカラムの再生処理条件 40℃のホウ酸ゲルカラムに、まず0.1Mリン
酸水溶液を流量2.0ml／分で約５分送り、次い
で0.1Mの水酸化ナトリウム水溶液を流量2.0
ml／分で約10分送り再生処理する。
上記の分析をホウ酸ゲルカラムの再生処理を行
わずに行つた場合のクロマトグラムを第６図に示
したが（いずれも左側がノルアドレナリン、右側
がアドレスリンのピークを示す）、分析の回数を
重ねるとカテコールアミン類の回収率が著しく低
下することが分る。
わずに行つた場合のクロマトグラムを第６図に示
したが（いずれも左側がノルアドレナリン、右側
がアドレスリンのピークを示す）、分析の回数を
重ねるとカテコールアミン類の回収率が著しく低
下することが分る。
また第７図に該カラムの再生処理を１回分析毎
に行つた場合のクロマトグラムを示したが、カテ
コールアミンのピークが一定で正確な分析のでき
ることが分る。
に行つた場合のクロマトグラムを示したが、カテ
コールアミンのピークが一定で正確な分析のでき
ることが分る。
すなわち試料中のカテコールアミンをホウ酸ゲ
ルに吸着させる際は、PH6.8〜7.4の移動相を用い
て吸着させるが、特に試料容積が大きい場合には
試料のPHが6.8以下になりやすく、カテコールア
ミンを正確に分析できなくなる傾向がある。この
ような場合でも上記のごとき流路抵抗比１：３を
有するバイパス経路で構成された試料導入装置を
用いることによつて、試料全体のPHを十分6.8以
上に保持することができカテコールアミンを正確
に分析することができた。
ルに吸着させる際は、PH6.8〜7.4の移動相を用い
て吸着させるが、特に試料容積が大きい場合には
試料のPHが6.8以下になりやすく、カテコールア
ミンを正確に分析できなくなる傾向がある。この
ような場合でも上記のごとき流路抵抗比１：３を
有するバイパス経路で構成された試料導入装置を
用いることによつて、試料全体のPHを十分6.8以
上に保持することができカテコールアミンを正確
に分析することができた。
上記のように本願発明の試料導入装置は、特に
カラムスイツチング方式またはグラジエント分析
を行う液体クロマトグラフイに有用である。
カラムスイツチング方式またはグラジエント分析
を行う液体クロマトグラフイに有用である。
第１図はこの発明の液体試料導入装置の一実施
例の構成説明図、第２図と第３図は従来の液体試
料導入装置の構成説明図、第４図と第５図はこの
発明の液体試料導入装置を備えたカテコールアミ
ン分析装置の既略系統図、第６図と第７図は上記
分析装置を用いてヒト血漿中のカテコールアミン
を分析して得たクロマトグラムである。 １……この発明液体試料導入装置を備えたカテ
コールアミン類の分析装置、２……ホウ酸ゲルカ
ラム、３……カテコールアミン類のホウ酸ゲルカ
ラムへの吸着用移動相、４，５……ホウ酸ゲルカ
ラムの再生処理液、６，１８……第１および第２
切換えバルブ、７，１２……ポンプ、８……移動
相・試料供給部、９……試料導入装置、１４……
高速液体クロマトグラフの分離カラム、１５……
検出部、２０……第１抵抗部、２１……試料注入
口、２２……第２抵抗部、２３……主直列流路、
２４……バイパス流路。
例の構成説明図、第２図と第３図は従来の液体試
料導入装置の構成説明図、第４図と第５図はこの
発明の液体試料導入装置を備えたカテコールアミ
ン分析装置の既略系統図、第６図と第７図は上記
分析装置を用いてヒト血漿中のカテコールアミン
を分析して得たクロマトグラムである。 １……この発明液体試料導入装置を備えたカテ
コールアミン類の分析装置、２……ホウ酸ゲルカ
ラム、３……カテコールアミン類のホウ酸ゲルカ
ラムへの吸着用移動相、４，５……ホウ酸ゲルカ
ラムの再生処理液、６，１８……第１および第２
切換えバルブ、７，１２……ポンプ、８……移動
相・試料供給部、９……試料導入装置、１４……
高速液体クロマトグラフの分離カラム、１５……
検出部、２０……第１抵抗部、２１……試料注入
口、２２……第２抵抗部、２３……主直列流路、
２４……バイパス流路。
Claims (1)
- １ 分析機器の移動相流路に介接される液体試料
導入装置であつて、試料注入口を備えた主直列流
路と、この主直列流路に対して並列に接続された
バイパス流路とからなり、主直列流路がバイパス
流路に比して大きな流路抵抗を有することを特徴
とする液体試料導入装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10563682A JPS58223064A (ja) | 1982-06-18 | 1982-06-18 | 液体試料導入装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10563682A JPS58223064A (ja) | 1982-06-18 | 1982-06-18 | 液体試料導入装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58223064A JPS58223064A (ja) | 1983-12-24 |
| JPH0142380B2 true JPH0142380B2 (ja) | 1989-09-12 |
Family
ID=14412943
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10563682A Granted JPS58223064A (ja) | 1982-06-18 | 1982-06-18 | 液体試料導入装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58223064A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5551354A (en) * | 1978-10-11 | 1980-04-15 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Method and device for catechol amine analysis |
-
1982
- 1982-06-18 JP JP10563682A patent/JPS58223064A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5551354A (en) * | 1978-10-11 | 1980-04-15 | Toyo Soda Mfg Co Ltd | Method and device for catechol amine analysis |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58223064A (ja) | 1983-12-24 |
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