JPS58223063A - カテコ−ルアミン類の分析法とその装置 - Google Patents

カテコ−ルアミン類の分析法とその装置

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JPS58223063A
JPS58223063A JP10563582A JP10563582A JPS58223063A JP S58223063 A JPS58223063 A JP S58223063A JP 10563582 A JP10563582 A JP 10563582A JP 10563582 A JP10563582 A JP 10563582A JP S58223063 A JPS58223063 A JP S58223063A
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JP
Japan
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boric acid
acid gel
catecholamines
gel column
column
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Pending
Application number
JP10563582A
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English (en)
Inventor
Yasuo Ishida
泰夫 石田
Morimasa Hayashi
守正 林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shimadzu Corp
Shimazu Seisakusho KK
Original Assignee
Shimadzu Corp
Shimazu Seisakusho KK
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Publication date
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Publication of JPS58223063A publication Critical patent/JPS58223063A/ja
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02Column chromatography
    • G01N30/04Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/16Injection
    • G01N30/20Injection using a sampling valve

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  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はカテコールアミン類の分析法とその装置に関
する。
血漿、尿などの生体試料中のカテコールアミン類の分析
法としては、従来、試料をアルミナカラムを通過させて
蛋白を除去するとともにカデコー・ルアオン類を吸着さ
せ、次すでこの吸着されたカテコールアミン類を脱着さ
せカラムクロマトグラフィに付して分析する方法が一般
に行われている。
しかしこの方法におけるアルミナカラムの再生処理操作
は著しく煩雑であって、その上カテコールアミン類の安
定した回収率が得られないという欠点を有している。
この発明は上記の欠点を解消するためになされたもので
ある。この発明の発明者らはカテコールアミン類が中性
〜弱塩基性条件下でホウ酸と安定な錯体を形成すること
に着目し、後記ごときホウ酸ゲ/l/に試料中のカテコ
ールアミン類を吸着させ次いでこれを脱着させて高速液
体クロマトグラフィに付して安定した回収率でカテコー
ルアミン類を分析しうろこととしかもこのホウ酸ゲルの
再生処理が極めて簡単な操作で行いうろことを見出しこ
の発明をなすに至ったものである。
かくしてこの発明は、カテコールアミン類含有試料を高
速液体クロマトグラフィで分析するに当って、予めホウ
酸ゲルカラムにpH5,8〜7.4でカテコールアミン
類を吸着させ、次いでpH4以下で脱着させ、その脱着
液を高速液体クロマトグラフィに付すとともに、脱着後
のホウ酸ゲルをリン酸水溶液とアルカリ水溶液で再生処
理することを特徴とするカテコールアミン類の分析法を
提供するものである。
また他の観点からこの発明は、カテコールアミン類のホ
ウ酸ゲルカラノ、への吸着用移動相の供給槽、2種のホ
ウ酸ゲル再生処理液供給槽、これらの槽からの液を切換
えるだめの第1切換え・9.−ブ     ・′:′お
よびカブコールアミン含有試料導入部が第2切換エパル
ブを介してホウ酸ゲルカラムと排液放出路にこの順に接
続され、かつカテコールアミン類のホウ酸ゲルカラムか
らの脱着用と高速液体クロマトグラフの分離カラムによ
る分離用とを兼ねる移動相の供給槽を第2切換えバl/
ブを介してホウ酸ゲルカラムに接続するとともにホウ酸
ゲルカラムの出口を高速液体クロマトグラフの分離カラ
ムに接続し、 これらの構成によってカテコールアミン類のホウ酸ゲル
カラムへの吸着、次いでその脱着後に高速液体クロマト
グラフでの分析ならびにホウ酸ゲルカラムの再生処理を
可能とするカテコールアミン類の分析装置を提供するも
のである。
この発明によれば生体試料などに含有されるノルアドレ
ナリン、アドレナリン、ドーパミンなどのごときカテコ
ールアミン類を安定した高い回収率で自動連続分析する
ことができ、その上カテコールアミン類を吸着させるホ
ウ酸ゲルの再生処理が極めて簡単な操作で行うことがで
きる。
この発明に用いられるホウ酸ゲルとしては、適当な担体
、たとえばポリメタクリル樹脂、七〃ロースなどにジヒ
ドロキシボリル基を化学結合させたものが用いられる。
このホウ酸ゲルをステンレス鋼製などのクロマト管に烏
圧下で充填されたものなどがホウ酸ゲルカラムとして用
いられる。
カテコールアきン類の上記ホウ酸ゲルへの吸着用移動相
としてはpH5,8〜7.4の酢酸アンモニウム水溶液
、トリス塩酸水溶#Cなどが挙げられるが、pHがfi
 N 7.0のIDTA−2Na含有(7)1ン酸ナト
リウム水溶液が好ましい。一方脱着用移動相としては強
酸性の塩酸水溶液、酢酸水溶液)どが挙げられるが、リ
ン酸にてpHがはV 2.0に調整された硫酸ナトリウ
ム水溶液が好ましいもので、この脱着用移動相はそのま
\高速液体クロマトグラフィの移動相として用いられる
また高速液体クロマトグラフ用のカラムとしてはゾルパ
ックス0D8(デュポン社製)などが用いられ、試料の
MiRによって適宜選択される。また高速液体クロマト
グラフで分離され走カテコールアミンは一般にトリヒド
ロキシインドール体に誘導化し螢光光度針で検出される
ホウ酸ゲルの再生処理は最初にリン駿水溶液を通過させ
次いで、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどのアル
カリ水溶液を通過させて行われる。
仁のような簡単な方法で再生処理することによって安定
した回収率でカテコールアミン類を分析することができ
る。
次に図に示す仁の発明の装置の実施例に基いて仁の発明
を詳述する。なおこれによってこの発明・が限定をうけ
るものではない。
第1図に示したとの発明のひとつの実施例のカテコール
アミン類分析装置(1)は、ホウ酸ゲ〃カラム(2)に
2カテコールアオン類を吸着させるための移動相(3)
と2種のホウ酸ゲルカラムの再生処理液(4)と(5)
とを第1切換えバルブ(6)を切換えてポンプ(7)に
よって供給する液相供給部(8)と試料導入部としての
試料注入口(9)とが連結された液相・試料供給路Q□
と、ホウ酸ゲルカラム(2)と、カテコールアミン類の
ホウ酸ゲルからの脱着用と高速液体クロマドグ2フイ分
析用とを兼ねる移動相aIlをポンプ叩で送る流路α漕
と、高速液体クロマトグラフの分離カラム0番と検出部
a9を有するカテコールアミン類分析路(161と、分
析排液放出路aηと、これらの多路を連結する第2切換
えバルブa印と、ホウ酸ゲルカラム(2)と分離カラム
a4との加熱定温保持手段(図示せず)とから構成され
ている。
次に上記の分析装置を用いてカテコールアミン類を分析
する操作法を述べる。
まず第2切換えバルブa樽を第1図に示す位置に固定し
、ホウ酸ゲルカラム(2)ヘカテコールアミン類を吸着
させるための移動相(3)を第1切換えバルブ(6)を
切換えてポンプ(7)にてホウ酸ゲルカラム(2)へ送
シ平衡状態とする。次に試料液を試料注入口(9)から
注入して試料中のカテコールアミン類をホウ酸ゲルカラ
ム(2)に吸着させる。次に第2切換えバルブ(IFj
を第2図に示す位置に切換える。次いで移動相01)を
ポンプa2によって第2切換えバルブ悄を介してホウ酸
ゲルカラム(2)に送って吸着されていたカテコールア
ミ漕を脱着させ、さらにこの脱着液を切換えバルブ0秒
を介して高速液体クロマトグラフの分離カラムIと検出
部151に送ってカテコールアミン類の分析が行われる
。一方ホウ酸ゲ〃カラム(2)の再生処理は、第2切換
えバルブa8を第1図に示す位置に切換え、該カラムの
再生処理液(4)と(5)とを、第1切換え弁(6)を
切換えてポンプ(7)によって所定の順序で、第2切換
えバルブ匝を介してホウ酸ゲルカラム(2)に送って行
われる。
次に第1図に示す分析装置を用いてヒト血漿を分析した
実施例を示す。
(1)試料注入 1)試料 ゝヒト血液をE D T A −2Naを用いて採取し
これよシ常法によって得た血漿900μlにピロ亜硫酸
ナトリウムの1嘔水溶液60μlと1規定の塩酸60μ
jとを順に加え4℃で24時間放置し丸ものの500μ
lを分析1回分の試料とした。
I)試料導入部 島津 8IL−ム形 (2)  カテコールアミン類のホウ酸ゲルカラムへの
吸着 1)ホウ酸ゲルカラム ホウ酸ゲ/I/(粒径0.1−0.4鴫)(アルドリッ
チ社製) を4trrrs内径X5aa長のステンレス鋼製円筒形
カラムに充填したもの。
11)移動相 0、 l Mリン酸ナトリウム水溶液(o、tsEDT
A−2Na含有)qpH7,0 111)移動相流II        2.0xl1分
IV)カラム温度       40℃(3)ホウ酸ゲ
ルカラムに吸着され九カテコールアミン類の脱着と高速
液体クロマトグラフによる分離と分析 1)高速液体り四マドグラフの分離カラムゾルパックス
 0D8(4,6卸内径X15C1Il長) 11)移動相 0.2M硫酸ナトリウム水溶液(Q、 l mMドデシ
ル硫酸ナトリウム含有、リン酸にてpH2,0に調整) II)移動相流ji      O,5lR1/分lv
)  カラム温度     40℃■)検出器 高滓 
化学反応検出器(試薬送液ポンプ;PRR−2A7反応
槽:0RB−2Aり及び螢光分光光度計:RF−50O
LOAを・含む。) (4)  ホウ酸ゲルカラムの再生処理条件4’O℃の
ホウ酸ゲルカ2ムに、まず0.1 M リン酸水溶液を
流量2.0 m77分で約5分送シ、次いで0.1 M
の水酸化ナトリウム水溶液を流量2.0m/分で約10
分送夛再生処理する。
上記の分析をホウ酸ゲルカラムの再生処理を行わすに行
った場合のクロマトグラムを第3図に示したが(いずれ
も左側がノルアドレナリン、右側がアドレナリンのピー
クを示す)、分析の回数を重ねるとカテコールアミン類
の回収率が著しく低下する仁とが分かる。
また第4図に該カラムの再生処理を1回分析毎に行った
場合のクロマトグラムを示したが、カテコールアミンの
ピークが一定で正確な分析のできることが分かる。
また試料導入部が第5図に示す構成を備えると流路■お
よびその出口側に連結した試料注入口(2)を備え第2
切換えバルブに延びる主直列流路と、第1抵抗流路(社
)より抵抗の小さい第2抵抗流路(2)を備え前記直列
流路に対して並列に連結したバイパス流路から構成され
ている。試料中のカテコールアミンをホウ酸ゲルに吸着
させる際は、pH6,8〜7.4の移動相を用いて吸着
させるが、特に試料容積が大きい場合には試料のpHが
6.8以下になルやすく、カテコールアミンを正確に分
析できなくなる傾向がある。このような場合でも上記の
ごとき流路抵抗比l:3を有するバイパス経路で構成さ
れた試料導入部を有するこの発明の分析装置は、試料全
体のpHを十分6.8以上に保持することができる。
【図面の簡単な説明】
第1図と第2図はこの発明を具体的に実施する分析装置
の概略系統図、第3図と第4図はその装置を用いてヒト
血漿中のカテコールアミンを分析して得たクロマトグラ
ム、第5図は好ましい具体的構造を有する試料導入部の
概略図である。 (1)・・・この発明の一実施例のカテコールアミン類
の分析vii 、     +21・・・ホウ酸ゲルカ
ラム、(3)・〕・カテコールアミン類のホウ酸ゲルカ
ラムへの吸着用移動相、 +41 、 +51・・−ホウ酸ゲルカラノ・の再生処
理液、161 、 fllG・・・第1および第2切喚
えバルブ、+7+ 、 IJ2j・・・ポンプ、 (8)・・・移動相・試料供給部、 +91 、1211・・・試料注入口、041・・・高
速液体クロマトグラフの分離カラム、(I9・・・検出
部、     (イ)、を潤・−・抵抗流路。 第3図    第4図 1回目  10回目 20回目      1回目  
10回目 20回目第5図 手続ンm正書(h式) %式% 1、事件の表示 昭和57年特許願第105635号 明の名称 カテコールアミン類の分析法とその装置36補正をする
者 事件どの関係  特許出願人 住 所 京都市中京区河原町通二条下ルーツ船人町37
8番地名 称  (199)株式会社島津製作所代表者
横地 節男 4、代理人 〒530 住 所 大阪市北区西天満5丁目1−3クォーター・ワ
ン ビル王命令の日付  昭和57年9月28日(発送
日)王により増加する発明の数 1g00 10!]目 20回目 第4図 1回目  10目目 200目

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 !、カテコールアミン類金含有試料高速液体クロマトグ
    ラフィで分析するに当って、予めホウ酸ケルカラムKl
    )I(64〜7.4でカテコールアミ。 ン類を吸着させ、次いでpH4以下で脱着させ、その脱
    着液を高速液体クロマトグラフィに付すとともに、脱着
    後のホウ酸ゲルをリン酸水溶液とアルカリ水溶液で再生
    処理する仁とを特徴とするカテコールアミン類の分析法
    。 2、 カテコールアミン類のホウ酸ゲルカラムへの吸着
    を、pH7,0のリン酸ナトリウムを主成分とする水溶
    液の移動相で行う特許請求の範囲第1項記載の分析法。 8、カテコールアミン類を吸着したホウ酸ゲルカラムの
    脱着と高速液体クロマドグ57による分析を、pH2,
    0の硫酸ナトリウムを主成分とする水溶液を移動相とし
    て用いて行う特許請求の範囲第1項記載の分析法。 4、 カテコールアミン類のホウ酸ゲルカラムへの吸着
    用移動相の供給槽、2種のホウ酸ゲル再生処理液供給槽
    、辷れらの槽からの液を切換えるための第1切換えバル
    ブおよびカテコールアミン含有試料導入部が第2切換え
    バルブを介してホウ酸ゲルカラムと排液放出路にこの順
    に接続され、かつカテコールアミン類のホウ酸ゲ〃カラ
    ムからの脱着用と高速液体りpマドグラフの分離力2ム
    による分離用とを兼ねる移動相の供給槽を第2切換えバ
    ルブを介してホウ酸ゲμカラムに接続するとともにホウ
    酸ゲルカラムの出口を高速液体夕日マトグ27の分離力
    2ムに接続し、 これらの構成によりてカテコールアミン類の  ′ホウ
    酸ゲルカ2ムへの吸着、次いでその脱着後に高速液体ク
    ロマトグラフでの分析ならびにホウ酸ゲ〃カラムの再生
    処理を可能とするカテコ−ルアミノ類の分析装置。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104950059A (zh) * 2014-03-31 2015-09-30 株式会社岛津制作所 液相色谱仪

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5551354A (en) * 1978-10-11 1980-04-15 Toyo Soda Mfg Co Ltd Method and device for catechol amine analysis

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