JPH11501807A

JPH11501807A - 免疫疾患の治療および診断のための組成物および方法

Info

Publication number: JPH11501807A
Application number: JP8526949A
Authority: JP
Inventors: レヴィンソン，ダグラス、エイ．
Original assignee: メレニウムファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド
Priority date: 1995-03-03
Filing date: 1996-03-01
Publication date: 1999-02-16
Also published as: EP1757621A2; EP1757621B1; DE69636216D1; EP0813538B1; WO1996027603A1; US6084083A; US6066322A; US6156887A; EP0813538A1; US5721351A; CA2214589A1; US6204371B1; DE69636216T2; AU718245B2; ATE328891T1; EP1757621A3; AU5178396A; US6414117B1; US20030158399A1; US6562343B1

Abstract

(57)【要約】本発明は、免疫疾患、特にＴヘルパー（ＴＨ）細胞およびＴＨ細胞様関連疾患の治療のための方法および組成物に関する。まず第１に、ＴＨ細胞およびＴＨ細胞サブ集団間および中で不差的に発現される遺伝子を同定し記載する。第２に、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患におけるＴＨ細胞サブ集団内で不差的に発現される遺伝子を同定し記載する。該同定遺伝子の発現および／または該同定遺伝子産物の活性のモジュレーションを治療的に利用して、免疫疾患症状を改善し、ＴＨ細胞応答性、例えば抗原に対する応答性をモジュレーションすることができる。さらに、該同定遺伝子および／または遺伝子産物を使用して、そのような免疫疾患を発現している又はその素因のある個体を診断することができる。さらにまた、該同定遺伝子および／または遺伝子産物を使用して、ＴＨ細胞応答性、例えば抗原に対する応答性を検出することができる。

Description

【発明の詳細な説明】免疫疾患の治療および診断のための組成物および方法１．緒言本発明は、免疫疾患、特にＴリンパ球関連疾患の治療および診断のための組成物および方法に関する。Ｔリンパ球関連疾患としては、例えば、慢性炎症疾患および障害、例えばクローン病、反応性関節炎、例えばライム病、インスリン依存性糖尿病、器官特異的自己免疫、例えば多発性硬化症、橋本甲状腺炎およびグレーヴズ病、接触皮膚炎、乾癬、移植拒絶、移植片対宿主疾患、サルコイドーシス、アトピー状態、例えば喘息およびアレルギー、例えばアレルギー性鼻炎、胃腸アレルギー、例えば食物性アレルギー、好酸球増加症、結膜炎、糸球体腎炎、ある種の病原体感受性、例えば蠕虫（例、リーシュマニア症）およびある種のウイルス感染症、例えばＨＩＶ、および細菌感染症、例えば結核およびらい腫らいなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。例えば、Ｔヘルパー（ＴＨ）細胞およびＴＨ細胞サブ集団（ＴＨ０、ＴＨ１およびＴＨ２細胞サブ集団などが挙げられるが、これらに限定されるものではない）の内および中で不差的に発現される遺伝子が同定されている。また、それらの遺伝子産物が、ＴＨ細胞およびＴＨ細胞サブ集団の分化、維持およびエフェクター機能に関与する遺伝子産物と相互作用する能力により、遺伝子が同定されている。同定された遺伝子は、診断的にまたは治療的介入の標的として使用することができる。この点で、本発明は、免疫疾患、特にＴＨ細胞サブ集団関連疾患の治療剤としての化合物の同定方法およびその治療的使用方法を提供する。さらに、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患の診断的評価および予後のための方法、そのような状態の素因を示す対象の同定方法、そのような疾患の治療のために臨床的評価を受けている患者のモニター方法、および臨床試験で用いる化合物の効力のモニター方法を提供する。２．発明の背景２つの異なる型のＴリンパ球、すなわちＣＤ８⁺細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）およびＣＤ４⁺ヘルパーＴリンパ球（ＴＨ細胞）が認められている。ＣＴＬは、表面の外来抗原を表現する細胞を認識し殺す。ＣＴＬ前駆体はＴ細胞受容体を表現し、このＴ細胞受容体は、他の細胞表面上の外来タンパク質由来のプロセシングされたペプチドを、クラスＩＭＨＣ分子と協力して認識する。この認識過程は、前駆体ＣＴＬの活性化、成熟および増殖を誘発し、外来性と認識される抗原を提示する細胞を破壊しうるＣＴＬクローンを与える。ＴＨ細胞は、体液性および細胞性の両形態のエフェクター免疫応答に関与している。体液性（または抗体）免疫応答では、ＴＨ細胞との相互作用を介してＢリンパ球により抗体が産生される。特に、細胞外抗原が抗原提示細胞（ＡＰＣ）によりエンドサイトーシスされ、プロセシングされ、クラスII主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子と優先的に結合してＣＤ４^-クラスIIＭＨＣ拘束性ＴＨ細胞に提示される。これらのＴＨ細胞は、今度は、Ｂリンパ球を活性化し、抗体産生を引き起こす。細胞媒介性または細胞性免疫応答は、細胞内位置に生息する微生物を中和するように機能する。ウイルス抗原などの外来抗原は、感染細胞内で合成され、クラスＩＭＨＣ分子と結合してそのような細胞表面上に提示される。そしてこれが、ＣＤ８⁺クラスＩＭＨＣ拘束性ＣＴＬの刺激につながる。結核およびらいを引き起こすマイコバクテリアなどのいくつかの外的病原因子は、マクロファージに取り込まれ、タンパク質分解酵素および他の毒性物質を含有する液胞中でプロセシングされる。これらのマクロファージ成分は、ほとんどの微生物を殺し消化する能力を有するが、マイコバクテリアなどの外的病原因子は生き残り増殖する。しかし、その外的病原因子の抗原はマクロファージによりプロセシングされ、クラスIIＭＨＣ分子と優先的に結合してＣＤ４⁺クラスIIＭＨＣ拘束性ＴＨ細胞に提示され、これが刺激されてインターフェロンγを分泌し、今度はこれがマクロファージを活性化する。そのような活性化は、その細胞が示す殺菌能を増強する。ＴＨ細胞は、ＴＨ１およびＴＨ２細胞サブ集団と称される少なくとも２つの異なるサブ集団よりなる。ＴＨ１およびＴＨ２サブタイプは、非常に分極化したＴＨ細胞集団を表すことが、証拠から示唆されている。そのようなサブ集団は、最初はマウス系で発見されたが（Mosmann，T.R.およびCoffman，R.L.，1989，Ann. Rev．Immunol．7:145中で論評されている）、ＴＨ１様およびＴＨ２様サブ集団の存在はヒトにおいても確認されている（Del Prete，A.F.ら，1991，J．Clin． Invest.88:346; Wiernenga，E.A.ら，1990，J．Imm．144:4651; Yamamura，M．ら，1991，Science 254:277; Robinson，D.ら，1993，J．Allergy Clin．Imm．9 2 :313）。ＴＨ１様およびＴＨ２様細胞は、最も著しく分極化したＴＨ細胞サブ集団を表しうるが、ＴＨ０細胞（Firestein，G.S.ら，1989，J．Imm．143:518）などの他のＴＨ細胞サブ集団は、ＴＨ１およびＴＨ２細胞サブ集団の特徴を有するＴＨ細胞を表す。ＴＨ１様およびＴＨ２様細胞は、免疫系の異なるエフェクター機能の一部として機能するらしい（Mosmann，T.R.およびCoffmann，R.L.，1989，Ann．Rev．Imm ．7:145）。特に、ＴＨ１様細胞は、細胞性免疫の発生を方向づけ、食細胞媒介性宿主防御を誘導し、遅延型過敏症に関連している。したがって、細胞内微生物による感染症は、ＴＨ型応答を誘導する傾向がある。ＴＨ２細胞は、体液性免疫応答を駆動し、これは、例えばある種の蠕虫寄生生物に対する防御と関連しており、抗体およびアレルギー応答に関与している。駆動される免疫エフェクター応答がＴＨ細胞型に応じて異なりうるのは、特定のＴＨ細胞サブ集団内で発現されるサイトカインの独占的な組み合わせのためであることが注目されている。例えば、ＴＨ１細胞はインターロイキン２（ＩＬ− ２）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）およびリンホトキシンを分泌し、一方、ＴＨ２細胞はインターロイキン４（ＩＬ−４）、インターロイキン５（ＩＬ− ５）およびインターロイキン１０（ＩＬ−１０）を分泌することが知られている。ＴＨ１およびＴＨ２サブ集団は、共通のナイーブ前駆体（ＴＨＰと称される）から生じると考えられている。例えば、単一のトランスジェニックＴ細胞受容体を発現するマウスからのナイーブＣＤ４⁺細胞は、ＴＨ１またはＴＨ２のいずれかの細胞型へ発生するよう誘導されうる。関与する抗原の性質および量、抗原提示細胞の型、存在するホルモンおよびサイトカイン分子の型などの抗原刺激の条件はすべて、おそらくその存在するサイトカインと関係がある決定的な役割と共に、ＴＨ１対ＴＨ２分化パターンの決定因子を代表するようである。そのような一連の可能な決定因子が複雑であるため、ＴＨ１またはＴＨ２分化を駆動するのに重要な正確な因子の完全な説明は、現在のところ、ほとんど知られていない。さらに、最近、ＣＤ４⁺ＴＨ細胞に加えて、ＣＤ８⁺ＣＴＬも、ある条件下で、ＴＨ１様またはＴＨ２様サイトカインプロフィールを示すことが注目されている（Seder，R.A.ら，1995，J．Exp．Med.181:5-7; Manetti，R．ら，1994，J．Exp ．Med.180:2407-2411; Maggi，E．ら，1994，J．Exp．Med.180:489-495）。そのようなＣＤ８⁺ＴＨ様細胞の正確な機能的役割は現在のところ知られていないが、これらの細胞サブ集団は、ウイルス、細胞内寄生生物などの感染性因子に対する免疫応答と大きな関連性を有しているらしい。ＴＨ１およびＴＨ２サブ集団が増すと、該細胞型は、それぞれに特有のサイトカインの作用により互いに負に調節する傾向にある。例えば、ＴＨ１産生ＩＮＦ −γはＴＨ２細胞を負に調節し、一方、ＴＨ２産生ＩＬ−１０はＴＨ１細胞を負に調節する。さらに、ＴＨ１およびＴＨ２が産生したサイトカインは、互いのエフェクター機能と拮抗する（Mosmann，T.R.およびMoore，1991，Immunol．Today 12:49）。感染過程の制御や消散ができないのは、免疫応答が不十分というよりはむしろ不適当なことによる場合が多く、それにより種々の異なる免疫学的疾患が生じうる。そのような疾患としては、例えば、アトピー状態（すなわち、ＩｇＥ媒介性アレルギー状態）、例えば喘息、アレルギー、例えばアレルギー性鼻炎、皮膚炎、例えば乾癬、病原体感受性、慢性炎症疾患、器官特異的自己免疫、移植拒絶および移植片対宿主疾患などが挙げられる。例えば、不治癒形態のヒトおよびマウスリーシュマニア症は、強力だが逆効果のＴＨ２様支配性免疫応答により生じる。らい腫らいも、優勢ではあるが不適当なＴＨ２様応答を特徴づけているらしい。もう１つの具体例としてはＨＩＶ感染が考えられる。この場合、ＴＨ１様細胞と他のＴＨ細胞サブ集団の比率の低下が、疾患症状への進行に重要な役割を果たしうると示唆されている。さらに、少なくともin vitroでは、ＴＨ２様クローンが、ＴＨ１様クローンより、ＨＩＶウイルス複製の効率的な支持体であるらしいことが注目されている。さらに、多数の病原性微生物に対するＴＨ１媒介性炎症応答は有益であるが、自己抗原に対するそのような応答は通常は有害である。ＴＨ１様応答の優先的活性化が、多発性硬化症およびインスリン依存性糖尿病のようなヒト炎症性自己免疫疾患の病因の中心であると示唆されている。例えば、ＴＨ１型のサイトカインは、多発性硬化症の患者の脳脊髄液、インスリン依存性糖尿病患者の膵臓、橋本甲状腺炎患者の甲状腺、クローン病患者の腸で優勢であり、このことは、そのような患者は、そのような疾患の原因病理に関与する抗原に対して、ＴＨ２様でなくＴＨ１様の応答を上昇させていることを示唆するものである。したがって、診断的および治療的な理由による主な目的は、特定のＴＨ細胞サブ集団のメンバーの同定、単離および／または標的化であろう。かかる目的を達成するためには、そのようなＴＨ細胞サブ集団の内および／または中で不差的に発現される遺伝子を同定することが必要となる。現在までの研究は、限られた数の不差的な公知のサイトカインおよびサイトカイン受容体のＴＨ細胞集団における発現に集中している。しかしながら、サイトカインは、不差的ＴＨ細胞サブ集団に加え、細胞型に対しても効果を奏する。すなわち、種々の多面発現性効果を示すのである。したがって、ＴＨ細胞サブ集団不差的な効果を有する（例えば、分泌サイトカインと異なり、ＴＨ細胞サブ集団不差的である）ＴＨ細胞サブ集団の信頼しうるマーカー（例、遺伝子配列）を同定することが有益と考えられる。３．発明の概要本発明は、免疫疾患、特にＴヘルパー（ＴＨ）細胞およびＴＨ細胞様関連疾患の治療のための方法および組成物に関する。まず第１に、ＴＨ細胞およびＴＨ細胞サブ集団の内および中で不差的に発現される遺伝子を同定し記載する。第２に、ＴＨ細胞亜関連疾患におけるＴＨ細胞サブ集団内で不差的に発現される遺伝子を同定し記載する。該同定遺伝子の発現および／または該同定遺伝子産物の活性のモジュレーションを治療的に利用して、免疫疾患症状を改善し、ＴＨ細胞応答性、例えば抗原に対する応答性をモジュレーションすることができる。さらに、該同定遺伝子および／または遺伝子産物を使用して、そのような免疫疾患を発現している又はその素因のある個体を診断することができる。さらに、該同定遺伝子および／または遺伝子産物を使用して、ＴＨ細胞応答性、例えば抗原に対する応答性を検出することができる。本明細書中で用いる「不差的発現」は、ＴＨ細胞サブ集団遺伝子の内および中での一時的および／または細胞性発現パターンの定量的および定性的な相違を意味する。不差的に発現される遺伝子が、「フィンガープリント遺伝子」および／または「標的遺伝子」に相当することがある。本明細書中で用いる「フィンガープリント遺伝子」は、不差的に発現される遺伝子であって、その発現パターンが、免疫疾患、例えばＴＨ細胞関連疾患の予後または診断の評価の一部として利用されうる遺伝子であるか、またはその代わりに、そのような疾患の治療に有用な化合物の同定方法で使用できる遺伝子を意味する。例えば、通常は該疾患に関連して示されるフィンガープリント遺伝子発現に対する該化合物の効果は、そのような疾患の治療剤としての該化合物の効力の評価に用いることができるし、あるいはさらに、そのような疾患の治療のために臨床的評価を受けている患者をモニターするのに用いてもよい。本明細書中で用いる「フィンガープリントパターン」は、一連の（一定の状態で存在するフィンガープリント遺伝子の２個から全部までの範囲）フィンガープリント遺伝子の発現パターンを決定する場合に生じるパターンを意味する。フィンガープリントパターンは、単一のフィンガープリント遺伝子の発現と同じ診断、予後および化合物同定方法で使用することができる。本明細書中で用いる「標的遺伝子」は、免疫疾患、例えばＴＨ細胞関連疾患に関与する不差的に発現される遺伝子を意味し、この場合、標的遺伝子発現または標的遺伝子産物活性のレベルのモジュレーションは、該免疫疾患を改善するよう作用しうる。標的遺伝子発現または標的遺伝子産物の活性をモジュレーションする化合物を、免疫疾患の治療で使用することができる。さらに、「経路遺伝子（pathway gene）」は、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患に関与する遺伝子産物と相互作用するおよび／またはＴＨ細胞サブ集団の分化およびエフェクター機能に関与する遺伝子産物と相互作用するそれらの遺伝子産物の能力により定義される。経路遺伝子は、標的遺伝子および／またはフィンガープリント遺伝子の特徴を示すこともある。本明細書中に記載する標的、フィンガープリントおよび／または経路遺伝子は、ＴＨ細胞サブ集団の内および／または中で不差的に発現されうるし、および／または、ＴＨ細胞サブ集団遺伝子産物と相互作用しうるが、該遺伝子は、追加的免疫過程で重要なメカニズムにも関与しうる。本発明は、以下のヌクレオチド、そのようなヌクレオチドを発現する宿主細胞およびそのようなヌクレオチドの発現産物を含む：（ａ）哺乳動物の不差的に発現されるおよび／または経路遺伝子の産物（ヒトおよびマウス１０、５４、５７、１０５、１０６、１６１および２００遺伝子産物を含むが、これらに限定されるものではない）をコードするヌクレオチド；（ｂ）不差的に発現されるおよび／または経路遺伝子の産物の機能的ドメインに対応するものの一部をコードするヌクレオチド、およびそのようなヌクレオチド配列にコードされるポリペプチド産物であり、受容体型遺伝子産物の場合、そのようなドメインは細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）および細胞質ドメイン（ＣＤ）を含むが、これらに限定されるものではない；（ｃ）不差的に発現されるおよび／または経路遺伝子の産物の突然変異体（そのドメインの１つの全部または一部は欠失または改変しており、受容体型遺伝子産物の場合、そのような突然変異体は、ＴＭの全部または一部が欠失している可溶性受容体、およびＣＤの全部または一部が欠失している無機能的受容体を含むが、これらに限定されるものではない）をコードするヌクレオチド；および（ｄ）不差的に発現されるおよび／または経路遺伝子の産物またはもう１つのポリペプチドに融合したそのドメインの１つを含有する融合タンパク質をコードするヌクレオチド。また本発明は、そのようなフィンガープリント、標的および経路遺伝子の産物、およびそのような遺伝子産物に対する抗体を含む。さらに、そのような遺伝子産物が寄与しうるＴＨ細胞サブ集団関連疾患の細胞や動物に基づくモデルの操作および用途も記載する。また本発明は、種々のＴＨ細胞サブ集団関連疾患の予後および診断の評価方法、およびそのような疾患の素因のある対象の同定方法に関する。さらに本発明は、免疫疾患用薬物の効力の評価方法、およびそのような疾患の治療のための臨床試験に参加している患者の進行のモニター方法を提供する。本明細書中に記載するＴＨ細胞サブ集団関連疾患には、例えばＴＨ１またはＴＨ１様関連疾患、あるいはＴＨ２またはＴＨ２様関連疾患が含まれる。ＴＨ１またはＴＨ１様関連疾患としては、例えば、慢性炎症疾患および障害、例えばクローン病、反応性関節炎、例えばライム病、インスリン依存性糖尿病、器官特異的自己免疫、例えば多発性硬化症、橋本甲状腺炎およびグレーヴズ病、接触皮膚炎、乾癬、移植拒絶、移植片対宿主疾患、サルコイドーシスなどが挙げられる。ＴＨ２またはＴＨ２様関連疾患としては、例えば、アトピー状態、例えば喘息およびアレルギー、例えばアレルギー性鼻炎、胃腸アレルギー、例えば食物性アレルギー、好酸球増加症、結膜炎、糸球体腎炎、ある種の病原体感受性、例えば蠕虫（例、リーシュマニア症）およびある種のウイルス感染症、例えばＨＩＶ、および細菌感染症、例えば結核およびらい腫らいなどが挙げられる。さらに、本明細書中に記載する方法および組成物は、ＴＨ様の細胞サブ集団遺伝子発現パターンおよび／または活性を示すＣＤ８⁺などの他の免疫細胞が関与する疾患の予後および診断の評価に使用できると意図される。さらに、本明細書中に記載する方法および組成物は、ＴＨ様の細胞サブ集団遺伝子発現パターンおよび／または活性を示すそのような免疫細胞、特にＣＤ８^-ＣＴＬが関与する疾患から生じる症状の改善に使用できると意図される。さらに本発明は、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患、および分化、維持および／またはエフェクター機能に関連する過程に関与する遺伝子の発現または遺伝子産物の活性をモジュレーションする化合物の同定方法を提供する。さらに本発明は、例えば、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患の症状または傾向を示す個体にそのようなモジュレーション性化合物を投与することを含むＴＨ細胞サブ集団関連疾患の治療方法を提供する。さらに、治療は、１以上のＴＨ細胞サブ集団の刺激または枯渇を引き起こすことがある。本明細書中で用いる「刺激」は、例えばそのようなＴＨ細胞サブ集団細胞の増殖による、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数の有効な増加を意味することがある。この用語は、例えばＴＨ細胞サブ集団不差的サイトカインパターンの発現の１細胞あたりの増加により示される、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の活性の増加も意味することがある。本明細書中で用いる「枯渇」は、例えばそのようなＴＨ細胞サブ集団細胞の増殖の減少による、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数の有効な減少を意味することがある。この用語は、例えばＴＨ細胞サブ集団不差的サイトカインパターンの発現の１細胞あたりの減少により示される、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の活性の減少も意味することがある。本発明は、ある程度は系統的な検索戦略に基づくものであり、この戦略には、ＴＨ０、ＴＨ１、ＴＨ２、ＴＨ１様およびＴＨ２様細胞を利用する実例が含まれる。この実例では、免疫系または免疫疾患の活性を模擬する系で該細胞を利用し、高感度で高処理量の遺伝子発現アッセイと組み合わせて、ＴＨ細胞サブ集団の内および／または中で不差的に発現される遺伝子を同定する。ある免疫細胞関連過程または疾患で何らかの役割を果たしていると考えられる単一の公知遺伝子産物の発現を評価するにすぎないアプローチに対して、本発明で用いる検索戦略およびアッセイは、公知であろうと新規であろうとＴＨ細胞サブ集団の内および中で不差的に発現されるすべての遺伝子の同定を可能にし、ＴＨ細胞応答におけるおよび／またはＴＨ細胞媒介性疾患におけるその一時的調節および機能の特徴づけを可能にする。この包括的アプローチおよび評価により、新規遺伝子および遺伝子産物の知見、およびＴＨ細胞媒介性免疫応答およびＴＨ細胞サブ集団関連疾患で主要な役割を果たす新規経路（例、モジュレーション経路）に関与する遺伝子および遺伝子産物（新規であろうと公知であろうと）の配置の同定が可能となる。したがって、本発明は、免疫系疾患の予後、診断、モニター、合理的なドラッグデザインおよび／または治療的介入に有用な標的の同定および特徴づけを可能にする。以下の第６〜８節に記載する実施例では、ＴＨ細胞サブ集団の内および／または中で不差的に発現される遺伝子を同定するのに本発明の検索戦略を用いて成功したことを示す。第９節では、同定遺伝子（２００遺伝子）の１つのヒト同族体のクローニングに成功したことを記載する。１０２および１０３遺伝子は、既に公知であるが、ＴＨ細胞サブ集団中で不差的に発現されることが本明細書中で示される遺伝子に相当する。特に、１０２遺伝子は、トリプシン様セリンプロテアーゼをコードするグランザイムＡまたはハヌカー（Hanukah）因子遺伝子に相当する。この遺伝子はナチュラルキラー細胞および一部のＣＤ４^-中で発現されると報告されていたが、本明細書中に記載する結果は、該遺伝子がＴＨ２細胞サブ集団内で不差的に発現されることを初めて示すものである。特に、１０２遺伝子は、ＴＨ２細胞サブ集団中では、ＴＨ１細胞サブ集団中より何倍も高いレベルで発現される。１０３遺伝子は、おそらく選択的スプライシングにより膜貫通および可溶性の両方の遺伝子産物をコードするＴ１、ＳＴ−２またはＦｉｔ−１遺伝子として公知の遺伝子に相当する。遺伝子１０３産物は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、インターロイキン１（ＩＬ−１）受容体に対して高い類似性を有する。本明細書中に記載の結果は、この遺伝子が、厳しく制御されたＴＨ２不差的態様でin vivoで発現されることを初めて示すものである。したがって、それがＴＨ２細胞サブ集団不差的マーカーおよび細胞表面タンパク質の両方の状態にあると仮定すると、遺伝子１０３産物は、免疫系疾患、特にＴＨ２細胞サブ集団関連疾患を診断および／またはモジュレーションする種々の方法で使用することができる。これらの公知遺伝子に加え、本明細書中に記載する系統的検索戦略を用いて、ＴＨ細胞サブ集団の内および／または中で不差的に発現されるいくつかの新規遺伝子を同定した。特に、これらには、１０、５４、５７、１０５、１０６、１６１および２００遺伝子が含まれる。５４、１０５、１０６およびマウス２００遺伝子は、それぞれ、ＴＨ１細胞サブ集団内で不差的に発現されることが示されている。特に、これらの遺伝子は、ＴＨ１細胞サブ集団では、ＴＨ２細胞サブ集団より何倍も高いレベルで発現される。新規５４遺伝子産物は、３７１アミノ酸のシステインプロテアーゼであり、このことは、５４遺伝子産物アミノ酸配列のアミノ酸残基約１４５〜１５６（ＣＹＳドメイン）、アミノ酸残基約２８７〜２９７（ＨＩＳドメイン）およびアミノ酸残基約３２１〜３４０（ＡＳＮドメイン）の３つのチオールプロテアーゼドメインの存在により示される。１０および５７遺伝子は、ＴＨ誘導可能遺伝子配列に相当する。すなわち、未刺激ＴＨ細胞でのそのような遺伝子の発現は検出不能であるかほとんど検出できないが、刺激されたＴＨ１および刺激されたＴＨ２の両細胞においては有意にアップレギュレーションされる。したがって、１０および５７遺伝子および／またはそれらの遺伝子産物は、非ＴＨ細胞サブ集団依存的介入プログラムの一部としての治療的処理のための新規標的となりうる。１０遺伝子産物は、３３８アミノ酸の受容体分子であり、それは、Ｇタンパク質共役受容体分子を発現する傾向がある７回膜貫通ドメイン配列モチーフを有するタンパク質のクラスに属するという点で、そのようなプログラムに特に適した標的である。したがって、１０遺伝子産物の構造から示されるとおり、それは、一般にＴ細胞応答に重要と考えられるシグナル伝達に関与すると考えられ、さらに、１０遺伝子産物のモジュレーションは、広範なＴ細胞関連疾患を有効に改善すると考えられる。特に、１０遺伝子産物は膜貫通産物であるため、その活性は、１０遺伝子発現細胞数の物理的変化または１０遺伝子産物活性の機能的レベルの変化により、特にモジュレーションされやすいといえる。例えば、１０遺伝子産物に結合する天然リガンド、天然リガンド誘導体および抗体を使用して、存在する誘導されたＴ細胞を集団中で他の細胞から物理的に分離することにより、あるいは、誘導されたＴ細胞の不差的破壊を目的としたり、そのようなＴ細胞の増殖を阻害することにより、存在する誘導されたＴ細胞の数を減少させることができる。さらに、１０遺伝子配列などの化合物または例えば可溶性１０遺伝子産物などの遺伝子産物を用いて、誘導されたＴ細胞活性のレベルを減少させ、最終的に、広範なＴ細胞関連疾患を改善することができる。例えば、可溶性遺伝子１０遺伝子産物の場合、該化合物は、１０遺伝子産物について内在性（すなわち天然の）リガンドと競合し、誘導されたＴ細胞活性のモジュレーションを起こしうる。例えばＩｇの末端を有する融合タンパク質などの可溶性融合タンパク質を含む１０遺伝子産物の細胞外ドメインまたはその一部および／または類似体の１以上を含むペプチドなどの可溶性タンパク質またはペプチドは、この目的に特に有用である。さらに、１０遺伝子産物の細胞外部分の１以上に対する抗体は、例えばリガンド結合を遮断することにより、１０遺伝子産物機能を減少させうる。さらに場合によっては、１０遺伝子産物に対する抗体は、１０遺伝子産物活性のレベルを増加させるように機能する。１０遺伝子産物は受容体の性質を有するため、受容体の機能的活性をモジュレーションし広範なＴ細胞関連疾患の改善において治療剤として作用しうる化合物の有用な同定方法が可能となる。例えば、細胞内カルシウム放出レベルを測定する機能的アッセイを用いて、１０遺伝子産物活性のアゴニストまたはアンタゴニストのいずれかとして作用する化合物を同定しうる。さらに、そのようなアッセイを使用して、天然の１０遺伝子産物リガンドを同定しうる。さらに、これらのモジュレーション性化合物はいずれも、広範なＴ細胞関連疾患の改善のための治療剤として使用することができる。最後に、１６１遺伝子は、免疫疾患関連症状の改善を目的とした治療方法のための追加的な潜在的に興味深い新規標的であることが示されている。実際、１６１遺伝子発現は、ＴＨ１、ＴＨ２およびＴＨ０細胞サブ集団に加えて、さらにもう１つのＴＨ細胞サブ集団の存在の指標となる可能性がある。ＴＨ細胞サブ集団不差的マーカーの同定は、いくつかの免疫疾患、特にＴＨ細胞サブ集団関連疾患の治療に用いることができる。例えば、アレルギーおよび／または喘息などのアトピー状態に伴う症状などの（これらに限定されるものではない）不適当なＩｇＥ免疫応答を伴う状態を改善させるのに、ＴＨ２サブ集団のマーカーを用いることができる。ＩｇＥ型抗体は、刺激されたＢ細胞により産生されるが、該細胞は、ＴＨ２細胞サブ集団により産生されるＩＬ−４を少なくともある程度は必要とする。したがって、例えばＴＨ２細胞の活性または数を減少させることにより分泌ＩＬ−４の有効濃度を減少させる治療は、循環ＩｇＥレベルの減少を引き起こし、今度は、アトピー状態の改善または除去につながる。したがって、本明細書中に記載のＴＨ２不差的遺伝子産物はいずれも、そのような状態の治療のためのＴＨ２細胞サブ集団細胞の数および／または活性を減少または枯渇させるための標的として使用することができる。１０３遺伝子産物の１つは膜結合性ＴＨ２細胞サブ集団分子であるため、１０３遺伝子は、この目的に特に適している。したがって、この１０３遺伝子産物に結合する天然リガンド、天然リガンド誘導体および抗体を用いて、存在するＴＨ２細胞を集団中で他の細胞から物理的に分離することにより、あるいは、ＴＨ２細胞の不差的破壊を目的としたり、そのようなＴＨ２細胞の増殖を阻害することにより、存在するＴＨ２細胞の数を減少させることができる。さらに、１０３遺伝子配列または遺伝子産物などの化合物を用いて、ＴＨ２細胞活性のレベルを減少させ、ＩＬ−４産生の減少を起こし、最終的に、ＩｇＥ関連疾患を改善することができる。例えば、該化合物は、１０３遺伝子産物について内在性（すなわち天然の）リガンドと競合しうる。リガンド結合１０３遺伝子膜貫通タンパク質の量が減少すると、ＴＨ２細胞活性がモジュレーションされる。Ｉｇの末端を有する融合タンパク質などの可溶性融合タンパク質を含む１０３遺伝子産物の細胞外ドメインまたはその一部および／または類似体を含むペプチドなどの可溶性タンパク質またはペプチドは、この目的に特に有用である。ＴＨ１細胞サブ集団関連疾患の治療において、ＴＨ細胞サブ集団不差的マーカーの同定を追加的に利用することができる。例えば、慢性炎症性および自己免疫疾患など（これらに限定されるものではない）の不適当な細胞性免疫応答を伴う状態を改善するのに、ＴＨ１サブ集団に関するマーカーを用いることができる。さらに、そのような遺伝子配列を過剰発現または誤発現（misexpressing）するトランスジェニック動物および／またはそのような配列の発現をほとんどまたは全く示さないトランスジェニック「ノックアウト」動物を、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患の動物モデルとして用いることができる。以下の第１１節に示す実施例では、２００および１０３トランスジェニック動物の生産を記載する。したがって、ＴＨ１細胞サブ集団不差的遺伝子配列および／または遺伝子産物、例えば５４（これは、３７１アミノ酸のシステインプロテアーゼ遺伝子産物をコードする）、１０５、１０６および２００（そのマウス同族体は２８０アミノ酸の膜貫通遺伝子産物をコードし、そのヒト同族体は３０１アミノ酸の膜貫通遺伝子産物をコードし、どちらもＩｇスーパーファミリーのメンバーである）遺伝子は、そのようなＴＨ１細胞サブ集団関連疾患の改善に適しうる。２００遺伝子産物は、ＴＨ１細胞サブ集団に制限されるだけでなく、Ｉｇスーパーファミリー２００遺伝子産物はさらに膜結合性である点で、２００遺伝子産物はそのような目的に特に適しうる。したがって、２００遺伝子産物に結合する天然リガンド、天然リガンド誘導体および抗体を使用して、存在するＴＨ１細胞を集団中で他の細胞から物理的に分離することにより、あるいは、ＴＨ１細胞の不差的破壊を目的としたり、そのようなＴＨ１細胞の増殖を阻害することにより、存在するＴＨ１細胞の数を減少させることができる。さらに、２００遺伝子配列などの化合物または可溶性２００遺伝子産物などの遺伝子産物を用いて、ＴＨ２細胞活性のレベルを減少させて、ＴＨ１細胞サブ集団関連疾患を改善することができる。例えば、該化合物は、２００遺伝子産物について内在性（すなわち天然の）リガンドと競合しうる。リガンド結合２００遺伝子膜貫通タンパク質の量が減少すると、ＴＨ２細胞活性がモジュレーションされる。例えば、Ｉｇの末端を有する融合タンパク質などの可溶性融合タンパク質を含む２００遺伝子産物の細胞外ドメインまたはその一部（例えば、Ｉｇ部分）および／または類似体を含むペプチドなどの可溶性タンパク質またはペプチドは、この目的に特に有用である。以下の第１０節に示す実施例では、２００遺伝子産物および１０３遺伝子産物Ｉｇ融合構築物およびタンパク質の構築および発現について記載する。３.１定義本明細書中で用いる「ＴＨ細胞サブ集団」なる語は、他のＴＨ細胞の発現パターンおよび活性と異なる遺伝子発現パターン（例、サイトカインおよび／または受容体または他の細胞表面分子の異なるパターン）および活性を示すＴＨ細胞の集団を意味する。そのようなＴＨ細胞サブ集団には、ＴＨ０、ＴＨ１およびＴＨ２細胞サブ集団が含まれるが、これらに限定されるものではない。本明細書中では、これらを代表的なＴＨ細胞サブ集団として頻繁に使用するが、これは明瞭化および例示のためであり、限定のためではない。本明細書中で用いる「ＴＨ様細胞サブ集団」（例、「ＴＨ１様」または「ＴＨ２様」）なる語は、ＴＨ細胞サブ集団についての前記の性質を有するＣＤ４⁺ＴＨ細胞の集団だけでなく、ＴＨ様サイトカイン発現パターンを示すＣＤ８⁺ＣＴＬを含むＣＤ４^-細胞をも意味すると意図される。本明細書中で用いる「不差的発現」は、遺伝子の一時的および／または細胞性発現パターンにおける定量的および定性的の両方の相違を意味する。本明細書中で用いる「標的遺伝子」は、免疫疾患および／またはＴＨ細胞サブ集団の分化、維持および／またはエフェクター機能に関与する不差的に発現される遺伝子を意味し、この場合、標的遺伝子発現または標的遺伝子産物の存在および／または活性のレベルのモジュレーションが、例えば、１以上のＴＨ細胞サブ集団の不差的枯渇または抑制、またはその代わりに刺激または増加を起こすよう機能して、今度は、免疫疾患、例えばＴＨ細胞サブ集団関連疾患の症状を改善する。標的遺伝子は、フィンガープリントおよび／または経路遺伝子の特徴を示すこともある。本明細書中で用いる「フィンガープリント遺伝子」は、不差的に発現される遺伝子であって、そのｍＲＮＡ発現パターン、タンパク質レベルおよび／または活性が、免疫疾患、例えばＴＨ細胞サブ集団関連疾患の評価における予後または診断の一部として使用できる遺伝子であるか、あるいは、例えば、通常は該疾患に関連して示されるフィンガープリント遺伝子発現に対する該化合物の効果を評価することにより、そのような疾患の治療に有用な化合物を同定する方法で使用できる遺伝子を意味する。フィンガープリント遺伝子は、標的および／または経路遺伝子の特徴を示すこともある。本明細書中で用いる「フィンガープリントパターン」は、一連の（一定の状態で存在するフィンガープリント遺伝子の２個から全部までの範囲）フィンガープリント遺伝子のｍＲＮＡ発現パターン、タンパク質レベルおよび／または活性を決定する場合に生じるパターンを意味する。フィンガープリントパターンは、単一のフィンガープリント遺伝子の発現に関して前記したのと同じ方法の一部で使用することができる。本明細書中で用いる「経路遺伝子（pathway gene）」は、免疫疾患、例えばＴＨ細胞サブ集団関連疾患に関与する遺伝子産物と相互作用するおよび／またはＴＨ細胞サブ集団の分化およびエフェクター機能に関与する遺伝子産物と相互作用する能力を示す産物を与える遺伝子を意味する。経路遺伝子は、標的遺伝子および／またはフィンガープリント遺伝子の特徴を示すこともある。本明細書中で用いる「負のモジュレーション」は、モジュレーション性処理を行わなかった場合の標的遺伝子産物のレベルおよび／または活性と比べて、標的遺伝子産物のレベルおよび／または活性が減少することを意味する。あるいは、本明細書中で用いるこの用語は、モジュレーション性処理を行わなかった場合のＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数および／または活性と比べて、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数および／または活性が減少することを意味する。本明細書中で用いる「正のモジュレーション」は、モジュレーション性処理を行わなかった場合の標的遺伝子産物のレベルおよび／または活性と比べて、標的遺伝子産物のレベルおよび／または活性が増加することを意味する。あるいは、本明細書中で用いるこの用語は、モジュレーション性処理を行わなかった場合のＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数および／または活性と比べて、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数および／または活性が増加することを意味する。４．図面の説明図１．マウスＴＨ細胞サブセットからのＲＮＡのディファレンシャルディスプレイ分析。Ｔ細胞受容体トランスジェニックマウス由来の脾Ｔ細胞を、ＴＨ１またはＴＨ２サブタイプの分極化集団になるようin vitroで分化させた。レーン１：三次刺激後２４時間のＴＨ２集団；レーン２：三次刺激後２４時間のＴＨ１集団；レーン３：二次刺激後１週間のＴＨ２集団；レーン４：二次刺激後１週間のＴＨ１集団；レーン５：in vitro刺激のために抗原提示細胞（ＡＰＣ）として使用したＴＡ３細胞系（このサンプルは、陰性対照として使用した）。レーンの各組は、２通り（ａおよびｂ）よりなり、ｃＤＮＡは同じＲＮＡ起源から別個に生成させた。矢印は、不差的に発現された配列を示し、本明細書中ではこれをバンド１０２と称する。さらに、本明細書中では、バンド１０２に対応する遺伝子を１０２遺伝子と称する。すべてのレーンは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）産物であり、このうち、Ｔ₁₁ＧＧは３’オリゴヌクレオチドとして使用し、ランダム１０マーオリゴヌクレオチド（Oligo#4，OP-Dキット，Operon、Inc.）は５’オリゴヌクレオチドとして使用した。図２．バンド１０２のクローン１０２．１のヌクレオチド配列（配列番号１）。本明細書中では、バンド１０２に対応する遺伝子を１０２遺伝子と称する。図３．初代ＴＨ１／ＴＨ２培養およびマウス組織内の１０２遺伝子の不差的調節を確認するノーザンブロット分析。ＲＮＡは、in vitroで刺激されたＴ細胞受容体トランスジェニック株由来のＴ細胞系から収穫した。レーン１、ＴＨ２、二次刺激後４０時間；レーン２、ＴＨ１、二次刺激後４０時間；レーン３、ＴＨ２集団、三次刺激後２４時間；レーン４、ＴＨ１、三次刺激後２４時間；レーン５、マウス胸腺；レーン６、マウス脾臓。１レーン当たり５マイクログラムの全ＲＮＡを使用した。クローン化バンド１０２配列をプローブとして使用した。図４Ａ．バンド１０３のヌクレオチド配列クローン１０３．１（配列番号２）。本明細書中では、バンド１０３に対応する遺伝子を遺伝子１０３と称する。図４Ｂ．１０３遺伝子産物。この図は、バンド１０３、１０３遺伝子（ＳＴ− ２、Ｔ１およびＦｉｔ−１としても公知である）産物およびＩＬ−１受容体ポリペプチドのそれぞれの構造の間の関係を示す。該タンパク質の細胞外、膜貫通および細胞質ドメインを、これらのドメインの境界を表示するアミノ酸残基と共に示す（Yanagisawaら，1993，FEBS318:83-87から改作）。図５．マウスＴＨ細胞の分極化集団における１０３遺伝子発現の定量的ＲＴ− ＰＣＲ分析。抗原による三次刺激の２４時間後の培養Ｔ細胞集団から、ＲＮＡサンプルを収穫した。ｃＤＮＡサンプルをＰＣＲ増幅し、それらの反応の産物を、１％アガロースゲル上で電気泳動し、エチジウムブロミド染色により可視化した。１０３遺伝子発現を上部パネルに示す。γ−アクチンのデータ（下部パネル）は、サンプルの質の相違に関する対照として含めた。各レーン上の数字は、各ｃＤＮＡの希釈率を示す。１０３遺伝子およびγ−アクチンの両方の増幅には、同じｃＤＮＡを使用した。図６．代表的なマウスＴＨ細胞系（ＴＨ２：ＣＤＣ２５，Ｄ１０．Ｇ４，ＤＡＸ；ＴＨ１：ＡＥ７.Ａ，Dorris，Ｄ１.１）における１０３遺伝子発現のノーザンブロット分析。クローンは、未刺激（−）またはプレート結合抗ＣＤ３抗体による６時間の刺激（＋）のいずれかであった。１レーンあたり１０マイクログラムの全ＲＮＡをローディングした。１８ｓおよび２８ｓリボソームＲＮＡの位置を参照マーカーとして示す。図７．ＴＨ細胞クローンおよびマウス組織における１０３遺伝子発現のノーザンブロット分析。レーン１：ＤＡＸ細胞、未刺激；レーン２、ＡＥ７細胞、刺激；レーン３、ＡＥ７細胞、未刺激；レーン４、Ｄ１０.Ｇ４細胞、刺激；レーン５、Ｄ１０.Ｇ４細胞、未刺激；レーン６、脳；レーン７、心臓；レーン８、肺；レーン９、脾臓；レーン１０、肝臓。クローンは、プレート結合抗ＣＤ３抗体で６時間刺激した。各細胞系および各組織には、それぞれ、７.５および１０マイクログラムの全ＲＮＡを使用した。ａ、ｂおよびｃの矢印は、完全長（ａ）およびトランケート（ｂ、ｃ）形態の１０３遺伝子をコードするＲＮＡを意味する。１８ｓおよび２８ｓリボソームＲＮＡマーカーの位置を示す。図８．１０３遺伝子ｍＲＮＡのＲＮアーゼプロテクション分析であり、マウスＴＨ細胞クローンにおける１０３遺伝子発現の調節を示す。レーン２〜６：β− アクチンプロテクション；レーン９〜１３：１０３遺伝子プロテクション；レーン１および８：マーカー；レーン２および９：未刺激のＴＨ１クローン；レーン３および１０：刺激されたＴＨ１クローン；クローン４および１１：未刺激のＴＨ２クローン；レーン５および１２：刺激されたＴＨ２クローン；レーン６および１３：完全にＲＮアーゼＡ消化された未保護プローブ；レーン７および１４：プローブ単独、添加ＲＮアーゼの不存在下。予想断片サイズ： β−アクチン保護プローブ：２５０ヌクレオチド； β−アクチン完全長プローブ：３３０ヌクレオチド；１０３遺伝子長形態断片：２５７ヌクレオチド；１０３遺伝子短形態断片：１７３ヌクレオチド; １０３遺伝子完全長プローブ：３２９ヌクレオチド。図９Ａ〜９Ｄ．完全長１０遺伝子ヌクレオチド配列（配列番号３）を最上列に示し、１０遺伝子産物の推定アミノ酸配列（配列番号９）を最下列に示す。該ヌクレオチド配列の下線を付した部分は、バンド１０ヌクレオチド配列に相当する。図１０Ａ〜１０Ｆに示すデータは、バンド１０ヌクレオチド配列によりコードされる１０遺伝子産物の一部を用いて得た。図１０Ａ−１０Ｆ。１０遺伝子の親水性データを示し、これは１０遺伝子由来のアミノ酸配列から７つの膜貫通ドメイン構造モチーフの存在が予測できることを示唆する。１０Ａ）タンパク質の７つの膜貫通ドメイン構造モチーフを示す、血小板活性化因子受容体の親水性プロット；１０Ｂ）タンパク質の推定の７つの膜貫通ドメイン構造モチーフの部分を示す、１０遺伝子の親水性プロット；１０Ｃ）タンパク質の７つの膜貫通ドメイン構造モチーフの一部を示す、血小板活性化因子受容体の親水性プロット。図１１。１０遺伝子配列を含む遺伝子座の染色体地図。マウス染色体１２の一部の地図を示す。染色体の左の数はセンチモルガンを示し；Ｄ１２ＮＤＳ１１、Ｄ１２ＭＩＴ４及びＤ１２ＭＩＴ８はマウスミクロサテライトマーカーを示し；ＴＨ１０は１０遺伝子を表す。図１２。バンド５７（配列番号４）のクローン７のヌクレオチド配列。バンド５７に対応する遺伝子を本明細書では５７遺伝子という。図１３。バンド１０５（配列番号５）のコンセンサスヌクレオチド配列。”Ｎ ”は”いかなるヌクレオチド”でもよいことを意味する。バンド１０５に対応する遺伝子を本明細書では１０５遺伝子という。図１４。バンド１０６（配列番号６）のクローンＨから得られたヌクレオチド配列。”Ｎ”は”いかなるヌクレオチド”でもよいことを意味する。バンド１０６に対応する遺伝子を本明細書では１０６遺伝子という。図１５。バンド１６１（配列番号７）のクローンＧから得られたヌクレオチド配列。バンド１６１に対応する遺伝子を本明細書では１６１遺伝子という。図１６。１６１クローンＧの複数の配列をＢＬＡＳＴ検索で同定したアミノ酸配列と並べたもの。星印は同一部位を示し、点は保存部位を示す。図１７Ａ−１７Ｄ。全長ネズミ２００遺伝子のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列。下段：ネズミ２００遺伝子のヌクレオチド配列（配列番号８）；上段：ネズミ２００遺伝子産物由来のアミノ酸配列（配列番号１０）。図１８。代表的ネズミＴＨ細胞株（ＴＨ２：ＣＤＣ２５、Ｄ１０．Ｇ４、ＤＡＸ；ＴＨ１：ＡＥ７．Ａ、Ｄｏｒｒｉｓ、Ｄ１．１）中におけるマウス２００遺伝子発現のノーザンブロット分析。クローンをプレートに結合した抗−ＣＤ３抗体で６時間刺激しなかった（−）か、あるいは刺激した（＋）。ＲＮＡマーカーの位置をキロダルトンで参考として示した。矢印は２００遺伝子のｍＲＮＡの位置を示す。図１９。抗ＣＤ３抗体で刺激した（＋）か、あるいは刺激しなかった（−）ＴＨ１（Ｄ１．１、Ｄｏｒｒｉｓ、ＡＥ７）細胞株及びＴＨ２（Ｄ１０．Ｇ４、ＤＡＸ、ＣＤＣ２５）細胞株中における５４遺伝子発現のノーザンブロット分析。１レーン当たり１５μｇの全ＲＮＡを装填した。細胞は第８．１節で記載するように、抗−ＣＤ３抗体で６及び７時間刺激した。ノーザンブロットは、全バンド５４ヌクレオチド配列から作製したプローブでハイブリダイズした。図２０。遺伝子５４のノーザンブロット分析の経時的研究。図に示す種々の時間刺激するか、あるいは刺激しなかったＴＨ１細胞株ＡＥ７細胞由来のＲＮＡを単離した。次に、予め抗−ＣＤ３抗体で２時間刺激しなかったか、あるいは刺激した細胞から、２つのＴＨ２細胞株（ＤＡＸ、ＣＤＣ２５）由来のＲＮＡを単離した。１レーン当たり１５μｇの全ＲＮＡを装填した。バンド５４ＤＮＡプローブをハイブリダイゼーションに用いた。図２１。各種組織における５４遺伝子発現のノーザンブロット分析。１レーン当たり１５μｇの全ＲＮＡを装填した。バンド５４ＤＮＡプローブをハイブリダイゼーションに用いた。図２２Ａ−２２Ｃ。全長５４遺伝子のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列。下段：５４遺伝子のヌクレオチド配列（配列番号１１）。上段：５４遺伝子由来のアミノ酸配列（配列番号１２）。図２３Ａ−２３Ｃ。５４遺伝子産物はタンパク質のシステインプロテアーゼクラスと高度の相同性をもつ。５４遺伝子産物アミノ酸をその予測されるプレプロ配列及び同定された成熟システインプロテアーゼポリペプチド配列とともに示す。個々の箱で囲んだアミノ酸残基はシステインプロテアーゼ活性部位内にあると思われる残基を表し、また箱で囲んだアミノ酸残基の連なりはシステインプロテアーゼ分子のプレプロ酵素部分内に通常見られるアミノ酸残基の連なりと相同な領域を表す。この連なり内の丸で囲んだアミノ酸残基は保存性アミノ酸を表す。矢印は推定の翻訳後の開裂部位を示す。図２４Ａ−２４Ｄ。全長ヒト２００遺伝子のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列。下段：ヒト２００遺伝子のヌクレオチド配列（配列番号２３）；上段：ヒト２００遺伝子産物由来のアミノ酸配列（配列番号２４）。５．発明の詳細な説明喘息やアレルギー性鼻炎を含むアレルギーなどのアトピー症状、乾癬、病原体感染効果、慢性炎症疾患、器官特異的自己免疫、移植片拒絶及び移植片対宿主疾患を含む（ただし、これに限定されない）免疫疾患、特にＴＨ細胞サブ集団関連の疾患のための治療用及び診断用の方法及び組成物を記載する。本発明は、ＴＨ −媒介性の免疫応答及び／又はＴＨ−サブ集団関連の疾患と生理学的に関連するモデルにおいて、ＴＨ細胞サブ集団内及び／又は間で特異的に発現される全ての遺伝子の発現と役割を評価することに部分的には基づいている。これによって、診断及び治療の両方で有用な疾患経路を同定することができる。正常及び／又は疾患状態にあるＴＨ細胞及びＴＨ細胞サブ集団内及び間で特異的に発現され、及び／又はこのような成熟サブ集団へと分化する途中で特異的に発現される”標的遺伝子”及び／又は”フィンガープリント遺伝子”と呼ばれる遺伝子について第５．４節で記載する。さらに、その遺伝子産物がＴＨ細胞サブ集団関連の疾患に関与する遺伝子産物、及び／又は該サブ集団の分化及びエフェクター機能に関与する遺伝子産物と相互作用する能力を示す”経路（pathway）遺伝子”と呼ばれる遺伝子について第５．４節で記載する。経路遺伝子はさらにフィンガープリント及び／又は標的遺伝子の特徴をもつことができる。このようなフィンガープリント、標的、及び経路遺伝子の同定法も第５．１節及び５．２節に記載する。また、このようなフィンガープリント、標的、及び経路遺伝子の遺伝子産物を第５．５節に記載し、このような遺伝子産物に対する抗体を第５．６節に記載し、さらにＴＨ細胞サブ集団の分化及びこのような遺伝子産物が貢献しうるＴＨ細胞サブ集団関連の疾患を第５．７節に記載する。このような疾患にかかりやすい素地を示す個体を同定するために、また臨床試験に使用される化合物の有効性をモニターするために、種々のＴＨ細胞サブ集団関連の疾患を予防的及び診断的に評価する方法を第５．１１節に記載する。ＴＨ細胞サブ集団関連の疾患に関与し、またＴＨ細胞サブ集団の分化及びエフェクター機能に関与する遺伝子の発現又は遺伝子産物の活性を調節する化合物を同定する方法を第５．８節に記載し、また免疫疾患を治療する方法を第５．９節に記載する。５．１．特異的に発現される遺伝子の同定この節では、免疫疾患、例えばＴＨ細胞サブ集団関連の疾患に関与し、及び／又は該サブ集団の分化、維持及びエフェクター機能に関与する、特異的に発現される遺伝子を同定する方法を記載する。このような遺伝子が特異的に発現されるには種々のレベルで起こりうる。例えば、未分化のＴＨ細胞と既に分化したか、あるいは分化中のＴＨ細胞（１つのＴＨ細胞サブ集団対別のＴＨ細胞サブ集団内である必要はないが）との間で、ナイーブＴＨ細胞と記憶ＴＨ細胞との間で、１つのＴＨサブ集団と別のＴＨサブ集団との間で（例えば、ＴＨ１とＴＨ２サブ集団で）、一定のＴＨ細胞サブ集団の成熟で刺激された細胞と成熟で刺激されていない細胞との間で、又は正常、又は非−ＴＨ細胞サブ集団関連の疾患状態と比較して、ＴＨ細胞サブ集団関連の疾患状態において、特異的に発現されることが起こりうる。このような特異的に発現される遺伝子は標的及び／又はフィンガープリント遺伝子となりうる。このような特異的に発現される遺伝子の同定法を第５．１．１節に記載する。このような特異的に発現される遺伝子をさらに性状決定する方法、ならびにこれを標的及び／又はフィンガープリント遺伝子として分類する方法を第５．３節に記載する。本明細書で使用する”特異的発現”とは、遺伝子の一時的な発現パターン及び／又は細胞タイプによる発現パターンにおける、量的及び質的示差の両方をいう。従って、特異的に発現される遺伝子は、例えば、正常状態とＴＨ細胞サブ集団関連の疾患状態との間で、１つのＴＨ細胞サブ集団と別のＴＨ細胞サブ集団（例えばＴＨ１とＴＨ２）との間で、抗原刺激されたＴＨ細胞セットと刺激されていないＴＨ細胞セットとの間で、あるいは未分化ＴＨ細胞と既に分化したか又は分化中のＴＨ細胞との間で、発現が活性化されたり又は完全に不活性化されることがある。このような質的に制御された遺伝子は、このような１つの状態又は細胞タイプ中で標準法によって検出できるが、両方では検出できない、発現パターンをこのような状態又は細胞タイプ中で示す。あるいは、特異的に発現される遺伝子は別の発現レベルを示すことがあり、即ち、正常状態とＴＨ細胞サブ集団関連の疾患状態との間で、抗原刺激されたＴＨ細胞セットと刺激されていないＴＨ細胞セットとの間で、１つのＴＨ細胞サブ集団と別のＴＨ細胞サブ集団との間で、あるいは未分化ＴＨ細胞と既に分化したか又は分化中のＴＨ細胞との間で、量的に増加又は減少して発現する。分化は多段階の事象であるから、特異的に発現される遺伝子は中間の分化段階のいずれで同定することもできる。特異的に発現される程度は、標準の性状決定方法、例えば下記の特異的ディスプレイ法によって可視するのに十分なほど大きければよい。発現の差異が可視できるその他の標準的性状決定法には、定量ＲＴ（逆転写酵素）ＰＣＲ及びノーザン分析及びＲＮａｓｅ保護法を含むが、これに限定されない。特異的に発現される遺伝子は標的遺伝子及び／又はフィンガープリント遺伝子としてさらに記載される。本明細書で、”フィンガープリント遺伝子”とは、ＴＨ細胞サブ集団関連の疾患の予後又は診断評価の一部にその発現パターンを利用できるか、あるいはＴＨ細胞サブ集団関連の疾患の治療に有用な化合物の同定法にその発現パターンを利用できる、特異的に発現される遺伝子をいう。フィンガープリント遺伝子は標的遺伝子又は経路遺伝子の特徴ももつ（下記の第５．２節参照）。本明細書で、”フィンガープリントパターン”とは、一連の（一定状態で存在するフィンガープリント遺伝子のうちの２つから全ての）フィンガープリント遺伝子の発現パターンを決定するときに生じるパターンをいう。フィンガープリントパターンは免疫疾患の治療に有用な化合物の同定法において有用であり、例えば、疾患と関連して通常示されるフィンガープリントパターンに及ぼす化合物の効果を評価することによって用いることもできる。本明細書で、”標的遺伝子”とは、標的遺伝子の発現レベル又は標的遺伝子産物の活性レベルの調節によってＴＨ細胞サブ集団関連疾患の症状を改善するような方法で、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患及び／又は該サブ集団の分化、維持及び／又はエフェクター機能に関与する、特異的に発現される遺伝子をいう。例えば、このような調節は１又はそれ以上のＴＨ細胞サブ集団の枯渇（depletion）又は刺激をもたらし、これによって免疫疾患、例えばＴＨ細胞サブ集団疾患の症状を改善する。本明細書で、”刺激”とは、例えばＴＨ細胞サブ集団の細胞増殖によって、ＴＨ細胞サブ集団などのＴ細胞集団に属する細胞の数を効率よく増加することをいう。この用語は、例えばＴＨ細胞サブ集団特異的サイトカインの発現パターンにおける細胞当たりの増加によって示されるような、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の活性の増加をいうこともある。本明細書で、”枯渇”とは、例えばＴＨ細胞サブ集団の細胞増殖における減少によって、ＴＨ細胞サブ集団などのＴ細胞集団に属する細胞の数を効率よく減少することをいう。この用語は、例えばＴＨ細胞サブ集団特異的サイトカインの発現パターンにおける細胞当たりの減少によって示されるような、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の活性の減少をいうこともある。ＴＨ細胞サブ集団関連疾患には、例えば喘息やアレルギー性鼻炎などのアトピー症状、ウイルスなどの病原体の影響、感染、慢性炎症疾患、乾癬、糸球体性腎炎、器官特異的自己免疫、移植片拒絶及び移植片対宿主疾患を含む。標的遺伝子はフィンガープリント遺伝子及び／又は経路遺伝子としての特徴ももつ（下記の第５．２節参照）。５．１．１．特異的に発現される遺伝子の同定法免疫疾患状態、例えばＴＨ細胞サブ集団関連疾患状態に関与し、及び／又は該サブ集団の分化、維持及び／又はエフェクター機能に関与する遺伝子の同定には種々の方法を使用できる。第５．１．１．１節で記載するのは、このような遺伝子の同定に使用できる被験者及びサンプルの作製に用いうる実験モデルである。モデルのカテゴリーで作製した材料を、第５．１．１．２節で記載するようにして、特異的に発現される遺伝子配列を示すために性状決定できる。５．１．１．１．特異的に発現される遺伝子の同定のためのモデル正常及び異常な免疫応答モデルを表すモデルをこの節で記載する。これらのモデルは、ＴＨ１及びＴＨ２サブ集団を含むがこれに限定されないＴＨ細胞サブ集団内及び間で特異的に発現される遺伝子を同定するのに使用できる。このような遺伝子は例えば、ＴＨ細胞サブ集団の分化、維持及び／又はエフェクター機能に、そしてＴＨ細胞サブ集団関連の疾患に関与することができる。例えば、ＴＨ細胞がＴＨ１状態又はＴＨ２状態に分化するのを誘導でき、例えば外来抗原によって刺激されることができ、また特異的に発現される遺伝子発現を分析する種々の過程で回収できる。本明細書で”トランスジェニックＴ細胞モデル”と呼ぶこのようなモデルの１態様では、トランスジェニック動物、好ましくはマウスを用い、このようなトランスジェニック動物の免疫系の有力なＴ細胞集団がただ１つの抗原を認識するように、特定のＴ細胞受容体を発現するように予め遺伝子操作されている。このような系は、ナイーブさが確認されており、またそれが認識する単一抗原に対する応答も確認されている同一Ｔ細胞の大集団を提供するという点で、好ましい。このようなトランスジェニック動物から単離されたＴヘルパー細胞をin vitroで誘導して、ＴＨ１、ＴＨ２又はＴＨ０細胞サブ集団のようなＴＨ細胞サブ集団に分化させる。特定の態様では、１つのＴヘルパー細胞グループ（ＴＨ１グループ）を、ＴＨ１状態への分化を誘導することが知られているサイトカインであるＩＬ −１２に暴露し、第２のＴヘルパー細胞グループ（ＴＨ２グループ）を、ＴＨ２状態への分化を誘導することが知られているサイトカインであるＩＬ−４に暴露し、そして第３グループを、サイトカイン媒介性の誘導を行わないことによって、ＴＨ−未指向性の状態に入らせる。本明細書で”Ｔ細胞株モデル”と呼ぶ第２のモデルでは、ＴＨ１及びＴＨ２及びＴＨ１様及びＴＨ２様細胞株などの成熟Ｔ細胞クローン、好ましくはヒト細胞株を用いる。このようなＴＨ細胞株には、以下の公知のネズミ細胞株：Ｄｏｒｉｓ、ＡＥ７、Ｄ１０．Ｇ４、ＤＡＸ、Ｄ１．１及びＣＤＣ２５を含むが、これに限定されない。このようなＴ細胞株は正常な個体から、またＴＨ細胞サブ集団関連疾患、例えば、クローン病などの慢性炎症疾患及び障害、ライム病を含む反応性関節炎、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、橋本病及びグレーブス病を含む器官特異的自己免疫疾患、接触皮膚炎、乾癬、移植片拒絶、移植片対宿主疾患、サルコイドーシス、喘息やアレルギー性鼻炎を含むアレルギーなどのアトピー性症状、食物アレルギーを含む消化器アレルギー、好酸球増多症、結膜炎、糸球体性腎炎、駆虫剤などのある種の病原体感受性（例えばレーシュマニア症）やＨＩＶを含むある種のウイルス感染、及び結核や癩腫性癩を含む細菌感染、を示す個体から由来したものでありうる。ＴＨ細胞クローンは種々の方法で刺激できる。このような刺激法には、ホルボールエステル、カルシウムイオノフォア又はレクチン（例えばコンカナバリンＡ）への暴露を含む薬理学的方法、Ｔ細胞受容体エピトープに対する抗体（例えば抗−ＣＤ３抗体）による処理、あるいは適当な抗原提示細胞（ＡＰＣ）の存在下に、特定ＴＨ細胞が認識することが知られている抗原への暴露を含むが、これに限定されない。このような初回刺激の後、細胞を刺激のない、そして例えば当業者に公知の標準法を用いてＩＬ−２の存在下に培養で維持する。次いで細胞をさらに１回以上の刺激と維持のサイクルに付す。本明細書で”in vivoモデル”と呼ぶ第３のモデルを用いて、特異的に発現される遺伝子配列を見いだすこともできる。動物モデルをin vivo刺激するのがこのモデルの基本である。刺激がin vivoであるという性質によって、生きている患者における類似の応答を特に予測できる。刺激は種々の方法で行うことができる。例えば、この節で上述したトランスジェニック動物などの動物に適当な抗原と適当なサイトカインを注射して所望のＴＨ細胞の分化を促す。次いで刺激後の種々の時点で、うみを出しているリンパ節を回収する。例えばＴＨ１指向性の動物から得たリンパ節をＴＨ２指向性の動物から得たリンパ節と比較する。正常な免疫分化と機能を表すモデルならびに免疫障害を表すモデルなどの広範な動物モデルをこのin vivoモデルに使用できる。例えば、第５．７．１節で記載する組換え及び非組換えの動物モデルのいずれかを用いることができる。このような方法のいずれの時点においても細胞サンプルを回収できる。例えば、いかなる刺激時点及び／又はいかなる維持時点の後でも細胞を回収できる。さらに、ＴＨ細胞の分化プロセス中の種々の時点で細胞を回収することができる。このようなサンプルから回収したＲＮＡを、例えば第５．１．１．２節で記載する方法によって比較し分析することができる。例えば、一定時間にＴＨ０、ＴＨ１及びＴＨ２グループから単離したＲＮＡを分析し比較できる。さらに、あるＴＨ細胞グループ内の刺激細胞と非刺激細胞から得たＲＮＡも比較、分析できる。さらに、未分化ＴＨ細胞から回収したＲＮＡを、究極的にはＴＨ細胞サブ集団を生じる分化プロセス中の種々の段階にある細胞から回収したＲＮＡと比較できる。５．１．１．２．モデル物質の分析特異的に発現される遺伝子を同定するために、第５．１．１．１節で記載するようなモデルで使用するＴＨ細胞から全ＲＮＡ又はｍＲＮＡを単離できる。ｍＲＮＡの単離に選択的でないあらゆるＲＮＡ単離法を用いてこのようなＲＮＡサンプルを精製できる。例えば、Ausubel，F.M．et al.，編集、1987-1993，Current Protocles in Molecular Biology，John Wiley & Sons，Inc．New York（その全てを参照としてここに援用する）を参照されたい。さらに、多数の細胞サンプルを当業者に公知の方法、例えば一段階ＲＮＡ単離法（Chomczynski，P.，1989, 米国特許第4,843,155号：その全てを参照としてここに援用する）を用いて容易に処理できる。特異的に発現される遺伝子によって生産されるＲＮＡを表す回収したＲＮＡサンプル内の転写物を当業者に公知の種々の方法によって同定できる。例えば、特異的（differential）スクリーニング（Tedder，T.F．et al.，1988，Proc．Nat l．Acad．Sci．USA 85:208-212）、消去式ハイブリダイゼーション（Hedrick，S ．M．et al.，1984，Nature 308:149-153; Lee，S.W．et al.，1984，Proc．Nat l．Acad．Sci．USA 88:2825）及び好ましくは特異的ディスプレイ（Liang，P an d Pardee，A.B.，1992，Science 257:967-971; 米国特許第5,262,311号: これらの全てを参照としてここに援用する）を用いて、特異的に発現される遺伝子由来の核酸配列を同定できる。特異的スクリーニングにはｃＤＮＡライブラリーの二重スクリーニングを含み、ここではライブラリーの１コピーを１つの細胞タイプのｍＲＮＡ集団に対応する全細胞ｃＤＮＡプローブでスクリーニングし、一方ｃＤＮＡライブラリーの二重コピーを第２の細胞タイプのｍＲＮＡ集団に対応する全ｃＤＮＡプローブでスクリーニングする。例えば、１つのｃＤＮＡプローブが対照被験者から由来の細胞タイプ又は組織の全細胞プローブに対応し、一方第２のｃＤＮＡプローブが実験被験者から由来の同じ細胞タイプ又は組織の全細胞ｃＤＮＡプローブに対応することができる。１つのプローブとハイブリダイズするが別のプローブとはハイブリダイズしないこれらのクローンは、対照被験者と実験被験者との間で興味のある細胞タイプにおいて特異的に発現される遺伝子に由来するクローンを表す可能性がある。消去法ハイブリダイゼーション法には一般に、２つの異なる材料から取ったｍＲＮＡの単離、該ｍＲＮＡ又は単離したｍＲＮＡから逆転写した１本鎖ｃＤＮＡのハイブリダイゼーション、及び全てのハイブリダイズした、２本鎖配列を除去することを含む。ハイブリダイズせずに残った１本鎖ｃＤＮＡは、２つのｍＲＮＡ材料の間で特異的に発現される遺伝子に由来するクローンを表す可能性がある。次にこのような１本鎖ｃＤＮＡを、特異的に発現される遺伝子由来のクローンを含むライブラリー構築の出発材料として用いる。特異的ディスプレイ法は、特異的に発現される遺伝子に由来する配列の同定を可能にする公知のポリメラーゼチェインリアクション（ＰＣＲ：Mullis，K.B.， 1987，米国特許第4,683,202号の実施態様を参照）を用いる方法である。まず、単離したＲＮＡを当業者に公知の標準法を用いて１本鎖ｃＤＮＡに逆転写する。逆転写酵素反応のプライマーには、オリゴｄＴ−含有プライマー、好ましくは下記のオリゴヌクレオチドの３’プライマータイプを含むが、これに限定されない。次に、この方法では、いかなる細胞であってもその中に存在するＲＮＡ転写物の再生可能なサブセットを表すクローンを増幅できる、以下に記載するようなＰＣＲプライマー対を用いる。異なるプライマー対を用いることにより、細胞中に存在する刺激されたｍＲＮＡのそれぞれを増幅することができる。このようにして増幅された転写物から、特異的に発現される遺伝子によって産生されたものを同定することができる。プライマー対の３’オリゴヌクレオチドプライマーには、５’末端に１０−１３個、好ましくは１１個のｄＴヌクレオチドのオリゴｄＴ鎖を含むことができ、これはｍＲＮＡのポリ（Ａ）テイル又はｍＲＮＡポリ（Ａ）テイルから逆転写されたｃＤＮＡの相補鎖とハイブリダイズする。３’プライマーの特異性を増加するためには、プライマーはその３’末端に１又はそれ以上、好ましくは２個の付加的ヌクレオチドを含むことができる。統計的には、興味のあるサンプル中に存在するｍＲＮＡ由来の配列のうちのただ１つのサブセットがこのようなプライマーとハイブリダイズするので、付加的ヌクレオチドを付けることにより、プライマーが興味のあるサンプル中に存在するｍＲＮＡ由来の配列のサブセットのみを増幅することを可能にする。これにより増幅した配列を表すバンドのそれぞれをより正確にかつ完全に可視化し性状決定することが可能になる。５’プライマーには、興味のある細胞又は組織由来のｃＤＮＡ配列とハイブリダイズすることができると統計的に期待できるヌクレオチド配列を含む。該ヌクレオチド配列は任意のものであり、５’オリゴヌクレオチドプライマーの長さは約９から約１５ヌクレオチドであり、約１３ヌクレオチドが好ましい。任意のプライマー配列を用いることにより、生産される増幅部分ｃＤＮＡの長さが様々なものとなり、従って標準の変性配列決定ゲル電気泳動によって異なるクローンを分離できる。ＰＣＲの反応条件は、増幅産物の収率と特異性を最適化し、さらに標準のゲル電気泳動法を用いて溶解しうる長さの増幅産物を生じるように選択すべきである。このような反応条件は当業者に公知であり、重要な反応パラメータには例えば、上述したオリゴヌクレオチドプライマーの長さやヌクレオチド配列、ならびにアニーリング及び伸長工程の温度及び反応時間を含む。２つの異なる細胞タイプのｍＲＮＡの逆転写及び増幅から得られたクローンのパターンを、配列決定ゲル電気泳動により可視化して比較する。特異的に発現される遺伝子は２つのバンドのパターン中の違いによって示される。特異的に発現される遺伝子配列の可能性があるものを上述したような多数の方法によっていったん同定すると、このような推定の特異的に発現される遺伝子の特異的発現を確証しなければならない。確証は例えばノーザン分析、定量ＲＴ／ＰＣＲ又はＲＮａｓｅ保護法などの当業者に公知の方法を用いて実施できる。確証にあたって、特異的に発現される遺伝子をさらに性状決定し、第５．３節で記載する標的及び／又はフィンガープリント遺伝子として同定することができる。例えば特異的ディスプレイによって得られた特異的に発現される遺伝子の増幅配列を用いて、対応する遺伝子の全長クローンを単離することができる。遺伝子の全長コーディング部分は、過度の実験を要せずに、当業者に公知の分子生物学的方法によって単離できる。例えば、単離した特異的に発現される増幅断片を標識してｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングに使用できる。あるいは、標識断片を用いてゲノムライブラリーをスクリーニングできる。全長ｃＤＮＡ配列の単離にはＰＣＲ法を用いることもできる。この節で既に記載したように、特異的ディスプレイによって得られた増幅遺伝子断片は、遺伝子中のいくつかのでたらめな部位に５’末端をもち、通常は遺伝子の転写された部分の３’末端に対応する位置に３’末端をもつ。増幅断片からヌクレオチド配列情報がいったん得られると、遺伝子の残り部分（すなわち、特異的ディスプレイを用いるときには遺伝子の５’末端）を例えばＲＴ／ＰＣＲによって得ることができる。全長遺伝子配列の同定とクローニングのためのこのような方法の１態様では、適当な組織又は細胞源から標準法によってＲＮＡを単離する。次に、増幅断片に対応するｍＲＮＡと相補的なオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、ＲＮＡ上で逆転写反応を行い、第１鎖合成を刺激する。プライマーはｍＲＮＡとアンチパラレルなので、ｍＲＮＡの５’末端方向に伸長は進むであろう。次に得られるＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドを標準の末端トランスフェラーゼ反応によってグアニンで”テイル”を付け、ハイブリッドをＲＮａｓｅＨで消化し、第２鎖合成をポリーＣプライマーで刺激する。２つのプライマーを用いて、遺伝子の５’部分をＰＣＲにより増幅する。次に得られる配列を単離し、以前に単離した配列と組み合わせて本発明の特異的に発現される遺伝子の全長ｃＤＮＡを作製する。クローニング戦略と組換えＤＮＡ法の総説としては、例えばSambrook et al.，1989 ，Molecular Cloning，A Laboratory Manual,（Volumes 1-3）Cold Spring Harb or Press，N.Y.;及びAusubel et al.，1989，Current Protocols in Molecular Biology，Green Publishing Associates and Wiley Interscience，N.Y.を参照のこと。５．２．経路遺伝子の同定法この節では経路遺伝子の同定法を記載する。本明細書で”経路遺伝子”とは、その遺伝子産物が、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患に関与する遺伝子産物と相互作用し、及び／又はＴＨ細胞サブ集団の分化、維持及び／又はエフェクター機能に関与する遺伝子産物と相互作用する能力を示す遺伝子をいう。経路遺伝子は特異的に発現され、従って第５．１節で記載する標的及び／又はフィンガープリント遺伝子の特徴をもつことができる。タンパク質−タンパク質相互作用の検出に適したあらゆる方法を用いて、遺伝子産物と、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患に関与し、及び／又は該サブ集団の分化、維持及び／又はエフェクター機能に関与することが知られている遺伝子産物との間の相互作用を同定することによって、経路遺伝子産物を同定できる。このような公知の遺伝子産物は細胞性又は細胞外タンパク質でありうる。このような公知の遺伝子産物と相互作用する遺伝子産物が経路遺伝子産物を表し、またこれをコードする遺伝子が経路遺伝子を表す。使用できる伝統的方法には、共沈殿、架橋、及びグラジエント又はクロマトグラフィーカラムによる共精製がある。このような方法を用いて経路遺伝子産物を同定できる。いったん同定すると、経路遺伝子産物を標準法と組み合わせて用いて、対応の経路遺伝子を同定できる。例えば、エドマン分解法（例えば、Creigh ton，1983，"Proteins: Structure and Molecular Principles"，W.H．Freeman & Co.，N.Y．pp.34-49）などの当業者に公知の方法を用いて、経路遺伝子産物の少なくとも部分アミノ酸配列を確認できる。得られたアミノ酸配列をガイドとして用いて、経路遺伝子配列のスクリーニングに用いるオリゴヌクレオチド混合物を作製できる。スクリーニングは例えば標準のハイブリダイゼーション法又はＰＣＲ法によって実施できる。オリゴヌクレオチド混合物の作製法及びスクリーニング法は公知である（例えば、Ausubel,前出; 及びPCR Protocols: A Guide to Methods and Applications，1990，Innis，M．et al.，編集，Academic Press， Inc.，New York参照）。さらに、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患状態及び／又は該サブ集団の分化、維持及び／又はエフェクター機能に関与するタンパク質と相互作用するタンパク質をコードする経路遺伝子の同時同定をもたらす方法を用いることができる。この方法は、例えば、疾患及び／又は該サブ集団の分化、維持及び／又はエフェクター機能に関与することが知られているか、あるいは示唆される標識タンパク質を、公知のλｇｔｌ１ライブラリーの抗体プロービングと類似の方法で用いて、発現ライブラリーをプロービングすることを含む。タンパク質のin vivoでの相互作用を検出する１方法である２ハイブリッド系を説明目的で記載するが、これは本発明を限定するものではない。この系の１形態が文献（Chien et al.，1991，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:9578-9582）に記載されており、またClontech（Palo Alto，CA）から市販されている。簡単に述べると、このような系を用いて、２つのハイブリッドタンパク質をコードするプラスミドを構築する：そのうちの１つは、公知のタンパク質と融合した転写活性化因子タンパク質、この場合であればＴＨ細胞サブ集団の分化又はエフェクター機能に関与するか、あるいはＴＨ細胞サブ集団関連疾患に関与することが知られているタンパク質のＤＮＡ−結合ドメインからなり、他方は、ｃＤＮＡの一部としてこのプラスミド中に予め組み込んでおいたｃＤＮＡによってコードされる未知タンパク質と融合した活性化因子タンパク質の活性化ドメインからなる。プラスミドを、その制御領域に転写活性化因子の結合部位を含むレポーター遺伝子（例えばｌａｃＺ）を含む、酵母株サッカロミセス・セレビシエ（Sacc aromyces cerevisiae）に形質転換する。どちらのハイブリッドタンパク質も単独ではレポーター遺伝子の転写を活性化できない。ＤＮＡ−結合ドメインハイブリッドは活性化機能を与えないので活性化できないし、また活性化ドメインハイブリッドは活性化因子の結合部位に局在できないので活性化できない。２つのハイブリッドタンパク質の相互作用が機能的活性化因子を再構成し、レポーター因子の発現をもたらすが、これはレポーター遺伝子産物をアッセイすることにより検出できる。２ハイブリッド系又は関連の方法を用いて、公知の”えさ（bait）”遺伝子産物と相互作用するタンパク質のための活性化ドメインライブラリーをスクリーニングできる。これに限定するものではないが、例えば、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患及び／又は該サブ集団の分化、維持及び／又はエフェクター機能に関与する公知の遺伝子産物をえさ遺伝子産物として用いることができる。全ゲノム配列又はｃＤＮＡ配列を活性化ドメインをコードするＤＮＡと融合する。このライブラリー、及びＤＮＡ−結合ドメインと融合したえさ遺伝子産物のハイブリッドをコードするプラスミドを、酵母のレポーター株中に同時形質転換し、得られる形質転換体をスクリーニングしてレポーター遺伝子を発現するものを選ぶ。これに限定するものではないが、例えば、ＧＡＬ４タンパク質のＤＮＡ−結合ドメインをコードするＤＮＡとえさ遺伝子が翻訳可能なように融合するように、ベクター中にえさ遺伝子をクローニングする。これらのコロニーを精製し、レポーター遺伝子の発現するライブラリープラスミドを同定する。次にＤＮＡ配列決定によりライブラリープラスミドによってコードされるタンパク質を同定する。えさ遺伝子産物と相互作用するタンパク質が検出される細胞系のｃＤＮＡライブラリーは、当業界で日常的に実施されている方法で作製できる。例えば本明細書で記載する特定の系によると、ｃＤＮＡ断片がＧＡＬ４の活性化ドメインと翻訳可能なように融合するようにｃＤＮＡ断片をベクター中に挿入できる。このライブラリーをえさ遺伝子−ＧＡＬ４融合プラスミドとともに、ＧＡＬ４活性化配列を含むプロモーターによって作動するｌａｃＺ遺伝子を含む酵母株中に、同時形質転換する。えさ遺伝子産物と相互作用する、ＧＡＬ４活性化ドメインと融合したｃＤＮＡでコードされるタンパク質は、活性ＧＡＬ４タンパク質を再構成し、これによってｌａｃＺ遺伝子の発現を作動させる。ｌａｃＺを発現するコロニーはＸ−ｇａｌの存在下において青色を示すことにより検出できる。次にこれらの株からｃＤＮＡを精製し、当業界で日常的に実施されている方法を用いて、えさ遺伝子−相互作用性タンパク質を生産し単離するのに使用できる。いったん経路遺伝子を同定し単離すると、例えば第５．３節で記載するようにしてこれをさらに性状決定できる。５．３．特異的に発現される遺伝子及び経路遺伝子の性状決定第５．１節で記載する方法により同定した特異的に発現される遺伝子、及び第５．２節で記載する方法により同定した経路遺伝子、ならびに別の方法で同定した遺伝子を、例えばこの節で記載する方法を用いてさらに性状決定することができる。このような遺伝子をここでは”同定された遺伝子”と呼ぶ。この節で記載する分析により、同定された遺伝子の生物的機能についての情報が得られる。特異的に発現される遺伝子の生物的機能をさらに評価することにより、標的及び／又はフィンガープリント遺伝子としてこれらを呼ぶことができるようになる。特に、さらなる性状決定により、遺伝子の発現の調節又は遺伝子産物の活性の調節が興味のあるあらゆるＴＨ細胞サブ集団関連疾患の改善をもたらすことが示された特異的に発現される遺伝子は全て、第５．１節に記載する”標的遺伝子” と呼ぶ。このような標的遺伝子及び標的遺伝子産物は、以下に記載するものとともに、第５．８節に記載する化合物発見戦略の対象となる。さらに、このような標的遺伝子、標的遺伝子産物及び／又は調節化合物は、第５．９節に記載するＴＨ細胞サブ集団疾患の治療法の一部として使用できる。このような方法には、例えば興味のあるＴＨ細胞サブ集団を選択的に枯渇又は抑制するか、あるいは刺激又は増加するような方法を含む。さらなる性状決定により、このような調節が興味のあるＴＨ細胞サブ集団関連疾患に積極的には影響しないが、その発現パターンが例えばＴＨ１／ＴＨ２関連疾患状態と相関する遺伝子発現”フィンガープリント”パターンに貢献することが示された特異的に発現される遺伝子は全て、”フィンガープリント遺伝子”と呼ぶ。”フィンガープリントパターン”については第５．１１．１節で詳しく記載する。標的遺伝子のそれぞれはフィンガープリント遺伝子としても、また経路遺伝子の全て又は一部としても機能しうることに注意すべきである。経路遺伝子もこの節で記載する方法によってさらに性状決定できることに注意すべきである。遺伝子の発現の調節又は遺伝子産物の活性の調節があらゆるＴＨ細胞サブ集団関連疾患を改善できることを示す情報をもたらす経路遺伝子も”標的遺伝子”と呼ぶ。このような標的遺伝子及び標的遺伝子産物は、以下に記載するものとともに、第５．８節に記載する化合物発見戦略の対象となる。さらに、このような標的遺伝子、標的遺伝子産物及び／又は調節化合物は、第５．９節に記載するＴＨ細胞サブ集団疾患の治療法の一部として使用できる。経路遺伝子の性状決定により、遺伝子発現又は遺伝子産物の活性の調節が興味のあるＴＨ細胞サブ集団関連疾患に積極的には影響しないが、その発現が例えばＴＨ１／ＴＨ２関連疾患状態と相関する遺伝子発現フィンガープリントパターンに貢献することが示された場合には、このような経路遺伝子をさらにフィンガープリント遺伝子と呼ぶ。同定された遺伝子をさらに性状決定するには種々の方法を用いることができる。第１に、当業者に公知の標準法を用いて得られる同定された遺伝子のヌクレオチド配列を用いて、同定された遺伝子産物の生物的機能に関する情報をもたらす１又はそれ以上の公知の配列モチーフとの相同性を明らかにする。第２に、同定された遺伝子によって生産されるｍＲＮＡの組織及び／又は細胞タイプ中の分布を当業者に公知の標準法を用いて分析する。このような方法には、例えばノーザン、ＲＮａｓｅ保護、及びＲＴ／ＰＣＲ分析を含む。このような分析により、例えば同定された遺伝子が、特定の興味のあるＴＨ細胞サブ集団関連疾患に貢献することが期待される細胞タイプ中で発現しているかどうかについての情報が得られる。このような分析は定常状態のｍＲＮＡ制御についての定量的情報をもたらし、同定された遺伝子のうちのどちらが興味のあるＴＨ細胞サブ集団関連の疾患に貢献することが期待できるかのについてのデータを与える。さらに、標準のin situハイブリダイゼーション法を用いて、ある組織又は細胞集団のうちのどの細胞が同定された遺伝子を発現するかについての情報が得られる。このような分析は、組織又は細胞集団中にある細胞の１つのサブセットのみが疾患と関連すると考えられる場合に、あるＴＨ細胞サブ集団関連疾患についての同定された遺伝子の生物的機能の情報を与える。第３に、標準法を用いて、同定された遺伝子の配列を用いることによって該遺伝子を遺伝子マップ、例えばマウス遺伝子マップ（Copeland，N.G．and Jenkins ，N.A.，1991，Trends in Genetics 7:113-118）やヒト遺伝子マップ（Cohen，D .，et al.，1993，Nature 366:698-701）に位置づけすることができる。このようなマッピング情報により、例えば、既知の遺伝的ＴＨ細胞サブ集団関連疾患がマッピングされる遺伝領域内にマッピングされる遺伝子を同定することにより、ヒト疾患にとっての遺伝子の重要性についての情報を得ることができる。このような領域には、例えばリースマニア症への関与が疑われるマウスSc1-1遺伝子座、又は非抗原特異的にIgE産生を制御し、従ってＴＨ２様関連疾患に関与すると考えられる１又はそれ以上の遺伝子座を含むヒト5q31.1染色体領域を含む（Mars h，D．et al.，1994，Science 264:1152-1156）。第四に、同定した遺伝子の生物学的機能は、適切なin vivo およびin vitro 系を使用してより直接的に評価することができる。in vivo 系としては、それらに限定されないが、免疫疾患の症状を生まれつき示す動物系、またはそのような症状を示すように遺伝子操作した動物系が挙げられる。さらに、そのような系としては、細胞型分化およびエフェクター機能をさらに解析するための系が挙げられ、また、それに限定されないが、上記5.1.1.1節および下記 5.7.1節に記載しているようなトランスジェニック動物系が挙げられる。in vitro系としては、それらに限定されないが、例えばＴＨ１またはＴＨ２細胞型を含む、細胞をベースとする系が挙げられる。ＴＨサブ集団細胞は、野生型細胞であってもよく、あるいは、問題のＴＨ細胞サブ集団関連疾患に寄与することが知られている、または推測される変異を含む非野生型細胞であってもよい。そのような系は、下記 5.7.2 節で詳細に説明する。同定した遺伝子の生物学的機能をさらに解析する際は、これらの遺伝子の発現をin vivo および／または in vitro 系内でモジュレーションする、すなわち、例えばトランスジェニック動物および／または細胞系で過発現(overexpress)または過少発現(underexpress)させ、次いで、その系に対するその影響をアッセイすることができる。あるいは、同定した遺伝子の産物の活性を、問題のin vivo および／または in vitro 系での活性レベルを上昇または低下させることによりモジュレーションし、次いで、その影響をアッセイしてもよい。そのような解析によって得られる情報は、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患などの、問題の遺伝子を含む免疫疾患を治療または制御するための適切な方法を示唆し得る。例えば、適切な治療としては、遺伝子発現および／または遺伝子産物活性のモジュレーションだけでなく、問題のＴＨ細胞サブ集団の選択的枯渇または刺激も挙げられる。本明細書に記載するような解析手順は、該モジュレーションがどういう状況で正または負になるかを示し得る。本明細書で使用する「正のモジュレーション」は、モジュレーション治療がない場合に認められるものに対する、遺伝子の発現または遺伝子の活性または問題の遺伝子産物の増加、あるいは、ＴＨ細胞サブ集団の刺激を意味する。本明細書で使用する「負のモジュレーション」は、モジュレーション治療がない場合に認められるものに対する、遺伝子発現または遺伝子活性の低下、あるいはＴＨ細胞サブ集団の枯渇を意味する。「刺激」および「枯渇」は、上記第３節で定義した通りである。治療法は、下記 5.9 節で説明する。５．４特異的発現遺伝子および経路遺伝子ここでは、上記 5.1.1節で同定された遺伝子などの特異的発現遺伝子および上記 5.2節で同定された遺伝子などの経路遺伝子について記載する。本発明の特異的発現遺伝子および経路遺伝子を下記表１に列挙する。特異的発現遺伝子配列は、図２、４Ａ、９および１２〜１５、１７、２２および２４に示す。示差表示分析により同定されるヌクレオチド配列を、ここでは、バンド１０、５４、５７、１０２、１０３、１０５、１０６、１６１および２００と言う。これらの配列に対応する遺伝子を、ここでは、各々、１０、５４、５７、１０２、１０３、１０６、１６１および２００遺伝子と言う。表１に、例えば上記 5.1 .1.1節および下記の６〜８節に示す実施例に記載するパラダイムによって同定される特異的発現遺伝子を列挙する。表１に、そのような遺伝子の上記以外の解析に関する情報をまとめる。表２には、ＮＲＲＬまたはＡＴＣＣに寄託されている、表１の遺伝子内にある配列を含む大腸菌(E．coli)クローンを示す。表１において、「特異的発現」の欄は、特異的発現特性を説明したものであり、それによって配列の同定を行った。この欄において、「ＴＨ誘導性」は、ＴＨ細胞刺激または活性化を引き起こすことができる物質に問題の細胞型をさらしたときに特異的発現が生じる場合を意味する。従って、これらの配列は、未分化、あるいは部分的または完全に分化したＴＨ細胞において特異的に発現され、これらの配列に対応する遺伝子は、ＴＨ１およびＴＨ２の両方のサブ集団で発現される。この欄の「ＴＨ１」は、ＴＨ２細胞に対して、成熟し、完全に分化したＴＨ１細胞において優先的に発現される遺伝子に対応する配列を意味する。この欄の「ＴＨ２」は、ＴＨ１細胞サブ集団に対して、成熟し、完全に分化したＴＨ２細胞サブ集団において優先的に発現される遺伝子に対応する配列を意味する。優先的発現は、上記 5.1に記載するように、定性的であっても定量的であってもよい。組織発現パターンも表１にまとめる。「組織／細胞区分」の欄には、遺伝子発現の試験を行った組織および／または細胞型ならびに遺伝子発現が所定の組織または細胞型で確認されたかどうかを示す。特に、「＋」は、問題の遺伝子からｍＲＮＡが検出できたことを示し、「−」は、問題の遺伝子からｍＲＮＡが検出できなかったことを意味する。特に断らない限り、「＋」および「−」は、試験した所定の組織または細胞型の全サンプルに関係する。本明細書で使用する「検出できる」とは、上記 5.1節に記載した通りである。さらに、ヒトおよび／またはマウス染色体地図上の、遺伝子が認められる物理的遺伝子座を「遺伝子座」の欄に示す。さらに、遺伝子が、核酸データベースにあることが知られている遺伝子に対応する場合は、そのような公知遺伝子に関する参考文献（すなわち参考文献名および／または遺伝子名）を「参考文献」の欄に示す。表１に示す遺伝子は、当業者に周知のクローニング法を使用して得ることができ、それらに限定されないが、適切なｃＤＮＡまたはｇＤＮＡ（ゲノムＤＮＡ）ライブラリー内で遺伝子を検出するための適切なプローブの使用が挙げられる。（例えば、Sambrookら、1989，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratories 参照。その全体を参考として本明細書に組み入れる。）本明細書で報告する配列に対するプローブは、下記表２に示す、ＮＲＲＬに寄託されている単離クローンから直接得ることができる。あるいは、該遺伝子に対するオリゴヌクレオチドプローブは、図２、４Ａ、９、１２〜１５、１７、２２および２４に開示されたＤＮＡ配列に基づいて合成することができる。先に報告された遺伝子に関しては、合成オリゴヌクレオチドを、次の文献に記載された公知の遺伝子に対して与えられた配列に基づいて合成または製造することができる。すなわち、granzyme A，Hanukah factor: Masson，D.ら、1986，FEBS Let t.208:84-88; Masson，D．ら、1986，EMBO J．5:1595-1600; Gershenfeld，H．K ．および Weissman，I．L.，1986，Science 232:854-858; ST-2，T1，Fit-1; Kl emenz，R．ら、1989，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86:5708-5712; Tominaga，S .，1989，FEBS Lett．258:301-301; Werenskiold，A．K．ら、1989，Mol．Cell ．Biol．9:5207-5214; Tominaga，S.ら、1992，Biochem．Biophys．Acta．1171: 215-218; Werenskiold，A．K.，1992，Eur．J．Biochem．204:1041-1047; Yanag isawa，K.ら、1993，FEBS Lett．318:83-87; ならびにBergers，G.ら、1994，EM BO J．13:1176-1188である。プローブを使用して、遺伝子の転写が行われる適切な細胞または細胞系から作製されるｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることができる。適切な細胞系としては、例えば、Dorris，AE7，D10.G4，DAX，D1.1および CDC25細胞系が挙げられる。さらに、トランスジェニックまたは非トランスジェニック系統由来の、精製した一次ナイーブＴ細胞を使用することもできる。あるいは、本明細書に記載の遺伝子は、例えば Ha-ras(EJ)遺伝子を安定にトランスフェクションさせた NIH 3T3細胞系、5C10細胞、および末梢血液リンパ球から構築されるｃＤＮＡライブラリーからクローニングすることもできる。下記表２には、表１に挙げた新規遺伝子内の配列を含む、単離した大腸菌(E． coli)クローンを示す。本明細書で使用する「特異的発現遺伝子」（すなわち、標的およびフィンガープリント遺伝子）または「経路遺伝子」は、（ａ）本明細書に開示した（図２、４Ａ、９、１２〜１５、１７、２２および２４に示す）、または表２に挙げた、ＮＲＲＬもしくはＡＴＣＣに寄託されたクローンに含まれる、ＤＮＡ配列の少なくとも一つを含む遺伝子；（ｂ）本明細書に開示した（図２、４Ａ、９、１２〜１５、１７、２２および２４に示す）；あるいは表２に挙げた、ＮＲＲＬもしくはＡＴＣＣに寄託されたクローンに含まれる；あるいは本明細書に開示した（図２、４Ａ、９、１２〜１５、１７、２２および２４に示す）ＤＮＡ配列が属する、または表２に挙げた、ＮＲＲＬもしくはＡＴＣＣに寄託されたクローンに含まれる、遺伝子のコード領域内に含まれる、ＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列をコードするすべてのＤＮＡ配列；（ｃ）本明細書に開示した（図２、４Ａ、９、１２〜１５、１７、２２および２４に示す）；あるいは表２に挙げた、ＮＲＲＬもしくはＡＴＣＣに寄託されたクローンに含まれる；あるいは本明細書に開示した（図２、４Ａ、９、１２〜１５、１７、２２および２４に示す）ＤＮＡ配列が属する、または表２に挙げた、ＮＲＲＬもしくはＡＴＣＣに寄託されたクローンに含まれる、遺伝子のコード領域内に含まれる、コード配列の相補体と、かなりストリンジェントな条件下でハイブリダイズし（例えば、0.5 M ＮａＨＰＯ₄、7 % ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、１mMＥＤＴＡ中、65℃でフィルター結合ＤＮＡにハイブリダイズし、0.1 x ＳＳＣ／0.1 % ＳＤＳ中、68℃ で洗浄する（Ausubel F．M．ら編、1989，Current Protocols in Molecular Bio logy，Vol．I，Green Publishing Associates，Inc.,および John Wiley & Sons ，Inc.,New York，at p．2.10.3））、上記（ａ）の遺伝子によってコードされる遺伝子産物と機能的に等価な遺伝子産物をコードするすべてのＤＮＡ配列；および／または（ｄ）本明細書に開示した（図２、４Ａ、９、１２〜１５、１７、２２および２４に示す）；あるいは表２に挙げた、ＮＲＲＬに寄託されたクローンに含まれる；あるいは本明細書に開示した（図２、４Ａ、９、１２〜１５、１７、２２および２４に示す）ＤＮＡ配列が属する、または表２に挙げた、ＮＲＲＬもしくはＡＴＣＣに寄託されたクローンに含まれる遺伝子のコード領域内に含まれる、コード配列の相補体と、あまりストリンジェントでない条件下（例えば、0.2 x ＳＳＣ／0.1 % ＳＤＳ中、42℃で洗浄（Ausubel ら、1989，前出）などのほどよくストリンジェントな条件）でハイブリダイズするが、上記（ａ）の遺伝子によってコードされる遺伝子産物と機能的に等価な遺伝子産物をなおもコードする、すべてのＤＮＡ配列を意味する。本発明はまた、配列（ａ）〜（ｄ）の縮重変形体も含む。本発明は、下記ヌクレオチド、該ヌクレオチドを発現する宿主細胞、および該ヌクレオチドの発現産物を含む。（ａ）それらに限定されないが、ヒトならびにマウス１０、５４、５７、１０５、１０６、１６１および２００遺伝子産物などの哺乳類の特異的発現遺伝子および／または経路遺伝子産物をコードするヌクレオチド；（ｂ）その機能性ドメインに対応する特異的発現および／または経路遺伝子産物の一部をコードするヌクレオチドならびに該ヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド産物（受容体型遺伝子産物の場合、そのようなドメインとしては、それらに限定されないが、細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、膜貫通ドメイン（ＴＭ）および細胞質ドメイン（ＣＤ）が挙げられる。）；（ｃ）そのドメインの一つの全部または一部が欠失または変化している特異的発現遺伝子および／または経路遺伝子産物の突然変異体をコードするヌクレオチド（受容体型遺伝子産物の場合、そのような突然変異体としては、それらに限定されないが、ＴＭの全部または一部が欠失している可溶性受容体およびＣＤの全部または一部が欠失している非機能性受容体が挙げられる。）；ならびに（ｄ）特異的発現遺伝子および／または経路遺伝子産物またはそのドメインの一つを含む、別のポリペプチドに融合した融合タンパク質をコードするヌクレオチド。本発明はまた、先のパラグラフのＤＮＡ配列（ａ）〜（ｄ）にハイブリダイズし、従ってそれらの相捕体である核酸分子、好ましくはＤＮＡ分子をも含む。そのようなハイブリダイゼーション条件は、上述したように、かなりストリンジェントであってもよく、または、あまりストリンジェントでなくてもよい。核酸分子がデオキシオリゴヌクレオチド（「オリゴ」）である場合、かなりストリンジェントな条件とは、例えば、6 x ＳＳＣ／0.05 %ピロリン酸ナトリウム中、37℃ （14塩基オリゴの場合）、48℃（17塩基オリゴの場合）、55℃（20塩基オリゴの場合）および60℃（23塩基オリゴの場合）での洗浄を意味し得る。これらの核酸分子は、例えば、標的遺伝子調節において、および／または標的、フィンガープリントおよび／または経路遺伝子核酸配列の増幅反応でのアンチセンスプライマーとして有用な、標的遺伝子アンチセンス分子として作用し得る。さらに、そのような配列は、標的遺伝子調節に対しても有用な、リボザイムおよび／または三重らせん配列の一部として使用することができる。さらに、そのような分子は、免疫疾患、例えば、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患の有無または素因を検出することができる診断法の構成要素として使用することができる。本発明はまた、（ａ）先のコード配列および／またはそれらの相補体（すなわち、アンチセンス）のいずれかを含むＤＮＡベクター；（ｂ）発現を指示する調節因子と機能を発揮するように結合した先のコード配列のいずれかを含むＤＮＡ発現ベクター；ならびに（ｃ）宿主細胞でのコード配列の発現を指示する調節因子と機能を発揮するように結合した先のコード配列のいずれかを含む遺伝子操作を施した宿主細胞をも含む。本明細書で使用する調節因子としては、それらに限定されないが、誘導性および非誘導性プロモーター、エンハンサー、オペレーターならびに発現を進め、調節する、当業者には周知の他の因子が挙げられる。該調節因子は、それらに限定されないが、サイトメガロウイルスｈＣＭＶ初期遺伝子、ＳＶ４０アデノウイルスの初期または後期プロモーター、lac 系、trp 系、ＴＡＣ系、ＴＲＣ系、ファージＡの主要オペレーターおよびプロモーター領域、コートタンパク質の制御領域、３−ホスホグリセレートキナーゼに対するプロモーター、酸ホスファターゼのプロモーター、ならびに酵母α−接合因子のプロモーターを含む。本発明は、本明細書に開示したＤＮＡ配列のいずれかの断片を含む。上記した遺伝子配列の他に、同じまたは他の種に存在し得るこれらの遺伝子の相同体および／またはこれらの遺伝子の全長をコードする配列も、過度の実験をすることなく、周知の分子生物技術によって同定し、単離することができる。さらに、該遺伝子産物の１個以上のドメインとかなり相同性を有するタンパク質をコードする遺伝子が、同じ種のゲノム内の他の遺伝子座にも存在し得る。これらの遺伝子も、同様の技術によって同定することができる。例えば、単離した特異的発現遺伝子配列を標識して、問題の生物から得られるｍＲＮＡから構築されるｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングに使用することができる。ハイブリダイゼーション条件は、ｃＤＮＡライブラリーが、標識配列が由来する生物の種類とは異なる生物に由来する場合には、ストリンジェンシーをより低くすべきである。ｃＤＮＡスクリーニングは、同じまたは異なる種における択一的にスプライシングされた転写産物に由来するクローンを同定することもできる。あるいは、標識断片を使用して、ここでも適切にストリンジェントな条件を使用することにより、問題の生物に由来するゲノムライブラリーをスクリーニングすることができる。ストリンジェンシーの低い条件は、当業者には周知であり、ライブラリーおよび標識配列が由来する特定の生物に依存して、予想通り変化する。そのような条件に関する手引きとしては、例えば、Sambrookら、19 89，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Springs Harbor Press，N .Y.; および Ausubelら、1989，Current Protocols in Molecular Biology，（G reen Publishing Associates and Wiley Interscience，N.Y.）を参照。さらに、まだ公知でない特異的発現遺伝子または経路遺伝子型の配列は、問題の遺伝子内のアミノ酸配列に基づいて設計される２個の縮重オリゴヌクレオチドプライマーのプールを使用してＰＣＲを行うことにより単離することができる。その反応に対する鋳型は、特異的発現遺伝子または経路遺伝子の対立遺伝子を発現することが知られている、または推測されている、ヒトまたはヒト以外の細胞系から調製されるｍＲＮＡの逆転写によって得られるｃＤＮＡであってもよい。ＰＣＲ産物は、増幅配列が特異的発現遺伝子または経路遺伝子様核酸配列の配列を表すことを確認するために、サブクローニングして配列分析することができる。次いで、ＰＣＲ断片を使用して、種々の方法により、全長のｃＤＮＡクローンを単離することができる。例えば、増幅断片を使用して、バクテリオファージｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることができる。あるいは、標識断片を使用して、ゲノムライブラリーをスクリーニングすることができる。ＰＣＲ法は、全長のｃＤＮＡ配列を単離するために使用することもできる。例えば、ＲＮＡは、適切な細胞または組織源から標準的手法に従って単離することができる。逆転写反応は、第一鎖の合成のプライミングのための、増幅断片の最も５’端に対して特異的なオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、ＲＮＡに対して行うことができる。得られるＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドは、次いで、標準的なターミナルトランスフェラーゼ反応を使用して、グアニンを「末端にする」ことができ、ハイブリッドはＲＮＡase Ｈで消化することができ、次いで、第二鎖の合成は、ポリ−Ｃプライマーでプライミングすることができる。すなわち、増幅断片の上流のｃＤＮＡ配列は容易に単離できる。使用することができるクローニング法の総説としては、例えば、Sambrookら、1989，Molecular Cloning ，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Press，N.Y.; および Ausubelら、1989，Current Protocols in Molecular Biology，(Green Publishing Associ ates and Wiley Interscience，N.Y.)を参照。同定された特異的発現遺伝子または経路遺伝子が、正常または野生型の遺伝子である場合は、この遺伝子を使用して、その遺伝子の突然変異対立遺伝子を単離することができる。そのような単離は、遺伝的根拠があることが知られている、または推測されているプロセスおよび疾患において好ましい。突然変異対立遺伝子は、ＴＨ細胞サブ集団疾患関連症状に関与する遺伝子型を有することが知られている、または推測されている個体から単離することができる。突然変異対立遺伝子および突然変異対立遺伝子産物は、次いで、下記に記載する治療および診断アッセイ系で使用することができる。突然変異遺伝子のｃＤＮＡは、例えば、当業者には周知の技術であるＰＣＲを使用して単離することができる。この場合、第一のｃＤＮＡ鎖は、オリゴ−ｄＴオリゴヌクレオチドを、突然変異対立遺伝子を有すると推定される個体において発現されることが知られている、または推測されている組織から単離されたｍＲＮＡにハイブリダイズさせ、その新しい鎖を逆転写酵素によって伸長することにより合成することができる。次いで、ｃＤＮＡの第二の鎖を、正常な遺伝子の５ ’端に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを使用して合成する。次いで、これら２個のプライマーを使用して、産物をＰＣＲにより増幅し、適切なベクター中にクローニングし、当業者に周知の方法によりＤＮＡ配列分析を行う。突然変異遺伝子のＤＮＡ配列を正常な遺伝子のものと比較することにより、突然変異遺伝子産物の機能の低下または変化の原因である突然変異を確かめることができる。あるいは、ゲノムまたはｃＤＮＡライブラリーを、各々ＤＮＡまたはＲＮＡを使用して、突然変異対立遺伝子を有することが推測されている、または知られている個体において問題の遺伝子を発現することが知られている、または推測されている組織から構築し、スクリーニングすることができる。次いで、正常な遺伝子またはその適切な断片を標識し、ライブラリーにおいて対応する突然変異対立遺伝子を同定するためのプローブとして使用することができる。この遺伝子を含むクローンは、次いで、その分野できまって行われる方法によって精製し、この節で上記したように配列分析を行うことができる。さらに、発現ライブラリーは、突然変異対立遺伝子を有することが推測されている、または知られている個体において問題の遺伝子を発現することが知られている、または推測されている組織から単離したＤＮＡまたは該組織から合成したｃＤＮＡを使用して構築することができる。こうして、標準的抗体スクリーニング法を、下記 5.6節で記載する正常な遺伝子産物に対する抗体とともに使用することにより、推定上の突然変異組織によって作られる遺伝子産物を発現させ、スクリーニングすることができる。（スクリーニング法に関しては、例えば、Harl ow，E.および Lane 編、1988，"Antibodies: A Laboratory Manual"，Cold Spri ng Harbor Press，Cold Spring Harbor を参照。）突然変異により機能の変化した遺伝子産物が発現する場合（例えば、ミスセンス突然変異の結果として）、ポリクローナル抗体セットは、恐らく突然変異遺伝子産物と交差反応するであろう。そのような標識抗体との反応により検出されたライブラリークローンは、この節の上記で記載したように精製し、配列分析を行うことができる。５．５特異的発現遺伝子および経路遺伝子産物特異的発現遺伝子および経路遺伝子産物としては、例えば、図９、１７、２２および２４に挙げたペプチドなどの、上記 5.4節に記載した遺伝子配列に対応する特異的発現遺伝子および経路遺伝子によってコードされるタンパク質が挙げられる。さらに、特異的発現遺伝子および経路遺伝子産物は、機能的に等価な遺伝子産物を表すタンパク質を含み得る。そのような遺伝子産物は、それらに限定されないが、図９、１７、２２および２４に挙げたペプチドの天然の変形体を含む。そのような等価な、特異的発現遺伝子および経路遺伝子産物は、上記 5.4節に記載した特異的発現遺伝子または経路遺伝子配列によってコードされるアミノ酸配列内にアミノ酸残基の欠失、付加または置換を含み得るが、得られるのはサイレント変異であり、従って、機能的に等価な、特異的発現遺伝子または経路遺伝子産物が得られる。アミノ酸の置換は、関与する残基の極性、電荷、溶解度、疎水性、親水性および／または両親媒性に基づいてなされる。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸としては、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびメチオニンが挙げられ；極性の中性アミノ酸としては、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンが挙げられ；正に帯電した（塩基性）アミノ酸としては、アルギニン、リシンおよびヒスチジンが挙げられ；負に帯電した（酸性）アミノ酸としては、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。本明細書で使用する「機能的に等価な」とは、上記 5.4節に記載した特異的発現遺伝子または経路遺伝子配列によってコードされる、内因性の特異的発現遺伝子および経路遺伝子産物と実質的に同様の in vivo活性を示すことができるタンパク質を意味する。あるいは、下記 5.3節に記載するようなアッセイの一部として使用する場合には、「機能的に等価な」とは、内因性の特異的発現遺伝子または経路遺伝子産物の対応する部分と実質的に同様の方法で、他の細胞または細胞外分子と相互作用し得るペプチドを意味し得る。特異的発現遺伝子または経路遺伝子産物の１つ以上のドメインに対応するペプチト（例えば、ＴＭ、ＥＣＤまたはＣＤ）、先端が切り取られた、または欠失した特異的発現遺伝子もしくは経路遺伝子産物（例えば、受容体型遺伝子産物の場合、特異的発現遺伝子または経路遺伝子産物の全長、特異的発現遺伝子または経路遺伝子ペプチド、あるいは先端が切り取られた特異的発現遺伝子または経路遺伝子産物が、無関係のタンパク質に融合したタンパク質）も本発明の範囲内であり、本節および上記 5.4節に開示した特異的発現遺伝子または経路遺伝子ヌクレオチドおよびアミノ酸配列に基づいて設計することができる。そのような融合タンパク質としては、それらに限定されないが、特異的発現遺伝子または経路遺伝子を in vivoで安定化し、半減期を長くするIgFC融合体；あるいは融合タンパク質を細胞膜に結合させ、ペプチドを細胞表面上に提示することができるいずれかのアミノ酸配列への融合体；あるいはマーカー機能を付与する酵素、蛍光タンパク質または発光タンパク質への融合体が挙げられる。特異的発現遺伝子または経路遺伝子産物をコードする配列に対する他の突然変異は、発現、スケールアップなどにより適するポリペプチドが選択された宿主細胞に生じるように導入することができる。例えば、システイン残基は、ジスルフィド結合を除くために、欠失させたり、別のアミノ酸で置換することができる。分泌または膜貫通タンパク質の場合は、Ｎ−結合グリコシル化部位を変えたり、除去することにより、例えば、Ｎ−結合部位を高グリコシル化させることが知られている酵母宿主からより容易に回収され、精製される均一産物の発現を達成することができる。このためには、グリコシル化認識配列（Ｎ−Ｘ−ＳまたはＮ− Ｘ−Ｔ）のいずれか１個以上の第１または第３アミノ酸位置の一つまたは両方での種々のアミノ酸置換、および／または該認識配列のいずれか１個以上の第２の位置でのアミノ酸欠失が、変異トリペプチド配列でのタンパク質のグリコシル化を防ぐことになる。（例えば、Miyajimaら、1986，EMBO J．5(6):1193-1197を参照。）特異的発現遺伝子または経路遺伝子産物は、当業者に周知の技術を使用して、合成法または組換えＤＮＡ法によって産生することができる。すなわち、本発明の特異的発現遺伝子または経路遺伝子ポリペプチドおよびペプチドの製造法をここに記載する。まず、本発明のポリペプチドおよびペプチドは、当業者に周知の技術によって合成または調製することができる。例えば、Creighton，1983，"Pr oteins: Structures and Molecular Principles"，W．H．Freeman およびCo.，N .Y.（その全体を参考として本明細書に組み入れる）を参照。ペプチドは、例えば、固体支持体上または溶液中で合成することができる。あるいは、当業者に周知の組換えＤＮＡ法を使用して、特異的発現遺伝子または経路遺伝子タンパク質をコードする配列および適切な転写／翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、 in vitro組換えＤＮＡ法、合成法および in vivo組換え／遺伝子組換え法が挙げられる。例えば、Sambrookら、1989，Molecular Cloning: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，N.Y.（その全体を参考として本明細書に組み入れる）および Ausubel，1989（前出）に記載の方法を参照。あるいは、特異的発現遺伝子または経路遺伝子タンパク質配列をコードすることができるＲＮＡは、例えば、シンセサイザーを使用して化学的に合成することができる。例えば、"Oligonucletotide Synthesis"，1984，Gait，M．J．編、IRL Pr ess，Oxford（その全体を参考として本明細書に組み入れる）に記載の方法を参照。種々の宿主−発現ベクター系が、特異的に発現されるかあるいは経路の本発明の遺伝子コード配列を発現するのに利用することができる。そのような宿主−発現ベクター系は、それにより前記の対象のコード配列を生産でき、かつ続いて精製できるビヒクルを表すが、さらに、適当なヌクレオチドコード配列により形質転換あるいはトランスフェクトされた場合に、特異的に発現されるかあるいは経路の本発明の遺伝子タンパク質をin sitで示す細胞も表す。これらのものとしては、本発明の特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質コード配列を含む組換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターにより形質転換された細菌（例えばE ．coli、B ．subtilis）のような微生物、前記の特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母(例えばSaccharomyc es ，Pichia )、前記の特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質のコード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えばバキュロウィルス）を感染させた昆虫細胞系、特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質のコード配列を含む組換えウイルス発現ベクター(例えばカリフラワーモザイクウイルス，CaMV; タバコモザイクウイルス，TMV)を感染させた、もしくは特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質のコード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えばTiプラスミド）で形質転換された植物細胞系、あるいは哺乳動物細胞のゲノム由来のプロモーター（例えばメタロチオネインプロモーター）もしくは哺乳類ウイルス由来のプロモーター（例えばアデノウィルス後期プロモーター、ワクシニアウィルス7.5Kプロモーター）を含む組換え発現構築物を有する哺乳動物細胞系（例えばCOS、CHO、BHK、293、3T3）等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。細菌系では、発現される特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質に意図される用途に応じて、多数の発現ベクターを有利に選択することができる。例えば、抗体の生産あるいはペプチドライブラリーをスクリーニングするために多量のそのようなタンパク質を製造しなければならない場合は、容易に精製できる融合タンパク生成物の高いレベルの発現を生起するベクターが望ましい。このようなベクターとしては、E ．coli 発現ベクターpUR278(Rutherら，1983，E MBO J．2:1791)が挙げられるが、これに限定されるものではない。このベクターでは、前記の特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質コード配列が、lacZコード領域を含むフレーム中で該ベクターに個々に連結して、融合タンパクが生産されるようにすることが可能であり、またpIN ベクター(Inouye & In ouye，1985，Nucleic acids Res.13:3101-3109; Van Heeke & Schuster，1989， J．Biol．Chem. 264:5503-5509）等も含まれる。pGEXベクターを用いていて、外来ポリペプチドをグルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)との融合タンパクとして発現してもよい。一般に、そのような融合タンパクは可溶性であり、グルタチオン−アガロースビーズへの吸着、および続いて行われる遊離のグルタチオンの存在下での溶出により、溶解細胞から容易に精製することができる。pGEXベクターは、トロンビンあるいはXa因子プロテアーゼ開裂部位を含み、したがってクローン化標的遺伝子タンパク質がGST 部分から放出できるように設計されている。昆虫系では、外来遺伝子を発現するためのベクターとしてAutographa califor nica核多角体病ウイルス(AcNPV)が使用される。該ウィルスはSpodoptera frugip erda 細胞中で増殖する。前記の特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子のコード配列は、このウイルスの非必須領域（例えばポリヘドリン遺伝子）中に個々にクローン化し、AcNPVプロモーター(例えばポリヘドリンプロモーター)の制御下に置くことができる。特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子コード配列をうまく挿入することにより、ポリヘドリン遺伝子の不活性化および非閉塞組換えウイルス(即ち、ポリヘドリン遺伝子によりコードされたタンパクコートを欠いているウイルス)の製造が得られる。これらの組換えウイルスを、挿入された遺伝子が発現されるSpodoptera frugiperda細胞を感染させるのに、用いる(例えば、Smithら，1983，J．Viol.46:584; Smith,米国特許第4,215,051号を参照) 。哺乳動物宿主細胞では、ウイルス系の多くの発現系を使用することが可能である。アデノウイルスが発現ベクターとして使用される場合は、対象である特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子コード配列が、アデノウイルス転写／翻訳制御複合体（例えば後期プロモーターおよび三分割リーダー配列）に連結することができる。このキメラ遺伝子は次に、in vitroまたはin vivo組換えによりアデノウイルスゲノムに挿入することができる。ウイルスゲノムの非必須領域（例えばE1またはE3領域）に挿入することにより、生存可能であり、かつ感染した宿主中で、特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質を発現可能な組換えウイルスを得ることができる(例えば、Logan & Shenk，1984，Proc．Natl． Acad．Sci．（USA）81:3655-3659を参照)。挿入された特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子コード配列の効率的な翻訳のためには、特定の開始シグナルも必要な場合がある。これらのシグナルはATG 開始コドン及び隣接配列を含む。それ自体の開始コドン及び隣接配列を含む特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子の全体を適当な発現ベクターに挿入する場合には、追加の翻訳制御シグナルは必要ない。しかし、特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子コード配列の部分のみが挿入される場合は、おそらくはATG 開始コドンを含む外来の翻訳制御シグナルが与えられなければならない。さらに、開始コドンは、所望のコード配列のリーディングフレームと同期して、全挿入物が確実に翻訳されなければならない。これらの外来翻訳制御シグナル及び開始コドンは、種々の起源のものであってよく、天然のものでも合成のものでもよい。発現の効率は、適当な転写エンハンサー要素、転写ターミネーター等を含ませることにより増強可能である(B itterら，1987，Methods in Enzymol．153:516-544を参照)。さらに、挿入された配列の発現を、モジュレートするか、あるいは遺伝子産物を所望の特異的な形で修飾し、プロセシングする宿主細胞株を選択することができる。タンパク生成物のそのような修飾(例えばグリコシル化)及びプロセシング（例えば開裂）は、タンパクの機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞は、タンパクの翻訳後のプロセシング及び修飾のための特徴的で特異的なメカニズムを有している。適当な細胞系または宿主系を選択して、発現された外来タンパクの正確な修飾及びプロセシングが確実に行われるようにしてもよい。この目的のためには、一次転写物の適当なプロセシング、遺伝子産物のクリゴシル化及びリン酸化のための細胞加工手段を有する真核宿主細胞を使用することができる。そのような哺乳動物宿主細胞には、限定するものではないが、CHO、VERO、BHK、He La、COS、MDCK、293、3T3、WI38等が含まれる。組換えタンパク質の長期間にわたる高収率の生産のためには、安定な発現が好ましい。例えば、特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質を安定に発現する細胞系を作製することができる。宿主細胞は、ウイルス複製起点を含む発現ベクターを使用するのではなく、適当な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位等）により制御されたＤＮＡ及び選択可能なマーカーにより形質転換することができる。外来ＤＮＡの導入の後、作製された細胞を富栄養化培地(enriched media)中で１〜２日増殖させ、その後選択培地に切り換えてもよい。組換えプラスミド中の選択可能なマーカーは、選択に対する抵抗性を与え、かつ細胞が、プラスミドをそのクロモソームに安定に組み込み、かつ増殖して遺伝子座を形成することができるようにする。この遺伝子座は、クローン化して細胞系に拡張できるものである。この方法は、特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質を発現する細胞系を作製するのに有利に使用することができる。そのような作製された細胞系は、特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質の内在的活性に影響する化合物のスクリーニングおよび評価に特に有用である。多数の選択系を使用することができ、限定するものではないが、例えば、単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ(Wiglerら，1977，Cell 11:223)、ヒポキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(Szybalska & Szybalski， 1962，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 48:2026)及びアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(Lowyら，1980，Cell 22:817)遺伝子を、tk、hgprt またはaprt^- 細胞中でそれぞれ使用することができる。また、抗代謝物抵抗性を選択の基礎として使用することができ、dhfr遺伝子についてのものはメトトレキセートに対する抵抗性を与えるものであり(Wiglerら，1980，Natl．Acad．Sci．USA 77;356 7; O'Hare ら，1981，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 78;1527)、gpt 遺伝子についてのものはマイコフェノール酸に対する抵抗性を与えるものであり(M ulligan & Berg，1981，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 78:2072)、neo 遺伝子についてのものはアミノグリコシドG-418 に対する抵抗性を与えるものであり(Col berre-Garapinら，1981，J．Mol．Biol．150:1)、hygro 遺伝子についてのものはヒグロマイシンに対する抵抗性を与えるものである(Santerreら，1984，Gene 30 :147)。あるいは、いずれの融合タンパク質も、発現される融合タンパク質に特異的な抗体を使用して容易に精製することができる。例えば、Janknechtらにより記載された系により、ヒト細胞系において発現された非変性融合タンパク質を容易に精製できる(Janknechtら、1991，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88: 8972-8976) 。この系においては、対象となる遺伝子をワクシニア組換えプラスミドにサブクローン化して遺伝子のオープンリーディングフレームが6個のヒスチジン残基からなるアミノ末端タグに翻訳時に融合されるようにする。組換体ワクシニアウイルスを感染させた細胞からの抽出物をNi²⁺ニトロ酢酸-アガロースカラムにかけ、ヒスチジンタグを付したタンパク質をイミダゾール含有バッファーにより選択的に溶出する。本明細書に記載したもののようにアッセイ系中の成分として使用する場合は、特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質を直接または間接的に標識して、特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質と試験物質との間に形成される複合体の検出を容易にすることができる。種々の適当な標識系の任意のものを使用することができ、限定するものではないが、¹²⁵Iのような放射性同位体、基質と接触したときに検出可能な発色信号あるいは光を生成する酵素標識系、蛍光標識等がある。間接的な標識化には標識抗体のようなタンパク質を使用し、これは特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子産物に特異的に結合するものである。そのような抗体としては、限定するものではないが、モノクローナル、ポリクローナル、キメラ、単鎖、Fab 断片及びFab 発現ライブラリーにより生産された断片が含まれる。そのようなアッセイシステムのための特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質を製造するのに組換えＤＮＡ技術を使用した場合は、標識化（直接または間接）、固定化、可溶性及び／または検出を促進できる融合タンパク質を製造することが有利であり得る。可溶性及び／または発現を促進し、かつタンパク質の血中半減期を上昇させることができる融合タンパク質としては、限定するものではないが、可溶性Ig末端融合タンパク質がある。そのような可溶性Ig末端融合タンパク質の製造方法は当業者に周知である。例えば、米国特許5,116,964号を参照。該特許は引用することにより全体を本明細書の一部とする。さらに、IgGlベクターによりコードされたIg領域に加えて、使用するIg領域のFc部分をアミノ酸置換により修飾して補体活性化及びFc結合を低減することができる（例えばヨーロッパ特許239400 B1、1 994年8月3日参照）。製造可能な可溶性Ig末端融合タンパク質として103遺伝子産物、200遺伝子産物あるいは10遺伝子産物を含む可溶性Ig末端融合タンパク質がある。そのような融合タンパク質内に含まれる103遺伝子産物あるいは200遺伝子産物はそれぞれ、例えば、103遺伝子細胞外ドメインまたはその部分、好ましくはリガンド結合部分、あるいは200遺伝子細胞外ドメインまたはその部分、好ましくはリガンド結合部分を含み得る。そのような融合タンパク質内に含まれる10遺伝子産物は、7個の膜貫通ドメイン配列モチーフの１以上の細胞外ドメインまたはその部分、好ましくはリガンド結合部分を含み得る。 103遺伝子産物のアミノ酸配列は知られている（例えば、Klemenz，R.ら、1989 ，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86:5708-5712; Tominaga，S.，1989，FEBS Let t. 258:301-310; Werenskiold，A.K.ら，1989，Mol．Cell．Biol. 9:5207-5214; Tominaga，S.ら，1992，Biochem．Biophys．Acta．1171:215-218; Werenskiold ，A.K.，1992，Eur．J．Biochem．204:1041-1047; Yanagisawa，K.ら，1993，FE BS Lett. 318:83-87; Bergers，G.ら，1994，EMBO J．13:1176-1188参照）。さらに、図4Bに示したように、103遺伝子産物の細胞外、膜貫通及び細胞質ドメインを画するアミノ酸残基も既知である。従って、当業者であれば周知の方法を使用して、そのような可溶性Ig末端103遺伝子産物融合タンパク質を製造することができる。下記の第10節に示す実施例は103遺伝子産物-Ig融合タンパク質の構築を記載するものである。マウス及びヒトの両方の200遺伝子産物のシグナル配列、細胞外、膜貫通及び細胞質ドメインは解明されており、例えば200遺伝子産物-Ig融合タンパク質の構築に利用できる。具体的には、280アミノ酸マウス200遺伝子産物（図17A-17D、配列番号10）は、アミノ酸残基１付近からアミノ酸残基20付近までのシグナル配列、アミノ酸残基21付近からアミノ酸残基192付近までの細胞外ドメイン、アミノ酸残基193付近からアミノ酸残基214付近までの膜貫通ドメイン、及びアミノ酸残基215付近からアミノ酸残基280付近までの細胞質ドメインを含む。さらに301 アミノ酸ヒト200遺伝子産物（図24A-24D、配列番号24）はアミノ酸残基１からアミノ酸残基20付近までのシグナル配列、アミノ酸残基21から200付近の成熟細胞外ドメイン、アミノ酸残基201-224付近の膜貫通ドメイン、及びアミノ酸残基225 から301付近までの細胞質ドメインを含む。これらのドメインが解明されれば、当業者は可溶性Ig末端200遺伝子産物融合タンパク質を容易に製造できるであろう。下記の第10節に示す実施例はマウス及びヒト200遺伝子産物-Ig融合タンパク質の構築を記載するものである。 338アミノ酸残基10遺伝子産物（図9A-9D、配列番号9）細胞外ドメインは、アミノ酸残基1-19付近、アミノ酸残基74-87付近、アミノ酸残基153-187付近及びアミノ酸残基254-272付近からの10遺伝子産物アミノ酸残基を含む。従って当業者は、そのような10遺伝子産物ドメイン情報を周知の方法と併せて使用して、１以上の10遺伝子産物細胞外ドメイン領域及びIg末端を含む可溶性Ig末端10遺伝子融合タンパク質を容易に製造できる。 5.6 特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子産物に特異的な抗体ここでは、１つ以上の特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子産物エピトープを特異的に認識することができる抗体の製造方法を記載する。そのような抗体としては、限定するものではないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体(mAB)、ヒト化あるいはキメラ抗体、単鎖抗体、Fab断片、F(ab')₂断片、Fab発現ライブラリーにより生成された断片、抗イディオタイプ(抗-Id)抗体、上記のいずれかのエピトープ結合断片等がある。このような抗体のIgテイルを修飾することにより補体活性化及びFc結合を低減することができる（例えばヨーロッパ特許239400 B1、1994年8月3日参照）。このような抗体は、例えば、生物学的サンプル中のフィンガープリント、標的あるいは経路遺伝子産物を検出するのに使用でき、診断法の一部として使用できる。あるいは、このような抗体は、以下の第5.9節に記載するように、免疫疾患治療法の一部として利用できる。例えば、上記抗体は、標的遺伝子活性をモジュレートするのに使用でき、TH細胞サブ集団分化、維持及び／またはエフェクター機能をモジュレートするのに使用でき、あるいは細胞表面エピトープに対する抗体の場合は、減損あるいは増強のいずれの目的においても、対象のTH細胞サブ集団を単離するのに使用することができる。特異的な形態で発現されるかあるいは経路の遺伝子に対する抗体の生産のために、種々の宿主動物が、特異的な形態で発現されるかあるいは経路の遺伝子タンパク質またはその一部の注射により免疫化することができる。そのような宿主動物としては、限定するものではないが、ウサギ、マウス、ラット等が挙げられる。宿主種に応じて、免疫応答を増加させるために、種々のアジュバントを使用することができ、そのようなものには、限定するものではないが、フロイント（完全及び不完全）、水酸化アルミニウムのような無機ゲル、リソレシチンのような表面活性物質、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノール、及び有用だと考えられる、BCG(bacille Calmette-Guerin)等のヒトアジュバント及びCory nebacterium parbvum が含まれる。ポリクローナル抗体は、抗原（例えば標的遺伝子産物）あるいは抗原として機能するその誘導体により免疫化された動物の血清に由来する抗体分子の不均一な集合体である。ポリクローナル抗体の製造のためには、上記に挙げたような宿主動物を、上記したようなアジュバントを補充した特異的な形態で発現されるかあるいは経路の遺伝子産物の注射により免疫化すればよい。モノクローナル抗体は特定の抗原に対する抗体の均質な集合体であり、培養中の連続的な細胞系により抗体分子の製造をもたらす任意の技術によって得られる。そのような方法としては、限定するものではないが、Kohler及びMilsteinのハイブリドーマ法(Nature，1975, 256:495-497及び米国特許4,376,110号)、ヒトB-細胞ハイブリドーマ法(Kosborら，1983，Immunology Today，4:72; Coteら，1983 ，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 80:2026-2030)及びEBV-ハイブリドーマ法(Cole ら，1985，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，Alan R．Liss，Inc.， pp．77-96)が挙げれる。そのような抗体は、IgG、IgM、IgE、IgA、IgD及びこれらの任意のサブクラスを含むいずれの免疫グロブリンクラスであってもよい。本発明のmAbを生成するハイブリドーマはin vitroあるいはin vivoのいずれでも培養できる。in vivoにおける高力価のmAbの製造が現在好ましい製造方法である。さらに、適当な抗原特異性を有するマウス抗体分子からの遺伝子を、適当な生物学的活性のヒト抗体分子からの遺伝子とともにスプライシングすることによる、「キメラ抗体」の生産のために開発された方法(Morrisonら，1984，Proc．Nat l．Acad．Sci.，81:6851-6855; Neubergerら，1984，Nature，312:604-608; Tak edaら，1985，Nature，314:452-454、米国特許4,816,567号)を使用することができる。キメラ抗体は、その異なる部分が異なる動物種に由来するものであり、例えばマウスmAbに由来する可変領域及びヒト免疫グロブリン定常領域を含むものである。あるいは、単鎖抗体の製造のために記載された技術（米国特許4,946,778号; B ird，1988，Science 242:423-426; Hustonら、1988，Proc．Natl．Acad．Sci．U SA 85:5879-5883: 及びWardら，1989，Nature 334:544-546）、及びヒト化モノクローナル抗体の製造のために記載された方法（米国特許5,225,539号、引用によりその全体を本明細書の一部とする）を抗特異的な形態で発現されるあるいは抗経路遺伝子産物抗体の製造に使用することができる。特異的なエピトープを認識する抗体断片を公知の方法により生成することができる。例えば、そのような断片としては、限定するものではないが、抗体分子のペプシン消化により製造できるF(ab')₂断片、及びF(ab')₂断片のジスルフィド架橋を還元することにより生成できるFab 断片が挙げられる。あるいは、Fab発現ライブラリーを構築して(Huseら，1989，Science, 246:1275-1281)、所望の特異性を有するモノクローナルFab断片の迅速で容易な同定を可能とすることができる。特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子の産物に対する抗体は、当業者に周知の技術を使用して、さらにそのような遺伝子産物を「模倣する」抗イディオタイプ抗体を生成するのに使用できる（例えば、Greenspan & Bona，1993，FASE B J 7(5):437-444:及びNissinoff，1991，J．Immunol．147(8):2429-2438参照）。例えば、受容体タイプ分子（例えば10、103及び200遺伝子産物）の場合には、 ECDに結合し、かつ受容体に対するリガンドの結合を競合的に阻害する抗体を使用してECDを「模倣する」、従ってリガンドに結合して中和する抗イディオタイプを生成するのに使用できる。そのような中和抗イディオタイプあるいはそのような抗イディオタイプのFab断片は、TH細胞サブ集団関連疾患の治療処方に使用できる。 5.7. 細胞及び動物ベースのモデル系ここでは、免疫疾患のモデル及びTH細胞サブ集団分化、維持及び／またはエフェクター機能のモデルとして機能する、細胞及び動物ベースの系について記載する。これらの系は種々の用途に使用できる。例えば、動物ベースのモデル系は、上記第5.1.1.1節で記載したin vivoパラダイムにより特異的な形態で発現される遺伝子を同定するのに使用できる。細胞及び動物ベースのモデル系はさらに、上記第5.3.節に記載したように、特異的に発現されるかあるいは経路の遺伝子を特性付けするのに使用できる。そのようにさらに特性付けすることにより、例えば、特異的に発現される遺伝子が標的遺伝子であることを示し得る。第二に、そのようなアッセイは、以下に記載するように、TH細胞サブ集団関連疾患症状を軽減することができる化合物を同定するように設計されたスクリーニング方法の一部として使用できる。このように動物及び細胞ベースのモデルは、TH細胞サブ集団関連疾患のような免疫疾患の治療に有効な薬剤、医薬、治療法、処置法を同定するのに使用できる。さらに、以下の第5.10.1節に詳細に記載するように、そのような動物モデルを使用して対象動物におけるLD₅₀及びED₅₀を判定でき、そのようなデータは、可能性のある免疫疾患治療のin vivoにおける効能を判定するのに使用できる。 5.7.1 動物ベース系 TH細胞サブ集団関連疾患の動物ベースモデル系としては、非組換え動物並びに組換え技術により製造されたトランスジェニック動物のいずれをも含む。 TH細胞サブ集団関連疾患の動物モデルは、例えば遺伝的モデルとすることができる。例えば、そのような動物モデルは、リーシュマニア耐性モデル、実験的アレルギー性脳脊髄炎モデル、及び(BALB/c Cr x DBA/2Cr)F1マウスとすることができる。この最後のマウスは、強いTH2様反応に関連する毒性カンジダアルビカンスの全身感染により、致死的な播種性の疾患を発症する。さらに、喘息についての周知のマウスモデルを使用してTH2様応答により引き起こされる症状の緩和について試験することができる（例えば、Lukacs，N.W.ら，1994，Am．J．Resp ．Cell Mol．Biol. 10:526-532; Gavett，S.H．ら，1994，Am．J．Cell Mol．B iol.10:587-593）。さらに動物モデルマウス後天性免疫不全症候群（MAID; Kana gawa，B.ら，1993，Science 262:240: Makino，M.ら，1990，J．Imm．144:434 7 ）をそのような研究に使用できる。あるいは、ヒト血液リンパ球系のin vivoモデルとなるSCIDhuマウス（例えば、Kenshima，H.ら，1994，Curr．Opin．Imm. 6:327-333参照）のような周知の動物モデルを利用できる。さらに、RAG-2-欠損未分化胚芽細胞補足法(Chen，J.ら，1993，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90:4528-4532; Shinkai，Y．ら，1992， Cell 68:855-867）を使用して、例えば、ヒト化リンパ球を含み、及び／または標的遺伝子配列を発現するマウスを製造することができる。さらには、Ｔ細胞を特異的に指向する標的化方法、例えばGuらの方法(Gu，H.ら，1994，Science 265 : 103-106)を使用してＴ細胞集団のみにおいて導入遺伝子を含む動物を製造できる。 TH細胞サブ集団関連疾患様症状を示す動物モデルは、例えば、第5.4節で上記したような標的遺伝子配列を、当業者に周知のトランスジェニック動物を製造する方法とともに使用することにより製造することができる。例えば、標的遺伝子配列は、対象となる動物のゲノム中に導入し、過剰発現させ、及び/または誤発現させることができ、あるいは内在的標的遺伝子が存在する場合には、それを過剰発現させ、誤発現させ、あるいは、中断して標的遺伝子発現を過少にするか不活性化することができる。200遺伝子及び103遺伝子トランスジェニック動物の構築と特性化は下記の第11節に記載する。標的遺伝子配列を過剰発現あるいは誤発現させるためには、標的遺伝子配列のコード部分を、高いレベルの遺伝子発現、あるいはその遺伝子が対象の動物及び／または細胞種で通常は発現されない細胞種での発現を誘導することができる調節配列に結合することができる。そのような調節領域は当業者には周知であり、過度の実験をすることなく利用できるであろう。内在的標的遺伝子配列の過少発現のためには、そのような配列を単離し、対象の動物のゲノム中に再導入した際に該内在的標的遺伝子の対立形質が不活性化されるように加工することができる。好ましくは、加工した標的遺伝子配列を遺伝子標的化により導入して、製造された標的遺伝子配列が動物のゲノムに組み込まれることにより内在的標的配列が中断されるようにする。遺伝子標的化はこの節において以下に説明する。任意の種の動物、限定するものではないが、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ブタ、ミニブタ、ヤギ、ヒトではない霊長類、例えばヒヒ、リス、サル及びチンパンジー等を使用してTH細胞サブ集団関連疾患の動物モデルを得ることができる。当分野で知られる任意の方法を用いて標的遺伝子導入遺伝子を動物に導入してトランスジェニック動物の創始系を製造することができる。そのような方法としては、限定するものではないが、前核マイクロインジェクション(Hoppe，P.C.及びWagner，T.E.，1989，米国特許4,873,191号);レトロウイルス媒介による微生物系への遺伝子移入(Van der Puttenら，1985，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 82 :6148-6152);胚幹細胞中での遺伝子標的化(Thompsonら，1989，Cell 56:313-32 1);胚のエレクトロポレーション(Lo，1983，Mol．Cell．Biol．3:1803-1804);及び精子媒仲介伝子移入(Lavitranoら，1989，Cell 57:717-723)等がある。このような技術の解説としては、Gordon，1989，Transgenic Animals，Intl．Rev．C ytol．115:171-229を参照。この文献は引用することにより本明細書の一部とする。本発明は、その全ての細胞に導入遺伝子を含むトランスジェニック動物、並びに全ての細胞ではなく一部に導入遺伝子を有する動物、即ちモザイク動物を提供するものである（例えば、Jakobovits，1994，Curr．Biol．4:761-763により記載された技術を参照）。導入遺伝子は単一の導入遺伝子あるいはコンカテマー、例えば頭−頭タンデム、あるいは頭−尾タンデムとして組込んでもよい。また、例えばLaskoら(lasko，M.ら，1992，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 89:6232-623 6)の教示に従い、導入遺伝子を特定の細胞種中に選択的に導入し、それを活性化することもできる。そのような細胞種特異的活性化に必要とされる調節配列は対象の特定の細胞種に依存し、当業者には明らかであろう。標的遺伝子導入遺伝子を内在的標的遺伝子のクロモソーム部位に組込むことが望まれる場合には、遺伝子標的化が好ましい。簡単に説明すると、そのような技術を利用する場合には、対象の内在的標的遺伝子に相同ないくつかのヌクレオチド配列を含むベクターを、クロモソーム配列との相同組換えにより内在的標的遺伝子のヌクレオチド配列に組み込み、その機能を停止させるために設計する。また例えばGuら(Gu，H.ら，1994，Science 265:103-106)の教示に従い、導入遺伝子を特定の細胞種に選択的に導入し、したがってその細胞種のみにおいて対象の内在的遺伝子を不活性化することもできる。そのような細胞種特異的不活性化に必要とされる調節配列は対象の特定の細胞種に依存し、当業者には明らかであろう。トランスジェニック動物が製造されれば、標準的な技術を用いて組換え標的遺伝子及びタンパク質の発現をアッセイできる。最初のスクリーニングをサザンブロット分析あるいはＰＣＲ法により行って、動物組織を分析し、導入遺伝子の組み込みが起こったかどうかをアッセイすることができる。トランスジェニック動物の組織における導入遺伝子のｍＲＮＡ発現のレベルは、限定するものではないが、動物から得られた組織サンプルのノーザンブロット分析、in situハイブリダイゼーション分析、RT-PCR等を使用して調べることができる。標的遺伝子発現組織のサンプルは、対象の標的遺伝子導入遺伝子遺伝子産物に特異的な抗体を使用して免疫細胞化学的に評価することもできる。標的遺伝子ｍＲＮＡあるいは標的遺伝子導入遺伝子ペプチド（標的遺伝子産物エピトープに対する抗体を使用して免疫細胞化学的に検出される）を容易に検出可能なレベルで発現する標的遺伝子トランスジェニック動物をさらに評価して、特徴的なTH細胞サブ集団関連疾患様症状を示す動物、あるいはTH細胞サブ集団分化表現型を示す動物を同定することができる。TH1様関連疾患症状としては、例えば、慢性炎症性疾患及び疾病、例えばクローン病、ライム病を含む反応性関節炎、インシュリン依存性糖尿病、多発性硬化症、橋本甲状腺炎及びグレーブス病を含む臓器特異的自己免疫疾患、接触性皮膚炎、乾癬、移植片拒絶、移植片対宿主疾患、及びサルコイドーシスに関連するもの等が挙げられる。TH2様関連疾患症状としては、アトピー症状、例えば喘息やアレルギー性鼻炎を含むアレルギー、食物アレルギーを含む胃腸管アレルギー、好酸球増加症、結膜炎、糸球体腎炎、蠕虫症（例えばリーシュマニア症）のようなある種の病原体感受性症、及びHI Vのようなある種のウイルス感染症、結核及びらい腫らいのような細菌感染症に関連するもの等が挙げられる。さらに、トランスジェニック動物内の特定の細胞種を、TH細胞サブ集団関連疾患に特徴的な細胞表現型について分析し、アッセイすることができる。そのような細胞表現型としては、例えば、対象のTH細胞サブ集団に特徴的な特異的なサイトカイン発現が挙げられる。さらに、そのような細胞表現型としては特定の細胞種の発現のフィンガープリントパターンを調べ、特異的なTH細胞サブ集団関連疾患を示す動物における特定の細胞種の既知のフィンガープリント発現プロフィールと比較することを含む。そのようなトランスジェニック動物は、TH細胞関連疾患のための適当なモデル系とすることができる。標的遺伝子トランスジェニック創始動物（即ち、標的遺伝子タンパク質を対象の細胞あるいは組織中で発現し、かつ好ましくはTH細胞サブ集団関連疾患の兆候を示す動物）が製造されれば、これを交配、同系交配、異系交配、あるいは交雑することにより特定の動物のコロニーを形成することができる。そのような交配方法の例としては、限定するものではないが、１より多い組み込み部位を有する創始動物を異系交配して別の系を生成すること、別の系を同系交配して、各標的遺伝子導入遺伝子の付加的な発現の効果により、より高いレベルで対象の標的遺伝子導入遺伝子を発現する複合標的遺伝子トランスジェニック動物を生成すること、異型接合体トランスジェニック動物を交雑して所定の組み込み部位について異型接合体である動物を生成して、発現を増加させ、ＤＮＡ分析により動物をスクリーニングすることの可能性のある必要性を排除すること、別々の異型接合体系を交雑して複合異型接合体あるいは同型接合体系を生成すること、動物を種々の同系交配遺伝子バックグラウンドに交配して、対立遺伝子を修飾することの、標的遺伝子導入遺伝子の発現及びTH細胞サブ集団関連疾患様症状の発症に対する影響を調べること等が挙げられる。そのようなアプローチの一つは、標的遺伝子トランスジェニック創始動物を野生型と交雑して、上記したもののようなTH細胞サブ集団関連疾患様症状を示すF1世代を生成することである。同型接合体標的遺伝子トランスジェニック動物が生存可能であることがわかった場合は、このF1世代を同系交配して同型接合体系を生成することができる。 5.7.2. 細胞ベースアッセイ標的遺伝子タンパク質をコードする標的遺伝子配列を含んで発現し、かつさらに対象のTH細胞サブ集団関連疾患に関連する細胞表現型を示す細胞は、TH細胞サブ集団関連疾患症状を緩和する能力を示す化合物を同定するのに使用できる。TH 細胞サブ集団関連疾患症状を緩和する能力を示し得る細胞表現型としては、例えば、対象のTH細胞サブ集団と関連するサイトカインあるいは細胞表面マーカー発現の阻害または増強、あるいは特定のTH細胞サブ集団の阻害または増強が挙げられる。さらに、対象の細胞の遺伝子発現のフィンガープリントパターンを分析して、正常な非TH細胞サブ集団関連疾患フィンガープリントパターンと比較することができる。TH細胞サブ集団関連疾患様細胞表現型を示し、かつ対象の細胞の正常なフィンガープリントパターンにより近いフィンガープリントパターンを形成する細胞を生起する化合物は、TH細胞サブ集団関連疾患症状を緩和する能力についてさらに試験する候補となり得ると考えられる。そのようなアッセイに使用できる細胞としては、例えば、非組換細胞系、例えばDorris、AE7、D10.G4、DAX、D1.1及びCDC25細胞系等がある。さらに、トランスジェニックあるいは非トランスジェニック株に由来する精製された一次的な天然の(naive)Ｔ細胞も使用できる。さらに、そのようなアッセイに使用できる細胞として組換トランスジェニック細胞系が挙げられる。例えば、第5.7.1節で上記した本発明のTH細胞サブ集団関連疾患動物モデルは、例えば、対象の疾患の細胞培養モデルとして使用可能な、 TH1様及び／またはTH2様細胞系を生成するのに使用することができる。TH細胞サブ集団関連疾患トランスジェニック動物から得た一次培養物を使用することもできるが、連続的な細胞系の世代が好ましい。トランスジェニック動物から連続的な細胞系を得るのに使用できる技術の例については、Smallら，1985，Mol．Cell Biol．5:642-648を参照。あるいは、TH細胞サブ集団関連疾患に関与していることが知られている細胞種の細胞は、細胞内の標的遺伝子発現の量を増加あるいは減少させることができる配列でトランスフェクトすることができる。例えば、標的遺伝子配列を対象の細胞のゲノムに導入して過剰発現させるか、あるいは内在的標的遺伝子配列が存在する場合は、それらを過剰発現させるかあるいは停止させて標的遺伝子発現を過少なものとするか、不活性化することができる。標的遺伝子を過剰発現させるため、標的遺伝子配列のコード部分を、対象の細胞種において遺伝子発現を誘導することができる調節配列に結合してもよい。そのような調節領域は当業者に周知であり、過度の実験をすることなく利用できるであろう。内在的標的遺伝子配列の過少発現のためには、そのような配列を単離し、対象の細胞種のゲノム中に再導入したときにその内在的標的遺伝子対立形質が不活性化されるように製造することができる。好ましくは、製造した標的遺伝子配列を遺伝子標的化により導入して、製造された標的遺伝子配列が細胞のゲノムに組み込まれることにより内在的標的配列が中断されるようにする。遺伝子標的化は上記第5.7.1節において説明した。標的遺伝子配列核酸のトランスフェクションは標準的な技術を使用して行うことができる。例えば、Ausubel，1989,（前出）を参照。トランスフェクトされた細胞は、組換標的遺伝子配列の存在、標的遺伝子ｍＲＮＡの発現と蓄積、及び組換標的遺伝子タンパク質産生の存在について評価する。標的遺伝子発現の減少が望まれる場合には、標準的技術を使用して、内在的標的遺伝子発現及び／または標的遺伝子産物産生における減少が得られるかどうかを示すことができる。 5.8. 標的遺伝子産物と相互反応する化合物についてのスクリーニングアッセイ以下のアッセイは、標的遺伝子産物に結合する化合物、標的遺伝子産物に相互反応するその他の細胞タンパク質に結合する化合物、標的遺伝子産物とその他の細胞タンパク質との相互反応を阻害する化合物に結合する化合物を同定するために設計されている。例えば、膜貫通受容体型タンパク質である、あるいはそうであると予測されている10、103及び200遺伝子産物の場合には、そのような方法によりそのような受容体に対するリガンドを同定することができる。103遺伝子産物リガンドは、例えば、遺伝子103発現がTH2特異的であるとして、喘息やアレルギーのようなTH2様特異的疾患の緩和のベースとして機能することができる。200 遺伝子産物リガンドは、例えば、TH1様特異的疾患の緩和のベースとして機能することができる。10遺伝子産物リガンドは、例えば、その遺伝子発現パターンが TH誘導性のものであるとして、広範なＴ細胞疾患の緩和のベースとして機能することができる。化合物は、限定するものではないが、その他の細胞タンパク質であってもよい。さらにそのような化合物は、限定するものではないが、ペプチド、例えば、限定するものではないが、標的遺伝子産物膜貫通受容体の細胞外部分を含むIg末端融合ペプチド、及びD-及び／またはL-配置のアミノ酸から形成されるランダムペプチドライブラリーのメンバー（例えば、Lam，K.S.ら、1991，Nature 354:82-8 4; Houghten，R.ら，1991，Nature 354:84-86）のような可溶性ペプチド、ホスホペプチド（限定するものではないが、ランダムのあるいは部分に縮退した設計されたホスホペプチドライブラリーのメンバー等、例えばSongyang，Z.ら，1993 ，Cell 72:767-778参照）、抗体（限定するものではないが、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、抗イディオタイプ、キメラあるいは単鎖抗体、及びFA B、F(ab')₂及びFab発現ライブラリー断片、及びそのエピトープ結合断片）、及び小有機分子及び無機分子等である。受容体型の標的分子の場合は、そのような化合物としては、ECDに結合し、かつ天然のリガンド（即ちアゴニスト）によりトリガーされる活性を模倣する有機分子（例えばペプチド模倣体）、並びにECD（あるいはその部分）を模倣し、かつ「中和する」天然のリガンドに結合するペプチド、抗体、その断片及びその他の有機化合物がある。コンピュータモデリング及びサーチの技術により、標的あるいは経路遺伝子発現または活性を調整できる化合物を同定すること、あるいは既に同定されているそのような化合物を改良することが可能である。そのような化合物あるいは組成物が同定されれば、活性部位あるいは領域が同定される。受容体分子に作用する化合物の場合、そのような活性部位は典型的にはリガンド結合部位であり、例えば受容体自体のリガンドとの相互作用ドメインである。活性部位は当分野で知られた方法を使用して、例えばペプチドのアミノ酸配列から、核酸のヌクレオチド配列から、あるいはその天然リガンドの関連化合物あるいは組成物の複合体の分析から同定できる。後者の場合では、化学的あるいはＸ線結晶学的な方法を用いて、因子上に複合化したリガンドが見られる場所を見つけることにより、活性部位を発見することが可能である。次に、この活性部位の３次元幾何学的構造を決定する。これは、完全分子構造を決定することができるＸ線結晶学などの既知の方法によって行なうことができる。他方、いくつかの分子間距離を決定するために、固相または液相ＮＭＲを使用することができる。部分的または完全な幾何学的構造を得るために、構造決定の他のいかなる実験方法でも使用することができる。この幾何学的構造を天然のまたは人工のリガンドとの複合体として測定してもよく、これによって決定された活性部位の構造の精度を上昇させることとなる。決定される構造が不完全または精度が不十分な場合、その構造を完全なものにする、またはその精度を改善するため、コンピュータベースの数値モデル化法を利用することができる。認知されているいずれのモデル化法をも使用することができ、これにはタンパク質または核酸などの特定の生体高分子に特異的なパラメーター化モデル、分子運動のコンピュータ処理を基礎とする分子動力学モデル、熱アンサンブル(ensemble)を基礎とする統計力学モデル、または複合モデルが含まれる。大部分の型のモデルについて、構成原子および構成官能基間の力を表す標準分子力場が必要であり、これは物理化学において既知の力場から選択することができる。不完全なまたは精度が劣る実験構造は、これらのモデル化法によってコンピュータ処理をした完全でより正確な構造の補強(constraint)として供される。実験的に、モデル化によって、またはこれらの組合せのいずれかによって、活性部位の構造を決定した後、最後に、化合物類の分子構造の情報を内蔵しているデータベースを検索して、モジュレーション化合物の候補を同定することができる。このような検索は、決定された活性部位構造に適合し、活性部位を確定する官能基と相互作用を行なう構造を有する化合物を探すものである。こうした検索は手動で実施することもできるが、好ましくはコンピュータを利用する。この検索によって見いだされたこれらの化合物は、標的または経路遺伝子産物をモジュレートする可能性がある化合物である。あるいはまた、これらの方法を用いて、既知のモジュレーション化合物またはリガンドよりも改善されたモジュレーション化合物を同定することができる。既知の化合物の組成を改変して、この新しい組成に対して適用した上記の実験方法またはコンピュータモデル化法を使用することによって、構造に対する改変の影響を調べることができる。そしてこの変更された構造を化合物の活性部位構造と比較することによって、改善されたものの適合性または相互作用が得られたかどうかを調べる。この様にして、側鎖基を変更するなどの、組成の系統的な変更を迅速に評価して、改善された特異性または活性を有する改変されたモジュレーション化合物またはリガントを得ることができる。標的遺伝子若しくは経路遺伝子または遺伝子産物の活性部位、ならびに関連する形質導入および転写因子の同定を基礎とするモジュレーション化合物の同定に有用なその他の実験法およびコンピュータモデル化法は当業者にとって明らかであろう。分子モデル化システムの例は、CHARMmおよびQUANTAプログラム（Polygen Corp oration,Waltham,MA）である。CHARMmはエネルギー最少化および分子動力学関数を実施する。QUANTAは分子構造の構築、図形モデル化および分析を実施する。QU ANTAによって、分子同士の挙動の相互作用構造、改変、可視化、および分析が可能になる。特定のタンパク質と相互作用を行なう薬剤のコンピュータモデル化に関して、 Rotivinen ら、1988,Acta Pharmaceutical Fennica 97:159-166；Ripka,New Sci entist 54-57(June 16,1988)；McKinaly and Rossmann,1989,Annu.Rev.Pharmaco l.Toxiciol. 29:111-122；Perry and Davies,OSAR:Quantitative Structure-Acti vity Relationships in Drug Design pp.189-193(Alan R.Liss,Inc.1989)；Lewi s and Dean,1989 Proc.R.Soc.Lond.236:125-140 and 141-162；および、核酸成分に対するモデル受容体に関して、Askew ら、1989,J.Am.Chem.Soc.111:1082-10 90などの、多数の文献が論述している。BioDesign,Inc.(Pasadena,CA)，Allelix ,Inc.(Mississauga,Ontario,Canada)，およびHypercube,Inc.(Cambridge,Ontari o)などの企業から、化学物質をスクリーニングし、図形的に描くその他のコンピュータプログラムを入手することができる。これらは主として特定のタンパク質に特異的な薬剤に応用できるように設計されているが、ＤＮＡまたはＲＮＡの領域に特異的な薬剤の設計にも、この領域が同定されていれば、応用することができる。結合を変更できると考えられる化合物の設計および産生に関して上に一般的に記載したが、阻害剤または活性化物質である化合物に関して、天然物質または合成化学物質、およびタンパク質などの生物学的活性物質などの既知の化合物のライブラリーをスクリーニングすることもできるはずである。ここに記載したようなアッセイによって同定される化合物は例えば、標的遺伝子産物の生物学的機能を精密化する、および免疫疾患症状を改善するのに有用である。例えば、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患状態がこの疾患に関与する細胞または組織における、標的遺伝子発現、標的遺伝子産物、および／または標的遺伝子産物活性の全体的レベル低下によって生じる場合において、標的遺伝子産物と相互作用する化合物としては、結合した標的遺伝子タンパク質の活性を強化または増幅させる物質が挙げられる。こうした化合物は標的遺伝子活性のレベルの効果的増加をもたらし、それによって症状を改善する。標的遺伝子内の変異がＴＨ細胞サブ集団関連疾患を引き起こす有害な作用をする異常な標的遺伝子タンパク質を生成させる原因となる場合、あるいはＴＨ細胞サブ集団関連疾患が発症するために正常標的遺伝子活性が必要である場合においては、標的遺伝子タンパク質に結合する化合物を、結合した標的遺伝子タンパク質の活性を阻害するものとして同定することができる。その他の化合物の同定、および例えば第５．８．１〜５．８．３節に記載するような手法によって同定した化合物の有効性試験のためのアッセイを下記の第５．８．４節に記載する。５．８．１．標的遺伝子産物に結合する化合物のin vitroスクリーニングアッセイ本発明の標的遺伝子産物に結合することができる化合物を同定するために、in vitroシステムを設計することができる。同定される化合物は、例えば、野性型および／または変異型標的遺伝子産物の活性をモジュレートするのに有用であり、標的遺伝子産物の生物学的機能を精密化するのに有用であり、正常な標的遺伝子産物の相互作用を妨害する化合物を同定するためのスクリーニングに利用することができ、またはそれら自身がこうした相互作用を妨害することができる。標的遺伝子産物に結合する化合物を同定するために使用するアッセイの原理には、２つの成分が相互作用して結合するために十分な条件下および十分な時間をかけたその標的遺伝子産物と試験化合物との反応混合物の調製によって、取り出すことができ及び／又は反応混合物中で検出することができる複合体を形成させることが含まれる。これらのアッセイは各種の方法で実施することができる。例えば、このようなアッセイを実施する１つの方法では、標的遺伝子産物または試験物質を固相上に固着させ、反応終了時に固相上に固着した標的遺伝子産物／試験化合物複合体を検出することが含まれる。こうした方法の１つの態様において、標的遺伝子産物を固体表面上に固着させ、試験化合物は固着させないで直接または間接的に標識することができる。実用上は、固相としてマイクロタイタープレートを利用するのが便利である。固着成分は非共有または共有結合的付着によって固定化することができる。非共有結合的付着は単にこのタンパク質の溶液で固相表面をコーティングし乾燥することによって実施することができる。あるいはまた、固定すべきタンパク質に特異的な、固定化した抗体、好ましくはモノクローナル抗体を使用して、固体表面にタンパク質を固着させることができる。アッセイを実施するために、固着成分を含有するコーティング表面に、非固定化成分を添加することができる。反応が完了した後、形成された何らかの複合体が固体表面上に固定化されたまま残留するような条件下で、未反応の成分を（例えば洗浄によって）除去する。固相上に固着された複合体の検出は多数の方法によって行なうことができる。当初固定化しなかった成分があらかじめ標識されている場合は、表面に固定化された標識の検出が複合体が形成されたことを示す。当初固定化しなかった成分があらかじめ標識されていない場合は、表面に固着した成分を検出するために、間接的標識を使用することができる。例えば、当初固定化しなかった成分に対して特異的な標識抗体の使用である（代わりに、この抗体が直接標識されるか、または標識された抗-Ig 抗体によって間接的に標識される）。あるいはまた、液相中で反応を行なわせ、反応生成物を反応しない成分から分離し、複合体を検出することができる。例えば、溶液中で形成された何らかの複合体を固着させるための、標的遺伝子産物または試験化合物に対して特異的な固定化抗体と、固着された複合体を検出するための、形成されるはずの複合体の他方の成分に対して特異的な標識抗体を使用する。５．８．２．標的遺伝子タンパク質と相互作用する細胞タンパク質のアッセイ新規標的タンパク質−細胞または細胞外タンパク質相互作用を同定するため、タンパク質−タンパク質相互作用を検出するのに好適ないずれの方法をも使用することができる。これらの方法は、上記第５．２節において経路遺伝子の同定に関して概説しており、同定された標的タンパク質と相互作用するタンパク質の同定に関して、ここで利用することができる。５．８．３．標的遺伝子産物／細胞巨大分子相互作用を妨げる化合物のアッセイ本発明の標的遺伝子産物は、in vivo で、タンパク質などの１以上の細胞または細胞外巨大分子と相互作用をする。こうした巨大分子としては、限定するわけではないが、核酸分子および上記第５．８．２節に記載したような方法によって同定されたタンパク質が挙げられる。ここでの議論のため、こうした細胞および細胞外巨大分子をここで“結合相手”と称する。これらの相互作用を妨害する化合物は標的遺伝子タンパク質、特に変異標的遺伝子タンパク質の活性を調節するのに有用である。こうした化合物としては、限定するわけではないが、例えば、上記第５．８．１節に記載したような抗体、ペプチドその他の分子が挙げられる。標的遺伝子産物とその細胞または細胞外の単数または複数の結合相手との間の相互作用を妨げる化合物を同定するために使用するアッセイシステムの基本原理には、標的遺伝子産物と結合相手の、この２つが相互作用して結合し、それによって複合体を形成するために十分な条件下および十分な時間をかけて、反応混合物を調製することが含まれる。ある化合物の阻害活性を試験するためには、その試験化合物の存在下または不存在下で反応混合物を調製する。試験化合物を反応混合物中に最初から含ませるか、または標的遺伝子産物およびその細胞または細胞外結合相手の添加に引き続いて添加することができる。試験化合物を存在させないか、またはプラシーボを存在させた対照反応混合物をインキュベートする。その後、標的遺伝子タンパク質および細胞または細胞外結合相手間の何らかの複合体の形成を検出する。試験化合物を含有する反応混合物中では複合体が形成されず、対照反応中では複合体が形成される場合は、その化合物が標的遺伝子タンパク質と相互作用性結合相手との相互作用を妨げることを示す。その他、試験化合物および正常標的遺伝子タンパク質を含有する反応混合物内での複合体の形成を、試験化合物および変異標的遺伝子タンパク質を含有する反応混合物内での複合体の形成と比較することもできる。この比較は、変異標的遺伝子タンパク質の相互作用は妨害するが正常標的遺伝子タンパク質の相互作用は妨害しない化合物を同定する必要がある場合において、重要となる。標的遺伝子産物と結合相手の相互作用を妨げる化合物のアッセイを、不均一または均一様式で実施することができる。不均一アッセイには、標的遺伝子産物または結合相手のいずれかを固相上に固着させ、そして反応終了時に固相上に固着した複合体を検出することが含まれる。均一アッセイにおいては、全反応を液相中で実施する。いずれのアプローチにおいても、試験する化合物に関して異なる情報を得るために、反応物の添加の順序を変更することができる。例えば、標的遺伝子産物と結合相手の間の相互作用を例えば競合によって妨げる試験化合物は、試験物質の存在下で反応を実施する、すなわち標的遺伝子タンパク質および相互作用性の細胞または細胞外結合相手よりも前に、またはこれらと同時に、試験物質を反応混合物中に添加することによって、同定することができる。あるいはまた、すでに形成された複合体を分断する試験化合物、例えば、複合体から一方の成分を追い出すような高い結合定数を有する化合物について、複合体が形成した後に反応混合物にこの化合物を添加することによって、試験することができる。各種の様式を以下に簡単に記載する。不均一アッセイシステムにおいて、標的遺伝子タンパク質または相互作用性の細胞または細胞外結合相手のいずれかを固体表面上に固着させ、一方固着させない成分を直接的または間接的に標識する。実用上は、マイクロタイタープレートを利用するのが便利である。固着させる成分は非共有結合または共有結合性付着によって固定する。非共有結合性付着は、標的遺伝子産物または結合相手の溶液を固体表面に単にコーティングし、乾燥することによって実施される。あるいはまた、固相表面に一方を固着させるために、固着する成分に特異的な固定化抗体を使用することができる。この表面はあらかじめ調製し、保存することができる。アッセイを実施するため、固定化成分の相手を、試験化合物の存在下または不在下でコーティング表面に暴露させる。反応が完了した後、反応しなかった成分を（例えば洗浄によって）除去すると、形成した複合体はいずれも固体表面に固定化されたまま残留するはずである。固体表面上に固着した複合体の検出は多数の方法によって実施することができる。固定しない成分があらかじめ標識されている場合、表面に固定された標識の検出は複合体の形成を示す。固定しない成分があらかじめ標識されていない場合、表面に固着した複合体を検出するために、間接的標識を使用する。例えば、当初固定されなかった成分に特異的な標識抗体を使用する（代わりに、この抗体が直接標識されるか、または標識抗-Ig 抗体によって間接的に標識される）。反応成分の添加の順序に応じて、複合体の形成を阻害するかまたはすでに形成された複合体を分断する試験化合物を検出することができる。あるいはまた、試験化合物の存在下または不存在下の液相中で反応を実施し、反応生成物を非反応成分から分離し、そして、例えば、溶液中に形成された何らかの複合体を固着させるための結合成分の一方に対して特異的な固定化抗体と、固着した複合体を検出するための他方の相手に対して特異的な標識抗体を使用して、複合体を検出する。ここでも、液相への反応成分の添加の順序に応じて、複合体を阻害するかまたはすでに形成された複合体を分断する試験化合物を同定することができる。本発明の別の態様において、均一アッセイを使用することができる。このアプローチにおいて、あらかじめ形成させる標的遺伝子タンパク質および相互作用性の細胞または細胞外結合相手の複合体を、標的遺伝子産物またはその結合相手のいずれかを標識するが、その標識によって発生するシグナルが複合体の形成によって消失するように、調製する（例えば、イムノアッセイのためにこのアプローチを利用している、Rubensteinによる米国特許第4,109,496 号参照）。形成された複合体の１つの成分と競合してこれを追い出す試験物質の添加の結果、バックグラウンド値以上のシグナルが産生されることになる。この様にして、標的遺伝子タンパク質／細胞または細胞外結合相手相互作用を妨害する試験物質を同定することができる。特定の態様において、上記第５．５節に記載した組み換えＤＮＡ手法を使用して、固定化用の標的遺伝子産物を調製することができる。例えば、pGEX-5X-1 などの融合ベクターを使用して、生成する融合タンパク質中で結合活性が維持されるような方法で、標的遺伝子をコードする領域をグルタチオン-S- トランスフェラーゼ（GST）遺伝子に融合させることができる。相互作用性の細胞または細胞外結合相手を精製し、当技術分野で通常実用化されており、上記第５．６節に記載されている方法を使用して、モノクローナル抗体を産生させるのに使用することができる。当技術分野で通常実用化されている方法によって、例えば放射性同位体¹²⁵Ｉでこの抗体を標識することができる。不均一アッセイにおいて、例えば、GST-標的遺伝子融合タンパク質をグルタチオン−アガロースビーズに固着させることができる。その後、試験化合物の存在化または不存在化で、相互作用および結合が生じるような様式で、相互作用性の細胞または細胞外結合相手を添加することができる。反応時間の終了時に、非結合物質を洗浄によって除去し、この系に標識モノクローナル抗体を添加して複合体化した成分に結合させることができる。グルタチオン−アガロースビーズと結合したまま残っている放射能の量を測定することによって、標的遺伝子タンパク質と相互作用性の細胞または細胞外結合相手の間の相互作用を検出することができる。試験化合物による相互作用の良好な阻害は測定放射能の減少をもたらす。あるいはまた、固体のグルタチオン−アガロースビーズの存在しない液体中で、GST-標的遺伝子融合タンパク質および相互作用性の細胞または細胞外結合相手を共に混合することができる。これらの成分を相互作用させている間またはその後に、試験化合物を添加することができる。その後、この混合物をグルタチオン −アガロースビーズに添加して、非結合物質を洗浄して除去する。この場合も、標識抗体を添加し、ビーズに結合した放射能を測定することによって、標的遺伝子産物／結合相手相互作用の阻害の程度を検出することができる。本発明の別の態様において、一方のまたは両方の全長タンパク質に代えて、標的遺伝子産物および／または相互作用性の細胞若しくは細胞外結合相手（結合相手がタンパク質の場合）の結合ドメインに相当するペプチド断片を使用して、これらと同一の手法を実施することができる。結合部位を同定し、単離するためには、当技術分野で通常実用化されている多くの方法のいずれでも使用することができる。これらの方法としては、限定するわけではないが、これらのタンパク質をコードする遺伝子の突然変異誘発、および共免疫沈降アッセイにおける結合の分断についてのスクリーニングが挙げられる。その後、複合体中の第２の物質をコードする遺伝子における補完的(compensating)変異を選別する。対応するタンパク質をコードする遺伝子配列の分析によって、相互作用性結合に関与するタンパク質の領域に相当する変異が明らかになる。あるいはまた、この節で上記した方法を使用して、１つのタンパク質を固体表面に固着させ、トリプシンなどのタンパク質分解酵素で処理した標識結合相手と相互作用させて結合させる。洗浄後、結合ドメインを含有する短い標識ペプチドが固体物質に結合したままで残留し、これを単離してアミノ酸配列決定によって同定することができる。また、細胞または細胞外結合相手をコードする遺伝子を得た後、短い遺伝子セグメントを遺伝子操作して、このタンパク質のペプチド断片を発現させ、その後結合活性について試験し、そして精製または合成することができる。例えば、限定するわけではないが、この節で上記したように、GST-標的遺伝子融合タンパク質を製造し、これをグルタチオンアガロースビーズに結合させることによって、標的遺伝子産物を固体物質に固着させることができる。相互作用性の細胞または細胞外結合相手を³⁵Ｓなどの放射性同位体で標識し、トリプシンなどのタンパク質分解酵素で切断することができる。その後、切断産物を固着されたGST-標的遺伝子融合タンパク質に添加して結合させる。非結合ペプチドを洗浄して除去した後、細胞または細胞外結合相手の結合ドメインなどの標識結合物質を溶出させて、精製し、周知の方法によって、配列決定分析をする。こうして同定したペプチドを合成によって製造するか、または周知の組み換えＤＮＡ手法を使用して適当な融合しやすいタンパク質に融合させることができる。５．８．４免疫疾患症状の改善および／または標的遺伝子産物の機能のモジュレーションについてのアッセイ限定するわけではないが、前記のアッセイシステムにおいて同定された化合物などの結合性化合物のいずれかを、免疫疾患、例えばＴＨ細胞サブ集団関連疾患の症状を改善する能力について試験することができる。こうした免疫疾患の症状を改善する能力を示す化合物の同定のための、細胞を基礎とする、または動物モデルを基礎とする試験を以下に記載する。さらに、標的遺伝子産物が例えば10遺伝子産物の7 膜貫通ドメイン配列を有する受容体である例における、標的遺伝子産物の機能をモジュレートする化合物の同定のための、細胞を基礎とするアッセイを下記、第５．８．４．１節に記載する。最初に、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患の症状を改善するために作用する化合物を同定するために、上記第５．７．２節に記載したような細胞を基礎とする系を使用することができる。例えば、この疾患症状を改善する能力が存在すると推定される化合物に、このような細胞系を、暴露した細胞中でこうした改善を引き出すために十分な濃度および十分な時間、暴露させる。暴露後、細胞を試験して、１以上のＴＨ細胞サブ集団関連疾患に類似する細胞の表現型が、疾患症状がより軽症になる又は発生率が低下する傾向のある表現型に変更されたかどうかを判定する。その他の細胞を基礎とするアッセイを下記第５．８．４．１節で考察する。ＴＨ細胞サブ集団関連係疾患、喘息（これは特にＴＨ2 類似関連疾患であるが）をとりあげると、ＴＨ2 またはＴＨ2 様細胞系のいずれをも利用することができる。これらの細胞系に暴露させて、細胞のＴＨ2 様表現型を減少させるような、細胞のＴＨ2 様表現型をモジュレートする能力について、化合物をアッセイする。このようなＴＨ2 モジュレーション能力を有する化合物は、潜在的にin viv o で喘息に関連する症状を改善する能力を示す化合物を表す。その他、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患に類似する症状を改善する能力を有する化合物を同定するために、上記第５．７．１節に記載したような動物を基礎とする系を使用することができる。こうした動物モデルは、このような疾患を治療するのに有効な薬剤、製剤、治療法および介入法を同定するための試験対象として使用される。例えば、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患症状を改善する能力が存在すると推定される化合物に、暴露した動物中でこうした改善を引き出すために十分な濃度および十分な時間、このような動物モデルを暴露させる。暴露に対する動物の応答、すなわち問題の化合物の有効性を、対象とするＴＨ細胞サブ集団関連疾患に関連する疾患の逆転を評価することによって、モニターすることができる。介入に関しては、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患に類似する症状のいずれの観点からでも逆転する治療はどれでも、対応するヒトＴＨ細胞サブ集団関連疾患の治療上の介入の候補として考えるべきである。試験薬剤の１投与量は、下記第５．10節で記載するように、用量−応答曲線から誘導して決定することができる。ＴＨ細胞サブ集団関連疾患に類似する症状を改善する化合物の能力を評価するため、細胞を基礎とする系または動物を基礎とする系のいずれかと組み合わせて、遺伝子発現パターンを利用することができる。例えば、１以上のフィンガープリント遺伝子の発現パターンが、その後こうした評価において使用することができるあるフィンガープリントプロフィールの部分を形成することができる。フィンガープリントプロフィールについては下記第５．11節に記載する。フィンガープリントプロフィールは、細胞および／または動物を基礎とするモデル系内でＴＨ細胞サブ集団関連疾患状態または正常なＴＨ細胞分化可能状態のいずれかのわかっている状態に関して特性化することができる。５．８．４．１．標的遺伝子産物の機能をモジュレートする化合物の同定方法この節においては、受容体標的遺伝子産物のアゴニストまたはアンタゴニストのいずれかとして作用する化合物を同定するための方法を記載する。10遺伝子産物（図9A−9D；配列番号９）は７膜貫通ドメイン標的遺伝子産物の１例である。説明を簡単にするため、したがって限定するわけではないが、この節において記載する方法を説明するために、10遺伝子産物を使用することとする。試験される化合物は、例えば、上記第５．８．１節から第５．８．３節に記載したアッセイによって同定されたような化合物である。こうした化合物としては、限定するわけではないが、例えば以下の物質が挙げられる；限定するわけではないが、標的遺伝子産物膜貫通受容体の細胞外部分を含有するIg末端融合ペプチドなどの可溶性ペプチドおよびランダムペプチドライブラリーのメンバー（例えば、Lam,K.S.ら、1991,Nature 354:82-84;Houghten,R.ら、1991,Nature 354:84- 86参照）などのD-および／またはL-配座アミノ酸からなるペプチド、ホスホペプチド（限定するわけではないが、ランダムまたは部分的に変性されたホスホペプチドライブラリーのメンバー；例えばSongyang,Z．ら、1993,Cell 72:767-778参照）、抗体（限定するわけではないが、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト化、抗イディオタイプ、キメラまたは単鎖抗体、ならびにFAb、F(ab')₂およびFAb 発現ライブラリー断片、そしてこれらのエピトープ結合断片を含む）および小さな有機または無機分子。ここに記載するアッセイは、こうした７膜貫通ドメイン受容体標的タンパク質（例えば10遺伝子産物）を発現する細胞内で細胞内カルシウム放出に影響を与えることによって受容体標的遺伝子活性に影響を与える化合物を同定するための機能的なアッセイである。こうした７膜貫通ドメイン受容体はＧタンパク質に結合した受容体であることが多く、そしてこれらの受容体の活性化はＧタンパク質によって仲介される細胞内カルシウムの放出をもたらすので、細胞内カルシウム放出を測定するのである。そして、受容体標的遺伝子産物の機能のモジュレーション（すなわち、アゴニストまたはアンタゴニストの作用）の結果、細胞内カルシウムのレベルの差異を生じる。アッセイは、７膜貫通ドメイン受容体標的遺伝子を発現する細胞を試験化合物と接触させ、細胞内カルシウムのレベルを測定することを含んでいる。その化合物が不在の場合にその細胞が示すはずのものと異なった細胞内カルシウムプロフィールを生成する化合物はアゴニストまたはアンタゴニストのいずれかである。アゴニスト化合物であれば、対照細胞と比較して細胞内カルシウムレベルが上昇する結果となり、一方アンタゴニストであれば、対照細胞と比較して細胞内カルシウムレベルが減少する結果となる。７膜貫通受容体標的遺伝子産物を発現するいずれの細胞もここで使用することができるが、細胞内カルシウムレベルを容易に測定することができる細胞を使用するのが好ましい。Xenopus oocytes はサイズが大きいことから、細胞内カルシウムのリポーター化合物を容易に注入することができるので、こうした好ましい細胞の１つである。その他、ミエローマ細胞を利用することもできる。こうしたリポーター化合物としては、限定するわけではないが、周知のFURA-2およびINDO -2などのカルシウム結合性薬剤が挙げられる。FURA-2／カルシウム複合体および INDO-2／カルシウム複合体は蛍光を発するので、細胞内カルシウムレベルの差異を測定することが可能になる。ここに記載するアッセイのために、Xenopus oocytes を対象とする標的タンパク質（例えば、10遺伝子産物）をコードするヌクレオチド配列でトランスフェクトする必要がある。当業者にとって周知の手法によって、この細胞に対象配列をトランスフェクトして、発現させることができ、これには例えば、上記第５．５節に記載した手法が含まれる。対象の標的遺伝子産物をコードし、注入を受けた oocytes がその遺伝子産物を発現するようなＲＮＡをXenopus oocytes に注入する。この節において記載するアッセイを、まず、対象の標的遺伝子産物、例えば10 遺伝子産物のアゴニストとして作用する化合物を同定するために使用することにする。ここで使用する“アゴニスト”は、標的遺伝子産物の活性を増加させることによって、標的遺伝子産物の活性をモジュレートする化合物をいい、これは細胞内カルシウムレベルの増加に通じる、この化合物のカルシウムの流入をもたらす能力として評価される。このようなアゴニストの中には、例えば、受容体標的遺伝子産物に対する天然のリガンド、例えば10遺伝子産物に対する天然のリガンドがある。これらのアッセイによって同定されるアゴニストは、広範囲にわたるＴ細胞関連疾患の改善のために有効な治療用薬剤として作用すると考えられる。この疾患の例としては、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患が挙げられ、この例ではこうした疾患は標的遺伝子産物活性のレベルの減少または消失が原因となる。ここで同定されたアゴニスト化合物のいずれをも、例えば下記第５．９．２節に記載する治療方法の一部として使用することができる。さらに、こうしたアゴニストは、例えば下記のような、対象とする受容体標的遺伝子産物のアンタゴニストを同定するために、使用することができる。ここで使用する“アンタゴニスト”は、標的遺伝子産物の活性を減少させることによって、標的遺伝子産物の活性をモジュレートする化合物をいい、これはこの化合物のカルシウムの流入の減少をもたらす能力として評価される。このアッセイによって同定されるアンタゴニストは、広範囲にわたるＴ細胞関連疾患の改善のために有効な治療用薬剤として作用すると考えられる。この疾患の例として、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患が含まれ、この例ではこうした疾患は標的遺伝子産物活性のレベルの増加または不適切化が原因となる。上記の標的遺伝子産物を発現する細胞を利用して、アンタゴニストのスクリーニングを実施することができる。この細胞としては、限定するわけではないが第 10遺伝子発現細胞、例えば第10遺伝子を発現するアフリカツメガエルの卵母細胞が含まれる。Ｔ細胞関連疾患が変異標的遺伝子産物に起因する例においては、アンタゴニストアッセイに利用される細胞を、Ｔ細胞関連疾患の原因に関与する変異受容体標的遺伝子産物を発現する細胞とすることができる。アンタゴニストのスクリーニングを実施するため、標的遺伝子発現細胞を、１）標的遺伝子産物のアゴニスト、および２）試験化合物と、一定時間接触させる。その後、この細胞中およびアゴニストのみと接触させた細胞中の細胞内カルシウムのレベルを測定する。試験化合物の存在下での細胞内カルシウムの放出レベルが試験化合物の不在下での細胞内カルシウムの放出レベルよりも低い場合、その試験化合物はアンタゴニストであると考えられる。ここで同定されたアンタゴニスト化合物のいずれをも、例えば下記第５．９．１節に記載する治療方法の一部として使用することができる。ここに記載した７膜貫通ドメイン受容体標的遺伝子産物のアンタゴニスト化合物として可能なものに、１以上のこの受容体標的遺伝子産物の細胞外ドメインを含有するペプチドがあり、好ましくはそれらのドメインはペプチドがリガンドに対する内在性の受容体に競合作用をするような、リガンドとの結合にかかわるドメインである。例えば、第10遺伝子産物の場合、こうした細胞外ドメインは第10 遺伝子産物のほぼ 1-19 アミノ酸残基、74-87 アミノ酸残基、153-187 アミノ酸残基および254-272 アミノ酸残基を含む。こうした細胞外ドメインアンタゴニスト化合物は、上記第５．５節に記載したような手法を利用することによって製造することができる、可溶性Ig尾部融合タンパク質を含んでもよい。その他、第10 遺伝子産物の細胞外部分に対する抗体は、例えばリガンドの結合をブロックすることによって、第10遺伝子産物の機能を減少させることもある。５．９．免疫疾患の治療およびＴＨ細胞の応答性のモジュレーションのための化合物および方法免疫疾患症状を例えば対象とするＴＨ細胞サブ集団のモジュレーションによって改善するために使用することができる方法および組成物を以下に記載する。これらのモジュレーションは、各モジュレーション作用が免疫疾患の症状を改善する総合的な結果を与えるかぎりにおいて、関与する特定の状況に応じて、正のまたは負の性質のものでよい。さらに、ＴＨ細胞の抗原に対する応答性をモジュレートするための方法を以下に記載する。ここで使用する“負のモジュレーション”とは、モジュレーション処置をしない場合の標的遺伝子産物のレベルおよび／または活性に対する、標的遺伝子産物のレベルおよび／または活性の減少をいうこととする。あるいはまた、ここで使用するこの用語は、モジュレーション処置をしない場合に存在する数と比較した、Ｔ細胞サブ集団の（例えば、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数の減少による）枯渇(depletion)をいうこととする。ここで使用する“枯渇”は上記第３節で定義したものである。ここで使用する“正のモジュレーション”とは、モジュレーション処置をしない場合の標的遺伝子産物のレベルおよび／または活性に対する、標的遺伝子産物のレベルおよび／または活性の増加をいうこととする。あるいはまた、ここで使用するこの用語は、モジュレーション処置をしない場合に存在する数と比較した、Ｔ細胞サブ集団の（例えば、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数の増加による）刺激をいうこととする。ここで使用する“刺激”は上記第３節で定義したものである。ＴＨ細胞サブ集団関連疾患または他の免疫疾患は、例えば、免疫応答を引き出すようなある種の抗原に暴露される間の正常な標的遺伝子の活性の結果として生起し、それによって疾患が進行する場合がある。例えば、ＴＨ2-様関連疾患の喘息およびアレルギーは、こうしたメカニズムを有する疾患の候補である可能性が高い。その他、少なくとも部分的に、標的遺伝子産物の異常な高レベル、または異常活性を示す標的遺伝子産物の存在によって、疾患がもたらされることがある。これらの場合、負のモジュレーション効果を引き出す、すなわち標的遺伝子産物のレベルおよび／または活性の減少をもたらす、あるいはＴＨ細胞サブ集団の（例えば、ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数を物理的に減少させることによる）枯渇をもたらす手法が、上記の筋書きのいずれかによって、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患症状の改善に影響することになる。（正常または異常な）標的遺伝子発現レベルまたは標的遺伝子産物の活性レベルの減少、および特異的ＴＨ細胞サブ集団細胞の数の減少のための負のモジュレーション手法を下記第５．９．１節で考察する。あるいはまた、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患または他の免疫疾患が、少なくとも部分的に、標的遺伝子発現の不在またはレベルの減少、標的遺伝子産物の活性レベルの減少、あるいは特異的ＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の総数の減少によってもたらされることがある。これらの場合、正のモジュレーション効果を引き出す、すなわち標的遺伝子発現のレベルおよび／またはこうした遺伝子産物の活性の増加をもたらす、あるいはＴＨ細胞サブ集団の（例えばＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数を物理的に増加させることによる）刺激をもたらす手法が、免疫疾患症状の改善に影響することになる。例えば、HIV-感染個体内のＴＨ2-様細胞に比較したＴＨ1-様細胞の総数の減少がAIDSへの進行と相関し得る（Clerci,M．ら、1993,J.Clin.Invest.91:759；Cle rci,M.ら、1993,Science262:1721；Maggi,E.ら、1994,Science265:244）。HIV- 感染個体内のＴＨ2-様細胞に比較したＴＨ1-様細胞の数を増加させることができる治療は、したがって、疾病への進行を阻止するかまたは遅らせる作用をすると思われる。標的遺伝子発現レベルまたは標的遺伝子産物の活性レベルを増加させる、そして特異的ＴＨ細胞サブ集団細胞のレベルを増加させるための正のモジュレーション手法を、下記第５．９．２節で考察する。症状を改善することができる免疫疾患として、ＴＨ1またはＴＨ1様関連疾患およびＴＨ2またはＴＨ2様関連疾患がある。ＴＨ1またはＴＨ1様関連疾患の例には、クローン病などの慢性炎症疾病および疾患、ライム病を含む反応性関節炎、インスリン依存性糖尿病、多発性硬化症、ハシモト甲状腺症およびグレイブ病を含む器官特異性自己免疫、接触皮膚炎、乾癬、移植片拒絶、移植片対宿主病およびサルコイドーシスが含まれる。ＴＨ2またはＴＨ2様関連疾患の例には、喘息およびアレルギー性鼻炎、消化器アレルギー（食物アレルギーを含む）を含むアレルギーなどのアトピー症状、好酸球増加症、結膜炎、糸球体腎炎、寄生虫（例えばリーシュマニア症）などのある種の病原体感受性症ならびにHIV を含むある種のウイルス感染症、そして結核および癩腫癩を含む細菌感染症が含まれる。ここに記載する方法は、さらに、応答性、例えば、抗原に対するＴＨ細胞サブ集団の応答性のレベルをモジュレートするために利用される。多くの免疫疾患には不十分なというよりは不適切な免疫応答が関与するので、こうした方法は重要である。例えば、喘息、病原体感受性症および慢性炎症を含むアトピー性IgE 仲介アレルギー症状などの疾患には強いがしかし対抗生産性(counterproductive) のＴＨ2-仲介免疫応答が関与する。さらに、自己抗原に対する不適切なＴＨ1-仲介免疫応答は、多発性硬化症、乾癬、インスリン依存性糖尿病、ハシモト甲状腺症およびクローン病などの疾患の進行の中心となる。ＴＨ細胞の応答性をモジュレートする方法には、例えば、ある化合物をＴＨ細胞と接触させて、その化合物が不在の場合のＴヘルパー細胞の応答性と比較して、Ｔヘルパー細胞の応答性をモジュレートする工程が含まれてもよい。モジュレーションはＴＨ細胞の応答性を増加することも減少することもある。下記第５．９．１−５．９．３．２節に記載したいずれかの手法を利用して、ＴＨ細胞の応答性の適切なモジュレーションに効果を与えることができる。 5.9.1 負のモジュレーター技術先に説明したとおり、ある免疫疾患の治療の成功は、標的遺伝子産物の発現および活性を抑制するのに利用できる技術、および特異的なTH細胞サブ集団に属する細胞全体の数を減少させるのに利用できる技術によりもたらされる。例えば、負のモジュレーター活性を示す、上記5.8 節で記載したアッセイにより同定された化合物を、本発明に従ってあるTH細胞サブ集団関連症状を改善させるために使用することができる。先に5.8 節で説明したように、このような分子として、ペプチド（例えば、標的遺伝子産物膜貫通受容体の可溶性細胞外部分に相当するペプチドなど）、ホスホペプチド、小さい有機および無機分子、および抗体（例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗イディオタイプ抗体、キメラ抗体もしくは一本鎖抗体、並びにそれらのFAb、F(ab')₂ およびFAb 発現ライブラリー断片、およびエピトープ結合断片が含まれる）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。このような化合物の有効投与量の決定および投与は、下記の5.10節に記載する。さらに、標的遺伝子の発現を抑制するアンチセンス分子およびリボザイム分子はまた、本発明に従って標的遺伝子発現のレベルを低下させ、こうして標的遺伝子活性のレベルを有効に低下させるために使用することができる。さらに、三重らせん分子を標的遺伝子活性のレベルを低下させるために利用することができる。このような技術は、下記の5.9.1.1 節に記載する。さらに、特定のTH細胞サブ集団を枯渇させる技術を下記の5.9.3 節で説明する。このような技術では、例えば、枯渇させるべきTH細胞サブ集団に特異的な新規な細胞表面マーカーを利用することができ、目的のTH細胞サブ集団のin vivo もしくはin vitro でのターゲティング破壊、または、選択的精製除去を含んでもよい。本発明により記載された方法により同定されたTH細胞サブ集団関連配列の中に、下記第７節に示した実施例で説明するように、本明細書中で103 遺伝子と呼ぶ遺伝子がある。103 遺伝子の発現がTH1 細胞だけでなく試験した全てのその他の組織で見られなかったことから、103 遺伝子はTH2 特異性遺伝子を表すことが本明細書において証明された。さらに、103 遺伝子により生産されたタンパク質の少なくとも一種は膜貫通タンパク質である。それゆえ、103 遺伝子およびその産物をTH2 細胞サブ集団関連疾患の治療に利用することができる。例えば、103 遺伝子産物およびその一部分は、アレルギーおよび／および喘息ようなアトピー症状に伴う症候を含むが、これらに限定されるものではない、不適当なIgE 免疫応答を伴う症状を改善するために、直接および間接に利用することができる。IgE 型抗体は、刺激されたＢ細胞により産生され、このＢ細胞はTH2 細胞サブ集団により産生されるIL-4を、少なくとも一部必要とする。それゆえ、例えば、TH2 細胞の数を減少させるかまたは活性を低下させることにより、分泌されるIL-4の有効濃度を低下させる、遺伝子103 産物およびその一部分の使用を含めて、あらゆる治療によって、循環IgE のレベルを低下させることができ、そして、不適当なIgE 免疫応答に由来する症状の改善を行うことができる。 TH2 特異性103 遺伝子産物をTH2 細胞の活性および／および有効濃度のこのような低下を行うために使用することができる種々の方法が存在する。例えば、10 3 遺伝子産物に結合する、天然リガンド、天然リガンドの誘導体および抗体が、このような細胞を集団中の他の細胞から物理的に分離し、それによってTH2 細胞サブ集団を枯渇させることによって、または、TH2 細胞の特異的破壊をターゲッティングすることによって、存在するTH2 細胞の数を減少させるために利用することができる。このような技術を、下記の5.9.3 節で説明する。さらに、このような化合物はTH2 細胞の分化増殖を抑制するために使用することができる。さらに、103 遺伝子配列および遺伝子産物のような化合物はTH2 細胞活性のレベルを低下させ、IL-4産生の低下を生じさせ、最終的に、IgE 関連疾患の改善をもたらすために利用することができる。例えば、103 遺伝子産物に対する内因性リガンドと競合する化合物を投与することができる。リガンド結合103 遺伝子膜貫通タンパク質の量の減少が生じると、TH2 細胞活性がモジュレートされるあろう。この目的に特に有益であり得る化合物として、例えば、Ig末端融合タンパク質などの可溶性タンパク質を含めて、細胞外ドメインを含む遺伝子103 産物の可溶性タンパク質またはペプチド、またはそれらの一部分および／または類似体が挙げられる（Ig末端融合タンパク質の生産の説明については、例えば、米国特許第5,116,964 号明細書を参照のこと）。 Igスーパーファミリーのメンバーである受容体標的遺伝子産物をコードする新規な200 遺伝子は、遺伝子発現のTH1 特異的パターンを示す。そのため、200 遺伝子、特にヒトの200 遺伝子、およびその産物は、TH1 細胞サブ集団関連疾患、例えば、慢性炎症性疾患、乾癬、移植片拒絶および移植片対宿主病の治療に利用することができる。このような疾患の治療は、目的の疾患に関係するTH1 細胞サブ集団の活性および／または有効濃度の低下を必要とするかもしれない。このようなものとして、 TH1 特異的200 遺伝子産物を、TH1 細胞の活性および／または有効濃度のこのような低下に影響を与えるために使用することができる、多くの方法がある。例えば、200 遺伝子産物に結合する、天然リガンド、天然リガンドの誘導体および抗体を、このような細胞を集団中の他の細胞から物理的に分離し、それによりTH1 細胞サブ集団を枯渇させることによって、または、TH1 細胞の特異的破壊をターゲッティングすることによって、TH1 細胞の数を減少させるために利用することができる。このような技術を下記の第5.9.3 節に説明される。さらに、このような化合物はTH1 細胞の増殖分化を抑制するためにに使用することができる。さらに、200 遺伝子産物に対する内因性リガンドと競合する化合物を投与することができる。このような化合物は循環リガンドに結合し、それを“中和する” はずである。リガンド結合200 遺伝子膜貫通タンパク質の量減少により、TH1 細胞活性がモジュレートされるであろう。この目的に特に有益であり得る化合物として、例えば、Ig末端融合タンパクなどの可溶性融合タンパク質および抗体を含めて、細胞外ドメインを含む遺伝子200 産物の可溶性タンパク質およびペプチド、またはその部分および／または類似体が挙げられる（Ig末端融合タンパク質の生産の説明については、例えば、米国特許第5,116,964 号明細書を参照のこと）。この目的のために、200 遺伝子産物のECD に相当するペプチド、200 遺伝子産物の可溶性欠失変異体、またはこれらの200 遺伝子産物ドメインまたは別のポリペプチドに融合した変異体（例えば、IgFc- ポリペプチド）のペプチドのいずれかを利用することができる。また、抗イディオタイプ抗体または200 遺伝子産物のECD を模倣し、200 遺伝子産物リガンドを中和する抗イディオタイプ抗体のFa b 断片を使用することができる。このような200 遺伝子産物ペプチド、タンパク質、融合タンパク質、抗イディオタイプ抗体またはFabを、Ｏｂを中和し、Ｔ細胞サブ集団関連疾患の改善を図るために充分な量で被験者に投与する。アミノ酸残基番号約21から約192 までの図17に示されたアミノ酸配列を有する ECD に相当する200 遺伝子産物ペプチドを使用することができる。アミノ酸残基番号約21から約200 までの図24に示されたアミノ酸配列を有するECD に相当するヒトの200 遺伝子産物ペプチドもまた、使用することができる。また、疎水性アンカー配列(例えば、図17中のアミノ酸残基番号約193-214、および図24中の約 201-約224)の全部または一部である変異体を使用することができる。IgFcポリペプチドへのこれらのペプチドの融合は、その調製品の安定性を増大させるはずであるばかりでなく、in vivo での融合タンパク質の半減期を延ばし、活性を高めるであろう。融合タンパク質のIg部分のFc領域をさらに修飾して、免疫グロブリンのエフェクター機能を低下させてもよい。例えば、融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、Fc受容体へのIgG の結合および補体活性化に要求されると考えられているCH2 ドメイン内のセリン残基および／またはヒンジ領域中のシステイン残基をセリン残基で置換する融合タンパク質をコードするように修飾されてもよい。循環200 遺伝子産物リガンドを中和するための別の実施態様では、このような可溶性型または分泌型の200 遺伝子産物を発現するように遺伝子操作した細胞を患者に投与してもよく、その後それらはin vivo で“バイリアクター”として作用し、200 遺伝子産物リガンド中和タンパク質を連続供給するだろう。このような細胞は、患者またはMHC 適合ドナーから得らてもよく、繊維芽細胞、血液細胞（例えば、リンパ球）、脂肪細胞、筋肉細胞、内皮細胞、等を含んでもよいが、これらに限定されるものではない。細胞をin vitroでで遺伝子組換え技術を用いて遺伝子操作し、200 遺伝子産物ペプチドのコード配列、または200 遺伝子産物融合タンパク質を、例えば、形質導入操作（ウイルスベクター、好ましくはトランスジーンを細胞ゲノムに組込むベクターを使用する）、およびプラスミド、コスミド、YAC、エレクトロポレーション、リポソームなどの使用を含むが、これらに限定されるものではないトランスフェクション操作によって、細胞に導入する。200 遺伝子産物コード配列は、200 遺伝子ペプチドまたは融合タンパク質の発現および分泌を達成させるために強力な構造プロモーターまたは誘導プロモーターおよびプロモーター／エンハンサーの制御下に置くことができるる。所望の 200 遺伝子産物を発現し、分泌する遺伝子操作された細胞を、患者に対して、全身的に、例えば、循環系中または腹腔内に導入することができる。また、細胞を基材に取込み、生体に移植することができ、例えば、遺伝子操作した繊維芽細胞を皮膚移植片の材料として移植することができ、遺伝子操作した血管内皮細胞を血管移植片の材料として移植することができる（例えば、Andersonらの米国特許第5,399,349 号、およびMulligan＆Wilsonの米国特許第5,460,959 を参照のこと；これらの特許はそれぞれ、参考として本明細書にそのまま含まれる）。投与されるべき細胞が非自己細胞である場合、それらは導入された細胞に対する宿主免疫応答の発生を妨げる周知技術を使用して投与することができる。例えば、この細胞は封入型で導入してもよく、これにより、細胞外の環境と成分との速やかな交換を可能にするが、導入細胞は宿主免疫系により認識されない。このようなアプローチおよび技術は、明確化のために、200 遺伝子産物を例にとって記載するが、それらはこのような受容体型構造を有する標的および／または経路遺伝子産物のいずれにも適用することができることが理解されるべきである。 10遺伝子産物を、７つの膜貫通ドメイン配列モチーフを有する受容体標的遺伝子産物として本明細書中で同定した。さらに、10遺伝子は発現のTH誘導パターンを示すことが示され、これは10遺伝子の発現が刺激に応答してTH1 細胞サブ集団およびTH2 細胞サブ集団の両方で亢進し、一般にＴ細胞応答に重要であることを意味する。それゆえ、10遺伝子およびその産物は広範なＴ細胞関連疾患の治療に利用することができる。103 遺伝子および200 遺伝子並びに遺伝子産物について上述したような技術もまた、10遺伝子の発現が関係する疾患の改善に利用することができる。 5.9.1.1.負のモジュレーターアンチセンス、リボザイムおよび三重らせんアプローチ TH細胞サブ集団関連症状の改善能を示すことができる化合物の中に、アンチセンス分子、リボザイム分子、および三重らせん分子がある。このような分子は、野生型、または適当な場合には、変異体標的遺伝子の活性を低下または阻害するように設計することができる。このような分子の産生および使用のための技術は当業者に周知である。アンチセンスアプローチは、標的または経路遺伝子ｍＲＮＡに相補的であるオリゴヌクレオチド（ＤＮＡおよびＲＮＡ）の設計を含む。アンチセンスオリゴヌクレオチドは相補的な標的および経路遺伝子ｍＲＮＡ転写産物に結合し、翻訳を阻害するであろう。絶対的な相補性が好ましいが、必ずしも必要とされない。本明細書でいう、ＲＮＡの一部に“相補的”な配列は、ＲＮＡとハイブリダイズして、安定な二重鎖を形成するのに充分な相補性を有する配列を意味する。二本鎖アンチセンス核酸の場合、二重鎖ＤＮＡの片側の一本鎖をこのように試験してもよく、または三重鎖形成を分析してもよい。ハイブリダイズ形成能は相補性の程度およびアンチセンス核酸の長さの両方に依存するであろう。一般に、ハイブリダイズする核酸が長い程、より多くの塩基がＲＮＡとミスマッチとなるが、それは安定な二重鎖（または場合によっては三重鎖）を含むことができ、依然として安定な二重鎖を形成することができる。当業者はハイブダイズした複合体の融点を決定するための標準的な手順を使用することにより、許容できる程度のミスマッチを確認することができる。メッセージの5'末端、例えば、AUG 開始コドンまでの5'未翻訳配列（AUG 開始コドンを含む）に相補的なオリゴヌクレオチドは、翻訳の阻害に際して最も有効に作用するはずである。しかしながら、ｍＲＮＡの3'未翻訳配列に相補的な配列は、同様にｍＲＮＡの翻訳を阻害する際に有効であることが最近示された。総説として、Wagner，R.，1994，Nature 372:333-335を参照のこと。こうして、例えば、図9A-9D、17A-17D、22A-22C、23A-23C および24A-24D に示すような標的遺伝子および経路遺伝子の5'- または3'- 非翻訳、非コード領域に相補的なオリゴヌクレオチドを、内因性の標的遺伝子および経路遺伝子ｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプローチに使用することができる。ｍＲＮＡの5'未翻訳領域に相補的なオリゴヌクレオチドは、AUG 開始コドンの相補体を含むはずである。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドは、それ程有効ではない翻訳のインヒビターであるが、本発明に従って使用することができる。標的および経路遺伝子ｍＲＮＡの5'-、3'- またはコード領域にハイブリダイズするように設計する場合は、アンチセンス核酸は少なくとも６ヌクレオチド長を有すべきであり、６から約50ヌクレオチド長までの範囲のオリゴヌクレオチドであることが好ましい。特別な場合には、オリゴヌクレオチドは、少なくとも10ヌクレオチド、少なくとも17ヌクレオチド、少なくとも25ヌクレオチドまたは少なくとも50ヌクレオチドである。標的配列の選択にかかわらず、in vitroの研究を最初に行い、遺伝子発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチドの能力を定量することが好ましい。これらの研究では、オリゴヌクレオチドのアンチセンス遺伝子の阻害と非特異的な生物学的効果とを区別する対照を利用することが好ましい。また、これらの研究では、標的ＲＮＡまたはタンパク質のレベルを内部対照ＲＮＡおよびタンパク質のレベルと比較することが好ましい。さらに、アンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して得られた結果を、対照オリゴヌクレオチドを使用して得られた結果と比較することが想像される。対照オリゴヌクレオチドは試験オリゴヌクレオチドとほぼ同じ長さであることが好ましく、またこのオリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列は標的配列への特異的ハイブリダイゼーションを妨害するのに必要とされない配列よりも長くはないアンチセンス配列とは異なることが好ましい。オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡもしくはＲＮＡまたはキメラ混合物もしくはこれらの誘導体またはこれらの修飾型であってもよく、一本鎖もしくは二本鎖であってもよい。オリゴヌクレオチドは、塩基部分、糖部分、およびリン酸基骨格を修飾することができ、例えば、その分子の安定性、ハイブリダイゼーション等を改良することができる。オリゴヌクレオチドは、その他の付随グループ、例えば、ペプチド（例えば、宿主細胞受容体をin vivo でターゲッティングするため）、および細胞膜を通過する輸送を促進する薬剤（例えば、Letsinger ら，1989，Proc ．Natl．Acad．Sci. U.S.A．86:6553-6556; Lemaitreら，1987，Proc ．Natl . Acad. Sci ．84:648-652; 1988 年12月15日に公開されたPCT 国際公開番号WO88 /09810を参照のこと）または血液脳関門（例えば、1988年４月25日に公開された PCT 国際公開番号 WO89/10134 を参照のこと）、ハイブリダイゼーション誘発開裂剤(例えば、Krolら，1988，BioTechniques 6:958-976)およびインターカレーテト剤（例えば、Zon，1988，Pharm. Res ．5:539-549を参照のこと）を含んでもよい。この目的のために、オリゴヌクレオチドを、別の分子、例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーション誘発架橋剤、輸送剤、ハイブリダイゼーション誘発開裂剤等に接合してもよい。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾塩基部分を含み、これらの塩基部分は、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルケオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルケオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸(v)、ワイブトキソシン、シュードウラシル、ケオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５ −メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５− オキシ酢酸(v)、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ− ２−カルボキシプロピル）ウラシル、(acp3)w、および２，６−ジアミノプリンを含むが、これらに限定されるものではない郡から選ばれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、アラビノース、２−フルオロアラビノース、キシルロース、およびヘキソースを含むが、これらに限定されるのものではない群から選ばれる少なくとも一つの修飾された糖部分を含んでもよい。さらに別の実施態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロアミドチオエートホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、メチルホスホネート、アルキルホスホトリエステル、およびホルムアセタールまたはこれらの類似体からなる群から選ばれた少なくとも一つの修飾されたリン酸骨格を含む。さらに別の実施態様では、アンチセンスオリゴヌクレオチドはα−アノマーオリゴヌクレオチドである。α−アノマーオリゴヌクレオチドは、相補的なＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッドを形成し、この場合、通常のβ−単位とは逆に、鎖が互いに平行になる(Gautier ら，1987，Nucl. Acids Res ．15:6625-6641)。オリゴヌクレオチドは２’−Ｏ−メチルリボヌクレオチド(Inoueら，1987，Nucl . Acids Res ．15: 6131-6148)、またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡ類似体(Inoueら，1987 ，FEBS Lett ．215:327-330)である。本発明のオリゴヌクレオチドは、当業界で公知の標準的な方法、例えば、自動ＤＮＡ合成装置（例えば、Biosearch、Applied Biosystems等より市販されている）を使用して合成してもよい。例として、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、Stein らの方法(1988, Nucl ．Acids Res．16:3209)により合成してもよく、メチルホスホネートオリゴヌクレオチドは多孔性ガラスポリマー担体(Sarin ら，1988，Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A. 85:7448-7451)等を使用して作製することができる。アンチセンス分子は、in vivo で標的遺伝子または経路遺伝子を発現する細胞に送達されるべきである。アンチセンスＤＮＡおよびＲＮＡを細胞に送出するために、多くの方法が開発されている。例えば、組織部位に直接注射できるアンチセンス分子、または所望の細胞を標的とするように設計した修飾アンチセンス分子（例えば、標的細胞表面で発現された受容体または抗原と特異的に結合するペプチドまたは抗体に結合されたアンチセンス）は、全身投与することができる。しかしながら、内因性ｍＲＮＡの翻訳を抑制するのに充分なアンチセンスの細胞内濃度を達成することはしばしば困難である。それゆえ、好ましいアプローチは、組換えＤＮＡ構築物を利用するものであり、ここでは、アンチセンスオリゴヌクレオチドが強力なpol III またはpol IIプロモーターの制御下に置かれる。患者中の標的細胞をトランスフェクトするためのこのような構築物の使用は、内因性標的遺伝子または経路遺伝子転写産物と相補的塩基対を形成する一本鎖ＲＮＡの転写を生じさせ、それによって標的遺伝子または経路遺伝子ｍＲＮＡの翻訳を阻止する。例えば、細胞に取り込まれ、アンチセンスＲＮＡの転写を指示するように、ベクターをin vivo で導入することができる。このようなベクターはエピソームのまま残ることができるか、またはそれが所望のアンチセンスＲＮＡを産生するように転写され得る限り、染色体に組込まれるようになる。このようなベクターは、当業界で標準的な組換えＤＮＡ技術により構築することができる。ベクターは、哺乳類細胞中における複製および発現に使用される、プラスミド、ウイルス、および当業界で知られているその他のベクターであってもよい。アンチセンスＲＮＡをコードする配列の発現は、哺乳類、好ましくはヒトの細胞中で作用するための当業界で知られているあらゆるプロモーターによるものであってもよい。このようなプロモーターは、誘導または構成プロモーターであってもよい。このようなプロモーターとして、SV初期期プロモーター領域(Bernoist およびChambon，1981, Nature 290:304-310)、ラウス肉腫ウイルスの3'ロングターミナルリピート中に含まれるプロモーター(Yamamoto ら，1980，Cell 22:787-797) 、ヘルペスのチミジンキナーゼプロモーター(Wagnerら，1981，Proc ．Natl. Aca d .Sci.U.S.A. 78:1441-1445)、メタロチオネイン遺伝子の調節配列(Brinster ら，1982，Nature 296:39-42）等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。あらゆるプラスミド、コスミド、YAC およびウイルスベクターを、組織部位に直接導入することができる組換えＤＮＡ構築物を調製するために使用することができる。また、所望の組織に選択的に感染するウイルスベクターを使用することができる。リボザイムはＲＮＡの特異的開裂を触媒作用することができる酵素ＲＮＡ分子である（総説について、例えば、Rossi，J.，1994, Current Biology 4:469-471 を参照のこと）。リボザイム作用機序は、相補的な標的ＲＮＡへのリボザイム分子の配列特異的ハイブリダイゼーション、続いてエンドヌクレオチドの（endonu cleolytic）開裂を伴う。リボザイム分子の組成は標的遺伝子ｍＲＮＡに相補的な一つ以上の配列を含まなければならず、かつｍＲＮＡ開裂に対応する公知の触媒配列を含まなければならない。この配列については、米国特許第5,093,246 号明細書（これは参考として本明細書にそのまま含まれる）を参照のこと。このようなものとして、標的遺伝子タンパク質をコードするＲＮＡ配列のエンドヌクレオリチドの開裂を特異的かつ有効に触媒作用するように遺伝子操作したハンマーヘッドモチーフリボザイム分子が本発明の範囲内にある。標的または経路遺伝子ｍＲＮＡ転写産物を触媒的に開裂するように設計されたリボザイム分子はまた、標的または経路遺伝子ｍＲＮＡの翻訳および標的および経路遺伝子の発現を阻止するために使用することができる（例えば、1990年10月 4 日に公開されたPCT 国際公開WO90/11364; Sarverら，1990，Science 247:1222 -1225 を参照のこと）。部位特異的認識配列でｍＲＮＡを開裂するリボザイムを標的または経路遺伝子ｍＲＮＡを分解するために使用することができるが、ハンマーヘッドリボザイムの使用が好ましい。ハンマーヘッドリボザイムは標的ｍＲＮＡと相補的塩基対を形成するフランキング領域により示された位置でｍＲＮＡを切断する。唯一の要件は、標的ｍＲＮＡが二つの塩基からなる下記の配列：5' -UG-3'を有することである。ハンマーヘッドリボザイムの構築および作製は当業界で周知であり、HaseloffおよびGerlach,1988，Nature，334:585-591 に充分に記載されている。好ましくは、リボザイムを遺伝子操作して、開裂認識部位が標的または経路遺伝子ｍＲＮＡの5'末端付近に配置する。すなわち、効率を高め、非機能性ｍＲＮＡ転写産物の細胞内蓄積を最小にするように遺伝子操作することが好ましい。また、本発明のリボザイムは、エンドリボヌクレアーゼ（以下、“Cech型リボザイム”という）、例えば、Tetrahymena Thermophila(IVS、またはL-19 IVS RN Aとして知られている)中で自然に生じたものおよびThomas Cech および共同研究者らによりさらに広く記載されたもの(Zaug ら，1984，Science ，224:574-57 8; ZaugおよびCech，1986，Science ，231:470-475; Zaugら，1986，Nature ，324:4 29-433; University Patents Inc.の公開された国際特許出願番号WO88/0430 0; BeenおよびCech，1986，Cell ，47:207-216）などを含む。Cech型リボザイムは、８塩基対活性部位を有し、これが標的ＲＮＡ配列にハイブリダイズした後に、標的ＲＮＡの開裂が起こる。本発明は、標的または経路遺伝子中に存在する８塩基対活性部位を標的とするこれらのCech型リボザイムを意図している。アンチセンスアプローチの場合のように、リボザイムは修飾オリゴヌクレオチド（例えば、改良された安定性、ターゲッティング等のためのもの）を含んでもよく、in vivo で標的または経路遺伝子を発現する細胞に送達されるべきである。好ましい送達方法は、強力な構成pol III またはpol IIプロモーターの制御下にリボザイムを”コードする”ＤＮＡ構築物を使用し、トランスフェクトした細胞が内因性標的または経路遺伝子メッセージを分解し、翻訳を阻害するのに充分な量のリボザイムを産生する。リボザイムはアンチセンス分子と異なり、触媒であるため、効率のためには低い細胞内濃度が必要だからである。本明細書に記載されたアンチセンス分子、リボザイム分子、および／または三重らせん分子を変異体遺伝子発現を阻害するために利用する場合、その技術はまた通常の標的遺伝子の対立遺伝子により産生されたｍＲＮＡの転写（三重らせん）および／または翻訳（アンチセンス、リボザイム）を有効に低下させるか、または阻害することができるという可能性があり、その蓋然性は、存在している通常の標的遺伝子産物の濃度が正常な表現型に必要とされるよりも低い場合に生じ得る。このような場合、標的遺伝子活性の実質的に正常なレベルが維持されることを確実にするために、正常な標的遺伝子活性を示す標的遺伝子ポリペプチドをコードし、発現する核酸分子を、アンチセンス処理、リボザイム処理、または三重らせん処理のいずれが利用されようともこれらに対して感受性である配列を含まない、下記の第5.9.2 節に記載されたような遺伝子治療方法により、細胞に導入することができる。また、標的遺伝子が細胞外タンパク質をコードする場合には、標的遺伝子活性の必要レベルを維持するために正常な標的遺伝子タンパク質を同時に投与することが好ましい。本発明のアンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡ、リボザイム、並びに三重らせん分子は、ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子の合成について当業界で公知のあらゆる方法により作製することができる。これらは、当業界で公知のオリゴデオキシリボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオチドを化学的に合成するための技術、例えば、固相ホスホルアミジト化学合成を含む。また、ＲＮＡ分子はアンチセンスＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ配列のin vitroおよびin vivo での転写により生成させることができる。このようなＤＮＡ配列は、好適なＲＮＡポリメラーゼプロモーター、例えば、T7およびSP6 ポリメラーゼプロモーターをとり込む種々のベクターにとり込まれ得る。また、使用されるプロモーターに応じて、アンチセンスＲＮＡを構成的および誘導的に合成するアンチセンスｃＤＮＡ構築物を細胞系に安定に導入することができる。ＤＮＡ分子に関する種々の公知の修飾を、細胞内の安定性を向上させ、および半減期を延ばす手段として導入することができる。可能な修飾として、その分子の5'末端および／または3'末端へのリボヌクレオチドおよびデオキシヌクレオチドのフランキング配列の付加またはオリゴデオキシリボヌクレオチド骨格中のホスホジエステラーゼ結合ではなくホスホロチオエート結合および２’Ｏ−メチル結合の使用が挙げられるが、これらに限定されるものではない。内因性の標的および／または経路遺伝子発現はまた、ターゲティングされた相同組換えを使用して、標的および／または経路遺伝子およびそのプロモーターを不活化または“ノックアウト”することにより低下させることができる（例えば、Smithiesら，1985，Nature 317:230-234; Thomas＆Capecchi，1987，Cell 51: 503-512; Thompson ら，1989 Cell 5:313-321 を参照のこと; これらのそれぞれが参考として本明細書にそのまま含まれる）。内因性標的および／または経路遺伝子（標的および／または経路遺伝子のコード領域または調節領域）に相同なＤＮＡに隣接した変異体、非機能性標的および／または経路遺伝子（および完全に無関係のＤＮＡ配列）を、選択可能なマーカーおよび／または陰性の選択可能なマーカーを用いるか、または用いずに、標的および／または経路遺伝子をin viv oで発現する細胞をトランスフェクトするために使用することができる。ターゲティングされた相同組換えによるＤＮＡ構築物の挿入は、標的および／または経路遺伝子の不活化をもたらす。このようなアプローチは、農業分野に特に適しており、この場合、ES（胚幹）細胞への修飾を、不活性標的および／または経路遺伝子を有する動物の子孫を作製するために使用することができる（例えば、Thom as＆Capecchi，1987およびThompson，1989、上出）。このような技術はまた、Ｔ細胞サブ集団関連疾患動物モデルを作製するために利用することができる。このアプローチは、組換えＤＮＡ構築物が適当なウイルスベクター、例えば、ヘルペスウイルスベクターを使用してin vivo で必要とされる部位に直接投与またはターゲティングすることを条件として、ヒトにおける使用に適合させることができるということに注目すべきである。また、内因性標的および／または経路遺伝子発現は、標的および／または経路遺伝子の調節領域に相補的なデオキシリボヌクレオチド配列（すなわち、標的および／または経路遺伝子プロモーターおよび／またはエンハンサー）をターゲッティングして、生体中の標的細胞中の標的および／または経路遺伝子の転写を阻止する三重らせん構造を形成することにより低下させることができる（一般に、 Helene,C．1991，Anticancer Drug Des.，6(6):569-84; Helene,C.ら，1992，An n，N.Y.Accad.Sci.,660:27-36;およびMaher,L.J.，1992，Bioassays 14(12):807 -15 を参照のこと）。本発明のさらに別の実施態様では、標的および／または経路遺伝子の活性は、“優性負(dominant negative)”アプローチを使用して低下させることができる。この目的のために、欠損標的および／または経路遺伝子産物をコードする構築物を、適当な標的細胞中で標的および／または経路遺伝子産物の活性を低下させるための遺伝子治療アプローチに使用することができる。 5.9.2. 正のモジュレーター技術先に説明したように、ある免疫疾患の治療は、標的遺伝子発現のレベルを高めるか、または標的遺伝子産物の活性を増加させるために利用できる技術、または特異的なTH細胞サブ集団に属するすべての細胞を有効に増加させるために利用できる技術により成功する。例えば、正のモジュレーター活性を示す、第5.8 節に記載したアッセイにより同定されたような化合物を、本発明に従ってあるTH細胞サブ集団関連症状を改善するために使用することができる。上記第5.8 節に説明したように、このような分子として、標的遺伝子産物の膜貫通タンパク質の可溶性細胞外部分に相当するペプチド、ホスホペプチド、小さい有機および無機の分子、および抗体（例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗イディオタイプ抗体、キメラ抗体および一本鎖抗体、並びにFAb、F(ab')₂およびFAb 発現ライブラリー断片、およびこれらのエピトープ結合断片を含む）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。例えば、標的遺伝子タンパク質のような化合物を、免疫疾患症状を改善するために充分なレベルで、このような症候を示す患者に投与することができる。以下の第5.10節で説明する技術のいずれかを、このような投与に利用することができる。当業者は、下記の第5.10.1節に記載するような技術を使用して、有効で、毒性用量以下の化合物の濃度の決定方法を容易に知るであろう。投与すべき化合物がペプチド化合物である場合、ペプチド化合物をコードするＤＮＡ配列は、症状を改善するために充分なペプチド化合物のレベルを生じさせるのに充分な濃度で、免疫疾患症状を示す患者に直接投与することができる。化合物の細胞内投与を達成する、以下の第5.10節に説明する、リポソーム投与などのいかなる技術も、このようなＤＮＡ分子の投与に利用することができる。ＤＮＡ分子は、例えば、公知の組換え技術により作製することができる。細胞外で作用するペプチド化合物の場合、このようなペプチドをコードするＤＮＡ分子は、充分な循環濃度のペプチドが免疫疾患症状の低減を誘導することができる限り、あらゆる細胞型により摂取されて発現される。細胞内で作用する化合物の場合、このようなペプチドをコードするＤＮＡ分子は免疫疾患の低減をもたらすのに充分なレベルで、目的のTH細胞サブ集団に取り込まれ、発現されるなければならない。それゆえ、ＤＮＡ分子を目的のTH細胞サブ集団に選択的に投与するために利用することができるいかなる技術も、細胞内で作用するペプチドをコードするＤＮＡ分子にとって好適である。例えば、喘息の場合、肺組織内にあるTH細胞サブ集団へのその分子の選択的投与のための技術が好ましい。さらに、TH細胞サブ集団関連疾患に異常な遺伝子が関与する場合、患者は遺伝子置換療法により治療することができる。正常な標的遺伝子の一つ以上のコピーまたは標的遺伝子機能を有する正常な標的遺伝子タンパク質の生成を指示する遺伝子の一部は、アデノウイルスベクター、アデノ関連ウイルスベクター、およびレトロウイルスベクターなどのベクターに加えて、リポソームのようなＤＮＡを細胞に導入するその他の粒子を使用して細胞に挿入することができるが、これらに限定されるものではない。このような遺伝子置換技術はin vivo およびin vitroで行うことができる。上記のように、細胞外分子をコードする遺伝子について、標的遺伝子を発現する細胞型は、免疫疾患の改善のために細胞外分子の充分な循環濃度を得るよりも重要ではない。さらに、上記のように、遺伝子が細胞内で、および膜貫通分子として作用する細胞をコードする場合、その遺伝子は目的のTH細胞サブ集団細胞型で発現される必要がある。それゆえ、目的の細胞型の範囲内の発現について選択する技術が標的遺伝子のこの後者のクラスには好ましい。in vivo のこのような技術として、例えば、標的遺伝子配列の適当な局所投与が挙げられる。標的および／または経路遺伝子発現の全レベルおよび／または標的および／または経路遺伝子活性を高めるために利用されてもよい別の方法は、Ｔ細胞サブ集団関連疾患の症状を改善するために充分な位置および数で、患者に適当な標的および／または経路遺伝子を発現する細胞、好ましくは自己細胞の導入を含む。このような細胞は組換えおよび非組換えのいずれであってもよい。患者中で標的および／または経路遺伝子発現の全レベルを増加させるために投与することができる細胞の中には、標的および／または経路遺伝子を発現する、正常な細胞がある。細胞は解剖学的な発現部位で、または生体中の異なる部位に配置される組織移植片の一部として投与することができる。このような細胞をベースとする遺伝子治療技術は当業者に公知である。例えば、Andersonらの米国特許第5,399,349 号、Mulligan＆Wilsonの米国特許第5,460,959 号を参照のこと。 in vitroでは、標的遺伝子配列を自己細胞に導入することができる。次に目的の標的遺伝子配列を発現するこれらの細胞は、疾患の症状の改善が生じるように、患者に、好ましくは静脈内投与により、再度導入することができる。また、特異的TH細胞サブ集団に属するTH細胞は、その他のTH細胞サブ集団細胞に対するこのTH細胞サブ集団に属する細胞の全数が増加するように、患者に投与することができ、これがTH細胞サブ集団関連疾患の改善をもたらす。このような TH細胞サブ集団増強のための技術を以下の第5.9.3.2 節に記載する。 5.9.3負および正のモジュレーター技術モジュレーター技術を利用する特別な用途に応じて、TH細胞サブ集団関連疾患を含む免疫疾患の改善をもたらす正および負の応答を生じさせることができるモジュレーター技術を本明細書に記載する。こうして、適当な場合に、この節の遺伝子操作は、第5.9.1 節に記載した負のモジュレーター技術と組み合わせて、または第5.9.2 節に記載した正のモジュレーター技術と組み合わせて使用することができる。 5.9.3.1.抗体技術モジュレーター能を示す抗体は、TH細胞サブ集団関連疾患のような免疫疾患を回復するために利用することができる。特異的な抗体に応じて、モジュレーター効果は負であってもよく、第5.9.1 節に記載した技術の一部として利用でき、または正であってもよく、節5.9.2 に上記された技術と組み合わせて使用することができる。負のモジュレーター能力を示す抗体はタンパク質に特異的に結合し、タンパク質の作用に干渉する抗体を表す。例えば、細胞外受容体の場合、このような抗体は、受容体を活性化しないが、その天然リガンドと結合する受容体の能力を遮断するような様式で受容体の細胞外ドメインと特異的に結合するはずである。例えば、遺伝子103 または200 の細胞外ドメインに対して誘導された抗体は、このような負のモジュレーターとして機能することができる。さらに、10遺伝子産物細胞外ドメインの一つ以上に対して誘導された抗体は、負のモジュレーター様式で機能することができる。このような抗体は、上記の第5.6 節に記載した標準的な技術を使用して、完全長の野生型もしくは変異体タンパク質に対して、またはタンパク質の部分に相当するペプチドに対して産生することができる。抗体として、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、FAb 断片、一本鎖抗体、キメラ抗体等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。正のモジュレーター能力を有する抗体はタンパク質に特異的に結合し、結合により、それが認識するタンパク質の機能を直接および間接に活性化するのに利用できる抗体を表す。例えば、ある抗体は膜貫通タンパク質を機能させる様式で膜貫通タンパク質の細胞外部分に結合することができ、その内因性リガンドが結合していることを介して膜貫通タンパク質を機能させ、こうして、例えば、シグナル変換経路を活性化することができる。抗体は、上記の第5.6 節に記載した通常の技術を使用して、完全長野生型もしくは変異体タンパク質に対し、およびタンパク質の部分に相当するペプチドに対して産生することができる。抗体として、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、FAb 断片、一本鎖抗体、キメラ抗体、等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。抗体に特異的な標的遺伝子タンパク質などのタンパク質が細胞内にあり、全抗体が使用される場合には、内在化抗体が好ましい。しかしながら、リポフェクチンおよびリポソームを用いて、抗体または遺伝子産物エピトープに結合するFab 領域の断片を細胞内に送達することができる。抗体の断片を使用する場合、タンパク質の結合ドメインに結合する最小の阻害性断片が好ましい。例えば、タンパク質に結合する抗体の可変領域のドメインに相当するアミノ酸配列を有するペプチドを使用することができる。このようなペプチドを、当業界で公知の方法（例えば、Creighton,1983,(上出);およびSambrookら,1989(上出)を参照のこと）を使用して、化学的に合成することができ、また組換えＤＮＡ技術により産生することができる。また、一本鎖抗体、例えば、細胞内エピトープに結合する中和抗体を投与することもできる。このような一本鎖抗体は、例えば、Marasco ら(Mar asco,W．ら，1993，Proc.Natl.Acad．Sci.USA 90:7889-7893)に記載されたような技術を利用して一本鎖抗体をコードするヌクレオチド配列を標的細胞集団内で発現させることにより投与することができる。抗体に特異的なタンパク質が細胞外にある場合、または該タンパク質が膜貫通タンパク質である場合には、ペプチド投与に適している以下の5.10節に記載される投与技術のいずれかを利用して、抗体をそれらの作用部位に有効に投与することができる。 5.9.3.2ＴＨ細胞サブ集団濃度を増加又は減少させる方法ここに記載した技法はあるＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の総数を枯渇あるいは増大させ、それによって目的とするＴＨ細胞サブ集団とその他のＴＨ細胞サブ集団との比を増加あるいは減少させるために用いることができる。とりわけ、あるＴＨ細胞サブ集団中に存在する細胞の総数を枯渇あるいは増大させるために用い得る分離法について述べており、さらに、特定のＴＨ細胞サブ集団を枯渇させるために用い得る方法について述べている。適用法の如何によって、あるＴＨ細胞サブ集団に属する細胞数を変化させることでＴＨ細胞サブ集団関連疾患の改善に対して刺激あるいは阻害応答を引き起こすことができる。適切な例においては本節の方法は前記の第5.9.1節に記載の阻害法とともに用いることができ、あるいはまた、前記第5.9.2節に記載の刺激法とともに用いることができる。ここに記載の分離法は特定の細胞表面マーカー、好ましくはトランスメンブレンマーカーの有無に基づくものである。このようなマーカーとしてはＴＨ２特異的１０３遺伝子産物細胞外ドメインマーカー、ＴＨ１特異的２００遺伝子産物細胞外ドメインマーカー、ＴＨ誘導性１０遺伝子産物細胞外ドメインマーカーが挙げられるが、これらに限定されなるものではない。ある特定のＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の数を増加又は増強することが目標であるような分離法の場合には、それに用いる抗体は未分化の、又は部分的に未分化のＴＨ細胞上に存在する細胞表面マーカーに対して特異的なものを用いることができる。未分化あるいは部分的に未分化なＴＨ細胞を分離し、精製した後、ＴＨ細胞を生理的緩衝液あるいは培地中で培養し、適当な因子の存在下で培養することにより、分化を誘導することができる。例えば、ＩＬ−４はＴＨ細胞をＴＨ２に分化させ、サイトカインＩＬ−１２はＴＨ細胞をＴＨ１に分化させるために添加することができる。分化させた後、細胞を洗浄し、例えば緩衝化食塩水中に再懸濁し、患者体内に、好ましくは静脈内投与により再導入することができる。細胞集団、例えば治療対象の患者自身の造血細胞から、in vitroで細胞を分離し精製する分離法を用いることができる。ＴＨ細胞サブ集団を含有する出発材料となる細胞集団、例えば造血細胞は当業者には周知の標準的な方法で得られる。このような方法をとり得る出発材料の一つとして末梢血があり、それは静脈穿刺で得られ、ヘパリン加試験管中に採取される。出発材料となる自己細胞を得た後、その出発材料中の他の細胞には存在しないが目的とするＴ細胞集団上には存在する特異的マーカーに結合するような抗体を利用する種々の方法を用いて、ＴＨ１又はＴＨ２細胞などのＴ細胞を除去して、選択的に分離精製できる。これらの方法としては例えば蛍光細胞分析分離装置(F ACS)及び蛍光色素を用いたフローサイトメトリー法、ビオチンをコンジュゲートさせた細胞表面マーカー特異的抗体、及びアフィニティーカラムマトリックス又はプラスチック表面などの固相支持体に結合させたアビジン又はストレプトアビジンを用いるビオチンーアビジン又はビオチンーストレプトアビジン分離法、又は抗体をコートした磁気ビーズを用いる磁気分離法がある。特異的マーカーに対する抗体を用いた分離法は正の選択又は負の選択となる。負の分離の場合には不要な細胞上にあるマーカーに特異的な抗体を用いる。例えば、ＴＨ１細胞の数を枯渇させることが望ましいようなＴＨ１細胞サブ集団関連疾患では、用いる抗体は２００遺伝子産物の細胞外ドメインに対するものとなる。一方、ＴＨ１細胞の数を枯渇させることが望ましいようなＴＨ２細胞サブ集団関連疾患では、用いる抗体は１０３遺伝子産物の細胞外ドメインに対するものとなる。このような細胞表面マーカーに対する抗体と結合した細胞を除去又は溶解し、残存している望ましい混合物を保持する。正の分離においては目的とする所望の細胞上に存在するマーカーに特異的な抗体を用いる。例えば、ＴＨ１細胞の数を増加させることが望ましいようなＴＨ１細胞サブ集団関連疾患では、用いる抗体は２００遺伝子産物の細胞外ドメインに対するものとなる。一方、ＴＨ１細胞の数を増加させることが望ましいようなＴＨ２細胞サブ集団関連疾患では、用いる抗体は１０３遺伝子産物の細胞外ドメインに対するものとなる。抗体と結合した細胞を分離し保持する。正及び負の分離は、実質的には同時にあるいは順次行うことができる。蛍光細胞分析分離装置(FACS)などによるフローサイトメトリーの使用が抗体による分離の一般的な方法である。典型的には、フローサイトメトリーによる分離は次のように行われる。細胞懸濁液を遠心し培地中に再懸濁する。蛍光色素とコンジュゲートさせた抗体を添加し、抗体と特異的細胞表面マーカーとを結合させる。次いで細胞混液を１回以上遠心・再懸濁することにより洗浄する。混液をFACSにかけ、蛍光特性の違いに基づいて細胞を分離する。FACSシステムは多色分析可能なものを含め各種の性能のものが入手可能である。装置にかけた細胞はその大きさや粒子性に起因する前方及び側方への特徴的な散乱パターン並びに特定の細胞表面マーカーの正及び／又は負の発現によって同定される。フローサイトメトリー以外の分離法でも迅速な分離が行える。そのような方法の一つとしてビオチン-アビジンをベースとしたアフィニティークロマトグラフィーによる分離がある。典型的には、その方法は、例えば本明細書中に記載した１０３遺伝子でコードされるトランスメンブランタンパク質などの特異的マーカーに対するビオチン結合抗体と細胞をインキュベートさせた後、アビジンカラムを通過させることによって行われる。ビオチン-抗体-細胞複合体はビオチン-アビジン相互作用によってカラムに結合し、その他の細胞はカラムを通過する。ビオチン-アビジンシステムの特異性は迅速な正の分離によく適したものである。複数回通過させることにより十分なレベルの目的とするＴＨ細胞サブ集団が分離される。分離法の目標があるＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の総数を枯渇させるためのものである場合には、出発材料の細胞中のＴＨ細胞サブ集団細胞を効果的に枯渇させた後の細胞を患者に再導入し得る。このようにＴＨ細胞サブ集団を枯渇させると、ＴＨ細胞サブ集団の活性又は活性の過剰に伴うＴＨ細胞サブ集団関連疾患の回復をもたらす。そのＴＨ細胞サブ集団を枯渇させた細胞は、細胞を洗浄し、例えば緩衝化食塩水中に再懸濁し、患者に静脈内投与することにより再導入される。細胞の生存度とリカバリーが十分であれば、ＴＨ細胞サブ集団を枯渇させた細胞を分離後直ちに患者に再導入することができる。また、ＴＨ細胞サブ集団を枯渇させた細胞を、患者に投与する前にex vivo で培養し増加させることもできる。インターロイキンやその他の周知の増殖因子を含む生理的緩衝液あるいは培地を用いる周知の方法で細胞数を増加させることが可能である。分離法の目標がＴＨ細胞サブ集団に属する細胞の総数を増強あるいは増加させるためのものである場合には、精製したＴＨ細胞サブ集団細胞に由来する細胞を患者に再導入でき、ＴＨ細胞サブ集団の活性低下に伴うＴＨ細胞サブ集団関連疾患の回復をもたらす。再導入する細胞を再導入前にex vivoで培養し細胞数を増加させる。精製したＴＨ細胞サブ集団細胞を洗浄し、例えば緩衝化食塩水中に懸濁し、静脈内投与により患者に再導入することができる。増加させるべき細胞を、標準的な方法により、精製ＴＨ細胞サブ集団の増殖を誘発する適当な増殖剤の存在下で培養する。そのような増殖剤としては例えば適当なサイトカイン、抗原、又は抗体が挙げられる。ＴＨ２細胞の場合には例えば増殖剤としてＩＬ−４を用いることができ、ＴＨ１細胞の場合には増殖剤としてＩＬ−１２を用いることができる。患者に再導入する前に、精製された細胞を例えば目的とする遺伝子産物をコードする遺伝子配列で形質転換させることにより修飾することができる。このような遺伝子産物は、精製したＴＨ細胞サブ集団の活性を増強させるような産物であるか、または、その他のＴＨ細胞サブ集団の一種又はそれ以上を抑制する産物でなければならない。細胞の形質転換及び遺伝子の発現の方法は当業者には周知であり、上記第5.5節に記載の方法を用い得る。さらに、ある特定のＴＨ細胞サブ集団に属する細胞数を枯渇させることが目標である場合には、周知のターゲティング法を用いることができる。このようなターゲティング法としては、in vivo又はin vitroでターゲティング剤を細胞集団に導入しその集団中のある特定の細胞のサブセットを選択的に破壊させるものである。このようなターゲティング剤のin vivo投与法については下記の第5.10節に記載する。通常、ターゲティング剤は先ずターゲティング部分を含み、該ターゲティング部分は、この場合には、ターゲティング剤とある特定のＴＨ細胞サブ集団との選択的会合を起こさせるものである。ターゲティング剤は次いでターゲティング剤が会合した細胞を破壊することのできる部分を含む。ターゲティング部分としては、ターゲットとなるＴＨ細胞サブ集団上に特異的に認められる細胞表面マーカーに対する抗体、又は、ターゲットとなるＴＨ細胞サブ集団上にしか認められない受容体型分子に結合するリガンド、例えば増殖因子類などに対する抗体が含まれるが、これらに限定されるものではない。ＴＨ２細胞の場合には、例えば、本明細書中に記載の１０３遺伝子産物の細胞外部分に対する抗体か又は、この受容体型ＴＨ２特異的分子に特異的なリガンドがターゲティング部分として該当する。ＴＨ１細胞の場合には、例えば、本明細書中に記載の２００遺伝子産物の細胞外部分に対する抗体か又は、この受容体型ＴＨ１特異的分子に特異的なリガンドがターゲティング部分として該当する。破壊を行なう部分としてはターゲティング剤が結合する相手の細胞を不活化あるいは破壊する能力のあるものであればいかなるものでも良い。例えば、破壊を行なう部分としてはサイトトキシン又は放射性物質が挙げられるがこれらに限定されるものではない。サイトトキシンとしては例えば植物由来、真菌由来、又は細菌由来の毒素類があり、通常は、リシンＡ鎖毒素の糖を除去したものが効力が強く半減期が長いため、好ましい。 5.10. 医薬調製品及び投与法ここに記載の化合物類、核酸配列及びＴＨ細胞サブ集団細胞は、免疫疾患例えばＴＨ細胞サブ集団関連疾患を治療又は改善するため治療上有効な投与量にて患者へ投与することができる。治療上有効な投与量とは、免疫疾患の症状を改善するのに十分な化合物又はＴＨ細胞サブ集団の量、または、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患又はその他の免疫疾患の改善をもたらす遺伝子産物を十分な濃度で発現させるような核酸配列の量を意味する。 5.10.1. 有効投与量化合物の毒性と治療上の有効性は、細胞培養又は実験動物を用いて、例えばLD₅₀ (集団の50%を致死させる投与量)及びED₅₀(集団の50%において治療上有効な投与量)を求めるための標準的な薬学的方法で求められる。毒性量と有効量の投与量比は治療インデックスと呼ばれ、LD₅₀/ED₅₀比で表される。治療インデックスの数値の大きい化合物が好ましい。毒性のある副作用を示す化合物も用いることができるが、未感染細胞へのダメージを最小限にとどめて副作用を低減させるために、そのような化合物を目的とする組織に運ぶためのデリバリーシステムの設計に注意を払わねばならない。細胞培養アッセイ及び動物実験から得られたデータをヒトへの投与量の範囲を求めるために利用することができる。このような化合物の投与量は、循環血漿中の濃度がED₅₀を含み毒性が全くないかまたはほとんどない循環濃度の範囲内になるような量であることが好ましい。投与量はこの範囲内で投与剤型及び投与経路によって変わる。本発明の方法で用いられる化合物に対しては、治療上有効な投与量は細胞培養アッセイで推定することができる。細胞培養で求めたと同様に、動物モデルにおいてIC₅₀値(すなわち症状の最大抑制の半分を達成するための供試化合物の濃度)をその範囲内に含む循環血漿中の濃度範囲を達成する投与量を求めることができる。このような情報を用いて、ヒトにおける有用な投与量をより正確に求めることができる。血漿中の濃度は例えば高速液体クロマトグラフィーで測定することができる。 5.10.2. 製剤化及び使用本発明に従って用いられる医薬組成物は、１種又はそれ以上の生理学的に許容し得るキャリアー又は添加剤を用いて従来法により製剤化することができる。化合物及び生理学的に許容し得る塩類、並びに溶剤を、吸入法又は通気法(口又は鼻のいずれかを経て)による投与、経口、舌下、非経口、又は直腸投与用に製剤化することができる。経口投与用としては、医薬組成物は例えば錠剤又はカプセル剤の形状をとることができ、結合剤(例えば糊化トウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドン、又はヒドロキシプロピルメチルセルロース)、充填剤(例えば乳糖、微結晶性セルロース、又はリン酸水素カルシウム)、滑沢剤(例えばステアリン酸マグネシウム、タルク又はシリカ)、崩壊剤(例えば馬鈴薯デンプン又はグリコール酸デンプンナトリウム)、又は湿潤剤(例えばラウリル硫酸ナトリウム)などの製剤学的に許容し得る添加剤を用いて従来法により製剤化することができる。錠剤は当業界で周知の方法を用いてコーティングすることができる。経口投与用の液状製剤は、例えば、溶液、シロップ又は懸濁液の形をとることができ、また、使用前に水又はその他の適当な媒体に溶解して服用する乾燥製剤とすることもできる。このような液状製剤は、懸濁剤(例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体又は水素化食用脂肪)、乳化剤(例えばレシチン又はアラビアゴム)、非水性媒体(例えばアーモンド油、油性エステル、エチルアルコール、又は分画した植物油)、及び保存剤(例えばメチル又はプロピル -p-ヒドロキシ安息香酸塩又はソルビン酸)などの製剤学的に許容し得る添加剤を用いて従来法により製剤化することができる。製剤中には緩衝塩類、香料、着色料、及び甘味料などを適宜含有させることもできる。経口投与用の製剤は、活性化合物の放出を制御するよう適切な方法で製剤化することができる。舌下投与用には、組成物を従来法により錠剤又はロゼンジの形状にすることができる。吸入投与用では、適当な噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、又はその他の適当なガスを用いて、加圧パック又はネブライザーよりエアロゾルスプレーの形で化合物を送り込む。加圧エアロゾルの場合、ある一定量を送り込むためのバルブを備えることによって投与量単位を決めることができる。吸入器あるいは通気器に用いる例えばゼラチン製のカプセル及びカートリッジは、化合物と適当な粉末基剤、例えば乳糖又はデンプンとを混合粉末として含む製剤とすることができる。化合物を例えば１回全量注射又は持続注入による非経口投与(すなわち静脈内及び筋肉内投与)用の剤型とすることができる。注射用の製剤は、例えばアンプル又は複数回投与用容器等のユニット投与量の形状であり、保存剤を含む。組成物は、油性あるいは水性媒体中で懸濁液、溶液、又は乳液などの形をとり、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤などの添加剤を含有することができる。又は、使用前に適当な媒体（例えば滅菌済で発熱性物質を除去した水）に溶解して用いる粉末製剤とすることもできる。ＴＨ細胞サブ集団細胞を患者に導入するときは静脈内投与が好ましい。化合物はさらに、例えば従来から用いられているココアバター又はその他のグリセリド類などの座剤の基剤を含有させて、座剤又は滞留浣腸剤などの直腸内投与剤型とすることができる。前記の製剤類に加え、化合物はデポー製剤とすることもできる。このような長期間効力が持続するような剤型は移植(例えば皮下又は筋肉内)、又は筋肉内注射によって投与できる。このためには、例えば、化合物を適当な重合体又は疎水性の材料(例えば、許容し得る油中に乳剤として)又はイオン交換樹脂とともに製剤化するか、あるいはわずかに水溶性の誘導体、例えばわずかに水溶性の塩として製剤化することができる。化合物は、所望により、活性成分を含む１又はそれ以上のユニット投与量を含有し得るパック又はディスペンサー中に容れることができる。パックは例えば、金属、又はブリスターパックなどのプラスチックフォイルから成る。パック又はディスペンサーには投与法の説明書を添付することができる。 5.11. 診断及びモニタリング法免疫疾患、例えばＴＨ細胞サブ集団関連疾患の診断、免疫疾患の素因の診断、このような免疫疾患に対する疾病素因、抗免疫疾患化合物の例えば臨床試験における有効性のモニタリング、及び疾患の治療のための臨床評価を行っている患者のモニタリングは、種々の方法を用いて行うことができる。さらに、活性化された免疫細胞、例えばＴＨ細胞サブ集団の中の活性化された細胞を検出するためには数多くの方法が用いられる。それらの方法は、例えば第5.1節に記載のフィンガープリント遺伝子ヌクレオチド配列、及び第5.5節(ペプチド)及び第5.6節(抗体)に記載の特異的に発現したペプチド及びパスウェイ遺伝子ペプチドに対する抗体などの試薬を用いることができる。とりわけ、これらの試薬は、例えば、1)標的遺伝子の発現、変異の有無の検出、標的遺伝子のｍＲＮＡの発現の過剰又は不足を、免疫疾患のない状態又はＴＨ細胞サブ集団が活性化されていない状態との比較で検出すること、2)標的遺伝子産物が過剰に生産されているかあるいは不足しているのかを免疫疾患のない状態又はＴＨ細胞サブ集団が活性化されていない状態との比較で検出すること、及び3)混合集団中の特異的ＴＨ細胞サブ集団細胞(例えば免疫疾患に関連するＴＨ細胞、あるいは活性化されたＴＨ細胞)の同定に用いることができる。本明細書に記載の方法は、例えば、少なくとも１種の本明細書中に記載の特異的フィンガープリント遺伝子核酸又は抗フィンガープリント遺伝子抗体試薬を含むあらかじめパッケージされた診断キットを用いて行うことができ、例えば臨床の場においてＴＨ１又はＴＨ２関連の異常を示している患者の診断に用いるのに便利である。下記の診断薬においてはフィンガープリント遺伝子が発現しているものであればいかなる細胞タイプや組織であっても用いることができるが、ＴＨ細胞であるのが好ましい。ここで用い得る方法の中には化合物の免疫疾患の治療の臨床試験における有効性をモニタリングする方法が含まれる。化合物としては例えば上記第5.9節に記載の化合物を用いることができる。このような方法は、患者サンプル中の遺伝子転写物又は遺伝子産物（正常あるいは免疫疾患のない状態に比較すると免疫疾患状態のＴＨ細胞サブ集団においては特異的に発現している）を検出することから成る。下記の第5.11.1節に記載のいかなる核酸検出法、又は下記の第5.11.2節に記載のいかなるペプチド検出法も、遺伝子転写物又は遺伝子産物（正常あるいは免疫疾患のない状態に比較すると免疫疾患状態のＴＨ細胞サブ集団においては特異的に発現している）を検出することに用いることができる。臨床試験の実施中に、例えば、単一フィンガープリント遺伝子の発現、又はＴＨ細胞サブ集団のフィンガープリントパターンを、試験化合物の存在又は不在下におけるＴＨ細胞サブ集団について測定することができる。化合物の有効性は、得られた発現データを対応する既知の正常で免疫疾患状態でないＴＨ細胞サブ集団での発現パターンと比較することにより得られる。有効性を示す化合物は、免疫疾患状態のＴＨ細胞サブ集団の単一フィンガープリント遺伝子発現及び／又はフィンガープリントパターンを、より正常な、免疫疾患でない状態のＴＨ細胞サブ集団に近い形に変える化合物である。免疫疾患状態でのＴＨ細胞サブ集団内で特異的に発現している遺伝子産物又は産物類を、正常状態あるいは免疫疾患のない状態でのＴＨ細胞サブ集団と比較して検出することも、潜在的な抗免疫疾患化合物の有効性を臨床試験の実施の際にモニタリングするために用いることができる。臨床試験中に、例えば、上述のような特異的に発現している遺伝子の１種又はそれ以上の産物の発現量及び／又は活性を、試験化合物の存在下又は不在下においてＴＨ細胞サブ集団について測定することができる。化合物の有効性は、得られたタンパク質の発現量及び／又は活性を、対応する正常な、免疫疾患のない状態でのＴＨ細胞サブ集団の既知の発現量／活性と比較することによって求められる。有効性を示す化合物は、免疫疾患状態のＴＨ細胞サブ集団のパターンを、より正常な、免疫疾患でない状態のＴＨ細胞サブ集団のパターンに近い形に変える化合物である。１０３遺伝子はＴＨ２特異的な性質を有するので、１０３遺伝子の転写物及び／又は産物の検出は、ＴＨ２細胞サブ集団関連免疫疾患、例えば喘息やアレルギーの治療のための臨床試験において化合物の有効性をモニタリングするのに特に適している。ＴＨ２細胞サブ集団に対するＴＨ１細胞サブ集団中の１０５、１０６及び２００遺伝子の発現パターンより、これらの遺伝子の転写物及び／又は産物を検出することは、ＴＨ１細胞サブ集団関連免疫疾患、例えば多発性硬化症、乾癬又はインシュリン依存性糖尿病の治療のための臨床試験において化合物の有効性をモニタリングするのに特に適している。さらにここで用い得る方法としては、ＴＨ細胞の応答性、例えば抗原に対する応答性を検出する方法、及び活性化された免疫細胞、例えばＴＨ細胞サブ集団の内の活性化されたものを検出する方法がある。多くの免疫疾患では不十分というよりはむしろ不適当な免疫反応が見られるため、これらのような検出方法は重要である。このような検出方法は、例えば免疫疾患の素因を検出するために用いることができる。ＴＨ細胞の応答性及び／又は活性化の検出法は、例えば、ＴＨ細胞サンプル中の遺伝子転写物あるいは産物（未活性化または非活性化状態にあるＴＨ細胞サブ集団に比較して、活性化又は応答性の状態（例えばＴＨ細胞サブ集団が抗原に暴露された状態）にあるＴＨ細胞サブ集団中に特異的に発現している）を検出することからなる。この特異的に発現している遺伝子転写物又は遺伝子産物の検出には、下記の第 5.11.1節に記載の核酸検出法、及び第5.11.2節に記載のペプチド検出法のどれでも用いることができる。１０３遺伝子はＴＨ２特異的な性質を有するので、その遺伝子転写物及び／又は産物の検出はＴＨ２細胞の活性化及び／又は応答性の検出に特に適している。さらに、１０５、１０６及び２００遺伝子はＴＨ１特異的な性質を有するので、その遺伝子転写物及び／又は産物の検出はＴＨ１細胞の活性化及び／又は応答性の検出に特に適している。 5.11.1 フィンガープリント遺伝子核酸の検出分析対象の細胞タイプあるいは組織からのＤＮＡ又はＲＮＡの単離は、当業者には周知の方法を用いて容易に行うことができる。診断法もまたin situで直接的に例えば、生検又は切除によって得た患者の組織切片(固定及び/又は凍結)に対して行うことができるので、核酸の精製は必要とされない。例えば第5.4節に記載されているような核酸試薬を上述のようなin situ法にプローブ及び／又はプライマーとして用いることができる(例えばNuovo，G.J.，1992，"PCR In Situ Hybridization:Protocols and Applications"，Raven Press，NY，参照)。ある細胞集団中での特定の細胞の発現も、例えば、上述のようなin situ技法又は標準的なフローサイトメトリー法で求められる。フィンガープリント遺伝子のヌクレオチド配列は、それがＲＮＡであってもＤＮＡであっても、例えば、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患の遺伝子構造及び発現を検出するための生物学的サンプルのハイブリダイゼーション又は増幅アッセイに用いることができる。そのようなアッセイ法としてはサザン又はノーザン分析、一本鎖立体配座多型性分析(single strand conformational polymorphism分析)、i n situ ハイブリダイゼーションアッセイ、及びＰＣＲ分析があるが、これらに限定されるものではない。このような分析により、フィンガープリント遺伝子の発現パターンの量的状態及びフィンガープリント遺伝子の発現及び／又は遺伝子組成の定性的状態を得ることができる。すなわち、このような技法は遺伝子発現の存在を検出し得るのみならず、発現量、とりわけどの特定の細胞が特定の遺伝子発現をしているかをも検出でき、さらに、例えば、点突然変異、挿入、欠損、染色体の再構成及び／又は遺伝子発現の活性化あるいは不活化も検出できる。フィンガープリント遺伝子特異的核酸分子を検出するための診断法としては、例えば分析対象の細胞タイプ又は組織に由来する核酸を１種又はそれ以上の、第 5.4節に記載の標識核酸試薬と、目的の核酸分子内にある相補的な配列との特異的アニーリングに好ましい条件下で、接触させインキュベートすることを含む。核酸試薬の長さは少なくとも15から30ヌクレオチドであるのが好ましい。インキュベーション後、核酸：フィンガープリント分子のハイブリッドからアニールしていない核酸を除去する。細胞タイプ又は組織に由来する核酸がハイブリダイズしたものは、もしそのような分子が存在するならば、検出することができる。この検出スキームを用いて、目的とする組織又は細胞タイプに由来する核酸を、例えば、膜、又はマイクロタイタープレート又はポリスチレンビーズなどのプラスチックの表面に固定化することができる。この場合、インキュベーション後にアニールされていない標識核酸試薬(そのタイプは第5.4節に記載)は容易に除去される。残存しているアニールされた標識フィンガープリント核酸試薬の検出は、当業界で周知の方法によって行うことができる。また、フィンガープリント遺伝子特異的核酸分子を検出するための別の診断法としては、それら遺伝子の増幅法、例えばＰＣＲ(実験的な実施態様としてはMul lis，K.B.，1987，U.S．Patent No.4,683,202に記載されている)、リガーゼ連鎖反応(Barany，F.，1991，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:189-193)、自己保持配列複製法(self sustained sequence replication)(Guatelli，J.C.ら，1990， Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87:1874-1878)、転写増幅システム(transcription al amplification system)(Kwoh,D.Y．ら，1989，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86 :1173-1177)、Ｑ-βレプリカーゼ(Lizardi，P.M.ら，1988，Bio/Technology 6 :1197)、又はその他の核酸増幅法を使用でき、増幅された分子は、その後当業界で周知の方法によって検出される。これらの検出法は核酸分子が非常に少数しか存在していない場合には特に有用である。このような検出法の実施態様の１つにおいて、目的とするＲＮＡ分子からｃＤＮＡが得られる(例えばＲＮＡ分子からｃＤＮＡへ逆転写させることにより)。このようなＲＮＡを単離する細胞タイプ又は組織としては、野生型フィンガープリント遺伝子が発現することが知られているものであればどのような組織でもよく、ＴＨ０、ＴＨ１、及び／又はＴＨ２細胞タイプ含有組織が含まれるが、これらに限定されるものではない。ｃＤＮＡ中のある配列が核酸増幅反応、例えばＰＣＲ増幅反応等の鋳型として用いられる。この方法の逆転写及び核酸増幅ステップにおいて合成開始試薬(例えばプライマー)として用いられる核酸試薬は、第5.4 節に記載のフィンガープリント遺伝子核酸試薬類から選択される。その核酸試薬の長さとしては、少なくとも9-30ヌクレオチドであるのが好ましい。増幅された産物の検出には、放射性又は非放射性標識ヌクレオチドを用いた核酸増幅を行うことができる。又は、標準的な臭化エチジウム染色又は他の適当な核酸染色法を用いて産物を可視化し得る程度まで十分に増幅させることもできる。１種のフィンガープリント核酸配列の検出に焦点を当てた方法に加え、複数のフィンガープリントパターンも上述のような検出スキームで評価し得る。ここでいうフィンガープリントパターンとは、ある一定の条件下で一定の組織又は細胞タイプについて得られた一連の(すなわち、少なくとも２つから、存在している総数に至るまでの)フィンガープリント遺伝子のｍＲＮＡ発現パターンを含んだものである。その条件とは、例えば、ＴＨ細胞サブ集団関連疾患、及び、ＴＨ細胞サブ集団の分化、維持及びエフェクター機能に関わるプロセスに関連する条件を含む。ＴＨ１関連疾患としては、例えば、クローン病、ライム病を含む反応性の関節炎、インシュリン依存性糖尿病、多発性硬化症、橋本甲状腺炎及びバセドウ病を含む臓器特異的自己免疫病、接触皮膚炎、乾癬、移植片拒絶反応、移植片対宿主病及びサルコイドージスなどの慢性炎症性疾病及び疾患を含む。ＴＨ２関連疾患としては、例えば、喘息やアレルギー性鼻炎・食物アレルギーを含む胃腸管アレルギーを含むアレルギーなどのアトピー状態、好酸球増加症、結膜炎、糸球体腎炎、寄生虫病(例えばリーシュマニア症)及びＨＩＶを含むある種のウイルス感染症などのある種の病原体罹病性状態、及び結核及び癩腫癩を含む細菌感染症を含む。フィンガープリントパターンは、上記第5.1.1.2節で述べた示差表示法、ノーザン分析、及び／又はＲＴ-ＰＣＲを用いて作製し得る。上記第3.2.1節に記載のいかなる遺伝子配列もプローブとして及び／又はＲＴ-ＰＣＲのプライマーとして、フィンガープリントパターンの作製と確認を行うために用い得る。 5.11.2 ターゲット遺伝子ペプチドの検出野生型又は変異フィンガープリント遺伝子ペプチドに対する抗体（上記第5.6 節に記載）をＴＨ細胞サブ集団関連疾患の診断用及び予後判定用に、例えばここに述べたように、用いることができる。その診断法は、フィンガープリント遺伝子産物、フィンガープリント遺伝子タンパク質発現の異常、又はフィンガープリント遺伝子タンパク質の構造及び／又は組織・細胞・細胞下の一時的な存在位置の異常を検出するために用いることができる。構造的な相異とは、例えば、変異フィンガープリント遺伝子タンパク質のサイズ、電気陰性度、又は抗原性における、正常フィンガープリント遺伝子タンパク質との相異を含む。分析対象の組織又は細胞タイプからタンパク質を単離することは、当業者に周知の方法を用いて容易に行える。ここで用いたタンパク質単離法は、例えば、Ha rlow and Lane(Harlow，E．and Lane D.，1988，"Antibodies: A Laboratory Ma nual"，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York ,)(参考として本明細書中に引用する)に記載されている方法などを用いることができる。野生型又は変異フィンガープリント遺伝子ペプチド分子の検出のための診断法として好ましいのは、例えば、フィンガープリント遺伝子ペプチドが抗フィンガープリント遺伝子産物特異的抗体との相互作用により検出されるイムノアッセイ法である。例えば、第5.6節で上述したような抗体又は抗体断片は本発明に有用であり、定量的に又は定性的に野生型あるいは変異フィンガープリント遺伝子ペプチドを検出するのに用いることができる。この検出は、例えば、蛍光標識抗体(この節の下記を参照せよ)を光学顕微鏡、フローサイトメトリー、又は蛍光定量法での検出に用いる免疫蛍光法によって行うことができる。このような技法は、例えば、１０遺伝子産物、２００遺伝子産物、及び１０３遺伝子産物のトランスメンブレン型など、フィンガープリント遺伝子ペプチドが細胞表面に発現している場合には特に好ましい。上述のように、ここに述べた技法は、ある細胞集団中の、目的とするフィンガープリント遺伝子産物を発現している特定の細胞を検出するために用いられるものである。本発明に有用な抗体(又はその断片)は、さらに、in situでフィンガープリント遺伝子ペプチドを検出するために、免疫蛍光法又は免疫電顕法において、組織学的用途にも用い得る。in situでの検出は、患者から組織標本を採取し、それに本発明の標識抗体を適用することによって行われる。抗体(又は断片)は、生物学的サンプルの上に標識抗体(又は断片)を重層することによって適用するのが好ましい。このような方法を用いることによって、フィンガープリント遺伝子ペプチドの存在のみならず、試験組織中での分布をも求めることができる。本発明を用いることにより、当業者であれば、上記のin situ検出を行うために多種多様の組織学的方法(例えば染色方法など)のいかなる方法でも改変して用い得ることが、容易に想像されるであろう。野生型又は変異フィンガープリント遺伝子ペプチドのイムノアッセイは、典型的には、生物学的サンプル、例えば体液、組織抽出物、新鮮な採取細胞、又は組織培養でインキュベートされた細胞を、フィンガープリント遺伝子ペプチドを同定し得る検出可能な標識抗体の存在下でインキュベートし、当業界で周知の多数の技法のうちの何らかを用いることにより結合した抗体を検出することから成る。生物学的サンプルは、細胞、細胞内粒子又は可溶性タンパク質を固定化する能力のあるニトロセルロース等の固相支持体又は担体、又は他の固相支持体と接触し、固定化される。次いで適当な緩衝液で支持体を洗浄し、検出可能な、標識フィンガープリント遺伝子特異的抗体で処理する。緩衝液で固相支持体の２回目の洗浄を行い、結合していない抗体を除去する。固相支持体上の結合標識の量を従来法で検出する。「固相支持体又は担体」とは抗原又は抗体を結合し得るものならばいかなるものでも良い。周知の支持体又は担体としてはガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ類、天然及び変性セルロース、ポリアクリルアミド類、斑糲岩(gabbros)、及びマグネタイトがある。担体の性質としては、本発明の目的に応じてある程度水溶性かあるいは不溶性かのどちらかである。支持物質としては、結合した分子が抗原又は抗体と結合能がある限りは実際上はいかなる構造を有していても良い。支持体の形状としてはビーズのような球状、又は試験管の内面又は棒の外面のような円筒状とし得る。また、表面をシートや試験紙のようなフラットなものにもできる。好ましい支持体としてはポリスチレンビーズがある。当業者ならばその他の適当な担体を多種知り得るか又はそれを通常の実験によって確認することができるであろう。あるロットの抗野生型又は変異フィンガープリント遺伝子産物抗体の結合能は、既知の方法に従って求められる。当業者であれば通常の実験を行うことによって操作性の良い最適のアッセイ条件を決めることができるであろう。フィンガープリント遺伝子ペプチド特異的抗体に検出可能な標識を付す方法の一つは、それを酵素に結合させて酵素免疫測定法(EIA)で用いることである(Voll er，A.，"The Enzyme Linked Immunosorbent Assay(ELISA)"，1978，Diagnostic Horizons 2:1-7，Microbiological Associates Quarterly Publication，Walke rsville，MD,；Voller，A.ら，1978，J．Clin．Pathol.31:507-520; Butler，J. E.，1981，Meth．Enzymol.73:482-523; Maggio，E．(ed.)，1980，ENZYME IMMUN OASSAY，CRC Press，Boca Raton，FL，USA; Ishikawa，E.ら，(eds.)，1981，EN ZYME IMMUNOASSAY，Kgaku Shoin，Tokyo)。抗体に結合する酵素は適当な基質と反応するが、分光光度、蛍光光度又は目視的に検出し得る化学的部分を作るような色素産生性の基質が好ましい。抗体を検出可能とするために標識する酵素としては、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、δ-5-ステロイドイソメラーゼ、イーストアルコールデヒドロゲナーゼ、α-グリセロリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β− ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース-6 -リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼが挙げられるが、これらに限定されるものではない。検出は酵素に対する色素産生性基質を用いる比色法で行うことができる。また、検出は、基質の酵素反応の程度を、同様に調製した標準品と目視で比較することにより行うことができる。また、検出は他の各種のイムノアッセイ法の何らかの方法を用いても行うことができる。例えば、抗体又は抗体断片を放射性標識することにより、フィンガープリント遺伝子の野生型のものや変異ペプチドをラジオイムノアッセイ(RIA)で検出することができる(例えば、Weintraub，B.，Principles of Radioimmunoass ays，seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques，The Endocr ine Society，March，1986,参照のこと。この文献は参照として本明細書に引用する)。放射性同位元素はガンマカウンター又はシンチレーションカウンターを用いて、あるいはオートラジオグラフィーにより検出し得る。また、抗体を蛍光物質で標識することも可能である。蛍光標識された抗体が適当な波長の光に曝されると、蛍光によりその存在が検出される。最も一般的に用いられる蛍光標識物質としては、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、o-フタルアルデヒド、及びフルオレサミンがある。また、抗体は¹⁵²EU又は他のランタニド系などの蛍光発光金属を用いて検出可能な標識を行うことができる。これらの金属はジエチレントリアミン五酢酸(DTP A)又はエチレンジアミン四酢酸(EDTA)などの金属キレート剤を用いて抗体に付着させることができる。また、抗体は化学発光物質と結合させることにより検出可能な標識を行うことができる。化学発光物質を結合させた抗体の存在は、化学反応中に生じてくる発光を検出することにより測定できる。特に有用な化学発光標識化合物の例としては、ルミノール、イソルミノール、テロマティックアクリジニウムエステル、イミダゾール、アクリジニウム塩、及びシュウ酸エステルがある。同様に、生物発光物質も本発明の抗体を標識するために用い得る。生物発光は化学発光の一種であり、触媒タンパク質が化学発光反応の効率を高めているような生物学的システム内で認められるものである。生物発光タンパク質の存在は発光を検出することにより行われる。標識の目的に用いられる重要な生物発光物質としては、ルシフェリン、ルシフェラーゼ及びエクオリンがある。６．実施例：ＴＨ２−富化遺伝子の同定及び特性付け本節で示した実施例においては、上記の5.1.1.1 節で記載したトランスジェニックＴ細胞パラダイムを利用して、本明細書中で１０２遺伝子と称されるＴＨ２細胞中で発現する遺伝子を同定した。その同定された遺伝子は、ＴＨ１細胞中のレベルよりも非常に高いレベルでＴＨ２細胞中に存在する。したがって、ここで示した実施例によって、ＴＨ細胞サブ集団中で特異的に発現する遺伝子の同定に対する本発明のパラダイム研究法の有用性が示される。 6.1 材料及び方法トランスジェニックマウス：特定の実験を受けたことのないＣＤ４^-細胞を、オボアルブミンを認識するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む非感作トランスジェニックマウス系の脾臓及び／又はリンパ節から得た(Murphy et al.，1990，Scienc e 250 :1720)。卵−特異的トランスジェニックＴ細胞：卵−特異的Ｔ細胞の懸濁液を、刺激性ペプチド抗原及び抗原提示細胞とともに本質的にMurphyら(Murphy et al.，1990 ，Science 250 :1720)に記載されているように共同培養した。簡単に言えば、2- 4×10⁶Ｔ細胞を、0.3μＭの卵ペプチドの存在下で、約２倍のＴＡ３抗原提示細胞とともにインキュベートした。ＴＨ１培養物には、約10ng／mlの組換えｍＩＬ −１２が含まれていた。反対に、ＴＨ２細胞は、ＩＬ−４（1000μ／ml）を受け入れた。培養開始後種々の時点で培養物を採取した。抗ＣＤ４を被覆した磁性ビーズ(Dynal,Inc.)を用いてＴ細胞からＴＡ３細胞を取り除いた。Ｔ細胞を穏やかに遠心分離することによりペレットにし、適当な容量のRNAzol^TM(Tel-Test,フレンドウッド(Friendwood)，テキサス)に溶解した。組織採集及びＲＮＡ単離：細胞をドライアイス上ですばやく凍結させた。次いで、サンプルを乳鉢と乳捧を用いて液体窒素下でホモジナイズした。組織からRNAzol^TM又はRNAzolB ^TM(Tel-Test,フレンドウッド，テキサス)のいずれかを用いて製造業者の指示にしたがって全細胞性ＲＮＡを抽出した。簡単に言えば、組織を適当な量のRNAzol^TM又はRNAzolB^TMに可溶化し、その可溶化したサンプルに1/10 v/vのクロロホルムを添加した後約15秒間激しく振盪することによってＲＮＡを抽出した。次いで、混合物を15分間、12,000ｇで遠心分離し、水相を新しいチューブに移した。ＲＮＡをイソプロパノールを用いて沈殿させた。結果として得られたＲＮＡペレットを水に溶解し、等容量のクロロホルムを用いて再抽出して残存しているフェノールを除去した。抽出した容量の２倍の容量のエタノールを用いて 150mM酢酸ナトリウムの存在下で沈殿させた。沈殿したＲＮＡを水に溶解してその濃度を分光器によって測定した(Ａ₂₆₀)。特異的表示（Differential display）：全細胞性ＲＮＡ（10-50 μg）を、40 単位のリボヌクレアーゼ阻害剤（Boehringer Mannhaim、ドイツ）の存在下で20 単位のDNase Ｉ（Boehringer Mannheim、ドイツ）にて処理した。フェノール／クロロホルムで抽出し、エタノール沈殿を行った後、ＲＮＡをＤＥＰＣ（ジエチルピロカルボネート）処理水に溶解した。上記の5.1.1.2 節に記載したように特異的ｍＲＮＡ表示を行った。ＲＮＡ（0. 4-2μg）をSuperscript 逆転写酵素(GIBCO/BRL)を用いて逆転写した。次に、ｃＤＮＡをPerkin-Elmer 9600 熱サイクラー上でＰＣＲによって増幅させた。反応混合物（20μl）には、任意のデカヌクレオチド及び12の可能性のあるＴ₁₁ＶＮ配列（ここで、ＶはｄＧ、ｄＣ又はｄＡのいずれかを示し、ＮはｄＧ、ｄＴ、ｄＡ、又はｄＣのいずれかを示す。）のうちの一つが含まれる。40サイクルのＰＣＲのパラメーターは以下のとおりである：ホールド(Hold)94 ℃，２分；サイクル94 ℃,15 秒、40℃，２分；傾斜(Ramp)72°30秒；ホールド72 ℃，５分；ホールド４℃。放射標識ＰＣＲ増幅産物を６％変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって分析した。再増幅及びサブクローニング：興味の対象であるＰＣＲバンドをシーケンシングゲル（sequencing gel）から回収し、再増幅させた。簡単に言えば、オートラジオグラムを乾燥ゲルに密着させて興味の対象であるバンドを含む領域をメスを用いて切除した。切除したゲル断片を 100μl ＴＥ（トリス−ＥＤＴＡ）緩衝液に約 100℃で15分間浸漬して溶離させた。次いで、ゲルスライスを短時間遠心分離することによってペレットにして、上清を新しいマイクロ遠心管に移した。ＤＮＡを 100mMの酢酸ナトリウム及び30μg のグリコーゲン（Boehringer Mannheim、ドイツ）の存在下でエタノールと混合して、ドライアイス上で約10分間沈殿させた。サンプルを10分間遠心分離し、ペレットを80 ％エタノールで洗浄した。ペレットを10μl の蒸留水に再懸濁した。溶離したＤＮＡ５μl を、標準Cetus Taq ポリメラーゼ緩衝液、ｄＮＴＰ20μ Ｍ、増幅したＤＮＡの初期産出に用いたオリゴヌクレオチドプライマーをそれぞれ１μＭを含む反応物 100μl 中で再増幅させた。サイクル条件は、上記したような増幅バンドを生じさせるのに用いた初期条件と同様の条件を用いた。増幅反応の半分を２％アガロースゲル上で行い、上記のSambrookらに記載されているように、ＤＥ−８１紙（Whatman Paper，Ltd.,英国）を用いて溶離させた。回収した断片をクローニングベクターｐＣＲ^TMII（Invitrogen，Inc.，サンディエゴ、カリフォルニア）に連結し、コンピテントE.coli株ＤＨ５α（Gibco/BRL、ゲイサースバーグ(Gaithersburg)，メリーランド）に形質転換した。アンピシリン（100 μg/ml）及びX-gal（40μg/ml）を含むＬＢ寒天平板上でコロニーを成長させて、青／白選択（blue/white selection）を行った。配列分析：サブクローニング後、Applied Biosystems自動シーケンサー（Appl ied Biosystems，Inc.，シアトル、ワシントン）にて再増幅したｃＤＮＡ断片の配列決定を行った。配列は、同じ挿入断片を含む４以上の別個の形質転換体から得た。本明細書に示したヌクレオチド配列は、その４つの配列から得られた情報のコンセンサス配列、又は指摘したように代表的なクローンから得られた配列のいずれかを示す。そのような一次配列データを編集し、ベクター配列及び高頻度反復配列にトリミングしてＢＬＡＳＴ(Altschul，S.F．et al.，1990，J.Mol.Bi ol.，215:403-410)プログラムを用いるGenbank データベースを調べるために用いた。ノーザン分析：ＲＮＡサンプルを 6.3％ホルムアルデヒドを含む１〜1.5 ％アガロース（Seakem^TM，LE，FMC BioProducts,ロックランド(Rockland)，メーン）を含む変性アガロースゲル中で電気泳動にかけた。5-20μg の全ＲＮＡを含むサンプルを変性ローディング溶液（72％脱イオン化ホルムアミド及びブロモフェノールブルー）と混合し、70℃で５分間加熱した。サンプルを氷上に置き、すぐにゲル上にロードした。ゲルを１％ＭＯＰＳ緩衝液（100mM ＭＯＰＳ、25mM酢酸ナトリウム、５mMＥＤＴＡ）に注入した。電気泳動後、ゲルをエチジウムブロミドで染色し、紫外線で視覚化した。電気泳動完了後、ゲルを50mM水酸化ナトリウム溶液に穏やかに攪拌しながら約 30分間浸漬することによって、ＲＮＡをそっと切断した。ゲルを水で２回すすぎ、次いで 0.1Ｍトリス-HCl(pH7.5)に約30分間浸漬することによって中和した。ゲルを20％ＳＳＣ（３Ｍ塩化ナトリウム、0.3Ｍクエン酸ナトリウム）を用いて手短に平衡化し、次いで20×ＳＳＣ中で一晩かけてHybond^TM,-N(Amersham，Inc. ，アーリントンハイツ(Arlington Heights),イリノイ)又はZeta-Probe(Bio-Rad ，Inc.，ヘラクレス(Hercules)，カリフォルニア)等のナイロン膜に転移させた。転移したＲＮＡを含む膜を80℃で２時間ベーキングして、ＲＮＡを固定化した。プローブとして種々のサイズのＤＮＡ断片を使用し、ランダムヘキサマー標識技術を用いて標識した。簡単に言うと、25ngの精製ＤＮＡ断片を用いて各プローブを作成した。断片を、ランダムヘキサマー及びヌクレオチドｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ及びｄＴＴＰの混合物（それぞれの最終濃度25μＭ）を含む20μl のランダムヘキサヌクレオチド標識反応物（Boehringer Mannheim,Inc.，インディアナポリス、インディアナ）に添加した。反応混合物を 100 ℃で10分間加熱して変性し、次いで氷上で冷やした。５μl のα−³²Ｐ−ｄＡＴＰ（50μCi；Amersham,Inc .,アーリントンハイツ，イリノイ）及びクレノウＤＮＡポリメラーゼ（２単位； Boehringer Mannheim,Inc.，インディアナポリス、インディアナ）を添加した。反応物を37℃で30分間インキュベートした。インキュベーション後、水30μl を標識反応物に添加し、その反応物をBioSpin-6^TMクロマトグラフィーカラム(Bio- Rad，Inc.，ヘラクレス，カリフォルニア)に通して取り込まれていないヌクレオチドを除去した。比取り込み率(specific incorporation)をシンチレーションカウンターを用いて測定した。ハイブリダイゼーション混合物１ml当たり1^-5×10⁶ cpmが使用された。固定化ＲＮＡを含むナイロン膜を製造業者の指示にしたがってプレハイブリダイズした。放射標識プローブを50％脱イオン化ホルムアミド中で70℃にて10分間加熱して変性し、次いでハイブリダイゼーション混合物（50％ホルムアミド、10 ％デキストラン硫酸、0.1％ＳＤＳ、100μg/mlの剪断サケ精子ＤＮＡ、５×ＳＳＣ、５×Denhardt's溶液、30mMトリス-HCl(pH8.5)、50mM NaPO₄(pH6.5)を含む）に添加した。ハイブリダイゼーションを42℃で一晩行った。次に、ナイロン膜を 0.2％ＳＳＣ及び 0.1％ＳＤＳの洗浄溶液に室温で２分間浸して残存しているハイブリダイゼーション溶液の大部分を除去した。続いて、膜を42℃に予備加熱した新しい洗浄溶液に20分間ずつ２回浸した。フィルターをプラスチックラップで覆って、オートラジオグラフフィルムに曝して結果を可視化した。 6.2 結果トランスジェニックＴ細胞パラダイム（上記の6.1 節で記載）を利用してＴＨ１とＴＨ２細胞の間に特異的に発現する遺伝子を同定した。二次抗原刺激又は三次抗原刺激のいずれかの後、ＲＮＡサンプルをＴＨ１細胞及びＴＨ２細胞から単離した。次いで、サンプルを特異的表示技術によって分析した。図１にこれらのサンプルから得られた、増幅した断片を、バンド１０２と称するＰＣＲ産物（これは、ＴＨ１細胞サブ集団に比較して、ＴＨ２細胞サブ集団中で高レベルで発現する遺伝子によって産生されたＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡを表すものと判定された）をさし示す矢印とともに示す。バンド１０２に対応する遺伝子は、本明細書では１０２遺伝子という。上記の6.1 節で記載したようにして、増幅したバンド１０２ｃＤＮＡを回収し、再増幅し、クローニングベクターにサブクローニングし、配列決定した。代表的なバンド１０２クローン、特にクローン１０２．１のヌクレオチド配列（配列番号１）を図２に示す。このコンセンサス配列を用いてＢＬＡＳＴ(Altschul，S.F．et al.，1990，J ．Mol.Biol.，215:403-410)データベースを調べたところ、トリプシン様セリンプロテアーゼをコードする、マウスGranzyme A又はHanukah 因子遺伝子(Masson ，D．et al.，1986，FEBS Lett.，208:84-88; Masson．D．et al.，1986，EMBO J．5:1595-1600; Gershenfeld，H.K．and Weissman，I.L.，1986，Science 232: 854-858)と98％の同一性を有する配列であるという結果が得られた。また、この遺伝子のヒト相同染色体も公知である(Gershenfeld，H.K．et al.，1988，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 85:1184-1188)。その遺伝子の推定特異的調節(putative differential regulation)を確認するために、増幅したバンド１０２ｃＤＮＡをプローブに用いてＴＨ１細胞系及びＴＨ２細胞系由来のＲＮＡサンプル、並びに脾臓及び胸腺組織由来のＲＮＡサンプルを含むノーザンＲＮＡブロットを行った。図３はそのようなノーザンブロット分析の一つの結果を示すものであり、この分析においては、１０２遺伝子ｍＲＮＡに対するメッセージの定常状態レベルは、刺激されたＴＨ１サンプルに対して刺激されたＴＨ２サンプル由来のＲＮＡサンプル中で有意に増加した。さらに、胸腺及び脾臓ＲＮＡサンプルの両方における正のシグナルは、１０２遺伝子産物がＴ細胞機能のいくつかの局面に関与するという証拠を裏付けている。このように、このノーザン分析によって、特異的表示結果によって示唆されていた推定特異的ＴＨ２調節が確認された。したがって、本節及び上記の5.1.1.1 節において記載したトランスジェニックＴ細胞パラダイムを利用することによって、本明細書で１０２遺伝子と称する、マウスGranzyme A/Hanukah因子遺伝子に対応するＴＨ２特異的調節遺伝子が同定され、それによってＴＨ１又はＴＨ２細胞集団等のＴヘルパー細胞サブ集団中に優先的に発現する遺伝子の同定におけるそのようなパラダイムの有用性が確認された。さらに、ここで同定された遺伝子は、以前、ナチュラルキラーＴ細胞中で発現することが見出されており、しかもＣＤ４^-細胞の分画中に発現することが報告されている(Fruth，U．et al.，1988，Eur．J．Imm.，18:773-781; Lui，C.C．e t al.，1989，J．Exp．Med.，170:2105-2118)一方で、ここで記載された結果は、かかる遺伝子に対するＴＨ細胞サブ集団の役割が見出された最初の事例を示す。本研究の前に、この遺伝子は、ＴＨ１細胞サブ集団及びＴＨ２細胞サブ集団関連疾患を含む種々の局面においてＴ細胞中で発現することが報告されていた。例えば、Granzyme A/Hanukah因子発現は、同種異系移植片拒絶(Muller，C．et al. ，1988，J．Exp．Med.，167:1124-1136)及び自己免疫疾患(Ojcius，D.M．and Yo ung，D.E.，1990，Cancer Cel1s，2:138-145; Young，L.H.Y．et al.，1992，Am ．J．Path.，140:1261-1268)（これらの疾患は、ＴＨ１細胞サブ集団関連疾患である。）において、並びにリーシュマニア感染罹病性マウス(Moll，H．et al.， 1991，Inf．and Imm．59:4701-4705)及び癩病巣(Ebnet，K．et al.，1991，Int ．Imm．3:9-19; Cooper，C.L．et al.，1989，J．Exp．Med．169:1565-1581)（これらは、いずれもＴＨ２細胞サブ集団関連疾患である。）においても報告されている。したがって、ここで示された特異的ＴＨ２様発現は、ＴＨ１細胞サブ集団と対比して、ＴＨ２細胞サブ集団における遺伝子産物に対してより主要な役割を明確に示す最初の分子による証拠を示すものである。７．実施例：ＴＨ２−特異的遺伝子の同定及び特性付け本節で示した実施例では、上記の5.1.1.1 節及び６節で記載した、トランスジェニックＴ細胞パラダイムを利用してＴＨ２細胞中に特異的に発現する遺伝子を同定した。特に、この遺伝子は、ＴＨ２細胞中に存在する一方で、ＴＨ１細胞には全く存在しない。この遺伝子は、選択的にＳＴ−２、Ｔ１、及びＦｉｔ−１として知られている遺伝子に相当するが、他のどんな分析された細胞型又は組織においても発現することは明らかにされておらず、in vivo で完全にＴＨ２特異的であるマーカーをコードすることがここで初めて示される。１０３遺伝子は細胞表面タンパク質をコードするが、これはここで議論される潜在的な意義である。 7.1 材料及び方法ＲＴ−ＰＣＲ分析：定量ＲＴ−ＰＣＲを下記のようにして行った。上記の6.1 節で記載したようにして調製した1-2 μg の全ＲＮＡをオリゴｄＴ_(12-18)プライマー及びSuperscript^TM RNAase H 逆転写酵素(Gibco-BRL、ゲイサースバーグ、メリーランド)を用いて逆転写した。簡単に言えば、ＲＮＡを全容量が11μl となるように１μl のオリゴｄＴ（500 μg/ml）と混合した。混合物を70℃で10 分間加熱して氷上で冷却した。短時間遠心分離した後、ＲＮＡの逆転写を１時間行った。第１のｃＤＮＡ鎖(first strand cDNA)のアリコートを−20℃で使用直前まで保存した。第１のｃＤＮＡ鎖の段階希釈によるＰＣＲ増幅によって発現レベルを測定した。この操作において、ｃＤＮＡは水で段階的に希釈した。次に、希釈液を配列特異的プライマーを用いるＰＣＲによってバッチ増幅した。ＰＣＲ反応による増幅はすべて同一の条件下で行った。したがって、生成した産物の量は最初に存在する配列鋳型の量を反映する。ｃＤＮＡの5-10倍希釈液を用い、その後に生成する産物の量がエチジウムブロミド染色ゲルのＵＶ照射によって明白に可視化するレベルから検出レベル以下に及ぶような十分な量の希釈液を用いた。ここで記載した方法は発現レベルにおける10倍の差異を識別することができる。配列決定された増幅バンドの増幅用のプライマーを設計した。このプライマーは、プログラムＯＬＩＧＯ(National Biosciences,プリマス、ミネソタ)を用いて選択した。このアッセイで用いられたプライマー配列は、下記のとおりである：１０３センスプライマー、5'-TTGCCATAGAGAGACCTC-3'（配列番号18）；バンド１０３アンチセンスプライマー、5'-TGCTGTCCAATTATACAGG-3'（配列番号19）；マウスガンマアクチンセンスプライマー、5'-GAACACGGCATTGTCACTAACT-3'（配列番号20）；マウスガンマアクチンアンチセンスプライマー、5'-CCTCATAGATGGGCA CTGTGT-3'（配列番号21）。定量ＰＣＲ反応は全て9600 Perkin-Elmer PCR マシーン(Perkin-Elmer)で行った。一般的に、増幅条件は下記のとおりである：30秒間の95℃での変性、30秒間の50-60 ℃でのアニーリング及び１分間の72℃での伸長からなる30-40 サイクル。サイクル後、72℃で10分間反応を続けた。 RNase 保護アッセイ：RNase 保護アッセイを、Ambion Inc．から購入したキットを用いて製造業者の指示にしたがって行った。GenBank 受託番号Y07519から得たＲＮＡプローブをRNase 保護アッセイに利用した。また、これらのプローブも、Ambion Inc．から購入したキットを用いて製造業者の指示にしたがって作成した。これらのＲＮＡプローブの配列は、遺伝子の5'末端に対応しており、コーディング及び5'非翻訳配列の両方を含む。抗ＣＤ−３刺激：条件は、下記の8.1 節に記載した条件と同様である。他の操作：本実施例で記載した実験において行った他の全ての細胞サンプル採取、ＲＮＡ単離、特異的表示、配列分析、及びノーザン操作は上記の6.1 節に記載したようにして行った。 7.2 結果ＴＨ１及びＴＨ２細胞サンプルから単離されたＲＮＡの特異的表示分析を上記の6.1 節で記載したようなトランスジェニックＴ細胞パラダイム研究を利用して行った。特に、ＴＨ細胞はオボアルブミンを認識するＴ細胞受容体を含むトランスジェニックマウスから得て(Murphy et al.，1990，Science 250:1720)、３回刺激を与え、ＲＮＡをＴＨ１細胞及びＴＨ２細胞から得た。ＲＮＡサンプルの特異的表示分析の結果、本明細書でバンド１０３と称するＴＨ２特異的発現バンドの同定がなされた。バンド１０３に対応する遺伝子は、本明細書では１０３遺伝子という。１０３遺伝子ｃＤＮＡを単離し、増幅し、サブクローニングして、図４Ａに示したようなヌクレオチド配列（配列番号２）を得た。データーベース調査により、バンド１０３のヌクレオチド配列は、選択的にＳＴ−２、Ｔ１又はＦｉｔ−１遺伝子(Klemenz，R．et al.，1989，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86:5708-5712 ; Tominaga，S.，1989，FEBS Lett．258:301-301; Werenskiold，A.K．et al.， 1989，Mol．Cell．Biol．9:5207-5214; Werenskiold，A.K.，1992，Eur．J．Bio ch em．204:1041-1047; Yanagisawa，K．et al.，1993，FEBS Lett．318:83-87; Be rgers，G．et al.，1994，EMBO J．13:1176-1188)として公知のマウス形の遺伝子と98％の同一性を有する配列であるという結果が得られた。１０３遺伝子は、おそらく、選択的にスプライシングされた転写物を介して、免疫グロブリンスーパーファミリーに属するトランスメンブラン及び可溶性形のタンパク質をコードする。可溶性形のタンパク質は、マウスインターロイキン− １受容体１型（ＩＬ−１Ｒ１）及びインターロイキン−１受容体２型（ＩＬ−１Ｒ２；細胞質ドメインが欠失している）の細胞外部分と高レベルの類似性を示す一方、トランスメンブラン部分（ＳＴ２Ｌと称する）はＩＬ−１ＲＩ配列全体及び細胞外ＩＬ−１Ｒ２配列と高い類似性をもつ。さらに、１０３遺伝子は、インターロイキン１受容体１型遺伝子座ときつく連鎖しているようである(McMahon， C.J．et al.，1991，EMBO J．10:2821-2832; Tominaga，S．et al.，1991，Bioc hem．Biophys．Acta．1090:1-8)。加えて、ヒト１０３遺伝子相同体も報告されている(Tominaga，S．et al.，1992，Biochem．Biophys．Acta．1171:215-218) 。図４Ｂに１０３遺伝子トランスメンブラン及び可溶性形のタンパク質を例示する。そして、それらとＩＬ−１ＲＩタンパク質配列との関係を示す。三次抗原刺激の24時間後に上記のようにして作成したＴＨ１細胞及びＴＨ２細胞から得られたＲＮＡの定量ＲＴ−ＰＣＲ分析（図５）によって、遺伝子の推定ＴＨ２特異的発現が確認されただけではなく、１０３遺伝子の発現がＴＨ２特異的のようであるということ、すなわち、感受性ＲＴ−ＰＣＲ研究ではＴＨ１のＲＮＡサンプル中で１０３遺伝子メッセージが検出されなかったということも明らかになった。１０３遺伝子のＴＨ２特異性は、さらに、いくつかの代表的なＴＨ細胞系のノーザン分析によって確認された。特に、３つのＴＨ２クローン（ＣＤＣ２５、Ｄ１０．Ｇ４、ＤＡＸ）及び３つのＴＨ１クローン（ＡＥ７．Ａ、Ｄｏｒｒｉｓ、Ｄ１．１）を利用して、ＲＮＡサンプルを刺激されていない細胞又は平板結合抗ＣＤ３抗体によって６時間刺激を受けた細胞から単離した。サンプルを図６に示したようにバンド１０３配列を用いて探索した。１０３遺伝子ＲＮＡは各ＴＨ２細胞系の刺激されていない細胞及び刺激された細胞の両方から得られたＲＮＡに存在する一方で、刺激されたＴＨ１細胞又は刺激されていないＴＨ１細胞のいずれから得られたサンプルの全てに１０３遺伝子ＲＮＡは全く存在していない。上記のＲＴ−ＰＣＲ分析が初めて証明したように、検出可能なＴＨ１誘導シグナルは存在しないので、１０３遺伝子はＴＨ２特異的のようである。図７に示したデータは、ＴＨ細胞クローン（レーン１−５）及びマウス組織（レーン６−10）における１０３遺伝子発現をアッセイした追加のノーザン分析を示すものである。刺激されたＴＨ２細胞及び刺激されていないＴＨ２細胞の両方において１０３遺伝子ＲＮＡの発現が確認されることに加えて、ここに示されたデータは、１０３遺伝子発現が試験された組織（すなわち、脳、心臓、肺、脾臓、及び肝臓）のそれぞれにおいて陰性のようであることが証明されている。図８は、１０３遺伝子調節についての２つのポイントを示すRNase 保護アッセイを例示する。第一に、このＴＨ細胞クローンの分析によって上記したＴＨ２特異的という結果が確認される。特に、RNase 保護によるこの研究の結果は、１０３遺伝子ｍＲＮＡがＴＨ１クローンＡＥ７には存在しないが、ＴＨ２クローンＤ１０．Ｇ４には存在するということを示す。第二に、RNase 保護によって、交互形の１０３遺伝子転写物がＴＨ２クローンの刺激により産生されることが示された。特に、抗ＣＤ３刺激の６時間以内に、追加的な２つの形の１０３遺伝子転写物がＴＨ２クローン中に現れる。これらの追加的な１０３遺伝子転写物形は、一つは、短縮され、分泌された可溶性形のバンド１０３遺伝子産物をコードする転写物を示し、もう一つは、さらに短縮された形の遺伝子産物をコードする、小さい、ミニと称される転写物を示す。したがって、トランスメンブラン遺伝子産物をコードする１０３遺伝子転写物は刺激されていないＴＨ２細胞及び刺激されたＴＨ２細胞の両方において発現する一方、２つの短縮形の転写物がＴＨ２特異的誘導手法において発現することは明らかである。さらに、トランスメンブラン産物をコードする１０３遺伝子転写物は刺激されたＴＨ２細胞及び刺激されていないＴＨ２細胞の両方において発現する一方、刺激された細胞中に存在するかかる転写物のレベルは低い、すなわち、ダウンレギュレートされる。したがって、低レベルのトランスメンブラン産物及び高レベルの分泌１０３遺伝子産物は、共同的に作用して何らかの刺激誘導シグナル伝達の発生を低下させ得る。さらに、ここで示した結果により、ミニ形の１０３遺伝子転写物（これは、可溶性形の１０３遺伝子産物の短縮版をコードすることができる。）が初めて観察されたということは注目される。要約すると、Ｔヘルパー細胞系における１０３遺伝子発現は以前から報告されている(Tominaga，S．et al.，1992，Biochem．Biophys．Acta．1171:215-218) 一方で、ここで利用したＴＨパラダイム／特異的表示技術は、初めて１０３遺伝子がＴＨ２細胞サブ集団特異的表面マーカーをコードするということを証明した。事実、本実施例で記載した結果は、in vivo でのＴＨ細胞サブ集団特異的細胞マーカーの最初の同定を示すものである。ＴＨ２細胞サブ集団特異的マーカー及び細胞表面タンパク質の両方としてのその状態が提供されているので、１０３遺伝子産物全長を種々の方法に利用してＴＨ細胞サブ集団関連疾患をモジュレートしたり、及び／又はそのようなモジュレート能力を発揮する化合物を同定することができる。さらに、切断型の１０３遺伝子産物は、これらの方法の一部として用いることができる。モジュレート方法は上記の5.9 節に記載されており、また、モジュレート化合物の同定のための戦略は上記の5.8 節に記載されている。８．実施例：新規ＴＨ細胞サブ集団特異的発現遺伝子の同定本節で示した実施例では、ＴＨ細胞サブ集団において及び／又はそのようなサブ集団の分化中に特異的に発現する遺伝子を表す新規遺伝子配列が記載される。 8.1 材料及び方法Ｔ細胞クローンパラダイム：上記の5.1.1.1 節で記載したようにＴ細胞クローンパラダイムの調査を実施した。特に、ＴＨ細胞クローンパラダイムには、３つの異なるクローンを用いた：Ｄ１０．Ｇ４（ＴＨ２）、ＡＥ７（ＴＨ１）及びＤ１．１（ＴＨ１）。刺激の前に、細胞培養物をフィコール勾配による遠心分離にかけることによってに生細胞で富化した。回収した細胞を計数してそれらの生存度をトリパンブルー排除法(exclusion)を用いて調べた。細胞をＴ２５又はＴ７５フラスコに、それぞれ培地５ml中に約５×10⁶細胞又は培地10ml中に約1.5× 10⁶細胞で植え替えた。一般的に、Current Protocols in Immunology，1992，Coligan，J.E．et al. ，John Wiley & Sons，NY，pp3.12.4-3.12.6 にしたがって、コーティングを行った。特に、プレーティング前に、フラスコを抗ＣＤ３−ε抗体(145-C11ハイブリドーマのハイブリドーマ上清；Parmingen，Inc.,サンディエゴ、カリフォルニア）でコーティングした。コーティングのために、抗体をフラスコの底を被覆するのに十分な容量で、１−２μg/mlでＰＢＳに再懸濁した。コーティング溶液をフラスコ上で37℃にて少なくとも１時間インキュベートした。インキュベーション後、抗体コーティング溶液を吸引によって除去し、ただちに細胞を添加した。フラスコを37℃のインキュベーター中に６時間置いた。細胞を、例えば培養物から上清を除去することによって採取し、その後RNAzol^TM溶液を加えることによって細胞を直接溶解した。ｃＤＮＡは下記のようにして得た。ｃＤＮＡ単離：上記の6.1 節に記載した方法を用いて細胞からＲＮＡを採取した。ｍＲＮＡをQuickPrep^TMｍＲＮＡ精製キット（Pharmacia）を用いて、製造業者の指示にしたがって直接精製した。ＴＨ１ｃＤＮＡライブラリーをGibco BRL SuperScript^TM Lambda Systemキットを用いて、製造業者の指示にしたがって構築した。簡単に言えば、精製ｍＲＮＡ 4.5μg を、Not-1 クローニング部位を含むポリＡ活性化された(poly A-prim ed)第１のｃＤＮＡ鎖の合成のための出発原料として用いた。第２のｃＤＮＡ鎖の合成は、RNase H 処理後、ランダムプライミングすることによって行った。Sa 1-1 アダプターを得られた２本鎖ｃＤＮＡの5'末端に連結した。連結したｃＤＮＡをNot-1 で消化して、サイズ分画した。長さが 0.5-8.0kbの範囲内のｃＤＮＡを含む画分をSal-1/Not-1 λZipLox^TMアームにクローニングした。次いで、組換えファージをStrategene Gigapack^TM II Packaging Extractsキットを用いて製造業者の指示にしたがってパッケージングした。E.coli Y 1090(ZL)^TM株(Gibco BRL）細胞をパッケージングした組換えファージで形質転換し、150mm皿当たり50 ,000pfu の密度で塗布した。サブクローニングされたバンド２００ｃＤＮＡ断片から作成した放射標識プローブにハイブリダイズすることによってプラークをスクリーニングした。λクローンからのｃＤＮＡ挿入断片の切除及び組換えプラスミドＤＮＡのE.coli DH10B(ZIP)^TM(GibcoBRL)への導入は製造業者の指示にしたがって行った。２００遺伝子ｃＤＮＡを単離するために、ｃＤＮＡライブラリーをバンド２００サブクローンＯの配列全体を標識することによって作成したプローブ（これは、特異的表示分析から得た増幅ｃＤＮＡを用いて構築された。）を用いてスクリーニングした。バンド２００配列は、pCRII Cloning Vector^TM(Invitrogen)をEc oRI を用いて消化することによって切除されたものである。このプローブを用いてスクリーニングした場合、約1/100,000 のｃＤＮＡライブラリープラークが陽性として評価された。さらなる研究のために、２００−Ｐ及び２００ＡＦを含むいくつかのクローンを選択した。また、上記のｃＤＮＡライブラリーを用いて５４遺伝子ｃＤＮＡクローンも単離した。スクリーニングのために、切除したバンド５４挿入断片全体をプローブとして用いた。その他の操作：本実施例で記載した実験において行った全てのトランスジェニックＴ細胞操作、細胞サンプル採取、追加のＲＮＡ単離、特異的表示、配列分析、及びノーザン操作は、上記の6.1 節で記載したとおりに行った。 8.2 結果トランスジェニックＴ細胞パラダイム及びＴ細胞クローンパラダイム調査を行って、ＴＨ細胞サブ集団内で及び／又はそのようなサブ集団の分化中に特異的に発現する遺伝子を示す遺伝子配列を同定した。ここで記載したものは、これらのパラダイム調査によって同定されたいくつかの新規遺伝子である。特に、ここで記載した遺伝子は、１０、５４、５７、１０５、１０６、１６１及び２００遺伝子と称されている。ここで記載した新規遺伝子配列の特異的発現特性付けの要約を上記の表１に示す。バンド１０及び５７はＴＨ誘導遺伝子配列として同定された。すなわち、刺激されていないＴＨ細胞におけるそのような遺伝子の発現は検出されないか、或いは著しく低いレベルで検出されたかのいずれかであるが、刺激されたＴＨ１細胞及びＴＨ２細胞の両方においてはアップレギュレートされる。事実、１０遺伝子発現は、刺激後６時間という早い時期に検出可能である。したがって、そのような遺伝子産物は、ＴＨ細胞の活性化に関与し得るものであり、及び／又は非ＴＨ細胞サブ集団特異的手法において成熟ＴＨ細胞機能の維持に関与し得るものである。図９Ａ−９Ｄは、１０遺伝子コーディング領域のヌクレオチド配列（配列番号３）及び１０遺伝子産物の誘導アミノ酸配列（配列番号１０）を表すものである。データベース調査により、１０遺伝子配列は新規である、すなわち、データベースにおいては以前には報告されていないということが示された一方で、バンド１０ヌクレオチド配列に対応する１０遺伝子の部分（図９Ａ−９Ｄのヌクレオチド配列の下線を引いた部分）の分析により、図１０Ａ−１０Ｆに示したように、公知の遺伝子産物の特異的クラスとの高い類似性が示された。特に、図１０Ａ− １０Ｆの親水性プロットに示されるように、１０遺伝子産物が７つのトランスメンブランドメイン配列モチーフを有するタンパク質をコードするようである。興味深いことに、このクラスのタンパク質に属する遺伝子産物はＣタンパク質結合受容体分子を表す傾向がある（例えば、Larhammar，D．et al.，1992，J．Biol ．Chem．267:10935-10938; Law，S.F．et al.，1991，J．Biol．Chem．266:1788 5-17991参照）。したがって、１０遺伝子産物の予測されたタンパク質構造と結合した１０遺伝子のＴＨ誘導発現は、１０遺伝子産物が成熟ＴＨ細胞の分化に重要なシグナル伝達の発生に関与しているということを示唆するものである。さらに、図１１に示した地図のとおり、染色体上でのマウス１０遺伝子の占める位置が同定された。１０遺伝子の遺伝子座は、染色体１２上にあり、Ｔ細胞自己抗原をコードする遺伝子クラスと密接に連鎖しており、しかもＩｇＨ鎖遺伝子の遺伝子座の近くに位置する。代表的なバンド５７クローンのヌクレオチド配列（配列番号４）を図１２に表す。バンド５７に対応する遺伝子は５７遺伝子である。５７遺伝子は、公のデータベースに見出されないので、新規な遺伝子配列のようである。これまでは公知のペプチドドメインとの相同性は同定されていなかった。上記の表１に示したとおり、遺伝子１０５、１０６及び２００は、増幅したバンド１０５、１０６及び２００のＴＨ１特異的出現(differential appearance) によって示されたように、それぞれＴＨ１細胞サブ集団内で高レベルで発現する。バンド１０５及び１０６内に含まれるヌクレオチド配列を、それぞれ、図１３（配列番号５）及び図１４（配列番号６）に表す。以下で論じるように、マウス２００遺伝子の配列を、図１７Ａ−１７Ｄに表す（配列番号８）。これらの配列は、公のデータベースには見出されない。これらの各配列が示すＴＨ１特異的発現パターンが提供されたので、その遺伝子及び遺伝子産物は、ＴＨ１関連疾患の治療、そのような疾患の診断、及び／又はＴＨ１関連疾患を改善することが可能な化合物の同定方法の一部に用いることができる可能性がある。１６１遺伝子はＴＨ細胞サブセット特異性のようである。すなわち、１６１遺伝子発現は、ＴＨ１細胞又はＴＨ２細胞のいずれかにおいて観察されているが、ＴＨ１細胞サブ集団及びＴＨ２細胞サブ集団の両方において同時にその発現が観察されたことはない。１６１遺伝子特異的発現パターンの詳細は現在解明しているところである。１６１遺伝子発現は、ＴＨ１、ＴＨ２及びＴＨ０細胞サブ集団に加えて、さらにもう一つのＴＨ細胞サブ集団の存在を示す可能性がある。図１５にバンド１６１ヌクレオチド配列を示す。１６１遺伝子は新規の配列のようである一方、図１６に示したように、公のデータベースにおける一連の遺伝子配列（配列番号１３−１７）とのはっきりとしたレベルでの類似性を有する。興味深いことに、このグループ内の遺伝子は、それぞれα−インターフェロン応答性プロモーターを含む。バンド２００をプローブとして利用して、下記の10節で要約したように、２００−Ｐ、２００−ＡＦ及び２００−Ｏと称されるクローンを含む、マウス２００遺伝子ｃＤＮＡクローン（これらは、ＮＲＲＬに寄託されている。）を同定し、単離した。ｃＤＮＡクローンを特性付けし、図１７Ａ−１７Ｄに示したようなマウス２００遺伝子コーディング領域のヌクレオチド配列全長（配列番号８）を得た。また、図１７Ａ−１７Ｄにマウス２００遺伝子産物誘導アミノ酸配列（配列番号１０）も示す。データベース調査によって、２００遺伝子産物は細胞外Ｉｇドメインをを含む新規受容体であり、したがってＩｇ受容体スーパーファミリーに入れられるということが示された。２００遺伝子ヒト相同体のクローニング及び特性付けは下記の９節に示された実施例において記載されている。マウス２００遺伝子ｍＲＮＡノーザンブロット分析の結果を図１８に示す。図１８に示されたデータは、第一に２００遺伝子は長さ約 1.2kbの転写物を産生するということを示し、第二に２００遺伝子発現のＴＨ１特異性を示している。この研究のために、３つのＴＨ１クローン（Ｄ１．１、Ｄｏｒｒｉｓ、ＡＥ７）及び３つのＴＨ２クローン（Ｄ１０Ｇ．４、ＤＡＸ、ＣＤＣ２５）を利用し、ＲＮＡサンプルは刺激されていない細胞（−）又は平板結合抗ＣＤ３抗体で６時間刺激された細胞（＋）のいずれかから単離した。サンプルを２００遺伝子配列を用いて探索した。図１８に示したように、刺激されたＴＨ１細胞及び刺激されていないＴＨ１細胞由来のＲＮＡは両方とも２００遺伝子ｍＲＮＡを含んでおり、一方でＴＨ２細胞から得られたサンプルには２００遺伝子ｍＲＮＡは含まれていなかった。刺激されたＴＨ１細胞のそれぞれにおいて、対応する刺激されていないＴＨ１細胞と比較して２００遺伝子発現が高いということも注目される。上記の表１に示したように、５４遺伝子はＴＨ１制限手法(TH1-restricted ma nner)において発現する。５４遺伝子は、ＴＨ１細胞クローンＡＥ７の発現パターンをＴＨ２細胞クローンＤ１０．Ｇ４のものと比較したＴ細胞パラダイム調査によって同定された。初期特異的発現分析は、上記の6.1 節で記載したような特異的表示技術を用いて行った。５４遺伝子発現のＴＨ１制限パターンは、図１９に示したように、ＴＨ１細胞系（ＡＥ７、Ｄ１．１、Ｄｏｒｒｉｓ）及びＴＨ２細胞系（Ｄ１０．Ｇ４、ＤＡＸ、ＣＤＣ２５）から単離されたＲＮＡのノーザン分析によって確認された。さらに、図１９に示されたＴＨ１／ＴＨ２ノーザンブロットデータは、抗ＣＤ３抗体で刺激された、又は刺激されていない細胞クローン内での５４遺伝子発現を示すものであり、５４遺伝子発現は刺激されたＴＨ１細胞内では低下するということが示されている。５４遺伝子発現をさらに特性付けるために、詳細な経時研究がＡＥ７クローンから単離されたＲＮＡを用いて行われた。特に、ＲＮＡは刺激されていないＡＥ７クローン、並びに図２０に示したように、抗ＣＤ３抗体を用いてさまざまな時間刺激したＡＥ７クローンから単離した。図２０に示したように、５４遺伝子発現は刺激の２−６時間後にわずかに低下し、刺激後４８時間以内に再び前刺激レベル(pre-stimulation level)を獲得することはなかった。種々のＴ細胞、Ｂ細胞及び単球／マクロファージ細胞系を示す細胞系の５４遺伝子発現分析を行ったところ、非ＴＨ１細胞では５４遺伝子発現が検出されず、５４遺伝子発現はＴＨ１様細胞に高度に制限されるということが示された。また、組織内での５４遺伝子発現のノーザン分析（図２１）も、ＴＨ１細胞制限発現プロフィールと一致する発現プロフィールを示した。すなわち、図２１に示したように、大部分の器官は、５４遺伝子を発現することができないが、リンパ節組織では高レベルの５４遺伝子発現が見られ、脾臓、睾丸及び子宮では低いが検出可能なレベルの発現が見られた。バンド５４ヌクレオチド配列（これは、５４遺伝子が同定された初期特異的表示分析において産生された増幅ｃＤＮＡから得られたものである。）を用いて、５４Ａ−Ｇと称する７つのｃＤＮＡクローンを単離した。各クローンは同様のサイズであった。５４−ＣのｃＤＮＡはE.coliクローン５４−Ｃに入れてＮＲＲＮに寄託した。図２２Ａ−２２Ｃに５４遺伝子コーディング配列全体を示す（配列番号１１）。また、５４遺伝子産物の誘導アミノ酸配列も図２２Ａ−２２Ｃに示す（配列番号１２）。データベース相同性調査に基づいて、５４遺伝子が新規のシステインプロテアーゼをコードするようである。システインプロテアーゼは細胞内タンパク質分解に貢献する酵素であり、組織分解において役割を果たすようである。したがって、ＴＨ１様細胞が関与する免疫疾患における５４遺伝子発現及び／又は５４遺伝子産物活性を阻害することが組織損傷を最小限にするのに役立ち得るという可能性がある。特に、５４遺伝子配列は、活性システインプロテアーゼ酵素に特有の３つのチオールプロテアーゼドメインを示す。これらのドメインは、アミノ酸残基約 145 −156 にＣＹＳドメイン（活性部位：Ｃ、151 位）、アミノ酸残基約 287−297 にＨＩＳドメイン（活性部位：Ｈ、289 位）、及びアミノ酸残基約 321−340 にＡＳＮドメイン（活性部位：Ｎ、326 位）を含む。興味深いことに、定型の(typ ical)ＣＹＳドメインは 149位（この位置は通常Ｇ又はＥである）のＫ残基によって切断されるが、これは恐らく、５４遺伝子産物システインプロテアーゼは非常に基質特異的であることを示すものである。さらに、アミノ酸配列分析は、 148位と189 位、 182位と224 位、及び282 位と347 位のシステイン間の確かなジスルフィド結合を示している。さらに、図２３Ａ−２３Ｃに５４遺伝子産物アミノ酸配列を示しており、その潜在的なシステインプロテアーゼ様の特徴のいくつかが示されている。例えば、５４遺伝子産物はシステインプロテアーゼプレプロ酵素領域（この領域は、活性システインプロテアーゼの生成によって切り離される。）に似たアミノ末端を有する。アミノ酸残基56から75の囲まれた領域は、以前いくつかのシステインプロテアーゼの特徴として注目された「ＥＲＦＮＩＮ」領域を示すものである(Ishidoh，K．et al.，1987，FEBS Lett．226:33-37)。囲まれた領域内の円で囲まれたアミノ酸残基は保存アミノ酸残基を示す。個々の囲まれたアミノ酸残基は相同性に基づき、酵素の活性部位内にあると考えられる残基を表す。９．実施例：ヒト200 遺伝子の同定および特性決定ここに提示される実施例においては、マウス200 遺伝子のヒト相同物に相当するヒト200 遺伝子のクローニング、同定および特性決定が記載される。 9.1 材料および方法マウス200 遺伝子プローブ：マウス200 遺伝子ｃＤＮＡ(femt 200)ＯＲＦの約 90％を含有するおよそ800 bp EcoRIインサートをゲル精製し、³²P 標識し、そして以下に記載されるλgt11ヒトリンパ球ｃＤＮＡライブラリーをプローブするのに使用した。ヒト200 遺伝子プローブ：ヒト200 遺伝子feht 200a ｃＤＮＡクローンの約500 bpインサートを³²P 標識し、そして以下に記載されるヒト胎児脾臓ｃＤＮＡライブラリーをプローブするのに使用した。スクリーニング操作：λgt11ヒトリンパ球ｃＤＮＡライブラリー（カタログNo .HL 1031B;Clontech）のおよそ10⁶個のプラークを前記マウス200 遺伝子プローブを用いて二通りでスクリーニングした。チャーチ(Church)緩衝液(7% SDS，250 mM NaHPO₄，２μM EDTA，1% BSA)中65℃でフィルターをプローブと一夜ハイブリダイズさせた。翌日、フィルターを2XSSC/1% SDS中50℃で30分間洗浄した。次にこのフィルターを−80℃でコダックフィルムに露出させた。陽性プラークを同じ条件下に再スクリーニングした。ストラタジーン(Stratagene)Uni-Zap クローニングシステムを用いて構築されたヒト胎児脾臓ｃＤＮＡライブラリーを前記したヒトfeht 200a 遺伝子プローブを用いてスクリーニングした。およそ10⁶個のプラークをチャーチ緩衝液中65℃ で一夜二通りでハイブリダイズさせた。次にフィルターを0.1XSSC，0.1% SDS 中 65℃で30分間洗浄しそしてフィルムに露出させた。陽性物を同じ条件下に二次スクリーニングにより確認した。サブクローニング／配列決定操作： λgt11ｃＤＮＡライブラリーから得られた陽性クローンからのＤＮＡをプレート溶解法により生成させた。この精製されたＤＮＡを消化してｃＤＮＡインサートを得、これをpBluescript プラスミド(Stratagene)中にサブクローンした。ヒト胎児脾臓ｃＤＮＡライブラリーから得られた陽性クローンを、Stratagene に記載されるようにしてExAssistヘルパーファージ、XL1-Blue細胞およびSOLR細胞を用いて切り出した。次に切り出し産物をLB/Ampプレート上に塗布しそして37 ℃で一夜インキュベートした。白色コロニーを選びとって配列決定用のＤＮＡを調製した。ＤＮＡ配列決定は標準的方法に従って行われた。ヒト遺伝子200 発現のノーザンブロット分析：前記6.1 節に記載されるようにしてノーザン(Northern)ブロットを実施した。種々のヒト臓器からの総ＲＮＡ15μｇを分析した(Clontech，CA)。用いられた³² P 標識プローブは前記したFeht200aクローンであり、このものはヒト遺伝子200 の5'ORF を含有する。 9.2 結果ヒト200 遺伝子の完全長配列はここに記載されるようにして成功裏にクローンされそして特性決定された。ヒト200 遺伝子をクローニングするためには、マウス200 遺伝子ｃＤＮＡ(fem t200)ＯＲＦの約90％を含有する800 bp EcoRIインサートをゲル精製し、³²P 標識し、そしてλgt11ヒトリンパ球ｃＤＮＡライブラリーをプローブするのに使用した。およそ10⁶個のプラークを前記9.1 節で記載されるようにして二通りでスクリーニングした。１個の陽性プラークが得られこれを同じ条件下に再スクリーニングした。ひとたび純粋となると、このクローンはプレート溶解法によりラムダＤＮＡを生成させるのに使用され、そしてこのラムダＤＮＡを消化して500bp インサート(feht200a)を得、このものは配列決定すると、マウス200 遺伝子のヒト相同物であることが判明した。ヒト200 遺伝子の全ORF をコードするクローンを得るには、前記9.1 節に記載されるようにしてヒト200 遺伝子プローブを用いてヒト胎児脾臓ｃＤＮＡをスクリーニングした。３個の陽性クローンが得られ、そのうちの２個が同じ条件下における二次スクリーニングで陽性であった。２個の陽性クローンをサブクローニングしそしてそれらのｃＤＮＡインサートを配列決定した。feht200bおよびfeht 200cと標識されたこれら２種のクローンはそれぞれ長さおよそ1.56 kb および2. 0 kbであり、feht200cは全コード配列を含有した。クローンfeht200cは下記12節に記載されるようにＡＴＣＣに寄託された。完全なヒト200 遺伝子オープンリーディングフレームを含有するヌクレオチド配列を図24Ａ−24Ｄ（配列番号23）に示す。ヒト200 遺伝子産物に由来するアミノ酸配列も図24Ａ−24Ｄ（配列番号24）に示す。ヒト200 遺伝子産物の301 アミノ酸残基配列では、それがアミノ酸残基１から約20までのシグナル配列、アミノ酸残基およそ21-200からの細胞外ドメイン、アミノ酸残基およそ201-224 からのトランスメンブランドメインおよびアミノ酸およそ225-301 からの細胞質ドメインを含む異なるドメインを呈示する細胞表面レセプターであることが示される。この細胞外ドメインはアミノ酸残基約30からアミノ酸残基約128 までからのIg型可変セットドメインを含有しており、従って20 0 遺伝子産物をIgレセプタースーパーファミリー内部に置いている。 200 遺伝子転写物の組織分布のノーザン分析が行われた。脳、腎臓、肝臓、肺、筋肉、前立腺、脾臓、胸腺および気管からのＲＮＡ1.5 μｇを単離しそしてヒト200 遺伝子発現に関して分析した。この分析では、脳、肺、気管、脾臓および胸腺を含む組織中におよそ2.2 kbのヒト200 遺伝子転写物が示された。要約すると、ここに記載されるように、マウス200 遺伝子のヒト類似物に相当するヒト200 遺伝子が成功裏にクローン化され特性決定された。そのアミノ酸配列から示されるとおり、ヒト200 遺伝子産物は分子のIgスーパーファミリークラスのレセプターである。 10．実施例：IgG1融合タンパク質の構築および発現この実施例に記載されるのは、IgG1融合タンパク質の構築および発現である。詳しくは、ヒトおよびマウスの200 遺伝子および103 遺伝子IgG1融合タンパク質の構築が論議される。 10.1 材料および方法IgG1 融合タンパク質をコードする組換えプラスミド：マウス200 遺伝子-hIgG1融合タンパク質をコードするベクターの生成：マウス 200 遺伝子のシグナル配列および細胞外ドメインをコードする断片を下記オリゴヌクレオチドを用いてマウス200 遺伝子のORF を含有するｃＤＮＡクローンから増幅させた：これらオリゴヌクレオチドプライマーはまたPCR 産物の5'および3'末端でそれぞれXhoIおよびBamHI 制限部位を導入して、続くIgG1発現ベクター（pCD5-CD44-Ig G1; Aruffo，A.ら、1991，Cell 61:1303-1313 を参照されたい）への挿入を容易にする。pCD5-CD44-IgG1ベクターはCD5 シグナル配列、CD44細胞外ドメインおよびヒトIgG1重鎖Fc領域を含有するタンパク質をコードする。マウス200 遺伝子-h IgG1融合タンパク質ベクターを構築するために、pCD5-CD44-IgG1のCD5 およびCD 44部分をマウス200 遺伝子産物シグナル配列および細胞外ドメインをコードする配列で置き換えた。 PCR 反応はアニール温度60℃での25サイクル増幅からなる。増幅ではVent^TM熱安定性ＤＮＡポリメラーゼ(New England BioLabs，Inc.; Beverly，Massachuset ts)が使用された。PCR 産物（約600bp）をXhoIおよびBamHI で消化して、pCD5-C D44-IgG1を予めXhoIおよびBamHI で消化してCD5 シグナル配列およびCD44エクトドメインをコードする配列を除去したものの中に挿入した。ヒト200 遺伝子-hIgG1融合タンパク質をコードするベクターの生成：ヒト200 遺伝子のシグナル配列および細胞外ドメインをコードする断片を下記オリゴヌクレオチドを用いてヒト200 遺伝子のORF を含有するｃＤＮＡクローンから増幅させた：増幅およびpCD5-CD44-IgG1サブクローニング操作はマウス200 遺伝子-hIgG1融合タンパク質に関して前記したと同様である。マウス103 遺伝子-hIgG1融合タンパク質をコードするベクターの生成：マウス 103 遺伝子産物細胞外ドメインを含有する溶性Ig融合タンパク質（サイズ約60k D）をコードするベクター（しかし103 遺伝子産物シグナル配列には欠ける）はここに記載されるようにして構築された。pCD5-CD44-IgG1ベクター（前記）のCD 44部分を、103 遺伝子産物細胞外ドメインをコードするヌクレオチド配列と置き換えた。Ig融合タンパク質の103 遺伝子産物細胞外ドメイン配列は103 遺伝子産物アミノ酸残基27-342からなった（すなわち、アミノ酸配列Ile-Val-Ala-Gly-Cy s-Ser で終わる103 遺伝子産物部分）。 103 遺伝子産物細胞外ドメインをコードする断片を、アミノ酸残基27-342を含有する103 遺伝子産物を生産するであろう103 遺伝子領域を挟む配列と相補的な合成オリゴヌクレオチドを用いてPCR により増幅された。このオリゴヌクレオチドは、後続のpCD5-CD44-IgG1内への挿入を容易にするために、各増幅された103 遺伝子断片の5'末端にKpnI部位および3'末端にBamHI 部位を創りだすよう設計されていた。 5'オリゴヌクレオチドは次のとおりであった： 3'オリゴヌクレオチドは次のとおりであった： PCR 反応条件は、Vent DNAポリメラーゼ（New England Biolabs，Beverly，M A）および鋳型として103D遺伝子を使用する95℃で30秒間、60℃で30秒間、および72℃で30秒間の15回サイクルからなった。 103 PCR 産物をKpnIおよびBamHI を用いて消化し、そしてCD5-IgG1ベクターの KpnI−BamHI 部位に連結し、こうしてCD44配列を103 遺伝子配列で置き換えた。 CD5 シグナル配列を含有する融合タンパク質、マウス103-細胞外ドメインおよびヒトIgG1重鎖Fc領域をコードする生成するプラスミドを製造者の指示に従いLi pofectAMINE^TM(GIBCOBRL，MD)を用いてCOS 細胞中にトランスフェクションさせた。150mm プレートの細胞のトランスフェクションに0.18μｇのプラスミドＤＮＡおよび140 μｌのLipofectAMINE^TMを用いた。トランスフェクション24時間後、培地を10% Ultra-low IgG Fetal Bovine Serum(GIBCOBRL，MD)/DMEM(BioWHITT AKER，Maryland)で置き換え、そしてトランスフェクションされた細胞を４−５日間増殖を継続させた。次に上清を収穫し、遠心して非付着性の細胞および屑を除去し、そして−20℃で貯蔵した。精製するには、上清の１mlを４℃でIPA-300 Immobilized rProteinA(Repligen ，MA)10μｌを用いて一夜沈殿させた。翌日、ビーズを遠心して集め、10容量のP BS で３回洗浄した。分析には、このビーズを20μｌの2 X Laemmli Sample Buff er(BIO-RAD，CA)中に懸濁させ、そして100 ℃で10分間ボイルした。このボイルしたサンプルを短時間回転させ、そして10% SDS-PAGEゲル(JILEinc．CT)上に負荷した。組換え融合タンパク質の代謝標識化：COS-７培養物の一過性トランスフェクション36時間後、細胞を置換増殖培地〔メチオニンおよびシステイン欠乏DMEM(ICN ,Inc.，CA)〕ですすいだ。すすぎ後、³⁵S-システインおよび³⁵S-メチオニンの混合物（Express³⁵S³⁵S^TM，Dupont，MA）の150 μCI/ 培地mlを置換培地に加えそして細胞を一夜培養した。 SDS-PAGE による組換えタンパク質の分析： hIgG1 融合タンパク質は200 遺伝子hIgG1 融合タンパク質に関する製造者の指示に従ってCOS-７細胞のLipfectAMINE^TM(Gibco，Inc.，MD)仲介一過性トランスフェクションにより生成させ、５日目上清の１mlを20mM HEPES（pH7.0）の存在下20μｌの Protein A Trisacrylビーズ（Pierce，Inc.，IL）と一定した攪拌下４℃で一夜混合した。次にビーズをPBS で３回洗ったのち負荷緩衝液に添加した。ビーズは還元性のまたは非還元性の負荷緩衝液と混合した（Molecular Clonin g，Sambrook，FritschおよびManiatis，第２版、1989，但しDTT が2.5%β−メルカプトエタノールで置換されている）。 10.2 結果ここでは組換えIgG 融合タンパク質の構築および発現が記載されている。詳細には、200 遺伝子産物-IgG1 および103 遺伝子産物-IgG1 融合タンパク質が記載されている。マウスおよびヒト200 遺伝子産物-IgG1 融合タンパク質は200 遺伝子産物シグナル配列およびヒトIgG1重鎖Fc領域への細胞外ドメイン融合物を含有する。103 遺伝子産物-IgG1 融合タンパク質はCDS シグナル配列および、ヒトIg G1重鎖Fc領域に融合した103 遺伝子産物細胞外ドメインを含有する。 200 遺伝子-hIgG1融合タンパク質は前記10.1節に記載されるように、COS-７細胞の一過性トランスフェクションにより生産された。COS-７上清のプロテインＡ免疫沈殿およびSDS-PAGEによるそれらの分析では、第１に、正確なIgG-1 ペプチドが融合物の一部分として生産されることが証明され（融合物のプロテインＡ免疫沈殿により証明される）、そして第２に、200 遺伝子-IgG1 融合タンパク質が培養上清mlあたり約１μｇの濃度で実質的に発現されることが証明された。さらに、免疫沈殿された上清を分析しそして還元性および非還元性条件下に比較すると、200 遺伝子-IgG1 融合タンパク質は、もし融合タンパク質中にヒトIgG1重鎖ペプチド配列が存在する場合は、予想されるように、オリゴマー化を受けることが明白である。さらに融合タンパク質がゲルを通して移動する（すなわち、緊密なバンドよりむしろ拡散する）際のそれらのサイズ（すなわち、アミノ酸配列単独から予測されたそれより大きい）および外観から、予測されたように、融合タンパク質がグリコシル化されていることが示される。 11．実施例：トランスジェニック動物の生産および特性決定ここにはマウス200 遺伝子産物またはマウス103 遺伝子産物を過剰発現するトランスジェニックマウスの生産および特性決定が記載される。 11.1 材料および方法200 遺伝子トランスジェニッククローンの構築：全200 遺伝子配列のPCR 産物がpCIL-10 プラスミド中のIL-10 遺伝子と置き換えるために用いられた。pCIL-10 プラスミドの構築を以下に記載する。 pCIL-10 プラスミドは5.5kb BamHI-XbaIゲノム断片を含有し、その中にはヒト CD2 エンハンサーが包含される(Greaves ら、1989，Cell 56(6):979-86)。ヒトイムノグロブリン重鎖プロモーター、P μ、を含有する0.5kb XXXbaI-SmaI 断片（Danner and Leder，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，1985，52:8658-8662）をCD 2 断片の3'- 末端に連結させた。P μ断片の後にIL-10 コード配列を含有するXb aI(ブラントエンド)-BamHI 断片が続き、これにヒト生長ホルモンの2.1 kb BamH I-EcoRIゲノム断片（HUMGHCSA(GenBank)の塩基5164-7317）が構築物の3'- 末端で連結された。全マウス200 遺伝子コード配列の0.8 kb PCR産物は、鋳型としてのマウス200 遺伝子c ＤＮＡ200-AF、および5'末端でSpeIそして3'末端でBamHI なる適合する制限部位を有するオリゴヌクレオチドプライマーを用いる25サイクル反応により得られた。用いられた5'- オリゴは5'-GCG CAA TTG ACT AGT GAC CCA CGC GTC C GG ATT TC-3'（配列番号31）でありそして3'- オリゴは5'-GAC GCG GAT CCT CAG GAT GGC TGC TGG CTG-3'（配列番号32）であった。95℃で２分間の熱変性後、V ent^TMＤＮＡポリメラーゼ(New England Biolabs，MA)により、95℃で30秒間、60 ℃で30秒間、72℃で60秒間の３工程サイクルを行った。72℃で５分間の最終工程が末端仕上げのために行われた。PCR 産物をSpeIおよびBamHI（New England Bio labs，Beverly，MA）により消化し、そしてIL-10 遺伝子のSpeIからBamHI までを除去後のpCIL-10 の断片に連結した。MaxEfficient E．coli DH5α−コンピテント細胞(GIBCO-BRL，MD)を製造者の指示に従って形質転換に使用した。形質転換体を0.1 μg/mlのアンピシリンを含有するLBブロス中で増殖させ、そしてＤＮＡをQiagene Plasmid Maxi Kit(Qiagene，CA)により抽出した。確認のために制限分析を実施し、そして最終的な構築物を配列決定してPCR により導入されたすべてのありうる突然変異を排除した。トランスジェニックマウスの生産からp2 00Tr3 で示されるプラスミドが選択された。この最終構築物は、マウス200 遺伝子コード配列の直前の上流にヒトIgM プロモーターの0.5kb 断片に結合したヒトCD２エンハンサーを含有する約5.5 kbゲノム断片を含有した。ヒト生長ホルモン遺伝子の3'未翻訳配列を含有する領域はマウス200 遺伝子ORF の直後の下流に位置しそしてポリＡスプライス部位を含有した。103 遺伝子トランスジェニッククローンの構築：全103 遺伝子配列のPCR 産物がpCIL-10 プラスミド中のIL-10 遺伝子と置き換えるために用いられた。pCIL-10 プラスミドはこの節で前記したとおりである。 103 遺伝子（Yanagisawa，K.ら、1993，FEBS 318:83-87）コード配列の全マウス長形態のPCR 産物は、鋳型としてマウスTH2 型細胞系、D10G4(ATCC，MD)、からの第１ストランドｃＤＮＡを用いる35サイクル反応により得られた。RNAzole^TM( TEL-TEST，Inc.，TX)によりこの細胞系から総ＲＮＡを抽出した。７マイクログラムのＲＮＡを、製造者の指示に従いSuperscript Reverse Transcriptase I(GI BCO BRL，MD)により20μl 第１ストランドｃＤＮＡ合成反応に使用した。ｃＤＮＡの２マイクロリッターをPCR 反応に使用した。5'- オリゴはであって、適合する制限部位SpeIを5'- 末端でそして3'- 末端でBamHI をそれぞれ有した。95℃で２分間の熱変性後、Vent^TMＤＮＡポリメラーゼ（New England Biolabs，Beverly，MA）により、95℃で45秒間、65℃で45秒間そして72℃で60秒間の３工程サイクルを行った。72℃で５分間の最終工程が末端仕上げのために行われた。PCR 産物をSpeIおよびBamHI (New England Biolabs)により消化し、そしてpBSKII(Stratagene)のBamHI-XhoI部位中にサブクローン化されたpCIL-10 からのヒト生長ホルモン断片を含有するpBSKIIGHベクターのSpeI-BamHI部位に連結し、これをpBS-103L-GH と名付けた。次にヒトCD2 エンハンサーおよび Pμプロモーターを含有するpCIL-10 断片をpBS-103L-GH の103L遺伝子の直前の上流に連結した。製造者の指示に従い、MaxEfficient E．coli DH5α−コンピテント細胞 (GIBCO BRL，MD)を形質転換に使用した。形質転換体を0.1 μg/mlのアンピシリンを含有するLBブロス中で増殖させ、そしてＤＮＡをQiagene Plasmid Maxi Kit (Qiagene，CA)により抽出した。確認のために制限分析を実施し、そして構築物を配列決定してPCR により導入されたすべてのありうる突然変異を排除した。pC D2-103L-GHで示されるプラスミドをトランスジェニックマウスの生産に選択した。トランスジェニックマウスの生産 C3H/HEJ およびFVB/NJマウスをJackson Laboratory（Bar Harbor，ME）から得た。３−４週令のメスを、10a.m.から 2p.m.の間の妊娠雌馬血清(PMS)の腹腔内注射に続く46時間後のヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG)の腹腔内注射により排卵誘発させた。hCG 投与に続き、メスを同じ系統のオスと一緒に一夜収容した。つぎの朝メスを交尾栓の存在について検査しそしてこれら栓のあるメスから実質的にManipulating the Mouse Embryo(Hogan等編、Cold Spring Harbor Laboratory Press，1994)に記載されるようにして胎芽を単離した。 p200Tr3 およびpCD2-103L-GH1 をNotIおよびXhoIで消化し続いてゲル電気泳動することにより、胎芽マイクロインジェクション用のＤＮＡを調製した。所望のバンドの直接正面にあるゲルにスリットを切り、NA-45 膜(Schleicher and Schu ell)を挿入しそしてＤＮＡバンドが膜に移行されるまで電気泳動を継続することにより、9 kbおよび10 kb 断片がそれぞれNA-45 膜上に電気泳動された。マイクロフュージチューブ中0.4ml の1M NaCl/0.05M アルギニン不含(arginine-free) 塩基と65-70 ℃で数時間インキュベートすることによりＤＮＡを膜から溶離させた。この溶離したＤＮＡをフェノール／クロロホルムおよびクロロホルムを用いて抽出し、エタノール沈殿させそして5 mMトリス，pH7.5/0.1 mM EDTAの 200μl 中に溶解させた。ＤＮＡを次にエタノールで再沈殿させ、そして10mMトリス，p H 7.5/0.1 mM EDTAの40μl 中に再溶解させた。マイクロインジェクションに先立ち、ＤＮＡを10mMトリス，pH 7.5/0.1 mM EDTA中1-2 μ/ml に希釈した。ＤＮＡをC3H/HEJ またはFVB/NJ系統胚のオス生殖核中にマイクロインジェクションしそしてインジェクションされた胚を実質的にManipulating the Mouse Emb ryo に記載されるようにして偽妊娠メスの卵管中に移した。生じた子孫を尾バイオプシーから調製されたＤＮＡのサザンブロットハイブリダイゼーションによりトランスジーン配列の存在に関して分析した。トランスジェニックマウスのサザンブロット分析：尾の約1/2"片をクリップで留めそして500 μl のプロテイナーゼＫ溶液[100mM トリスHCl，pH 8.0; 5mM EDTA，pH 8.0; 0.2% SDS; 200mM NaCl; 100μg/mlプロテイナーゼＫ(Boehringer Mannheim，Germany)]中55℃で一夜消化した。消化物を15分間遠心して未消化屑を除去した。上清を同量のイソプロパノールを用いて室温で沈殿させた。沈殿を25分間遠心しそしてペレットを75％エタノール中で洗った。ペレットを風乾しそして100 μl TE; pH 8.0中に再懸濁した。尾ＤＮＡの制限消化はつぎのようにして実施された。すなわち、20μl のＤＮＡ溶液を１mM スペルミジンの存在下80単位のBamHI(New England Biolabs)を用いて37℃で一夜消化した。消化したサンプルを0.8%アガロースゲルを用いてゲル電気泳動により分析した。0.25M HCl 中10分間続いて0.5M NaOH，1M NaCl中30分間、そしてつぎに2.5MトリスHCl(pH 7.4)，2.5M NaCl中30分間の脱プリンに続いて分離したＤＮＡをHybond-N＋(Amersham，Inc.)に移行させた。移行直前に、ゲルを10X SSC トランスファー緩衝液中で短時間平衡化させた。移行は毛細管作用により10X SSC 中で一夜実施された。移行後、膜を風乾させそしてStratolinker(Stratagene，I nc.)を用いてUV架橋させた。架橋後、膜を２X SSC 中で短時間すすいだ。 200 遺伝子トランスジェニック分析には、Random Primed DNA Labelling Kit( Boehringer Mannheim)を用い、ヒトIgM プロモーターのおよそ500 塩基対を含有する放射性標識されたプローブを製造した。ヒトIgM 重鎖プロモーターの500bp Xba-1/Spe-1 断片がプローブとして使用された。ハイブリダイゼーションはRapi d-Hyb(Amersham)ハイブリダイゼーション溶液を用いる標準的ハイブリダイゼーション操作により実施された。ハイブリダイゼーション溶液１mlあたり１×10⁶c pmを65℃で一夜インキュベートした。膜を0.5X SSC 0.1% SDS 中65℃で30分間２回洗浄しそしてオートラジオグラフィーにより露出させた。トランスジエニック動物は0.5 kb Pμ断片を含有するプローブにハイブリダイズするおよそ7.0 kb B amHI断片の存在により検出された。 103 遺伝子トランスジェニック動物には、前記したpCD2-103L-GH構築物の³²P 放射性標識PCR 断片を用いた。PCR 断片は下記プライマーを用いて生成された。ヌクレオチドプライマーおよびpCD2-103L-GH鋳型を用い、PCR 反応条件はつぎのとおりであった:Vent^TMＤＮＡポリメラーゼ（New England Biolabs，Beverly，M A）を使用して、94℃で30秒間、60℃で30秒間、および72℃で30秒間の20サイクル。EcoRI およびSpeIで消化したマウスゲノムにハイブリダイゼーションさせると、生成するプローブは内因性2.4 kbバンドおよび0.85Kbトランスジェニック特異的バンドにハイブリダイズした。 11.2 結果前記11.1節に記載された方法に従い、200 遺伝子トランスジエニックマウス（４つのC3H 創始者系統（founder line）、６つのFVB 創始者系統）および103遺伝子トランスジェニックマウス（５つのFVB 創始者系統）を生成させた。サザンハイブリダイゼーション分析では、両200 および103 遺伝子トランスジェニック創始者動物がうまく生産されたことが証明された。 200 トランスジェニック動物に関しては、４系統のトランスジェニックマウスがC3H 近交系統マウスに創成された。これらの系統の一つを200 トランスジーンの発現に関して検査した。予想されたとおり、200 トランスジーン転写物が胸腺、脾臓およびリンパ節で検出され、支配的にT-細胞に限定されたパターンと一致した。およそ６−７か月令では、創始者動物の３つが視認による検査で病気であると思われた。130-1.2 で表されるこれら創始者の一つをおよそ６か月令で殺した。殺した時点で、メスは有意に長くは生存しなかったであろうことが予想された。130-1.2 を解剖すると、脾臓および一方の腎臓が著しく異常であることが明白であった。脾臓は正常のおよそ10倍のサイズでありそして青白い外観の細胞で充たされていることが明らかであった。脾細胞集団をフローサイトメトリーにより検査し、そして主なる細胞集団がMAC-1(マクロファージ／顆粒球細胞表面マーカー)発現に関して陽性であると判定された。これらの細胞はまた高い側面散乱プロフィルを有した。この動物からの脾臓切片をヘマトキシリンおよびエオシンで染色しそして光線顕微鏡により観察した。これらのデータは、異常細胞集団が多形多核好中球からなることを示唆している。異常腎臓もこれら同じ細胞によって浸潤されていることが明らかとなった。 130-1.2 の子孫の一つはその第２の同腹子を誕生させたがおよそ６か月令で死んだ。解剖すると、腸閉塞が明らかであることが注目され、これが死を引き起こすのに寄与した可能性がある。加えて、さらに他の創始者動物が完全に病気であることが明らかとなり、殺された。しかしながらこの動物では、臓器の全体的検分によってもまたはリンパ球集団のフローサイトメトリー分析によっても何の異常も観察されなかった。終わりに、残りの創始者動物はおよそ６か月令までに病気の徴候を示していることが観察された。これらの動物をSPF(特異的な病原体不含)条件下に維持すると、これらの動物が感染性の病原体への露出により病気となる可能性は非常に少ない。むしろ、トランスジーンの効果は免疫系の何らかの局面をモジュレートすることである可能性が最も高い。130-1.2 の観察に基づけば、トランスジーン発現の結果として、その系統は免疫不全に罹る可能性がありそしてそれゆえ環境中に存在する通常は無害な有機体（細菌、等）による感染を受け易いことが疑われる。それゆえ、この遺伝子産物は免疫エフェクター応答の何らかの局面においてまたは免疫系の適正な調節において正常に機能することが可能である。 FVB 近交系統で生成された200 トランスジェニックマウス創始者系統はそれらが６か月令に接近した際にも何ら外観的な病気の徴候を示さなかった。 12．微生物の寄託以下の微生物をPeoria，IllinoisのAgricultural Research Service Culture Collection（NRRL）に1995年１月19日（10-C，57-E，105-A，106-H，161-G，200 -O）、1995年３月２日（200-P を含有するE ．coli DH10B(Zip)^TM）および1995年６月１日（200-AF，10-X，54-C）に寄託し、そして示される受託番号が割り当てられた。微生物 NRRL 受託番号 10-C B-21390 57-E B-21391 105-A B-21392 106-H B-21393 161-G B-21394 200-O B-21395 E ．coli B-21416 200-P cDNAを含有するDH10B(Zip)^TM 200-AF B-21457 10-X B-21455 54-C B-21456 下記微生物はRockville Maryland，のAmerican Type Culture Collection（AT CC）に1995年12月12日に寄託され、そして示される受託番号が割り当てられた。微生物 ATCC 受託番号 E ．coli, feht 200C 69967 本発明はここに記載される詳細な態様により範囲が限定されるものではなく、これらは本発明のそれぞれの局面の単なる説明として意図され、そして機能的に同等の方法および構成分は本発明の範囲内にある。事実、ここに示され記載されたものに加え本発明の種々の変形が前出の記載および添付図面から当業者には明らかとなろう。かかる変形は添付の請求の範囲内に該当することが意図される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 48/00 ＡＢＥＡ６１Ｋ 48/00 ＡＤＺＡＤＺＣ０７Ｋ 14/52 Ｃ０７Ｋ 14/52 16/24 16/24 19/00 19/00 Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＣ１２Ｎ 5/10 33/564 ＺＧ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 33/564 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＰ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ

Claims

【特許請求の範囲】１．以下のヌクレオチド配列：バンド５７（配列番号４）、バンド１０５（配列番号５）、バンド１０６（配列番号６）またはバンド１６１（配列番号７）；または図９Ａ〜９Ｄに示される第１０遺伝子ヌクレオチド配列（配列番号３）；図２２Ａ〜２２Ｃに示される第５４遺伝子ヌクレオチド配列（配列番号１１）；または図１７Ａ〜１７Ｄまたは図２４Ａ〜２４Ｄに示される第２００遺伝子ヌクレオチド配列（それぞれ、配列番号８または配列番号２３）；またはNRRLに寄託されている以下のE.coliクローン内のプラスミドに含まれる遺伝子または遺伝子断片のヌクレオチド配列：１０−Ｃ（NRRL受託番号第B-21390 号）、５７−Ｅ（NRRL受託番号第B-21391 号）、１０５−Ａ（NRRL受託番号第B-21392 号）、１０６−Ｈ（NRRL受託番号第B-21393 号）、１６１−Ｇ（NRRL受託番号第B-21394 号）または２００−Ｏ（NRRL受託番号第B-21395 号）；またはNRRLに寄託されている以下のE.coliクローン内のｃＤＡＮに含まれる遺伝子または遺伝子断片のヌクレオチド配列： 200−P ｃＤＮＡ（NRRL受託番号第B-21416 号）、200−AF（NRRL受託番号第B-21457 号）、10-X（NRRL受託番号第B-21455 号）、54-C（NRRL受託番号第B- 21456 号）を含有するDH10B(Zip)（商標）；またはアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)に寄託されている以下のE.coliクローン内のｃＤＮＡに含まれる遺伝子または遺伝子断片のヌクレオチド配列： feht 200C（ATCC受託番号第69967 号）を含有する単離核酸。２．ストリンジェントな条件下で、請求項１に記載のヌクレオチド配列またはその相補体(complement)、またはNRRLまたはATCCに寄託されている請求項１に記載のE.coliクローン内のプラスミドまたはｃＤＮＡに含まれる遺伝子または遺伝子断片にハイブリダイズする単離核酸。３．請求項１に記載のヌクレオチド配列またはその相補体、またはNRRLまたはAT CCに寄託されている請求項１に記載のE.coliクローン内のプラスミドまたはｃＤＮＡに含まれる遺伝子または遺伝子断片によってコードされるアミノ酸配列をコードする単離核酸。４．コードされる前記アミノ酸配列が、図９Ａ〜９Ｄに示すアミノ酸配列（配列番号９）、図１７Ａ〜１７Ｄに示すアミノ酸配列（配列番号１０）、図２２Ａ〜２２Ｃに示すアミノ酸配列（配列番号１２）または図２４Ａ〜２４Ｄに示すアミノ酸配列（配列番号２３）である請求項３に記載の単離核酸。５．請求項１、２、３または４に記載の核酸を含有するベクター。６．宿主細胞においてヌクレオチド配列の発現を調節するヌクレオチド配列調節要素と操作上共働して請求項１、２、３または４に記載の核酸を含有する発現ベクター。７．請求項１、２、３または４に記載の核酸を含有することを特徴とする遺伝子工学的に操作された宿主細胞。８．宿主細胞においてヌクレオチド配列の発現を調節するヌクレオチド配列調節要素と操作上共働して請求項１、２、３または４に記載の核酸を含有する遺伝子工学的に操作された宿主細胞。９．請求項１、２、３または４に記載の核酸によってコードされる単離遺伝子産物。１０．前記遺伝子産物が、配列番号９、配列番号１０、配列番号１２または配列番号２４のアミノ酸を含有する蛋白質である請求項９に記載の単離遺伝子産物。１１．請求項９に記載の遺伝子産物を免疫特異的に結合する抗体。１２．免疫疾患を診断するための方法であって、患者のサンプルにおいて、免疫疾患の状態にあるＴヘルパー細胞のサブ集団で特異的に発現される遺伝子転写物または遺伝子産物を、非免疫疾患の状態にあるＴヘルパー細胞のサブ集団でのものを基準にして、検出する工程を具える方法。１３．前記免疫疾患がＴヘルパー細胞サブ集団関連疾患である請求項１２に記載の方法。１４．前記Ｔヘルパー細胞サブ集団関連疾患がＴＨ１細胞サブ集団関連疾患である請求項１３に記載の方法。１５．前記ＴＨ１細胞サブ集団関連疾患が慢性炎症性疾患、多発性硬化症、関節炎、乾せんまたはインシュリン依存性糖尿病である請求項１４に記載の方法。１６．前記遺伝子転写物または遺伝子産物が第５４、第１０５、第１０６または第２００遺伝子産物または遺伝子転写物である請求項１４に記載の方法。１７．前記Ｔヘルパー細胞サブ集団関連疾患が、ＴＨ２細胞サブ集団関連疾患である請求項１３に記載の方法。１８．前記ＴＨ２細胞サブ集団関連疾患が、喘息、アレルギー、好酸球増加症、結膜炎、リーシュマニア症または癩腫癩である請求項１７に記載の方法。１９．前記遺伝子転写物または遺伝子産物が第１０２または第１０３遺伝子産物または遺伝子転写物である請求項１８に記載の方法。２０．哺乳動物において免疫疾患を治療するための方法であって、前記哺乳動物に、免疫疾患を起こすのに関与するＴヘルパー細胞サブ集団を調節する化合物を投与して、前記免疫疾患の症状が改善されるようにする工程を含む前記の方法。２１．前記化合物が、前記Ｔヘルパー細胞サブ集団を負に調節する請求項２０に記載の方法。２２．前記化合物が、前記Ｔヘルパー細胞サブ集団を正に調節する請求項２０に記載の方法。２３．前記免疫疾患がＴＨ１細胞サブ集団関連疾患によって仲介される請求項２０に記載の方法。２４．前記免疫疾患が慢性炎症性疾患、多発性硬化症、乾せん、関節炎またはインシュリン依存性糖尿病である請求項２３に記載の方法。２５．前記免疫疾患がＴＨ２細胞サブ集団関連疾患によって仲介される請求項２０に記載の方法。２６．前記免疫疾患が喘息、アレルギー性鼻炎、好酸球増加症、結膜炎、リーシュマニア症または癩腫癩である請求項２５に記載の方法。２７．前記化合物が可溶性の第１０３遺伝子産物である請求項２６に記載の方法。２８．前記可溶性の第１０３遺伝子産物が、第１０３遺伝子産物細胞外ドメインを含有する請求項２７に記載の方法。２９．前記可溶性の第１０３遺伝子産物がＩｇ末端(Ig-tailed)第１０３遺伝子産物融合蛋白質である請求項２７に記載の方法。３０．免疫疾患を治療するための方法であって、前記免疫疾患に関与するＴヘルパー細胞サブ集団を標的にして、前記Ｔヘルパー細胞サブ集団に属する細胞の濃度が、前記免疫疾患の症状を改善するようなやり方で変わるようにする工程を含む前記の方法。３１．前記Ｔヘルパー細胞サブ集団に属する細胞の数が増加する請求項３０に記載の方法。３２．前記Ｔヘルパー細胞サブ集団に属する細胞の数が減少する請求項３０に記載の方法。３３．前記標的化が、前記免疫疾患に関与する前記Ｔヘルパー細胞サブ集団を他の細胞から選択的に分離することによって前記免疫疾患に関与する前記Ｔヘルパー細胞サブ集団を枯渇させる工程を含む請求項３２に記載の方法。３４．前記標的化が、前記免疫疾患に関与する前記Ｔヘルパー細胞サブ集団を選択的に殺す請求項３２に記載の方法。３５．前記免疫疾患が、ＴＨ１細胞サブ集団によって仲介される請求項３０に記載の方法。３６．前記免疫疾患が慢性炎症性疾患、多発性硬化症、関節炎、乾せんまたはインシュリン依存性糖尿病である請求項３５に記載の方法。３７．前記免疫疾患がＴＨ２細胞サブ集団によって仲介される請求項３０に記載の方法。３８．前記免疫疾患が喘息、アレルギー、好酸球増加症、結膜炎、リーシュマニア症または癩腫癩である請求項３７に記載の方法。３９．活性化されたＴヘルパー細胞サブ集団を検出するための方法であって、前記活性化されたＴヘルパー細胞サブ集団において発現される遺伝子転写物または遺伝子産物を検出する工程を含む前記の方法。４０．前記Ｔヘルパー細胞サブ集団がＴＨ細胞サブ集団である請求項３９に記載の方法。４１．前記遺伝子転写物または前記遺伝子産物が、第２００遺伝子の遺伝子転写物または遺伝子産物である請求項４０に記載の方法。４２．前記Ｔヘルパー細胞サブ集団がＴＨ２細胞サブ集団である請求項３９に記載の方法。４３．前記遺伝子転写物または遺伝子産物が、第１０３遺伝子の遺伝子転写物または遺伝子産物である請求項４２に記載の方法。４４．免疫疾患の治療のための臨床試験において化合物の効能をモニターするための方法であって、患者サンプルにおいて、免疫疾患の状態にあるＴヘルパー細胞のサブ集団で特異的に発現される遺伝子転写物または遺伝子産物を、非免疫疾患の状態にあるＴヘルパー細胞のサブ集団でのものを基準にして、検出する工程を含む前記の方法。４５．前記免疫疾患がＴＨ１細胞サブ集団関連疾患である請求項４４に記載の方法。４６．前記ＴＨ１細胞サブ集団関連疾患が慢性炎症性疾患、多発性硬化症、関節炎、乾せんまたはインシュリン依存性糖尿病である請求項４５に記載の方法。４７．前記遺伝子転写物または遺伝子産物が第５４、第１０５、第１０６または第２００遺伝子産物または遺伝子転写物である請求項４６に記載の方法。４８．前記免疫疾患がＴＨ２細胞サブ集団関連疾患である請求項４７に記載の方法。４９．前記ＴＨ２細胞サブ集団関連疾患が喘息、アレルギー、好酸球増加症、結膜炎、リーシュマニア症または癩腫癩である請求項４８に記載の方法。５０．前記遺伝子転写物または遺伝子産物が第１０２または第１０３遺伝子産物または遺伝子転写物である請求項４８に記載の方法。５１．Ｔヘルパー細胞の応答性(responsiveness)を調節するための方法であって、Ｔヘルパー細胞を化合物と接触させて、前記Ｔヘルパー細胞の応答性が調節されるようにする工程を含む前記の方法。５２．前記Ｔヘルパー細胞の応答性が増加する請求項５１に記載の方法。５３．前記Ｔヘルパー細胞の応答性が減少する請求項５１に記載の方法。５４．前記Ｔヘルパー細胞がＴＨ２細胞である請求項５１に記載の方法。５５．前記化合物が可溶性の第１０３遺伝子産物を含有する請求項５４に記載の方法。５６．前記可溶性の第１０３遺伝子産物が第１０３遺伝子産物細胞外ドメインを含有する請求項５５に記載の方法。５７．前記可溶性の第１０３遺伝子産物が可溶性のＩｇ末端第１０３遺伝子産物融合蛋白質である請求項５５に記載の方法。５８．前記Ｔヘルパー細胞がＴＨ１細胞である請求項５１に記載の方法。５９．前記化合物が、可溶性の第１０５、第１０６または第２００遺伝子産物を含有する請求項５８に記載の方法。６０．前記可溶性の第１０５、第１０６または第２００遺伝子産物が、第１０５、第１０６または第２００遺伝子産物細胞外ドメインを含有する請求項５８に記載の方法。６１．前記可溶性の第１０５、第１０６または第２００遺伝子産物が、可溶性のＩｇ末端第１０５、第１０６または第２００遺伝子産物融合蛋白質である請求項５８に記載の方法。６２．Ｔヘルパー細胞の応答性の状態を検出するための方法であって、Ｔヘルパー細胞において、応答状態にあるＴヘルパー細胞で特異的に発現される遺伝子転写物または遺伝子産物を、非応答状態にあるＴヘルパー細胞でのものを基準にして、検出する工程を含む前記の方法。６３．前記Ｔヘルパー細胞がＴＨ１細胞である請求項６２に記載の方法。６４．前記遺伝子転写物または遺伝子産物が、第５４、第１０５、第１０６または第２００遺伝子転写物または産物である請求項６３に記載の方法。６５．前記Ｔヘルパー細胞がＴＨ２細胞である請求項６４に記載の方法。６６．前記遺伝子転写物または遺伝子産物が、第１０３遺伝子転写物または産物である請求項６５に記載の方法。６７．Ｉｇ末端第１０３遺伝子産物融合蛋白質を含有する単離した可溶性の第１０３遺伝子産物。６８．前記Ｉｇ末端遺伝子産物融合蛋白質が第１０３遺伝子産物細胞外ドメインを含有する請求項６７に記載の可溶性の第１０３遺伝子産物。６９．Ｉｇ末端第２００遺伝子産物融合蛋白質を含有する単離した可溶性の第２００遺伝子産物。７０．前記Ｉｇ末端遺伝子産物融合蛋白質が第２００遺伝子産物細胞外ドメインを含有する請求項６９に記載の可溶性の第２００遺伝子産物。７１．受容体標的遺伝子産物の活性を調節する化合物を同定するための方法であって、前記受容体標的遺伝子産物を発現する第１の細胞を、試験化合物および受容体標的遺伝子産物の活性化物質(activator)と接触させる工程、前記第１の細胞において細胞内カルシウム放出のレベルを測定する工程、および前記レベルを、上記活性化物質とは接触させたが上記試験化合物とは接触させなかった第２の受容体標的遺伝子産物発現細胞のレベルと比較して、前記第１の細胞内での細胞内カルシウム放出のレベルが前記第２の細胞のものとは異なる場合に、受容体標的遺伝子産物の活性を調節する化合物が同定されているようにする工程を含む前記の方法。７２．７個の膜貫通ドメイン受容体標的遺伝子産物が第１０遺伝子産物である請求項７３に記載の方法。７３．前記細胞がアフリカツメガエル(Xenopus)卵母細胞またはミエローマ細胞である請求項７３に記載の方法。７４．図１７Ａ〜１７Ｄまたは図２４Ａ〜２４Ｄに示されるような少なくとも１種の第２００遺伝子産物ドメインを含有するペプチドまたはポリペプチドを発現することが可能な導入遺伝子を、ゲノムに組み込まれた状態で含有する第２００遺伝子トランスジェニック動物。