JPH11508247A

JPH11508247A - ウベニメクス及びウベニメクスを含む医薬組成物のウイルス性肝炎の治療薬としての用途

Info

Publication number: JPH11508247A
Application number: JP9503498A
Authority: JP
Inventors: ツォウ，シャンシュエ; アイ，リン; ワン，ピン; イエ，チュアンフア; ペン，ミンシウ
Priority date: 1995-06-21
Filing date: 1996-06-21
Publication date: 1999-07-21
Also published as: CN1098249C; WO1997000677A1; US6245813B1; CN1138572A

Abstract

(57)【要約】本発明はウベニメクス（Ubenimex）又はその塩類又はウベニメクス又はその塩類を含む医薬組成物によるウイルス性肝炎、とくに慢性Ｂ型肝炎の治療における用途に関する。

Description

【発明の詳細な説明】ウベニメクス及びウベニメクスを含む医薬組成物のウイルス性肝炎の治療薬としての用途本発明はウベニメクス及びその塩類又はウベニメクスを含む医薬組成物のウイルス性肝炎の治療薬としての用途に関する。ウイルス性肝炎は人類の健康を厳に損なう世界的伝染病であり、今日まで少なくとも５種類のウイルス性肝炎の病源体が発見されている。それはＡ型肝炎ウイルス(HAV)、Ｂ型肝炎ウイルス(HBV)及びＣ型肝炎ウイルス(HCV)、Ｄ型肝炎ウイルス(HDV)及びＥ型肝炎ウイルス(HEV)である。これらのウイルスは皆、急性肝炎を誘発することができ、その中でＢ型、Ｃ型、Ｄ型肝炎ウイルスは、慢性肝炎を引き起こす。普通、急性肝炎は自限性を有し、即ち患者自身が完全に回復される。故に、ウイルス性肝炎の治療研究のポイントは、慢性肝炎におかなければならない。特に発病率の高い慢性Ｂ型肝炎については、目下全世界においてＢ型肝炎表面抗原(HBsAg)保菌者の人数は、2.8億を越えており、慢性Ｂ型肝炎患者は7800 万に及ぶ。目下、慢性Ｂ型肝炎を治療する主な医薬品として以下のものがある。１．抗ウイルス薬、例えば、インターフュロン。インターフュロンは今のところ慢性肝炎を治療する理想的な医薬品と認められ、臨床上30〜45％の患者の病状が緩解される（HBeAgが陰性に転化し、肝組織学についても改善が認められる）。また、５〜25％の患者が治療される（HBeAgとHBsAgは皆消失された）。但し、インターフュロンは経口投与はできず、値段が高く、また、入院の必要がない慢性肝炎患者及び普及に不便なところが多い。尚、その副作用が著しく、例えば、高熱（38〜40℃）、戦慄、低血圧、悪心、下痢、筋肉痛、頭痛及び倦怠等がある。これらはそれ故広く応用されなかった。２．その他の抗ウイルス薬、例えば、ビダラピン、燐酸ビダラビン、アシクロビル、ホスホノ蟻酸、ジドプジン、スラシン、ポリイノシン酸−ポリシチジル酸、２′，３′−ジデオキシシチジンなど。これらの薬剤は、臨床効果が確立されておらず、また毒副作用大きいので未だ広く応用されていない状態である。３．免疫調節剤、例えば、（１）ヤルファクターであるチモジン、イムノリボ核酸、トランスファクター、インターロイキン−２等；（２）ホルモン剤、例えば、副腎皮質ホルモン、プロスタグランジン等；（３）特異性又は非特異性抗原又は抗体、例えば、Ｂ型肝炎ワクチン、BCGワクチン、MPS(mycobacteria phecis ubstance)高力価免疫グロブリン等；（４）細胞内のシクロヌクレオチド化合物に影響を及ぼすもの、例えば、イミダゾール類薬剤。これらの免疫調整剤は今は未だ試験段階に止まっている現状である。４．中国伝統医学から来るチョレイゲルカン、山豆根注射液、マトリン注射液、レンチナン等があるが、これらの薬剤の効果は更に確かめる必要がある。故に、治療効果が高く、副作用の低い投与し易い新しい抗ウイルス性肝炎薬の開発が切望される。本発明の目的は治療効果が高く、副作用の低い抗ウイルス性肝炎治療薬の提供にある。本発明者は幅広く十分な検討を行った結果、ウイルス性肝炎、特に慢性Ｂ型肝炎に対して、ウベニメクス（ubenimex）又はその塩が優れた治療効果を持ち、副作用の低いことが予想外に発見された。本発明は上記の発見に基づく。ウベニメクスは、次の構造式をもつ化合物で、化学名はＮ−〔（２Ｓ，３Ｒ） −４−フュニル−３−アミノ−２−ヒドロキシブチリル〕Ｌ−ロイシンである。本化合物は梅沢浜夫らが始めてストプトシヤス・オリボレチクリMD₉₇₆−Ｃ₇という菌株の発酵液から単離し、これがアミノペプチダーゼＢ及びロイシンアミノペプチダーゼに対して明らかに抑制活性を持っていることが発見された〔J．Ant ibiotics，29，97-99(1976)〕。ウベニメクスは、現在主に抗癌剤（日本特公昭60−9487、公開特許公報平４− 193827参照）、放射線副作用軽減剤（日本公開特許公報平３−110150参照）、抗血栓形成剤（日本公開特許公報62-72613参照）と末梢鎮痛剤(US4,308,256)等に用いられている。但し、これがウイルス性肝炎の治療に用いられることは未だ全く報告されていない。本発明の第一の側面は、ウベニメクス又はその塩類のウイルス性肝炎、特に慢性Ｂ型肝炎の治療薬としての用途及びウベニメクス又はその塩の有効量のウイルス性Ｂ型肝炎患者、特に慢性Ｂ型肝炎患者への応用にある。本発明の第二の側面は、ウベニメクス又はその塩を含む医薬組成物の、ウイルス性肝炎、特に慢性Ｂ型肝炎の治療薬としての用途及び本薬剤のウイルス性肝炎、特に慢性Ｂ型肝炎患者への応用にある。また、本薬剤は、ウベニメクス又はその塩を含み、その他のウイルス性肝炎に用いられる医薬品を含んでも含まなくてもよく、そして製造工程に用いられる補助剤を含んでもよい。本発明のもう一つの側面はウベニメクス又はその塩のウイルス性肝炎治療薬の製造方法における使用にそしてウベニメクス又はその塩の治療量を含み、その他のウイルス性肝炎薬を含んでも含まなくてもよく、また補助剤を含むことができるウイルス性肝炎治療薬における、使用にある。本発明においては、ウベニメクス及びウベニメクスを含む医薬組成物は各種の適切な投与経路で投与することが出来るが、経口投与が好ましい。投与量の範囲は患者の年令、性別、肝炎の重度及び投与経路により異なるが、通常、投与量範囲は10〜100mg／日にある。次の薬理学実験によりウイルス性肝炎に対するウベニメクスの生物的作用を説明する。一．ウベニメクスの抗アヒルＢ型肝炎ウイルスの実験。実験材料及び方法（一）モデル動物健康成年の重度産“麻鴨蛋（たまご）”という家鴨卵を孵化した１〜２日齢の家鴨雛の腹腔経由で0.1ml DHBV DNA陽性のウイルス血清を接種し１週間の後、外頚静脈から採血し、ジゴキシンでラベルしたDHBV DNA探針で斑点交雑検出により感染陽性家鴨を選び出して実験動物とし１か月齢まで飼育を続けた。（二）実験の組分け及び薬の投与量 DHBV DNA陽性の１か月齢家鴨76羽をランダムに５つのグループに分ける：１．ウイルス対照組：デンプンの入ったカプセル0.8ｇ／kg／日を毎朝空腹時に服用する。２．陽性薬物対照組：アシクロビル(Aciclovir)毎日１回100mg／kg／日を腹腔内注射する。３．ウベニメクス低用量組：0.5mg／kg／日４．ウベニメクス中用量組：５mg／kg／日５．ウベニメクス高用量組：25mg／kg／日ウベニメクスは白色粉末で、デンプンとよく混和して対応する規格のカプセルを作成し、毎朝空腹時に服用する。投与実験期間は１か月とする。（三）観察の指標１．血清DHBV DNAの変更情況：投与前、投与後２週間、投与後１か月、停薬１週間後に、それぞれ外頚静脈から採血し、血清を分離して−20℃において保存する。斑点交雑法によりジゴシキシン探針を用いて服薬前後の血清を比較して試験する。試験するときは探針同質性のプラスミドDNAの倍数比例に希釈したものをニトロセルロース・フイルム上にスポッティングし、交雑して示したスポットの色の濃さを基準とし、試験しようとする被検血清交雑斑点の色と比較して半定量を行なう。２．投与停止後各グループの実験動物の半分を殺し、それぞれの実験動物の肝臓組織の小さい塊まりを採取し、10％ホルムアルデヒド溶液で固定し、ルーチン HE染色病理検査をする。残った肝臓を氷浴に入れて実験室へ持ち帰り−70℃に冷蔵して家鴨の肝臓のDNAの抽出と、Southern Blotの測定及び肝臓内病毒DNA複製に対する薬物作用の検討に供する。３．各組は服薬前、服薬２週間後、１か月後、服薬停止１週間後にそれぞれ採血して家鴨血清中グルタミン・ピルビック・トランスアミナーゼ及びグルタミン酸オキサル酢酸トランスアミナーゼの変化情況を検査する。結果（一）服薬前、服薬中及び服薬後における血清中のDHBV DNAの変化情況：ウイルス対照の他、陽性薬物対照組、ウベニメクス低、中、高用量組の投与１か月後と服薬前とを比較すれば、皆DHBV DNAが著しく又は極く著しく下降したこと（Ｐ＜0.05又はＰ＜0.01）が認められ、低用量は服薬２週間後においてもDHBV DNAが明らかに下降するのが見られた。しかし停薬１週間の後はDHBV DNAの逆昇現象が認められた（表１参照）。服薬前に感染されたウイルスDNAタイターの低いものは服薬後陰転し易く、その中で、陽性薬物対照組服薬２週間後及び１か月後におけるDHBV DNAの陰転率はそれぞれ30.77％と46.15％で、ウベニメクス各用量組よりやや高いが著しい差異が認められなかった（Ｐ＞0.05）（表２参照）。 DHBV DNA含量の低下又はDNAの陰転効果はウベニメクスの用量多少には明らかな関係が認められなかった。注₃ “^* ”_I Ｐ＜0.05 “^**”_I Ｐ＜0.01 各組家鴨毎羽服薬前後の血清DHBV DNAのタイター変化情況については表１−５を参照のこと。就中“＋＋＋＋”は10,000pg；“＋＋＋”は1000pg ；“＋＋”は100 pg；“＋”は10pg；“−”は＜１pg。（二）肝臓HE染色病理検査各組は皆程度の異なる肝細胞空胞変性、腫脹、部分的に門脈区及び小葉間中隔炎症細胞の浸潤が見られた。このような非特異性肝組織病理表現は服薬組と対照組に明らかな差異が認められず、同時にウベニメクス服薬組肝細胞の壊死増生現象も見られなかった。（三）肝臓組織DNA抽出物のSouthern Blotの検査：アシクロビル(Aciclovir)とウベニメクスで１か月治療した後、家鴨肝臓組織中のDHBV DNAは全面的に、特にDNA(RC)，DNA(SC)，DNA(SS)は皆降下が認められた。図１を参照のこと。図１の説明：ａ，ｂ，ｄ，ｅはそれぞれアシクロビル、ウベニメクスの高、中、低用量組家鴨肝臓組織DNAの抽出物、Ｃはウイルス対照組家鴨肝臓組織DNA抽出物である。HindIII酵素で切ったλ（ラムダ）バクテリオファージDNAはサイズの基準（Kb）とする。（四）服薬前後における血清トランスアミナーゼの変化：表３，４を参照のこと。各実験組のALT及びAST時間の経過と共に皆正常状態に戻った（我々は10羽のDHBV血清に感染していない成年麻鴨血清中のALT及びASTを検査したところ、それぞれ＜44.47 酵素活性単位と、＜49.35酵素活性単位であった）。DHBVの感染により血清トランスアミナーゼが一時的に上昇するが、同一時相を比較すれば、服薬２週間後、１か月後にはウベニメクスの各用量組のALTはウイルス対照組より有意差（Ｐ＜0 .01）が見られた。しかしアシクロビルは服薬２週間の後１か月の後はウイルス対照組と比較すれば有意差（Ｐ＞0.05）が認められなかった。その他に服薬２週間後には各用量組のASTは有意差（Ｐ＞0.05）が見られなかったが、服薬１か月後、服薬停止１週後各服薬組がウイルス対照組と比較して有意差（Ｐ＜0.05）が認められた。注：“^* ”Ｐ＜0.05 “^**”Ｐ＜0.01 注：“^* ”Ｐ＜0.05 “^**”Ｐ＜0.01 結論 DHBVとHBVは好肝DNAウイルス科（Hepadnavirus）に属し、DHBV感染家鴨をヒトＢ型肝炎発病機序及びウイルス復製過程の研究として、有効薬物のスクリニングに用いられる家鴨Ｂ型肝炎動物モデルの応用としては益々広くなってきた。１〜３日齢の家鴨の雛がDHBVを感染した場合、長期間にウイルス血液を維持されるが明らかな自然陰転現象はない。故に、我々は家鴨Ｂ型動物モデルによるウベニメクスの抗ウイルス作用をチェックし、臨床において肝炎患者を治療するために参考データを提供した。実験結果からも明らかなように、ウベニメクスの投与１か月後、血清中のDHBV DNAが著しく又は極く著しく下降され、服薬を停止した場合DNAの逆昇現象があるが逆昇の度合は陽性薬対照組（アシクロビル）より低く、アシクロビルが服薬停止１週間の後DNA逆昇タイターは服薬前のそれを超過した。尚、ウベニメクスの抗ウイルス効果はウベニメクスの服用量には明らかな関係がなく、低用量で１か月服用すれば著しいウイルス抑制作用が発現される。肝臓病理学検査及び治療前後の血清トランスアミナーゼ検査結果より明らかなようにウベニメクスは肝臓組織学には明らかな影響が認められなかった。しかも治療期間同一時相内においてALTとASTは明らかに低下したことにより、本薬剤について一定の肝臓機能改善効果が認められた。 Southern Blot検査結果がウベニメクスはDHBV DNAの肝臓内復製を抑制することが出来ることを示唆した。その現れは、本薬剤を１か月投与後、皆肝臓内組織 DHBV DNAのRC，SC，SSの低下が認められたことである。二．四塩化炭素によるマウスの急性肝損傷に対するウベニメクスの影響。（一）実験材料１．動物：ICRマウス18〜22ｇ、雌雄各半分。四川抗生物質工業研究所動物室飼育。２．薬物：ウベニメクス（Ubenimex以下BSと称す）は四川抗生物質工業研究所より、白色粉末で、ロット・ナンバは94836Ｂであった。ビフュニルジカルボキシラートは中国医学科学院薬物研究所実験製薬工場製、ロット・ナンバー881217 であった。四塩化炭素は重慶南方化学試薬工場製、分析用純度で、使用前植物油で0.1％の溶液に調製した。（二）操作方法実験動物をランダムに組分けし、BSは３つの用量組に分け、即ち0.05mg／kg／日、0.5mg／kg／日、５mg／kg／日、７日間続けて内服し、他に生理食塩水対照組及び陽性対照組（ビフュニルジカルボキシラート60mg／kg／日、７日間続いて内服）、各組は最後の一回服薬後24時間目に0.1％CCI₄10ml／kgを腹腔注射し、2 4時間たってから断頭法により処理して血液を採集し、血清を分離してアベNPオート生化学装置でアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST) とアラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)を定量した。実験を更に一回繰返した。（三）結果結果は次の表を見よ： CCI₄によるマウスの急性肝損傷AST及びALTに対するBSの影響 ^* NS組と比較すれば 0.01＜Ｐ＜0.05^** NS組と比較すればＰ＜0.01 CCI₄によるマウスの肝損傷の主な症状はALTの上昇で、上の表からも明らかなように、BS投与組は対照組よりCCI₄中毒マウス血清のALT活性が著しく降下され、且つ降下作用の度合は用量に依存する。次に挙げる臨床治療例でウベニメクスの慢性Ｂ型肝炎に対する治療効果を説明する。但し、決して本発明は以上に述べた内容に限らない。実施例１一．病例選択：主に1993年〜1994年１月迄の慢性持続性Ｂ型肝炎、HBeAg又はH BV-DNA陽性、又は両者とも陽性の入院患者から23例選んだ。但し、これらの患者は抗ウイルス剤やホルモンを応用したことがない。これに対応する期間に比較し得る病例20例を対照とした。臨床的にタイプの分け方及び診断基準は1990年５月に開催された全国ウイルス性肝炎学術会議の改訂案に従った。二．一般資料：ウベニメクス治療組。男19例；女４例；年齢８〜47才；病気経過11か月〜11年。対照組。男16例；女４例；年齢６〜63才；病気経過、病因学及び臨床症状発現等は皆似ている。三．検査方法：Ｂ型肝炎はELISA法、HBV-DNAはPCR法によって検査した。治療前及び治療後第２，３か月の血清標本について検査した。四．治療方法：ウベニメクス治療組はウベニメクスを30mg、毎日１回、連続90 日間内服を１クールとする。対照組はチョレイグルカン及びリバビリン９例、チョレイグルカン及びＢ型肝炎ワクチン11例、３か月を１クールとする。結果一．Ｂ型肝炎ウイルス高復製陰性転化率：治療組HBeAg及びHBV-DNAが皆陽性である12例の中で２項目が共に陰性転化者が３例（３／12）、HBeAg １項目だけが陽性である11例の中で陰性に転化したのは８例（８／11）、HBeAgの総陰性転化率は69％（16／23）であった。対照組の20例中HBV-DNA ５例が陽性が陰転しなかった。HBeAg陽性の15例中陰転した例が５例、陰性転化率は33.3％（５／15）であった。両組対照μ＝2.1634，Ｐ＜0.05であり明らかな差があった。ウベニメクス治療組は対照組より著しく高かった。二．肝機能（ALT及びSB）の変化：治療組においては治療前肝機能ALT51-386μ、治療開始後１〜２か月において母体伝播の８才罹患児のほか；2 2例は程度の異なる上昇が見られた。治療開始後３か月には15例のALTが正常まで降下した。回復率は65.2％で、治療組においては、治療前BSは４〜17.1μ mol／Ｌ、治療後19.1μ mol／Ｌに上昇したが適当な処置をとって正常まで降下した１例を除くほか、正常範囲に回復した。対照組においては治療開始前ALTが異常であるのが20例、治療後正常に回復したのが12例、回復率は60％で、ウベニメクスと比べてμ＝0.035，Ｐ＞0.05であり両組に明らかな差は認められなかった。対照組においては治療開始前一部の病例はBSのやや上昇が見られ、保肝治療をとった後正常に回復した。ディスカッションウベニメクスにみる慢性持続性Ｂ型肝炎23例の治療と、猪苓（ちょれい）ポリサッカライドにみる慢性Ｂ型肝炎の治療を比較した結果、猪苓ポリサッカライドよりウベニメクスの抗ウイルス作用が優れ、且つ服用が便利であった。また慢性持続性Ｂ型肝炎患者には不良反坐が見られなかった。以上実験データ及び臨床治療実験例から明らかなように、ウベニメクスはウイルス性肝炎、とくに慢性Ｂ型肝炎には良好な治療効果を示した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者アイ，リン中華人民共和国，シチュアン 610051，チェンドゥシ，シャンバンカオル９ハオ (72)発明者ワン，ピン中華人民共和国，シチュアン 610051，チェンドゥシ，シャンバンカオル９ハオ (72)発明者イエ，チュアンフア中華人民共和国，シチュアン 610051，チェンドゥシ，シャンバンカオル９ハオ (72)発明者ペン，ミンシウ中華人民共和国，シチュアン 610051，チェンドゥシ，シャンバンカオル９ハオ

Claims

【特許請求の範囲】１．ウイルス性肝炎の治療のための、次の式に示すウベニメクス又はその塩の使用方法であって、治療有効量のウベニメクス又はその塩をウイルス性肝炎患者に投与することを特徴とする使用方法。２．ウイルス性肝炎の治療のための、ウベニメクス又はその塩を含む医薬組成物の使用方法であって、その組成物の治療有効量をウイルス性肝炎患者に投与することを特徴とする使用方法。３．前記医薬組成物が、他の知られた抗ウイルス性肝炎剤と共に、ウベニメクス又はその塩並びに医薬として許容される捕助剤及び／又は賦形剤を含む、請求項２に記載の使用方法。４．前記ウベニメクス又はその塩が、腸管又は非腸管経路によりウイルス性肝炎患者に投与される、請求項１又は２に記載の使用方法。５．ウベニメクス又はその塩の、抗ウイルス性肝炎剤の製造における使用。