JPS58212779A - 酵母 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、アルコール、醸造等の各種発酵生産を有利に
する酵母、酵母の製造法（創製法ン並にその利用法に関
する。

従来、ビール、ワイン、ウィスキー、清酒。

焼酎、泡盛等Ω酒類、味噌、醤油等の醸造、パン、発酵
乳等の食品発酵生産の発酵生産、パルプ廃液の発酵、糖
蜜などの糖質を原料とする各種アルコール発酵生産１食
用酵母、飼料酵母。

核酸等の工業原料酵母発酵生産９石油、メタノール、酢
酸を生産培地とする各種の発酵生産等に実用酵母が使用
されているが、その夫々その目的とする生産に於て、そ
の生産原料培地に存在し、又は外部から侵入する一酵母
や細菌により、その良好な発酵生産性を阻害され、又そ
の結果生産物の品質の低下、変敗等を生ぜしめる。従で
か−る目的とする発酵生産を阻害する酵母（以下野生酵
母と云う）や細菌（以下汚染細菌と云う）による影響を
防止するために、現状では原料培地の比較的高温の加熱
殺菌や生産設備の殺菌等の処理を必要とし、食品等に於
ては、生産物の比較的高温の加熱殺菌又はミクロフィル
ターによる無菌ｐ過等の処理を必要とし、多大の時間と
労力や精細な微生物管理と製造コストの増大をもたらし
ている欠点を有する。

本発明はか−る従来の不都合を解消し、円滑容易な高能
率且つ経済的な発酵生産を提供することを目的とする。

本発明者等は、上記目的のため、広く保存菌や自然界等
より汚染細菌を死滅させるような抗細菌性を看する酵母
を鋭意スクリーニングした結果、上記の目的に適する新
酵母を下記のように見出し、これをそのま−実用酵母と
して利用し得ることも知見した。

即ち、醸造工場の廃水処理場の廃水より１常法により酵
母、コロニーを分取し、下記の方法でスクリーニングし
た。

殺菌麦芽汁を分注した試験管に、分取した各供試酵母を
接種し培養発酵後、酵母を除去し、この各試験管に下記
の細菌を１０．０００　ｃｅｌｌｓ／ｍｌ接種し、２５
°Ｃで増殖の有無を経日観察した。

使用細菌 ラクトバチルスプレビス（ＩＡｃｔｏｂａｃ４１１ｕｓ
　ｂｒｅｖｉｓ　）。

ペディオコッカス・セレビシェ（Ｐｅｄｉｏｏｏｏｏｕ
Ｂｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　）　、エン′テロバクター６
アエロゲネス（Ｅｎｔθｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇ
ｅｎｅｓ　）　、タレブシエラ・アエロゲネス（Ｋｌｅ
ｂｓｉｅｌｌａ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ　）、バチルス・
アスボロゲネウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｓｐｏｒｏｇ
ｅｎａｕｓ　）。

次に各発酵液を濃縮し、カップ法（常法によるンにより
阻止円径を測定した。培地はハートイン７ユージヨン培
地、シェドラー培地等を使用した。かくしてその抗細菌
性の強さを測定した所、特に強力な抗細菌性を有する酵
母を見出した。而してこれにつき、更に詳細（菌学的性
質をチェックした。

（！Ｌ）各培地における生育状態 ■　麦芽汁における生育状態　発育良好（ｂ）醋酸ソー
ダ培地上　胞子を形成する（、）射出胞子形成しない （ａ名主理学的性質 ■最適生育条件　ｐＨ５，０２８℃■生育の範囲ｐＨ３
，５〜６．８■硝酸塩の同化（へ）■脂肪の分解（へ）
■尿素の分解（ハ）■ゼラチンの液化（ハ）■カロチノ
イドの生成（へ）■顕著な有機酸の生成（へ）■デンプ
ン様物質の生成←）［相］ビタミンの要求性（へ）■抗
細菌性 （，３）下記化合物に対する同化性の有無資化性　　発
酵性 Ｄ−アラビノース　　　千　　　　　　十資化性　　発
酵性 Ｄ−グルコース　　　　＋　　　　　　十り−マンノー
ス　　　　＋　　　　　　十り−ガラクトース　　　士
　　　　　　士Ｄ−７ラクトース　　　＋　　　　　　
十麦芽汁　　　十　　　＋ シ　　ヨ　糖　　　　　　　　　十　　　　　　　　十
乳糖　　　　−− メリビオース　　　　　　−− ラフィノース　　　　　　−　　　　　　−α−メチル
−Ｄ− クリコシド　　　　　　＋　　　　　　＋更に、改めて
抗細菌性テストをディスクアガー法、液体培養法により
行なった結果、下記の細菌を死滅させることが分った。

バチルスＱサブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉ
ｌｉ８）。

バチルス９すへニフォルミス（Ｂ、　ｌｉｏｈｅｎｉｆ
ｏｒｍｉｓ）　。

バチルスｅメガテリウム（’Ｂ、　ｍａｇａｔｈｅｒｉ
ｏｍ　）等のバチルス属、フリネバクテリウム属 （０ｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｏｎ　ｓｐｐ、　）　、
ミクロバクテリウムフラブム（Ｍｉａｒｏｂａｏｔｅｒ
ｉｏｍ　ｆｌａｖｕｍ　）　、ザルチナ・ルテア（５ａ
ｒｏｉｎａ　１ｕｔｅａ　）　、ザルチナ自アルビダ（
Ｓ、　ａｌｂｌａ　）　、セラチア・マーセスンス（５
ｅｒｒａｔｉａ　ｍａｒｓｅｓｏｅｎｓ　）　、スタフ
イロコツカス・アウレウス（５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｏ
ｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　）　。

ペディオコッカス属（Ｐｅｄｉｏｏｏａａｕｓ　ｓｐｐ
、　）　、ラクトバチルス・プレビス（Ｌａｏｔｏｂａ
ｏｉｌｌｕｓ　ｂｒｅｖｉｓ）　。

エツシエリキア・コリ　（ｌ５ｏｈｅｒｉｏｈｉａ　ａ
ｏｌｉ　）　。

エンテロバクタ−・エアロゲネス（Ｋｎｔ、ｅｒｏｂｏ
ｃｔｅｒａｅｒｏｇｓｎｅｓ　）　、クレブシェラ・ア
エロモナス（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ａｅｒｏｇｅｎｅ
ｓ　）　、クレブシェラ・ニューモニｘ　（Ｋ１．　ｐ
ｎｅｕｍｏｎｉａｓ　）　、アエロモナス−属（Ａｅｒ
ｏｍｏｍａｓ　ｓｐ、　）　、アシネトバクタ−属（Ａ
ａｉｎｅｔｏｂａｏｔｅｒ　ａｐ、　）　、　ハフ　ニ
ア属（Ｈａｆｎｉａｓｐｐ、）　＋セラチアマルセセン
ス（Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｏｅｎｓ　）　、エ
ツシエリチ゛アｅコリ（］ｌｃｌ！Ｉａｈｅｒｉｃｈｉ
ａ　ｏｏｌｉ　）　、シュードモナス・アエルギノーザ
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏＦ４ａ　
）　、シュードモナス・フライ（Ｐｓ、　ｆｒａｇｉ　
）等。

上記の菌学的性質を、「ザ、イースツ、ア。

タクソノミツク、スタディＪ　７版（「Ｔｈｅｙ＠ａｓ
ｔｓ、　Ａ　ｔａｘｏｎｏｍｉｏ　５ｔｕｄｙ　Ｊ　７
ｔｈ　ｅｄｉｔｉｏｎ　）に徴シ、サツカロミセス・セ
レビシェと菌学的性質が同じであるが、机側菌性を有す
る点で相異するので、これをサツカロミセス・セレビシ
ェＡ−３と命名した。（Ｓａｏａｈａｒｏｍｙｃｅｓ　
ｏｅｒｅｖｉｓｉａｅ　Ａ　−５） 以下これを便宜上杭細菌性酵母Ａ−５と称する。尚、該
机側菌性酵母Ａ−５は、微工研菌寄受託番号第６５４９
号として寄託されている。

而して、本発明は、該酵母Ａ−５を利用してこれ自体を
各種発酵生産を行ない得ること並に下記の方法で従来の
各種酵母にその机側菌性を付与せしめ机側菌性酵母を製
造し得ることを知見した。即ち、本発゛明は、該机側菌
性酵母Ａ−３の発見と共にこれ耐発酵生産に使用するこ
とを特徴とする発酵法、並に該机側菌性酵母Ａ−５の机
側菌性因子（遺伝子）を少くとも１回の接合（交配）法
、細胞融合法又はこれらの組み合わせにより所要の酵母
、一般には、実用酵母に導入することを特徴とする机側
菌性酵母の製造法に存する。而して、該接合法、細胞融
合法又はこれらの組み合わせは、必要に応じ゛、２回以
上繰り返し、該酵母Ａ−３のもつ目的とする特定の生産
に於て、マイナスとなる因子（遺伝子）・があれば、こ
れを適当に除去するべく、胞子形成、単胞子クローン分
割、単胞子クローン選出を通じ、２回以上繰り返し、或
はこれらの方法を組み合わせて行なうことが好ましい。

次にその発酵生産に使用する１例を示せば、これを廃糖
蜜、パルプ廃液等の糖質含有原料に、適当量接種して、
従来のアルコール酵母を使用する場合と同様の発酵条件
で発酵させることにより、アルコール発酵を行ないエタ
ノールを得られるが、この場合、本発明酵母を使用して
有利なことは、前記原料培地を加熱殺菌するに当り、汚
染細菌を加熱殺菌するに必要な温度に加熱する必要がな
くそれよりも低温の例えば５０〜７０°Ｃで野生酵母の
加熱殺菌を行なえば足り、燃費がそれだけ安価である。

更には、従来ミクロフィルターによる細菌ν過を不要と
し、除酵母だけで足り有利である。かくして、机側菌性
酵母Ａ−５は発酵生産用実用酵母として利用することが
出来、上記はアルコール発酵生産の場合で説明したが、
その菌学的性質からみて１他のアルコール発酵にも利用
できることは明らかである。

更に本発明は、該酵母Ａ−５を上記の方法により机側菌
性を有しない酵母、一般には、従来各種の発酵生産目的
に使用されているいわゆる各種の実用酵母にその机側菌
性因子を導入して机側菌性実用酵母とすることに利用し
得る。

次にその机側菌性酵母の製造法の実施例と、不法で製造
された机側菌性酵母を発酵生産に利用することを特徴と
する本発明の実施例につき説明する。

下記に実用酵母サツカロミセス・ウパルム（Ｓａｃｃｈ
ａｒｏｍｙａｅｓ　ｕｖａｒｕｍ　）［旧称サツカロミ
セス伊カールスベルゲンシス（Ｓ、　ｏａｒｌｓｂｅｒ
ｇｅｎｓｉｓ）］属、サツカロミセス・セレビシェ（Ｓ
、　ｏｅｒｅｖｉｇｉｏｅ）に属するビール醸造その他
の実用酵母に机側菌性を付与する実施例につき添付図面
の第１図を参考に説明する。

机側菌性因子（１＆）を核内に有する前記の机側菌性酵
母Ａ　−３ｔｌ）と机側菌性因子を付与すべくサツカロ
ミセス・セレビシェ（Ｓａｏｃｈａｒｏｍｙｏｅ日ｏｅ
ｒｓｖｉｇｉｌＬｅ　）　Ｂ　Ｓ　ＲニーＹＥ９−５（
（財）醸造科学研究所　保存菌株）（参照符号２）を用
意し、その夫々につき、常法に従って胞子形成を行ない
夫々の１倍体の単胞子クローンα及びａを作成する。

このように準備した酵母Ａ　−５（１１の単胞子株αと
実用酵母サツカロミセス・セレビシェ（２）ノ単胞子株
ａとを常法により交配し、接合子（２）を得る。即ち、
この接合子（２）はその核中に酵母Ａ−５ｆｉｌのもつ
机側、菌性因子（，１ａ）が導入された机側菌性実用酵
母を得る。該机側菌性実用酵母につき菌学的性質を調べ
たが、抗、細菌性が付加された以外は、従来のビール酵
母、サツカロミセス・セレビシェと同じであり、即ち、
その菌学的性質は、酵母Ａ−５と全く同じであった。従
で、上記の文献に徴し、机側菌性を有する点でサツカロ
ミセス・セレビシェと異なるので、サツカロミセス・セ
レビシェＭＡと命名した。これを用いて、ビール醸造、
アルコール発酵等を試験したが、低温殺菌培地で足り、
培地の細菌を死滅させ、良好な状態で発酵生産が得られ
ることを確認した。又、特に前記したように、従来必要
とするミクロフィルターによる汚染細菌の除去いわゆる
無菌−過や、発酵生産品の高温加熱殺菌を要しないので
作業の省力化、設備コストの低下等の利点をもたらす。

尚、必要に応じ、机側菌性酵母の特定の目的の発酵生産
の適性を向上せしめるため、その発酵生産に実用の酵母
との胞子接合（交配）法。

細胞融合法等を繰り返し行なうことが出来る。

例えば、ビール醸造の適性を向上せしめるため、ビール
酵母、との交配法等を繰り返し行なうことができる。

即ち、図示の例では、該机側菌性サツカロミセス・セレ
ビシェＭＡにつき、胞子形成ト単胞子分離を行ない１倍
体の単胞子り四−ンを得、図面で模写的にあられした各
クローン（３）〜（６）につき夫々ビール試醸を行ない
、そのうちビール醸造性劣化因子（１ｂ）の最小のクロ
ーン（５）を選出して例えば、サツカロミセス・ウバル
ムエＡＭ４２０６　　（参照符号７）との細胞融合を行
ないビール醸造性の向上した机側菌性実用酵母ＭＡを得
た。これにつき菌学的性質をチェックした。

これによれば机側菌性酵母Ａ−５と同じ机側菌性を有す
る以外は、サツカロミセス・ウパルム４２０６と同じ菌
学的性質を有して居た。但し、曲用らによる血清学的所
見ｒ　Ｊ、　Ｆｅ’ｒｍｅｎｔ、　Ｔｅｏｈ。

５７、Ａ５，３６４　（１９７９）Ｊでは抗原構造１，
１０゜１８を示した。かくして、前記文献ザ、イースツ
に徴し、サツカロミセス・ウバルムＭＡと命名した。（
微工研菌寄第６５５０号） 該酵母ＭＡを使用しビール醸造した場合の机側菌性テス
トにつき以下説明する。

ラクトバチルス属、ペデイオフツカス属、アエロモナス
（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ　）属、エンテロバクタ−（Ｅｎ
ｔｅｒｏｂａｏｔｅｒ　）属、りＣプシエラ（Ｋｌｅｂ
ｓｉｅｌｌａ　）属、ハフニア（Ｈｏｆｎｉａ　）属、
アシネトバクタ−（Ａｏｉｎｅｔｏｂａｏｔｅｒ　）属
、コリネバクテリウム（Ｏｏｒｙｎｅｂａｏｔｅｒｌｕ
ｍ　）属、バチルス（Ｂ＆０１ｌｌｕｓ　）属に属する
ビール汚染細菌の１１種の菌株を、前記の改質酵母菌株
を１５００万ｏｅｌｌｓ／ｍｌづつ接種した１１°Ｂｇ
の各麦芽汁に夫々１万ｏｅｌｌｓ／　ｍｌづつ添加して
、その主発酵をその夫々につき８℃、１０℃、１７°Ｃ
に分けて行なった。然る所、発酵温度で多少の長短はあ
るものの３〜１０日間で全ての細菌は死滅し、その夫々
につきその後無菌的に良好なビール醸造をもたらした。

又１麦芽汁５１を用いて、前記改質酵母を使用して常法
によりビールを試醸し、−過後、５５０ｍ１のびんに分
注し、カーポネーションし℃びん詰ビールとする際に、
前述の１１種の細菌各菌株１０，０００ｏ＠１１．ｓ／
ｍ／！添加し、その各びん詰を３０℃に保ち、菌の増殖
を経日観察したが、全く増殖は認められなかった。従来
の改質しない通常の酵母（７）を使用し試験し、その各
びん詰時前述の１１種の細菌の各菌株１０，０００ｏ　
ｅ　１１８７ｍ７！を添加し、その各びん詰を３０°Ｃ
に保った所、いづれのびん詰も３〜７日後混濁を生じビ
ールを変敗させた。

更に、本発明は、更に上記従来の欠点を解消し１前記の
低温加熱殺菌すら要せずに、無殺菌で発酵生産を行ない
得る机側菌性と抗野生酵母性（キラー性）とを有する抗
汚染菌性酵母を提供することを目的とし、机側菌性を有
する酵母又は机側菌性因子を導入されて得られた机側菌
性を有する酵母（いわゆるキラー酵母ンとのみを素材と
し、或は更に両因子を導入すべき所定の酵母とを素材と
し、少くとも１回の接合（交配）法、細胞融合法、又は
これもの組み合わせを通じて、該両因子の導入された机
側菌性並にキラー性を有する酵母を製造するどとを特徴
とする。

更に本発明は、培地や発酵生産設備、或は生産物の加熱
殺菌や無ｍ濾過を全く要しない面金的な発ｄ’生産を行
なう発酵法を提供するもので、上記の創製した抗汚染菌
性酵母を発酵生産に使用することを特徴とする。下記に
上記の発明の実施例を第２図を参考に詳述する。

上記の製造法につき説明するに、机側菌性因子を導入す
る酵母素材として、机側菌性を有する酵母である前記の
サツカロミセス属に属する酵母例えば酵母Ａ−３を使用
するか机側菌性因子を導入されて得られた机側菌性酵母
である前記の製造法で得られたｉツ力ロミセス・セレビ
シェＭＡやサツカロミセス・ウパルムＭＡその他適宜得
られる机側菌性の発酵生産用実用酵母を使用するが、第
２図示の例では、酵母Ａ−５を使用した。

これと交配又は細胞融合させるとキラー因子を導入する
素材と′（てのキラー酵母は公知のものとして、へへ〜
蔦％へ蔦属隅属事ちサツカロミセス属に属するサツカロ
ミセス・セレビシェＧ７０６．仝Ｎ０ＹＯ１００６，仝
Ｎ　０ＹＯ７５８、仝Ｎ０ＹＱ２５５．キャンデダ（Ｑ
ＩＬｎｄｉｄａ）属、デバリオミセス（Ｄｅｂａｒｙｏ
ｍｙｏｅａ　）属、ハンゼヌラ（Ｈａｎｅｅｎｕｌａ　
）属、ピヒア（Ｐｉｃｈｉａ　）属。

トルロプシス（ＴＱｒｕｌＯｐｓｉ８　）属、クルイ７
エロミセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙａｅｓ　）属のいづ
れかに属するキラー酵母を使用する。キラー酵母の判定
は、クロスストリーキング法、カップ法等によった。

第２図示ではキラー酵母としてＧ７０６を使用した。該
Ｇ７０６は、アルコール、酒類等の発酵生産を阻害する
野生酵母サツカロミセス・ジアスタテイクス（Ｓａｃｏ
ｈａｒｏｍｙｃｅｅ　ｄｉａｓｔａｔｉｏｕｓ）。

サツカロミセス・バストリアヌス（Ｓ、　ｐａｓｔｏｒ
ｉａｎｕｓ）サツカロミセス・エリプソイブウス　（Ｓ
、　ｅｌｌｉｐｓｏ　−１ａｅｕｓ　）　’Ｉのサツカ
ロミセス属、トルロプシス属、ハンゼヌラ属等の野生酵
母を死滅させる性質を有する。

このように机側菌性を有する酵母Ａ−３とキラー酵母ａ
７０６とを組み合せ素材として、先づ該酵母Ａ−５（１
）につき胞子形成、単胞子分離を行ない１倍体のα型単
飽子クローンを得た。

これをｍ胞質内にキラー因子（１０ｍ）を南する＆梨１
倍体のキラー酵母Ｇ７０６と交配を行ない机側菌性因子
（１ａ）とキラー因子（１０ｍ）の既因子が導入された
接合子を得る。こ−に得られた酵母は、両親株の夫々も
つ机側菌性とキラー性とを併せ有すｄ之を抗汚染薗性と
以下略称す〜る）以外（ｉ、そのｍ　学的性質はサツカ
ロミセス・セレビシェに同じで、これをサツカロミセス
・セレビシェＭＡＫと命名する。この抗汚染薗性酵母は
、アルコール発酵等の発酵生麺に於て、加熱板−しない
糖蜜等の糖質原料に接柚し、発酵生産を行なった所、そ
の抗汚染劇性により野生酵母、１５染細菌を死滅させ良
好な状態で発酵生産を行なうことが出来た。

尚、抗汚染曲性酵母は、必要に応じ、その舟定の目的の
発酵生産の適性を向上せしめるため、例えば、ビール１
ｉｉＩＩ造の適性を向上せしめるため、その発酵生産に
実用の酵母との胞子接合（交配９法、細Ｔｉ！、ｌ！ｌ
！合法等を繰り返し行なうことかできる。例えば、ビー
ルｍ造の適性を向上せしめるため、ビール酵母との交配
法等を繰り返し行なうことができる。即ち、図示の例で
は、前記のサツカロミセス・セレビシェＭＡＫを胞子形
成、分割して１倍体の単胞子クローンとし、その単胞子
クローンＦ１（ｌ）−Ｆ、　（４１の中から、ビール醸
造性劣化因子（１０ｂ）の最も少ないｙｔ（３１株［（
１ｂ）因子は（ｉｏｂ）因子より劣化付与性が小さい］
を選出し、これを親株αとして別個に用意したビール酵
母サツカロミセス・ウバルム、サツカロミセス・セレビ
シェ（参照符号２）の単離胞子クローン８株とを接合（
交配）させる。ビール醸造適性の向上した抗汚染菌性接
合千を得た。

この接合子株につき、菌学的特性を調べたが、前記第１
次交配により得られたサツカロミセス・セレビシェＭＡ
Ｋと同じであった。従で、この抗汚染菌性酵母もサツカ
ロミセス・セレビシェＭＡＫであり、このビール醸造に
使用し、香味の良い良質のビールが得られることが試験
により確認された。この場合、この酵母ＭＡＫの胞子形
成、分割を行ない多数の単胞子クローンの中から醸造性
劣化因子の最小のものを選出しこれをビール醸造に用い
ることが最も好ましい。

而してこのビール醸造に於て、麦芽汁培地は加熱殺菌せ
ず、その主発酵、後発酵は、無菌状“態で良好に行なわ
れ、その後ミクロフィルターを使用せず、除酵母を分離
後、びんに分注した後も加熱殺菌せずにびん結晶として
、経日観察したが、良好な香味をもつ初期のビールが長
期間維持された。

尚、上記のようにして得られた抗汚染細菌性すツカロミ
セス譬セレビシェＭＡＫのピール醸Ｉ造性を更に向上せ
しめるため、該ＭＡＲにつき胞子形成、分割を行ないそ
の単胞子クローン？。

（１）〜Ｆ＊（４１の中から最もその劣化因子の最小の
単離飽子株Ｆｆ（３）を選出し、この選出株とサツカロ
ミセス・ウバルムエＡＭ４２０６（ＡＴＯＯ９０８０）
株との細胞融合を行ないビール醸造性の更に改善された
抗汚染菌性酵母を得た。この菌学的性質を調べた所、ザ
、イースツ記載のサツカロミセス・ウバルムと一致した
。

即ち、その詳細を下記する。

（、）　　各培地における生育状態 ■　麦芽汁　（４〜６）Ｘ　（５〜１０）μ円形又は卵
形。

皮膜形成弱、下面酵母 ■　麦芽汁寒天培地　円形又は卵形　単又は２連　コロ
ニー、表面平滑 ■　２０　ｐｐｍクリスタルバイオレット添加麦芽汁寒
天培地発育せず （ｂ）　　千ｍ胞子の形成 酢酸ソーダ培地上殆んど形成せず （Ｃ）　　射出胞子の形成　なし く、ｉ）　　各生理的性質 ■　最適生育条件　ｐＨ４，５〜６，５　　　２８℃■
　生育の範囲　　ｐＨ３，８〜６．８０〜３５°Ｃ■　
硝醸塩の同化　− ■　脂肪の分解　　− ■　尿素の分解　　十 ■　ゼラチンの液化　− ■　好浸透圧性又は耐浸透圧性　− ■　カロチノイドの生成　− ■　顕著な有機酸の生成　− ［相］　デンプン様物質の生成　− 〇　ビタミン要求性　　ビオチン、パントテン酸カルシ
ウムイノシトール要求性弱 ■　ガラクトース　　　　　＋　　　　　　十■　シュ
ークロース　　　千　　　　　　十■　マルトース　　
　　　千　　　　　　十■　ラクトース　　　　　−− ■　ラフィノース　　　　　＋　　　　　　　＋■　ア
ラビノース　　　　　　　　　　　＋■　７ラクトース
　　　　＋　　　　　　十■　メリビオース　　　　＋
　　　　　　十■　イノジット　　　　　−　　　　　
　＋＠　アトニット　　　　　−　　　　　　−０ズル
シット　　　　　−　　　　　　−■　可溶性デンプン
　　　−− 発酵性　　同化性 ［相］　デキストリン　　　　−− ＠ＫＮＯ，− その抗細菌性とキラー性については、夫々前記した酵母
Ａ−５のもつ抗細菌性とキラー酵母Ｇ７０２のもつキラ
ー性とをそのま＼有していた。

尚、前記の画用らの血清学的分類によれば、抗原構造は
、「１，１０，１８Ｊであった。

而して、上記抗汚染菌性酵母をサツカロミセス・ウバル
ム（旧称サツカロミセス・カールスベルゲンシス）ＭＡ
Ｋと命名した。これは微工研菌寄第６５５１号として寄
託されている。

該サツカロミセス・ウバルムＭＡＫにつき抗細菌性とキ
ラー性とを下記のように試験した。。

被検菌として、ラクトバチルス属、ペデオコツカス属、
アエロモナス属、エンテロバクタ−属。

クレブシェラ属、ハフニア属、アシネトバクタ−属、コ
リネバクター属、バチルス属、シュードモナス属の名馬
より選んだ１０株の汚染細菌とサツカロミセス属、トル
ロプシス属、ハンゼヌラ属等から選んだ１０株の野生酵
母を夫々１種づつを１組みと゛した混合菌を１０組つく
り、この各組につき各菌種２５０万ｏ　ｅ　１１　ｓ　
７′ｍｌを、−前記と同様に前記サツカロミセス・ウノ
くルムぽを夫々１５００万ｃｅｌｌｓ／ｍ／！接穂した
各麦芽汁サンプルにつき前記と同様に主発酵させた所、
各サンプル中の混合菌は５〜１０日の間に完全に死滅し
た。又貯酒後の林九ｍ塾びん詰ビールにつき前記と同様
に、混合菌各５００　ｏｅｌ１８／ｍｌ添加し、２５℃
に保温して経日観察したが全く閑の増殖は認められなか
った。

上記の試験に於て、野生酵母と汚染細菌の生存の有無は
、ＴＴＯ染色法によりシクロヘキシミド添加培地による
培養で毎日確認し、生存率θ％を完全死滅とした。

上記の実施例から容易に理解されるように、抗細菌性因
子とキラー性因子とを実用酵母に導７、入する方法とし
て、色々な他の組み合わせが考えられる。

例えば、（１）実用酵母に対し、抗細菌性因子を有する
酵母（”６１母Ａ−３や抗細菌性因子を導入された酵母
）とキラー因子を有する酵母（キラー酵母やキラー因子
を導入された実用酵母）の交配又は細胞融合を順次行な
うこと。（ＩＩ）キラー酵母と酵母Ａ−３又は机側菌性
酵母ＭＡとの細胞融合後、この融合体と実用酵母との細
胞融合又は交配１等々である。

次に上記のサツカロミセス・ウノくルムＭＡＫな使用し
ビール醸造法の１例を詳述する。

常法によって調製した冷麦汁を該ＭＡＫ酵母を適当量接
種し、８〜１５℃の範囲で主発酵を約１週間行ない、そ
の後０〜２°Ｃの範囲で約５０日間後発酵を行ない熟成
する。次で該ＭＡＫ培養酵母を濾過した後、従来必要と
していたセラミックフィルター、メンブランフィルタ−
等のミクロフィルターによる細菌の無菌濾過を行なうこ
となく、直ちに生ビール製品とし、或はびんに分注し、
カーボネーションし打栓しびん詰製品とし、この間従来
必要とするびん詰め後の６０°Ｃｌ２Ｏ〜５０分殺菌処
理を全く行なわれなかった。かくして、その製品後長期
に亘り、貯１蔵し細菌汚染によるにごりの発生の有無を
経日観察したが、異常なく、而も香味の良い品質を維持
していることが確認された。

このように、本発明の抗汚染菌性酵母を使用すれば、全
く無菌状態で安定した良質の発酵生産が得られる。

上記実施例の全ての机側菌性酵母はビール醸造以外の酒
類、アルコール発酵、その他の発酵生産に利用できるこ
とは云うまでもない。

上記本発明の抗細菌性因子の導入、又は該因子とキラー
因子の両因子の導入は、各種の発酵生産に夫々用いられ
ている各種実用酵母に適用されることは云うまでもなく
、又かくして得られる夫々の机側菌性実用酵母、又は抗
汚染菌性実用酵母をその対応する各発酵生産に使用する
ときは、従来に比し低温殺菌で済み、或は全く加熱殺菌
や細菌濾過等を行なう必要がなく極めて有利な発酵法を
もたらす。

次に本発明が適用される実用酵母を例示する。

サツカロミセス属、シゾサツカロミセス属、チゴサッカ
ロミセス属、ピヒア属、チゴビヒγ属。

デバリオミセス属、ハンゼヌラ属、エンドミフプシス属
、ハンゼニアスポラ属、スボロボミセス属、クリブトフ
ッカス属、クレツケラ属、カンジダ属、トルロプシス属
、ロドトルラ属、ミクロトルラ属、プレタノミセス属、
キャンデイダ属、オイデイウム属、クルイ７エロミセス
属。

クラドスポリウム属のいづれかに属する各種発酵生産用
実用酵母である。而してこれら実用酵をその発酵生産の
種類との関係でその具体例を示せば、シゾサツカロミセ
スボンベ（Ｓｃｈｉｚｏｇａａｏｈａｒｏ−ｍｙｏｅｓ
　ｐｏｍｂｅ　）、サツカロミセス拳デルプルツキ−（
Ｓａｃｏｈａｒｏｍｙｏｅｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｏｈｉｉ
　）等のアルツーｈ発ｍ酵母、サツカロミセス・セレビ
シェ等のウィスキー酵母、サツカロミセス・サケ等の清
酒酵母、サツカロミセス・エリプソイブウス等のワイン
酵母、サツカロミセス・ルーキシ−（Ｓ、　ｒｏｕｘｉ
ｅ　）等の醤油酵母、トルロプシス・ミソ　（Ｔｏｒｕ
ｌｏｐｓｉｓ　ｍ１ｓｏ　）　、チコ°サツカロミセス
壷ミソ（ｚｙｇｏｅａｃｃｈａｒｏｍｙｏｅｇ　ｍｘｅ
ｏン９等の味噌酵母、サツカロミセス・アワモリ　（ｓ
、ａｗａｍｏｒｉ）等の泡盛酵母、サツカロミセス・セ
レビシェ等ノ焼耐酵母、サツカロミセス・セレビシェ、
シゾサツカロミセス・ボンベ（Ｓｏｈｉｚｏｓａｏｏｈ
ａｒｏｍｙｏｅｇｐｏｍｂｅ　）等のパン酵母、クルイ
７エロミセス・ラクテイス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｏ６
ｓ　１ａｃｔｉｓ　）等の発酵乳酵母、キャンデイダ・
ロブスタ（０ａｎｄｉｄａｒｏｂｕｓｔａ）、クラドス
ポリウム・レジナエ（０ＬＩＬ（１０１！−ｐｏｒｉｕ
ｍ　ｒｅｅｉｎｄｅ）　、　）ルロプシス−７アマタ（
Ｔｏｒｕｌｏｐｇｉｓ　ｆａｍａｔａ）等の石油、メタ
ノール。

酢酸を原料培地とする発酵生産酵母、サツカロミセス・
セレビシェ等の食用飼料用酵母、オイデイウムｅラクテ
イス（Ｏｌｄｉｕｍ　１ａｏｔｉａ　）、ハンセヌラ・
アノマラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　ａｎｏｍａｌａ　）　
、　）ルロプシス・ユテイリス（Ｔｏｒｕｌｏｐｅｉｓ
　ｕｔｉｌｉｇ）。

等の工業原料酵母生産用酵母。

本発明を夫々の上記発酵生産用実用酵母に適用するとき
は、その机側菌性酵母又は抗汚染細菌性酵母が得られ、
又その夫々の発酵生産に使用するときは、その発酵生産
の能率の向上、容易な生産管理で低コストの生産が得ら
れる。

尚、本発明で使用する抗細菌性を有する酵母Ａ−５やキ
ラー酵母、或はこれを導入する実用酵母については、夫
々その変種や変異株を使用し得ることは云うまでもない
。

次に本発明の抗汚染菌性酵母ＭＡＫの製造法の更に詳細
な実施例につき記載する。

実施例１ 机側菌性酵母サツカロミセス・セレビシェＡ−３株を常
法により胞子形成させ、その単胞子をマニピュレーター
により分割してα型１倍体の単胞子クローン１５株を得
た。これらをアクリフラビン処理し、呼吸欠損変異株〔
ρ−〕とした。

次にこれらとキラー酵母サツカロミセス・セレビシｘ　
Ｇ　７０６　ａ型ハブロイド株（ｈｉｓ４．１ｅｕ２゜
ｔｈｒ２（ｋｉｌｌｅｒ　））とを接合させる。即ち、
その１白金耳づつ菌体を各別にＹ　］！ｉ　Ｐ　Ｄ、培
地４　ｍｌに加え、２５℃、２４時間培養し混合する。

遠心後段階希釈したのち、０．１　ｍｌ　ｆ　Ｍｉｎ、
　ｇｌｙｃｅｒｏｌ培地を用いて塗布培養する。２５°
Ｃ１３日間培養し接合によるコロニーを釣菌する。この
ようにして得た接合子株Ｆ、を胞子形成、単胞子分離を
行ない栄養要求性ｈｉｓ４．１ｅｕ２．　ｔｈｒ４のい
づれか１つ以上を持ち、且つキラー性及び抗細菌性を持
つ子株１０００株を分離取得した。これらの中から比較
的瘤造性劣化性形質の少ない株を選出し、これと別個に
胞子形成と単胞子クローン分離とを行なって準備した通
常のビール酵母サツカロミセス・セレビシェ１倍体との
接合を行なった。

このようにして得られた接合子株７．につき、胞子形成
、単胞子分割により１１０株の単胞子クローンを分取し
た。これらにつきビールＫｍ性をチェックし、この中か
ら醸造性に最適の接合子１１株を選出し、この選出様と
優れた醸造性をもつビール酵母サツカロミセス優つパル
ムエＡＭ４２０６　（ＡＴＯＯ９０８り株とのプロトプ
ラスト融合を次のように行なった。

即ち、その雨林につき、１白金耳をＹｌ！ＩＦＤ　（イ
ーストエキス１％、ペプトン２％、クルコース２％）液
７ｍ７！に植菌し、８時間振とう培養（５０’ＣＡＬ、
た培養液を１００ｍ／！のＹＫＰＤに植菌し、更に１６
時間振とり培養する。次に遠心で集めた菌体を新しいＹ
ｌｌ！ＦＤ培地１００ｍ１に植菌し１更に３〜４時間振
とう培養する。遠心で集めた菌体を高張バッファー（Ｉ
　ＭＫＯＬ、　１０ｍＭＴｒｉｃ　−ＨｏＩ、　ｐＨ７
，５）で１度洗った後、２−メルカプトエタノール０．
２ｒｒｔｌを含む高張バッファー５０ｍ１に懸濁し、３
０°Ｃ２０分間処理する。遠心した細胞をチモリラーゼ
−５ｏｏｏ　（細胞壁分解酸素）７５０００　１００〜
４００．ｕｇ／ｌｎｌと８０μ１０２−メルカプトエタ
ノールを含む高張バッファー２０ｍ１中に懸濁し、細胞
壁を分解する。プロトプラスト化の進行を１０分毎にチ
ェックし、形成が完了したら高張バッファーで３回洗う
。（プロトプラスト化工程）。洗浄プロトプラストをｐ
Ｈ！０４０％、５０ｍＭ　Ｇａ０１１液に懸濁し、５０
℃１５分静置後、２０分間遠心（ｚｏｏｏｒｐすする。

融合したプロトプラストを高張バッファーに懸濁した後
、再生培地（ＩＭＫＯＬ、３％寒天を含む。融解後、４
５℃に保ち液状にしておく。）に加え、シャーレに流し
込み固化させる。２５〜３０°Ｃで培養し、出現するコ
ロニーより融合株を取り出す。

かくして、キラー性と机側菌性を有し且つ醸造性の優れ
たサツカロミセス・ウバルムＭＡＫ株（微工研菌寄第６
５５１号）を得た。

実施例２ 机側ｍ性酵母すツ力ロミ七ス・セレビシェＡ−６株を常
法により胞子形成させ、その単胞子をマニピュレーター
により分割してα型１倍体の単胞子クローン１５株を得
た。これらをアクリフラビン処理し、呼吸欠損変異株〔
ρ−〕とした。

次にこれらとビール酵母サツカロミセス・七しビシより
ＳＲニーＹＢ９−５！Ｌ型ハブロイド株とを接合させる
。即ち、その１白金耳づつ菌体を各別にＹＦｉＰＤ培地
４ｙｎｌニ加え、２５℃、２４時間培養し混合する。遠
心後、段階希釈したのち、０．１ｍｌをＭｉｎ、　ｇｌ
ｙｃｅｒｏｌ培地を用いて塗布培養する。２５℃、５日
間培養し接合によるコロニーを釣菌する。このようにし
て得た接合子株Ｆ、即ち机側菌性ビール酵母サツカロミ
セス・セレビシェＭＡを得た。この接合子株Ｆ＋　ｔｌ
”胞子形成、単胞子分離を行ない栄養要求性ｈｉ１１４
．１ｅｕ２゜ｔｈｒ４　　のいづれか１つ以上を持ち且
つ子株！。

５０株を分離取得した。これらの中から比較的ビール醸
造性劣化形質の少ない株を選出し、これと優れた醸造性
をもつビール酵母、サツカロミセス惨つバルムエＡＭ４
２０６（ＡＴＯＯ９０８０）株とを前記実施例１と同様
にプロトプラスト融合を行ない机側菌性ビール酵母、サ
ツカロミセス・ウバルムＭＡ株（微工研菌寄第６５５０
号）を得た。

次に、他の発酵生産用実用酵母を上記の方法で机側菌性
実用酵母と抗汚染菌性実用酵母としたものをその夫々の
発酵生産に使用した発酵法につき下記に例示する。

実施例１ 机側菌性アルコール酵母、サツ力ロミ七ス・デルプルツ
キ−の圧搾物１０９を通常の糖蜜原料を約６０℃、２０
分間低温加熱殺菌した培地２１に接種し常法によりアル
コール発酵を行なった所、汚染細菌の増殖による弊害な
く、良質且つ高収率のアルコールが生産された。

実施例２ 上記の机側菌性アルコール酵母に代え、抗汚染菌性シゾ
サツカロミーセス・ボンベの圧搾物１０ｇを通常の糖蜜
原料を加熱殺菌することなくそのま−を培地として、実
施例１と同様のアルコール発酵を行なった。

この間、全く汚染細菌及び野生酵母による弊害なく、良
好なアルフール発酵が行なわれ、良質且つ高収率のアル
コールが得られた。

実施例３ 抗汚染菌性すツカロミセス拳エリプソイデウスの圧搾物
２０ｇを５１容の発酵槽の５個を互に上部で連通した連
続発酵槽の第１発酵槽に入れ、該第１発酵槽にぶどう圧
搾果汁を連続的に注入し順次後段の残る発酵槽に徐々に
流入するようにしながら適温で、発酵せしめ、最終段槽
よりその発酵を終了した生産ぶどう酒を連続的に得る発
酵法を行ない長期に亘り安定した良質のぶどう酒を得ら
れ、これを通常のｐ過を行ない酵母を除去した後びんに
分注し、びん詰製品とした。これを長期保存したが、品
質の劣化が全くなかった。

実施例４ 抗汚染菌性トルロプシス・ユテイリスを亜硫酸パルプ廃
液を加熱殺菌することなく発酵槽内に入れ、常法により
発酵せしめた所、この酵母菌体のみが良好に増殖し、高
収率で且つ純度の高いその酵母製品菌体が得られた。

このように本発明によれば、抗細菌性を有する酵母Ａ−
５の知見と共にその机側菌性因子を交配法、細胞融合法
、又はこれらの組み合わせの少くとも１回を通じて所要
の発酵生産用実用酵母に導入することにより各種の所要
の机側菌性発酵生産用実用酵母を製造することが出来、
又必要に応じ、キラー因子を有する酵母、キラー酵母又
は実用酵母を併せて導入することにより、各種の抗汚染
菌性発酵生産用実用酵母製造でき、このようにして得ら
れた菌を使用し１従来の発酵法に比し微生物的管理を著
しく容易にし又熱膜的に高能率、低コストの発酵生産が
得られる等の効果を有する。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の机側菌性酵母の製造法の実施例、第２
図は本発明の抗汚染菌性酵母の製造法の実施例を示す。 （１）・・・抗細菌性を有する酵母Ａ−３（１ａ）・・
・机側菌性因子　（２）・・・実用酵母　ＭＡ・・・机
側菌性酵母Ｆ１（３）〜Ｆ！　（ｅ）・・・単腕子クロ
ーンＭＡ株（７）・・・実用酵母　αｌ・・・キラー酵
母　（１０ａ）・・・キラー因子ＭＡＫ・・・抗汚染菌
性酵母 特許出願人　　サッポロビール株式会社　　・パフ 代　理　　人　　　北　　　村　　　欣　　　　−−゛
外２名

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　机側菌性°を有するサツカロミセス属に属する酵
   母。 ｚ　机側菌性を有するサツカロミセス・セレビシェＡ−
   ３（微工研菌寄受託番号第６５４９号）。 五　机側菌性を有する酵母の机側菌性因子を少くとも１
   回の接合（交配）法、細胞融合法又はこれらの組み合わ
   せを通じて所定の酵母に導入することを特徴とする机側
   菌性酵母の製造法。 ４、　机側菌性を有する酵母は、サツカロミセス属に属
   する酵母である特許請求の範囲（３）に記載の製造法。 ５、　机側菌性を有する酵母はサツカロミセス・セレビ
   シェＡ−３である特許請求の範囲（３）に記載の製造法
   。 ＆　該所定の酵母は、目的とする発酵生産に実用の酵母
   であり、且？サツカロミセス属、シゾサツカロミセス属
   、チゴサッカロミセス属。 サツカロミコデス属、ピヒア属、チゴビヒア属、デバリ
   オミセス属、ノＡンゼヌラ属、エンドミコプシス属、ハ
   ンゼニアスボラ属、スボ　　。 ロボロミセス馬、クリプＦフッカス属、クレツケラ属、
   カンジダ属、）ルロブシス属、ロドトルラ属、ミロトル
   ラ属、プレタノミセス属、キャンデイダ属、オイデイウ
   ム属、クルイ７エロミセス属、クラドスポリウム属のい
   づれかに属する酵母である特許請求の範囲（３）に記載
   の製造法。 ｌ　机側菌性を有する酵母としてサツカロミセス・セレ
   ビシェＡ−５と所定の酵母としてサツカロミセス属に属
   する実用酵母とを使用してサツカロミセス属に属する机
   側菌性実用酵母を製造することを特徴とする特許請求の
   範囲（３）に記載の机側菌性酵母の製造法。 ａ　サツカロミセス属に属する机側菌性酵母。 ９　机側菌性サツカロミセス・ウパルムＭＡ（微工研菌
   寄受、託番号第　６５５０　号）。 １［Ｌ　　抗開菌性を有する酵母、又は机側菌性因子を
   導入されて得られた机側菌性酵母を発酵生産に使用する
   ことを特徴とする発酵法。 １１、　　サツカロミセス属に属する机側菌性実用酵母
   を発酵生産に使用することを特徴とする特許請求の範囲
   （９）に記載の発酵法。 １２、　　サツカロミセス・ウバルムＭＡを発酵生産に
   徳用するごとを特徴とする特許請求の範囲Ｑ（Ｉに記載
   の発酵法。 １＆　発酵生産は、低温殺菌培地で行なうことを特徴と
   する特許請求の範囲（１１）に記載の発酵法。 １４、　　生産用培地は酵母を殺菌するに足る低温で殺
   菌することを特徴とする特許請求の範囲（１３）に記載
   の発酵法。 １５、　　発酵生産は、バッチ式又は連続式発酵手段で
   行なうことを特徴とする特許請求の範囲（１０１に記載
   の発酵法。 １＆　発酵生産は、アルコール発酵生産、ビール。 ワイン、ウィスキー、清酒、焼酎、泡盛等の酒類、味噌
   、醤油等の醸造、パン、発酵乳。 等の食品発酵生産９食用酵母、飼料酵母、核酸等の工業
   原料酵母発酵生産１石油、メタノール、酢酸を生産培地
   とする各種の発酵生産である特許請求の範囲ＯＱ〜０９
   のいづれかに記載の発酵法。 １ｚ　　抗開菌性を有する酵母、又は机側菌性因子を導
   入されて成る机側菌性酵母を発酵生産に使用し、発酵生
   産を終了後低温殺菌又は／及び除酵母ｒ過を行なうこと
   を特徴とする発酵法。 １ａ　　抗開菌性を有する酵母、又は机側菌性因子を導
   入されて得られた机側菌性酵母を使用して発酵生産を終
   了後、これを分離回収し、再び発酵生産に使用すること
   を特徴とする発酵法。 １９、　　抗開菌性を有する酵母又は机側菌性因子を導
   入されて得られた机側菌性酵母とキラー性を有する酵母
   （いわゆるキラー酵母）とのみを素材とし、或は更に両
   因子を導入すべき所定の酵母とを素材とし、少くとも１
   回の接合（交配）法、細胞融合法、又はこれらの組み合
   わせを通じて、該両因子の導入された机側菌性並にキラ
   ー性を有する酵母を製造することを特徴とする抗汚染菌
   性酵母の製造法。 ２α　サツカロミセス・セレビシェＡ−５等のサツカロ
   ミセス属番こ属する抗開菌性を有する酵母である特許請
   求の範囲（１１に記載の製造法。 ２１、　　机側菌性因子を導入されて得られた菌性酵母
   は、サツカロミセス・ウバルムＭＡ等の特許請求の範囲
   （３）に（７）のいづれかに従で製造された実用酵母で
   ある特許請求の範囲Ｈに記載の製造法。 ２２、　　キラー酵母は、サツカロミセス属に属するサ
   ツカロミセス・セレビシェ０７０６．仝Ｎ０ＴＯ２５，
   ５，仝Ｎ０ＸＯ７５５，仝Ｎ０ＹＯ１００６、仝ＫＬ−
   ８８．仝ＷＬ　７．カンデイダ属、デバリオミセス属、
   ハンゼヌラＭ。 クルイ７エロミセス属、ビヒア属、トルロプシス属に属
   するキラー酵母である特Ｆｒ　ｇ＃求の範囲０９に記載
   の製造法。 ２＆　所定の酵母は、目的とする発酵生産に実用の酵母
   であり、且つサツカロミセス属、シゾサツカロミセス属
   、チゴサッカロミセス属。 サツカロミコデス属、ピヒア属、チゴビヒア属、デバリ
   オミセス属、ハンゼヌラ属、エンドミコプシス属、ハン
   ゼニアスボラ属、スボロボミセス属、クリプトコツカス
   属、クレツケラ属、カンジダ属、トルロプシス属、ロド
   トルラ属、ミロトルラ属、プレタノミセス属。 キャンデイダ属、オイデイウム属、クルイフエロミセス
   属、クラドスポリウム属のいづれかに属する特許請求の
   範１ｆｆｌ（ｌに記載の製造法。 ２４、　　抗開菌性を有する酵母と゛してサツカロミセ
   ス・セレビシェＡ−５とキラー酵母としてサツカロミセ
   スＯセレビシェＧ７０６とを接合（交配）法等により、
   抗開菌性とキラーとを有する抗汚染菌性酵母サツカロミ
   セス・セレビシェＭＡＫを製造することを特徴とする特
   許請求の範囲（１１に記載の製造法。 ２５．　　特許請求の範囲（２滲の製法に従で得られた
   抗汚染菌性酵母サツカロミセス・セレビシェＭＡＫとサ
   ツカロミセス−セレビシェＢＳＲニーＹＢ９−５とを接
   合（交配）等により机側菌性及びキラー性を有する抗汚
   染菌性酵母サツカロミセス・セレビシェＭＡ４を製造す
   ること゛を特徴とする特許請求の範囲ＤＩに記載の製造
   法。 ２６、　　特許請求の範囲Ｃ５１に記載の製法により得
   た抗汚染菌性酵母ＭＡＫとサツカロミセス・ウバルムエ
   ＡＭ４２０６とを細胞融合させて机側菌性及びキラー性
   を有する抗汚染閑性酵母すツ力ロミ七ス・ウパルムＭＡ
   Ｋを製造することを特徴とする特許請求の範囲ＣＩ優に
   記載の製造法。 ２７、　　机側菌性を有する酵母としてサツカロミセス
   ・セレビシェＡ−３とキラー酵母としてサツカロミセス
   拳セレビシェＧ７０６．！：を接合（交配）させて接合
   子を得、該接合子につき胞子形成、単胞子クローン分割
   によりビール醸造性劣化因子の比較的少ない単胞子クロ
   ーンを選出し、該選出単胞子クローンとサツカロミセス
   ・セレビシよりＳＲニーＹＢ９−５との接合（交配）を
   行ない接合子を得、該接合子につき胞子形成、単胞子ク
   ローン分割を行ない、これ力）ら更にビール醸造性劣化
   因子の少ない単胞子クローンを選出し、該選出クローン
   とサツカロミセス・ウバルムエＡＭ４２０６との細胞融
   合を行ない特にビール醸造に好適なサツカロミセスｅウ
   バルムＭＡＫを得ることを特徴とする特＃′ｆｎ求の範
   囲ａ１又は弼に記載の製造法。 ２ａ　　机側菌性とキラー性とを有するサツカロミセス
   属に属する抗汚染菌性酵母。 ２９、　　抗汚染ｍ性すツ力ロミ七ス・ウバルムＭＡＫ
   （微工研菌寄受託番号第　６５５１　号）。 ３１　　机側菌性因子とキラー性因子を導入されて得ら
   れた抗汚染菌性酵母を発酵生産に使用することを特徴と
   する発酵法。 ５１．　　机側菌性とキラー性を有する抗汚染菌性酵母
   として特許請求の範囲翰〜（２１に記載のいづれかの方
   法で製造したものを使用することを特徴とする特許請求
   の範囲（至）に記載の発酵法。 ５２、　　机側菌性とキラー性を有するサツカロミセス
   に属する抗汚染菌性酵母を使用する特許請求の範囲（至
   ）に記載の発酵法。 ３五抗汚染菌性サツカロミセス・ウバルムＭＡＸを使用
   する特許請求の範囲（至）に記載の発酵法。 ５４、　　発酵生産は、無殺菌培地で行なうことを特徴
   とする特許請求の範囲（至）に記載の発酵法。 ３５、　　発酵生産は、バッチ式又は連続式発酵手段で
   行なうことを特徴とする特許請求の範囲（至）に記載の
   発酵法。 ３と　発酵生産は、アルコール発酵生産、ビール。 ワイン、ウィスキー、清酒、焼酎、泡盛等の酒類、味噌
   、醤油等の醸造、パン、発酵乳。 等の食品発酵生産２食用酵母、飼料酵母、核酸等の工業
   原料酵母発酵生産２石油、メタノール、酢酸を生産培地
   とする各種の発酵生産である特許請求の範囲□□□〜田
   のいづれかに記載の発酵法。 ５７、　　机側菌性とキラー性を有する抗汚染菌性酵母
   を発酵生産に使用し発酵生産を終了後、加熱殺菌又は／
   及び無菌瀝過しないこと？特徴とする発酵法。 、３ａ　　机側菌性とキラー性を有する抗汚染菌性酵母
   を使用して発酵生産を終了後、これを分離回収し再び発
   酵生産（使用することを特徴とする発酵法。