JPS58141779A - 嫌気性細菌の培養方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は嫌気性細菌の培養方法に関するものである。細
菌は酸素の要求度から　１）偏性好気性菌　２）通気嫌
気性菌　３）偏性嫌気性菌に分けられ、このうち偏性嫌
気性菌の中化はボツリヌス菌、ウェルシュ菌等の食中毒
菌も多く近年、嫌気性細菌の培養方法が注目されてきて
いる。

しかしながら、従来嫌気性細菌の培養番とは特別の器具
、装置を必要とし、かつ操作にはかなりの熟練を必要と
されていた。

従来までの方法には　１）重層法　り高層固形培地培養
法　璽）空気置換法　約化学的醸素吸収法　■還元剤等
を培地に加える方法　荀生物学的方法等があるが、これ
らはいずれも嫌気雰囲気を作るためには操作が煩雑であ
った。

最も一般的に行なわれている方法は　吟のうちガスパッ
ク法で原理は化学的方法によりＨ２ガス及び炭酸ガスを
発生させ、　Ｐｄ　金属触媒を用いてＨ２と容器内の０
２とを反応させ嫌気状態を作り出すものであるｏしかし
ながら、この方法では　■可燃性のＨ２ガスの発生を伴
い、酸累除去彼も数十％のＨ２ガスが残存し危険である
こと　■触媒の温度が１００℃以上の高温番こ達する点
　■触媒の再生が必要であること■経済性に劣る点　等
の問題点が指摘されていた。

本発明はこれらの欠点を克服したものである。

すなわち本発明は、嫌気性細菌を接種した培地を　（ａ
）炭酸鉄または炭酸鉄とアルカリ性物質を有効成分とす
る組成物を通気性包材に密封包装してなる密封包装体お
よび（ｂｌ炭酸ガスを実質的に発生せず酸素を吸収する
脱酸素剤包装体と共に実質的に非通気性の包材または気
密容器内に密封して嫌気性細菌を培養する方法であって
、密封系内の酸素濃度を１０時間以内に１％以下好まし
くは０．１％以下にし、かつ密封系内における炭酸ガス
の濃度が５〜３０％になるよう酸素を吸収し、炭酸ガス
ー二生するように（・）とｆｂｌを調製して組合わせ、
密封後１０時間以内に酸素濃度を１％以下好ましくは０
．１％以下にし、酸素濃度１％以下好ましくは０．１％
以下、炭酸ガス濃度５〜５０％好ましくは８〜２０％で
保持する嫌気性細菌の培養方法である。

本発明においては密封系内の酸素濃度を１０時間以内に
１％以下にすることが必須であり、この条件が満足され
ない場合には嫌気性細菌は死滅する。また炭酸ガス濃度
を５〜３０％、好ましくは８〜２０％にすることが必要
であり、炭酸ガス濃度が５％よりも低い場合には嫌気性
細菌の培養は実質的に困難である。又、炭酸ガス濃度が
３０％よりも高い場合には、密封容器に圧がかかるか、
袋の場合にはふくらんで破袋する等の危険性があり、実
用的ではない。

本発明において用いられる包装体（ａｔは酸素を吸収し
炭酸ガスを発生するものである。包装体（ａ）で用いら
れる炭酸第一鉄は第一鉄塩（例えば硫酸第一鉄）と炭酸
塩（例えば炭′聚ソーダ）との反応により製造したもの
、あるいは天然に鉱石として産出する菱鉄鉱等、製造方
法には依らず使用可能である。また、その原料である第
一鉄塩と炭酸塩とを粉砕、混合した状態のものも使用可
能である。なお炭酸第一鉄は通常５〜２Ｏ］ｉｔ％の水
を含み通常はこの様な状態で使用される０アルカリ、性
物質としては、例えばアルカリ金属の水酸化物、炭酸塩
、重炭酸塩、アルカリ土類金属の水酸化物があげられる
。包装体ｆａｔの組成物には、さらに各種粉末又は微粒
状フィラー（例えば粉末活性炭、タルク、アバタラガス
クレー、酸化チタン、酸化鉄粉、ホワイトカーボン、ゼ
オライト、アルミナ）などの添加物を含めることができ
、これらの添加によっても酸素吸収能、炭酸ガス発生能
を調節することができる。

本発明においてはさらに包装体（ｂｌが用いられるが、
この包装体は脱酸素剤組成物を通気性包材で密封包装し
たものである。脱酸素剤組成物は炭酸ガスを実質的に発
生せず酸素を吸収し固定する還元剤であり、例えば亜硫
酸塩、亜硫酸水素塩、チオ硫酸塩、亜ニチオン酸塩、ヒ
ドロキノン、カテコール、レゾルシン、ピロガロール、
没食子醗、ロンガリット、ソルボース、グルコース、リ
グニン、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキ
シ７ニソール、鉄粉詔よび第一鉄塩（炭酸塩を除く）か
らなる群から選ばれる少なくとも一種を有効成分とする
ものがあげら２″１φ０それらのなかでも鉄粉および電
解質を含むものが奸才しい。脱酸素剤組成物には水や各
種粉末又は微粒状フィラーなどの添加物を含めることが
でき、これらの添加によるでも酸素吸収能を調節するこ
とができる〇 包装体（ａｌ、（ｂｌは通気性包材に包装したものであ
るが、ここで用いられる通気性包材としては嫌気性培養
のために必要な酸素吸収速度を考慮してガーレ一式透気
度（ＪＩＳ−Ｐ−８１１７、シリンダーの重さ　５７０
１が通常１０００ｓｅｃより大きいもの（特に１００　
ｓｅｃより大きな通気性を有するものが好ましい。例え
ば有孔プラスチックフィルムを紙などとラミネートした
もの、又はいわゆるマイクロポーラスフィルムもしくは
それを他の通気性シートとラミネートしたものなどがあ
げられる。

本発明においては包装体（ａｌ、（ｂｌ中の組成物の成
分、組成は包装体（ａｌ、（ｂｌを組合わせたものが、
密封系内の成木濃度を１０時間以内に１％以下好ましく
は０．１％以下にすることができ、かつ炭酸ガス濃度を
５〜３０％にしうるよう調製される。包装体（ａｌ、（
ｂｌは組合わせて用いたときに、密封系内の酸素量の１
〜２０倍の酸素を吸収する能力を有し、かつ密封系内に
おける酸素吸収量に対する炭酸ガス発生量が０．２〜０
゜７になるよう調製するのが好ましい。

本発明で使用する密封容器は通常、酸素透気度が５００
　Ｑ！ｌ：／　ｒｌ　１１２４　ｈｒ＊ａｔｏｍ以下、
好ましくは１００　ｃｃ／　ｔｔｌ　＊　２４　ｈｒ−
ａｔｏｍ　以下の材質で作られたものであり、完全に密
封可能であれば、その形態にかかわらず使用可能である
。

例えば本発明で用いる最も簡単な容器は各種塩化ビニリ
デンコートフィルム（ＫＯＰ、ＫＯＮ。

ＫＰｇＴ等）、ビニロン等で例示される実質的に非通気
性の透明の包材で作られた袋であり、嫌気性菌の接種さ
れた培地を包装体（ａｌ、ら）と共に封入し、ヒートシ
ール、又は封止材により封止することにより密封できる
。なおこのような透明フィルムを用いることによって培
養中の嫌気性菌の生育状況を観察することが可能である
。

培養温度は通常２０〜４０℃である。

本発明によれば触媒や特殊な器具、装置を必要とせず、
包装体（ａｌ、（ｂｌを嫌気性細菌を接種した培地と共
に非通気性包材または気密容器に封入、密封することに
より、きわめて簡単に嫌気性細菌を培養することができ
るＯ 以下に実施例をあげて説明する０ 実施例 Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｃｕｃｌｅａｔｕｍ　を
ＧＡＭブイヨンで２４時間嫌気培養した培養液の希釈液
０．１１をＧＡＭ寒天培地に混合し、シャーレに入れた
。このシャーレと、炭酸第一鉄　Ｂ？、水酸化カルシウ
ム　０．１１を紙に有孔ポリエチレンをラミネートした
通気性包材で包装した炭蒙ガスを発生する脱酸素剤、お
よび同じ通気性包材で鉄粉　６〕、塩化カルシウム・２
水塩０．７ノ、粉末活性炭　２ノと水　２ｖを包装、し
た脱酸素剤とを塩化ビニリデンをコートした延伸ポリプ
ロピレン／ポリエチレンの積層フィルムからなる透明な
袋に入れ、ヒートシールを行なった。袋内の炭酸ガスの
濃度は８％になり、密封後２．５時間で酸素の濃度は０
．１％以下になった。

３７℃で４８時間培養後、コロニー数を測定した。また
比較例１として同試料を大気中で培養した場合および比
較例２として炭酸ガスが存在しない゛嫌気性状態で培養
した場合の例を示した。

結果を下表に示した。

一３′、

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 嫌気性細菌を接種した培地を゛ら）炭酸鉄または炭酸鉄
   とアルカリ性物質を有効成分とする組成物を通気性包材
   に密封包装してなる密封包装体および缶）炭酸ガスを実
   質的に発生せず酸素を吸収する脱酸素剤包装体と共に実
   質的に非通気性の包材または気密容器内に密封して嫌気
   性細菌を培養する方法であって、密封系内の酸素濃度を
   １０時間以内に１％以下にし、かつ密封系内における炭
   酸ガスの濃度が５〜３０％になるよう酸素を吸収し、炭
   酸ガスを発生するように（ａ＋と缶）を調製して組合わ
   せ、密封後１０時間以内に酸素濃度を１％以下にし、酸
   素濃度１％以下、炭酸ガス濃度５〜３０％で保持する嫌
   気性細菌の培養方法。