JPH05502792A - 生殖器腫瘍を伴い得るパピローマウイルス感染のインビトロ診断に主として使用されるパピローマウイルス(hpv63)プローブ、並びにこのパピローマウイルスに遺伝的且つ免疫学的に関連した産物 - Google Patents
生殖器腫瘍を伴い得るパピローマウイルス感染のインビトロ診断に主として使用されるパピローマウイルス(hpv63)プローブ、並びにこのパピローマウイルスに遺伝的且つ免疫学的に関連した産物Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
生殖2ii腫瘍を伴い得るパピローマウィルス感染のインビ)・口診断に主とし
て使用されるパピローマウィルス(HP VO2)プローブ、並びにこのパピロ
ーマウィルスに遺伝的且つ免疫学的に関連した産物
本発明は、パピローマウィルス(l(P V 63 )のDNA又はこのパピロ
ーマウィルスの変異株のDNAに係わり、より特定的にはこのパピローマウィル
スに由来するプローブに間する。本発明は、このパピローマウィルスに遺伝的且
つ免疫学的に関連した産物、並びにこれら種々の産物をパピローマウィルス感染
のin viLro3断に使用する方法、そしてこれら産物のうち特定のものを
同じパピローマウィルスもしくはパピローマウィルス変異株に対する予防接種に
使用する方法にも関する。
「パピローマウィルスに遺伝的且つ免疫学的に関連した産”PIJjというのは
、初期DNAに由来する様々な産物、即ち対応するRNA、あるいはこの初期D
NAを全部もしくは一部分含む組換えDNA、これら組換えDNAのコンビテン
1〜細胞宿主内での発現産物、及びこれらの産物に対する抗体等を意味する。従
って、初期DNAの種々の読み取り枠の全部又は一部の転写及び翻訳の結果上じ
るポリペプチドはこのような産物である。また、これらのポリペプチドによりi
n vivoで誘導される抗体もこの種の産物である。
「パピローマウィルス」という用語には、比較的軽い皮膚又は粘膜のゆうぜい(
いぼ)がら、上皮内腫瘍(nI!o−plasie)及び皮膚もしくは粘膜の癌
に変質し得る過形成()Iyperplasie)に至るまでの種々の形態のウ
ィルス感染を引き起こすとみなされてきたという共通点を有する多数のウィルス
が含まれる。パピローマウィルス感染としては、より特定的には、皮膚のゆうぜ
い(特に尋常性ゆうぜい及び足底ゆうぜい)、いぼ状表皮異形成、表皮又は粘膜
の偏平又は中間ゆうぜい、上皮内Bflf、、並びに皮膚癌、いぼ状表皮異形成
及び上皮内腫瘍からの癌、子宮頭部及び外部生殖器官の癌、コンジローム及び乳
頭腫が挙げられる。
幾つかの型のパピローマウィルスは既に開示されている。
例えば、仏国主特許84.18369/2,578,267及び追加特許85゜
07073/2.58”1,655、特許86.01425/2,593,82
8並びに1988年6月に出願された特許88.08324に記述されているも
のがそうである。これらの先行特許明細書は総て、ゆうぜい又は散在性病変(l
asions +5aculaires diss6min6es)がら単離し
た新しいパピローマウィルスの型又は亜をに関するものであり、そのうちの成る
ものは、そのパピローマウィルスに感染した患者の生殖器腫瘍、特に子宮頂部底
を早期に発生させる力が他のものよりら強い。
一般的に言えば、これらの先行特許には、パピローマウィルスが互いに著しく異
なるにもかかわらず、塩基対約7000〜8000個の大きさを有すると記述さ
れている。また、そのゲノムは、「ノンストリンジェント(non 5trir
+gent) Jもしくは「ノ〉ストリフト(non 5trict)」と称す
る条件、又は逆に「スI・リンジエンI−ハイブリダイゼーション」もしくは「
ストリクl−Jと称する条件で行ったハイブリダイゼーション試験て評価すると
、成る程度の相同を有し得る。
ノンストリフト又はノンストリンジェント条件でのハイブリダイゼーション試験
は、HEILM^NC,^らにより1980.J。
Virol、、36,395−407に記述されている条件、並びにCROIS
−SANTらにより1982.C,R,^cad、Sc、Paris、294,
581−586に記述されている条件で、2つのウィルス単隈体に由来するDN
Aを互いに接触させることによって行う(ヘテロ二重頌分子)。
これらのノンストリフト又はノンストリンジェント条件では、ハイブリダイゼー
ション試験を、特に培地及び温度に関して、下記の条件で行う。
ノンスト1 ト灸−T険−40℃ ・
5011IMのリン酸す1リウムMNH(pH=6.5>と、 5xSSC(1
xSSC= 0.15M NaCl、0.015Mクエン酸すl−リウム)と、
2025のポルムアミ1;と、200μH7mlの酵母転移RNAと、0.0:
、’5のDenharLi容液と2含む、容液中で42℃て゛ハイブリダイゼー
ションを行う。
ストリフト又はストリンジェント条件でのハイブリダイゼーション試験は、にR
EMSDORF、Dらの条件< (1982) 、JVirol仕、436−4
47及び1983.J、Virol、48:340−351)並びにDavis
RJ、らの条件(1,971,MeLhods Enzymol、、21,4
13−418)で、2つのウィルス単離体に由来するDNAを互いに接触させる
ことによって行う(ヘテロ二重鎮分子)。
これらのストリフI・又はスI・リンジェント条件では、ハイプリダイゼーショ
シI験を、特に培地及び温度に関して下記の条件で行う。
ストリクトTm 20°C。
50mMのリン酸ナトリウム緩衝液(pH=6.5)と、5xSSC(1,xx
ssc= O,1,5M NaCl、0.015Mクエン酸ナトリウム)と;5
0%のホルムアミドと、200μg/mlの酵母転移RNAと、0.02%のD
enhart溶液とを含む溶液中で42℃でハイブリダイゼーションを行う。
先行特許明細書には、ストリフト又はストリンジェント条件で50%以下の交差
ハイブリダイゼーション率を示すパピローマウィルスは異なる型に属するもので
あると記述されている。これらのストリクト又はストリンジェント条件で502
6以上のハイブリダイゼーション率(又はハイブリダイゼーション度)が観察さ
れるウィルスは、同一の型に属すると見なされる。これらのウィルスはこの同一
の型の中で異なる亜をを形成し得る。ちなみに、2つのHP Vは、スI・リク
トハイプリダイゼーション条件で、即ち飽和するまて液体培地でハイブリダイズ
し且つハイブリッドをヌクレアーゼS1で処理した後で、そのゲノムが50%以
下の交差ハイブリダイゼーションを示す場きには異なる型に属する。2つのHP
Vは、そのゲノムが不完全ではあるが50%以上の相同を有する場合には、同
一の型の亜をである。少数の制限酵素切断部位にしか差異が見られなければ変異
株である。
先行特許には、パピローマウィルスに由来するDNA、特にこれらパピローマウ
ィルスのゲノ11を全部又は一部含む遺伝子組換え体(D N A−HP Vと
称する)をハイブリダイゼーションプローブとして使用する方法も記述されてい
る。DNA−HPVの混合物又は「カクテルJをハイブリダイゼーションプロー
ブ温き物の調製に使用する方法も記述されている。これらのプローブ混合物は、
感染の種票、更には思考における所定のパピローマウィルスの発見に伴う危険度
のin vitro診断で、時には単独のグローブよりも効果的に使用し得る。
感染の種層としては、生殖器腫瘍、特に子宮癌を伴い得るものが挙げられる6例
えば、(本発明のD N A −HP Vを除外する場合には)後述のカクテル
を参照されたい。
ちなみに、前述のin vitro、4断検査で使用し得るプローブとしては、
特許88.08324に記載(7)70−ブHP V 54、)!PV55 (
a及びb)を用いて構成できるものが挙げられる。これら公知のプローブの制限
地図を添付図面の図1及び図2に再現した。
本発明は、新規に単離されたパピローマウィルスと、この新規のパピローマウィ
ルスから得ることができるゲノムDNAと、このゲノムDNAのフラグメン)・
と、このD N A−1,1P VもしくはDNA−1−IP、Vフラグメント
を用いて形成できる新規のハイブリダイゼーションプローブとに間する。
子宮よ部の生殖器上皮肉腫瘍の臨床的特徴を有する病巣から何回も繰り返し単離
された新規のHPV(以後HP VO2と称する)のDNAは、添付の図3に示
した制限地図を特徴とする。
この物理地図は、種々の制限エンドヌクレアーゼによる切断部位の位置を示して
いる。各地図の原点は非反復切断部位、この場きは部位BamH1からなる。こ
の原点に対する他の部位の距離はゲノムの長さの%で表す。
この新規のパピローマウィルスの発見、並びにこのパピローマウィルスに由来し
得るDNAの生産は、特にパピローマウィルスに起因するか又はパピローマウィ
ルスの作用で発生し得る生殖器病変の元となる感染をより精密に詮所することを
可能にすると共に、これらの感染がもつと恐ろしい病気に変化する危険の度合い
をより確実に判断することを可能にするものである。
本発明は、これらのパピローマウィルスの変異株であって、それぞれ同一の亜型
に属し、従ってストリンジエント条件でHP V 63のDNAとハイブリダイ
ズすることができる総ての変異株にも関する。
本発明はまた、先行特許明細書に既に開示されているプローブ「カクテルJを本
願発明のパピローマウィルスに由来するプローブで補完したものにも係わり、従
って更に改善された詮所キットにも関する。
1(P V 63のゲノムから形成したハイブリダイゼーシヨ〉プローブは特に
、後で述べる先行特許明細書に記載の条件で、特に生殖器腫瘍及び子宮頚部癌の
ような危険を伴うパピローマウィルス型をin viLro於断及び詮所は検出
する場合に有用である。
これらのハイブリダイゼーションプローブは、同じタイプの症状の6断用「カク
テル」に含ませると有利である。
これらの詮所用混&物のII P V 54.55a及び55b以外の構成成分
の制限地図が載っている先行特許明細書も参考文献として挙げられる。従って、
これらの先行特許明細書は、これらの「カクテル」の組成に含まれる池のDNA
−l−I P Vの同定に関して本明細雷の一部分をなすとみなされる。
本発明は、各HPV63 DNAのフラグメント又はDNAのフラグメント、特
に同等の長さを有し、主にストリク)−条件で前述のフラグメントとハイブリダ
イズできるフラグメントにも関する。本発明はまた、前述のDNA−1(P V
を全部又は一部分含む組換えDNA、より特定的には、遺伝子El、E2、E4
、E6−E7、Ll、L2及び遺伝子開領域NCに対応するフラグメント、又は
前記各D N A−HP Vの遺伝子開領域に対応する配列を含むフラグメント
をそれぞれ含む組換えDNAにも関する。本発明は更に、これらのD N A
−HP Vがら形成できるプローブか、又はこのD N A −HP Vに含ま
れているフラグメントであって、ストリフ1〜条件で前述のものとハイブリダイ
ズでき且つノンストリフI・条件で公知の型HPV16、If P V 18及
びHP V 33に対応するDNA−HPVとハイブリダイズできる任意のフラ
グメントがら形成できるプローブと、これらのプローブが又はこれらのプローブ
を含む混合物を用いるin wiLro診断方法とにも関する。
−三 に ゛ J のI−IPV 7 HPV6 B の −クローニング び
HP V 16.18及び33に特異的なプローブの混合物を用いて、ノンスト
リフ1〜条件(Tm−40?5)でのハイブリダイゼーションにより軽い異形成
(グレードエの上皮肉腫1)から抽出したDNA中に新規のI−i P V型を
検出した。穫々の制限ヌクレアーゼに対するこのDNAの感受性を調べたところ
、酵素B a m HIがウィルス配列を一回切断し、その結果的8Kb(1−
IPVの直線化ゲノムの大きさ)の分子が得られた。このDNA:Ig製物をB
amHIで消化した隆、8KbのDNA分子を非反復部位BamT(Iてプラス
ミドpUc18中に挿入し、大腸菌に12 (株C600)にクローニングした
。怒染細菌培養物のレプリカを、ノンストリフト条件で、型16.18及び33
に対応するプローブの混き物とハイブリダイズさせることにより組換えプラスミ
ドを検出した。総てのウィルス配列を含む組換えプラスミドが複数単離された。
これらの組換えプラスミドを挿入酵素BamHIで切断すると、ノンストリフト
条件でプローブ16.18及び33とハイブリダイズする8Kbのフラグメント
が得られる。これらの組換えプラスミドと元の病変のDNAとを酵素Pstlと
BamHIとの温き物で切断すると、3つのフラグメントが得られる。これらの
フラグメントの分子量の合計はパピローマウィルスのゲノムの大きさに等しい、
このウィルスDNAの制限地図を、1つの酵素に対するこのDNAの恐受性の検
査に基づいてft成したところ、8つの切断部位が明らかになった(図1)。
二のようにして1ヤ成した地図は、現在公知のl(P Vゲノムの地図とは異な
る。新規のHP VのDNAと池のHP VのDNAとの閏の配列相開度を、極
めてスl−リクトな条件(Tm10℃)で転移−ハイブリダイゼーション実験を
行うことによって分析した。この条件では、既述のHPVのDNAとの交差ハイ
ブリダイゼーシヨ〉は全く検出されなかった。このような特徴を有する新規のH
F’ Vは従って新規のHP V型を構成する。これをHP V 63と称する
。
種々の条件でHPV63のDNAとHP V 16のDNAとの間で形成された
ベテロ二重鎖分子を電子ぽ微鏡で分析した結果、2つのゲノムの物理地図を並べ
ることができ、HP〜763のDNAに担持された種々の遺伝子の理論的位置が
決定された。
このゲノノ、の地図上の、HP V G 3の主要遺伝子及び調節領域の推定位
置6
末端の座標
5′ 3゜
E6−E7.、、、、、、、、.71 81L2.、、、、、、、、、、、.2
2,5 41.2L1.、、、、、、、、、、、、.40 60.7調節領域、
、、、、、、、、、、60.7 71従って本発明は、−m的には、前記D N
A−HP V又はこのD N A −11P Vのフラグメントを含む総ての
組換えDNAにも係わり、特にこれらの組換えDNAで形成したハイブリダイゼ
ーショングローブであって、本発明のパピローマウィルス又はこのパピローマウ
ィルスの変異株もしくは亜型による感染の検出に特に適したプローブにも関する
。これらのプローブは、特に別のマーカーと直接的又は間接的に結きさせるため
に、それ白木3凛識するか、又は特定のヌクレオチドのしベルで修飾することが
できる。勿論、これらのプローブで、パピローマウィルスのD N Aに対応す
るヌクしオチド配列とは無関係であって通常はクローニシグベクターに由来する
部分は、対応するパピローマウィルス又はその変異株のDNAの含量について検
査している試料に別の核酸が含まれていた場3に、ストリンジェント条件でその
核酸とハイブリダイズする危険がないようなものである。
通常はヒト患者に由来する検査すべき生物学的試料を、生殖器腫瘍及び/又は子
宮頚部癌を誘発し得るが又は誘発したパピローマウィルスによる感染のin v
iLro3断のために検査する本発明の方法は、前述のプローブと、必要であれ
ば該プローブにアクセスできるように予め処理した前記試料の核酸とを好ましく
はスI・リンジェントハイプリダイゼーション条件で接触させ、試料中に所期の
ウィルスDNAが存在していればそのDNAと前記プローブとの間に形成される
ことになるバイブリドを検出することを特徴とする。
精製HP V 63のDNAがら調製した放射性プローブを使用すると、このウ
ィルスの病原体としての能力を測定することができた。現在同定されているもの
とは異なる1−I P Vゲノムを含む生殖器病巣から抽出した94のDNA調
製物におけるHPV63のDNAの存在を調べたところ、6つの子宮頂部上皮肉
腫瘍にI−I P V 63のDNAが存在していた(6.4%)。従ってHP
V63は、li癌影形成潜在能力有する生殖器向性T(P V型である。生殖器
腫瘍、特に子宮頚部癌を発生させる危険のあるHPV型の詮所又は検出のために
は、分子プローブの調製に使用される総てのHPV DNA混合物にこのHPV
63を含まぜることが極めて望ましい。
そこで本発明の一変形実施BfRては、生殖器腫瘍、子宮頂部症、コンジローム
及び乳頭腫をin viLroi断するために、プローブを他のパピローマウィ
ルス、特にHP V 16.18.33.39.54、あるいはIIPV6.1
1.42.54に由来するプローブと組ごわせ、より特定的には一群の詮所がコ
ンジローム及び乳頭腫にも係わる場合には、HPV6.11.42.55に由来
するプローブと組合わせる。本発明の各プローブ又は該プローブを含む混合物は
、特に下記のように使用し得る。但し、ここで説明する診断検査は、本発明の1
0−ブ又はプローブ混合物の使用条件分限定するものではない。
この実施例は、例えば生検で、病巣の掻爬によって得た細胞、又はCarnoy
混合物(エタノール、クロロホルム、酢iR6:3:l)によって固定した、パ
ラフィン中に含まれている生検切片中のHP Vの同定に係わる。この検査では
、公知の原理に基づく方法でDNAを予め採取試料から抽出しておく必要がある
。そして、このDNAの分析を、本発明のHPVから、又はこれを含むDNAも
しくはHPV混合物から調製した放射性プローブ(P又はff5Sで標語)を用
いて、ストリフト条件又はそれほどストリフトではない条件で実施される分子ハ
イブリダイゼーション試験で行う。
使用できるハイブリダイゼーション方法は幾つかある。
例えば、プロットハイブリダイゼーション(hybridaLionsur L
ache)と称する方法を使用してもよい、この方法は、DNAの変性後、アリ
コート量のDNAをメンプラン(二I・ロセルロース又は°’f;enescr
eenp l us” )上に配置し、通常の条件下で各メンプランをプローブ
混合物とハイブリダイズさせ、これらのメンプランをレントゲン写真フィルムと
接触させて露光することにより、放射性ハイブリッドを検出することからなる。
また、レフ゛リカハイブリダイゼーション(hybridation sur
r6plique)という方法も使用し得る。
この方法は、DNAを料理酵素で処理することによって生じたDNAフラグメン
トをアガロースゲル電気泳動で分離し、これらのフラグメントをアルカリ変性し
た後でメンプランにトロセルロース、“Cenescreenplus”)上に
移動させ、通常の条件でプローブの適当な混合物とハイブリダイズさせることか
らなる。放射性ハイブリッドの形成は、メンプランをレントゲン写真フィルムと
接触させて露光すれば検出される。
放射性プローブは、ニックトランスレージコン法で標識したH P VのDNA
か、又は例えばSP6型のベクター中に挿入したウィルスDNAの転写によって
形成したRNAからなる。放射性プローブの使用には感度が高いという利点があ
るが、だからといって、例えばそれ自体が漂工されているか又はそれ自体が酵素
マーカー、蛍光マーカー等を有する抗体によって認諾される抗体により認識され
得るビオチニル化プローブのような非放射生プローブを使用できないわけではな
い。
本発明は、前述のタイプの組換えD N Aで形質転換したコンビテンI・細胞
培養物、特にパピローマウィルスのDNAに対応するヌクレオチド配列が前記細
胞培養物中て該ヌクレオチド配列の転写及び調節エレメントの制御下におかれる
ような組換えDNAで形質転換したコンピテント細胞培養物にも関する。
従って、本発明は対応するコ〉ビテンI−細胞宿主中でのこれら組換えDNAの
発現産物と、これらの発現産物に対して産生され得る対応する抗体とにも関する
。
そのため本発明は、特にDNA IIP■63の遺伝子E1、E2、E4、E6
、E7、LL、L2のそれぞれの発現の結果上じたポリペプチドに関する。
従って、これらのポリペプチドを産生するための本発明の方法は、これらのタン
パク質の1つに対応するヌクレオチド配列がこの細胞宿主中で発現され得るよう
に、HPV63由来の対応するヌクレオチド配列を含む組換えDNAでコンピテ
ント細胞培養物を形質転換し、コンピテント細胞宿主によって合成された産物か
らこれらのポリペプチドを回収し、精製する(例えば、細胞培養物又は発現産物
が発生した培地から予め抽出した発現産物を、このようなポリペプチドに対して
予め形成した抗体と接触させる)ことからなる。
本発明のパピローマウィルスの各ゲノムの配列L2の発現産物は、より特定的に
は問題のジャンルの調製物が予め固定さ!している場合には、HPV63里パピ
ローマウィルス又はその変異株に感染した生物学的試料中の遺伝子L2の発現産
物を認識し得る抗体のin vivo産生にそれ自体を使用できるという点で特
別な利点を有する。
本発明は、HP V 63にそれぞれ由来する前記ポリペプチドを含むハイブリ
ッドポリペプチド、例えばタンパク質L2を、このタンパク質L2の免疫JW持
性を本質的に変えることのない別のポリペプチド配列に融合させたものにも関す
る。これら別のポリペプチドフラグメントは特に、これらのハイブリッドポリペ
プチドの産生に使用されている方法、例えば遺伝子工学の結果として存在し得る
0例えば、これらのハイブリッドポリペプチドはトガラフI・シダーゼに由来す
る配列を含む、この種の産物は特に、ラクトースオペロンの全部又は一部によっ
て修飾されており且つ本発明の問題のパピローマウィルスに由来する遺伝子L2
由来のヌクレオチド配列をラクトースオペロンのプロモーター(又は他の任意の
適当なプロモーター、例えばファージ^)の下流に挿入した状態で含む適当なベ
クター(ファージ又はプラスミド)で大ysmを形質転換することによって得る
ことができる。有利には、ラクトースオペロンのトガラフ)・シダーゼの遺伝子
の少なくとも一部分を含む前述タイプのプラスミド又はファージを使用する。
本発明のポリペプチドはまた、精製した状態では、特に二ノtらのポリペプチド
で免疫した動物の血清から、これらのポリペプチドに対応する抗体を精製する方
法で使用できる。特に、これらのポリペプチドはアフィニティカラムに固定し得
る。従って、これらの抗体の精製操fヤは、前記ポリペプチドを担持しているア
フィニティカラムにこれらの抗体を含む血清を接触させて通すことからなる。こ
れらのカラムに選択的に固定した抗体は、適当なイオン強度を有する適当な榎W
i液、例えば酢酸アンモニウムのような塩の水溶液を用いて抗原−抗体後自体を
解離することにより回収し得る。酸性化した溶液を使用してもよい。
本発明は、前記ポリペプチドに対する抗体、特にHP VO2の遺伝子E6、E
7又は好ましくはL2の発現産物に対する抗体の産生方法にも関する。この方法
は、適当な生きている宿主を前記ポリペプチドで免疫し、免疫した宿主の血清か
ら形成された抗体を、特にこの血清を精製状官の対応するポリペプチドと接触さ
せ且つ形成された抗原−杭木複合体から前記抗体を回収することによって回収す
る操作を含む。
本発明は更に、本発明の抗体(又はこれらの抗体と他のパピローマウィルスに由
来する抗体との組合わせがちなる抗体群)を111用した組成物、特に前述のD
N A 7 HP Vの組成物又は「カクテル」に由来する後述の抗体(又は
対応する抗体群)をよむ組成物にも関する。
本発明は特に、予め精製した前述の抗体又は抗体混合物を適当な医薬用ビヒクル
とMi&わせたものに関する。この組成物は、患者に由来する組織又は細胞試料
のin viLro於断検査詮所果所与の症状が臨床的に詮所された場きに、そ
の症状の治療に使用できる。この組成物はぐ特に血清形態で)好ましくは非経口
的に投与し得る。その結果この血清は、I(P V 63型パピローマウイルス
によって発生した感染の退行を誘起し得る。
これらの抗体はより特定的には、感染した個体に由来する組織切片が、同じ盟の
パピローマウィルスの特定の構造遺伝子、特にL2の発現産物をも含み得る限り
、本発明のパピローマウィルス又はその変異株の1つに関する感染診断検査に使
用し得る。
そこで本発明は、特に一般的腫瘍及び子宮頚部癌を1nviLro診断するため
に、問題の個体に発生した病変に由来する組織切片を抗原−抗体複合体が発生す
るような条件で接触させ、この抗原−抗体複合体を検出する方法も提供する。検
出は有利には、例えば培地又は前述のCARNOY混合物(L、l、l5ON著
”llistochimie eL cytochi+nie animale
s″にも記述されている)を用いて解に条件で予め固定した調製物に対して行う
。
抗し2抗体が固定された場合には、第1の抗体に対して形成した別の抗体によっ
てこの抗し2抗体を認識することがてきる。これら別の抗体には、好ましくは非
放射性の適当なマーカーを付ける。これらのマーカーは例えば酵素性又は蛍光性
のものがよい。
このようにして選択された抗体は、これらの抗体に対応する前述のハイブリダイ
ゼーションプローブと同様に、対応する病気のタイプをin vitro診断す
るのに使用できる。
本発明は、1種預又は好ましくは複数種の別のタンパク質L2を、選択した投与
形態、特に非経口投与に適した医薬的に許容し得るビヒクルと組合わせて含む、
対応する予防接種組成物にも間する。この種の組成物は、HP\−I3又は対応
する型のパピローマウィルスによる感染の危険が高い個体を防護するのに使用し
得る。
DNA−HPV63を含む株は、1989年12月210に寄託番号l−918
でCNCMに寄託した。寄託した株は、HP V 63のDNAを含む組換えプ
ラスミドBam1−IIを含む大腸菌に12株NM522の培it物からなる。
尚、HP V 54.55A及び55Bゝは1988年5月6日に下記の番号で
(下記の形態で)CNCMに寄託されている・
−PSP64HPV54:丁−756、−PGM 4 HPV55A :T−7
57、−PGM 4 HPV55B :l−758゜要約
本発明は、1989年12月21日に寄託番号ニー918でCNCMに寄託した
DNA−1(PV63に由来するパピローマウィルス10−ブに関する。このプ
ローブは、ヒ1−生物学的試料中に含まれているDNAとのハイブリダイゼーシ
ョンによって、生殖器腫瘍又は子宮頚部癌を1nvitro検出するのに使用し
得る。
国際調査報告
国際調査報告
Th1l−一−―−雷−1−−〜鮨町t・−m−−(7)amcsed−m−Q
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ス国、
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αa30・ソー、リュ・ドユ・ドクトウール・ル−・4975654・パリ・セ
デクス・13、リュ・ドウ・トルビア
Claims (14)
- 1.図3に示した制限地図を特徴とするDNAもしくは該DNAのフラグメント か、又はストリクト条件で前記DNAもしくはフラグメントとハイブリダイズす る対応するDNAもしくはDNAフラグメントで主に構成されていることを特徴 とするパピローマウイルスDNA。
- 2.1989年12月21日にNo.I−918でCNCMに寄託されたものの 中に含まれているDNAもしくはそのフラグメントに対応するか、又はストリク ト条件で前記DNAもしくはフラグメントとハイブリダイズする対応するDNA もしくはDNAフラグメントからなることを特徴とする請求項1に記載のパピロ ーマウイルスDNA。
- 3.ストリクト条件でHPV63とハイブリダイズし且つノンストリクト条件で HPV16、HPV18又はHPV33とハイブリダイズするフラグメントから なることを特徴とする請求項1又は2に記載のDNA。
- 4.前記フラグメントが、HPV63の遺伝子E1、E2、E4、E6−E7、 L1、L2の1つ又は遺伝子間領域NCの全部もしくは一部分に対応することを 特徴とする請求項3に記載のDNA。
- 5.請求項1から4のいずれか一項に記載のDNAに由来するDNAで構成され たハイブリダイゼーションプローブ。
- 6.請求項1から4のいずれか一項に記載のいずれか1つのパピローマウイルス DNAのいずれか1つの構造遺伝子の発現産物に対応するポリペプチド。
- 7.より特定的には、パピローマウイルスHPV63のゲノムの配列L2の発現 産物からなることを特徴とする請求項6に記載のポリペプチド。
- 8.請求項6又は7に記載のポリペプチドに対する抗体。
- 9.生物学的試料をHPV型パピローマウイルスによる感染のin vitro 検出検査にかける方法であって、請求項5に記載のような対応するプローブを、 必要に応じて該プローブにアクセスできるように予め処理した試料の核酸と、好 ましくはストリンジェントハイブリダイゼーション条件で接触させ、試料中に所 期のウイルスDNAが存在していればそのDNAと前記プローブとの間で形成さ れることになるハイブリドを検出することからなることを特徴とする方法。
- 10.in vitro診断が、生殖器腫瘍及び子宮頚部癌を検出するためのも のであることを特徴とする請求項9に記載の方法。
- 11.生殖器腫瘍及び子宮頚部癌を誘発し得る型のパピローマウイルスによる感 染をin vitro診断するための請求項8に記載の抗体の使用方法あって、 請求項8に記載のような抗体をin vitro診断すべき個体に由来する生物 学的試料と接触させ、形成された抗原−抗体複合体を検出することからなる方法 。
- 12.請求項1から4のいずれか一項に記載のDNA又は請求項5に記載のプロ ーブを別のパピローマウイルス、特に−HPV16、18、33、39、54、 −HPV6、11、42、54、 −HPV6、11、42、55、 −HPV6、11、42、54及び55の複数の対応するDNAと組合わせたも のを含むパピローマウイルスDNA混合物。
- 13.請求項12に記載のHPV DNAの構造遺伝子の発現産物に対応するポ リペプチドの混合物。
- 14.請求項13に記載のポリペプチドに対する抗体の混合物。
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