JPS58212782A - Ｌ−アラニンデヒドロゲナ−ゼｙｋ−１およびその製造法 - Google Patents
Ｌ−アラニンデヒドロゲナ−ゼｙｋ−１およびその製造法Info
- Publication number
- JPS58212782A JPS58212782A JP57095293A JP9529382A JPS58212782A JP S58212782 A JPS58212782 A JP S58212782A JP 57095293 A JP57095293 A JP 57095293A JP 9529382 A JP9529382 A JP 9529382A JP S58212782 A JPS58212782 A JP S58212782A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- alanine
- alanine dehydrogenase
- dehydrogenase
- thermus
- minutes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＬ−アラニンデヒドロゲナーゼＹＫ−１および
その製造法に関する。
その製造法に関する。
Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼは以下の反応を触媒する
酵素として知られている。
酵素として知られている。
Ｌ −Ａｌａｎｉｎｅ−１−Ｈ２Ｏ−１−ＮＡＤｙ＝
：Ｐｙｒｕｖａｔｅ −トＮ）Ｉ３ ＋ＮＡＤＨＬ−ア
ラニ／デヒドロゲナーゼは、ピルビン酸からのし一アラ
ニンの酵素的合成あるい１ｄＬ−アラニ／、ピルビン酸
等の定量等の応用面が考えられるが、実際上余り実用化
されていない。この理由としては、まず第１には従来の
し一アラニ／デヒドロゲナーゼは工業的に利用するうえ
で安定性に問題があったからである。即ち工業的にＬ−
アラニ／を生産させるためには、酵素を固定化したり、
反応温度を高めたりする必要があり、より安定な酵素が
求められているが従来のものでは不十分であった。つぎ
にＫｍ値が大きすぎることも問題であった。Ｌ−アラニ
ンを酵素的に測定する場合、微瞼に存在するし一アラニ
ンと反応する必要があり、従ってＫ 、ｍ値の小さいし
一アラニ／デヒドロゲナーゼが要望されるからである。
：Ｐｙｒｕｖａｔｅ −トＮ）Ｉ３ ＋ＮＡＤＨＬ−ア
ラニ／デヒドロゲナーゼは、ピルビン酸からのし一アラ
ニンの酵素的合成あるい１ｄＬ−アラニ／、ピルビン酸
等の定量等の応用面が考えられるが、実際上余り実用化
されていない。この理由としては、まず第１には従来の
し一アラニ／デヒドロゲナーゼは工業的に利用するうえ
で安定性に問題があったからである。即ち工業的にＬ−
アラニ／を生産させるためには、酵素を固定化したり、
反応温度を高めたりする必要があり、より安定な酵素が
求められているが従来のものでは不十分であった。つぎ
にＫｍ値が大きすぎることも問題であった。Ｌ−アラニ
ンを酵素的に測定する場合、微瞼に存在するし一アラニ
ンと反応する必要があり、従ってＫ 、ｍ値の小さいし
一アラニ／デヒドロゲナーゼが要望されるからである。
従来、比較的安定性の高いＬ−アラニンデヒドロゲナー
ゼとしては、サーマス す−モフイラス（Ｚ、Ｖａｌｊ
、、 Ｂｉｏｃｈｊｍｊｃａ ｅｔ ＢｉｏＤ
ｌ＋ｉ＋；ｉｃａ Ａｃｔａ６１５巻、３４頁、１９
８０年）、ノく千ルス・ズブチリス（Ａ、Ｙｏｓｈｉｄ
ａ、、 ＢｉｏｃｈｉｍｉＣａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｉ
−ｓｉｃａ Ａｃｔａ ９ ６ 巻 、
２４８ 頁 、 １９６５ 年 ）、 ノ（チ
ルス属菌（１，Ｅｐｓｔｅｉｎ、 、旧ｏｃｈｉ、ｍ１
ｑａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｉｓｉ−ｃａ Ａｃｔａ ４４
５巻、５４９頁、１９７６年）等力よ知られていたが、
本発明者は、さら□に安定性に優れたし一アラニンデヒ
ドロゲナーゼについて鋭意探索したところ、サーマス・
フラノ；スに属する菌株サーマス・フラバスＡＴ−６２
を培養することによって、培養物中に著綾の熱安定性に
優れかつまだＫｍ値の小さい新規なし一アラニンデヒド
ロゲナーゼＹＫ−１を生産蓄積することを見出し、本発
明を完成したものである。サーマス・フラノくスＡＴ−
６２（Ｄ菌学的性質にライては（’ｆ、 ３ａｉｋｉ
’ら、Ａｇｒ、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、＋ ３
６巻、２３５７−２３６６頁、１９７２年）に記載され
ており、又本菌は工業技術院微生物工業研究所に機工研
菌寄第６５２９（ＦＥＲＩｖＬ−ＰＮα６５２９）とし
て寄託されている。
ゼとしては、サーマス す−モフイラス（Ｚ、Ｖａｌｊ
、、 Ｂｉｏｃｈｊｍｊｃａ ｅｔ ＢｉｏＤ
ｌ＋ｉ＋；ｉｃａ Ａｃｔａ６１５巻、３４頁、１９
８０年）、ノく千ルス・ズブチリス（Ａ、Ｙｏｓｈｉｄ
ａ、、 ＢｉｏｃｈｉｍｉＣａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｉ
−ｓｉｃａ Ａｃｔａ ９ ６ 巻 、
２４８ 頁 、 １９６５ 年 ）、 ノ（チ
ルス属菌（１，Ｅｐｓｔｅｉｎ、 、旧ｏｃｈｉ、ｍ１
ｑａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｉｓｉ−ｃａ Ａｃｔａ ４４
５巻、５４９頁、１９７６年）等力よ知られていたが、
本発明者は、さら□に安定性に優れたし一アラニンデヒ
ドロゲナーゼについて鋭意探索したところ、サーマス・
フラノ；スに属する菌株サーマス・フラバスＡＴ−６２
を培養することによって、培養物中に著綾の熱安定性に
優れかつまだＫｍ値の小さい新規なし一アラニンデヒド
ロゲナーゼＹＫ−１を生産蓄積することを見出し、本発
明を完成したものである。サーマス・フラノくスＡＴ−
６２（Ｄ菌学的性質にライては（’ｆ、 ３ａｉｋｉ
’ら、Ａｇｒ、 Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、＋ ３
６巻、２３５７−２３６６頁、１９７２年）に記載され
ており、又本菌は工業技術院微生物工業研究所に機工研
菌寄第６５２９（ＦＥＲＩｖＬ−ＰＮα６５２９）とし
て寄託されている。
本発明のし一アラニンデヒドロゲナーゼは次の理化学的
−：霞を有している。
−：霞を有している。
（１）作用：Ｌ−アラニ／を酸化重税アミン反Ｅ６によ
りピルビン酸にする作用およびピルビン酸にアミノＪ、
９を付加してＬ−アラニ／を生成する可逆反応を触媒す
る作用を有する。
りピルビン酸にする作用およびピルビン酸にアミノＪ、
９を付加してＬ−アラニ／を生成する可逆反応を触媒す
る作用を有する。
（２）基質特異性：Ｌ−アラニンに特異的に作用し、Ｌ
−セリンには１５係の相対力画を示しだが、他のアミノ
酸にはほとんど作用しない。
−セリンには１５係の相対力画を示しだが、他のアミノ
酸にはほとんど作用しない。
（３）至適ＰＨ二本酵素の至適Ｐ）（ば１０〜ｌｌ付近
にある（第１図に示す通り）。なお用いた緩衝液として
は、Ｐ Ｈ９，２−１０，３ではｓｏｆｉＭグリ／／−
塩化カリウムー水酸化カリウム緩衝液、Ｉ’）（１９，
３−１１，０５では、５０ ｍ Ｍ燐酸二ナトリウム緩
衝液である。
にある（第１図に示す通り）。なお用いた緩衝液として
は、Ｐ Ｈ９，２−１０，３ではｓｏｆｉＭグリ／／−
塩化カリウムー水酸化カリウム緩衝液、Ｉ’）（１９，
３−１１，０５では、５０ ｍ Ｍ燐酸二ナトリウム緩
衝液である。
（Ｊｌ）Ｈ安定性＝５０Ｃ１６０分処理した場合、ｐ
Ｈ６，０〜８５付近で最も安定である（第２図に示す通
り）。
Ｈ６，０〜８５付近で最も安定である（第２図に示す通
り）。
（５）至適温度二６０〜７０Ｃ付近ＶＣある（第３図に
示す通り）。
示す通り）。
（６）熱な定性＝８０Ｃ１８０分処理では全く失活せず
、９０Ｃ１８０分処理で約３０係の失活が認められる（
２４図に示す通、す）。
、９０Ｃ１８０分処理で約３０係の失活が認められる（
２４図に示す通、す）。
（７）阻害剤に対する影＃：
（ａ） 各種阻害剤１．０ ｍ Ｍの影響について表
１に示す−０ 表 １ 腎 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミンテトラアセテートＰＣＭ
Ｂ：パラクロロマーキュリ−ベンゾエート※のＰＣＭＢ
ａ度は０．１ ｍ Ｍである。
１に示す−０ 表 １ 腎 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミンテトラアセテートＰＣＭ
Ｂ：パラクロロマーキュリ−ベンゾエート※のＰＣＭＢ
ａ度は０．１ ｍ Ｍである。
（ｂ） 金属イオン（１，０ｍＭ）等の影１について
表２に示す。
表２に示す。
表 ２
※の濃度は０．２７７１ Ｍである。
（８）分子敬：約２９０． ＯＯＯ〜３００． ＯＯＯ
（ゲル沖過法による） （９）等成魚ニア、５６（焦点電気泳動法に、しる）ａ
ｌＫｍ値：約３ＸＩＯ−４Ｍ 上記理化学的性質を持ったＬ−アラニンデヒドロゲナー
ゼＹＫ−１は他の微生物起源のし一アラニンデヒドロゲ
ナーゼとは明らかに異なった新規酵素である。
（ゲル沖過法による） （９）等成魚ニア、５６（焦点電気泳動法に、しる）ａ
ｌＫｍ値：約３ＸＩＯ−４Ｍ 上記理化学的性質を持ったＬ−アラニンデヒドロゲナー
ゼＹＫ−１は他の微生物起源のし一アラニンデヒドロゲ
ナーゼとは明らかに異なった新規酵素である。
表３に各４微生物起源の耐熱性Ｌ−アラニンデヒドロゲ
ナーゼと本酵素との比較を示す。
ナーゼと本酵素との比較を示す。
表 ３
表３より明らかの如く、本発明のし一アラニンデヒドロ
ゲナーゼＹＫ−１（生産菌：サーマス・フラバスＡＴ−
６２）は他のいずれの酵素よりＫｍ値が小さく、かつ安
定性に優れていることがわかる。本発明の新規Ｌ−アラ
ニンデヒドロゲナーゼＹＫ−１はサーマス・フラパスＡ
、Ｔ −６２ＦＥＲＭ−Ｐｌ＆１６５２９を培養するこ
とによって得られるが、使用する培地としては、炭素源
、窒素源、無機物その他栄養素を程よく含有する培地な
らば、合成培地または天然培地のいずれも使用可能であ
り、液状でも固状でもよいが、通常は液体培地を使用す
る。
ゲナーゼＹＫ−１（生産菌：サーマス・フラバスＡＴ−
６２）は他のいずれの酵素よりＫｍ値が小さく、かつ安
定性に優れていることがわかる。本発明の新規Ｌ−アラ
ニンデヒドロゲナーゼＹＫ−１はサーマス・フラパスＡ
、Ｔ −６２ＦＥＲＭ−Ｐｌ＆１６５２９を培養するこ
とによって得られるが、使用する培地としては、炭素源
、窒素源、無機物その他栄養素を程よく含有する培地な
らば、合成培地または天然培地のいずれも使用可能であ
り、液状でも固状でもよいが、通常は液体培地を使用す
る。
培養条件としては、培養開始時のＰＨは６〜８の範囲で
、培養温度は６Ｏ−８０Ｃの範囲で行われる。このよう
な条件下で、１２〜５０時間培養することによって培養
物中にＬ−アラニンデヒドロゲナーゼＹＫ−１が著量生
成する。
、培養温度は６Ｏ−８０Ｃの範囲で行われる。このよう
な条件下で、１２〜５０時間培養することによって培養
物中にＬ−アラニンデヒドロゲナーゼＹＫ−１が著量生
成する。
こうして培養物中に生産蓄積されたＬ−アラニンデヒド
ロゲナーゼＹＫ−１は次の如き方法で採取される。Ｌ−
アラニンデヒドロゲナーゼＹＫ−１は主に菌体中に存在
するので、培養終了後、菌体は遠心分離、濾過等の方法
で集められ、水または緩衝液で洗浄し、次いでＰＨ５〜
８の適当な緩衝液に懸濁し、グイノーミル等で菌体を磨
砕し、菌体内Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼＹＫ−１を
抽出する。
ロゲナーゼＹＫ−１は次の如き方法で採取される。Ｌ−
アラニンデヒドロゲナーゼＹＫ−１は主に菌体中に存在
するので、培養終了後、菌体は遠心分離、濾過等の方法
で集められ、水または緩衝液で洗浄し、次いでＰＨ５〜
８の適当な緩衝液に懸濁し、グイノーミル等で菌体を磨
砕し、菌体内Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼＹＫ−１を
抽出する。
こうして菌体抽出物より得られる粗し一アラニップヒド
ロゲナーゼＹＫ−１をさらに精製するには、硫安塩析、
透析、ＤＥＡＥ−セルロースカラムクロマトグラフィー
、ブルーセファロースカラムクロマトグラフィー、濃縮
、セファデックスＧ−２００ゲル濾過等の通常の精製手
段が用いられる。
ロゲナーゼＹＫ−１をさらに精製するには、硫安塩析、
透析、ＤＥＡＥ−セルロースカラムクロマトグラフィー
、ブルーセファロースカラムクロマトグラフィー、濃縮
、セファデックスＧ−２００ゲル濾過等の通常の精製手
段が用いられる。
次に本発明において用いたＬ−アラニンデヒドロゲナー
ゼＹＫ−１の活性測定法を示す。
ゼＹＫ−１の活性測定法を示す。
４４ｍＭＬ−アラニ／水溶液０．１ ｍｌ、 ５０
ｍＭグリ／ン緩衝液（ＰＨｌ Ｏ，０） ２．５６ｒｎ
１．および１４ ｍ Ｍ Ｎ Ａ Ｄ水溶Ｏ０，１ｒｎ
ｌをキュベツト（径１０ｍ）にとり、３７Ｃ１５分間予
備加温する。次いで、酵素液を加えて３７Ｃで３４０ｎ
ｍの吸光度を２〜３分間記録し、直線部分から１分間当
りの吸゛ 光度の変化を求める（△ＯＤｔ ）。一方、
コントロールとして基質の代りに水を用いたもので上記
と同様の操作を行い吸光度の変化を求める（△０Ｄｂ）
。
ｍＭグリ／ン緩衝液（ＰＨｌ Ｏ，０） ２．５６ｒｎ
１．および１４ ｍ Ｍ Ｎ Ａ Ｄ水溶Ｏ０，１ｒｎ
ｌをキュベツト（径１０ｍ）にとり、３７Ｃ１５分間予
備加温する。次いで、酵素液を加えて３７Ｃで３４０ｎ
ｍの吸光度を２〜３分間記録し、直線部分から１分間当
りの吸゛ 光度の変化を求める（△ＯＤｔ ）。一方、
コントロールとして基質の代りに水を用いたもので上記
と同様の操作を行い吸光度の変化を求める（△０Ｄｂ）
。
Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼの単位は３７Ｃで１分間
に１μｍｏｌｅのＮＡＤを還元する酵素量と定義する。
に１μｍｏｌｅのＮＡＤを還元する酵素量と定義する。
一方、１ｍＭのＮＡＤの吸光係数は６２２と報告されて
いるから、求める酵素溶液１ｒｎｌ！当りの力価は次式
より求められる。
いるから、求める酵素溶液１ｒｎｌ！当りの力価は次式
より求められる。
６、２２ Ｘ ０．１
以下実施例について述べる。
実施例１
ポリペプトン２０係、酵母エキス１．０％からなる培地
（ＰＨ７，２，１２０ｔｌ’、２０分間滅菌）３００ｍ
ｌを有する坂ロフラスコにサーマス・フラバスＡＴ−６
２ＦＥＲＭ−ＰＮｌ１６５２９を接種し６８Ｃ１２４時
間培養して種菌を調製した。次いでこの種菌を上記と同
一組成からなる培地２０１を有する３０を容ジャーファ
ーメンタ−に接種し、７２ｔＺ’、１８時間通気攪拌培
養し、培養終了後、培養物を６０００ ｒｐｍ、１０分
間遠心分離して集菌し、この菌体を０．８５ ％の食塩
水で洗浄後、０．２ Ｍ燐酸緩衝液（ＰＨ７０）２ｊに
懸濁せしめ、グイノーミル（Ｄｙｎｏ−Ｍｉｌｌ ：
Ｗｉｌｌｙ Ａ、Ｂａｃｂｏｆｅｎ社製スイス）にか
け菌体を磨砕した。この磨砕液を１０，０００ｒｐｉｎ
、２０分間遠心分離し上清液を得る。この上清液に硫安
を加え、硫安４５％飽和で沈澱する区分を採取する。こ
の沈殿を０．２Ｍ燐酸緩衝液（ＰＨ７，０）２００−に
再び溶解した後、４０，０００ｒ、ｐｍ、３０分間遠心
分離−して不溶物を除去し、上溝液に硫安を加え、硫安
３０〜４５チ飽和で沈殿する区分を集め、１０ ｍ Ｍ
）リス−塩酸緩衝液（ＰＨ７，６５）Ｌｏｏｍ／に溶
解後、同緩衝液１０１で２４時間透６析した。この透析
して得られｆｃ ｔＬの酵素活性は４３５単位であった
。
（ＰＨ７，２，１２０ｔｌ’、２０分間滅菌）３００ｍ
ｌを有する坂ロフラスコにサーマス・フラバスＡＴ−６
２ＦＥＲＭ−ＰＮｌ１６５２９を接種し６８Ｃ１２４時
間培養して種菌を調製した。次いでこの種菌を上記と同
一組成からなる培地２０１を有する３０を容ジャーファ
ーメンタ−に接種し、７２ｔＺ’、１８時間通気攪拌培
養し、培養終了後、培養物を６０００ ｒｐｍ、１０分
間遠心分離して集菌し、この菌体を０．８５ ％の食塩
水で洗浄後、０．２ Ｍ燐酸緩衝液（ＰＨ７０）２ｊに
懸濁せしめ、グイノーミル（Ｄｙｎｏ−Ｍｉｌｌ ：
Ｗｉｌｌｙ Ａ、Ｂａｃｂｏｆｅｎ社製スイス）にか
け菌体を磨砕した。この磨砕液を１０，０００ｒｐｉｎ
、２０分間遠心分離し上清液を得る。この上清液に硫安
を加え、硫安４５％飽和で沈澱する区分を採取する。こ
の沈殿を０．２Ｍ燐酸緩衝液（ＰＨ７，０）２００−に
再び溶解した後、４０，０００ｒ、ｐｍ、３０分間遠心
分離−して不溶物を除去し、上溝液に硫安を加え、硫安
３０〜４５チ飽和で沈殿する区分を集め、１０ ｍ Ｍ
）リス−塩酸緩衝液（ＰＨ７，６５）Ｌｏｏｍ／に溶
解後、同緩衝液１０１で２４時間透６析した。この透析
して得られｆｃ ｔＬの酵素活性は４３５単位であった
。
次いで透析液を同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−セルロ
ースカラム（２，６Ｘ ３２．ｄ Ｋ通過させ、食塩濃
度Ｏ１〜０．２ Ｍにて吸着された蛋白質を溶出せしめ
、溶出液を集め、カーボワノクス（別名ポリエ千し７グ
リコール６０００）にて濃縮した。
ースカラム（２，６Ｘ ３２．ｄ Ｋ通過させ、食塩濃
度Ｏ１〜０．２ Ｍにて吸着された蛋白質を溶出せしめ
、溶出液を集め、カーボワノクス（別名ポリエ千し７グ
リコール６０００）にて濃縮した。
こうして得られた濃縮液のし一アラニンデヒドロゲナー
ゼ活性は２８４単位であ−・た。濃縮液４７−をｌ Ｏ
ｍ Ｍ ）リス−塩酸緩衝液（ＰＨ７，６５）に対して
透析した後、８０Ｃ１２０分間の加熱処理を行い、微量
の沈殿物を１０，０００ ｒｐｍ、１０分間の遠心分離
により除去した。加熱処理後の液のし一アラニ／デヒド
ロゲナーゼの活性は２７３単位であった。
ゼ活性は２８４単位であ−・た。濃縮液４７−をｌ Ｏ
ｍ Ｍ ）リス−塩酸緩衝液（ＰＨ７，６５）に対して
透析した後、８０Ｃ１２０分間の加熱処理を行い、微量
の沈殿物を１０，０００ ｒｐｍ、１０分間の遠心分離
により除去した。加熱処理後の液のし一アラニ／デヒド
ロゲナーゼの活性は２７３単位であった。
次Ｋ、同緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−セルロースカラ
ム（２，６Ｘ ２２ ｒｒｎ）に上記酵素液を通過させ
、食塩＃度が０〜０，３Ｍである（α線勾配にて溶出せ
しめ、食塩濃度０１５Ｍ付近で溶出されるＬ−アラニン
デヒドロゲナーゼ活性区分傘集め、カーボワソクスにて
濃縮した。この濃縮液３８−（Ｌ−アラニンデヒドロゲ
ナーゼ活性は２１６単位であ−・た。）を５０ ｍ Ｍ
ト’Ｊスー塩酸緩衝液（Ｐ）Ｉ ７．６５ ）に対し
て透析した後、同緩衝液で緩衝化したブルーセファロー
スカラム（２×１２ｒｒｎ）に通過させ、ＮＡＤＨ＃度
がＯ〜０．１ ｍ Ｍである直線勾配にて溶出せしめた
活性区分を集めカーボワノクスにて濃縮した。この濃縮
液５＋ｎｇ（Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼ活性は１６
８単位である。）を５０ ｍ Ｍ燐酸緩衝液（ＰＨ６，
５）で予め緩衝化したセファデックスＧ−２００カラム
（２Ｘ ７．５（Ｍ）チャージしてゲルｐ過を行い、活
性区分を集めた後、再度カーポワックス濃縮し、同カラ
ムにてゲルｅ過を行い 活性区分を集め、コロンオンバ
ッグにより濃縮し、最終的にＬ−アラニンデヒ９７なる
し一アラニノデセドロゲナーゼＹＫ−１の精製溶液１．
Ｏｍｌを得た。
ム（２，６Ｘ ２２ ｒｒｎ）に上記酵素液を通過させ
、食塩＃度が０〜０，３Ｍである（α線勾配にて溶出せ
しめ、食塩濃度０１５Ｍ付近で溶出されるＬ−アラニン
デヒドロゲナーゼ活性区分傘集め、カーボワソクスにて
濃縮した。この濃縮液３８−（Ｌ−アラニンデヒドロゲ
ナーゼ活性は２１６単位であ−・た。）を５０ ｍ Ｍ
ト’Ｊスー塩酸緩衝液（Ｐ）Ｉ ７．６５ ）に対し
て透析した後、同緩衝液で緩衝化したブルーセファロー
スカラム（２×１２ｒｒｎ）に通過させ、ＮＡＤＨ＃度
がＯ〜０．１ ｍ Ｍである直線勾配にて溶出せしめた
活性区分を集めカーボワノクスにて濃縮した。この濃縮
液５＋ｎｇ（Ｌ−アラニンデヒドロゲナーゼ活性は１６
８単位である。）を５０ ｍ Ｍ燐酸緩衝液（ＰＨ６，
５）で予め緩衝化したセファデックスＧ−２００カラム
（２Ｘ ７．５（Ｍ）チャージしてゲルｐ過を行い、活
性区分を集めた後、再度カーポワックス濃縮し、同カラ
ムにてゲルｅ過を行い 活性区分を集め、コロンオンバ
ッグにより濃縮し、最終的にＬ−アラニンデヒ９７なる
し一アラニノデセドロゲナーゼＹＫ−１の精製溶液１．
Ｏｍｌを得た。
第１図、第２図、第３図および第４図ｆｒｔ本発明によ
るし一アラニンデヒドロゲナーゼＹ Ｋ−１の至適用（
、安定ＰＨ１至適温度および熱′ゲ定性をそれぞれ示す
図である。なお第４図において白丸は、８０Ｃで処理し
ｌこ場合であり、黒丸１．９０ｉＣで処理した場合であ
る。 特許出願人 人野製薬株式会社 第１図 ９，０ １０．０ １１．０第
２ 図 ３ ５ ７ ９ １１第３図 ４０ ５０ ６０ ７０ ８０温
度 （Ｃ） 第４図 １０２０ ４０ ８０時間（分）
るし一アラニンデヒドロゲナーゼＹ Ｋ−１の至適用（
、安定ＰＨ１至適温度および熱′ゲ定性をそれぞれ示す
図である。なお第４図において白丸は、８０Ｃで処理し
ｌこ場合であり、黒丸１．９０ｉＣで処理した場合であ
る。 特許出願人 人野製薬株式会社 第１図 ９，０ １０．０ １１．０第
２ 図 ３ ５ ７ ９ １１第３図 ４０ ５０ ６０ ７０ ８０温
度 （Ｃ） 第４図 １０２０ ４０ ８０時間（分）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次のｌＪｊ化学的性ｎを４４−する１７−アラニン
デヒドロゲナーゼＹＫ−１ （１）作用：Ｌ−アラニンと酸ｆヒ的脱ｆミ／反応て↓
：リピルビン酸＋こする作中およＣ′メビルビ／酸（（
アミノ基を付加してＬ−アラニンを生成するり逆反応を
触媒する作用を有する。 （２）基質特異性：Ｌ＝アラニノに特異的に作用し、Ｌ
−セリンに対して約１．５ ％の作用を仔するも他のア
ミノ酸に対してほとんど作用しない。 （３）至適ｐＨ：本酵素の至適ｐＨは１０〜１１である
。 （４） Ｔ） Ｈ安定性：本酵素の安定ｐＦ（範囲は６
０〜８５である。 （５）至適温度＝６０〜７０Ｃ （６）熱女定性二８０Ｃ１８０分処理では全く失活せず
、９０Ｃ１８０分処理で７０係の残存活性を有する。 （７）阻害剤に対する影＃： ＭｒＩ”、Ｚｎ′！＋、
Ｃｕ２ ＋ 、）（ｇ２ｉＦｅ’＋、Ｐｄ＋等の２価金
属イオンおよびＰＣＭＢで強く阻害される。 （８）分子量：約２９０．０００〜３００．０００ （
ゲルｐ過法による） （９）等電点ニア、５６（焦点也気詠動法による）ＱＩ
Ｋ ｍ値：約３Ｘ１０−４Ｍ ２ サーマス フラバノに属するＬ−アラニンデヒドロ
ゲナーゼＹＫ−１生産萌を栄養培地に培養し、傳られた
培養物からＩ、−アラニンデヒドロゲナーゼを採取する
ことを特徴とするＬ−アラニンデヒドロゲナーゼＹＫ−
１の製造法。 ３ サーマス フラバノに属するＬ−アラニンデヒドロ
ゲナーゼＹＫ−１生産菌がサーマス・フラバノＡＴ−６
２（ＦＥＲＭ−ｐＮα６５２９）であることを特徴とす
る特許請求の範囲第２項記載のＬ−アラニンデヒドロゲ
ナーゼＹＫ−１の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57095293A JPS58212782A (ja) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | Ｌ−アラニンデヒドロゲナ−ゼｙｋ−１およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57095293A JPS58212782A (ja) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | Ｌ−アラニンデヒドロゲナ−ゼｙｋ−１およびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58212782A true JPS58212782A (ja) | 1983-12-10 |
| JPH0328188B2 JPH0328188B2 (ja) | 1991-04-18 |
Family
ID=14133724
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57095293A Granted JPS58212782A (ja) | 1982-06-02 | 1982-06-02 | Ｌ−アラニンデヒドロゲナ−ゼｙｋ−１およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58212782A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4546077A (en) * | 1982-08-24 | 1985-10-08 | Unitika Ltd. | Leucine dehydrogenase and a process for production thereof |
| US5116748A (en) * | 1988-09-27 | 1992-05-26 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | Process for the production of l-alanine dehydrogenase from 78-3 ferm bp-2517 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7452687B2 (ja) | 2020-10-07 | 2024-03-19 | 日本電信電話株式会社 | 識別子変更管理装置、識別子変更管理方法及び識別子変更管理プログラム |
| WO2022074773A1 (ja) | 2020-10-07 | 2022-04-14 | 日本電信電話株式会社 | 識別子変更管理装置、識別子変更管理方法及び識別子変更管理プログラム |
| EP4227879A1 (en) | 2020-10-07 | 2023-08-16 | Nippon Telegraph And Telephone Corporation | Identifier change management device, identifier change management method, and identifier change management program |
-
1982
- 1982-06-02 JP JP57095293A patent/JPS58212782A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4546077A (en) * | 1982-08-24 | 1985-10-08 | Unitika Ltd. | Leucine dehydrogenase and a process for production thereof |
| US5116748A (en) * | 1988-09-27 | 1992-05-26 | Toyo Jozo Kabushiki Kaisha | Process for the production of l-alanine dehydrogenase from 78-3 ferm bp-2517 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0328188B2 (ja) | 1991-04-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2850515B2 (ja) | グルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造法 | |
| JPS58212782A (ja) | Ｌ−アラニンデヒドロゲナ−ゼｙｋ−１およびその製造法 | |
| EP0229219B1 (en) | Urease and process for preparation thereof | |
| EP0365158B1 (en) | Process for production of l-alanine dehydrogenase and a microorganism strain of the genus sporolactobacillus | |
| JP3029915B2 (ja) | 耐熱性アデノシン−５’−ホスホスルフェートキナーゼ及びその製造法 | |
| US4918012A (en) | Method for producing carnitine, L-carnitinamide hydrolase and method for producing same | |
| JPS5915625B2 (ja) | 新規なアシルコエンザイムａオキシダ−ゼおよびその製法 | |
| JPH0783712B2 (ja) | 新規なプロリンアシラーゼ及びその製造法 | |
| JPS6248380A (ja) | セフアロスポリンｃアシラ−ゼの製造法 | |
| JPH0829079B2 (ja) | Ｌ−フェニルアラニンデヒドロゲナ−ゼおよびその製造方法 | |
| JPS6332482A (ja) | Ｌ−フエニルアラニン脱水素酵素及びその製造法 | |
| JPH0856666A (ja) | 耐熱性ｏ−アセチルセリンスルフヒドリラーゼおよびその製造法 | |
| JPH01148184A (ja) | 耐熱性マンニトールデヒドロゲナーゼおよびその製造法 | |
| JPS6434287A (en) | Thermoduric aspartate transminase and production thereof | |
| JPS5982086A (ja) | Ｌ−α−グリセロリン酸オキシダ−ゼ | |
| JPH06327471A (ja) | 耐熱性グルタミン酸脱水素酵素およびその製造方法 | |
| JPS592688A (ja) | グリセロ−ルキナ−ゼの製造法 | |
| JPH03297383A (ja) | 耐熱性キサンチンオキシダーゼおよびその製造法 | |
| JPS6318471B2 (ja) | ||
| JPH0856660A (ja) | 耐熱性ロイシン脱水素酵素およびその製造法 | |
| JPH04179479A (ja) | 耐熱性グルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造法 | |
| JPS6151879B2 (ja) | ||
| JPH03127986A (ja) | 新規ヌクレオシドホスホリラーゼ | |
| JPH0337B2 (ja) | ||
| JPH0634714B2 (ja) | ピロリン−５−カルボン酸脱水素酵素の製造法 |