JPS58213711A - 鉄（２）ポルフイリン錯体を包接したリポソ−ムおよび酸素吸脱着剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はいわゆる鉄（ＩＩ）ポルフィリン錯体を包接
したリン脂質リポソームおよび該リポソームからなる酸
素吸脱着剤に関する。

ヘモグロビンやミオグロビンの鉄（ＩＩ）ポルフィリン
錯体、は酸素分子を可逆的に吸脱着する。このような天
然のポルフィリン鉄（ＩＩ）錯体と類似の酸素吸脱着機
能を持つ錯体を合成するために、従来、多くの研究が発
衣されている。その例としては、Ｊ　、　Ｐ　、　Ｃｏ
ｌｌｍａｎ　＊　Ａｃｃｏｕｎｔｓ　ｏｆＣｈａｍｌｃ
ａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１０２６５（１９７７）　；
Ｆ　、　Ｂａ５ｏｌｏ　＊　Ｂ　、　Ｍ　、　Ｈｏｆｆ
ｍａｎおよびＪ、Ａ、Ｉｂｅｒａ　、　１ｂｉｄ、　、
　８３８４（１９７５）などである。特に、室温条件下
で安定な酸素錯体が生成できると報告されているポルフ
ィリン鉄（ＩＩ）錯体として鉄（ＩＩ）−５，１０，１
５，２０−テトラ（α、α、α、α−０−ピパラミドフ
ェニル）ポルフィリン錯体（Ｊ　、　Ｐ　、　Ｃｏｌｌ
ｍａｎ他、　　ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＡｍｅｒｉｃａｎ
　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｏｃｉｅｔｙ　９７１４２７　
（１９７５）参照）がある。しかし、この錯体は少量で
も水が共存すると、直ぐに酸化されるため、酸素錯体を
生成できなくなる。

これを解決し、水中、室温下という生理的条件に近い条
件下で可逆的な酸素吸脱着・運搬が可能な材料として本
発明者らは鉄（■）−５．１０．１５．２０−テト２（
α、α、α、α−０−ビパラξドフェニル）ポルフィリ
ンーイミタソール誘導体錯体を包接したリン脂質リポソ
ームを特願昭５６−８９３１２号として出願した。この
リポソームは前記錯体を包接するものとして天然または
合成のリン脂質のみを用いている。

しかしながら、上記のような材料を、酸素運搬機能を有
する代用血液として医用面で利用することを考えた場合
、リン脂質のみからなるリポソームを用いることは望ま
しいものとはいえない。すなわち、このようなリポソー
ムを動物静脈内に多量に投与した場合、その動物の赤血
球や組繊細胞からその主要構成成分の一つであるコレス
テロールが、該投与されたリポソーム中へ引き抜かれ、
該動物の赤血球の脆弱化や血中遊離コレステロール量の
増加を誘起するという欠点がある。

したがって、この発明は、上記鉄（ＩＩ）　、ｊ？ルフ
ィリン錯体を包接したリン脂質リポソームの利点を損な
うことなく上記欠点を解決したリポソ−ムを提供するこ
とを目的とする。

この発明によれば上記目的は一般式 （ここで、Ｒ４はこれが結合するイミダゾール基の中心
鉄への配位を阻害しない基、Ｒ２，Ｒ，および８４はそ
れぞれ水素また紘疎水性置換基であってそれらの内少な
くとも１つは疎水性置換基）で示される鉄（ＩＩ）　−
５、１０、１５、２０−ｆト２（α。

α、α、α−Ｑ　−ヒバ２ミドフエニル）ポルフィリン
（以下、Ｆｅ（３１）Ｔｐｉｖ　ＰＰ　）錯体をリン脂
質とコレステロールからなるリポソームに包接させるこ
とによって達成できる。

上記Ｆａ（■）Ｔｐｉｖ　ＰＰを包接するリポソームを
形成する成分の一つであるリン脂質としては、レシチン
、クファリン、ホスファチジルコリン（大豆、牛肝臓、
牛脳、牛心筋および卵黄ホスファチジルコリン婚天然の
ものや、ノパルくトイルホスファチジルコリン、ノステ
アロイルホスファテジルコリン、ノミリステロイルホス
ファチジルコリン等合成のもの）、ホス７アチジルエタ
ノールアミン、スフィンコバニリン等を単独でまたは混
合物として用いることができる。

この発明に用いられるリポソームのもう一つの成分はコ
レステロールである。リン脂質トコレスチロールとの重
量比は、ｌないし１００であり、より好ましくは２ない
し５０である。

Ｆａ　（ＩＩ）　Ｔｐｉｖ　ＰＰ錯体は単独では酸素を
配位により吸脱着する作用はほとんどなく、この目的を
達成するためには軸位（第５または第６配位座）に塩基
性配位子を配位させる必要がある。この発明では、との
軸配位子として前記式■に示すように、式 で示される置換イミダゾールを用いている。ここで、Ｒ
４は当該イミダゾールのＦａ　（ｎ）　Ｔｐｉｖ　ＰＰ
への配位を阻害しない基であり、メチル基、エチル基お
よびプロピル基（ｎ−プロピル基およびイソゾロビル基
を含む）が好ましい。Ｒ２゜Ｒ３およびＲ４はそれぞれ
水素または疎水性基であって、少なくとも１つは疎水性
基である。疎水性基であるのは通常Ｒ２またはＲ５こと
にＲ２である。

このような疎水性基の例を挙げると、Ｃ５〜Ｃ６゜（−
Ｃｌ２ＣＯ−（ＣＨ２１ＣＨ，、ｎ＝１へ３０．または
→ＣＨ２九「Ｃｏ　−（ＣＨ２５ＣＨｓ、ｍ＝３ｘ２５
．１＝０または１）である。軸配位子としての置換イミ
ダゾール基ル位に上記置換基（Ｒ１）を持つとともに疎
水性基を持つことが重要である。本発明者らの研究によ
れば、疎水性基を持たない置換イミダゾール例えば１．
２−ジメチルイミダゾールを軸配位子とし持つＦ・（Ｉ
Ｉ）　Ｔｐｉｖ　ＰＰ錯体ではこれをリン脂質リポソー
ムに包接させても安定な酸素錯体を形成せず直ちに酸化
する。

また、疎水性基の疎水性が増す（例えばアルキル基にあ
っては炭素数が増す）程、当該錯体のリポソームへの包
接は良好となシ、かつ生成する酸素錯体は水による酸化
を受は難くなって安定化する。

Ｆｅ　（ＩＩ）　Ｔｐｉ’ｖ　ＰＰをリン脂質リポソー
ムに包接させるには、不活性ガス雰囲気（例えば、窒素
ガス、セアルゴンガス）中で、Ｆｅ（至）Ｔｐｌｖ　Ｐ
Ｐおよび過剰奮の置換イミダゾール（イミダゾール／ポ
ルフィリンモル比＝２〜１００）を適当な溶媒例工ばク
ロロホルム、ジクロルメタン、ベンゼン、トルエンに溶
解し、これに亜ニチオン酸すＩＩＪウム等の還元剤の水
溶液を加え、振とう・攪拌し、水−有機溶媒不均一層系
中でＦｅ１ｌ）Ｔｐｉｖ　ＰＰの中心鉄を二価に還元す
る。ついで、この有機層を集め脱水処理後この溶液にリ
ン脂質とコレステロールとの混合物を加える（リン脂質
−コレスチロール混合物とポルフィリンの重量比は１０
ないし１０００、好ましくは５０ないし２００）。その
後、この糸から溶媒を減圧下に留去し、例えばフラスコ
の内壁面上の薄膜として固形分を得る。これらの操作は
不活性ガス下あるいはＣＯガスを吹き込んでおこなって
もよい。ＣＯガスを使用した場合には、最後に加熱脱気
によってこれを簡単に除去できる。

次に、上記薄膜固体に不活性ガス雰囲気下で水系媒質（
例えば、水、リン酸緩衝水（ｐｉ（＝５〜９）、生理食
塩水、Ｋｒ５ｂｉ　−Ｒ１ｎｇｅｒａ溶液、あるいはこ
れらにデキストラン、ヒドロキシエチルスターチ、アル
ブミン等の血液増量剤やアミノ酸、糖類、ビタミン等を
溶解した゛水溶液）を加えた後、振とうめるいはミキサ
ーで攪拌し、することによって乳濁状の多重層リポソー
ム膜としてＦｅ　（ＩＩ）　Ｔｐｌｖ　ＰＰを包接した
リポソーム分散液が得られる。これ金さらに超音波処理
することによって多重層リポソームをより径の小さな多
重層リポソームもしくは単重層リポソームとすることが
できる。

なお、前記の亜ニチオン酸ナトリウム水溶液による還元
の代りに、パラジウム−カーボン／水素ガスによる還元
も利用できる。例えば、Ｆｅ（２）Ｔｐｉｖ　ＰＰとイ
ミダゾール配位子とを乾燥ジクロルメタンあるいはベン
ゼン／メタノール混合溶媒に溶解し、少量のツヤラジウ
ムカーボンを添加し、これに水素ガスを充分に吹き込み
室温下で還元しＦｅ　（Ｉｆ）　Ｔｐｉｖ　ＰＰ溶液を
調製し、ツヤラジウムカーボンをろ別して得たろ液を用
いてもよい。

あるいはまた、Ｆｅ　ＩＩ）Ｔｐｌｖ　ＰＰを包接した
リポソーム分散液を同様に調製し、還元剤としてβ−ニ
コチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ
＋　）　、Ｄ−グルコース−６−リン酸（Ｇ６Ｐ）　、
グルコース−６−りン嫁デヒドロｒナーゼ、フェレドキ
シンおよびフェレドキシン−ＮＡＤＰリダクターゼ（Ｆ
　’−ＮＡＤＰＲ）よりなる酵素系を鉄＠）ポルフィリ
ン錯体１モル当りＤ−グルコース−６−リン酸が１モル
以上となる割合で用い、５ないし９の−１の下で還元を
おこなってＦ＠ＱＩＤ　ｆ：　Ｆｅ　（１）とすること
もできる。この酵素系にカタラーゼを適量添加しておく
と好ましい。

Ｆｅ　（ｎ）　Ｔｐｌｖ　ＰＰを包接したリポソームの
平均粒径は、上記調製法のうち超音波処理操作の田力お
よび時間の制御により数μｍ〜２００Ｘの範囲で調節で
きる。

こうして得たこの発明に係る１ノポソームは、その中に
包接されたＦ・（Ｉｔ）　Ｔｐｌｖ　ｐｐの、酸素分圧
差による可逆的酸素吸脱着機能を安定に発揮させ、該Ｆ
・（ｎ）　Ｔｐｉｖ　ＰＰは室温下、永の共存下でも安
定な酸素錯体を形成し、酸素吸脱着剤として機能する。

また、Ｆｅ　（ＩＩ）　Ｔｐｉｖ　ＰＰを包接する１」
ン脂質トコレスチロールよりなるリポソームは特にコレ
ステロールの存在によりより優れた生体適合性がある。

したがって、この発明のＩＪポソームは生体適性のより
高い（すなわち、赤血球の脆弱化や血中遊離コレステロ
ールの増力ロヲ招７５）ない）酸素吸脱着剤の特徴を持
つこととなる。

また、コレステロールを用いることによシ、ＩＪ　、ｊ
ｅソーム自体の安定性も増す。

以下、この発明の実施例を記す。

実施例１ 窒素がス雰囲気下において、Ｆｅ　Ｑ［）　Ｔｐｌｖ　
ＰＰ−Ｂｒ１７Ｖ（８，７Ｘ　１０−’ミリモル）、１
−ｎ−ラウリル−２−メチルイミダゾール１１■（４，
３Ｘ１０　　（リモル）をトルエン５　ｒＲｔ　Ｋ　溶
解し、これに過剰の亜ニチオン酸ナトリウムを溶解した
水溶液５　ｍｌを加え振盪後、−酸化炭素がスを吹き込
んだ。静置後、トルエン層を採取し、少計のモレキュラ
ーシーガス４Ｘを加え、脱水処理した。このトルエン溶
液に、卵黄ホスファチジルコリン（以下、ＰＣと略記す
る）０．１３ｇとコレステロ−ゝル０．０１４Ｎをトル
エン２ＦｒＬｌＫ溶解し一酸化炭素ガスをあらかじめ飽
和させておいたものを加えた。トルエンを減圧留去して
フラスコの内壁面上に残った薄膜状固体物質を、さらに
１００℃で０．５時間減圧処理して一酸化炭素を完全に
除去した。ついで、これに、酸素がスを除去したリン酸
緩衝水（１’４７．０　）　１０　ｍｌを加えた後、窒
素がス下において超音波攪拌（２０ｋＨｚ、１００Ｗ）
を１０分間行い、５．１０，１５．２０−テトラ（α、
α。

α、α−（０＋　ピパラミドフェニル）ポルフィン鉄ω
）−モノ（１−ｎ−ラウリル−２−メチルイミダゾール
）錯体の多重層リポソーム分散水溶液を得た。窒素ガス
下における溶液の可視吸収スペクトルの吸収極大波長λ
ｍａｘは５３２．５６２ｎｍの２本であり、デオキシ型
に相当した。吸収スペクトルの形および吸収極大波長は
、無水ベンゼン溶液などにおける同種錯体の文献値とも
一致している。

なお、本実施例で用いた１−ｎ−ラウリル−２−メチル
イミダゾールは、次のように合成した０ ２−メチルイミダゾール１９９　（０，２３ｍｏｌｅ）
。

臭化ラウリル２５９　（０，１０ｍｏｌｅ　）を混合し
２００℃に１０時間加熱反応した。冷却後１０％に２Ｃ
Ｏ３水溶液５Ｑ□＋／を加え攪拌したのち、エーテル抽
出（２Ｘ３０（１／）した。有機層を合わせて、飽和Ｎ
ａ　ＨＣＯｓ水浴液（２Ｘ２００ｍ／）、飽和ＮａＣ／
、水溶液で洗滌後、分液して乾燥Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し
た。蒸発に供した後褐色油状物を得、これを１シリカｒ
ルカラム（シリカダル５００ｇ；ＣＨＣＬｓ　：　Ｍｅ
ＯＨ＝１０　：　１　）で精製した。収量２０ｇｒｘ収
率７９チ。これを減圧蒸留し、沸点１５６〜１５８℃／
　４　、ｗ　Ｈｇ留分を用いた。

マス−ベクトル：　Ｍ＋＝２５０．　’Ｈ−ＮＭＲＮ−
クトル（ＣＤＣｔ、　、　ＴＭＳ　）： δ（ｐＰｍ）６．８８（ｄ、Ｊ＝ＩＨｚ）、６．７６（
ｄ、Ｊ＝ＩＨｚ）：１ｍ４位、５位ｐｒｏｔｏｎａ３．
８９　（２Ｈ，ｔ　、　Ｊ＝７Ｈｚ　）　：　１位Ｎ−
皐す−ＣＨ２ ２，３６（３Ｈ，Ｓ）：　１ｍ２位の５旦。

ＩＲスペクトル（ＮａＣ２板）　ｃｍ　　、３４００　
ｅ　２９３０−２８６０．１５２５．１５００．１４６
５．１４２５．１３７５゜１２８０．１１４５，９９５
，７２０．６８０実施例２ 実施例１で得たリポソーム分散水溶液（窒素ガス雰囲気
下）に２５℃で酸素ガスを吹き込むと、デオキシ型の２
本のピークに代ってλｍａｘ５４６　ｎｍの単ピークが
新たに観測され、無水トルエン溶液中におけるこの種の
Ｆｅ　（ｎ）　Ｔｐｉｖ　ＰＰ錯体の酸素化錯体の文献
値と一致している。この酸素化錯体溶液に窒素がスを短
時間バブリングすることＫより、デオキシスペクトルへ
の可逆的変化が観測され、可逆的な酸素吸脱着を確認し
た。また、得られた酸素錯体の吸収スペクトルの経時変
化の追跡から求めた酸素錯体の半寿命は、２５℃で約４
時間以上であった。

実施例３ 実施例１の還元型調製法に従って Ｆ＠Ｑ［）　Ｔｐｉｖ　ＰＰ−Ｂｒ　３．６＋９（３，
１５Ｘ　１０−’モル）、ｌ−ラウリル−２−メチルイ
ミダゾール４３ｍ９（５０倍当菫）、ＰＣＯ，５６，！
ｉ＋（２５０イ音当欺）およびコレステロール０．０５
６．！ｉ＋を用い、生理食塩水（ｐＩ″Ｎ６．８　）　
Ｚ　ｏ　ｍｌ中で還元体のリポソーム溶液を作った。こ
れをＮ２下水水浴中で超音波処理（２０ｋＨｚ、１５０
Ｗ：１．５ｈｒ　）を行ないはとんど透明なリボン゛−
ム分散溶液とした◎ との溶液を用いて室温下で０□錯体の可逆的吸脱着のチ
ェック・と、安定性のチェック（経時変化）を行なった
。実施例２と同様に１酸素ガスを溶液に吹き込むことに
より酸素化錯体に相当する可視吸収ス（クトルを得た。

又、この溶液に窒素ガスを吹き込むことにより、もとの
デオキシ体スペクトルが得られ、酸素の可逆的吸脱着を
確認した。また、上記の酸素錯体の半寿命は、２５℃に
おいて４時間以上であった。

実施例４ 実施例１において卵黄ホスファチツルコリン０．１３．
９とコレステロール０．０１４ｇの混合物の代ｐに卵黄
ホスファチジルコリン０．１３．９とコレステロール０
．０４２ｇとの混合物を用いた以外は全く同様の手法に
より５，１０．１５．２０−テトラ（α、α、α、α−
０−ピパラミドフェニル）ポルフィリン鉄■）−モノ（
１−ｎ−ラウリル−２−メチルイミダゾール）錯体のリ
ポソーム分散液を得た。窒素ガス下におけるこの分散液
の可視吸収スペクトルのλｍａｗは５３２ｎｍ　ｅ　５
６０ａｍでありた。実施例２と同様に、酸素ガスを溶液
に吹き込むことにより酸素化錯体に相当する可視吸収ス
ペクトルを得た。ついで、この溶液に窒素がスを吹き込
むととＫより、もとのデオキシ体スペクトル（λｍ□＝
５４４ｎｍ）が得られ、酸素の可逆的吸脱着を確認した
。また、上記の酸素錯体の半寿命は、２５℃において４
時間以上であった。

実施例５ 実施例１において、１−ラウリル−２−メチルイミダゾ
ールを同モル量の１−トリチル−２−メチルイミダゾー
ルに代えた以外は全く同じ手法により％　　５ｔｌＯ，
１５ｅ２０−テトラ（α、α、α、α−Ｑ　−ヒａ４　
ラミドフェニル）ポルフィン鉄（ＩＩ）−モノ（１−ト
リチル−２−メチルイミダゾール）錯体のリポソーム分
散水溶液を得た。可視吸収スペクトルのλＷａＸは、５
３２ｎｍおよび５６０　ｎｍであった。実施例２と同様
な手法で、酸素錯体（λｍＨ５４３ｎｍ　）を確認した
。

なお、本実施例で用い７’ｊｌ−）ジチル−２−メチル
イミダゾールは、次のように合成した。

２−メチルイミダゾール−Ａｇ塩４．３９　（０，０２
３モル）をトルエン５０ｍ１に懸□濁攪拌し塩化トリチ
＃　７．０　ｇ　（０，０２５モル）を加え１０ｈｒ加
熱還流した。室温に戻し不溶部（ＡｇＢｒ　）を戸別し
、Ｐ液を濃縮し黄褐色固体を得た。シリカダルカラム（
シリカゲル２００ｇ、ＣＨＣｔ３／Ｍｅ１０Ｈ＝２０／
ｌ）テ稍［Ｌ、ベンゼン−ヘゲタン系から再結晶した。

収量３．３４＃、収率４５％６マススペクトル：Ｍ＋３
２４．　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ｃｏｃｚ　　ＴＭＳ
　）− δ（ＰＰｍ）ニア、００〜７．４０（１５Ｈ，ｍ）：フ
ェニルプロトン６．８６．６．７６（ｅａｃｈ　ＩＨ，
ｄ　、　Ｊ　＝ｌＨｚ）　：イミダゾール４位、５位−
グロトン １．６７（３Ｈ，Ｓ）：イミダゾール２位−９５゜ＩＲ
（ＫＢｒディスク）：　　３３５０．３０？０．３０３
０．１６００゜１５２０、１４９０．１４５０．１３９
５゜１３０５．１２４０，１１８０．１１４０゜１０？
０．１０３５，１０００．９９０゜９１０．８８０，８
６５，７６０，７５０゜７００鋼−１ 実施例６ 実施例ＩＶｃおいて、卵黄ホスファチノルコリン０．１
”３ｇを、ソノ母ルミトイルホスファチソルコリン０．
１８．９に代え、更に超音波攪拌操作を、６０℃の浴上
にて行った以外は全く同様な手法により、５．１０．１
５．２０−テトラ（α。

α、α、α−Ｑ　−ヒハラｊドフェニル）ポルフィン鉄
０）−モノ（１−ｎ−ラウリル−２−メチルイミダゾー
ル）錯体のリポソーム分散水溶液を得た・窒素ガス下に
おける溶液の可視吸収スペクトルはλｒｎ＠ｚ　５３２
ｎｍ　、５６２ｎｍであった。実施例２０手法に従い酸
素錯体の生成を確認した。

上記の酸素錯体の半寿命は、４時間以上であった。

実施例７ 実施例１において、１−ラウリル−２−メチルイミダゾ
ールの代りに四モル蓋の１−ステアリル−２−メチルイ
ミダゾールを用いた以外は全く同じ手法により５，１０
，１５．２０−テトラ（α、α、α、α−０−　ｆｔ＊
ラミドフェニル）ポルフイン鉄０）−モノ（１−ｎ−ラ
ウリル−２−メチルイミダゾール）錯体のリポソーム分
散水溶液を得た。窒素がス下における溶液可視吸収スペ
クトルは福＠ｘ５３２ｎｍ　ｅ　５６２ｎｍでありた。

実施例２０手法に従い酸素錯体の生成を確認した。

上記の酸素錯体の半寿命は、４時間以上であっ友Ｏ 本実施例で用いた１−ステアリル−２−メチルイミダゾ
ールは、実施例１において合成したｌ−ラウリル−２−
メチルイミダゾールの合成力ｒルカラム精製（クロロホ
ルム／メタノール＝１０／１）した後、減圧乾燥した。

マススペクトル：　Ｍ”＝３３４（Ｍｙ３３４）ＩＲス
ペクトル（ＫＢｒ錠剤）Ｄｌｌ　、３４２０，２９８０
゜２９４０．２８７０．１５１０．１４８０．１４３５
゜１３８５．１３００．１２９０．１１４０．１１１０
゜９９０．７５５，７２５．６９０ ’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣ１，、ＴＭＳ　）δ
（ｐｐｍ）：１．７　（ｔ　−２Ｈ−Ｚｎ−Ｃ−ＣＨ２
−）　６．８９　（ｄ　−ＩＨ）　−６，８０（ｄ、Ｉ
Ｈ）（イミダゾールの４位、５位）。

３．８０（ｔ、２Ｈ，Ｎ−皐１１−）、　２．３７　（
３Ｈ、Ｓ　、ＦｍＣＨ，）。

１．２６（３０Ｈ，Ｓ、＋ｃｕ２−）、５）、０．８８
（ｔ　、３Ｈ。

−ＣＨ，）　、元素分析値（重量％　）　Ｃ７９，０１
（７９，０）　。

Ｈ１２，７２（１２，６）８゜３１（８，４）Ｃ２□Ｈ
４２Ｎ２実施例８ 実施例１において、１−ｎ−ラウリル−２−メチルイミ
ダゾールのかわりにメチル１ｌ−（１−（２−メチル）
イミダゾリル〕ウンデカノエイト（４，３Ｘ１０　　ζ
リモル）を用いた以外は全く同じ手法により５．１０．
１５．２０−テトラ（α、α、α、α−０−ビパラミド
フェニル）ポルフィン鉄（ＩＩ）−モノ〔メチル１ｌ−
（１−（２−メチル）イミダゾリル）ウンデカノエイト
〕錯体のリポソーム分散水溶液を調製した。

窒素ガス下ｅζおける可視吸収スペクトル吸収極大波長
’ｍａｘは５３３　ｎｍおよび５６１　ｎｍであった。

本実施例で用いたメチル１ｌ−４１−（２−メチル）イ
ミダゾリル〕ウンデカノエイトは次の様にして合成した
。

１１−ブロムウンデカン２２５Ｉｉｅ々ンゼン１００ｍ
Ｊ中塩化オキザリル１３ｍＪ存在下に４時間室温攪拌し
た。次にメタノール５０肩ｌを加えて一夜放置後常法処
理して１１−ブロムウンデカン酸メチルエステル２３ｇ
（収率８７．５　％　）を得た。

２−メチルイミダゾール８．２ｇをＮａＨ２，４１１／
ＤＭＦ　２００１ＡＩの懸濁溶液中にゆっくり加えた。

添加後９０℃で１時間加熱し、先に得た１１−１０ムウ
ンデカン嘔メチルエステルを滴下した。続いて２時間９
０℃で加熱攪拌した後、常法により処理した。

シリカダルカラム（ＣＨＣｔ、／ＣＨ，ＯＨ＝　９／１
（ｖ／ｖ　）　）を用いて精製し、メチル１ｌ−（１−
（２−メチル）イミダゾリル）ウンデカノエイト９．５
ｇ（収率４１饅）を得た。

ＩＲ（液膜）　：　１７４０ｃｒｎ−’　（１’　　　
ｅエステル）Ｃ＝０ ’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＴＭＳ　、　ＣＤＣ１，）δ
（ｐｐｍ）１．２８（−重線、１２Ｈ。

ニＮＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）６ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２−）
　、　１．６８　（多重線。

幅広−４Ｈ、ＮＣＨｚＣＨ２（ＣＨ２）４ＣＪ（２０Ｈ
２ＣＯ２−）　Ｃ２，３１（三重線、　２　Ｈ、−ＣＨ
２ＣＯ□−）、２．３７（−重線、３Ｈ，イきダゾール
項−ＣＨ５）　、　３．６６（−重線、　３Ｈ，−ＣＯ
ＯＣＨ，）　、　３．８０（三重線、２Ｈ。

、ＮＣ１（２−）　、　６．８０　（二重線、Ｈ，イミ
ダゾール項５位プロトン）、６．９０（二重線、■、イ
ミダゾール項４位グプロン） ＭＳスペクトル：Ｍ＋２８０ 本実施例で調製した鉄（Ｕ）ポルフィリン錯体リポソー
ム分散水溶液を用い、実施例２に従い酸素錯体の生成を
確認した。酸素錯体の福、Ｘは５４５　ａｍであった。

半寿命は４時間以上であった。

実施例９ Ｆｓ（［）ｒｐｉｖ　　ＰＰ・ｊｌｌｒ　　１！ｔｉｐ
（８，７Ｘ　　１　０’　　　ミ　　リ　　モ　ル　）
　、１”ｎ−ラウリル−２−メチルイミダゾール１１ダ
（４，４Ｘ　１０”−２ミリモル）、卵黄ホスファチジ
ルコリン１２５■およびコレステロール２０１Ｒ９ｔ″
フラスコ中でベンゼン５ｄＫＨＭした後、室温上真空ポ
ンプで濃縮してフラスコ壁土の薄膜とした。これに０．
０５　Ｍ　リン酸緩衝水（ＰＨ７，０）１０−を加え、
水冷して窒素ガス下において超音波攪拌（２０ｋＨｚ、
１００Ｗ　）を３０分間行ないリポソーム分散溶液とし
た。

こうして得たリポソーム分散溶液Ｋ ＮＡＤＰ　　Ｏ，５ＴｎＩｉ、　Ｇ　６　Ｐ　３．０１
！ｕｉ、フェレドキシン０．０１■、フェレドキシン−
ＮＡＤＰリダクターゼ（Ｆ　−ＮＡＤＰＲ）　０．０２
１ｎ９、カタラーゼ０．０５１！を加えたのち、酸素ガ
スを１時間バブルし、さらに、グルコース−６−リン酸
ゾヒドロｒナーゼ０．０１７１１１ｉＪをリン酸緩衝水
（ｐＨ７，０）０．１１ｎ／！に溶解した液を注入した
。これを窒素雰囲気中２５℃に保持しながら、鉄（至）
から鉄（ＩＩ）への還元反応を可視吸収スペクトルで追
跡した。時間と共に５゜１０．１５．２０−テトラ（α
、α、α、α−０−ヒハラミドフェニル）ポルフィリン
鉄（■）−モノ（１−ｎ−ラウリル−２−メチルイミダ
ゾール）錯体に基づく吸収極大位置５３５ｎｍｔ５６０
ｎｍの吸光度が増加し、約５時間後に完全に還元された
。

実施例２に従い、上記還元型リポソーム溶液に酸素ガス
を接触させ友ところ、直ちに酸素錯体の可視吸収スペク
トル（λｍ□＝５４４ａｍ）を得た。この酸素錯体の２
５℃における半寿命は実施例１の錯体のそれと同等であ
った。

実施例１Ｏ Ｆ＠ＩＩ）　ＴｐｔｖＰＰ−Ｂｒ　１．　Ｏｍ？　（８
，７Ｘ　１０″″４″４ミリ、１−ラウリル−２−メチ
ル−イミダゾール１１ｙ＋９（４，４Ｘ　１０−２ミ！
Ｊモル）、　　ツノぐルミトイルホスファチソルコリン
５０■およびコレステロール５〜をベンゼン／メタノー
ル＝　９／１　（ｖ／ｖ）　混合婢媒１０ｍ１に溶解し
、１０　＊　Ｐｄ−Ｃを少量加え、水素がスを２０分間
吹き込んで還元し、解媒を炉別したのち、溶媒を減圧乾
固して固体とした。

これに凍結−脱気したリン酸緩衝水（メ１７．２）を窪
素雰囲気下加え、振とりし乳濁状の溶液とし、さらに超
音波処理（２０ｋＨｚ＋１ＯｏＷ）を３０分間行ない鉄
（ＩＩ）−５，１０，１５，２０−テトラ（α、α、α
、α−０−ピパラミドフェニル）ポルフィリン−モノ（
１−ラウリル−２−メチル−イミダゾール）錯体のほと
んど透明なリポソーム溶液を得た。この可視吸収スペク
トルは福、ｘ５３５　ｅ５６０　ｎｍを示すデオキシ型
で、これに酸素ガスを吹き込むと直ちにスペクトルが変
化しλｍａｘ５４４　ｎｍの酸素化錯体となる。さらに
窒素ガスを吹き込むとλｍ□５３５．５６０ｎｍＫスペ
クトルが戻り、可逆的に酸素を吸脱着することを確認し
た。上記の酸素錯体の半寿命は、４時間以上であった。

＊電制１１ 実施例３で調整した還元体のリポソーム分散溶液（５ｍ
／）を真空凍結脱気（Ｉ　Ｘ　１０　　ｔｏｒｒｔ４回
）したラット血清５ｄで希釈し、対照セルに同じラット
血清（生理食塩水でＡ希釈）を用いて可視スペクトルを
測定した。スペクトルのピーク位置は、既に述べたよう
に、酸素の吸着脱着の繰返しに伴って２ｍａｘが５４６
　ｎｍの吸収帯とλｍ□が５３５．５６２ｎｍの吸収帯
の間を往復変化する。酸素錯体の半寿命は３時間以上で
ありた。したがって血清中でも生理食塩水中と差がなく
血清は悪影響を与えないことおよび血清中でも該リポソ
ーム−Ｆｅ　（ＩＩ）ポルフィリン錯体が酸素結合能を
有することが明らかとなった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）戎　　　　　　　　　ＣＨ ５ （ここで、Ｒ，はこれが結合したイミダゾールの中心鉄
   への配位を阻害しない嵩高くない基、Ｒ２゜Ｒ３および
   Ｒ４はそれぞれ水素または疎水性置換基であってそれら
   の内少なくとも１つは疎水性置換基）で示される鉄（［
   １）−５，１０，１５，２０−テトラ（α、α、α、α
   −０−ピパラξドフェニル）ポルフィリン錯体を包接し
   たことを特徴とするリン脂質とコレステロールからなる
   リポソーム。 （２）Ｒがメチル基、エチル基またはプロピル基である
   特許請求の範囲第１項記載のリポソーム０ （３）ＲおよびＲがそれぞれ水素で６Ｄ、Ｒ２が４ Ｃ５〜Ｃ３０アルキル基またはトリチル基もしくは置換
   トリチル基あるいはカルざン酸アルキルエステル基であ
   る特許請求の範囲第１項または第２項記載のリポソーム
   。 （４）　　リン脂質がホスファチジルコリンでおる特許
   請求の範囲第１項ないし第３項のいずれかに記載のリポ
   ソーム。 ｋＬ２ （ここで、Ｒ７はこれが結合するイミダゾール基の中心
   鉄への配位を阻害しない基、Ｒ２，Ｒ，およびＲ４はそ
   れぞれ水素または疎水性置換基であってそれらの内少な
   くとも１つは疎水性置換基）で示される鉄（ｎ）−５，
   １０，１５，２０−ｆトラ〔α。 α、α、α−（０−ピパラミドフェニル）〕ホルフィリ
   ン錯体を包接したことを特徴とするリン脂、ａｍ、　Ｘ
   、；Ｉｒ、；ＩＬ−、ｎムよりなる酸素吸脱着剤。 （６）　　Ｒ１がメチル基、エチル基またはプロピル基
   である特許請求の範囲第５項記載の酸素吸脱着剤。 （７）　　ＲｓおよびＲ４がそれぞれ水素であり、Ｒ２
   が５　３０アルキル基またはトリチル基もしくは置換ト
   リチル基あるいはカルボン酸アルキルエステル基である
   ４！杆請求の範囲第５項または第６項記載の酸素吸脱着
   剤。 （８）　　リン脂質がホスファチゾルコリンである特許
   請求の範囲第５項ないし第７項のいずれかに記載の酸素
   吸脱着剤。