JPS58198296A - ｄ−２−アミノブタノ−ルの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 木兄−は、ツセｔ２−アミノー１−１メノールをその対
掌体に分割する方法に胸するものである。２−アミノ−
１ブタノ−Ａは不斉巌嵩を有するもので、４体と２体の
２櫨の光学外性体力存在する。２−アミノ−１−１タノ
ールはエタンブトール台底り中間原料として１莱的に有
用であるが２樵の光学Ａ性体より合成されたエタンブト
ールの内＊幼ｖ４Ｉ’するのはｄ−２−アミノ−１−ブ
タノ−により合成＠　ｚＬ　タエタン１トールであり、
ｔ−２−アミノ−１−１タノ−ルより合成されたエタン
ブトールは薬効を有しないばかりか、副作用も強いこと
が知られている。、従って一連の用途目的のためにはｄ
ｔ−２−アミノ−１−ブタノールを光字分割する必要か
める。

かよりな光学分割の方法としては、ｄｔ−２−アミノ−
１−ブタノールとＬ−一石酸とのジアステレオマーを形
成せしり、こ几ンアルコール等の水ＬＥ−縄申で丹鮎晶
によプ光字分割して、次いで憎うＩしたｄ−２−アミノ
−１−１タノールリＬ−、畠石鹸塩と１＾力リ土訓金属
化合物とを水注畷縄＋で反応せしめることによってＬ−
１１ｉ石練りアルカリ土類金属塩を固体として沈澱して
分Ｉ１１ゼしめ、同時に遊−のｄ−２−７ミノー１−１
タノーｉｂ　５　ｆｇ縄中に倫る方法か知られている。

しかしＬ−ａｈｌｋは非天然溢であることから天然臘に
比して非常に＋Ｉｂ−であること及び水＃Ｓ性であるた
め七の回収が山崩であり、経済性の−で問題かめる。

本発明者はかかる欠点のないｆｆｒ規なａｔ−２−アミ
ノ−１−１タノールの分割方法を＠究した結果ｄｔ−２
−アミノー１−ブタノールのＮ−アシル誘導体ｔアミノ
アシラーゼによって不斉にすなわち４体のみを加水分解
（以下不斉加水分解という）する方法かｄｔ−２−アミ
ノ−１−ブタノールの光学分割に非常に好適に用いうろ
ことを見出し本発明に到達した。さらに詐しぐは本発明
者等は酵素特にアミノアシラーゼの戚るもｆ：）は基買
ラセミ体（Ｎ−アシル化合物）を不斉加水分解する能力
を持っていることに看目し、もしアミノアルコール類の
へ〜アシル誘導体においてもこのように不斉加水分解す
ることが効果的に可能でりｎばアミノアルコ−７１−類
の光学分割に惚めて鳴利であろうと４え広範な探索研究
な行った。その鮎釆アスペルギルス属。

ペニシリウム属及びストレプトミセスＪ４に属する菌株
が不斉加水分ｔＩｓ能力馨もつアミノアシラーゼを産生
することを見出した。

すなわち、本発明はｄｔ−２−７ミノー１−プタノー／
ｌ”ｒＲジクロイド或は歌無水吻と反応させて得た２−
アミノ−１−１タノールのＮ　−アシル誘導体を＊用し
、該Ｎ−アシＡ＃導体な一体のみ【不斉加水分解するア
ミンアシラーゼを作用させて脱アシル化せしめて目的の
ｄ−２−アミノ−１−ブタノールとすること特徴とする
方法であり、そののちこれを例えばイオン交換樹脂中浴
媒抽出、蒸麺、分別晶析等の手法【用いて伽の成分と分
離することにより所望のｄ−２−アミノ−１−ブタノ−
ｚｆ取得する。

醜ムのような黴庄吻は保存菌株から或は自然界から儒え
は次に記載する方法で分離すること４ｈ出来る。すなわ
ちｄ−２−７ミノー１−１タノールのＮ−アシル化物例
えばＮ−アセチル化會−１ｈ−クロロアセチル化付物、
威はＮ−ベンジル化曾物を唯一の炭素源として生育しう
る株を保存菌株、或は自然界から分離し、次いでその中
からＮ−アシルＩ＃尋体ン加水分解して２−アミノブタ
ノールを遊−する能力のすぐれた菌株な生成するアミノ
基Ｙ指像として選択する。

その後、ｄｔ−２−アンノー１−ブタノールのＮ−アシ
ル化物χ不斉加水分解してｄ−２−アミノ−１−ブタノ
ールを生成する能力のすぐれた―株を施光度を指標とし
て選択する。か＼る選択法は、予め同−属の微生物の多
数の１ｇ株についてａｔ−２−アシルアミノブタノ−身
の不斉加水分解能力を試験し、該能力χ有する菌株につ
いて　　培養することによって傅られる。

か＼る手順で選択した菌株けａ−ｔ−２−アミノ−１−
１タノールのＮ−アシル化−を不斉加水分解して選択的
にａ−２−アミノ−１−プタノールケ生成せしめるアミ
ノアシラーゼを産生する能力をもつ。か＼る菌株のこの
よりな特異な活性は本発明者によってはじめて紹められ
たものである。

前記の方法で分離された微生物のうち以下にあける真の
菌株は本発明Ｋ特に有利に利用される例でるるか前記ス
クリーニング方法で選択されたものでめれはいづれもｆ
川できる。

アスペルギルス噛オリーゼ、アスペｈ ギルスークラクス、アスベノｂギルス・タマリイ、ペニ
シリウム・ビナセウス。

ペニシリウム・ピリデカツム、ストレププトミセスΦグ
リセウス か＼る値缶智に纏常の方法Ｃ増査し得られた培養物又は
その処ｍｗを不斉加水分解に用（するア建）アシラーゼ
として用いる。増養方法としては瀘気遺拌場％、煽ｖｋ
場養、静置培養のいずれをも）υ用でき勾か通常好気的
培養が好結果をもたらす。

これらの場書物またはその処墳１な用いてｄｔ−２−ア
ミノ−１−ブタノールの不斉加水分解を行なわせる場合
、１ミノアシラーゼとしては―体培ｇｋ液或はその上澄
液、上澄液より塩析畳で分離したアミノアシンーゼ、ア
ミノアシラーゼを公知方法で固定化したもの等を用いる
ことか出来る。不斉加水分Ｓ条粁としては反応液のＰＨ
は５〜Ｂ１反応温度は、１０℃〜５０℃の間で選ばれる
が、２０℃〜４００が望ましい。反応時開は基質幽度、
＃木活性の強さおよび反応温良によつ−Ｃ変為が通常（
１，５Ｈｒ〜７２　）１ｒである。

基質績度はアミノアシラーゼ活性の強さとの関係で決め
られるが通常ｄｔ−２−アｉノー１−プタノールのＮ−
アシル化合物の１１〜１０ｍの範囲内で選ばれる。

本発明の基質として用いるａｔ−２−アミノ−１−ブタ
ノ−ｈのＮ−アシル化は例えばＪ・Ａ、Ｃｅ８　Ｖｏｌ
　６６　ｐｓｓａ　−５３９（１９４４）　Ｋ準拠して
行われる。酸無水物を用いてアシル化する場合条件によ
ってはＮ−アシに化と同時にエステル化反応も起ること
があるが、そのようにエステル化されたものでもアミノ
アシラーゼの種類を適切に選べばａｔ−２−アミノ−１
−ゲタノールのＮ−アシル化物と全く同様に扱うことが
出来る。本発明で用いられるアシル基としては、アセチ
ル基、クロロアセチル基及びベンジル基が好結果をもた
らす。

本発明を工業的に実施する場合ＩＬ＃或／Ｉｉ′ｌＩＩ
製アミノ−アシラーゼの水ｓａｔ’　ｄｔ−アジルアミ
ノ−１−１タノー身水＃Ｉ濠に加えて不斉加水分解せし
めてもよいがこの場合アゼノーアシラーゼの回収及び繰
り返し使用が事実上不ＯＴ総なので不利である。従って
アゼノーアシラーゼはａ等かの方法で固定化して水に不
溶な廖にして用いれば繰り返し使用することも可能にな
るし、又不斉加水分解を連続的に行うことも可能となる
ので工業的Ｋｕ＃嵩ｒｉ固足化して使用することがｉ＋
ｔましい。同定化の方法としては公知方法り筐り担体結
合法（共有結合法、イオン結合法、吸着法）、架橋法、
包括法、その他いずれの方法も用いることか出来る。

又本発明の方法によって光学分割された残）のｔ−２−
アミノ−１−ブタノ−人は公知方法で＾ラセミ化し再び
本発明の方法の原料として１［することが出来る。

以上ｌｉｌ！明した如く本発−の方法はｄｔ−２−アず
ノー１−１タノールの光学分１ＩＩＩＫおいテ微生物酵
素の不斉加水分解作Ｍｔ’始めて利用することｔ見出し
た点で！１ｒ現性がろる。又、−一２−７しｈ−１−１
タノールの製造方法において崗定化酵嵩ン用いることに
より、ＩＥ分式、Ａｌ１式いずれの方法にても可能とな
った点でその工事的価値は大きい。

以下本発＠ン実施例にて説明するが本発−はこれに限定
されるものでない。

実−例１ （１）　［＃嵩液のＷｓ整〕 下記組成の培地２０ｍン２４■径の試験管中で予めａｔ
−２〜アシル１ミノ−１−１タノールの不斉加水分解餌
力についてスクリーニングされたａｓｐ　＠ｏｒｙ亭ａ
ｅ　ｔ”　５０℃で７２時間振＠Ｎ養した。

培＃ｈ繊成 可溶性デンプン　　　１５．Ｏｆ ＃母母上キス　　　　　４．ＬＩ　Ｉ Ｋ、Ｈｆすａ　　　　　　　　ｔＱｚ ＭｇＳ０４・７Ｈ２０α５Ｉ 仁れｔ蒸榴水１，０００　ｔＫ、暇−ｉ：ｒ−シ１　Ｐ
）１６　Ｋｌｌ製する。同−ｊｌｊ＊１ｔ’を容れた攪
拌機つき小１１Ｍ培養佃（答横２ｔ）に上記試験管培養
液を鋲拙し６０℃で一気しつつ７２時間攪拌培養する、
かくして得られた培養液を遠心分離機に用いて遠心分離
し厘体を除去した。この上ｔｊｌ濠を檜アンモニヤ水で
Ｐ）ｉ　４０に調節し６０℃以下の温度で減圧？ｌＩＭ
し約３００ｍｇとする。アンモニヤ水でＰ）ｉ　４５と
したのチ約５℃に冷却しスターラーで攪拌しつつ硫酸ア
ンモニウム１８０をを徐々に加える。このさいＰＨの低
下に注意しに’ｋ１４以下にならぬようアンモニヤ水′
Ｉｋ軸）して調節する。析出沈澱してきた＃１ｋｊｆ白
な慮心分−して集め冷蒸溜水６０−に治屏、１夜冷暗所
で透析する。透析の終ったｔＩＩ木１１ｉ、は約５℃に
冷却し撹拌しつつ容量で６０ｇ６となるまで冷アセトン
を徐々に加える。析出した沈ｌ１１ｔ’直ちに遠心分離
して集め冷蒸−水２０−に溶かし不ｉＩｌ物を遠心分離
して除き上置みな＃３ｍ液とする。

（２）（（１−アミノ−１−ブタノールのＮ−アシ身化
〕 温度針、―下装嵩及び攪拌装置をつけた１Ｌ三つロフラ
スコにベンゼン５００ｍ、無水炭酸ソーダ２５１及び１
＆Ｏ２の純ｄＬ−２−７ンノー１−ブタノ−Ｊ−を仕込
む、内容−Ｖ激しく攪拌しつつＩＯＣまで冷却する。Ｚ
ａｌｆ＆−）ヘンジイルクロライドと１ΩＯｓｄのベン
（ンとを混合した液を滴下装置から徐々に−１する。こ
のとき内容物は徴しく攪拌すると共に内容物の温度が１
０℃を越えないように冷却する。４５分後炭酸ンーダ２
５１１に：追加する。

引続きｌ０ＣＫ保ちクク４時間内谷吻０攪拌を続ける。

その後冷却４１１を除いて更に４時間攪拌する。滴下装
置ｖ取り除急代りにコンデ／サー’ｔ−＊ｃ付けて内容
智からベンゾイルクロライド臭が無くなるまでリフラッ
クス【ａける。内容物が熱いうちに反応液のｆ過を行っ
て無機物質（塩）１ｈ：ｍ＜。１液ｔｉ１００ｃｃの熱
ベンゼンで２（２）抽出する。餉出筐は合体して全体の
体積が４００ｍＫなるようにべ／ゼンを加え次いで冷却
する。析出する２−ベンゾイルアミノ−１−ブタノ−Ａ
−耐重をＰ別して集め冷ベンゼンで洗滌后乾燥する。収
祷量社３４〜５５ｔである。

（２（ａｔ−２−ベンノイルアミノ−１−ブタノールの
不斉加水分解〕 ４１ｔ　−２−ベンゾイノＬ、ｆイノー１−ゲタノーｘ
　３０　＃＊　１　ｔＫｆｍｂ−シ１　ｓｌ性ソー／Ｉ
ＩでＰｋ−１＝ムＯＫ調整する。さきにｇ４盛した酵素
［２０ｓｇｔ’礒ｍ、攪拌しつつ６７℃で２４ａｌｌｌ
ｋｌ不斉加水分解を行わしめる。加水分解反応の進行に
つれてｌ′Ｈの低下がおこるので１〇−苛性ンーダ欲Ｖ
：１１１ｒ続的に１加して常に）’ｈｔ’ｔｏに保つよ
うにする。反応終了后反応淑′Ｉｋ＃アニオン交準樹脂
に通してｄ−２−アミノ−１−ブタノールな絢脂にａ看
せしめ洗ｍ、Ｉ！１ｄ−２−アミノー１−グメノールを
溶出せしめる。製出’＆　’ｋ　１００　ｍＨｆの減圧
下で水ｔ’ａｍ去し、次（・で史に２０　ｍＨｆまで減
圧ｋＡめて＃点り６〜８４１：ｌ：／２０■ルのｄ−２
−１オノ−１−１タノールを抽出せしめる。収得量は９
７を純度ｑ８ｓ、［α］腎＝＋９８であった。

実施例２ （１）〔酵素液の調整〕 下記組成を持つ培Ｊｍ２０−を２４■径の試験管中で予
めｄｔ−２−１シルアミノブタノールの不斉加水分解能
力についてスクリーニングされたＰｅｎ１ｃｉｌｌｉｉ
ｏｎ　ｖｉｎａｃｅｏｕｓ　Ｙ：　２５　Ｃで１２０時
間振盪培養した。

培地組成 可溶性澱粉　　　２０ｆ グロオースベ１トン　　　　　　１１ Ｋ２ｋｌＰＯ−２＃ （ＮＨ，）、８０．　　　　　１．４１Ｍｇ８０４・７
）１，０　　　０．５１ＣａＣ１，０，３＃ 尿素　　０．５１ これを水１０００−に溶解してＰＨ４５Ｋｌｌ葺した。

上記培地１をを容れた攪拌機つき小履培養僧（容積２１
）Ｋ上記賦験管培養腋を豪徳し２５℃で通気しりっ１２
０＃Ｆ蘭攪拌培養する。かくして得られた培養液を遠心
分離機な用いて瀘心分離し―体を除去した。この上泄濠
について実施例−１記載のｓＳ液の調整方法に阜じて丸
塊してｌＩ素液液約２〇を得る。

（２）［（１−２−アミノ−１−１タノールのＮ−アシ
ル化〕 温度針、滴Ｆ装置及び攪拌装置ｔつけた１Ｌ三クロフラ
スコにベンゼン５００１ｍ１ｇ、無水脚績ソーダ２５９
及び１　Ｂ、Ｏｆの（１−２−アミノ−１−ブタノール
χ仕込む。内容物を激しく攪拌しつつ、１０℃まで冷却
する。１５．７ｆの１セナルクロライドと１００−のベ
ンゼンとを１曾した液な滴下装置から徐々に滴下する。

このとき内容物は漱しく攪拌すると共に内容−の温度が
１０℃を越えないように冷却する。

４５分後戻酸ソーダ２５　ｆ’ｔ’追加する。引続１ｉ
１０℃に保ちつつ４時間内答暢の攪拌を続ける。その後
冷却債乞除いて更に４時間攪拌する。滴下！ｉｔゼ取り
除き代りにコンデンナ−ン＊Ｄ付けて内容物から１セチ
ルクロライド臭が無くなる１でリフラックス’（ｆｆＭ
ける。

内容物が熱いうちに反応液のｆＩｉｉｌｋｋ行って無Ｉ
ｌ物質（＃ｊ）を除く。Ｐ液は１００−の熟ベンゼンで
２１抽出する。抽出１［は合体して全体の体積が４００
−になるようにベンゼンを加え次いで冷却する。析出す
る２−１セチルアミノ−１−ブタノ−ｚｌｆｉ晶１に１
別して集め冷ベンゼンで洗滌后乾燥する。収得ｆｉｄ２
５〜２６ｆである。

（３）（ｄｔ−２−アセチルアミノ−１−１タノールの
不斉加水分解〕 ｄｔ−２−アセチルアミノ−１−ブタノ−ＪＬ−２［Ｌ
３ｆｆ水１ｔｖｃ浴かしｌ５ｆ７性ソーダＰＨ６，０に
調整す！Ｊ４（υ項で調整した鯵累筐２０ｍｇｋ添加、
攪拌しつつ５７Ｃで２４時間不斉加水分解を行わしめる
。加水分解の進行につれてＰＨの低下がおこるので１０
１１＆ソーダを断続的に添加して常にＰＨを６０に保つ
ようにする。反応終了后反応欲１に＃アニオン変換１１
脂に遡してｄ−２−アミノ−１−ブタノールを樹脂に吸
盾せしめ、洗滌后ｄ　−２−アミノ−１−１タノールｔ
’＃出せしめる。

−出歇ｖ１００■均の減圧下で水を溜置し、次いでｊＥ
Ｋ　２０■絢１で減圧を薦めて沸点８５〜８４Ｖ２０■
階のｄ−２−アミノ−１−ブタノ−Ａ−ｆ　１ｌｉｌ出
せしめた。収得量１０ｒ１軸度９８−〔四）’ｏ　”　
＋９．５であった。

央Ｊｌｌｋ例６ （わ〔鯵Ｓ腋の調整〕 上記組！ｉｔＶ持つ培地２０−な２４■径の試験管中で
ストレプトミセス・グリセウスを３０℃で４８時＃ＭＪ
ｌｔＲ］ｌｌ培養した。

検地組成 嵐　ＩＩ　　　　　５０　　Ｆ ＮａＮＬ）、　　　　　　２　　＃ ＫｓＨＰ（）４　　　　　１　１ Ｍｇ８０ａ　・７ｋｌ　ｚυ　　０．５１ＫＣ１［１５
１ に’ｅ８０４・　７ｋｉｚＯ１口１１ これｔ’＊’ＬＯＯＯｍＫ浴解してに’に一１＝１Ｑ〜
１３に調整する。

上記培地１ｔ’ｇ容れた撹拌機りき小証増養債（容積２
１）に上記試験管培養液に澱−し３０℃で通気しつつ７
０時間撹拌培養する。

かくして得られた培ｍａｔ’瀘心分１砿を用いて遠心分
点して菌体′Ｉｔ隷六した。この上ｆ象について一安ｗ
　７０　ｇｂ＠和−力りし析出する徂＃素を遠心分離し
て系めＰ？ｒ志鑓水３υ−に鉦解、１夜冷暗所で透析す
る。透析の終った酵素液は凍鮎乾−し冷蟲伽水２ｕ―に
絣かし不浴物を遠心分離して除き装置みを酵素液とする
。

（２）（：ｄｔ−２−アセチルアミノ−１−１タノール
の不斉加水分解〕 笑施夛−一２の方法で合胞した２−１セチルアミノ−１
−ブタノール２１５ｆＹ水１ｔＷＣ溶かし１−＠性ンー
ダ歌でｐｉｔｌｏにｊＩ４！＆する。

前項でｗ４整した蝉嵩叡２０−をミー、攪拌しつつ５７
Ｃで２４時間不斉加水分解ン行わしめる。加水分解の進
行に′）几てＰｌｌり低下がおこるので１〇−苛性ソー
ダ’ｄＥを酊絖的にｉ加してＰＨを７．０に保つように
すゐ０反応員了后反応ａｔ’夾施＠−２−記載の方法で
精員しｄ−２−アミノ−１−ブタノ−Ａ１１ｔ１’得た
。純度９８％（”）”ｏ−”８であった。

以　　　上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１７ｄ−２−アシルアミノ−１−１タノールのみケ加
   水分解する能力を有するアミノアシラーゼを有する微生
   ｌｌｌ１Ｉ馨用いてｄｔ−アシル１ミノ、ストレプトミ
   セス属の微生物でろってａｚ、−２−γシルアミノー１
   −１タノールに過用してｄ−２−アシル１ミノ−１−１
   タノールの与を選択的に加水分解する能力を指標として
   スクリーニングしたものでわる特ｅａ求の颯１１！１！
   （１〕項の製造法。 ＋３）　　アミノアシラーゼｔ４！する倣張物について
   ＃累の向定化地＠を行なったものを用いる特許ｉ′１１
   ！水の範囲第（１）穢の編造法。 （４）　ｄｔ−１シルアミノ−１−ブタノ−＾としてｄ
   ｔ−２−ベンゾイルアンノー１−ブタノ−ｘ、ｄＬ−２
   −１セチルアミノ−１−１メノール若しくはｄＬ−２−
   クロロアセチルアミノ−１−ブタノ−ｚｆ用いる特許請
   求の範囲第（１）項の製造法。 （５７−嵩の固定化処理によって本に不嬉化された微生
   物な用いる特Ｉｌｆ祷求の範囲第（１７項若しくはＩＮ
   　＜３）項のいづれかに記載り叡慮法。