JPH1128088A - 乳頭腫ウィルス及びその診断方法 - Google Patents
乳頭腫ウィルス及びその診断方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 新しいタイプの乳頭腫ウィルスを原因とする
又はこれらのタイプの作用の下で発生しうるさまざまな
カテゴリーの感染をより高度に診断し、より確実に識別
する方法を提供する。 【解決手段】 新たに分離された乳頭腫ウィルス、そこ
から抽出可能なゲノムＤＮＡ又はこれらのゲノムＤＮＡ
のフラグメント（断片）ならびにこれらのＤＮＡ−ＨＰ
Ｖ又はそのフラグメントから形成されうる新しいハイブ
リダイゼーションプローブを提供する。
又はこれらのタイプの作用の下で発生しうるさまざまな
カテゴリーの感染をより高度に診断し、より確実に識別
する方法を提供する。 【解決手段】 新たに分離された乳頭腫ウィルス、そこ
から抽出可能なゲノムＤＮＡ又はこれらのゲノムＤＮＡ
のフラグメント（断片）ならびにこれらのＤＮＡ−ＨＰ
Ｖ又はそのフラグメントから形成されうる新しいハイブ
リダイゼーションプローブを提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、乳頭腫ウィルス
（ＨＰＶ４９、ＨＰＶ５０、ＨＰＶ５４、ＨＰＶ５５）
のＤＮＡ又はこれらの乳頭腫ウィルスの変異体に関する
ものであり、さらに限定的に言うとこれらの乳頭腫ウィ
ルス（ＨＰＶ４９、ＨＰＶ５０、ＨＰＶ５４、ＨＰＶ５
５）から誘導されたプローブに関するものである。ま
た、本発明は、この乳頭腫ウィルスに遺伝学的及び免疫
学的に関連する生成物、ならびに乳頭腫ウィルス感染の
試験管内検出及びそのうちのいくつかのものについては
これらの同じ乳頭腫ウィルス又は乳頭腫ウィルス変異体
に対するワクチン注射のためにこれらのさまざまな生成
物を利用する方法にも関するものである。
（ＨＰＶ４９、ＨＰＶ５０、ＨＰＶ５４、ＨＰＶ５５）
のＤＮＡ又はこれらの乳頭腫ウィルスの変異体に関する
ものであり、さらに限定的に言うとこれらの乳頭腫ウィ
ルス（ＨＰＶ４９、ＨＰＶ５０、ＨＰＶ５４、ＨＰＶ５
５）から誘導されたプローブに関するものである。ま
た、本発明は、この乳頭腫ウィルスに遺伝学的及び免疫
学的に関連する生成物、ならびに乳頭腫ウィルス感染の
試験管内検出及びそのうちのいくつかのものについては
これらの同じ乳頭腫ウィルス又は乳頭腫ウィルス変異体
に対するワクチン注射のためにこれらのさまざまな生成
物を利用する方法にも関するものである。
【０００２】「乳頭腫ウィルスに遺伝学的又は免疫学的
に関連する生成物」というのは、初期ＤＮＡの全て又は
一部を含む組換え型ＤＮＡであるか、対応するＲＮＡで
あるかに関わらず、その初期ＤＮＡから誘導されたさま
ざまな生成物、ならびに有効な細胞宿主の中で場合によ
っては組換え型のこれらのＤＮＡの発現の結果として得
られる「免疫学的」生成物のことである。したがってこ
こで問題となるのは、初期ＤＮＡのさまざまなオープン
リーディングフレームの全て又は一部の転写及び翻訳の
結果生じたポリペプチドである。さらに、かかるポリペ
プチドにより生体内に誘導された抗体でもある。
に関連する生成物」というのは、初期ＤＮＡの全て又は
一部を含む組換え型ＤＮＡであるか、対応するＲＮＡで
あるかに関わらず、その初期ＤＮＡから誘導されたさま
ざまな生成物、ならびに有効な細胞宿主の中で場合によ
っては組換え型のこれらのＤＮＡの発現の結果として得
られる「免疫学的」生成物のことである。したがってこ
こで問題となるのは、初期ＤＮＡのさまざまなオープン
リーディングフレームの全て又は一部の転写及び翻訳の
結果生じたポリペプチドである。さらに、かかるポリペ
プチドにより生体内に誘導された抗体でもある。
【０００３】「乳頭腫ウィルス」という表現は、比較的
良性の皮ふゆうぜい又は粘膜ゆうぜいから、上皮内腫瘍
及び皮ふガンに悪化する可能性のある過形成に至るまで
段階的に広がった複数のウィルス感染形態の原因とされ
ているという共通点をもつ多数のウィルスを網羅してい
る。
良性の皮ふゆうぜい又は粘膜ゆうぜいから、上皮内腫瘍
及び皮ふガンに悪化する可能性のある過形成に至るまで
段階的に広がった複数のウィルス感染形態の原因とされ
ているという共通点をもつ多数のウィルスを網羅してい
る。
【０００４】乳頭腫ウィルス感染としては、さらに限定
的に言うと、皮ふゆうぜい（特に尋常性ゆうぜい及び足
底ゆうぜい）、いぼ状表皮異形成、皮ふ扁平又は中間ゆ
うぜい、上皮内腫瘍及び皮ふガン、いぼ状表皮異形成ガ
ン、生殖器腫瘍及び子宮頸ガン、コンジローム及び乳頭
腫を挙げることができる。
的に言うと、皮ふゆうぜい（特に尋常性ゆうぜい及び足
底ゆうぜい）、いぼ状表皮異形成、皮ふ扁平又は中間ゆ
うぜい、上皮内腫瘍及び皮ふガン、いぼ状表皮異形成ガ
ン、生殖器腫瘍及び子宮頸ガン、コンジローム及び乳頭
腫を挙げることができる。
【０００５】
【従来の技術】これまですでにいくつかのタイプの乳頭
腫ウィルスが開示されてきた。例えば、フランス原特許
第８４．１８３６９号／２５７８．２６７号及びその追
加特許第８５．０７０７３号／２５８１．６５５号及び
第８６．０１４２５号／２５９３．８２８号に記述され
ているものがそれであるが、これらは全て、侵された患
者の皮ふの早期のガン進行を生じさせる可能性が他のも
のよりもさらに大きいものをいくつか含む、広がった斑
点状患部すなわちゆうぜいから分離された新しいタイプ
及びサブタイプの乳頭腫に関するものである。
腫ウィルスが開示されてきた。例えば、フランス原特許
第８４．１８３６９号／２５７８．２６７号及びその追
加特許第８５．０７０７３号／２５８１．６５５号及び
第８６．０１４２５号／２５９３．８２８号に記述され
ているものがそれであるが、これらは全て、侵された患
者の皮ふの早期のガン進行を生じさせる可能性が他のも
のよりもさらに大きいものをいくつか含む、広がった斑
点状患部すなわちゆうぜいから分離された新しいタイプ
及びサブタイプの乳頭腫に関するものである。
【０００６】同様にヒト乳頭腫（ＨＰＶ）のさまざまな
タイプのウィルスの主要な役割そして免疫因子の重要性
も知られている。これらの因子は、乳頭腫感染の病因論
における化学線及びさまざまな遺伝因子に関する文献中
にすでに記されている役割に対し追加を行なうものであ
る。
タイプのウィルスの主要な役割そして免疫因子の重要性
も知られている。これらの因子は、乳頭腫感染の病因論
における化学線及びさまざまな遺伝因子に関する文献中
にすでに記されている役割に対し追加を行なうものであ
る。
【０００７】原特許及びその追加特許に基づく発明は、
規定された主要なゲノム特性をもつ新たに分離された大
量の乳頭腫ウィルスの相対的挙動に関してなされた観察
から導き出されたものである。
規定された主要なゲノム特性をもつ新たに分離された大
量の乳頭腫ウィルスの相対的挙動に関してなされた観察
から導き出されたものである。
【０００８】原特許及び追加特許内では複数のタイプ及
びサブタイプの新しい乳頭腫ウィルスが記述されてい
た。また、より詳しい試験管内診断技術において、既知
のＨＰＶのＤＮＡと組合わせた状態及び／又は互いの間
で組合わせた状態或いは又単独の形でのこれらの新しい
乳頭腫ウィルスのＤＮＡの使用についても同様であっ
た。
びサブタイプの新しい乳頭腫ウィルスが記述されてい
た。また、より詳しい試験管内診断技術において、既知
のＨＰＶのＤＮＡと組合わせた状態及び／又は互いの間
で組合わせた状態或いは又単独の形でのこれらの新しい
乳頭腫ウィルスのＤＮＡの使用についても同様であっ
た。
【０００９】一般的に言って、原特許においては、乳頭
腫ウィルスは互いに非常に異なるものの約７０００〜８
０００の塩基対のサイズをもつゲノムを有していた。そ
の上、そのゲノムはなお、「ストリンジェントでない」
又は逆に「ストリンジェントな」ハイブリダイゼーショ
ン条件の下で行なわれたハイブリダイゼーション試験に
おいて、相同性として評価された或る一定の相同性を呈
している可能性がある。
腫ウィルスは互いに非常に異なるものの約７０００〜８
０００の塩基対のサイズをもつゲノムを有していた。そ
の上、そのゲノムはなお、「ストリンジェントでない」
又は逆に「ストリンジェントな」ハイブリダイゼーショ
ン条件の下で行なわれたハイブリダイゼーション試験に
おいて、相同性として評価された或る一定の相同性を呈
している可能性がある。
【００１０】ストリンジェントな条件下で５０％未満の
相同性を示す乳頭腫ウィルスは、異なるタイプに属して
いると言われていた。このようなストリンジェントな条
件の下で５０％を超える相同性を示すウィルスは、同一
タイプに属するものとみなされる。これらはこの同じタ
イプの中で異なるサブタイプを形成することができる。
相同性を示す乳頭腫ウィルスは、異なるタイプに属して
いると言われていた。このようなストリンジェントな条
件の下で５０％を超える相同性を示すウィルスは、同一
タイプに属するものとみなされる。これらはこの同じタ
イプの中で異なるサブタイプを形成することができる。
【００１１】ストリンジェントでない条件下でのハイブ
リダイゼーション試験というのは、HEILMAN C.A.他〔１
９８０年、J. Virol、３６巻、３９５〜４０７頁〕及び
CROISSANT他〔１９８２年、C.R. Acad. Sc. Paris 、
２９４巻、５８１〜５８６頁（ヘテロ二本鎖分子）〕に
記されている以下の条件下における２つのウィルス単離
株からのＤＮＡの相互接触を暗に意味するものである。
特に、「ストリンジェントでない」条件は、研究対象で
ある乳頭腫ウィルスのＤＮＡ、この乳頭腫ウィルスの変
異体又はこのＤＮＡのクローンを、ハイブリッドの融合
温度（Ｔｍ）よりも約４０℃低い温度で基準の乳頭腫ウ
ィルスＤＮＡと接触させる作業を意味している。
リダイゼーション試験というのは、HEILMAN C.A.他〔１
９８０年、J. Virol、３６巻、３９５〜４０７頁〕及び
CROISSANT他〔１９８２年、C.R. Acad. Sc. Paris 、
２９４巻、５８１〜５８６頁（ヘテロ二本鎖分子）〕に
記されている以下の条件下における２つのウィルス単離
株からのＤＮＡの相互接触を暗に意味するものである。
特に、「ストリンジェントでない」条件は、研究対象で
ある乳頭腫ウィルスのＤＮＡ、この乳頭腫ウィルスの変
異体又はこのＤＮＡのクローンを、ハイブリッドの融合
温度（Ｔｍ）よりも約４０℃低い温度で基準の乳頭腫ウ
ィルスＤＮＡと接触させる作業を意味している。
【００１２】ストリンジェントな条件でのハイブリダイ
ゼーション試験というのは、KREMSDORF. D. 他〔（１９
８２年）、J. Virol、４３巻、４３６〜４４７頁及び１
９８３年、J. Virol、４８巻、３４０〜３５１頁）〕及
びDavis R.W.他〔１９７１年、Methods Enzymol.、２１
巻、４１３〜４１８頁（ヘテロ二本鎖分子）〕により記
述されている条件の下で、２つのウィルス単離株からの
ＤＮＡを互いに接触させることを暗に意味している。特
に「厳しい（ストリンジェントな）」条件というのは、
研究対象である乳頭腫ウィルスのＤＮＡ、この乳頭腫ウ
ィルスの変異体又はこのＤＮＡのクローンを、ハイブリ
ッドの融合温度（Ｔｍ）より約２０℃低い温度で基準の
乳頭腫ウィルスのＤＮＡと接触させることを意味してい
る。
ゼーション試験というのは、KREMSDORF. D. 他〔（１９
８２年）、J. Virol、４３巻、４３６〜４４７頁及び１
９８３年、J. Virol、４８巻、３４０〜３５１頁）〕及
びDavis R.W.他〔１９７１年、Methods Enzymol.、２１
巻、４１３〜４１８頁（ヘテロ二本鎖分子）〕により記
述されている条件の下で、２つのウィルス単離株からの
ＤＮＡを互いに接触させることを暗に意味している。特
に「厳しい（ストリンジェントな）」条件というのは、
研究対象である乳頭腫ウィルスのＤＮＡ、この乳頭腫ウ
ィルスの変異体又はこのＤＮＡのクローンを、ハイブリ
ッドの融合温度（Ｔｍ）より約２０℃低い温度で基準の
乳頭腫ウィルスのＤＮＡと接触させることを意味してい
る。
【００１３】原特許及び追加特許の中では複数のウィル
スが開示されている。また同様に、これらのウィルスの
ゲノム（ＤＮＡ−ＨＰＶｓと呼ばれる）を全て又は一部
分含む遺伝的組換え体も開示されている。したがって、
原特許及び追加特許に基づく発明は、７０００〜８００
０の塩基対というサイズを共通点として有し、しかもこ
れらの特許の図面中に示されている制限酵素開裂地図を
その特徴とするＤＮＡ−ＨＰＶに関するものであった。
特に、図面には、乳頭腫ウィルスから得られ、ＨＰＶ２
ｄ、ＨＰＶ１０ｂ、ＨＰＶ１４ａ、ＨＰＶ１４ｂ、ＨＰ
Ｖ１５、ＨＰＶ１７ａ、ＨＰＶ１７ｂ、ＨＰＶ１９、Ｈ
ＰＶ２０、ＨＰＶ２１、ＨＰＶ２２、ＨＰＶ２３、ＨＰ
Ｖ２４、ＨＰＶ２８、ＨＰＶ２９、ＨＰＶ３２（旧ＨＰ
Ｖ３１）、ＨＰＶ３３（旧ＨＰＶ３２又はＨＰＶ−ＩＰ
２）、ＨＰＶ３４（旧ＨＰＶ−ＩＰ３）、ＨＰＶ３６
（旧ＨＰＶ−ＩＰ４）、ＨＰＶ３９（旧ＩＰ５）及びＨ
ＰＶ４２（旧ＩＰ６）という呼称に相応するＤＮＡ−Ｈ
ＰＶの制限酵素開裂地図を提供している。
スが開示されている。また同様に、これらのウィルスの
ゲノム（ＤＮＡ−ＨＰＶｓと呼ばれる）を全て又は一部
分含む遺伝的組換え体も開示されている。したがって、
原特許及び追加特許に基づく発明は、７０００〜８００
０の塩基対というサイズを共通点として有し、しかもこ
れらの特許の図面中に示されている制限酵素開裂地図を
その特徴とするＤＮＡ−ＨＰＶに関するものであった。
特に、図面には、乳頭腫ウィルスから得られ、ＨＰＶ２
ｄ、ＨＰＶ１０ｂ、ＨＰＶ１４ａ、ＨＰＶ１４ｂ、ＨＰ
Ｖ１５、ＨＰＶ１７ａ、ＨＰＶ１７ｂ、ＨＰＶ１９、Ｈ
ＰＶ２０、ＨＰＶ２１、ＨＰＶ２２、ＨＰＶ２３、ＨＰ
Ｖ２４、ＨＰＶ２８、ＨＰＶ２９、ＨＰＶ３２（旧ＨＰ
Ｖ３１）、ＨＰＶ３３（旧ＨＰＶ３２又はＨＰＶ−ＩＰ
２）、ＨＰＶ３４（旧ＨＰＶ−ＩＰ３）、ＨＰＶ３６
（旧ＨＰＶ−ＩＰ４）、ＨＰＶ３９（旧ＩＰ５）及びＨ
ＰＶ４２（旧ＩＰ６）という呼称に相応するＤＮＡ−Ｈ
ＰＶの制限酵素開裂地図を提供している。
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】原特許及びその追加特
許に基づく発明は同様に、当時新規の乳頭腫ウィルス及
び／又は相応する表題の出願の日より以前に知られてい
た乳頭腫ウィルスから分離されたＤＮＡ−ＨＰＶの混合
物すなわち「カクテル」、又はさまざまなカテゴリーの
感染ひいては患者における一定の乳頭腫ウィルスの発見
に付随する危険性のレベルの診断のためにより効果的に
利用することのできる、これらを含むハイブリダイゼー
ションプローブの「カクテル」にも関するものであっ
た。したがって、新しい乳頭腫ウィルス又はそれから誘
導されたＤＮＡの発見は、さまざまなタイプの乳頭腫ウ
ィルスを原因とする又はこれらのタイプの作用の下で発
生しうるさまざまなカテゴリーの感染をより高度に診断
し、特により確実に識別する可能性、そして一定のカテ
ゴリーの感染においては、これらの感染がより恐ろしい
病気に変わる危険度をより良く予後判定する可能性を提
供する。
許に基づく発明は同様に、当時新規の乳頭腫ウィルス及
び／又は相応する表題の出願の日より以前に知られてい
た乳頭腫ウィルスから分離されたＤＮＡ−ＨＰＶの混合
物すなわち「カクテル」、又はさまざまなカテゴリーの
感染ひいては患者における一定の乳頭腫ウィルスの発見
に付随する危険性のレベルの診断のためにより効果的に
利用することのできる、これらを含むハイブリダイゼー
ションプローブの「カクテル」にも関するものであっ
た。したがって、新しい乳頭腫ウィルス又はそれから誘
導されたＤＮＡの発見は、さまざまなタイプの乳頭腫ウ
ィルスを原因とする又はこれらのタイプの作用の下で発
生しうるさまざまなカテゴリーの感染をより高度に診断
し、特により確実に識別する可能性、そして一定のカテ
ゴリーの感染においては、これらの感染がより恐ろしい
病気に変わる危険度をより良く予後判定する可能性を提
供する。
【００１５】
【課題を解決するための手段】この点において、本発明
は、新たに分離された乳頭腫ウィルス、そこから抽出可
能なゲノムＤＮＡ又はこれらのゲノムＤＮＡのフラグメ
ント（断片）ならびにこれらのＤＮＡ−ＨＰＶ又はその
フラグメントから形成されうる新しいハイブリダイゼー
ションプローブに関する。本発明は同様に、同一のサブ
タイプにそれぞれ属しており、したがって以下に厳しい
条件の下でその制限酵素開裂地図を参照することによっ
て識別されている対応する乳頭腫ウィルスとハイブリダ
イゼーションしうるような、これらの乳頭腫ウィルスの
全ての変異体にも関するものである。
は、新たに分離された乳頭腫ウィルス、そこから抽出可
能なゲノムＤＮＡ又はこれらのゲノムＤＮＡのフラグメ
ント（断片）ならびにこれらのＤＮＡ−ＨＰＶ又はその
フラグメントから形成されうる新しいハイブリダイゼー
ションプローブに関する。本発明は同様に、同一のサブ
タイプにそれぞれ属しており、したがって以下に厳しい
条件の下でその制限酵素開裂地図を参照することによっ
て識別されている対応する乳頭腫ウィルスとハイブリダ
イゼーションしうるような、これらの乳頭腫ウィルスの
全ての変異体にも関するものである。
【００１６】
【発明の実施の形態】以下にＨＰＶ４９、ＨＰＶ５０、
ＨＰＶ５４、ＨＰＶ５５と名付けられているＤＮＡ−Ｈ
ＰＶは、添付の図面（第１図から第４図）に示されてい
る制限酵素開裂地図をその特徴とする。
ＨＰＶ５４、ＨＰＶ５５と名付けられているＤＮＡ−Ｈ
ＰＶは、添付の図面（第１図から第４図）に示されてい
る制限酵素開裂地図をその特徴とする。
【００１７】該地図は、さまざまな制限エンドヌクレア
ーゼによる切断部位の位置を示している。各地図の原点
は、唯一の切断部位で構成されている。原点との関係に
おけるその他の部位の距離は、ゲノム長の百分率単位で
表わされている。
ーゼによる切断部位の位置を示している。各地図の原点
は、唯一の切断部位で構成されている。原点との関係に
おけるその他の部位の距離は、ゲノム長の百分率単位で
表わされている。
【００１８】本発明はさらに、原特許又は追加特許内に
すでに記載されているものの本発明に基づく乳頭腫ウィ
ルスの１つから誘導された１つのプローブで補完された
プローブの「カクテル」のうちのいくつかを含む新しい
プローブ「カクテル」、したがってさらになお一層完成
された形の診断用「キット」にも関するものである。
すでに記載されているものの本発明に基づく乳頭腫ウィ
ルスの１つから誘導された１つのプローブで補完された
プローブの「カクテル」のうちのいくつかを含む新しい
プローブ「カクテル」、したがってさらになお一層完成
された形の診断用「キット」にも関するものである。
【００１９】ＨＰＶ（ＨＰＶ４９、ＨＰＶ５０、ＨＰＶ
５４、ＨＰＶ５５）のゲノムで構築されたハイブリダイ
ゼーションプローブは、原特許及び追加特許内に記され
ており、しかも本書中以下に再び記される条件下におけ
る、特に以下のような、危険性を構成する乳頭腫ウィル
スのタイプの試験管内診断及び／又は発見にとって極め
て有効である： − ＨＰＶ４９については：皮ふゆうぜい（特に尋常性
ゆうぜい及び足底ゆうぜい）の検出及びいぼ状表皮異形
成の鑑別診断； − ＨＰＶ５０については：いぼ状表皮異形成、上皮内
腫瘍及び皮ふガン； − ＨＰＶ５４については：生殖器腫瘍及び子宮頸ガ
ン； − ＨＰＶ５５については：生殖器腫瘍及び子宮頸ガ
ン、コンジローム及び乳頭腫。
５４、ＨＰＶ５５）のゲノムで構築されたハイブリダイ
ゼーションプローブは、原特許及び追加特許内に記され
ており、しかも本書中以下に再び記される条件下におけ
る、特に以下のような、危険性を構成する乳頭腫ウィル
スのタイプの試験管内診断及び／又は発見にとって極め
て有効である： − ＨＰＶ４９については：皮ふゆうぜい（特に尋常性
ゆうぜい及び足底ゆうぜい）の検出及びいぼ状表皮異形
成の鑑別診断； − ＨＰＶ５０については：いぼ状表皮異形成、上皮内
腫瘍及び皮ふガン； − ＨＰＶ５４については：生殖器腫瘍及び子宮頸ガ
ン； − ＨＰＶ５５については：生殖器腫瘍及び子宮頸ガ
ン、コンジローム及び乳頭腫。
【００２０】これらのハイブリダイゼーションプローブ
は、上に再度喚起した同一タイプの疾患の診断用「カク
テル」に包含されると有利である。この点において、こ
れらの診断用混合物のその他のいくつかの構成要素の制
限酵素開裂地図が記されている原特許及び追加特許を再
度参照することになる。この点において、原特許及び追
加特許は、これらの「カクテル」の組成の中に入るその
他のＤＮＡ−ＨＰＶの識別に関して、本記述の一部を成
すものとみなされなくてはならない。
は、上に再度喚起した同一タイプの疾患の診断用「カク
テル」に包含されると有利である。この点において、こ
れらの診断用混合物のその他のいくつかの構成要素の制
限酵素開裂地図が記されている原特許及び追加特許を再
度参照することになる。この点において、原特許及び追
加特許は、これらの「カクテル」の組成の中に入るその
他のＤＮＡ−ＨＰＶの識別に関して、本記述の一部を成
すものとみなされなくてはならない。
【００２１】本発明は同様に、先行するＤＮＡ−ＨＰ
Ｖ、特に厳しい条件下でこれとハイブリダイゼーション
することのできる各々のＤＮＡ−ＨＰＶのフラグメント
にも関するものである。同様に、本発明は、上述のＤＮ
Ａ−ＨＰＶの全て又は一部を含む組換え型ＤＮＡ、さら
に限定的に言うとそれぞれ遺伝子Ｅ１、Ｅ２、Ｅ６〜Ｅ
７、Ｌ１、Ｌ２及び遺伝子間領域、ＮＣ、に相当するフ
ラグメント、又は上述のＤＮＡ−ＨＰＶの各々の遺伝子
間領域に相当する配列を含むフラグメントを含む組換え
型ＤＮＡにも関する。さらに本発明は、これらのＤＮＡ
−ＨＰＶ又は相当するフラグメントで構成されうるプロ
ーブ、及びかかるプローブ又はこれらを含む混合物を用
いた試験管内診断方法にも関する。
Ｖ、特に厳しい条件下でこれとハイブリダイゼーション
することのできる各々のＤＮＡ−ＨＰＶのフラグメント
にも関するものである。同様に、本発明は、上述のＤＮ
Ａ−ＨＰＶの全て又は一部を含む組換え型ＤＮＡ、さら
に限定的に言うとそれぞれ遺伝子Ｅ１、Ｅ２、Ｅ６〜Ｅ
７、Ｌ１、Ｌ２及び遺伝子間領域、ＮＣ、に相当するフ
ラグメント、又は上述のＤＮＡ−ＨＰＶの各々の遺伝子
間領域に相当する配列を含むフラグメントを含む組換え
型ＤＮＡにも関する。さらに本発明は、これらのＤＮＡ
−ＨＰＶ又は相当するフラグメントで構成されうるプロ
ーブ、及びかかるプローブ又はこれらを含む混合物を用
いた試験管内診断方法にも関する。
【００２２】ウィルス性ＤＮＡの調製物は、以下に記さ
れている技法に従って抽出された。
れている技法に従って抽出された。
【００２３】以下では、さらに正確な形で、本発明に基
づく乳頭腫ウィルスの各々を分離した条件、そして次に
この乳頭腫ウィルスからＤＮＡ−ＨＰＶを得た条件を記
すことにする。
づく乳頭腫ウィルスの各々を分離した条件、そして次に
この乳頭腫ウィルスからＤＮＡ−ＨＰＶを得た条件を記
すことにする。
【００２４】免疫抑制患者のゆうぜい内に見られる新し
いＨＰＶタイプ（ＨＰＶ４９）の分子クローニングと特
徴づけ：腎臓移植を受けた患者の手の中間ゆうぜいから
抽出されたＤＮＡで、ＨＰＶ５の特異的放射性ＤＮＡプ
ローブとの厳しい条件下でのハイブリダイゼーションに
より、新しいタイプのＨＰＶが明らかにされた。制限酵
素に対するこのＨＰＶのＤＮＡの感受性について調べた
ところ、エンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩがウィルスＤＮ
Ａを１ヵ所切断することがわかった。エンドヌクレアー
ゼＥｃｏＲＩによる腫瘍性ＤＮＡの処理の後、消化生成
物を、ＥｃｏＲＩ処理したプラスミドベクターｐＧｅｍ
４のＤＮＡ内に挿入した。組換え型プラスミドに組込ま
せた後、新しいＨＰＶのＤＮＡを、厳しくない条件の下
でＨＰＶ５の特異的放射性ＤＮＡプローブを用いて、コ
ロニーハイブリダイゼーション技法（Benton及びDavis)
により選択した。ウィルス配列の全てを含む１つの組換
え型プラスミドを分離した。エンドヌクレアーゼＥｃｏ
ＲＩ及びＨｉｎｄ IIIの混合物による、ゆうぜいから抽
出されたＤＮＡの調製物と組換え型ＤＮＡの切断によ
り、乳頭腫ウィルスのゲノムの分子量（約８キロ塩基
（Kb））に相当する分子量をもつウィルスＤＮＡの同じ
４つのフラグメントが生み出される。
いＨＰＶタイプ（ＨＰＶ４９）の分子クローニングと特
徴づけ：腎臓移植を受けた患者の手の中間ゆうぜいから
抽出されたＤＮＡで、ＨＰＶ５の特異的放射性ＤＮＡプ
ローブとの厳しい条件下でのハイブリダイゼーションに
より、新しいタイプのＨＰＶが明らかにされた。制限酵
素に対するこのＨＰＶのＤＮＡの感受性について調べた
ところ、エンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩがウィルスＤＮ
Ａを１ヵ所切断することがわかった。エンドヌクレアー
ゼＥｃｏＲＩによる腫瘍性ＤＮＡの処理の後、消化生成
物を、ＥｃｏＲＩ処理したプラスミドベクターｐＧｅｍ
４のＤＮＡ内に挿入した。組換え型プラスミドに組込ま
せた後、新しいＨＰＶのＤＮＡを、厳しくない条件の下
でＨＰＶ５の特異的放射性ＤＮＡプローブを用いて、コ
ロニーハイブリダイゼーション技法（Benton及びDavis)
により選択した。ウィルス配列の全てを含む１つの組換
え型プラスミドを分離した。エンドヌクレアーゼＥｃｏ
ＲＩ及びＨｉｎｄ IIIの混合物による、ゆうぜいから抽
出されたＤＮＡの調製物と組換え型ＤＮＡの切断によ
り、乳頭腫ウィルスのゲノムの分子量（約８キロ塩基
（Kb））に相当する分子量をもつウィルスＤＮＡの同じ
４つのフラグメントが生み出される。
【００２５】新しいＨＰＶのＤＮＡの制限酵素開裂地図
は、１８の制限エンドヌクレアーゼに対するこのＤＮＡ
の感受性の研究に基づいて作られた。２７の切断部位が
位置決定された（補遺１）。この地図は、これまでに分
離されたあらゆるＨＰＶのものと異なるものである。こ
れまでに識別されたＨＰＶのＤＮＡと新しいＨＰＶのＤ
ＮＡの間の相同性を、新しいＨＰＶの特異的放射性ＤＮ
Ａプローブを用いて、多少の差こそあれ厳しい条件の下
で、レプリカに対するハイブリダイゼーション実験によ
って分析した。これまでに識別されたＨＰＶのＤＮＡと
新しいＨＰＶのＤＮＡとの間に、厳しくないハイブリダ
イゼーション条件下で、唯一の配列相同性を検出した。
いぼ状表皮異形成に特異的に結びつけられているＨＰＶ
のＤＮＡで、最大の交差ハイブリダイゼーションが見ら
れた。したがって、免疫抑制された患者のゆうぜいから
特徴づけされた新しいウィルスは、暫定的にＨＰＶ４９
と呼ばれる新しいタイプのＨＰＶを構成する。
は、１８の制限エンドヌクレアーゼに対するこのＤＮＡ
の感受性の研究に基づいて作られた。２７の切断部位が
位置決定された（補遺１）。この地図は、これまでに分
離されたあらゆるＨＰＶのものと異なるものである。こ
れまでに識別されたＨＰＶのＤＮＡと新しいＨＰＶのＤ
ＮＡの間の相同性を、新しいＨＰＶの特異的放射性ＤＮ
Ａプローブを用いて、多少の差こそあれ厳しい条件の下
で、レプリカに対するハイブリダイゼーション実験によ
って分析した。これまでに識別されたＨＰＶのＤＮＡと
新しいＨＰＶのＤＮＡとの間に、厳しくないハイブリダ
イゼーション条件下で、唯一の配列相同性を検出した。
いぼ状表皮異形成に特異的に結びつけられているＨＰＶ
のＤＮＡで、最大の交差ハイブリダイゼーションが見ら
れた。したがって、免疫抑制された患者のゆうぜいから
特徴づけされた新しいウィルスは、暫定的にＨＰＶ４９
と呼ばれる新しいタイプのＨＰＶを構成する。
【００２６】ＨＰＶ４９のＤＮＡとＨＰＶ５のＤＮＡの
間で形成されたヘテロ２本鎖分子を電子顕微鏡で分析す
ることにより、ＨＰＶ４９のＤＮＡによりさまざまな遺
伝子の理論的位置を規定することが可能となった。同様
に、ＨＰＶ４９のＤＮＡの１フラグメントのヌクレオチ
ド配列を決定することにより、ＨＰＶ５の遺伝子地図と
ＨＰＶ４９のＤＮＡの物理的地図を整列させることが可
能となった。
間で形成されたヘテロ２本鎖分子を電子顕微鏡で分析す
ることにより、ＨＰＶ４９のＤＮＡによりさまざまな遺
伝子の理論的位置を規定することが可能となった。同様
に、ＨＰＶ４９のＤＮＡの１フラグメントのヌクレオチ
ド配列を決定することにより、ＨＰＶ５の遺伝子地図と
ＨＰＶ４９のＤＮＡの物理的地図を整列させることが可
能となった。
【００２７】ＨＰＶ４９の病原性能力を、このウィルス
のＤＮＡから調製された放射性プローブを用いて探究し
た。免疫抑制された患者（２７例）、肉屋（２６例）又
は一般母集団（２１例）から採取されたゆうぜい、ＥＶ
（いぼ状表皮異形成）にかかった３１人の患者の良性病
変、角化棘細胞腫１８例、ボウエン皮ふ病２０例、光線
性角化症２５例、基底細胞上皮腫２５例、棘細胞上皮腫
２３例、においてＨＰＶ４９を探究した。他の２名の免
疫抑制患者にＨＰＶ４９が発見された。
のＤＮＡから調製された放射性プローブを用いて探究し
た。免疫抑制された患者（２７例）、肉屋（２６例）又
は一般母集団（２１例）から採取されたゆうぜい、ＥＶ
（いぼ状表皮異形成）にかかった３１人の患者の良性病
変、角化棘細胞腫１８例、ボウエン皮ふ病２０例、光線
性角化症２５例、基底細胞上皮腫２５例、棘細胞上皮腫
２３例、においてＨＰＶ４９を探究した。他の２名の免
疫抑制患者にＨＰＶ４９が発見された。
【００２８】ＨＰＶ４９は、稀ではあるものの、ゆうぜ
いに結びつけられたもう１つのタイプの皮ふＨＰＶを構
成する。特に免疫抑制された被検者におけるゆうぜいに
関連するＨＰＶタイプを診断するためには、分子プロー
ブの調製のためのＨＰＶのＤＮＡのあらゆる混合物に対
しこれを取り入れることが望ましい。
いに結びつけられたもう１つのタイプの皮ふＨＰＶを構
成する。特に免疫抑制された被検者におけるゆうぜいに
関連するＨＰＶタイプを診断するためには、分子プロー
ブの調製のためのＨＰＶのＤＮＡのあらゆる混合物に対
しこれを取り入れることが望ましい。
【００２９】以下の表には、ＨＰＶ４９の主要な遺伝
子、及び遺伝子間領域の、このゲノムの地図上の推定上
の位置づけが明示されている： 末端の座標（％） ５´ ３´ Ｅ６−Ｅ７ ２ １２．５ Ｅ１ １１ ３４．５ Ｅ２ ３４ ５４ Ｌ２ ５４．５ ７６ Ｌ１ ７６ ９７ 遺伝子間領域 ９７ ２
子、及び遺伝子間領域の、このゲノムの地図上の推定上
の位置づけが明示されている： 末端の座標（％） ５´ ３´ Ｅ６−Ｅ７ ２ １２．５ Ｅ１ １１ ３４．５ Ｅ２ ３４ ５４ Ｌ２ ５４．５ ７６ Ｌ１ ７６ ９７ 遺伝子間領域 ９７ ２
【００３０】光線性角化症の病巣に結びつけられた新し
いタイプのＨＰＶ（ＨＰＶ５０）の分子クローニング及
び特徴づけ ＨＰＶ５特異的放射性ＤＮＡプローブとの厳しくない条
件下でのハイブリダイゼーションにより、いぼ状表皮異
形成（ＥＶ）にかかった患者から採取した光線性角化症
の病巣の混合物から抽出されたＤＮＡにおいて、新しい
タイプのＨＰＶが明らかになった。この腫瘍性ＤＮＡの
調製物は、予めＨＰＶ５、２０、２３及び３６のＤＮＡ
を含んでいることが示されていた。制限エンドヌクレア
ーゼＥｃｏＲＩによる病巣から抽出されたＤＮＡの消化
の後、新しいＨＰＶのＤＮＡに相当する約１．９KbのＤ
ＮＡフラグメントが観察された。腫瘍性ＤＮＡを酵素Ｅ
ｃｏＲＩで処理し、消化生成物を、７Kb未満のサイズの
ＤＮＡフラグメントのクローニングを可能にするバクテ
リオファージλｇｔ１０のＤＮＡ内に、ＥｃｏＲＩ部位
に挿入した。組換え型ＤＮＡの包膜及び大腸菌（Escher
ichia coli）Ｋ１２（菌株Ｃ６００）の感染の後、１．
９KbのＤＮＡフラグメントを挿入した組換え型バクテリ
オファージを、厳しくない条件の下でＨＰＶ５の特異的
放射性ＤＮＡバンドを用いて、溶菌プラークのハイブリ
ダイゼーション技法により選択した。複数の組換え型バ
クテリオファージを分離し、１．９KbのＤＮＡフラグメ
ントを含むものであることを実証した。このＤＮＡフラ
グメントをファージＤＮＡ配列から切り出し、プラスミ
ドＳＰ６５に再クローニングした。プラスミド配列から
切り出され、純化された１．９KbのＤＮＡフラグメント
から調製された放射性プローブは、厳しい条件の下でＨ
ＰＶ５、２０、２３及び３６のＤＮＡとの交差ハイブリ
ダイゼーションを全く示さなかった。その代り、このプ
ローブは、酵素ＥｃｏＲＩにより処理された病巣から抽
出されたＤＮＡ内の１．９KbのＤＮＡフラグメント、な
らびに未処理の腫瘍性ＤＮＡ内のＩ型（超らせんの環
状）及びII型（開環状）のＨＰＶのＤＮＡ分子を実証す
ることを可能にした。複数の制限酵素に対するこの新し
いＨＰＶのＤＮＡの感受性を研究することにより、酵素
ＳａｃＩがウィルス性ＤＮＡを１ヵ所切断することがわ
かった。酵素ＳａｃＩによる腫瘍性ＤＮＡの消化の後、
８Kb（ＨＰＶのゲノムのサイズ）のＤＮＡ分子をショ糖
濃度勾配遠心分離法により純化し、次にＳａｃＩ部位に
よりプラスミドＳＰ６５のＤＮＡ内に挿入した。新しい
ＨＰＶのＤＮＡを組込んだ組換え型プラスミドを、厳し
い条件の下で１．９Kbのフラグメントの特異的放射性Ｄ
ＮＡプローブを用いることによりコロニーに対するハイ
ブリダイゼーション法により選択した。ウィルス性配列
を全て含む複数の組換え型プラスミドを分離した。エン
ドヌクレアーゼＳａｃＩによる組換え型プラスミドのＤ
ＮＡの切断は、厳しい条件下で１．９KbのＤＮＡフラグ
メントとハイブリダイゼーションする８Kbのフラグメン
トを生み出す。酵素ＳａｃＩ及びＰｖｕIIの混合物によ
る、組換え型プラスミドのＤＮＡ及び病巣から抽出され
たＤＮＡ調製物の切断は、乳頭腫ウィルスのゲノムのも
の（８Kb）に相当する全分子量をもつ同じ４つのフラグ
メントを生成する。
いタイプのＨＰＶ（ＨＰＶ５０）の分子クローニング及
び特徴づけ ＨＰＶ５特異的放射性ＤＮＡプローブとの厳しくない条
件下でのハイブリダイゼーションにより、いぼ状表皮異
形成（ＥＶ）にかかった患者から採取した光線性角化症
の病巣の混合物から抽出されたＤＮＡにおいて、新しい
タイプのＨＰＶが明らかになった。この腫瘍性ＤＮＡの
調製物は、予めＨＰＶ５、２０、２３及び３６のＤＮＡ
を含んでいることが示されていた。制限エンドヌクレア
ーゼＥｃｏＲＩによる病巣から抽出されたＤＮＡの消化
の後、新しいＨＰＶのＤＮＡに相当する約１．９KbのＤ
ＮＡフラグメントが観察された。腫瘍性ＤＮＡを酵素Ｅ
ｃｏＲＩで処理し、消化生成物を、７Kb未満のサイズの
ＤＮＡフラグメントのクローニングを可能にするバクテ
リオファージλｇｔ１０のＤＮＡ内に、ＥｃｏＲＩ部位
に挿入した。組換え型ＤＮＡの包膜及び大腸菌（Escher
ichia coli）Ｋ１２（菌株Ｃ６００）の感染の後、１．
９KbのＤＮＡフラグメントを挿入した組換え型バクテリ
オファージを、厳しくない条件の下でＨＰＶ５の特異的
放射性ＤＮＡバンドを用いて、溶菌プラークのハイブリ
ダイゼーション技法により選択した。複数の組換え型バ
クテリオファージを分離し、１．９KbのＤＮＡフラグメ
ントを含むものであることを実証した。このＤＮＡフラ
グメントをファージＤＮＡ配列から切り出し、プラスミ
ドＳＰ６５に再クローニングした。プラスミド配列から
切り出され、純化された１．９KbのＤＮＡフラグメント
から調製された放射性プローブは、厳しい条件の下でＨ
ＰＶ５、２０、２３及び３６のＤＮＡとの交差ハイブリ
ダイゼーションを全く示さなかった。その代り、このプ
ローブは、酵素ＥｃｏＲＩにより処理された病巣から抽
出されたＤＮＡ内の１．９KbのＤＮＡフラグメント、な
らびに未処理の腫瘍性ＤＮＡ内のＩ型（超らせんの環
状）及びII型（開環状）のＨＰＶのＤＮＡ分子を実証す
ることを可能にした。複数の制限酵素に対するこの新し
いＨＰＶのＤＮＡの感受性を研究することにより、酵素
ＳａｃＩがウィルス性ＤＮＡを１ヵ所切断することがわ
かった。酵素ＳａｃＩによる腫瘍性ＤＮＡの消化の後、
８Kb（ＨＰＶのゲノムのサイズ）のＤＮＡ分子をショ糖
濃度勾配遠心分離法により純化し、次にＳａｃＩ部位に
よりプラスミドＳＰ６５のＤＮＡ内に挿入した。新しい
ＨＰＶのＤＮＡを組込んだ組換え型プラスミドを、厳し
い条件の下で１．９Kbのフラグメントの特異的放射性Ｄ
ＮＡプローブを用いることによりコロニーに対するハイ
ブリダイゼーション法により選択した。ウィルス性配列
を全て含む複数の組換え型プラスミドを分離した。エン
ドヌクレアーゼＳａｃＩによる組換え型プラスミドのＤ
ＮＡの切断は、厳しい条件下で１．９KbのＤＮＡフラグ
メントとハイブリダイゼーションする８Kbのフラグメン
トを生み出す。酵素ＳａｃＩ及びＰｖｕIIの混合物によ
る、組換え型プラスミドのＤＮＡ及び病巣から抽出され
たＤＮＡ調製物の切断は、乳頭腫ウィルスのゲノムのも
の（８Kb）に相当する全分子量をもつ同じ４つのフラグ
メントを生成する。
【００３１】新しいＨＰＶのＤＮＡ制限酵素開裂地図
を、１６の制限酵素に対するこのＤＮＡの感受性の研究
に基づいて作成した。２８の切断部位が位置決定され
た。こうして作成された地図は、今日識別されているＨ
ＰＶのゲノムの地図と異なる。今日特徴づけされている
ＨＰＶのＤＮＡと新しいＨＰＶのＤＮＡの間の配列相同
性を、厳しい条件又は厳しくない条件の下で行なわれた
レプリカに対するハイブリダイゼーション実験により分
析した。厳しい条件の下ではいかなる配列相同性も発見
されなかった。それに対して、厳しくない条件の下で
は、弱いものではあるものの有効な交差ハイブリダイゼ
ーションが、ＥＶの特異的ＨＰＶのＤＮＡと新しいＨＰ
ＶのＤＮＡとの間のみで観察された。したがって、ＥＶ
にかかった患者において観察された光線性角化症の患部
から分離されたウィルスは、新しい１つのタイプのＨＰ
Ｖを構成し、これを暫定的にＨＰＶ５０と呼ぶ。
を、１６の制限酵素に対するこのＤＮＡの感受性の研究
に基づいて作成した。２８の切断部位が位置決定され
た。こうして作成された地図は、今日識別されているＨ
ＰＶのゲノムの地図と異なる。今日特徴づけされている
ＨＰＶのＤＮＡと新しいＨＰＶのＤＮＡの間の配列相同
性を、厳しい条件又は厳しくない条件の下で行なわれた
レプリカに対するハイブリダイゼーション実験により分
析した。厳しい条件の下ではいかなる配列相同性も発見
されなかった。それに対して、厳しくない条件の下で
は、弱いものではあるものの有効な交差ハイブリダイゼ
ーションが、ＥＶの特異的ＨＰＶのＤＮＡと新しいＨＰ
ＶのＤＮＡとの間のみで観察された。したがって、ＥＶ
にかかった患者において観察された光線性角化症の患部
から分離されたウィルスは、新しい１つのタイプのＨＰ
Ｖを構成し、これを暫定的にＨＰＶ５０と呼ぶ。
【００３２】ＨＰＶ８のヌクレオチド配列及びＨＰＶ５
０のゲノムの小さな領域を比較分析することにより、Ｈ
ＰＶ５０の物理的地図をＨＰＶ８の遺伝子地図と整列さ
せ、ＨＰＶ５０のＤＮＡがもっている異なる遺伝子の理
論的位置を規定することができた。
０のゲノムの小さな領域を比較分析することにより、Ｈ
ＰＶ５０の物理的地図をＨＰＶ８の遺伝子地図と整列さ
せ、ＨＰＶ５０のＤＮＡがもっている異なる遺伝子の理
論的位置を規定することができた。
【００３３】純化されたＨＰＶ５０のＤＮＡから調製さ
れた放射性プローブを使用して、このウィルスの病原性
能力を決定することができた。ＨＰＶ５０は、一般集団
（分析例２２件）、免疫抑制患者（２７例）及び肉屋
（２６例）について観察されたゆうぜい、角化棘細胞腫
１８例、ボウエン皮ふ病２０例、光線性角化症２５例、
基底細胞上皮腫２４例及び棘細胞上皮腫２２例において
発見されなかった。逆に、研究対象となった３１人のう
ち、ＥＶにかかった３人の患者の良性病巣の擦過から抽
出されたＤＮＡ内には、ＨＰＶ５０のＤＮＡが検出され
た。
れた放射性プローブを使用して、このウィルスの病原性
能力を決定することができた。ＨＰＶ５０は、一般集団
（分析例２２件）、免疫抑制患者（２７例）及び肉屋
（２６例）について観察されたゆうぜい、角化棘細胞腫
１８例、ボウエン皮ふ病２０例、光線性角化症２５例、
基底細胞上皮腫２４例及び棘細胞上皮腫２２例において
発見されなかった。逆に、研究対象となった３１人のう
ち、ＥＶにかかった３人の患者の良性病巣の擦過から抽
出されたＤＮＡ内には、ＨＰＶ５０のＤＮＡが検出され
た。
【００３４】したがって、ＨＰＶ５０は、ＥＶに関連す
るもう１つのタイプの皮ふＨＰＶを構成する。ＥＶに関
連するタイプのＨＰＶの診断を目的とした、分子プロー
ブの調製のためのあらゆるＨＰＶのＤＮＡの混合物に、
これを取り入れるこることが望ましい。
るもう１つのタイプの皮ふＨＰＶを構成する。ＥＶに関
連するタイプのＨＰＶの診断を目的とした、分子プロー
ブの調製のためのあらゆるＨＰＶのＤＮＡの混合物に、
これを取り入れるこることが望ましい。
【００３５】以下の表には、ＨＰＶ５０の主要な遺伝子
及び遺伝子間領域の、このゲノムの地図上の推定上の位
置づけが明示されている： 末端の座標（％） ５´ ３´ Ｅ６−Ｅ７ １．８ １２．６ Ｅ１ １０．２ ３６ Ｅ２ ３５ ５４．８ Ｌ２ ５５．８ ７６．２ Ｌ１ ７５．２ ９６．６ 遺伝子間領域 ９６．６ １．８
及び遺伝子間領域の、このゲノムの地図上の推定上の位
置づけが明示されている： 末端の座標（％） ５´ ３´ Ｅ６−Ｅ７ １．８ １２．６ Ｅ１ １０．２ ３６ Ｅ２ ３５ ５４．８ Ｌ２ ５５．８ ７６．２ Ｌ１ ７５．２ ９６．６ 遺伝子間領域 ９６．６ １．８
【００３６】ブシュケ−レーヴェンシュタイン腫瘍内で
発見された新しいタイプのＨＰＶの分子クローニングと
特徴づけ 陰茎のブシュケ−レーヴェンシュタイン腫瘍から抽出さ
れたＤＮＡにおいて、ＨＰＶ１８の特異的放射性プロー
ブとの厳しくない条件の下でのハイブリダイゼーション
によって、新しいタイプのＨＰＶが明らかにされた。複
数の制限エンドヌクレアーゼに対するこのＨＰＶのＤＮ
Ａの感受性を研究したところ、エンドヌクレアーゼＢａ
ｍＨＩがウィルスＤＮＡを１ヵ所切断することがわかっ
た。エンドヌクレアーゼＢａｍＨＩによるこの腫瘍から
抽出されたＤＮＡの消化の後、８Kb（ＨＰＶゲノムのサ
イズ）のＤＮＡ分子を包含する画分を、ショ糖濃度勾配
下の遠心分離により純化した。ＢａｍＨＩ部位により、
８Kbの分子をバクテリオファージラムダのＤＮＡ内に挿
入した。組換え型ＤＮＡの包膜及び宿主細菌（大腸菌、
菌株ＬＡ１０１）のトランスフェクションの後、新しい
ＨＰＶのＤＮＡを挿入した組換え型バクテリオファージ
を、厳しくない条件の下でＨＰＶ１８の特異的放射性Ｄ
ＮＡプローブを用いて溶菌プラークに対するハイブリダ
イゼーション技法（Benton及びDavis)により選択した。
ウィルス配列を全て含む複数の組換え型バクテリオファ
ージを分離した。エンドヌクレアーゼＢａｍＨＩ及びＰ
ｓｔＩの混合物による、腫瘍から抽出されたＤＮＡの調
製物及び組換え型バクテリオファージのＤＮＡの切断
は、１ＨＰＶゲノムの分子量に相当する全分子量を有す
る同じフラグメントを生み出す。新しいＨＰＶのＤＮＡ
をファージＤＮＡ配列から切り出し、プラスミドＳＰ６
４内に再クローニングした。
発見された新しいタイプのＨＰＶの分子クローニングと
特徴づけ 陰茎のブシュケ−レーヴェンシュタイン腫瘍から抽出さ
れたＤＮＡにおいて、ＨＰＶ１８の特異的放射性プロー
ブとの厳しくない条件の下でのハイブリダイゼーション
によって、新しいタイプのＨＰＶが明らかにされた。複
数の制限エンドヌクレアーゼに対するこのＨＰＶのＤＮ
Ａの感受性を研究したところ、エンドヌクレアーゼＢａ
ｍＨＩがウィルスＤＮＡを１ヵ所切断することがわかっ
た。エンドヌクレアーゼＢａｍＨＩによるこの腫瘍から
抽出されたＤＮＡの消化の後、８Kb（ＨＰＶゲノムのサ
イズ）のＤＮＡ分子を包含する画分を、ショ糖濃度勾配
下の遠心分離により純化した。ＢａｍＨＩ部位により、
８Kbの分子をバクテリオファージラムダのＤＮＡ内に挿
入した。組換え型ＤＮＡの包膜及び宿主細菌（大腸菌、
菌株ＬＡ１０１）のトランスフェクションの後、新しい
ＨＰＶのＤＮＡを挿入した組換え型バクテリオファージ
を、厳しくない条件の下でＨＰＶ１８の特異的放射性Ｄ
ＮＡプローブを用いて溶菌プラークに対するハイブリダ
イゼーション技法（Benton及びDavis)により選択した。
ウィルス配列を全て含む複数の組換え型バクテリオファ
ージを分離した。エンドヌクレアーゼＢａｍＨＩ及びＰ
ｓｔＩの混合物による、腫瘍から抽出されたＤＮＡの調
製物及び組換え型バクテリオファージのＤＮＡの切断
は、１ＨＰＶゲノムの分子量に相当する全分子量を有す
る同じフラグメントを生み出す。新しいＨＰＶのＤＮＡ
をファージＤＮＡ配列から切り出し、プラスミドＳＰ６
４内に再クローニングした。
【００３７】新しいＨＰＶＳＰ６４のＤＮＡの制限酵素
開裂地図を、２０の制限エンドヌクレアーゼに対するこ
のＤＮＡの感受性の研究に基づいて作成した。３３の部
位が位置決定された。この地図は、これまでに分離され
た全てのＨＰＶのものと異なっている。新しいＨＰＶの
特異的放射性ＤＮＡプローブを用いて、厳しい又は厳し
くない条件の下でレプリカに対するハイブリダイゼーシ
ョン実験によって、既知のＨＰＶタイプのＤＮＡと新し
いＨＰＶのＤＮＡとの間の相同性を分析した。厳しくな
いハイブリダイゼーション条件下で、弱い配列相同が１
つだけ観察された。わずかに重要な交差ハイブリダイゼ
ーションが、粘膜の病巣に関連するＨＰＶのＤＮＡと新
しいＨＰＶのＤＮＡとの間に検出された。したがって、
ブシュケ−レーヴェンシュタイン腫瘍から分離されたウ
ィルスは、新しいタイプのＨＰＶすなわちＨＰＶ５４を
構成する。
開裂地図を、２０の制限エンドヌクレアーゼに対するこ
のＤＮＡの感受性の研究に基づいて作成した。３３の部
位が位置決定された。この地図は、これまでに分離され
た全てのＨＰＶのものと異なっている。新しいＨＰＶの
特異的放射性ＤＮＡプローブを用いて、厳しい又は厳し
くない条件の下でレプリカに対するハイブリダイゼーシ
ョン実験によって、既知のＨＰＶタイプのＤＮＡと新し
いＨＰＶのＤＮＡとの間の相同性を分析した。厳しくな
いハイブリダイゼーション条件下で、弱い配列相同が１
つだけ観察された。わずかに重要な交差ハイブリダイゼ
ーションが、粘膜の病巣に関連するＨＰＶのＤＮＡと新
しいＨＰＶのＤＮＡとの間に検出された。したがって、
ブシュケ−レーヴェンシュタイン腫瘍から分離されたウ
ィルスは、新しいタイプのＨＰＶすなわちＨＰＶ５４を
構成する。
【００３８】ＨＰＶ５４のＤＮＡとＨＰＶ１６のＤＮＡ
との間に形成されたヘテロ２本鎖分子の電子顕微鏡での
分析ならびにＨＰＶ５４のＤＮＡフラグメントのヌクレ
オチド配列の確認により、ＨＰＶ５４の物理的地図をＨ
ＰＶ１６の遺伝子地図と整列させ、ＨＰＶ５４のＤＮＡ
が有するさまざまな遺伝子の理論的位置を規定すること
が可能となった。
との間に形成されたヘテロ２本鎖分子の電子顕微鏡での
分析ならびにＨＰＶ５４のＤＮＡフラグメントのヌクレ
オチド配列の確認により、ＨＰＶ５４の物理的地図をＨ
ＰＶ１６の遺伝子地図と整列させ、ＨＰＶ５４のＤＮＡ
が有するさまざまな遺伝子の理論的位置を規定すること
が可能となった。
【００３９】１７９人の患者の生殖器の病巣から得たＤ
ＮＡ調製物で、ＨＰＶ５４のＤＮＡを探究した。尖圭の
６７の標本、ブシュケ−レーヴェンシュタイン腫瘍の１
０の標本、ボーエン病性丘疹症の１４の標本、ボーエン
病の１７の標本、侵食ガンの４０の標本そして頸上皮内
腫瘍の２８の標本において、ＨＰＶ５４は発見されなか
った。
ＮＡ調製物で、ＨＰＶ５４のＤＮＡを探究した。尖圭の
６７の標本、ブシュケ−レーヴェンシュタイン腫瘍の１
０の標本、ボーエン病性丘疹症の１４の標本、ボーエン
病の１７の標本、侵食ガンの４０の標本そして頸上皮内
腫瘍の２８の標本において、ＨＰＶ５４は発見されなか
った。
【００４０】ＨＰＶ５４は、これまで特徴づけされてき
た生殖器ＨＰＶに対する類似性がほとんどない新しいタ
イプのＨＰＶである。生殖器病巣に関連するタイプのＨ
ＰＶの診断を目的とした、分子プローブの調製のための
全ての混合物に、これを取り入れることが望ましい。
た生殖器ＨＰＶに対する類似性がほとんどない新しいタ
イプのＨＰＶである。生殖器病巣に関連するタイプのＨ
ＰＶの診断を目的とした、分子プローブの調製のための
全ての混合物に、これを取り入れることが望ましい。
【００４１】以下の表には、ＨＰＶ５４の主要な遺伝子
及び遺伝子間領域の、このゲノムの地図上での推定上の
位置づけが明示されている： 末端の座標（％） ５´ ３´ Ｅ６−Ｅ７ １．８ １０．８ Ｅ１ １０．８ ３５．６ Ｅ２ ３４．５ ４８．７ Ｌ２ ５２．３ ７１．５ Ｌ１ ６９．９ ９０．５ 遺伝子間領域 ９０．５ １．８
及び遺伝子間領域の、このゲノムの地図上での推定上の
位置づけが明示されている： 末端の座標（％） ５´ ３´ Ｅ６−Ｅ７ １．８ １０．８ Ｅ１ １０．８ ３５．６ Ｅ２ ３４．５ ４８．７ Ｌ２ ５２．３ ７１．５ Ｌ１ ６９．９ ９０．５ 遺伝子間領域 ９０．５ １．８
【００４２】尖圭コンジロームに結びつけられた新しい
タイプのＨＰＶ（ＨＰＶ５５）の分子クローニングと特
徴づけ ＨＰＶ６の特異的放射性ＤＮＡプローブとの厳しくない
条件の下でのハイブリダイゼーションにより、陰茎の尖
圭コンジロームから抽出されたＤＮＡにおいて、新しい
タイプのＨＰＶが明らかにされた。複数の制限エンドヌ
クレアーゼに対する感受性の研究により、このＨＰＶの
ＤＮＡがエンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩにより２ヵ所切
断され、合計がＨＰＶゲノム１つのサイズに相当する
（８Kb）、５．６５キロ塩基（Kb）と２．１５Kbの分子
量の２つのＤＮＡフラグメントを生み出すことがわかっ
た。酵素ＥｃｏＲＩによる腫瘍ＤＮＡの消化の後、Ｅｃ
ｏＲＩ部位によりバクテリオファージラムダｇｔ１０内
に７Kb未満のサイズのＤＮＡ分子を挿入した。組換え型
ＤＮＡの包膜及び大腸菌Ｋ１２（菌株Ｃ６００）の感染
の後、新しいＨＰＶのサブゲノムフラグメントを含む組
換え型バクテリオファージを、厳しくないハイブリダイ
ゼーション条件の下でＨＰＶ６のＤＮＡプローブを用い
て、溶菌プラークに対するハイブリダイゼーション技法
（Benton及びDavis)により選択した。新しいＨＰＶのゲ
ノムに相当する２つのフラグメントのいずれか一方を含
む複数の組換え型バクテリオファージを特徴づけした。
エンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩによる組換え型バクテリ
オファージ及び病巣から抽出された腫瘍ＤＮＡの処理
は、５．６５Kbと２．１５Kbの期待通りの２つのフラグ
メントを生み出した。これら２つのフラグメントをファ
ージＤＮＡ配列から切り出し、プラスミドｐＧｅｍ４内
に再クローニングした。１５の制限エンドヌクレアーゼ
に対するこのＤＮＡの感受性の研究に基づいて、新しい
ＨＰＶのＤＮＡの制限酵素開裂地図を作成した。１９の
切断部位を位置づけした。この地図は、これまでに特徴
付けされてきたあらゆるＨＰＶのものと異なっている。
新しいＨＰＶの特異的放射性ＤＮＡプローブを用いて厳
しい条件下で行なったレプリカに対するハイブリダイゼ
ーション実験により、既知のＨＰＶのＤＮＡと新しいＨ
ＰＶのＤＮＡとの間の配列相同性を分析した。新しいＨ
ＰＶのＤＮＡとＨＰＶ１３のＤＮＡで部分的ハイブリダ
イゼーションがみられ、ＨＰＶ６及び１１のＤＮＡでさ
らに小さい交差ハイブリダイゼーションが発見された。
飽和液体媒質中のハイブリダイゼーション実験とそれに
続くヌクレアーゼＳ１によるハイブリッドの消化で、Ｄ
ＮＡの相同性を評価した。ＨＰＶ１３、６及び１１のＤ
ＮＡと新しいＨＰＶのＤＮＡとの間での相同性は、それ
ぞれ２０、１０及び１０％と見積られた。したがって、
陰茎のコンジロームから分離されたウィルスは、新しい
タイプのＨＰＶすなわちＨＰＶ５５を構成する。
タイプのＨＰＶ（ＨＰＶ５５）の分子クローニングと特
徴づけ ＨＰＶ６の特異的放射性ＤＮＡプローブとの厳しくない
条件の下でのハイブリダイゼーションにより、陰茎の尖
圭コンジロームから抽出されたＤＮＡにおいて、新しい
タイプのＨＰＶが明らかにされた。複数の制限エンドヌ
クレアーゼに対する感受性の研究により、このＨＰＶの
ＤＮＡがエンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩにより２ヵ所切
断され、合計がＨＰＶゲノム１つのサイズに相当する
（８Kb）、５．６５キロ塩基（Kb）と２．１５Kbの分子
量の２つのＤＮＡフラグメントを生み出すことがわかっ
た。酵素ＥｃｏＲＩによる腫瘍ＤＮＡの消化の後、Ｅｃ
ｏＲＩ部位によりバクテリオファージラムダｇｔ１０内
に７Kb未満のサイズのＤＮＡ分子を挿入した。組換え型
ＤＮＡの包膜及び大腸菌Ｋ１２（菌株Ｃ６００）の感染
の後、新しいＨＰＶのサブゲノムフラグメントを含む組
換え型バクテリオファージを、厳しくないハイブリダイ
ゼーション条件の下でＨＰＶ６のＤＮＡプローブを用い
て、溶菌プラークに対するハイブリダイゼーション技法
（Benton及びDavis)により選択した。新しいＨＰＶのゲ
ノムに相当する２つのフラグメントのいずれか一方を含
む複数の組換え型バクテリオファージを特徴づけした。
エンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩによる組換え型バクテリ
オファージ及び病巣から抽出された腫瘍ＤＮＡの処理
は、５．６５Kbと２．１５Kbの期待通りの２つのフラグ
メントを生み出した。これら２つのフラグメントをファ
ージＤＮＡ配列から切り出し、プラスミドｐＧｅｍ４内
に再クローニングした。１５の制限エンドヌクレアーゼ
に対するこのＤＮＡの感受性の研究に基づいて、新しい
ＨＰＶのＤＮＡの制限酵素開裂地図を作成した。１９の
切断部位を位置づけした。この地図は、これまでに特徴
付けされてきたあらゆるＨＰＶのものと異なっている。
新しいＨＰＶの特異的放射性ＤＮＡプローブを用いて厳
しい条件下で行なったレプリカに対するハイブリダイゼ
ーション実験により、既知のＨＰＶのＤＮＡと新しいＨ
ＰＶのＤＮＡとの間の配列相同性を分析した。新しいＨ
ＰＶのＤＮＡとＨＰＶ１３のＤＮＡで部分的ハイブリダ
イゼーションがみられ、ＨＰＶ６及び１１のＤＮＡでさ
らに小さい交差ハイブリダイゼーションが発見された。
飽和液体媒質中のハイブリダイゼーション実験とそれに
続くヌクレアーゼＳ１によるハイブリッドの消化で、Ｄ
ＮＡの相同性を評価した。ＨＰＶ１３、６及び１１のＤ
ＮＡと新しいＨＰＶのＤＮＡとの間での相同性は、それ
ぞれ２０、１０及び１０％と見積られた。したがって、
陰茎のコンジロームから分離されたウィルスは、新しい
タイプのＨＰＶすなわちＨＰＶ５５を構成する。
【００４３】ＨＰＶ１１のＤＮＡとＨＰＶ５５のＤＮＡ
との間で形成されたヘテロ２本鎖分子の電子顕微鏡での
分析及びＨＰＶ５５のＤＮＡフラグメントのヌクレオチ
ド配列の決定により、ＨＰＶ５５のＤＮＡの物理的地図
とＨＰＶ１１の遺伝子地図を整列させ、ＨＰＶ５５のＤ
ＮＡが有するさまざまな遺伝子の理論的位置を規定する
ことが可能となった。
との間で形成されたヘテロ２本鎖分子の電子顕微鏡での
分析及びＨＰＶ５５のＤＮＡフラグメントのヌクレオチ
ド配列の決定により、ＨＰＶ５５のＤＮＡの物理的地図
とＨＰＶ１１の遺伝子地図を整列させ、ＨＰＶ５５のＤ
ＮＡが有するさまざまな遺伝子の理論的位置を規定する
ことが可能となった。
【００４４】純化されたＨＰＶ５５のＤＮＡから調製さ
れた放射性プローブを使用することでこのウィルスの病
原性能力を研究することが可能となった。ＨＰＶ５５の
ＤＮＡは、調査した６７例のうちもう一人の女性の患者
の肛門コンジローム内においてのみ明らかにされた。さ
らに９６人の患者について採取されたその他のタイプの
生殖器病巣から抽出されたＤＮＡ内には、ＨＰＶ５５は
検出されなかった。
れた放射性プローブを使用することでこのウィルスの病
原性能力を研究することが可能となった。ＨＰＶ５５の
ＤＮＡは、調査した６７例のうちもう一人の女性の患者
の肛門コンジローム内においてのみ明らかにされた。さ
らに９６人の患者について採取されたその他のタイプの
生殖器病巣から抽出されたＤＮＡ内には、ＨＰＶ５５は
検出されなかった。
【００４５】ＨＰＶ５５は、稀ではあるが、生殖器病巣
に関連するＨＰＶタイプの診断を目的とした、プローブ
の調製用のあらゆるＨＰＶ混合物に取り入れなくてはな
らない。
に関連するＨＰＶタイプの診断を目的とした、プローブ
の調製用のあらゆるＨＰＶ混合物に取り入れなくてはな
らない。
【００４６】以下の表には、ＨＰＶ５５の主要な遺伝子
及び遺伝子間領域の、このゲノムの地図上での推定上の
位置づけが明示されている： 末端の座標（％） ５´ ３´ Ｅ６−Ｅ７ １．３ １０．４ Ｅ１ ９ ３５ Ｅ２ ３４ ４８．２ Ｌ２ ５５．６ ７２．９ Ｌ１ ７１．４ ９１．７ 遺伝子間領域 ９１．７ １．３
及び遺伝子間領域の、このゲノムの地図上での推定上の
位置づけが明示されている： 末端の座標（％） ５´ ３´ Ｅ６−Ｅ７ １．３ １０．４ Ｅ１ ９ ３５ Ｅ２ ３４ ４８．２ Ｌ２ ５５．６ ７２．９ Ｌ１ ７１．４ ９１．７ 遺伝子間領域 ９１．７ １．３
【００４７】一般に、本発明は同様に、上述のＤＮＡ−
ＨＰＶ又はこのＤＮＡ−ＨＰＶのフラグメントを含む全
ての組換え型ＤＮＡ、特に、これらの組換え型ＤＮＡで
形成され、本発明に基づく乳頭腫ウィルス又はこの乳頭
腫ウィルスの変異体による感染の検出に特に適合させた
ハイブリダイゼーションプローブにも関するものであ
る。これらのプローブは、特に全く別の遺伝標識との直
接的又は間接的なカップリングのため一定のヌクレオチ
ドレベルで変更されてもよいし、あるいはそれ自体標識
づけされてもよい。当然のことながら、これらのプロー
ブの中で、乳頭腫ウィルスのＤＮＡに相当するヌクレオ
チド配列とは無関係で通常クローニングベクターからく
る部分は、対応する乳頭腫ウィルス又はその変異体の１
つのＤＮＡの含有量についてテストされる試料中に場合
によって含まれているその他の核酸とは、厳しい条件の
下でハイブリダイゼーションする危険性のないものであ
る。
ＨＰＶ又はこのＤＮＡ−ＨＰＶのフラグメントを含む全
ての組換え型ＤＮＡ、特に、これらの組換え型ＤＮＡで
形成され、本発明に基づく乳頭腫ウィルス又はこの乳頭
腫ウィルスの変異体による感染の検出に特に適合させた
ハイブリダイゼーションプローブにも関するものであ
る。これらのプローブは、特に全く別の遺伝標識との直
接的又は間接的なカップリングのため一定のヌクレオチ
ドレベルで変更されてもよいし、あるいはそれ自体標識
づけされてもよい。当然のことながら、これらのプロー
ブの中で、乳頭腫ウィルスのＤＮＡに相当するヌクレオ
チド配列とは無関係で通常クローニングベクターからく
る部分は、対応する乳頭腫ウィルス又はその変異体の１
つのＤＮＡの含有量についてテストされる試料中に場合
によって含まれているその他の核酸とは、厳しい条件の
下でハイブリダイゼーションする危険性のないものであ
る。
【００４８】したがって、乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ４
９、ＨＰＶ５０、ＨＰＶ５４、ＨＰＶ５５）又はその変
異体による感染に関するテストすべき生物学的試料に対
する試験管内診断のための方法は、上述のもののような
プローブを、好ましくは厳しいハイブリダイゼーション
条件の下で、場合によってはこのプローブに対しアクセ
ス可能な状態にされたこの試料の核酸と接触させるこ
と、そして場合によって試料中に存在する求められてい
るウィルスＤＮＡと前記プローブとの間で形成されるハ
イブリッドを検出すること、をその特徴としている。
９、ＨＰＶ５０、ＨＰＶ５４、ＨＰＶ５５）又はその変
異体による感染に関するテストすべき生物学的試料に対
する試験管内診断のための方法は、上述のもののような
プローブを、好ましくは厳しいハイブリダイゼーション
条件の下で、場合によってはこのプローブに対しアクセ
ス可能な状態にされたこの試料の核酸と接触させるこ
と、そして場合によって試料中に存在する求められてい
るウィルスＤＮＡと前記プローブとの間で形成されるハ
イブリッドを検出すること、をその特徴としている。
【００４９】このような方法は、次のものの検出にとっ
て特に有利である： − ＨＰＶ４９：皮ふゆうぜい（特に尋常性ゆうぜい及
び足底ゆうぜい）における検出ならびにいぼ状表皮異形
成の鑑別診断； − ＨＰＶ５０：いぼ状表皮異形成、上皮内腫瘍及び皮
ふガンにおける検出； − ＨＰＶ５４：生殖器腫瘍及び子宮頸ガンにおける検
出； − ＨＰＶ５５：生殖器腫瘍及び子宮頸ガン、コンジロ
ーム及び乳頭腫における検出。
て特に有利である： − ＨＰＶ４９：皮ふゆうぜい（特に尋常性ゆうぜい及
び足底ゆうぜい）における検出ならびにいぼ状表皮異形
成の鑑別診断； − ＨＰＶ５０：いぼ状表皮異形成、上皮内腫瘍及び皮
ふガンにおける検出； − ＨＰＶ５４：生殖器腫瘍及び子宮頸ガンにおける検
出； − ＨＰＶ５５：生殖器腫瘍及び子宮頸ガン、コンジロ
ーム及び乳頭腫における検出。
【００５０】一つの実施態様としては、プローブは、そ
の他の乳頭腫ウィルス、特に以下に記されているものか
ら誘導されたプローブと組み合わされている： − ＨＰＶ４９の場合、ＨＰＶ１、２ｄ、４と組み合わ
せて、又は変形態様としてＨＰＶ３、１０ａ、１０ｂ、
２８、２９と組み合わせて； − ＨＰＶ５０の場合、ＨＰＶ５、１７ａ、２４と組み
合わせて、又は変形態様としてＨＰＶ５、８、１４ｂ、
３６と組み合わせて； − ＨＰＶ５４の場合、ＨＰＶ１６、１８、３３、３９
と組み合わせて、又は変形態様としてＨＰＶ６、１１、
４２と組み合わせて；そして − ＨＰＶ５５の場合、ＨＰＶ６、１１、４２と組み合
わせて
の他の乳頭腫ウィルス、特に以下に記されているものか
ら誘導されたプローブと組み合わされている： − ＨＰＶ４９の場合、ＨＰＶ１、２ｄ、４と組み合わ
せて、又は変形態様としてＨＰＶ３、１０ａ、１０ｂ、
２８、２９と組み合わせて； − ＨＰＶ５０の場合、ＨＰＶ５、１７ａ、２４と組み
合わせて、又は変形態様としてＨＰＶ５、８、１４ｂ、
３６と組み合わせて； − ＨＰＶ５４の場合、ＨＰＶ１６、１８、３３、３９
と組み合わせて、又は変形態様としてＨＰＶ６、１１、
４２と組み合わせて；そして − ＨＰＶ５５の場合、ＨＰＶ６、１１、４２と組み合
わせて
【００５１】本発明に基づくプローブの各々又はこのプ
ローブを含む混合物は、特に、以下のようにして用いる
ことができる。ただし、当然のことながら、ここに記さ
れている診断試験は、本発明に基づくプローブ又はその
混合物の使用条件を制限するものとしてみなされてはな
らない。
ローブを含む混合物は、特に、以下のようにして用いる
ことができる。ただし、当然のことながら、ここに記さ
れている診断試験は、本発明に基づくプローブ又はその
混合物の使用条件を制限するものとしてみなされてはな
らない。
【００５２】考慮されている例において問題となってい
るのは、例えば生検において、病巣の擦過により得られ
た細胞、又はカルノワ混合液（エタノール、クロロホル
ム、酢酸を６：３：１）により固定され、パラフィン内
に包埋された生検切片内で、ＨＰＶを識別することにあ
る。この検査は、既知の原理の方法に従った採取物から
のＤＮＡの事前抽出を必要とし、本発明に基づくＨＰＶ
或いはＤＮＡ又はＨＰＶの混合物から調製された放射性
プローブ（32Ｐ又は35Ｓで標識づけされている）を用い
て、厳しい又はさほど厳しくない条件の下で行なわれる
分子ハイブリダイゼーション実験によるこのＤＮＡの分
析を利用するものである。
るのは、例えば生検において、病巣の擦過により得られ
た細胞、又はカルノワ混合液（エタノール、クロロホル
ム、酢酸を６：３：１）により固定され、パラフィン内
に包埋された生検切片内で、ＨＰＶを識別することにあ
る。この検査は、既知の原理の方法に従った採取物から
のＤＮＡの事前抽出を必要とし、本発明に基づくＨＰＶ
或いはＤＮＡ又はＨＰＶの混合物から調製された放射性
プローブ（32Ｐ又は35Ｓで標識づけされている）を用い
て、厳しい又はさほど厳しくない条件の下で行なわれる
分子ハイブリダイゼーション実験によるこのＤＮＡの分
析を利用するものである。
【００５３】複数のハイブリダイゼーション方法が利用
できる。例えば、ドットハイブリダイゼーション法を利
用してもよい。この方法には、ＤＮＡの変性の後、膜
（ニトロセルロース又は「Genescreen plus」）の上に一
定量のＤＮＡアリコートを沈積させること、プローブ混
合物と通常の条件下で各膜をハイブリダイゼーションさ
せること、そして、放射線写真フィルムと接触させて膜
を露光することにより放射性ハイブリッドを検出するこ
とが含まれている。同様に、レプリカハイブリダイゼー
ション方法を用いることもできる。この方法には、制限
酵素によるＤＮＡの処理の後、生み出されたＤＮＡフラ
グメントをアガロースゲルで電気泳動して分離するこ
と、アルカリ変性の後、フラグメントを膜（ニトロセル
ロース、「Genescreen plus」）上に転移させること、そ
してさまざまなプローブ混合物と通常の条件下でこれら
をハイブリダイゼーションすることが含まれている。放
射性ハイブリッド形成は、放射線写真フィルムと接触さ
せて膜を露光した後、検出される。
できる。例えば、ドットハイブリダイゼーション法を利
用してもよい。この方法には、ＤＮＡの変性の後、膜
（ニトロセルロース又は「Genescreen plus」）の上に一
定量のＤＮＡアリコートを沈積させること、プローブ混
合物と通常の条件下で各膜をハイブリダイゼーションさ
せること、そして、放射線写真フィルムと接触させて膜
を露光することにより放射性ハイブリッドを検出するこ
とが含まれている。同様に、レプリカハイブリダイゼー
ション方法を用いることもできる。この方法には、制限
酵素によるＤＮＡの処理の後、生み出されたＤＮＡフラ
グメントをアガロースゲルで電気泳動して分離するこ
と、アルカリ変性の後、フラグメントを膜（ニトロセル
ロース、「Genescreen plus」）上に転移させること、そ
してさまざまなプローブ混合物と通常の条件下でこれら
をハイブリダイゼーションすることが含まれている。放
射性ハイブリッド形成は、放射線写真フィルムと接触さ
せて膜を露光した後、検出される。
【００５４】放射性プローブは、「ニック翻訳（nick-t
ranslation）」法により標識づけされたＨＰＶのＤＮＡ
によって、あるいは、例えばＳＰ６タイプのベクター内
に挿入されたウィルスＤＮＡの転写により調製されたＲ
ＮＡによって、構成されている。放射性プローブの使用
には、感受性が高いという利点があるが、だからといっ
て、非放射性プローブ、例えば、自ら標識づけされてい
るか又はそれ自体酵素、標識などの蛍光をもつ抗体によ
り認識されうるビオチニル化されたものを使用すること
が排除されるわけではない。
ranslation）」法により標識づけされたＨＰＶのＤＮＡ
によって、あるいは、例えばＳＰ６タイプのベクター内
に挿入されたウィルスＤＮＡの転写により調製されたＲ
ＮＡによって、構成されている。放射性プローブの使用
には、感受性が高いという利点があるが、だからといっ
て、非放射性プローブ、例えば、自ら標識づけされてい
るか又はそれ自体酵素、標識などの蛍光をもつ抗体によ
り認識されうるビオチニル化されたものを使用すること
が排除されるわけではない。
【００５５】本発明は同様に、上述のタイプの組換え型
ＤＮＡで形質転換された細胞培養物、特に、かかる細胞
培養物の中で、乳頭腫ウィルスのＤＮＡに相当するヌク
レオチド配列がこのヌクレオチド配列の転写及び調節要
素の制御下に置かれている組換え型ＤＮＡで形質転換さ
れたものにも関するものである。
ＤＮＡで形質転換された細胞培養物、特に、かかる細胞
培養物の中で、乳頭腫ウィルスのＤＮＡに相当するヌク
レオチド配列がこのヌクレオチド配列の転写及び調節要
素の制御下に置かれている組換え型ＤＮＡで形質転換さ
れたものにも関するものである。
【００５６】したがって、本発明は同様に、これらの組
換え型ＤＮＡの発現生成物ならびにかかる発現生成物に
対して生成されうる対応する抗体にも関する。
換え型ＤＮＡの発現生成物ならびにかかる発現生成物に
対して生成されうる対応する抗体にも関する。
【００５７】この点において、本発明は、このようにし
て生成でき、それぞれ乳頭腫ウィルスの各々に対応す
る、特に遺伝子Ｅ１、Ｅ２、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、Ｌ２の
発現の結果として得られるポリペプチドに関する。
て生成でき、それぞれ乳頭腫ウィルスの各々に対応す
る、特に遺伝子Ｅ１、Ｅ２、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、Ｌ２の
発現の結果として得られるポリペプチドに関する。
【００５８】したがって、これらのポリペプチドの生成
のための本発明に基づく方法には、上述のタンパク質の
１つに相当するヌクレオチド配列がかかる細胞宿主内で
発現されうるような形で、上述のような組換え型ＤＮＡ
の１つでコンピテント細胞培養物を形質転換させるこ
と、この細胞宿主により合成された生成物からこれらの
ポリペプチドを回収すること、そして純化すること（例
えば、細胞培養物又はそれを生育させた媒質から予め抽
出した発現生成物を、かかるポリペプチドに対して予め
形成させた抗体と接触させることによる）が含まれてい
る。
のための本発明に基づく方法には、上述のタンパク質の
１つに相当するヌクレオチド配列がかかる細胞宿主内で
発現されうるような形で、上述のような組換え型ＤＮＡ
の１つでコンピテント細胞培養物を形質転換させるこ
と、この細胞宿主により合成された生成物からこれらの
ポリペプチドを回収すること、そして純化すること（例
えば、細胞培養物又はそれを生育させた媒質から予め抽
出した発現生成物を、かかるポリペプチドに対して予め
形成させた抗体と接触させることによる）が含まれてい
る。
【００５９】しかしながら、本発明に基づく乳頭腫ウィ
ルスのゲノムの各々の配列Ｌ２の発現生成物は、それら
がそれ自体、対応する乳頭腫ウィルスに侵され、異なる
タイプの乳頭腫ウィルスには侵されていない生物学的採
取物の中で遺伝子Ｌ２の発現生成物を認識することので
きる抗体の生体内生成のために用いられうるものである
という点において（そして特に、問題となっている種類
の調製物が予め固定されている場合）、特に有利なもの
である。
ルスのゲノムの各々の配列Ｌ２の発現生成物は、それら
がそれ自体、対応する乳頭腫ウィルスに侵され、異なる
タイプの乳頭腫ウィルスには侵されていない生物学的採
取物の中で遺伝子Ｌ２の発現生成物を認識することので
きる抗体の生体内生成のために用いられうるものである
という点において（そして特に、問題となっている種類
の調製物が予め固定されている場合）、特に有利なもの
である。
【００６０】さらに本発明は、他のポリペプチド配列が
タンパク質Ｌ２の免疫原特性を甚しく変えないかぎりに
おいて、他のポリペプチド配列に融合されたタンパク質
Ｌ２のような、それぞれ対応する乳頭腫ウィルスから誘
導された上述のポリペプチドを含むハイブリッドポリペ
プチドにも関するものである。これらのその他のポリペ
プチドフラグメントの存在は、特に、遺伝子工学方法に
よる、使用されたこれらのハイブリッドポリペチドの生
成様式の結果であると考えられる。例えば、これらのハ
イブリッドポリペプチドは、ベータ−ガラクトシダーゼ
から誘導された配列を含んでいる。このような生成物
は、特に、ラクトースオペロンの全て又は一部分により
変更され、しかもラクトースオペロンのプロモーター
（又はラムダファージのような他の適当な全てのプロモ
ーター）の下流に挿入された形で、本発明に基づく関係
する乳頭腫ウィルスからの遺伝子Ｌ２から誘導されたヌ
クレオチド配列を有するような適切なベクター（ファー
ジ又はプラスミド）で、大腸菌を形質転換することによ
り、得ることができる。また、ラクトースオペロンのベ
ータ−ガラクトシダーゼの遺伝子の少なくとも一部分を
含むこのタイプのプラスミド又はファージを利用すると
有利である。
タンパク質Ｌ２の免疫原特性を甚しく変えないかぎりに
おいて、他のポリペプチド配列に融合されたタンパク質
Ｌ２のような、それぞれ対応する乳頭腫ウィルスから誘
導された上述のポリペプチドを含むハイブリッドポリペ
プチドにも関するものである。これらのその他のポリペ
プチドフラグメントの存在は、特に、遺伝子工学方法に
よる、使用されたこれらのハイブリッドポリペチドの生
成様式の結果であると考えられる。例えば、これらのハ
イブリッドポリペプチドは、ベータ−ガラクトシダーゼ
から誘導された配列を含んでいる。このような生成物
は、特に、ラクトースオペロンの全て又は一部分により
変更され、しかもラクトースオペロンのプロモーター
（又はラムダファージのような他の適当な全てのプロモ
ーター）の下流に挿入された形で、本発明に基づく関係
する乳頭腫ウィルスからの遺伝子Ｌ２から誘導されたヌ
クレオチド配列を有するような適切なベクター（ファー
ジ又はプラスミド）で、大腸菌を形質転換することによ
り、得ることができる。また、ラクトースオペロンのベ
ータ−ガラクトシダーゼの遺伝子の少なくとも一部分を
含むこのタイプのプラスミド又はファージを利用すると
有利である。
【００６１】本発明に従ったポリペプチドはまた、それ
が純化されている場合、特にこれらのポリペプチドによ
り免疫された動物の血清からのそれらに対応する抗体の
純化技法において利用することができる。特にこれらの
ポリペプチドは、アフィニティカラム上で固定されるこ
とができる。このとき抗体の純化作業は、これらを含む
血清を、上述のポリペプチドを有するアフィニティカラ
ムと接触させて通過させることから成る。これらのカラ
ム上に選択的に固定された抗体は、次に、酢酸アンモニ
ウムのような塩の溶液などの適当なイオン強度を呈する
適切な緩衝液を用いて、抗原−抗体複合体を解離させる
ことより回収する。同様に酸性化された溶液を利用する
こともできる。
が純化されている場合、特にこれらのポリペプチドによ
り免疫された動物の血清からのそれらに対応する抗体の
純化技法において利用することができる。特にこれらの
ポリペプチドは、アフィニティカラム上で固定されるこ
とができる。このとき抗体の純化作業は、これらを含む
血清を、上述のポリペプチドを有するアフィニティカラ
ムと接触させて通過させることから成る。これらのカラ
ム上に選択的に固定された抗体は、次に、酢酸アンモニ
ウムのような塩の溶液などの適当なイオン強度を呈する
適切な緩衝液を用いて、抗原−抗体複合体を解離させる
ことより回収する。同様に酸性化された溶液を利用する
こともできる。
【００６２】本発明は同様に、上記ポリペプチドに対す
る、特に本発明に基づく乳頭腫ウィルスの各々の遺伝子
Ｅ６、Ｅ７又は好ましくはＬ２の発現生成物に対する、
抗体の生成方法にも関するものである。かかる方法に
は、前記ポリペプチドで適切な生体宿主を免疫するこ
と、そして特に純化された状態での対応するポリペプチ
ドとこれらの血清の接触及び形成された抗原−抗体複合
体からのこれらの抗体の回収により、免疫された宿主の
血清から形成された抗体を回収すること、が含まれてい
る。
る、特に本発明に基づく乳頭腫ウィルスの各々の遺伝子
Ｅ６、Ｅ７又は好ましくはＬ２の発現生成物に対する、
抗体の生成方法にも関するものである。かかる方法に
は、前記ポリペプチドで適切な生体宿主を免疫するこ
と、そして特に純化された状態での対応するポリペプチ
ドとこれらの血清の接触及び形成された抗原−抗体複合
体からのこれらの抗体の回収により、免疫された宿主の
血清から形成された抗体を回収すること、が含まれてい
る。
【００６３】最後に、本発明は、本発明に基づく抗体
（又はその他の乳頭腫ウィルスからの抗体と共にこれら
の抗体を含むグループ）を利用した混合物、特に以下に
再度言及されるような上述のＤＮＡ−ＨＰＶの「カクテ
ル」又は混合物から誘導された抗体（又は対応する抗体
のグループ）を含む混合物にも関する。
（又はその他の乳頭腫ウィルスからの抗体と共にこれら
の抗体を含むグループ）を利用した混合物、特に以下に
再度言及されるような上述のＤＮＡ−ＨＰＶの「カクテ
ル」又は混合物から誘導された抗体（又は対応する抗体
のグループ）を含む混合物にも関する。
【００６４】特に、本発明は、与えられた一定のタイプ
の疾患において往々にして存在するとみなされている対
応する抗体又は抗体の混合物に関するものである。関係
する患者からの組織学的及び細胞学的採取物に対する試
験管内診断試験の後、一定の病気が臨床的に診断された
場合あるいは生体内診断試験によりその感染乳頭腫ウィ
ルスが上述の全体の中の乳頭腫ウィルスの１つのものと
同様なタイプに属していることが立証された場合、直ち
に、予め純化されたこれらの抗体は、適当な薬学的賦形
剤と共に、一定の病気の治療において、当該患者への、
特に非経口的な、投与によって利用することが可能であ
る。このとき、これらの血清は、本発明に基づく乳頭腫
ウィルスにより誘発された感染の退行をひき起こすこと
ができる。
の疾患において往々にして存在するとみなされている対
応する抗体又は抗体の混合物に関するものである。関係
する患者からの組織学的及び細胞学的採取物に対する試
験管内診断試験の後、一定の病気が臨床的に診断された
場合あるいは生体内診断試験によりその感染乳頭腫ウィ
ルスが上述の全体の中の乳頭腫ウィルスの１つのものと
同様なタイプに属していることが立証された場合、直ち
に、予め純化されたこれらの抗体は、適当な薬学的賦形
剤と共に、一定の病気の治療において、当該患者への、
特に非経口的な、投与によって利用することが可能であ
る。このとき、これらの血清は、本発明に基づく乳頭腫
ウィルスにより誘発された感染の退行をひき起こすこと
ができる。
【００６５】これらの抗体は、さらに限定的に言うと、
感染者からの組織学的切片に、同じ乳頭腫ウィルス又は
対応する変異種の構造遺伝子のいくつか、特にＬ２の発
現生成物も含まれている可能性があるかぎりにおいて、
本発明に基づく乳頭腫ウィルス又はこれらのウィルスの
変異体に関する感染の診断試験において利用することが
できる。
感染者からの組織学的切片に、同じ乳頭腫ウィルス又は
対応する変異種の構造遺伝子のいくつか、特にＬ２の発
現生成物も含まれている可能性があるかぎりにおいて、
本発明に基づく乳頭腫ウィルス又はこれらのウィルスの
変異体に関する感染の診断試験において利用することが
できる。
【００６６】同様に、有利なことに、上述の条件下でそ
の他の乳頭腫ウィルスから誘導される抗体と場合によっ
て共にあるこれらの抗体は、特に次のような試験管内診
断のために用いることができる： − ＨＰＶ４９：皮ふゆうぜい（特に尋常性ゆうぜい及
び足底ゆうぜい）において、及びいぼ状表皮異形成の鑑
別診断； − ＨＰＶ５０：いぼ状表皮異形成、上皮内腫瘍及び皮
ふガンにおいて； − ＨＰＶ５４：生殖器腫瘍及び子宮頸ガンにおいて； − ＨＰＶ５５：生殖器腫瘍及び子宮頸ガン、コンジロ
ーム及び乳頭腫において。
の他の乳頭腫ウィルスから誘導される抗体と場合によっ
て共にあるこれらの抗体は、特に次のような試験管内診
断のために用いることができる： − ＨＰＶ４９：皮ふゆうぜい（特に尋常性ゆうぜい及
び足底ゆうぜい）において、及びいぼ状表皮異形成の鑑
別診断； − ＨＰＶ５０：いぼ状表皮異形成、上皮内腫瘍及び皮
ふガンにおいて； − ＨＰＶ５４：生殖器腫瘍及び子宮頸ガンにおいて； − ＨＰＶ５５：生殖器腫瘍及び子宮頸ガン、コンジロ
ーム及び乳頭腫において。
【００６７】したがって、本発明はさらに、乳頭腫ウィ
ルスのうちの１つにより、対象であるヒトの体内で誘発
された病巣からの組織学的切片を、抗原−抗体複合体の
生成を可能にする条件下で、選ばれた単数又は複数の抗
体と接触させること、そしてこの抗原−抗体複合体を検
出することを含む、試験管内診断方法にも関する。有利
なことに、検出は、例えば上述のカルノワ混合液又は媒
質（同様に、「aniumal組織化学及び細胞化学」という題
のL. LISONの著書にも記述されている）を用いて解離性
の条件の下で予め固定された調製物について行なわれ
る。
ルスのうちの１つにより、対象であるヒトの体内で誘発
された病巣からの組織学的切片を、抗原−抗体複合体の
生成を可能にする条件下で、選ばれた単数又は複数の抗
体と接触させること、そしてこの抗原−抗体複合体を検
出することを含む、試験管内診断方法にも関する。有利
なことに、検出は、例えば上述のカルノワ混合液又は媒
質（同様に、「aniumal組織化学及び細胞化学」という題
のL. LISONの著書にも記述されている）を用いて解離性
の条件の下で予め固定された調製物について行なわれ
る。
【００６８】場合によって固定された抗Ｌ２抗体は、こ
れらの抗体に対して形成されたその他の抗体により認識
されうる。これらのその他の抗体は、適切な標識、好ま
しくは非放射性の標識を有している。これらの標識は、
例えば酵素又は蛍光性のものである。
れらの抗体に対して形成されたその他の抗体により認識
されうる。これらのその他の抗体は、適切な標識、好ま
しくは非放射性の標識を有している。これらの標識は、
例えば酵素又は蛍光性のものである。
【００６９】したがって、選択された抗体は、こうして
対応する上述のハイブリダイゼーションプローブとし
て、対応するタイプの疾患を試験管内で診断するために
用いることができる。
対応する上述のハイブリダイゼーションプローブとし
て、対応するタイプの疾患を試験管内で診断するために
用いることができる。
【００７０】最後に、本発明は、対応する乳頭腫を原因
とする疾患に侵されうる危険性の高いヒトを防護するた
めに用いることのできる、選択された投与様式、特に非
経口投与様式に適合させた薬学的に受入れることのでき
る賦形剤と共に、単数又は好ましくは複数のタンパク質
Ｌ２を含む、対応するワクチン混合物に関するものであ
る。
とする疾患に侵されうる危険性の高いヒトを防護するた
めに用いることのできる、選択された投与様式、特に非
経口投与様式に適合させた薬学的に受入れることのでき
る賦形剤と共に、単数又は好ましくは複数のタンパク質
Ｌ２を含む、対応するワクチン混合物に関するものであ
る。
【００７１】上述のＤＮＡ−ＨＰＶの菌株は、以下の寄
託番号にて、１９８８年５月６日ＣＮＣＭに寄託され
た： − ＰＧＥＭ ４ＨＰＶ４９：Ｉ−７５４ − ＰＳＰ ６５ＨＰＶ５０：Ｉ−７５５ − ＰＳＰ ６４ＨＰＶ５４：Ｉ−７５６ − ＰＧＥＭ ４ＨＰＶ５５Ａ：Ｉ−７５７ − ＰＧＥＭ ４ＨＰＶ５５Ｂ：Ｉ−７５８
託番号にて、１９８８年５月６日ＣＮＣＭに寄託され
た： − ＰＧＥＭ ４ＨＰＶ４９：Ｉ−７５４ − ＰＳＰ ６５ＨＰＶ５０：Ｉ−７５５ − ＰＳＰ ６４ＨＰＶ５４：Ｉ−７５６ − ＰＧＥＭ ４ＨＰＶ５５Ａ：Ｉ−７５７ − ＰＧＥＭ ４ＨＰＶ５５Ｂ：Ｉ−７５８
【００７２】本発明はまた、上述のＤＮＡから誘導され
た、より短いフラグメント、例えば１５〜２５ヌクレオ
チドのフラグメントにも関する。これらのさらに短いフ
ラグメントは、前記ハイブリダイゼーション方法の１変
形実施態様の使用のためのプライマーを構成すべく用い
ることができる。なおかかる変形実施態様では、米国特
許第４，６８３，２０２号及び第４，６８３，１９５号
ならびにヨーロッパ特許出願明細書第２００，３６２号
に記述されているようなＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反
応、英語で「Polymerase Chain Reaction」）と呼ばれる
技法が利用されている。
た、より短いフラグメント、例えば１５〜２５ヌクレオ
チドのフラグメントにも関する。これらのさらに短いフ
ラグメントは、前記ハイブリダイゼーション方法の１変
形実施態様の使用のためのプライマーを構成すべく用い
ることができる。なおかかる変形実施態様では、米国特
許第４，６８３，２０２号及び第４，６８３，１９５号
ならびにヨーロッパ特許出願明細書第２００，３６２号
に記述されているようなＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖反
応、英語で「Polymerase Chain Reaction」）と呼ばれる
技法が利用されている。
【図１】ＤＮＡ−ＨＰＶ４９の制限酵素開裂地図であ
る。
る。
【図２】ＤＮＡ−ＨＰＶ５０の制限酵素開裂地図であ
る。
る。
【図３】ＤＮＡ−ＨＰＶ５４の制限酵素開裂地図であ
る。
る。
【図４】ＤＮＡ−ＨＰＶ５５の制限酵素開裂地図であ
る。
る。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ 21/08 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｓ 33/569 33/569 Ｌ 33/574 33/574 Ｃ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｎ 7/00 Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｒ 1:92） (72)発明者 クレムスドルフ・ディナ フランス国、75013 パリ、リュー・エス キロール 35 (72)発明者 ポー−アルノード・ジェラルド フランス国、93100 モントルーユ、ブル バール・ア・ブリャンド 16
Claims (13)
- 【請求項１】 図１に示す制限酵素地図を特徴とする、
乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ４９）のＤＮＡ。 - 【請求項２】 図２に示す制限酵素地図を特徴とする、
乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ５０）のＤＮＡ。 - 【請求項３】 図３に示す制限酵素地図を特徴とする、
乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ５４）のＤＮＡ。 - 【請求項４】 請求項１〜３のいずれか１項に記載のＤ
ＮＡから誘導されたＤＮＡ又はそのＤＮＡのフラグメン
トを含み、かつ乳頭腫ウィルスのＤＮＡを特異的に検出
するハイブリダイゼーションプローブ。 - 【請求項５】 遺伝子Ｅ１、Ｅ２、Ｅ６、Ｅ７、Ｌ１、
Ｌ２及びＮＣからなる群から選択された、請求項１〜３
のいずれか１項に記載の乳頭腫ウィルスのＤＮＡの構造
遺伝子の発現生成物に相当するポリペプチド。 - 【請求項６】 該当する乳頭腫ウィルスのゲノムの配列
Ｌ２の発現生成物からなることを特徴とする、請求項５
に記載のポリペプチド。 - 【請求項７】 請求項５又は請求項６に記載のポリペプ
チドのうちの１つに対する抗体。 - 【請求項８】 ＨＰＶ４９、ＨＰＶ５０、ＨＰＶ５４型
の乳頭腫ウィルスによる感染を、試験対象である生物学
的試料についてインビトロで検出する方法において、請
求項４に記載の対応するプローブを、場合によっては、
好ましくはストリンジュントなハイブリダイゼーション
条件の下で、予めこのプローブに対しアクセス可能な状
態にしておいた、かかる試料の核酸と接触させること、
そして試料中に場合により存在している調査すべきウィ
ルスのＤＮＡと前記プローブとの間で形成されたハイブ
リッドを検出すること、を特徴とする方法。 - 【請求項９】 プローブがＨＰＶ４９から誘導されるこ
と、そしてインビトロ診断が皮ふゆうぜい（特に尋常性
ゆうぜい及び足底ゆうぜい）の検出及びいぼ状表皮異形
成の識別診断を目的としていること、を特徴とする、請
求項８に記載の方法。 - 【請求項１０】 プローブがＨＰＶ５０から誘導される
こと、そしてインビトロ診断が、いぼ状表皮異形成、上
皮内腫瘍及び皮ふガンの検出を目的としていること、を
特徴とする、請求項８に記載の方法。 - 【請求項１１】 プローブがＨＰＶ５４から誘導される
こと、そしてインビトロ診断が、生殖器形成及び子宮頸
ガンの検出を目的としていること、を特徴とする、請求
項８に記載の方法。 - 【請求項１２】 ＨＰＶ４９、ＨＰＶ５０又はＨＰＶ５
４型乳頭腫ウィルスによる感染のインビトロ診断に請求
項７に記載の抗体を用いる方法であって、その診断にお
いて、請求項７に記載の抗体をインビトロ診断に委ねら
れたヒトからとった生物学的試料と接触させること、及
び形成された抗原−抗体複合体を検出すること、さらに
かかる検出が、用いる抗体に応じて、以下の： −ＨＰＶ４９から誘導された場合、皮ふゆうぜい（特に
尋常性ゆうぜい及び足底ゆうぜい）のインビトロ診断及
びいぼ状表皮異形成の識別診断、 −ＨＰＶ５０から誘導された場合、いぼ状表皮異形成、
上皮内腫瘍及び皮ふガンの診断、 −ＨＰＶ５４から誘導された場合、生殖器腫瘍及び子宮
頸ガンのインビトロ診断、 を可能にすることを特徴とする方法。 - 【請求項１３】 用いる抗体が、該当する乳頭腫のゲノ
ムの配列Ｌ２の発現生成物に対するものであることを特
徴とする、請求項１２に記載の方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8806486A FR2631341B1 (fr) | 1988-05-13 | 1988-05-13 | Sondes a papillomavirus hpv49, hpv50, hpv54, hpv55 et produits genetiquement et immunologiquement lies a ce papillomavirus hpv49, hpv50, hpv54, hpv55 et procede de diagnostic in vitro d'infections a papillomavirus et d'immunisation in vivo contre ces papillomavirus |
| FR8806486 | 1988-06-21 | ||
| FR888808324A FR2632956B2 (fr) | 1988-05-13 | 1988-06-21 | Sondes a papillomavirus hpv49, hpv50, hpv54, hpv55; produits genetiquement et immunologiquement lies a ce papillomavirus hpv49, hpv50, hpv54, hpv55; procede de diagnostic in vitro d'infections a papillomavirus et d'immunisation in vivo contre ces papillomavirus |
| FR8808324 | 1988-06-21 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1118845A Division JPH0235086A (ja) | 1988-05-13 | 1989-05-15 | 乳頭腫ウイルス（ｈｐｖ４９、ｈｐｖ５０、ｈｐｖ５４、ｈｐｖ５５）ゾンデ、この乳頭腫ウィルス（ｈｐｖ４９、ｈｐｖ５０、ｈｐｖ５４、ｈｐｖ５５）に遺伝的及び免疫学的に結びつけられた生成物、そして、乳頭腫ウィルス感染の試験管内診断とこれら乳頭腫ウィルスに対する生体内免疫化の方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1128088A true JPH1128088A (ja) | 1999-02-02 |
| JP3207389B2 JP3207389B2 (ja) | 2001-09-10 |
Family
ID=26226663
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1118845A Pending JPH0235086A (ja) | 1988-05-13 | 1989-05-15 | 乳頭腫ウイルス（ｈｐｖ４９、ｈｐｖ５０、ｈｐｖ５４、ｈｐｖ５５）ゾンデ、この乳頭腫ウィルス（ｈｐｖ４９、ｈｐｖ５０、ｈｐｖ５４、ｈｐｖ５５）に遺伝的及び免疫学的に結びつけられた生成物、そして、乳頭腫ウィルス感染の試験管内診断とこれら乳頭腫ウィルスに対する生体内免疫化の方法 |
| JP11634998A Expired - Lifetime JP3207389B2 (ja) | 1988-05-13 | 1998-04-27 | 乳頭腫ウィルス及びその診断方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1118845A Pending JPH0235086A (ja) | 1988-05-13 | 1989-05-15 | 乳頭腫ウイルス（ｈｐｖ４９、ｈｐｖ５０、ｈｐｖ５４、ｈｐｖ５５）ゾンデ、この乳頭腫ウィルス（ｈｐｖ４９、ｈｐｖ５０、ｈｐｖ５４、ｈｐｖ５５）に遺伝的及び免疫学的に結びつけられた生成物、そして、乳頭腫ウィルス感染の試験管内診断とこれら乳頭腫ウィルスに対する生体内免疫化の方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US5342930A (ja) |
| EP (1) | EP0342128B1 (ja) |
| JP (2) | JPH0235086A (ja) |
| AT (1) | ATE121749T1 (ja) |
| DE (1) | DE68922336T2 (ja) |
| ES (1) | ES2072308T3 (ja) |
| FR (1) | FR2632956B2 (ja) |
| HK (1) | HK185095A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003528595A (ja) * | 2000-02-26 | 2003-09-30 | エーバーハルト−カルルス−ウニヴェルズィテート テュービンゲン ウニヴェルズィテートクリーニクム | ヒト乳頭腫ウイルスの検出 |
Families Citing this family (23)
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|---|---|---|---|---|
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| FR2661921B1 (fr) * | 1990-05-11 | 1992-08-07 | Pasteur Institut | Sonde a papillomavirus (hpv66), notamment pour le diagnostic in vitro d'infections a papillomavirus, pouvant s'accompagner de neoplasies genitales, et produits genetiquement et immunologiquement lies a ce papillomavirus. |
| GB9113809D0 (en) | 1991-06-26 | 1991-08-14 | Cancer Res Campaign Tech | Papillomavirus l2 protein |
| WO1994025627A1 (en) | 1993-04-30 | 1994-11-10 | Lorence Robert M | Methods of treating and detecting cancer using viruses |
| US6365787B1 (en) * | 1994-09-30 | 2002-04-02 | The Johns Hopkins University | Compounds for the suppression of HIV TAT transactivation |
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| JP2002541822A (ja) * | 1999-04-14 | 2002-12-10 | エム ユー エス シー ファンデーション フォー リサーチ ディベロップメント | 組織特異的および病原体特異的毒性物質ならびにリボザイム |
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| WO2004002416A2 (en) * | 2002-06-26 | 2004-01-08 | The Penn State Research Foundation | Methods and materials for treating human papillomavirus infections |
| AU2004275865B2 (en) | 2003-09-25 | 2008-09-25 | Third Wave Technologies, Inc. | Detection of HPV |
| EP1819835B1 (en) | 2004-12-08 | 2010-08-04 | Gen-Probe Incorporated | Detection of nucleic acids from multiple types of human papillomaviruses |
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