JPH11240898A - ポリペプチド - Google Patents

ポリペプチド

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JPH11240898A
JPH11240898A JP10078549A JP7854998A JPH11240898A JP H11240898 A JPH11240898 A JP H11240898A JP 10078549 A JP10078549 A JP 10078549A JP 7854998 A JP7854998 A JP 7854998A JP H11240898 A JPH11240898 A JP H11240898A
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Takanori Okura
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 インターロイキン−１８受容体としてのポ
リペプチド、その用途及びＤＮＡを提供することを課題
とする。 【解決手段】遺伝子の発現によって得ることができる、
インターロイキン−１８受容体としてのポリペプチド、
有効成分として、斯かるポリペプチドを含んでなるイン
ターロイキン−１８受容体感受性疾患剤、斯かるポリペ
プチドをコードするＤＮＡ、そして、ポリペプチドをコ
ードするＤＮＡを発現させる工程と、生成したポリペプ
チドを採取する工程を含んでなるポリペプチドの製造方
法、斯かるポリペプチドを有効成分とするインターロイ
キン−１８の中和剤、さらには、インターロイキン−１
８に当該ポリペプチドを作用させることを特徴とするイ
ンターロイキン−１８の中和方法により解決する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明はサイトカインを認
識する新規な受容体蛋白質、とりわけ、インターロイキ
ン−１８（以下、「ＩＬ−１８」と略記する。）を認識
する新規なポリペプチドに関する。
【０００２】
【従来の技術】ＩＬ−１８は、免疫系における情報伝達
物質であるサイトカインの一種である。ＩＬ−１８は、
特開平８−２７１８９号公報、特開平８−１９３０９８
号公報及びハルキ・オカムラら『ネイチャー』、第３７
８巻、第６，５５２号、８８乃至９１頁（１９９５年）
に見られるように、発見当初、インターフェロン−γ誘
導因子として記載されていたが、その後、シンペイ・ウ
シオら『ザ・ジャーナル・オブ・イムノロジー』、第１
５６巻、４，２７４乃至４，２７９頁（１９９６年）に
おける提案にしたがって、「ＩＬ−１８」と呼称される
ようになった。成熟型のＩＬ−１８は１５７個のアミノ
酸からなり、免疫担当細胞において生理活性物質として
有用なインターフェロン−γ（以下、「ＩＦＮ−γ」と
略記する。）の産生を誘導する性質と、キラー細胞の細
胞障害性を増強したり、キラー細胞の生成を誘導する性
質を兼備している。これらの性質故に、ＩＬ−１８は抗
ウイルス剤、抗菌剤、抗腫瘍剤、抗免疫疾患剤などの医
薬品として広範な用途が期待され、鋭意研究が進められ
ている。
【０００３】前述のとおり、ＩＬ−１８にかぎらず、サ
イトカインは、本来、免疫系における情報伝達を担う物
質として産生され、分泌される。したがって、サイトカ
インが哺乳類の体内で過剰に産生されたり、外部から投
与されたりすると、免疫系のバランスに片寄りを生じる
可能性がある。哺乳類の細胞の表面には、通常、受容体
と呼ばれるサイトカインを認識する部位があり、分泌さ
れたサイトカインは、この受容体に結合することによっ
て、初めて所期の情報を細胞に伝達することができる。
正常な免疫系においては、サイトカインとサイトカイン
を認識する受容体がある一定のバランスを保っていると
考えられる。したがって、斯界においては、ＩＬ−１８
を医薬品として実用化するためにも、ＩＬ−１８そのも
のの生理作用の解明に加えて、ＩＬ−１８受容体（以
下、「ＩＬ−１８Ｒ」と略記する。）の性質・性状が一
刻も早く解明され、量産されることが期待されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】斯かる状況に鑑み、こ
の発明の第一の課題は、量産容易なＩＬ−１８Ｒとして
のポリペプチドを提供することにある。
【０００５】さらに、この発明の第二の課題は、斯かる
ポリペプチドの医薬としての用途を提供することにあ
る。
【０００６】加えて、この発明の第三の課題は、斯かる
ポリペプチドをコードするＤＮＡを提供することにあ
る。
【０００７】さらに加えて、この発明の第四の課題は、
斯かるポリペプチドの製造方法を提供することにある。
【０００８】さらに加えて、この発明の第五の課題は、
斯かるポリペプチドを用いるＩＬ−１８の中和剤を提供
することにある。
【０００９】さらに加えて、この発明の第六の課題は、
斯かるポリペプチドによるＩＬ−１８の中和方法を提供
することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明者らがこれらの課
題を解決すべく鋭意研究したところ、ホジキン病患者に
由来するリンパ芽球様細胞の一種であるＬ４２８細胞中
にＩＬ−１８を認識する物質が存在していることを突き
止めた。本発明者がこの物質を分離し、性質・性状を調
べたところ、その本質は蛋白質であり、分離された状態
においてもＩＬ−１８をよく認識し、結合することが判
明した。斯くして存在が確認されたＩＬ−１８Ｒは、ヒ
トを含む哺乳類において、免疫系を活性化するＩＬ−１
８を認識し、その生理活性を中和するので、自己免疫疾
患を初めとする過剰な免疫反応に起因する種々の疾患の
治療・予防に効果を発揮することが判明した。さらに、
本発明者がこのＩＬ−１８Ｒの部分アミノ酸配列を手掛
りにＬ４２８細胞を鋭意検索したところ、ＩＬ−１８Ｒ
をコードするＤＮＡを取得するに到った。そして、この
ＤＮＡを人為的に発現させて得られるポリペプチドがＩ
Ｌ−１８をよく認識し、Ｌ４２８細胞から分離されたＩ
Ｌ−１８Ｒと同様の生理活性を有することを確認すると
ともに、そのポリペプチドが斯かるＤＮＡを用いる組換
えＤＮＡ技術により、所望量を製造し得るものであるこ
とを確認してこの発明を完成した。
【００１１】すなわち、この発明は前記第一の課題を、
遺伝子の発現によって得ることができる、ＩＬ−１８Ｒ
としてのポリペプチドにより解決するものである。
【００１２】この発明は前記第二の課題を、有効成分と
して、斯かるポリペプチドを含んでなるＩＬ−１８Ｒ感
受性疾患剤により解決するものである。
【００１３】この発明は前記第三の課題を、斯かるポリ
ペプチドをコードするＤＮＡにより解決するものであ
る。
【００１４】この発明は前記第四の課題を、斯かるポリ
ペプチドをコードするＤＮＡを発現させる工程と、生成
したポリペプチドを採取する工程を含んでなるポリペプ
チドの製造方法により解決するものである。
【００１５】この発明は前記第五の課題を、斯かるポリ
ペプチドを有効成分とするＩＬ−１８の中和剤により解
決するものである。
【００１６】この発明は前記第六の課題を、ＩＬ−１８
に斯かるポリペプチドを作用させることを特徴とするＩ
Ｌ−１８の中和方法により解決するものである。なお、
この発明で用いるＬ４２８細胞は、平成８年１２月２４
日以降、茨城県つくば市東１丁目１番３号にある通商産
業省、工業技術院、生命工学工業技術研究所に受託番号
『ＦＥＲＭ ＢＰ−５７７７』で寄託されている。
【００１７】
【発明の実施の形態】この発明は、遺伝子の発現によっ
て得ることができる、ＩＬ−１８Ｒとしてのポリペプチ
ドに関するものである。この発明によるヒト由来のポリ
ペプチドは、通常、部分アミノ酸配列として、配列表に
おける配列番号１２乃至１９に示すアミノ酸配列の１又
は複数を含有し、全体としては、例えば、配列表におけ
る配列番号２０に示すアミノ酸配列の一部又は全部を含
有する。また、この発明によるマウス由来のポリペプチ
ドは、通常、配列表における配列番号２１に示すアミノ
酸配列の一部又は全部を含有する。したがって、この発
明でいうポリペプチドとは、配列表における配列番号２
０又は２１に示すアミノ酸配列をそっくりそのまま含有
するポリペプチドに加えて、例えば、それらのアミノ酸
配列に１又は複数のアミノ酸が付加したポリペプチド、
とりわけ、Ｃ末端及び／又はＮ末端に１又は複数のアミ
ノ酸が付加したアミノ酸配列を含有するポリペプチド、
配列番号２０及び２１に示すアミノ酸配列におけるアミ
ノ酸の１又は複数が欠失したアミノ酸配列を含有するポ
リペプチド、とりわけ、配列番号２２乃至２５に示すア
ミノ酸配列を含有する可溶性ポリペプチド、さらには、
上述のごときポリペプチドに糖鎖が結合したポリペプチ
ドであっても、それらが遺伝子の発現によって得ること
ができ且つＩＬ−１８Ｒとしての機能を有するかぎり、
すべて包含するものとする。ちなみに、ＩＬ−１８は、
すでに、ヒト及びマウスに由来するものが知られてお
り、これらはいずれも１５７個のアミノ酸を含んでな
り、それぞれ、配列表における配列番号２６に示すアミ
ノ酸配列（ただし、符合「Ｘａａ」を付して示したアミ
ノ酸は、イソロイシン又はトレオニンを表すものとす
る。）、及び、配列表における配列番号２７に示すアミ
ノ酸配列（ただし、符合「Ｘａａ」を付して示したアミ
ノ酸は、メチオニン又はトレオニンを表すものとす
る。）を有する。
【００１８】この発明のポリペプチドは、通常、組換え
ＤＮＡ技術を応用して製造される。すなわち、当該ポリ
ペプチドをコードするＤＮＡを人為的に発現させ、生成
したポリペプチドを採取する。この発明は、当該ポリペ
プチドをコードするＤＮＡに加えて、組換えＤＮＡ技術
を用いる当該ポリペプチドの製造方法を提供するもので
もあり、この発明の製造方法によるときには、所望量の
当該ポリペプチドが容易に得られる。
【００１９】この発明の製造方法で用いるＤＮＡとして
は、それが当該ポリペプチドをコードするかぎり、天然
の給源から得られたＤＮＡであっても、これを人為的に
改変したり、化学合成したものであってもよい。すなわ
ち、斯界においては、一般に、あるポリペプチドをコー
ドするＤＮＡを人為的に発現させるに際し、そのＤＮＡ
の発現効率を改善したり、あるいは、ポリペプチドその
ものの生理活性や物性を改善する目的で、ＤＮＡにおけ
る塩基の１又は複数を他の塩基で置換したり、ＤＮＡに
適宜の塩基配列を連結することがある。この発明のＤＮ
Ａにおいても斯かる変更は当然可能であり、具体的に
は、最終的に得られるポリペプチドが所期の生理活性を
失わない範囲で、前述のごときこの発明のポリペプチド
をコードするＤＮＡにおける５´末端及び／又は３´末
端に適宜の制限酵素による認識部位、開始コドン、終止
コドン、プロモーター、エンハンサーなどの塩基配列を
連結し得ることは言うまでもない。したがって、この発
明でいうＤＮＡとは、前述のごときポリペプチドをコー
ドするＤＮＡ、そのＤＮＡの塩基配列に相補的な塩基配
列を有するＤＮＡ、さらには、それらのＤＮＡがコード
するアミノ酸配列を変更することなく、塩基の１又は複
数を他の塩基で置換したＤＮＡのすべてを包含すること
となる。
【００２０】斯かるＤＮＡを天然の給源から得るには、
例えば、配列表における配列番号１２乃至２５に示すア
ミノ酸配列に基づき調製したオリゴヌクレオチドをプロ
ーブにして、上皮細胞、内皮細胞、間質細胞、軟骨細
胞、単球、顆粒球、リンパ球、神経細胞及びそれらを培
養株化して得られるヒト及びマウスを含む哺乳類由来の
細胞を検索すればよい。細胞の検索に当たり、検索対象
の細胞を培養する培養培地に、斯かる細胞においてＩＬ
−１８Ｒ遺伝子の発現を誘発し得る物質、とりわけ、Ｉ
Ｌ−１２やＩＬ−１８を細胞１×１０6 当たり約０．０
１ｐｇ乃至１μｇ、望ましくは、約１ｐｇ乃至１００ｎ
ｇ含有せしめると、目的とするＤＮＡの取得を容易にす
ることができる。望ましい細胞の具体例としては、リン
パ球を始めとする造血系細胞などを培養株化して得られ
る、例えば、ジュン・ミノワダ『キャンサー・レビュ
ー』、第１０巻、１乃至１８頁（１９８８年）に記載さ
れているＪＭ細胞、ＨＤＬＭ−２細胞、ＭＯＬＴ−１６
細胞及びＰＥＥＲ細胞、さらには、Ｌ４２８細胞（ＦＥ
ＲＭ ＢＰ−５７７７）、ＫＧ−１細胞（ＡＴＣＣ Ｃ
ＣＬ−２４６）、Ｕ−９３７細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−
１５９３．２）などのリンパ芽球様細胞が挙げられる。
斯くして得られるＤＮＡのうち、ヒト及びマウス由来の
ＤＮＡは、通常、それぞれ配列表における配列番号１及
び２に示す塩基配列の一部又は全部を含有する。例え
ば、ホジキン病患者由来のリンパ芽球様細胞の一種であ
るＬ４２８細胞（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７７７）から得ら
れるＤＮＡは、配列表における配列番号７に示したとお
り、配列番号２０に示すアミノ酸配列をコードする配列
番号１に示す塩基配列と、配列番号１に示す塩基配列の
５´末端に連結されたシグナルペプチドをコードする塩
基配列からなる。また、配列表における配列番号２２乃
至２５に示すアミノ酸配列の可溶性ポリペプチドは、そ
れぞれ、配列番号３乃至６に示す塩基配列によってコー
ドされ、配列番号８乃至１１の塩基配列に示したよう
に、通常、その５´末端にシグナルペプチドをコードす
る塩基配列を連結した形態で用いられる。斯かるＤＮＡ
は通常の化学合成によっても得られ、いずれにしても、
一旦ＤＮＡが入手されれば、これにＰＣＲ法を適用する
ことによって所望のレベルに容易に増幅することができ
る。なお、配列表における配列番号２０及び２１に示す
アミノ酸配列は、いずれも、シグナルペプチドのアミノ
酸配列とともに、ピー・パーネットら、『ザ・ジャーナ
ル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー』、第２７１
巻、３，９６７乃至３，９７０頁（１９９６年）に報告
されている。しかしながら、同論文においては、配列番
号２０及び２１に示すアミノ酸配列を有するポリペプチ
ドがＩＬ−１８Ｒとして機能する事実について、示唆も
教示もなされていない。
【００２１】斯かるＤＮＡは、微生物及び動植物由来の
適宜の宿主に導入すると、当該ポリペプチドを発現す
る。この発明のＤＮＡは、通常、組換えＤＮＡの形態で
宿主に導入される。組換えＤＮＡはこの発明のＤＮＡと
自律複製可能なベクターを含んでなり、ＤＮＡさえ入手
できれば、通常一般の組換えＤＮＡ技術により比較的容
易に調製することができる。この発明のＤＮＡを挿入し
得るベクターとしては、例えば、ｐＫＫ２２３−３、ｐ
ｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ、ＢＣＭＧＳＮｅｏ、ｐｃＤＬ−Ｓ
Ｒα、ｐＫＹ４、ｐＣＤＭ８、ｐＣＥＶ４、ｐＭＥ１８
Ｓ、ｐＥＦ−ＢＯＳなどのプラスミドベクターが挙げら
れる。自律複製可能なベクターは、通常、プロモータ
ー、エンハンサー、複製起点、転写終結部位、スプライ
シング配列及び／又は選択配列などの、この発明のＤＮ
Ａが個々の宿主において発現するための適宜塩基配列を
含んでなる。なお、プロモーターとして、例えば、熱シ
ョック蛋白質プロモーターや、あるいは、同じ特許出願
人による特開平７−１６３３６８号公報に開示されたイ
ンターフェロン−αプロモーターを用いるときには、形
質転換体における当該ＤＮＡの発現を外部刺激により人
為的に制御できることになる。
【００２２】斯かるベクターにこの発明のＤＮＡを挿入
するには、斯界において慣用の方法が用いられる。具体
的には、まず、この発明のＤＮＡを含む遺伝子と自律複
製可能なベクターとを制限酵素及び／又は超音波により
切断し、次に、生成したＤＮＡ断片とベクター断片を連
結する。遺伝子及びベクターの切断にヌクレオチドに特
異的に作用する制限酵素、とりわけ、ＡｃｃＩ、Ｂａｍ
ＨＩ、ＢｓｔＸＩ、ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、Ｎｏ
ｔＩ、ＰｓｔＩ、ＳａｃＩ、ＳａｌＩ、ＳｍａＩ、Ｓｐ
ｅＩ、ＸｂａＩ、ＸｈｏＩなどを用いれば、ＤＮＡ断片
とベクター断片を連結するのが容易となる。ＤＮＡ断片
とベクター断片を連結するには、必要に応じて、両者を
アニーリングした後、生体内又は生体外でＤＮＡリガー
ゼを作用させればよい。斯くして得られる組換えＤＮＡ
は、微生物や動物由来の宿主において無限に複製可能で
ある。
【００２３】斯かる組換えＤＮＡは、適宜宿主に導入し
て当該ポリペプチドの製造に用いられる。宿主として
は、斯界において慣用される微生物及び動植物由来のも
のを用いることができるが、ポリペプチドの最終用途が
医薬品である場合には、酵母や哺乳類由来の宿主が望ま
しい。哺乳類由来の宿主細胞の具体例としては、例え
ば、３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−９２）、Ｃ１２７
Ｉ細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６１６）、ＣＨＯ−Ｋ１
細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−６１）、ＣＶ−１細胞（ＡＴ
ＣＣ ＣＣＬ−７０）、ＣＯＳ−１細胞（ＡＴＣＣ Ｃ
ＲＬ−１６５０）、ＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−
２）、ＭＯＰ−８細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１７０９）
及びそれらの変異株を始めとする、ヒト、サル、マウス
及びハムスター由来の上皮系細胞、間質系細胞及び造血
系細胞が挙げられる。斯かる宿主にこの発明のＤＮＡを
導入するには、例えば、公知のＤＥＡＥ−デキストラン
法、燐酸カルシウム法、エレクトロポレーション法、リ
ポフェクション法、マイクロインジェクション法、さら
には、レトロウイルス、アデノウイルス、ヘルペスウイ
ルス、ワクシニアウイルスなどによるウイルス感染法な
どを用いればよい。形質転換体から当該ポリペプチドを
産生するクローンを選択するには、形質転換体を培養培
地で培養し、当該ポリペプチドの産生が観察されたクロ
ーンを選択すればよい。なお、哺乳類由来の宿主細胞を
用いる組換えＤＮＡ技術については、例えば、黒木登志
夫、谷口克、押村光雄編集、『実験医学別冊細胞工学ハ
ンドブック』、１９９２年、羊土社発行や横田崇、新井
賢一編集、『実験医学別冊バイオマニュアルシリーズ３
遺伝子クローニング実験法』、１９９３年、羊土社発
行などにも詳述されている。
【００２４】斯くして得られる形質転換体は、培養培地
で培養すると、宿主内外に当該ポリペプチドを産生す
る。培養培地としては、形質転換体を培養するための慣
用の培養培地を用いればよく、斯かる培養培地は、通
常、緩衝水を基材とし、これにナトリウムイオン、カリ
ウムイオン、カルシウムイオン、燐イオン、塩素イオン
などの無機イオンと、宿主の代謝能力に応じた微量元
素、炭素源、窒素源、アミノ酸、ビタミンなどを加え、
必要に応じて、さらに血清、ホルモン、細胞成長因子、
細胞接着因子などを含有せしめて構成される。個々の培
養培地としては、例えば、１９９培地、ＤＭＥＭ培地、
Ｈａｍ´ｓ Ｆ１２培地、ＩＭＤＭ培地、ＭＣＤＢ１０
４培地、ＭＣＤＢ１５３培地、ＭＥＭ培地、ＲＤ培地、
ＲＩＴＣ８０−７培地、ＲＰＭＩ−１６３０培地、ＲＰ
ＭＩ−１６４０培地、ＷＡＪＣ４０４培地などが挙げら
れる。斯かる培養培地に形質転換体を約１×１０4乃至
１×１０7個／ｍｌ、望ましくは、約１×１０5乃至１×
１０6個／ｍｌ接種し、必要に応じて新鮮な培養培地と
取替えながら、温度３７℃前後で１日乃至１週間、望ま
しくは、２乃至４日間浮遊培養又は単層培養すると、当
該ポリペプチドを含む培養物が得られる。形質転換体の
種類や培養条件にもよるが、斯くして得られる培養物
は、通常、１ｌ当り当該ポリペプチドを約１μｇ乃至１
ｍｇ含む。
【００２５】このようにして得られた培養物は、必要に
応じて、超音波、細胞溶解酵素及び／又は界面活性剤に
より菌体又は細胞を破砕した後、濾過、遠心分離などに
より当該ポリペプチドを菌体若しくは細胞又はそれらの
破砕物から分離し、精製する。精製には菌体若しくは細
胞又はそれらの破砕物を除去した培養物に、例えば、塩
析、透析、濾過、濃縮、分別沈澱、イオン交換クロマト
グラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、吸着クロマ
トグラフィー、等電点クロマトグラフィー、疎水性クロ
マトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、アフィニテ
ィークロマトグラフィー、ゲル電気泳動、等電点電気泳
動などの生理活性蛋白質を精製するための斯界における
慣用の方法が適用され、必要に応じて、これらは適宜組
合せて適用される。そして、最終使用形態に応じて、精
製ポリペプチドを濃縮・凍結乾燥して液状又は固状にす
ればよい。なお、同じ特許出願人による特開平８−１９
３０９８号公報に開示されたＩＬ−１８及び特願平８−
３５６４２６号明細書に開示されたモノクローナル抗体
は当該ポリペプチドの精製に極めて有用であり、これら
を用いるイムノアフィニティークロマトグラフィーによ
るときには、高純度の当該ポリペプチドが最少の時間と
労力で得られる。
【００２６】この発明のポリペプチドは、ヒトを含む哺
乳類において、免疫系を活性化するＩＬ−１８を認識・
結合して免疫反応を抑制したり調節する性質を有するの
で、過剰な免疫反応に起因する種々の疾患の治療・予防
に著効を発揮する。免疫系は、本来、有害な異物から生
体を防御するためのものであるが、ときとして、その働
き故に、却って、生体に有害な結果をもたらすことがあ
る。哺乳類に、例えば、皮膚、腎臓、肝臓、心臓、骨髄
などの臓器を移植すると、同種異系抗原に対する拒絶反
応や免疫反応により、Ｔ細胞が活性化され、リンパ球が
増殖したり、炎症が生じることがある。症状の程度こそ
違え、同様の現象は、例えば、アレルゲンのように、宿
主が固有のものと見做さない異種異系抗原が侵入した場
合にも観察される。自己免疫疾患においては、本来、固
有のものと見做されるべき成分がアレルギー反応を惹起
する。この発明のポリペプチドは、ヒトを含む哺乳類に
投与すると、斯かる免疫反応を抑制又は調節し、それら
に起因する各種疾患の治療・予防に著効を発揮する。し
たがって、この発明でいう感受性疾患とは免疫反応の亢
進に起因する疾患であって、ＩＬ−１８Ｒが直接又は間
接に作用して治療又は予防し得るすべての疾患というこ
とになり、個々の感受性疾患としては、例えば、上記の
ごとき臓器移植に伴う拒絶反応や、悪性貧血、萎縮性胃
炎、インスリン抵抗性糖尿病、ウェジナー肉芽腫症、円
板状エリテマトーデス、潰瘍性大腸炎、寒冷凝集素症、
グッドパスチャー症候群、クローン病、原発性胆汁性肝
硬変症、交感性眼炎、甲状腺機能亢進症、若年性糖尿
病、シェーグレン症候群、自己免疫性肝炎、自己免疫性
溶血性貧血、重症筋無力症、進行性全身性硬化症、全身
性エリテマトーデス、多発性寒冷血色素尿症、多発性筋
炎、多発性結節性動脈炎、多発性硬化症、特発性アジソ
ン病、特発性血小板減少性紫班病、バセドウ病、白血球
減少症、ベーチェット病、早発性更年期、慢性関節リウ
マチ、リウマチ熱、慢性甲状腺炎、ホジキン病、ＨＩＶ
感染症、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、
花粉症及びハチ毒アレルギーを含む自己免疫疾患及びア
レルギー性疾患が挙げられる。なお、この発明のポリペ
プチドは、ＩＦＮ−γの過剰産生や過剰投与などに起因
する敗血症ショックの治療や予防にも有効である。
【００２７】斯くして、有効成分としてこの発明のポリ
ペプチドを含んでなる感受性疾患剤は、上記のごとき感
受性疾患を治療・予防するための抗自己免疫疾患剤、抗
アレルギー剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、増血剤、白血球
増多剤、血小板増多剤、鎮痛剤、解熱剤などとして多種
多様な用途を有することとなる。剤型並びに感受性疾患
の種類及び症状にもよるが、この発明の感受性疾患剤
は、通常、液状、懸濁状、ペースト状又は固形状に調製
され、この発明のポリペプチドを０．００００１乃至１
００％（ｗ／ｗ）、望ましくは、０．０００１乃至２０
％（ｗ／ｗ）含んでなる。
【００２８】この発明の感受性疾患剤は、当該ポリペプ
チド単独の形態はもとより、それ以外の生理的に許容さ
れる、例えば、担体、賦形剤、希釈剤、アジュバント、
安定剤、さらには、必要に応じて、他の生理活性物質の
１若しくは複数種類との組成物としての形態をも包含す
る。安定剤としては、例えば、血清アルブミンやゼラチ
ンなどの蛋白質、グルコース、シュークロース、ラクト
ース、マルトース、トレハロース、ソルビトール、マル
チトール、マンニトール、ラクチトールなどの糖質及び
クエン酸塩若しくは燐酸塩を主体とする緩衝剤が、ま
た、併用し得る他の生理活性物質としては、例えば、Ｆ
Ｋ５０６、グルココルチコイド、シクロフォスファミ
ド、ナイトロゲンマスタード、トリエチレンチオフォス
ファミド、ブズルファン、フェニラミンマスタード、ク
ロランブシル、アザチオプリン、６−メルカプトプリ
ン、６−チオグアニン、６−アザグアニン、８−アザグ
アニン、フルオロウラシル、シタラビン、メトトレキセ
ート、アミノプテリン、マイトマイシンＣ、塩酸ダウノ
ルビシン、アクチノマイシンＤ、クロモマイシンＡ３、
塩酸ブレオマイシン、塩酸ドキソルビシン、サイクロス
ポリンＡ、Ｌ−アスパラギナーゼ、ビンクリスチン、ビ
ンブラスチン、ヒドロキシウレア、塩酸プロカルバジ
ン、副腎皮質ホルモン、金製剤などの他に、ＩＬ−１８
以外のサイトカインの受容体アンタゴニスト、例えば、
インターロイキン−１受容体蛋白質、インターロイキン
−２受容体蛋白質、インターロイキン−５受容体蛋白
質、インターロイキン−６受容体蛋白質、インターロイ
キン−８受容体蛋白質及びインターロイキン−１２受容
体蛋白質に対するそれぞれの抗体、さらには、ＴＮＦ−
α受容体、ＴＮＦ−β受容体、インターロイキン−１受
容体、インターロイキン−５受容体及びインターロイキ
ン−８受容体に対するそれぞれのアンタゴニストなどが
挙げられる。
【００２９】さらに、この発明の感受性疾患剤は投薬単
位形態の薬剤をも包含し、その投薬単位形態の薬剤と
は、当該ポリペプチドを、例えば、１回当りの用量又は
その整数倍（４倍まで）若しくはその約数（１／４０ま
で）に相当する量を含んでなり、投薬に適する物理的に
一体の剤型にある薬剤を意味する。このような投薬単位
形態の薬剤としては、注射剤、液剤、散剤、顆粒剤、錠
剤、カプセル剤、舌下剤、点眼剤、点鼻剤、坐剤などが
挙げられる。この発明の感受性疾患剤は経口的に投与し
ても非経口的に投与してもよく、いずれの場合にも感受
性疾患の治療・予防に効果を発揮する。感受性疾患の種
類や症状にもよるが、具体的には、患者の症状や投与後
の経過を観察しながら、成人当り約１μｇ乃至１ｇ／
回、通常、約１０μｇ乃至１００ｍｇ／回の当該ポリペ
プチドを１乃至４回／日又は１乃至５回／週の用量で１
日乃至１年間に亙って経口投与するか、皮内、皮下、筋
肉内又は静脈内に非経口投与すればよい。
【００３０】ところで、この発明のポリペプチドをコー
ドするＤＮＡは、いわゆる、「遺伝子療法」にも有用で
ある。すなわち、通常の遺伝子療法においては、この発
明のＤＮＡを、例えば、レトロウイルス、アデノウイル
ス、アデノ随伴ウイルスなどのウイルス由来のベクター
に挿入するか、カチオニックポリマーや膜融合型リポソ
ームなどのリポソームに包埋し、この状態でＩＬ−１８
Ｒに感受性を有する疾患に罹患した患者に直接注入する
か、あるいは、患者からリンパ球を採取し、生体外で導
入した後、患者に自家移植するのである。また、養子免
疫遺伝子療法においては、効果細胞にこの発明のＤＮＡ
を通常の遺伝子療法の場合と同様にして導入すると、例
えば、腫瘍細胞やウイルス感染細胞などの標的細胞に対
する効果細胞の細胞障害性が高まり、養子免疫療法を強
化することができる。さらに、腫瘍ワクチン遺伝子療法
においては、患者から摘出した腫瘍細胞にこの発明のＤ
ＮＡを通常の遺伝子療法の場合と同様にして導入し、生
体外で一定数に達するまで増殖させた後、患者に自家移
植するのである。移植された腫瘍細胞は患者体内におい
てワクチンとして作用し、強力且つ抗原特異的な抗腫瘍
免疫を発揮する。斯くして、この発明のＤＮＡは、例え
ば、悪性腫瘍、ウイルス性疾患、感染症及び自己免疫疾
患を始めとする各種疾患の遺伝子療法、さらには、臓器
移植やアレルギー性疾患に伴う拒絶反応や過剰な免疫反
応の抑制に著効を発揮することとなる。なお、これらの
遺伝子療法を実施するための一般的手順は、例えば、島
田隆、斉藤泉、小澤敏也編集、『実験医学別冊バイオマ
ニュアルＵＰシリーズ 遺伝子治療の基礎技術』、１９
９６年、羊土社発行にも詳述されている。さらに、この
発明のポリペプチドをコードするＤＮＡは、その一部又
は全てをプローブ又はプライマーとして用いるハイブリ
ダイゼーション法やＰＣＲ法を諸種の哺乳類に由来する
ＤＮＡやＲＮＡに適用することにより、この発明のポリ
ペプチドと構造的に関連する物質をコードするＤＮＡ、
例えば、この発明に開示された個々のＤＮＡとは相違す
る起源のＩＬ−１８Ｒとしてのポリペプチドをコードす
るＤＮＡ、さらには、ＩＬ−１８Ｒに対する作動薬や拮
抗薬などをコードするＤＮＡの検索にも有用である。
【００３１】また、この発明のポリペチプチドはＩＬ−
１８を認識し、結合する性質があるので、当然のことな
がら、ＩＬ−１８を精製したり検出するためのアフィニ
ティークロマトグラフィーや標識アッセイにおいても有
用である。また、これに加え、この発明のポリペプチ
ド、とりわけ、この発明の可溶性ポリペプチドは、ＩＬ
−１８Ｒに対する作動薬や拮抗薬の、生体内又は生体外
での検索にも有用である。さらに、この発明のポリペプ
チドには、ＩＬ−１８を認識し、結合して、その生理作
用を中和する性質があるので、当該ポリペプチドを有効
成分とするこの発明の中和剤及び、ＩＬ−１８に当該ポ
リペプチドを作用させるこの発明の中和方法は、ＩＬ−
１８の過剰産生やＩＬ−１８の過剰投与に起因する種々
の疾患の治療に有用である。
【００３２】以下、この発明の実施の形態につき、実施
例を挙げて説明する。なお、以下の実施例１乃至９にお
いて用いられる手法は斯界において慣用のものであり、
例えば、黒木登志夫、谷口克、押村光雄編集、『実験医
学別冊細胞工学ハンドブック』、１９９２年、羊土社発
行や横田崇、新井賢一編集、『実験医学別冊バイオマニ
ュアルシリーズ３ 遺伝子クローニング実験法』、１９
９３年、羊土社発行などにも詳述されている。
【００３３】
【実施例１】〈ＩＬ−１８Ｒの調製と特徴付け〉
【００３４】
【実施例１−１】〈ＩＬ−１８Ｒの調製〉常法により、
生後間もないハムスター新生児の腹腔内にウサギ由来の
抗リンパ球抗体を注射して免疫反応を減弱させた後、背
部皮下にホジキン病患者に由来するリンパ芽球様細胞株
の一種であるＬ４２８細胞（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７７
７）を約５×１０5 個／匹注射移植し、通常の方法で３
週間飼育した。皮下に生じた腫瘍塊（約１０ｇ／匹）を
摘出し、常法により血清無含有のＲＰＭＩ−１６４０培
地（ｐＨ７．４）により分散させ、洗浄して増殖細胞を
得た。
【００３５】この増殖細胞に対して０．８３％（ｗ／
ｖ）塩化アンモニウムと１７０ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７．７）との混液（容量比９：１）を細胞湿重量
の１０倍量加え、撹拌した後、２，０００ｒｐｍで１０
分間遠心分離して細胞を回収した。次に、細胞を適量の
燐酸緩衝食塩水（以下、「ＰＢＳ」と言う。）に浮遊さ
せ、撹拌し、２，０００ｒｐｍで遠心分離して再度回収
し、１ｍＭ塩化マグネシウムを含む１０ｍＭトリス−塩
酸緩衝液（ｐＨ７．２）に細胞密度約１×１０8個／ｍ
ｌになるように浮遊させ、キネマティカ製細胞破砕機
『ポリトロン』により破砕し、１ｍＭ塩化マグネシウム
及び１Ｍシュークロースをそれぞれ含む１０ｍＭトリス
−塩酸緩衝液（ｐＨ７．２）をシュークロースの最終濃
度が０．２Ｍになるように加えた後、１，０００ｒｐｍ
で遠心分離して上清を採取し、これを２５，０００ｒｐ
ｍでさらに６０分間遠心分離し、沈澱部を採取した。こ
の沈澱に１２ｍＭ ３−［（３−コラミドプロピル）ジ
メチルアンモニオ］−１−プロパンスルフォネート（以
下、「ＣＨＡＰＳ」と言う。）、１０ｍＭ ＥＤＴＡ及
び１ｍＭフェニルメチルスルフォニルフルオライドをそ
れぞれ適量加え、４℃で１６時間撹拌した後、２５，０
００ｒｐｍで６０分間遠心分離し、上清を採取した。
【００３６】この上清を１２ｍＭ ＣＨＡＰＳを含むＰ
ＢＳにより平衡化しておいたファルマシア製アフィニテ
ィークロマトグラフィー用ゲル『ウィート・ジャーム・
レクチン・セファロース６Ｂ』のカラムに負荷し、カラ
ムを１２ｍＭ ＣＨＡＰＳを含むＰＢＳにより洗浄した
後、溶出液の蛋白質含量を波長２８０ｎｍの紫外線に対
する吸光度でモニターしながら、０．５Ｍ Ｎ−アセチ
ル−Ｄ−グルコサミン及び１２ｍＭ ＣＨＡＰＳをそれ
ぞれ含むＰＢＳを通液した。そして、吸光度が０．１６
乃至０．２０の画分を採取し、合一したところ、蛋白質
含量約１ｍｇ／ｍｌの水溶液が原料細胞１０12個当り約
２５ｌ得られた。
【００３７】この水溶液の一部を小分し、常法にしたが
って 125Ｉで標識したヒトＩＬ−１８を４ｎｇずつ加
え、４℃で１時間インキュベートし、担体としてγ−グ
ロブリンと平均分子量６，０００ダルトンのメルク製ポ
リエチレングリコール『ポリエチレングリコール６００
０』をそれぞれ適量加え、氷冷下で３０分間静置して結
合反応させた後、反応物を６，０００ｒｐｍで５分間遠
心分離し、生じた沈澱を採取し、放射能強度を測定し
た。同時に、 125Ｉ標識ヒトＩＬ−１８に加えて未標識
のヒトＩＬ−１８を３μｇ用いる系を設け、これを上記
と同様に処置して対照とした。対照と比較したところ、
被検水溶液から生じた沈澱の放射能強度は有意に高かっ
た。このことは、上記で得た水溶液が正にＩＬ−１８Ｒ
を含有するものであり、ＩＬ−１８に作用させると、こ
のＩＬ−１８ＲがＩＬ−１８を認識し、結合したことを
示している。
【００３８】
【実施例１−２】〈モノクローナル抗体に対する結合
性〉Ｌ４２８細胞（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７７７）を０．
１％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを含み、０．１％（ｖ
／ｖ）ウシ血清アルブミンを補足したＲＰＭＩ−１６４
０培地（ｐＨ７．４）に細胞密度４×１０7 個／ｍｌに
なるように浮遊させる一方、同じ特許出願人による特願
平８−３５６４２６号明細書に記載された方法により得
た、ヒトＩＬ−１８Ｒに特異的なモノクローナル抗体Ｍ
Ａｂ＃１１７−１０Ｃを濃度０．０１９μｇ／ｍｌ、
０．２０９μｇ／ｍｌ、２．３μｇ／ｍｌ、２５．３μ
ｇ／ｍｌ又は１３９．５μｇ／ｍｌになるように０．１
％（ｖ／ｖ）ウシ血清アルブミンを補足した別のＲＰＭ
Ｉ−１６４０培地（ｐＨ７．４）に溶解した。
【００３９】次に、上記で調製した細胞浮遊液を５０μ
ｌずつとり、これに濃度の相違する上記モノクローナル
抗体溶液のいずれかを５０μｌずつ加え、４℃で２時間
振盪した後、常法にしたがって 125Ｉにより標識したヒ
トＩＬ−１８を４ｎｇ含み、０．１％（ｖ／ｖ）ウシ血
清アルブミンを補足したＲＰＭＩ−１６４０培地（ｐＨ
７．５）を５０μｌずつ加え、同じ温度でさらに３０分
間振盪した。その後、各細胞浮遊液にジブチルフタレー
ト／ジオクチルフタレート混液（容量比１：１）を２０
０μｌずつ加え、２０℃、１０，０００ｒｐｍで５分間
遠心分離した後、細胞を含む沈澱部を採取し、アロカ製
ガンマカウンター『ＡＲＣ−３００型』を用いて放射能
強度を測定した。
【００４０】同時に、モノクローナル抗体を省略する一
方、 125Ｉ標識ヒトＩＬ−１８を４ｎｇとともに未標識
ヒトＩＬ−１８を４μｇ加える系（非特異的結合区）と
未標識ヒトＩＬ−１８を加えない系（総結合区）をそれ
ぞれ設け、これらを試験区と同様に処置した。そして、
「総結合区」及び「非特異的結合区」において観察され
た放射能強度と、試験区において観察された放射能強度
をそれぞれ数１に示す式に代入し、阻害率（％）を計算
した。結果を図１に示す。
【００４１】
【数１】
【００４２】さらに、実施例１−１の方法により得たＩ
Ｌ−１８Ｒを含む水溶液を５０μｌずつとり、これを上
記と同様の濃度に調製したモノクローナル抗体ＭＡｂ＃
１１７−１０Ｃを５０μｌ加え、４℃で２時間振盪した
後、 125Ｉ標識ヒトＩＬ−１８を４ｎｇずつ加え、同じ
温度でさらに３０分間振盪した。その後、４ｍｇ／ｍｌ
γ−グロブリンを５０μｌ加え、氷冷下で３０分間静
置した後、２０％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコールを
含むＰＢＳを２５０μｌ加え、氷冷下でさらに３０分間
静置し、４℃、６，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、
沈澱部を採取し、その放射能強度を上記と同様にして測
定した。
【００４３】同時に、モノクローナル抗体を省略する一
方、 125Ｉ標識ヒトＩＬ−１８を４ｎｇとともに未標識
ヒトＩＬ−１８を４μｇ加える系（非特異的結合区）と
未標識ヒトＩＬ−１８を加えない系（総結合区）をそれ
ぞれ設け、これらを試験区と同様に処置した。そして、
「総結合区」及び「非特異的結合区」において観察され
た放射能強度と、試験区において観察された放射能強度
をそれぞれ数１に示す式に代入し、阻害率（％）を計算
した。結果を図１に併記する。
【００４４】図１に見られるように、Ｌ４２８細胞を用
いる場合も、溶液状のＩＬ−１８Ｒを用いる場合も、モ
ノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−１０Ｃの濃度が上昇
するにしたがって、ＩＬ−１８のＬ４２８細胞及びＩＬ
−１８Ｒへの結合がより強く阻害された。このことは、
モノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−１０Ｃが溶液中の
ＩＬ−１８Ｒ及びＬ４２８細胞の表面に存在すると考え
られるＩＬ−１８ＲにＩＬ−１８と競合して結合したこ
とを示すと同時に、実施例１−１の方法により得た水溶
液がＩＬ−１８を認識する性質ある蛋白質、すなわちＩ
Ｌ−１８Ｒを含有し、そして、モノクローナル抗体ＭＡ
ｂ＃１１７−１０ＣがそのＩＬ−１８Ｒに特異的に反応
するモノクローナル抗体であることを示している。
【００４５】
【実施例１−３】〈ウェスタン・ブロッティング分析〉
実施例１−１の方法により得たＩＬ−１８Ｒ水溶液の一
部をとり、これに２．５％（ｗ／ｖ）ドデシル硫酸ナト
リウム及び５０％（ｖ／ｖ）グリセリンからなる混液を
２／３容量加え、３７℃で１時間インキュベートした
後、常法にしたがって、還元剤非存在下においてゲル濃
度１０乃至２０％のグラジエントＳＤＳ−ＰＡＧＥを適
用して蛋白質成分を分離した。常法によりゲルをニトロ
セルロース膜上に移取り、適量の大日本製薬製固定化剤
『ブロックエース』に１時間浸漬し、さらに、同じ特許
出願人による特願平８−３５６４２６号明細書に開示さ
れた方法により得たモノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７
−１０Ｃ、ブロックエース及びツイーン２０をそれぞれ
１０μｇ／ｍｌ、１０％（ｖ／ｖ）及び０．０５％（ｖ
／ｖ）の濃度で含む５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５）に１時間浸漬した後、０．０５％（ｖ／ｖ）ツ
イーン２０を含む５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５）で洗浄して過剰の抗体を除いた。ニトロセルロ
ース膜を西洋ワサビパーオキシダーゼで標識したウサギ
由来の抗マウスイムノグロブリン抗体の適量と１０％
（ｖ／ｖ）ブロックエース及び０．０５％（ｖ／ｖ）ツ
イーン２０をそれぞれ含むトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５）に１時間浸漬して反応させ、０．０５％（ｖ／
ｖ）ツイーン２０を含む５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液
（ｐＨ７．５）により洗浄した後、アマシャム製染色キ
ット『ＥＣＬ ｋｉｔ』を用いて発色させた。
【００４６】同時に、モノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１
７−１０Ｃを省略した系を設け、上記と同様に処置して
対照とした。なお、分子量マーカーには、ウシ血清アル
ブミン（６７，０００ダルトン）、オボアルブミン（４
５，０００ダルトン）、カルボニックアンヒドロラーゼ
（３０，０００ダルトン）、トリプシンインヒビター
（２０，１００ダルトン）及びα−ラクトアルブミン
（１４，４００ダルトン）を用いた。結果を図２に示
す。
【００４７】図２のゲル電気泳動像において、モノクロ
ーナル抗体無添加のレーン３には見られないバンドが、
モノクローナル抗体添加のレーン２には観察されるが、
このバンドはＩＬ−１８Ｒに相当するバンドである。
【００４８】
【実施例１−４】〈ＩＬ−１８に対する活性阻害〉ヒト
急性骨髄性白血病患者に由来する株化細胞の一種である
ＫＧ−１細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ−２４６）を１００μ
ｇ／ｍｌカナマイシンと１８．８ｍＭ燐酸水素二ナトリ
ウムをそれぞれ含み、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清を
補足したＲＰＭＩ−１６４０培地（ｐＨ７．２）に細胞
密度１×１０7 個／ｍｌになるように浮遊させ、同じ特
許出願人による特願平８−３５６４２６号明細書に開示
された方法により得たモノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１
７−１０Ｃを濃度１０μｇ／ｍｌになるように加えた
後、３７℃で３０分間インキュベートした。
【００４９】次に、９６ウェルマイクロプレートに上記
ＫＧ−１細胞浮遊液を５０μｌ／ウェルずつ分注し、そ
れに、ヒトＩＬ−１８を上記と同一の新鮮な培地に濃度
０ｎｇ／ｍｌ、１．５６ｎｇ／ｍｌ、３．１２ｎｇ／ｍ
ｌ、６．２５ｎｇ／ｍｌ、１２．５ｎｇ／ｍｌ、２５ｎ
ｇ／ｍｌ又は５０ｎｇ／ｍｌになるように溶解したもの
を５０μｌ／ウェルずつ加え、さらに、上記と同一の新
鮮な培地に濃度５μｇ／ｍｌになるように溶解したリポ
多糖を５０μｌ／ウェルずつ加え、３７℃で２４時間イ
ンキュベートした後、培養上清を採取し、そのＩＦＮ−
γ含量を通常の酵素免疫アッセイにより調べた。並行し
て、各々のヒトＩＬ−１８濃度につき、モノクローナル
抗体ＭＡｂ＃１１７−１０Ｃを省略した系をそれぞれ設
け、これらを上記と同様に処置して対照とした。結果を
図３に示す。なお、図３に示すＩＦＮ−γ含量は、米国
国立衛生研究所（ＮＩＨ）から入手したＩＦＮ−γ標準
品（Ｇｇ２３−９０１−５３０）に基づき国際単位（Ｉ
Ｕ）に換算して表示している。
【００５０】図３に示す結果は、モノクローナル抗体Ｍ
Ａｂ＃１１７−１０Ｃが共存すると、免疫担当細胞とし
てのＫＧ−１細胞におけるＩＬ−１８によるＩＦＮ−γ
産生の誘導が阻害されることを示している。このこと
は、モノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−１０ＣがＩＬ
−１８と競合してＫＧ−１細胞の表面に存在するＩＬ−
１８Ｒを封鎖し、結果として、ＩＬ−１８によるＫＧ−
１細胞への情報伝達を妨げたことを示している。
【００５１】
【実施例１−５】〈ＩＬ−１８Ｒの精製〉同じ特許出願
人による特願平８−３５６４２６号明細書に記載された
方法により得たモノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−１
０Ｃ ７８ｍｇを適量の蒸留水に溶解し、溶液を０．５
Ｍ塩化ナトリウムを含む硼酸緩衝液（ｐＨ８．５）に対
して４℃で１６時間透析した。その後、常法にしたがっ
て、透析内液にファルマシア製臭化シアン活性化ゲル
『ＣＮＢｒ−アクティベーテッド・セファロース４Ｂ』
を適量加え、穏やかに撹拌しながら４℃で１８時間反応
させてゲルにモノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−１０
Ｃを固定化した。
【００５２】次に、プラスチック製円筒管に上記のゲル
をカラム状に充填し、２ｍＭ ＣＨＡＰＳを含むＰＢＳ
により平衡化した後、実施例１−１の方法により得たＩ
Ｌ−１８Ｒを含む水溶液を負荷し、１２ｍＭ ＣＨＡＰ
Ｓを含むＰＢＳを通液して非吸着成分を除いた。その
後、カラムに２ｍＭ ＣＨＡＰＳ含む３５ｍＭエチルア
ミン（ｐＨ１０．８）を通液しつつ、溶出液を８ｍｌず
つ採取し、それぞれの画分におけるＩＬ−１８Ｒの有無
を実施例１−１の 125Ｉ標識ヒトＩＬ−１８を用いる方
法により判定した。このとき得られたクロマトグラムを
図４に示す。
【００５３】図４に見られるように、実施例１−１のＩ
Ｌ−１８Ｒを含む水溶液のようなＩＬ−１８Ｒと夾雑物
質を含む混合物にモノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−
１０Ｃを用いるイムノアフィニティークロマトグラフィ
ーを適用すると、ＩＬ−１８Ｒがシャープな単一ピーク
となって溶出した。この単一ピークに相当する画分を採
取し、合一し、凍結乾燥したところ、精製ＩＬ−１８Ｒ
の固状物が得られた。
【００５４】その後、このようにして精製したＩＬ−１
８Ｒの一部をとり、ＰＢＳ中、１００℃で５分間インキ
ュベートした後、実施例１−２の方法により残存活性を
測定したところ、ＩＬ−１８に対する結合性が全く観察
されず、加熱により失活したことが判明した。このこと
は、この受容体の本質が蛋白質であることを裏付けてい
る。
【００５５】さらに、上記のようにして得た精製ＩＬ−
１８Ｒを適量のＰＢＳに溶解し、室温下、ＰＢＳに対し
て一晩透析し、実施例１−１の方法により 125Ｉ標識ヒ
トＩＬ−１８の適量とピアース製架橋試薬『ＢＳ3』を
１ｍＭそれぞれ加えた後、０℃で２時間静置してＩＬ−
１８Ｒと 125Ｉ標識ヒトＩＬ−１８との複合体を形成さ
せた。反応物にトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）を濃
度５０ｍＭになるように加え、０℃でさらに１時間静置
して反応を停止させ、常法にしたがって、反応物に分子
量マーカーとともに還元剤としてジチオトレイトールを
用いるＳＤＳ−ＰＡＧＥを適用して蛋白質成分を分離し
た後、オートラジオグラム分析した。
【００５６】得られたオートラジオグラムにおける分子
量マーカーの易動度に基づき計算したところ、このＩＬ
−１８Ｒと 125Ｉ標識ヒトＩＬ−１８との複合体の分子
量は、見掛け上、約５０，０００乃至２００，０００ダ
ルトンであることが判明した。ヒトＩＬ−１８の分子量
は約２０，０００ダルトンであるから、ＩＬ−１８Ｒに
ヒトＩＬ−１８が１分子結合したと仮定すると、ＩＬ−
１８Ｒの分子量は約３０，０００乃至１８０，０００ダ
ルトンということになる。
【００５７】
【実施例１−６】〈ＩＬ−１８Ｒのペプチド・マッピン
グ〉実施例１−５の方法により得た精製ＩＬ−１８Ｒ
を、還元剤としての２％（ｗ／ｖ）ジチオトレイトール
を含むゲル濃度７．５％（ｗ／ｖ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ
によりゲル電気泳動し、ゲルを０．１％（ｗ／ｖ）クー
マシーブリリアントブルーを含む４０％（ｖ／ｖ）水性
メタノールと１％（ｖ／ｖ）酢酸水溶液の混液に５分間
浸漬して染色し、４０％（ｖ／ｖ）水性メタノールと１
％（ｖ／ｖ）酢酸水溶液の混液にさらに２時間浸漬して
脱色した後、ゲルにおける分子量約８０，０００乃至１
１０，０００ダルトンに相当する染色部分を切出し、
０．２Ｍ炭酸アンモニウムを含む５０％（ｖ／ｖ）水性
アセトニトリルを加え、室温下で繰返し振盪した。次い
で、ゲルを真空乾燥し、０．２Ｍ炭酸アンモニウム（ｐ
Ｈ８．０）を加え、５分間静置してゲルを膨潤させ、プ
ロメガ製トリプシン製剤『シーケンシング・グレード・
モディファイッド・トリプシン』を０．１μｇ／μｌ含
む１ｍＭ塩酸と０．２Ｍ炭酸アンモニウム（ｐＨ８．
９）をそれぞれ適量加え、３７℃で一晩反応させた。１
０％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸水溶液により反応を停
止させた後、反応物に０．１％（ｖ／ｖ）トリフルオロ
酢酸水溶液と６０％（ｖ／ｖ）水性アセトニトリルの混
液を加え、室温下で振盪した後、上清を採取し、真空乾
燥し、遠心濾過してペプチド断片を含む濃縮物を得た。
【００５８】この濃縮物を予め０．０６５％（ｖ／ｖ）
トリフルオロ酢酸水溶液により平衡化しておいたファル
マシア製高速液体クロマトグラフィー用カラム『μＲＰ
ＣＣ２／Ｃ１８ ＳＣ２．１／１０』に負荷し、通液開
始から１６０分間でアセトニトリル濃度が０％（ｖ／
ｖ）から８０％（ｖ／ｖ）まで直線的に上昇するアセト
ニトリルの濃度勾配下、８０％（ｖ／ｖ）水性アセトニ
トリルを含む０．０５５％（ｖ／ｖ）トリフルオロ酢酸
水溶液を１００μｌ／分の流速で通液した。波長２１４
ｎｍにおける溶出液の吸光度をモニターしながら溶出液
を分画し、溶出開始から約４５分後、約５０分後、約５
５分後、約５８分後、約６２分後、約７２分後、約７５
分後及び約７７分後に溶出したペプチド断片をそれぞれ
別々に採取した。常法にしたがって、これらのペプチド
断片（以下、溶出時間の早い順に「ペプチド断片１」、
「ペプチド断片２」、「ペプチド断片３」、「ペプチド
断片４」、「ペプチド断片５」、「ペプチド断片６」、
「ペプチド断片７」及び「ペプチド断片８」と言う。）
のアミノ酸配列をパーキン・エルマー製プロテイン・シ
ーケンサー『４７３Ａ型』により調べたところ、ペプチ
ド断片１乃至８は、それぞれ、配列表における配列番号
１２乃至１９に示すアミノ酸配列を有することが判明し
た。このとき得られたペプチド・マップを図５に示す。
【００５９】
【実施例２】〈ＤＮＡの調製〉
【００６０】
【実施例２−１】〈全ＲＮＡの調製〉常法にしたがっ
て、Ｌ４２８細胞（ＦＥＲＭ ＢＰ−５７７７）を１０
％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清を補足したＲＰＭＩ−１６４
０培地（ｐＨ７．２）に浮遊させ、培養規模を拡大しな
がら、３７℃で増殖させた。所期の細胞密度に達した時
点で増殖細胞を採取し、これを６Ｍグアニジンイソチオ
シアナート及び０．５％（ｗ／ｖ）ザルコシルをそれぞ
れ含む１０ｍＭクエン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ７．
０）に浮遊させ、ホモジナイザーで破砕した。
【００６１】次に、３５ｍｌ容遠心管に５．７Ｍ塩化セ
シウムを含む０．１Ｍ ＥＤＴＡ（ｐＨ７．５）を注入
し、その上部に上記で得られた細胞破砕物を重層し、こ
の状態のまま、２０℃、２５，０００ｒｐｍで２０時間
超遠心分離し、ＲＮＡ画分を採取した。このＲＮＡ画分
を１５ｍｌ容遠心管にとり、クロロホルム／１−ブタノ
ール混液（容量比４：１）を等容量加え、５分間振盪
し、４℃、１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した
後、水層部を採取し、これにエタノールを２．５倍容加
え、−２０℃で２時間静置して全ＲＮＡを沈澱させた。
この沈澱を採取し、７５％（ｖ／ｖ）水性エタノールで
洗浄した後、滅菌蒸留水０．５ｍｌに溶解してＬ４２８
細胞由来の全ＲＮＡを含む水溶液を得た。
【００６２】
【実施例２−２】〈ｍＲＮＡの調製〉実施例２−１の方
法により得た全ＲＮＡを含む水溶液に１ｍＭ ＥＤＴＡ
及び０．１％（ｗ／ｖ）ザルコシルをそれぞれ含む１０
ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）を０．５ｍｌ加
え、全量を１ｍｌとした。この混液に日本ロシュ製オリ
ゴ（ｄＴ）３０ラテックス『オリゴテックスｄＴ３０ス
ーパー』を１ｍｌ加え、６５℃で５分間反応させた後、
氷浴中で急冷した。次いで、反応物に５Ｍ塩化ナトリウ
ムを０．２ｍｌ加え、３７℃で１０分間インキュベート
した後、２５℃、１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分
離し、生成したペレット状の沈澱を採取し、これを滅菌
蒸留水０．５ｍｌに懸濁し、６５℃で５分間インキュベ
ートしてラテックスからｍＲＮＡを溶離させた。得られ
た水溶液に適量のエタノールを加え、生成した沈澱を採
取し、凍結乾燥して、ｍＲＮＡの固状物を得た。
【００６３】
【実施例２−３】〈ポリペプチドをコードするＤＮＡ断
片の調製〉０．５ｍｌ容反応管に２５ｍＭ塩化マグネシ
ウムを４μｌ、５００ｍＭ塩化カリウムを含む１００ｍ
Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．３）を２μｌ、２５ｍ
ＭｄＮＴＰミックスを１μｌ、４０単位／μｌのリボヌ
クレアーゼインヒビターを０．５μｌ、そして、２００
単位／μｌの逆転写酵素を１μｌそれぞれ加えた後、５
０μＭランダムヘキサヌクレオチドの適量と実施例２−
２の方法により得たｍＲＮＡを１０ｎｇ加え、滅菌蒸留
水で全量を２０μｌとした。得られた混合物を４２℃で
２０分間インキュベートし、さらに９９℃で５分間イン
キュベートすることにより反応を終結させて第一ストラ
ンドｃＤＮＡを含む反応物を得た。
【００６４】この反応物を２０μｌとり、これに２．５
単位／μｌのストラタジーン製ＤＮＡポリメラーゼ『ク
ローンドＰｆｕポリメラーゼ』１μｌ、ストラタジーン
製専用緩衝液１０μｌ及び２５ｍＭ ｄＮＴＰミックス
１μｌをそれぞれ加え、さらに、ピー・パーネットらが
『ザ・ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリ
ー』、第２７１巻、３，９６７乃至３，９７０頁（１９
９６年）に報告しているアミノ酸配列に基づいて調製し
た５´−ＴＣＡＧＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＡＴ
ＴＧＴＡＧＡＧＡＡ−３´及び５´−ＧＡＡＧＣＧＧＣ
ＣＧＣＡＴＣＡＴＴＡＡＧＡＣＴＣＧＧＡＡＡＧＡＡＣ
−３´で表される塩基配列のオリゴヌクレオチド０．１
μｇをそれぞれセンスプライマー及びアンチセンスプラ
イマーとして加え、滅菌蒸留水で全量を１００μｌとし
た。この混合物を９５℃で１分間、４２℃で２分間、７
２℃で３分間この順序でインキュベートするサイクルを
３回繰返した後、さらに、９５℃で１分間、６０℃で２
分間、７２℃で３分間この順序でインキュベートするサ
イクルを３５回繰返してＰＣＲ反応させた。
【００６５】得られたＰＣＲ産物を５０ｎｇとり、これ
にストラタジーン製プラスミドベクター『ｐＣＲ−Ｓｃ
ｒｉｐｔ Ｃａｍ ＳＫ（＋）』を１ｎｇ加え、さら
に、宝酒造製ＤＮＡライゲーションキット『ＤＮＡライ
ゲーション・キット・バージョン２』を用い、１６℃で
２時間反応させてプラスミドベクター内にこのＰＣＲ産
物であるＤＮＡ断片を挿入した。反応物の一部をとり、
常法にしたがってストラタジーン製大腸菌株『ＸＬ１−
Ｂｌｕｅ ＭＲＦ´Ｋａｎ』を形質転換した。
【００６６】
【実施例３】〈組換えＤＮＡの調製〉実施例２−３の方
法により得た形質転換体をクロラムフェニコールを３０
μｇ／ｍｌ含むＬＢ培地（ｐＨ７．５）に接種し、３７
℃で１８時間培養した後、培養物から菌体を採取し、こ
れを常法にしたがって処理してプラスミドＤＮＡを得
た。ジデオキシ法により、このプラスミドＤＮＡが配列
表における配列番号７に示す塩基配列を含有しているこ
とを確認した後、制限酵素ＮｏｔＩ及びＳａｌＩをそれ
ぞれ作用させ、得られたＤＮＡ断片１００ｎｇに、制限
酵素ＮｏｔＩ及びＸｈｏＩにより予め同様に切断してお
いたマルチクローニングサイト改変インビトロジェン製
プラスミドベクター『ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ』を１０ｎ
ｇ加え、宝酒造製ライゲーション・キット『ライゲーシ
ョン・キット・バージョン２』を用い、１６℃で２時間
反応させた。反応物の一部をとり、これを常法にしたが
って『ＸＬ１−Ｂｌｕｅ ＭＲＦ´Ｋａｎ』に導入して
この発明の組換えＤＮＡ『ｐｃＤＮＡ／ＨｕＩＬ−１８
Ｒ』を含む形質転換体『ｃＤＮＡ／ＨｕＩＬ−１８Ｒ』
を得た。常法にしたがって分析したところ、組換えＤＮ
Ａ『ｐｃＤＮＡ／ＨｕＩＬ−１８Ｒ』においては、この
発明のポリペプチドをコードする、配列表における配列
番号１に示す塩基配列を含有するｃＤＮＡである『ＩＬ
−１８Ｒ ｃＤＮＡ』が、図６に示すように、サイトメ
ガロウイルス・プロモーターＰｃｍｖの下流に連結され
ていた。
【００６７】
【実施例４】〈形質転換体の調製〉実施例３の方法によ
り得た形質転換体『ｃＤＮＡ／ＨｕＩＬ−１８Ｒ』をア
ンピシリンを１００μｇ／ｍｌ含むＬＢ培地（ｐＨ７．
５）に接種し、３７℃で１８時間培養した後、培養物か
ら菌体を採取し、これを常法にしたがって処理してプラ
スミドＤＮＡを採取した。別途、アフリカミドリザルの
腎臓に由来する線維芽細胞株の一種であるＣＯＳ−１細
胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６５０）を常法にしたがって
増殖させ、これに上記で得られたプラスミドＤＮＡを２
０μｇとり、これを通常一般のエレクトロポレーション
法により１×１０7 個のＣＯＳ−１細胞に導入して、こ
の発明のＤＮＡを含む形質転換体を得た。
【００６８】
【実施例５】〈ポリペプチドの製造〉平底培養瓶に１０
％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清を補足したＤＭＥＭ培地（ｐ
Ｈ７．２）をとり、これに実施例４の方法により得た形
質転換体を１×１０5 個／ｍｌの割合で接種し、５％Ｃ
Ｏ2 インキュベーター中、３７℃で３日間培養した。培
養物から培養液を除去した後、培養瓶内に５ｍＭ ＥＤ
ＴＡ及び０．０２％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムをそれ
ぞれ含むＰＢＳを注入して増殖細胞を脱着させた。
【００６９】この増殖細胞をＰＢＳで洗浄した後、２０
ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ塩化カリウム、１．５ｍＭ
塩化マグネシウム、０．１ｍＭ ＥＤＴＡを含む緩衝液
（ｐＨ７．４）（以下、「ハイポトニックバッファー」
と言う。）で再度洗浄し、細胞密度を２×１０7 個／ｍ
ｌとなるようにハイポトニックバッファーに懸濁した。
この細胞懸濁液を氷上でダウンス型ホモジナイザーによ
りホモジナイズし、１５，０００ｒｐｍで５分間遠心分
離して細胞核及び非破砕細胞を除去した後、２ｍＭ Ｃ
ＨＡＰＳを含むＰＢＳに対して一夜透析した。
【００７０】この透析物を実施例１−５に示した方法で
作製したモノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−１０Ｃを
固定化したカラムに負荷し、１２ｍＭ ＣＨＡＰＳを含
むＰＢＳを通液して非吸着成分を除いた。その後、カラ
ムに２ｍＭ ＣＨＡＰＳを含む３５ｍＭエチルアミン
（ｐＨ１０．８）を通液し、溶出液を分画採取した。そ
して、それぞれの画分におけるヒト由来のポリペプチド
の有無を実施例１−１に示した 125Ｉ標識ヒトＩＬ−１
８を用いる方法により判定し、選別し、合一したとこ
ろ、配列表における配列番号２０に示すアミノ酸配列の
ポリペプチドを含む水溶液が原料細胞１０8 個当り約２
ｍｌ得られた。なお、この水溶液の蛋白質含量は約１０
μｇ／ｍｌであった。
【００７１】斯くして得られたこの発明のポリペプチド
に実施例１で述べた方法を適用し、その理化学的性質を
調べた。その結果、本実施例で得られたポリペプチド
は、部分アミノ酸配列として、配列表における配列番号
１２乃至１９に示すアミノ酸配列をそれぞれ有するとと
もに、Ｌ４２８細胞由来のＩＬ−１８Ｒと同様の生理活
性を示した。
【００７２】
【実施例６】〈ヒト由来の可溶性ポリペプチド〉
【００７３】
【実施例６−１】〈組換えＤＮＡの調製〉０．５ｍｌ容
反応管に実施例３の方法により得た組換えＤＮＡ『ｐｃ
ＤＮＡ／ＨｕＩＬ−１８Ｒ』１ｎｇ、１０×ＰＣＲ緩衝
液１０μｌ及び２５ｍＭ ｄＮＴＰミックス１μｌをそ
れぞれとり、２．５単位／μｌ Ｐｆｕ ＤＮＡポリメ
ラーゼを１μｌ加えた後、センスプライマー及びアンチ
センスプライマーとして５´−ＴＣＡＧＴＣＧＡＣＧＣ
ＣＡＣＣＡＴＧＡＡＴＴＧＴＡＧＡＧＡＡＴＴＡ−３´
及び５´−ＧＡＡＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＣＡＴＴＡＴＣ
ＴＴＧＴＧＡＡＧＡＣＧＴＧ−３´で表される塩基配列
のポリヌクレオチドをそれぞれ適量加え、滅菌蒸留水で
１００μｌとした。次いで、混合物を、常法にしたがっ
て、９４℃で１分間、４２℃で２分間、７２℃で３分間
この順序でインキュベートするサイクルを３回繰返した
後、さらに、９４℃で１分間、６０℃で２分間、７２℃
で３分間この順序でインキュベートするサイクルを３５
回繰返してＰＣＲ反応させた。
【００７４】得られたＰＣＲ産物を５０ｎｇとり、これ
に宝酒造製プラスミドベクター『ｐＣＲ−Ｓｃｒｉｐｔ
ＳＫ（＋）』を１ｎｇ加え、さらに、宝酒造製ＤＮＡ
ライゲーションキット『ＤＮＡライゲーション・キット
・バージョン２』を用い、１６℃で２時間反応させてプ
ラスミドベクター内にＰＣＲ産物であるＤＮＡ断片を挿
入した。反応物の一部をとり、常法にしたがってストラ
タジーン製大腸菌『ＸＬ１−Ｂｌｕｅ ＭＲＦ´Ｋａ
ｎ』を形質転換した。
【００７５】上記で得られた形質転換体をアンピシリン
を１００μｇ／ｍｌ含むＬＢ培地（ｐＨ７．５）に接種
し、３７℃で１８時間培養した後、培養物から菌体を採
し、これを常法にしたがって処理してプラスミドＤＮＡ
を得た。ジデオキシ法により、このプラスミドＤＮＡが
配列表における配列番号１０に示す塩基配列を含有して
いることを確認した後、制限酵素ＮｏｔＩ及びＳａｌＩ
をそれぞれ作用させ、得られたＤＮＡ断片１００ｎｇ
に、予め制限酵素ＮｏｔＩ及びＸｈｏＩにより切断して
おいた、エス・ミズシマら『ニュークレイック・アシッ
ド・リサーチ』、第１８巻、第１７号、５，３３２頁
（１９９０年）に記載された方法に準じて調製したプラ
スミドベクター『ｐＥＦ−ＢＯＳ』を１０ｎｇ加え、宝
酒造製ライゲーションキット『ライゲーション・キット
・バージョン２』を用い、１６℃で２時間反応させた。
反応物の一部をとり、これを常法にしたがって『ＸＬ１
−Ｂｌｕｅ ＭＲＦ´Ｋａｎ』に導入して、この発明の
組換えＤＮＡ『ｐＥＦＨＩＬ１８Ｒ−１４』を含む形質
転換体『ＥＦＨＩＬ１８Ｒ−１４』を得た。常法にした
がって分析したところ、この組換えＤＮＡ『ｐＥＦＨＩ
Ｌ１８Ｒ−１４』においては、この発明のポリペプチド
をコードする、配列表における配列番号６に示す塩基配
列を含有するｃＤＮＡである『ＥＦＨＩＬ１８Ｒ−１４
ｃＤＮＡ』が、図７に示すように、延長因子１プロモ
ーター『ＥＦ１αＰ』の下流に連結されていた。
【００７６】
【実施例６−２】〈形質転換体の調製〉実施例６−１の
方法により得た形質転換体『ＥＦＨＩＬ１８Ｒ−１４』
をアンピシリンを１００μｇ／ｍｌ含むＬＢ培地（ｐＨ
７．５）に接種し、３７℃で１８時間培養した後、培養
物から菌体を採取し、これを常法にしたがって処理して
プラスミドＤＮＡを採取した。別途、アフリカミドリザ
ルの腎臓に由来する線維芽細胞株の一種であるＣＯＳ−
１細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６５０）を常法にしたが
って増殖させ、これに上記で得られたプラスミドＤＮＡ
を２０μｇとり、これを通常一般のエレクトロポレーシ
ョン法により１×１０7 個のＣＯＳ−１細胞に導入し
て、この発明のＤＮＡを含む形質転換体を得た。
【００７７】
【実施例６−３】〈可溶性ポリペプチドの製造〉平底培
養瓶に味の素製無血清培地『ＡＳＦ１０４』をとり、こ
れに実施例６−２の方法により得た形質転換体を１×１
０5 個／ｍｌの割合で接種し、常法にしたがって５％Ｃ
Ｏ2 インキュベーター中、３７℃で３日間培養した。培
養物から培養上清を採取し、実施例１−５の方法により
得たモノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−１０Ｃを固定
化したカラムに負荷し、１２ｍＭ ＣＨＡＰＳを含むＰ
ＢＳを通液して非吸着画分を除いた。その後、カラムに
２ｍＭ ＣＨＡＰＳを含む３５ｍＭエチルアミン（ｐＨ
１０．８）を通液し、溶出液を分画採取した。そして、
それぞれの画分におけるヒト由来の可溶性ポリペプチド
の有無を実施例１−１に示した 125Ｉ標識ヒトＩＬ−１
８を用いる方法により判定し、選別し、合一したとこ
ろ、配列表における配列番号２２に示すアミノ酸配列の
ポリペプチドを含む水溶液が原料細胞１０8 個当り約２
ｍｌ得られた。なお、この水溶液の蛋白質含量は約１０
μｇ／ｍｌであった。
【００７８】斯くして得られたこの発明の可溶性ポリペ
プチドに実施例１で述べた方法を適用し、その理化学的
性質を調べた。その結果、本実施例で得られた可溶性ポ
リペプドは、部分アミノ酸配列として、配列表における
配列番号１２乃至１７及び配列番号１９に示すアミノ酸
配列をそれぞれ含有するとともに、Ｌ４２８細胞由来の
ＩＬ−１８Ｒと同様の生理活性を示した。
【００７９】
【実施例７】〈ヒト由来の可溶性ポリペプチド〉０．５
ｍｌ容反応管に実施例６−１の方法により得た組換えＤ
ＮＡ『ｐＥＦＨＩＬ１８Ｒ−１４』１ｎｇ、１０×ＰＣ
Ｒ緩衝液１０μｌ及び２５ｍＭ ｄＮＴＰミックス１μ
ｌをそれぞれとり、２．５単位／μｌ Ｐｆｕ ＤＮＡ
ポリメラーゼを１μｌ加え、さらに、センスプライマー
及びアンチセンスプライマーとして、それぞれ、５´−
ＴＣＡＧＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＡＴＴＧＴＡ
ＧＡＧ−３´及び５´−ＧＡＡＧＣＧＧＣＣＧＣＴＣＡ
ＴＴＡＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＴＧＣＡ
ＡＣＡＴＧＧＴＴＡＡＧＣＴＴ−３´で表される塩基配
列のオリゴヌクレオチドをそれぞれ適量加えた後、滅菌
蒸留水で全量を１００μｌとした。この混合物を９４℃
で１分間、４２℃で２分間、７２℃で３分間この順序で
インキュベートするサイクルを３回繰返した後、さら
に、９４℃で１分間、６０℃で１分間、７２℃で１分間
この順序でインキュベートするサイクルを３５回繰返し
てＰＣＲ反応させて、配列表における配列番号５に示す
塩基配列、その塩基配列の５´末端に連結された制限酵
素ＳａｌＩによる切断部位とコザック配列、そして、３
´末端に連結された制限酵素ＮｏｔＩにより切断部位と
（Ｈｉｓ）6 タグをコードする塩基配列からなるＤＮＡ
断片を得た。このＤＮＡ断片を実施例６−１におけると
同様にしてストラタジーン製大腸菌株『ＸＬ１−Ｂｌｕ
ｅ ＭＲＦ´Ｋａｎ』に導入し、この発明の組換えＤＮ
Ａ『ｐＥＦＨＩＬ１８ＲＤ１−２−Ｈ』を含む形質転換
体を得た。常法にしたがって分析したところ、この組換
えＤＮＡにおいては、この発明のポリペプチドをコード
する、配列表における配列番号５に示す塩基配列を含有
するｃＤＮＡである『ＨＩＬ１８ＲＤ１−２−Ｈ』が、
図８に示すように、延長因子プロモーター『ＥＦ１α
Ｐ』の下流に連結されていた。
【００８０】斯くして得られた形質転換体を用い、実施
例６−２におけると同様にして組換えＤＮＡ『ｐＥＦＨ
ＩＬ１８ＲＤ１−２−Ｈ』をＣＯＳ−１細胞に導入した
後、そのＣＯＳ−１細胞を実施例６−３におけると同様
に培養した。培養物から培養上清を採取し、膜濾過によ
り濃縮した後、キアジェン製アフィニティークロマトグ
ラフィー用ゲル『Ｎｉ−ＮＴＡ Ｓｐｉｎ Ｋｉｔ』の
カラムに負荷し、カラムに２０ｍＭイミダゾールを含む
ＰＢＳを通液して非吸着画分を除いた。その後、カラム
に２５０ｍＭイミダゾールを含むＰＢＳを通液し、溶出
液を分画採取する一方、それぞれの画分におけるヒト由
来の可溶性ポリペプチドの有無を実施例１−１に示した
125Ｉ標識ヒトＩＬ−１８を用いる方法により判定し、
選別し、合一したところ、配列表における配列番号２３
に示すアミノ酸配列のポリペプチドを含む水溶液が原料
細胞１０8 個当り約２ｍｌ得られた。なお、この水溶液
の蛋白質含量は約１０μｇ／ｍｌであった。
【００８１】斯くして得られたこの発明の可溶性ポリペ
プチドに実施例１で述べた方法を適用し、その理化学的
性質を調べた。その結果、本実施例で得られた可溶性ポ
リペプチドは、部分アミノ酸配列として、配列表におけ
る配列番号１４乃至１６及び１９に示すアミノ酸配列の
それぞれの一部又は全てを含有するとともに、Ｌ４２８
細胞由来のＩＬ−１８Ｒと同様の生理活性を示した。
【００８２】
【実施例８】〈ヒト由来の可溶性ポリペプチド〉センス
プライマー及びアンチセンスプライマーとして、それぞ
れ、５´−ＴＣＡＧＴＣＧＡＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＡ
ＴＴＧＴＡＧＡＧ−３´及び５´−ＧＡＡＧＣＧＧＣＣ
ＧＣＴＣＡＴＴＡＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＴ
ＧＴＣＴＴＴＣＡＧＴＧＡＡＡＣＡＧＣＴ−３´で表さ
れる塩基配列のオリゴヌクレチオドを用いた以外は実施
例７と同様にして、この発明の組換えＤＮＡ『ｐＥＦＨ
ＩＬ１８ＲＤ１−Ｈ』を含む形質転換体を得た。常法に
したがって分析したところ、この組換えＤＮＡにおいて
は、この発明のポリペプチドをコードする、配列表にお
ける配列番号３に示す塩基配列を含有するｃＤＮＡであ
る『ＨＩＬ１８ＲＤ１−Ｈ』が、図９に示すように、延
長因子プロモーター『ＥＦ１αＰ』の下流に連結されて
いた。その後、実施例７におけると同様にして、この組
換えＤＮＡをＣＯＳ−１細胞に導入し、発現させたとこ
ろ、配列表における配列番号２４に示すアミノ酸配列の
ポリペプチドを含む水溶液が原料細胞１０8 個当り約２
ｍｌ得られた。なお、この水溶液の蛋白質含量は約１０
μｇ／ｍｌであった。
【００８３】斯くして得られたこの発明の可溶性ポリペ
プチドに実施例１で述べた方法を適用し、その理化学的
性質を調べた。その結果、本実施例で得られた可溶性ポ
リペプチドは、部分アミノ酸配列として、配列表におけ
る配列番号１４及び１５に示すアミノ酸配列をそれぞれ
含有するとともに、Ｌ４２８細胞由来のＩＬ−１８Ｒと
同様の生理活性を示した。
【００８４】
【実施例９】〈マウス由来の可溶性ポリペプチド〉
【００８５】
【実施例９−１】〈組換えＤＮＡの調製〉Ｌ４２８細胞
由来のｍＲＮＡに代えて、マウス肝細胞から常法にした
がって調製したｍＲＮＡを用いた以外は、実施例２−３
と同様に反応させて第一ストランドｃＤＮＡを含む反応
物を得た。さらに、ピー・パーネットらが『ザ・ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー』、第２７
１巻、３，９６７乃至３，９７０頁（１９９６年）に報
告しているアミノ酸配列及び配列表における配列番号１
に示す塩基配列に基づいて調製した５´−ＴＣＡＧＴＣ
ＧＡＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＣＡＴＣＡＴＧＡＡＧＡＡ−
３´及び５´−ＧＡＡＧＣＧＧＣＣＧＣＡＴＣＡＴＴＡ
ＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＴＧＴＡＡＡＧ
ＡＣＡＴＧＧＣＣ−３´で表される塩基配列のオリゴヌ
クレオチドをそれぞれセンスプライマー及びアンチセン
スプライマーとして用い、上記で得た反応物を実施例２
−３と同様にＰＣＲ反応させて、配列表における配列番
号１１に示す塩基配列と、その塩基配列の５´末端に連
結された制限酵素ＳａｌＩによる切断部位と、配列番号
１１に示す塩基配列の３´末端に連結された制限酵素Ｎ
ｏｔＩによる切断部位及び（Ｈｉｓ）6 タグをコードす
る塩基配列とを含んでなるＤＮＡ断片を得た。
【００８６】その後、実施例６−１に示す方法により、
このＤＮＡ断片を大腸菌『ＸＬ１−Ｂｌｕｅ ＭＲＦ´
Ｋａｎ』に導入して形質転換し、形質転換体からプラス
ミドＤＮＡを採取し、それが配列表における配列番号１
１に示す塩基配列を含んでなることを確認した後、プラ
スミドベクター『ｐＥＦ−ＢＯＳ』を用いて大腸菌『Ｘ
Ｌ１−Ｂｌｕｅ ＭＲＦ´Ｋａｎ』に導入し、この発明
の組換えＤＮＡ『ｐＥＦＭＩＬ−１８ＲＳＨＴ』を含む
形質転換体『ＥＦＭＩＬ１８ＲＳＨＴ』を得た。常法に
したがって分析したところ、この組換えＤＮＡ『ｐＥＦ
ＭＩＬ１８ＲＳＨＴ』においては、この発明のポリペプ
チドをコードする、配列表における配列番号４に示す塩
基配列を含有するｃＤＮＡである『ＥＦＭＩＬ１８ＲＳ
ＨＴ ｃＤＮＡ』が、図１０に示すように、延長因子１
プロモーター『ＥＦ１αＰ』の下流に連結されていた。
【００８７】
【実施例９−２】〈形質転換体と可溶性ポリペプチドの
調製〉実施例６−２で述べた方法により、実施例９−１
の方法により得た形質転換体『ＥＦＭＩＬ１８ＲＳＨ
Ｔ』からプラスミドＤＮＡを採取し、これをＣＯＳ−１
細胞に導入して、マウス由来の可溶性ポリペプチドをコ
ードするＤＮＡを含む形質転換体を得た。
【００８８】平底培養瓶に味の素製無血清培地『ＡＳＦ
１０４』をとり、これに形質転換したＣＯＳ−１細胞を
１×１０5 個／ｍｌの割合で接種し、常法にしたがって
５％ＣＯ2 インキュベーター中、３７℃で３日間培養し
た。培養物から培養上清を採取し、キアジェン製アフィ
ニティークロマトグラフィー用ゲル『Ｎｉ−ＮＴＡ』の
カラムに負荷し、２０ｍＭイミダゾールを含むＰＢＳを
通液して非吸着画分を除去した後、カラムに２５０ｍＭ
イミダゾールを含むＰＢＳを通液し、溶出液を分画採取
した。それぞれの画分におけるマウス由来の可溶性ポリ
ペプチドの有無を実施例１−１に示した 125Ｉ標識マウ
スＩＬ−１８を用いる方法により判定し、選別し、合一
したところ、配列表における配列番号２５に示すアミノ
酸配列のポリペプチドを含む水溶液が原料細胞１０8 個
当り約２ｍｌ得られた。なお、この水溶液の蛋白質含量
は約１００μｇ／ｍｌであった。実施例１で述べた方法
に準じて調べたところ、斯くして得られた可溶性ポリペ
プチドはマウスＩＬ−１８をよく中和した。
【００８９】
【実施例１０】〈液剤〉安定剤として林原製結晶トレハ
ロース粉末『トレハオース』を１％（ｗ／ｖ）含む生理
食塩水に実施例５乃至８に記載されたいずれかの方法に
より得たポリペプチドのいずれかを１ｍｇ／ｍｌになる
ように溶解し、常法にしたがって精密濾過により除菌し
て４種類の液剤を得た。
【００９０】安定性に優れた本品は、自己免疫疾患を含
む感受性疾患を治療・予防するための注射剤、点眼剤、
点鼻剤などとして有用である。
【００９１】
【実施例１１】〈乾燥注射剤〉安定剤としてシュークロ
ースを１％（ｗ／ｖ）含む生理食塩水１００ｍｌに実施
例５乃至８に記載されたいずれかの方法により得たポリ
ペプチドのいずれかを１００ｍｇ溶解し、常法にしたが
って精密濾過により除菌した後、バイアル瓶に１ｍｌず
つ分注し、凍結乾燥し、密栓して、４種類の粉末製剤を
得た。
【００９２】安定性に優れた本品は、自己免疫疾患を含
む感受性疾患を治療・予防するための乾燥注射剤として
有用である。
【００９３】
【実施例１２】〈軟膏剤〉滅菌蒸留水に和光純薬工業製
カルボキシビニルポリマー『ハイビスワコー１０４』と
林原製結晶トレハロース粉末『トレハオース』をそれぞ
れ濃度１．４％（ｗ／ｗ）及び２．０％（ｗ／ｗ）にな
るように溶解し、実施例５乃至８に記載されたいずれか
の方法により得たポリペプチドのいずれかを均一に混合
した後、ｐＨ７．２に調整して、１ｇ当り、この発明の
ポリペプチドを約１ｍｇ含む４種類のペースト製剤を得
た。
【００９４】延展性と安定性に優れた本品は、自己免疫
疾患を含む感受性疾患を治療・予防するための軟膏剤と
して有用である。
【００９５】
【実施例１３】〈錠剤〉林原製無水結晶α−マルトース
粉末『ファイントース』に実施例５乃至８に記載された
いずれかの方法により得たポリペプチドのいずれかと細
胞賦活剤としてのルミンを均一に混合し、得られた混合
物を常法により打錠して、製品１錠（約２００ｍｇ）当
り、この発明のポリペプチド及びルミンをそれぞれ約１
ｍｇ含む４種類の錠剤を得た。
【００９６】摂取性、安定性に優れ、細胞賦活作用も有
する本品は、自己免疫疾患を含む感受性疾患を治療・予
防するための錠剤として有用である。
【００９７】
【実験】〈急性毒性試験〉常法にしたがって、８週齢の
マウスに実施例１０乃至１３の方法により得た種々剤型
の感受性疾患剤を経皮、経口又は腹腔内に注射投与し
た。その結果、被検試料のＬＤ５０は、この発明のポリ
ペプチドの量に換算すると、いずれの投与経路によって
も約１ｍｇ／マウス体重以上であった。このことは、こ
の発明のポリペプチドがヒトを含む哺乳類に投与する医
薬品に配合して安全であることを裏付けている。
【００９８】
【発明の効果】以上説明したとおり、この発明はＩＬ−
１８を認識する新規な受容体蛋白質の発見に基づくもの
である。この発明のポリペプチドは、ヒトを含む哺乳類
において免疫反応を抑制したり調節する性質を有するの
で、臓器移植に伴う拒絶反応の緩和や、過剰な免疫反応
に起因する種々の疾患の治療・予防に著効を発揮する。
さらに、この発明のポリペプチドはＩＬ−１８の生理作
用の解明や、ＩＬ−１８Ｒに特異的なモノクローナル抗
体を産生し得るハイブリドーマの樹立、さらには、ＩＬ
−１８を精製したり検出するためのアフィニティークロ
マトグラフィーや標識アッセイにも有用である。また、
これに加え、この発明のポリペプチド、とりわけ、この
発明の可溶性ポリペプチドは、ＩＬ−１８Ｒに対する作
動薬や拮抗薬の、生体内又は生体外での検索にも有用で
ある。斯くも有用なるポリペプチドは、組換えＤＮＡ技
術を利用するこの発明の方法により、所望量を容易に製
造することができる。
【００９９】この発明は斯くも顕著な作用効果を奏する
発明であり、斯界に貢献すること誠に多大な意義のある
発明であると言える。
【０１００】
【配列表】
配列番号：1 配列の長さ：1563 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：1..1563 特徴を決定した方法：E 配列 GAA TCT TGT ACT TCA CGT CCC CAC ATT ACT GTG GTT GAA GGG GAA CCT 48 Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu Gly Glu Pro 1 5 10 15 TTC TAT CTG AAA CAT TGC TCG TGT TCA CTT GCA CAT GAG ATT GAA ACA 96 Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu Ile Glu Thr 20 25 30 ACC ACC AAA AGC TGG TAC AAA AGC AGT GGA TCA CAG GAA CAT GTG GAG 144 Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu His Val Glu 35 40 45 CTG AAC CCA AGG AGT TCC TCG AGA ATT GCT TTG CAT GAT TGT GTT TTG 192 Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp Cys Val Leu 50 55 60 GAG TTT TGG CCA GTT GAG TTG AAT GAC ACA GGA TCT TAC TTT TTC CAA 240 Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Gln 65 70 75 80 ATG AAA AAT TAT ACT CAG AAA TGG AAA TTA AAT GTC ATC AGA AGA AAT 288 Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile Arg Arg Asn 85 90 95 AAA CAC AGC TGT TTC ACT GAA AGA CAA GTA ACT AGT AAA ATT GTG GAA 336 Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg Gln Val Thr Ser Lys Ile Val Glu 100 105 110 GTT AAA AAA TTT TTT CAG ATA ACC TGT GAA AAC AGT TAC TAT CAA ACA 384 Val Lys Lys Phe Phe Gln Ile Thr Cys Glu Asn Ser Tyr Tyr Gln Thr 115 120 125 CTG GTC AAC AGC ACA TCA TTG TAT AAG AAC TGT AAA AAG CTA CTA CTG 432 Leu Val Asn Ser Thr Ser Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Lys Leu Leu Leu 130 135 140 GAG AAC AAT AAA AAC CCA ACG ATA AAG AAG AAC GCC GAG TTT GAA GAT 480 Glu Asn Asn Lys Asn Pro Thr Ile Lys Lys Asn Ala Glu Phe Glu Asp 145 150 155 160 CAG GGG TAT TAC TCC TGC GTG CAT TTC CTT CAT CAT AAT GGA AAA CTA 528 Gln Gly Tyr Tyr Ser Cys Val His Phe Leu His His Asn Gly Lys Leu 165 170 175 TTT AAT ATC ACC AAA ACC TTC AAT ATA ACA ATA GTG GAA GAT CGC AGT 576 Phe Asn Ile Thr Lys Thr Phe Asn Ile Thr Ile Val Glu Asp Arg Ser 180 185 190 AAT ATA GTT CCG GTT CTT CTT GGA CCA AAG CTT AAC CAT GTT GCA GTG 624 Asn Ile Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys Leu Asn His Val Ala Val 195 200 205 GAA TTA GGA AAA AAC GTA AGG CTC AAC TGC TCT GCT TTG CTG AAT GAA 672 Glu Leu Gly Lys Asn Val Arg Leu Asn Cys Ser Ala Leu Leu Asn Glu 210 215 220 GAG GAT GTA ATT TAT TGG ATG TTC GGG GAA GAA AAT GGA TCG GAT CCT 720 Glu Asp Val Ile Tyr Trp Met Phe Gly Glu Glu Asn Gly Ser Asp Pro 225 230 235 240 AAT ATA CAT GAA GAG AAA GAA ATG AGA ATT ATG ACT CCA GAA GGC AAA 768 Asn Ile His Glu Glu Lys Glu Met Arg Ile Met Thr Pro Glu Gly Lys 245 250 255 TGG CAT GCT TCA AAA GTA TTG AGA ATT GAA AAT ATT GGT GAA AGC AAT 816 Trp His Ala Ser Lys Val Leu Arg Ile Glu Asn Ile Gly Glu Ser Asn 260 265 270 CTA AAT GTT TTA TAT AAT TGC ACT GTG GCC AGC ACG GGA GGC ACA GAC 864 Leu Asn Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Ser Thr Gly Gly Thr Asp 275 280 285 ACC AAA AGC TTC ATC TTG GTG AGA AAA GAC ATG GCT GAT ATC CCA GGC 912 Thr Lys Ser Phe Ile Leu Val Arg Lys Asp Met Ala Asp Ile Pro Gly 290 295 300 CAC GTC TTC ACA AGA GGA ATG ATC ATA GCT GTT TTG ATC TTG GTG GCA 960 His Val Phe Thr Arg Gly Met Ile Ile Ala Val Leu Ile Leu Val Ala 305 310 315 320 GTA GTG TGC CTA GTG ACT GTG TGT GTC ATT TAT AGA GTT GAC TTG GTT 1008 Val Val Cys Leu Val Thr Val Cys Val Ile Tyr Arg Val Asp Leu Val 325 330 335 CTA TTT TAT AGA CAT TTA ACG AGA AGA GAT GAA ACA TTA ACA GAT GGA 1056 Leu Phe Tyr Arg His Leu Thr Arg Arg Asp Glu Thr Leu Thr Asp Gly 340 345 350 AAA ACA TAT GAT GCT TTT GTG TCT TAC CTA AAA GAA TGC CGA CCT GAA 1104 Lys Thr Tyr Asp Ala Phe Val Ser Tyr Leu Lys Glu Cys Arg Pro Glu 355 360 365 AAT GGA GAG GAG CAC ACC TTT GCT GTG GAG ATT TTG CCC AGG GTG TTG 1152 Asn Gly Glu Glu His Thr Phe Ala Val Glu Ile Leu Pro Arg Val Leu 370 375 380 GAG AAA CAT TTT GGG TAT AAG TTA TGC ATA TTT GAA AGG GAT GTA GTG 1200 Glu Lys His Phe Gly Tyr Lys Leu Cys Ile Phe Glu Arg Asp Val Val 385 390 395 400 CCT GGA GGA GCT GTT GTT GAT GAA ATC CAC TCA CTG ATA GAG AAA AGC 1248 Pro Gly Gly Ala Val Val Asp Glu Ile His Ser Leu Ile Glu Lys Ser 405 410 415 CGA AGA CTA ATC ATT GTC CTA AGT AAA AGT TAT ATG TCT AAT GAG GTC 1296 Arg Arg Leu Ile Ile Val Leu Ser Lys Ser Tyr Met Ser Asn Glu Val 420 425 430 AGG TAT GAA CTT GAA AGT GGA CTC CAT GAA GCA TTG GTG GAA AGA AAA 1344 Arg Tyr Glu Leu Glu Ser Gly Leu His Glu Ala Leu Val Glu Arg Lys 435 440 445 ATT AAA ATA ATC TTA ATT GAA TTT ACA CCT GTT ACT GAC TTC ACA TTC 1392 Ile Lys Ile Ile Leu Ile Glu Phe Thr Pro Val Thr Asp Phe Thr Phe 450 455 460 TTG CCC CAA TCA CTA AAG CTT TTG AAA TCT CAC AGA GTT CTG AAG TGG 1440 Leu Pro Gln Ser Leu Lys Leu Leu Lys Ser His Arg Val Leu Lys Trp 465 470 475 480 AAG GCC GAT AAA TCT CTT TCT TAT AAC TCA AGG TTC TGG AAG AAC CTT 1488 Lys Ala Asp Lys Ser Leu Ser Tyr Asn Ser Arg Phe Trp Lys Asn Leu 485 490 495 CTT TAC TTA ATG CCT GCA AAA ACA GTC AAG CCA GGT AGA GAC GAA CCG 1536 Leu Tyr Leu Met Pro Ala Lys Thr Val Lys Pro Gly Arg Asp Glu Pro 500 505 510 GAA GTC TTG CCT GTT CTT TCC GAG TCT 1563 Glu Val Leu Pro Val Leu Ser Glu Ser 515 520
【０１０１】配列番号：2 配列の長さ：1557 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：1..1557 特徴を決定した方法：S 配列 TCA AAA AGT TGT ATT CAC CGA TCA CAA ATT CAT GTG GTA GAG GGA GAA 48 Ser Lys Ser Cys Ile His Arg Ser Gln Ile His Val Val Glu Gly Glu 1 5 10 15 CCT TTT TAT CTG AAG CCA TGT GGC ATA TCT GCA CCA GTG CAC AGG AAT 96 Pro Phe Tyr Leu Lys Pro Cys Gly Ile Ser Ala Pro Val His Arg Asn 20 25 30 GAA ACA GCC ACC ATG AGA TGG TTC AAA GGC AGT GCT TCA CAT GAG TAT 144 Glu Thr Ala Thr Met Arg Trp Phe Lys Gly Ser Ala Ser His Glu Tyr 35 40 45 AGA GAG CTG AAC AAC AGA AGC TCG CCC AGA GTC ACT TTT CAT GAT CAC 192 Arg Glu Leu Asn Asn Arg Ser Ser Pro Arg Val Thr Phe His Asp His 50 55 60 ACC TTG GAA TTC TGG CCA GTT GAG ATG GAG GAT GAG GGA ACG TAC ATT 240 Thr Leu Glu Phe Trp Pro Val Glu Met Glu Asp Glu Gly Thr Tyr Ile 65 70 75 80 TCT CAA GTC GGA AAT GAT CGT CGC AAT TGG ACC TTA AAT GTC ACC AAA 288 Ser Gln Val Gly Asn Asp Arg Arg Asn Trp Thr Leu Asn Val Thr Lys 85 90 95 AGA AAC AAA CAC AGC TGT TTC TCT GAC AAG CTC GTG ACA AGC AGA GAT 336 Arg Asn Lys His Ser Cys Phe Ser Asp Lys Leu Val Thr Ser Arg Asp 100 105 110 GTT GAA GTT AAC AAA TCT CTG CAT ATC ACT TGT AAG AAT CCT AAC TAT 384 Val Glu Val Asn Lys Ser Leu His Ile Thr Cys Lys Asn Pro Asn Tyr 115 120 125 GAA GAG CTG ATC CAG GAC ACA TGG CTG TAT AAG AAC TGT AAG GAA ATA 432 Glu Glu Leu Ile Gln Asp Thr Trp Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Glu Ile 130 135 140 TCC AAA ACC CCA AGG ATC CTG AAG GAT GCC GAG TTT GGA GAT GAG GGC 480 Ser Lys Thr Pro Arg Ile Leu Lys Asp Ala Glu Phe Gly Asp Glu Gly 145 150 155 160 TAC TAC TCC TGC GTG TTT TCT GTC CAC CAT AAT GGG ACA CGG TAC AAC 528 Tyr Tyr Ser Cys Val Phe Ser Val His His Asn Gly Thr Arg Tyr Asn 165 170 175 ATC ACC AAG ACT GTC AAT ATA ACA GTT ATT GAA GGA AGG AGT AAA GTA 576 Ile Thr Lys Thr Val Asn Ile Thr Val Ile Glu Gly Arg Ser Lys Val 180 185 190 ACT CCA GCT ATT TTA GGA CCA AAG TGT GAG AAG GTT GGT GTA GAA CTA 624 Thr Pro Ala Ile Leu Gly Pro Lys Cys Glu Lys Val Gly Val Glu Leu 195 200 205 GGA AAG GAT GTG GAG TTG AAC TGC AGT GCT TCA TTG AAT AAA GAC GAT 672 Gly Lys Asp Val Glu Leu Asn Cys Ser Ala Ser Leu Asn Lys Asp Asp 210 215 220 CTG TTT TAT TGG AGC ATC AGG AAA GAG GAC AGC TCA GAC CCT AAT GTG 720 Leu Phe Tyr Trp Ser Ile Arg Lys Glu Asp Ser Ser Asp Pro Asn Val 225 230 235 240 CAA GAA GAC AGG AAG GAG ACG ACA ACA TGG ATT TCT GAA GGC AAA CTG 768 Gln Glu Asp Arg Lys Glu Thr Thr Thr Trp Ile Ser Glu Gly Lys Leu 245 250 255 CAT GCT TCA AAA ATA CTG AGA TTT CAG AAA ATT ACT GAA AAC TAT CTC 816 His Ala Ser Lys Ile Leu Arg Phe Gln Lys Ile Thr Glu Asn Tyr Leu 260 265 270 AAT GTT TTA TAT AAT TGC ACC GTG GCC AAC GAA GAA GCC ATA GAC ACC 864 Asn Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Asn Glu Glu Ala Ile Asp Thr 275 280 285 AAG AGC TTC GTC TTG GTG AGA AAA GAA ATA CCT GAT ATC CCA GGC CAT 912 Lys Ser Phe Val Leu Val Arg Lys Glu Ile Pro Asp Ile Pro Gly His 290 295 300 GTC TTT ACA GGA GGA GTA ACT GTG CTT GTT CTC GCC TCT GTG GCA GCA 960 Val Phe Thr Gly Gly Val Thr Val Leu Val Leu Ala Ser Val Ala Ala 305 310 315 320 GTG TGT ATA GTG ATT TTG TGT GTC ATT TAT AAA GTT GAC TTG GTT CTG 1008 Val Cys Ile Val Ile Leu Cys Val Ile Tyr Lys Val Asp Leu Val Leu 325 330 335 TTC TAT AGG CGC ATA GCG GAA AGA GAC GAG ACA CTA ACA GAT GGT AAA 1056 Phe Tyr Arg Arg Ile Ala Glu Arg Asp Glu Thr Leu Thr Asp Gly Lys 340 345 350 ACA TAT GAT GCC TTT GTG TCT TAC CTG AAA GAG TGT CAT CCT GAG AAT 1104 Thr Tyr Asp Ala Phe Val Ser Tyr Leu Lys Glu Cys His Pro Glu Asn 355 360 365 AAA GAA GAG TAT ACT TTT GCT GTG GAG ACG TTA CCC AGG GTC CTG GAG 1152 Lys Glu Glu Tyr Thr Phe Ala Val Glu Thr Leu Pro Arg Val Leu Glu 370 375 380 AAA CAG TTT GGG TAT AAG TTA TGC ATA TTT GAA AGA GAT GTG GTG CCT 1200 Lys Gln Phe Gly Tyr Lys Leu Cys Ile Phe Glu Arg Asp Val Val Pro 385 390 395 400 GGC GGA GCT GTT GTC GAG GAG ATC CAT TCA CTG ATA GAG AAA AGC CGG 1248 Gly Gly Ala Val Val Glu Glu Ile His Ser Leu Ile Glu Lys Ser Arg 405 410 415 AGG CTA ATC ATC GTT CTC AGC CAG AGT TAC CTG ACT AAC GGA GCC AGG 1296 Arg Leu Ile Ile Val Leu Ser Gln Ser Tyr Leu Thr Asn Gly Ala Arg 420 425 430 CGT GAG CTC GAG AGT GGA CTC CAC GAA GCA CTG GTA GAG AGG AAG ATT 1344 Arg Glu Leu Glu Ser Gly Leu His Glu Ala Leu Val Glu Arg Lys Ile 435 440 445 AAG ATC ATC TTA ATT GAG TTT ACT CCA GCC AGC AAC ATC ACC TTT CTC 1392 Lys Ile Ile Leu Ile Glu Phe Thr Pro Ala Ser Asn Ile Thr Phe Leu 450 455 460 CCC CCG TCG CTG AAA CTC CTG AAG TCC TAC AGA GTT CTA AAA TGG AGG 1440 Pro Pro Ser Leu Lys Leu Leu Lys Ser Tyr Arg Val Leu Lys Trp Arg 465 470 475 480 GCT GAC AGT CCC TCC ATG AAC TCA AGG TTC TGG AAG AAT CTT GTT TAC 1488 Ala Asp Ser Pro Ser Met Asn Ser Arg Phe Trp Lys Asn Leu Val Tyr 485 490 495 CTG ATG CCC GCA AAA GCC GTC AAG CCA TGG AGA GAG GAG TCG GAG GCG 1536 Leu Met Pro Ala Lys Ala Val Lys Pro Trp Arg Glu Glu Ser Glu Ala 500 505 510 CGG TCT GTT CTC TCA GCA CCT 1557 Arg Ser Val Leu Ser Ala Pro 515
【０１０２】配列番号：3 配列の長さ：312 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴： 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：1..312 特徴を決定した方法：S 配列 GAA TCT TGT ACT TCA CGT CCC CAC ATT ACT GTG GTT GAA GGG GAA CCT 48 Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu Gly Glu Pro 1 5 10 15 TTC TAT CTG AAA CAT TGC TCG TGT TCA CTT GCA CAT GAG ATT GAA ACA 96 Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu Ile Glu Thr 20 25 30 ACC ACC AAA AGC TGG TAC AAA AGC AGT GGA TCA CAG GAA CAT GTG GAG 144 Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu His Val Glu 35 40 45 CTG AAC CCA AGG AGT TCC TCG AGA ATT GCT TTG CAT GAT TGT GTT TTG 192 Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp Cys Val Leu 50 55 60 GAG TTT TGG CCA GTT GAG TTG AAT GAC ACA GGA TCT TAC TTT TTC CAA 240 Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Gln 65 70 75 80 ATG AAA AAT TAT ACT CAG AAA TGG AAA TTA AAT GTC ATC AGA AGA AAT 288 Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile Arg Arg Asn 85 90 95 AAA CAC AGC TGT TTC ACT GAA AGA 312 Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg 100
【０１０３】配列番号：4 配列の長さ：921 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：1..921 特徴を決定した方法：S 配列 TCA AAA AGT TGT ATT CAC CGA TCA CAA ATT CAT GTG GTA GAG GGA GAA 48 Ser Lys Ser Cys Ile His Arg Ser Gln Ile His Val Val Glu Gly Glu 1 5 10 15 CCT TTT TAT CTG AAG CCA TGT GGC ATA TCT GCA CCA GTG CAC AGG AAT 96 Pro Phe Tyr Leu Lys Pro Cys Gly Ile Ser Ala Pro Val His Arg Asn 20 25 30 GAA ACA GCC ACC ATG AGA TGG TTC AAA GGC AGT GCT TCA CAT GAG TAT 144 Glu Thr Ala Thr Met Arg Trp Phe Lys Gly Ser Ala Ser His Glu Tyr 35 40 45 AGA GAG CTG AAC AAC AGA AGC TCG CCC AGA GTC ACT TTT CAT GAT CAC 192 Arg Glu Leu Asn Asn Arg Ser Ser Pro Arg Val Thr Phe His Asp His 50 55 60 ACC TTG GAA TTC TGG CCA GTT GAG ATG GAG GAT GAG GGA ACG TAC ATT 240 Thr Leu Glu Phe Trp Pro Val Glu Met Glu Asp Glu Gly Thr Tyr Ile 65 70 75 80 TCT CAA GTC GGA AAT GAT CGT CGC AAT TGG ACC TTA AAT GTC ACC AAA 288 Ser Gln Val Gly Asn Asp Arg Arg Asn Trp Thr Leu Asn Val Thr Lys 85 90 95 AGA AAC AAA CAC AGC TGT TTC TCT GAC AAG CTC GTG ACA AGC AGA GAT 336 Arg Asn Lys His Ser Cys Phe Ser Asp Lys Leu Val Thr Ser Arg Asp 100 105 110 GTT GAA GTT AAC AAA TCT CTG CAT ATC ACT TGT AAG AAT CCT AAC TAT 384 Val Glu Val Asn Lys Ser Leu His Ile Thr Cys Lys Asn Pro Asn Tyr 115 120 125 GAA GAG CTG ATC CAG GAC ACA TGG CTG TAT AAG AAC TGT AAG GAA ATA 432 Glu Glu Leu Ile Gln Asp Thr Trp Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Glu Ile 130 135 140 TCC AAA ACC CCA AGG ATC CTG AAG GAT GCC GAG TTT GGA GAT GAG GGC 480 Ser Lys Thr Pro Arg Ile Leu Lys Asp Ala Glu Phe Gly Asp Glu Gly 145 150 155 160 TAC TAC TCC TGC GTG TTT TCT GTC CAC CAT AAT GGG ACA CGG TAC AAC 528 Tyr Tyr Ser Cys Val Phe Ser Val His His Asn Gly Thr Arg Tyr Asn 165 170 175 ATC ACC AAG ACT GTC AAT ATA ACA GTT ATT GAA GGA AGG AGT AAA GTA 576 Ile Thr Lys Thr Val Asn Ile Thr Val Ile Glu Gly Arg Ser Lys Val 180 185 190 ACT CCA GCT ATT TTA GGA CCA AAG TGT GAG AAG GTT GGT GTA GAA CTA 624 Thr Pro Ala Ile Leu Gly Pro Lys Cys Glu Lys Val Gly Val Glu Leu 195 200 205 GGA AAG GAT GTG GAG TTG AAC TGC AGT GCT TCA TTG AAT AAA GAC GAT 672 Gly Lys Asp Val Glu Leu Asn Cys Ser Ala Ser Leu Asn Lys Asp Asp 210 215 220 CTG TTT TAT TGG AGC ATC AGG AAA GAG GAC AGC TCA GAC CCT AAT GTG 720 Leu Phe Tyr Trp Ser Ile Arg Lys Glu Asp Ser Ser Asp Pro Asn Val 225 230 235 240 CAA GAA GAC AGG AAG GAG ACG ACA ACA TGG ATT TCT GAA GGC AAA CTG 768 Gln Glu Asp Arg Lys Glu Thr Thr Thr Trp Ile Ser Glu Gly Lys Leu 245 250 255 CAT GCT TCA AAA ATA CTG AGA TTT CAG AAA ATT ACT GAA AAC TAT CTC 816 His Ala Ser Lys Ile Leu Arg Phe Gln Lys Ile Thr Glu Asn Tyr Leu 260 265 270 AAT GTT TTA TAT AAT TGC ACC GTG GCC AAC GAA GAA GCC ATA GAC ACC 864 Asn Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Asn Glu Glu Ala Ile Asp Thr 275 280 285 AAG AGC TTC GTC TTG GTG AGA AAA GAA ATA CCT GAT ATC CCA GGC CAT 912 Lys Ser Phe Val Leu Val Arg Lys Glu Ile Pro Asp Ile Pro Gly His 290 295 300 GTC TTT ACA 921 Val Phe Thr 305
【０１０４】配列番号：5 配列の長さ：621 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴： 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：1..621 特徴を決定した方法：S 配列 GAA TCT TGT ACT TCA CGT CCC CAC ATT ACT GTG GTT GAA GGG GAA CCT 48 Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu Gly Glu Pro 1 5 10 15 TTC TAT CTG AAA CAT TGC TCG TGT TCA CTT GCA CAT GAG ATT GAA ACA 96 Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu Ile Glu Thr 20 25 30 ACC ACC AAA AGC TGG TAC AAA AGC AGT GGA TCA CAG GAA CAT GTG GAG 144 Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu His Val Glu 35 40 45 CTG AAC CCA AGG AGT TCC TCG AGA ATT GCT TTG CAT GAT TGT GTT TTG 192 Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp Cys Val Leu 50 55 60 GAG TTT TGG CCA GTT GAG TTG AAT GAC ACA GGA TCT TAC TTT TTC CAA 240 Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Gln 65 70 75 80 ATG AAA AAT TAT ACT CAG AAA TGG AAA TTA AAT GTC ATC AGA AGA AAT 288 Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile Arg Arg Asn 85 90 95 AAA CAC AGC TGT TTC ACT GAA AGA CAA GTA ACT AGT AAA ATT GTG GAA 336 Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg Gln Val Thr Ser Lys Ile Val Glu 100 105 110 GTT AAA AAA TTT TTT CAG ATA ACC TGT GAA AAC AGT TAC TAT CAA ACA 384 Val Lys Lys Phe Phe Gln Ile Thr Cys Glu Asn Ser Tyr Tyr Gln Thr 115 120 125 CTG GTC AAC AGC ACA TCA TTG TAT AAG AAC TGT AAA AAG CTA CTA CTG 432 Leu Val Asn Ser Thr Ser Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Lys Leu Leu Leu 130 135 140 GAG AAC AAT AAA AAC CCA ACG ATA AAG AAG AAC GCC GAG TTT GAA GAT 480 Glu Asn Asn Lys Asn Pro Thr Ile Lys Lys Asn Ala Glu Phe Glu Asp 145 150 155 160 GAG GGG TAT TAC TCC TGC GTG CAT TTC CTT CAT CAT AAT GGA AAA CTA 528 Gln Gly Tyr Tyr Ser Cys Val His Phe Leu His His Asn Gly Lys Leu 165 170 175 TTT AAT ATC ACC AAA ACC TTC AAT ATA ACA ATA GTG GAA GAT CGC AGT 576 Phe Asn Ile Thr Lys Thr Phe Asn Ile Thr Ile Val Glu Asp Arg Ser 180 185 190 AAT ATA GTT CCG GTT CTT CTT GGA CCA AAG CTT AAC CAT GTT GCA 621 Asn Ile Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys Leu Asn His Val Ala 195 200 205
【０１０５】配列番号：6 配列の長さ：927 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：1..927 特徴を決定した方法：E 配列 GAA TCT TGT ACT TCA CGT CCC CAC ATT ACT GTG GTT GAA GGG GAA CCT 48 Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu Gly Glu Pro 1 5 10 15 TTC TAT CTG AAA CAT TGC TCG TGT TCA CTT GCA CAT GAG ATT GAA ACA 96 Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu Ile Glu Thr 20 25 30 ACC ACC AAA AGC TGG TAC AAA AGC AGT GGA TCA CAG GAA CAT GTG GAG 144 Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu His Val Glu 35 40 45 CTG AAC CCA AGG AGT TCC TCG AGA ATT GCT TTG CAT GAT TGT GTT TTG 192 Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp Cys Val Leu 50 55 60 GAG TTT TGG CCA GTT GAG TTG AAT GAC ACA GGA TCT TAC TTT TTC CAA 240 Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Gln 65 70 75 80 ATG AAA AAT TAT ACT CAG AAA TGG AAA TTA AAT GTC ATC AGA AGA AAT 288 Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile Arg Arg Asn 85 90 95 AAA CAC AGC TGT TTC ACT GAA AGA CAA GTA ACT AGT AAA ATT GTG GAA 336 Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg Gln Val Thr Ser Lys Ile Val Glu 100 105 110 GTT AAA AAA TTT TTT CAG ATA ACC TGT GAA AAC AGT TAC TAT CAA ACA 384 Val Lys Lys Phe Phe Gln Ile Thr Cys Glu Asn Ser Tyr Tyr Gln Thr 115 120 125 CTG GTC AAC AGC ACA TCA TTG TAT AAG AAC TGT AAA AAG CTA CTA CTG 432 Leu Val Asn Ser Thr Ser Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Lys Leu Leu Leu 130 135 140 GAG AAC AAT AAA AAC CCA ACG ATA AAG AAG AAC GCC GAG TTT GAA GAT 480 Glu Asn Asn Lys Asn Pro Thr Ile Lys Lys Asn Ala Glu Phe Glu Asp 145 150 155 160 CAG GGG TAT TAC TCC TGC GTG CAT TTC CTT CAT CAT AAT GGA AAA CTA 528 Gln Gly Tyr Tyr Ser Cys Val His Phe Leu His His Asn Gly Lys Leu 165 170 175 TTT AAT ATC ACC AAA ACC TTC AAT ATA ACA ATA GTG GAA GAT CGC AGT 576 Phe Asn Ile Thr Lys Thr Phe Asn Ile Thr Ile Val Glu Asp Arg Ser 180 185 190 AAT ATA GTT CCG GTT CTT CTT GGA CCA AAG CTT AAC CAT GTT GCA GTG 624 Asn Ile Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys Leu Asn His Val Ala Val 195 200 205 GAA TTA GGA AAA AAC GTA AGG CTC AAC TGC TCT GCT TTG CTG AAT GAA 672 Glu Leu Gly Lys Asn Val Arg Leu Asn Cys Ser Ala Leu Leu Asn Glu 210 215 220 GAG GAT GTA ATT TAT TGG ATG TTC GGG GAA GAA AAT GGA TCG GAT CCT 720 Glu Asp Val Ile Tyr Trp Met Phe Gly Glu Glu Asn Gly Ser Asp Pro 225 230 235 240 AAT ATA CAT GAA GAG AAA GAA ATG AGA ATT ATG ACT CCA GAA GGC AAA 768 Asn Ile His Glu Glu Lys Glu Met Arg Ile Met Thr Pro Glu Gly Lys 245 250 255 TGG CAT GCT TCA AAA GTA TTG AGA ATT GAA AAT ATT GGT GAA AGC AAT 816 Trp His Ala Ser Lys Val Leu Arg Ile Glu Asn Ile Gly Glu Ser Asn 260 265 270 CTA AAT GTT TTA TAT AAT TGC ACT GTG GCC AGC ACG GGA GGC ACA GAC 864 Leu Asn Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Ser Thr Gly Gly Thr Asp 275 280 285 ACC AAA AGC TTC ATC TTG GTG AGA AAA GAC ATG GCT GAT ATC CCA GGC 912 Thr Lys Ser Phe Ile Leu Val Arg Lys Asp Met Ala Asp Ile Pro Gly 290 295 300 CAC GTC TTC ACA AGA 927 His Val Phe Thr Arg 305
【０１０６】配列番号：7 配列の長さ：1620 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴 起源 生物名：ホジキン病患者由来のリンパ芽球様細胞 株名：L428 (FERM BP−5777) 配列の特徴 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..57 特徴を決定した方法：E 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：58..1620 特徴を決定した方法：E 配列 ATG AAT TGT AGA GAA TTA CCC TTG ACC CTT TGG GTG CTT ATA TCT GTA 48 Met Asn Cys Arg Glu Leu Pro Leu Thr Leu Trp Val Leu Ile Ser Val -15 -10 -5 AGC ACT GCA GAA TCT TGT ACT TCA CGT CCC CAC ATT ACT GTG GTT GAA 96 Ser Thr Ala Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu 1 5 10 GGG GAA CCT TTC TAT CTG AAA CAT TGC TCG TGT TCA CTT GCA CAT GAG 144 Gly Glu Pro Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu 15 20 25 ATT GAA ACA ACC ACC AAA AGC TGG TAC AAA AGC AGT GGA TCA CAG GAA 192 Ile Glu Thr Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu 30 35 40 45 CAT GTG GAG CTG AAC CCA AGG AGT TCC TCG AGA ATT GCT TTG CAT GAT 240 His Val Glu Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp 50 55 60 TGT GTT TTG GAG TTT TGG CCA GTT GAG TTG AAT GAC ACA GGA TCT TAC 288 Cys Val Leu Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr 65 70 75 TTT TTC CAA ATG AAA AAT TAT ACT CAG AAA TGG AAA TTA AAT GTC ATC 336 Phe Phe Gln Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile 80 85 90 AGA AGA AAT AAA CAC AGC TGT TTC ACT GAA AGA CAA GTA ACT AGT AAA 384 Arg Arg Asn Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg Gln Val Thr Ser Lys 95 100 105 ATT GTG GAA GTT AAA AAA TTT TTT CAG ATA ACC TGT GAA AAC AGT TAC 432 Ile Val Glu Val Lys Lys Phe Phe Gln Ile Thr Cys Glu Asn Ser Tyr 110 115 120 125 TAT CAA ACA CTG GTC AAC AGC ACA TCA TTG TAT AAG AAC TGT AAA AAG 480 Tyr Gln Thr Leu Val Asn Ser Thr Ser Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Lys 130 135 140 CTA CTA CTG GAG AAC AAT AAA AAC CCA ACG ATA AAG AAG AAC GCC GAG 528 Leu Leu Leu Glu Asn Asn Lys Asn Pro Thr Ile Lys Lys Asn Ala Glu 145 150 155 TTT GAA GAT CAG GGG TAT TAC TCC TGC GTG CAT TTC CTT CAT CAT AAT 576 Phe Glu Asp Gln Gly Tyr Tyr Ser Cys Val His Phe Leu His His Asn 160 165 170 GGA AAA CTA TTT AAT ATC ACC AAA ACC TTC AAT ATA ACA ATA GTG GAA 624 Gly Lys Leu Phe Asn Ile Thr Lys Thr Phe Asn Ile Thr Ile Val Glu 175 180 185 GAT CGC AGT AAT ATA GTT CCG GTT CTT CTT GGA CCA AAG CTT AAC CAT 672 Asp Arg Ser Asn Ile Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys Leu Asn His 190 195 200 205 GTT GCA GTG GAA TTA GGA AAA AAC GTA AGG CTC AAC TGC TCT GCT TTG 720 Val Ala Val Glu Leu Gly Lys Asn Val Arg Leu Asn Cys Ser Ala Leu 210 215 220 CTG AAT GAA GAG GAT GTA ATT TAT TGG ATG TTC GGG GAA GAA AAT GGA 768 Leu Asn Glu Glu Asp Val Ile Tyr Trp Met Phe Gly Glu Glu Asn Gly 225 230 235 TCG GAT CCT AAT ATA CAT GAA GAG AAA GAA ATG AGA ATT ATG ACT CCA 816 Ser Asp Pro Asn Ile His Glu Glu Lys Glu Met Arg Ile Met Thr Pro 240 245 250 GAA GGC AAA TGG CAT GCT TCA AAA GTA TTG AGA ATT GAA AAT ATT GGT 864 Glu Gly Lys Trp His Ala Ser Lys Val Leu Arg Ile Glu Asn Ile Gly 255 260 265 GAA AGC AAT CTA AAT GTT TTA TAT AAT TGC ACT GTG GCC AGC ACG GGA 912 Glu Ser Asn Leu Asn Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Ser Thr Gly 270 275 280 285 GGC ACA GAC ACC AAA AGC TTC ATC TTG GTG AGA AAA GAC ATG GCT GAT 960 Gly Thr Asp Thr Lys Ser Phe Ile Leu Val Arg Lys Asp Met Ala Asp 290 295 300 ATC CCA GGC CAC GTC TTC ACA AGA GGA ATG ATC ATA GCT GTT TTG ATC 1008 Ile Pro Gly His Val Phe Thr Arg Gly Met Ile Ile Ala Val Leu Ile 305 310 315 TTG GTG GCA GTA GTG TGC CTA GTG ACT GTG TGT GTC ATT TAT AGA GTT 1056 Leu Val Ala Val Val Cys Leu Val Thr Val Cys Val Ile Tyr Arg Val 320 325 330 GAC TTG GTT CTA TTT TAT AGA CAT TTA ACG AGA AGA GAT GAA ACA TTA 1104 Asp Leu Val Leu Phe Tyr Arg His Leu Thr Arg Arg Asp Glu Thr Leu 335 340 345 ACA GAT GGA AAA ACA TAT GAT GCT TTT GTG TCT TAC CTA AAA GAA TGC 1152 Thr Asp Gly Lys Thr Tyr Asp Ala Phe Val Ser Tyr Leu Lys Glu Cys 350 355 360 365 CGA CCT GAA AAT GGA GAG GAG CAC ACC TTT GCT GTG GAG ATT TTG CCC 1200 Arg Pro Glu Asn Gly Glu Glu His Thr Phe Ala Val Glu Ile Leu Pro 370 375 380 AGG GTG TTG GAG AAA CAT TTT GGG TAT AAG TTA TGC ATA TTT GAA AGG 1248 Arg Val Leu Glu Lys His Phe Gly Tyr Lys Leu Cys Ile Phe Glu Arg 385 390 395 GAT GTA GTG CCT GGA GGA GCT GTT GTT GAT GAA ATC CAC TCA CTG ATA 1296 Asp Val Val Pro Gly Gly Ala Val Val Asp Glu Ile His Ser Leu Ile 400 405 410 GAG AAA AGC CGA AGA CTA ATC ATT GTC CTA AGT AAA AGT TAT ATG TCT 1344 Glu Lys Ser Arg Arg Leu Ile Ile Val Leu Ser Lys Ser Tyr Met Ser 415 420 425 AAT GAG GTC AGG TAT GAA CTT GAA AGT GGA CTC CAT GAA GCA TTG GTG 1392 Asn Glu Val Arg Tyr Glu Leu Glu Ser Gly Leu His Glu Ala Leu Val 430 435 440 445 GAA AGA AAA ATT AAA ATA ATC TTA ATT GAA TTT ACA CCT GTT ACT GAC 1440 Glu Arg Lys Ile Lys Ile Ile Leu Ile Glu Phe Thr Pro Val Thr Asp 450 455 460 TTC ACA TTC TTG CCC CAA TCA CTA AAG CTT TTG AAA TCT CAC AGA GTT 1488 Phe Thr Phe Leu Pro Gln Ser Leu Lys Leu Leu Lys Ser His Arg Val 465 470 475 CTG AAG TGG AAG GCC GAT AAA TCT CTT TCT TAT AAC TCA AGG TTC TGG 1536 Leu Lys Trp Lys Ala Asp Lys Ser Leu Ser Tyr Asn Ser Arg Phe Trp 480 485 490 AAG AAC CTT CTT TAC TTA ATG CCT GCA AAA ACA GTC AAG CCA GGT AGA 1584 Lys Asn Leu Leu Tyr Leu Met Pro Ala Lys Thr Val Lys Pro Gly Arg 495 500 505 GAC GAA CCG GAA GTC TTG CCT GTT CTT TCC GAG TCT 1620 Asp Glu Pro Glu Val Leu Pro Val Leu Ser Glu Ser 510 515 520
【０１０７】配列番号：8 配列の長さ：369 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..57 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：58..369 特徴を決定した方法：S 配列 ATG AAT TGT AGA GAA TTA CCC TTG ACC CTT TGG GTG CTT ATA TCT GTA 48 Met Asn Cys Arg Glu Leu Pro Leu Thr Leu Trp Val Leu Ile Ser Val -15 -10 -5 AGC ACT GCA GAA TCT TGT ACT TCA CGT CCC CAC ATT ACT GTG GTT GAA 96 Ser Thr Ala Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu 1 5 10 GGG GAA CCT TTC TAT CTG AAA CAT TGC TCG TGT TCA CTT GCA CAT GAG 144 Gly Glu Pro Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu 15 20 25 ATT GAA ACA ACC ACC AAA AGC TGG TAC AAA AGC AGT GGA TCA CAG GAA 192 Ile Glu Thr Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu 30 35 40 45 CAT GTG GAG CTG AAC CCA AGG AGT TCC TCG AGA ATT GCT TTG CAT GAT 240 His Val Glu Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp 50 55 60 TGT GTT TTG GAG TTT TGG CCA GTT GAG TTG AAT GAC ACA GGA TCT TAC 288 Cys Val Leu Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr 65 70 75 TTT TTC CAA ATG AAA AAT TAT ACT CAG AAA TGG AAA TTA AAT GTC ATC 336 Phe Phe Gln Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile 80 85 90 AGA AGA AAT AAA CAC AGC TGT TTC ACT GAA AGA 369 Arg Arg Asn Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg 95 100
【０１０８】配列番号：9 配列の長さ：678 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..57 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：58..678 特徴を決定した方法：S 配列 ATG AAT TGT AGA GAA TTA CCC TTG ACC CTT TGG GTG CTT ATA TCT GTA 48 Met Asn Cys Arg Glu Leu Pro Leu Thr Leu Trp Val Leu Ile Ser Val -15 -10 -5 AGC ACT GCA GAA TCT TGT ACT TCA CGT CCC CAC ATT ACT GTG GTT GAA 96 Ser Thr Ala Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu 1 5 10 GGG GAA CCT TTC TAT CTG AAA CAT TGC TCG TGT TCA CTT GCA CAT GAG 144 Gly Glu Pro Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu 15 20 25 ATT GAA ACA ACC ACC AAA AGC TGG TAC AAA AGC AGT GGA TCA CAG GAA 192 Ile Glu Thr Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu 30 35 40 45 CAT GTG GAG CTG AAC CCA AGG AGT TCC TCG AGA ATT GCT TTG CAT GAT 240 His Val Glu Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp 50 55 60 TGT GTT TTG GAG TTT TGG CCA GTT GAG TTG AAT GAC ACA GGA TCT TAC 288 Cys Val Leu Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr 65 70 75 TTT TTC CAA ATG AAA AAT TAT ACT CAG AAA TGG AAA TTA AAT GTC ATC 336 Phe Phe Gln Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile 80 85 90 AGA AGA AAT AAA CAC AGC TGT TTC ACT GAA AGA CAA GTA ACT AGT AAA 384 Arg Arg Asn Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg Gln Val Thr Ser Lys 95 100 105 ATT GTG GAA GTT AAA AAA TTT TTT CAG ATA ACC TGT GAA AAC AGT TAC 432 Ile Val Glu Val Lys Lys Phe Phe Gln Ile Thr Cys Glu Asn Ser Tyr 110 115 120 125 TAT CAA ACA CTG GTC AAC AGC ACA TCA TTG TAT AAG AAC TGT AAA AAG 480 Tyr Gln Thr Leu Val Asn Ser Thr Ser Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Lys 130 135 140 CTA CTA CTG GAG AAC AAT AAA AAC CCA ACG ATA AAG AAG AAC GCC GAG 528 Leu Leu Leu Glu Asn Asn Lys Asn Pro Thr Ile Lys Lys Asn Ala Glu 145 150 155 TTT GAA GAT CAG GGG TAT TAC TCC TGC GTG CAT TTC CTT CAT CAT AAT 576 Phe Glu Asp Gln Gly Tyr Tyr Ser Cys Val His Phe Leu His His Asn 160 165 170 GGA AAA CTA TTT AAT ATC ACC AAA ACC TTC AAT ATA ACA ATA GTG GAA 624 Gly Lys Leu Phe Asn Ile Thr Lys Thr Phe Asn Ile Thr Ile Val Glu 175 180 185 GAT CGC AGT AAT ATA GTT CCG GTT CTT CTT GGA CCA AAG CTT AAC CAT 672 Asp Arg Ser Asn Ile Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys Leu Asn His 190 195 200 205 GTT GCA 678 Val Ala
【０１０９】配列番号：10 配列の長さ：984 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..57 特徴を決定した方法：E 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：58..984 特徴を決定した方法：E 配列 ATG AAT TGT AGA GAA TTA CCC TTG ACC CTT TGG GTG CTT ATA TCT GTA 48 Met Asn Cys Arg Glu Leu Pro Leu Thr Leu Trp Val Leu Ile Ser Val -15 -10 -5 AGC ACT GCA GAA TCT TGT ACT TCA CGT CCC CAC ATT ACT GTG GTT GAA 96 Ser Thr Ala Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu 1 5 10 GGG GAA CCT TTC TAT CTG AAA CAT TGC TCG TGT TCA CTT GCA CAT GAG 144 Gly Glu Pro Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu 15 20 25 ATT GAA ACA ACC ACC AAA AGC TGG TAC AAA AGC AGT GGA TCA CAG GAA 192 Ile Glu Thr Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu 30 35 40 45 CAT GTG GAG CTG AAC CCA AGG AGT TCC TCG AGA ATT GCT TTG CAT GAT 240 His Val Glu Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp 50 55 60 TGT GTT TTG GAG TTT TGG CCA GTT GAG TTG AAT GAC ACA GGA TCT TAC 288 Cys Val Leu Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr 65 70 75 TTT TTC CAA ATG AAA AAT TAT ACT CAG AAA TGG AAA TTA AAT GTC ATC 336 Phe Phe Gln Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile 80 85 90 AGA AGA AAT AAA CAC AGC TGT TTC ACT GAA AGA CAA GTA ACT AGT AAA 384 Arg Arg Asn Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg Gln Val Thr Ser Lys 95 100 105 ATT GTG GAA GTT AAA AAA TTT TTT CAG ATA ACC TGT GAA AAC AGT TAC 432 Ile Val Glu Val Lys Lys Phe Phe Gln Ile Thr Cys Glu Asn Ser Tyr 110 115 120 125 TAT CAA ACA CTG GTC AAC AGC ACA TCA TTG TAT AAG AAC TGT AAA AAG 480 Tyr Gln Thr Leu Val Asn Ser Thr Ser Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Lys 130 135 140 CTA CTA CTG GAG AAC AAT AAA AAC CCA ACG ATA AAG AAG AAC GCC GAG 528 Leu Leu Leu Glu Asn Asn Lys Asn Pro Thr Ile Lys Lys Asn Ala Glu 145 150 155 TTT GAA GAT CAG GGG TAT TAC TCC TGC GTG CAT TTC CTT CAT CAT AAT 576 Phe Glu Asp Gln Gly Tyr Tyr Ser Cys Val His Phe Leu His His Asn 160 165 170 GGA AAA CTA TTT AAT ATC ACC AAA ACC TTC AAT ATA ACA ATA GTG GAA 624 Gly Lys Leu Phe Asn Ile Thr Lys Thr Phe Asn Ile Thr Ile Val Glu 175 180 185 GAT CGC AGT AAT ATA GTT CCG GTT CTT CTT GGA CCA AAG CTT AAC CAT 672 Asp Arg Ser Asn Ile Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys Leu Asn His 190 195 200 205 GTT GCA GTG GAA TTA GGA AAA AAC GTA AGG CTC AAC TGC TCT GCT TTG 720 Val Ala Val Glu Leu Gly Lys Asn Val Arg Leu Asn Cys Ser Ala Leu 210 215 220 CTG AAT GAA GAG GAT GTA ATT TAT TGG ATG TTC GGG GAA GAA AAT GGA 768 Leu Asn Glu Glu Asp Val Ile Tyr Trp Met Phe Gly Glu Glu Asn Gly 225 230 235 TCG GAT CCT AAT ATA CAT GAA GAG AAA GAA ATG AGA ATT ATG ACT CCA 816 Ser Asp Pro Asn Ile His Glu Glu Lys Glu Met Arg Ile Met Thr Pro 240 245 250 GAA GGC AAA TGG CAT GCT TCA AAA GTA TTG AGA ATT GAA AAT ATT GGT 864 Glu Gly Lys Trp His Ala Ser Lys Val Leu Arg Ile Glu Asn Ile Gly 255 260 265 GAA AGC AAT CTA AAT GTT TTA TAT AAT TGC ACT GTG GCC AGC ACG GGA 912 Glu Ser Asn Leu Asn Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Ser Thr Gly 270 275 280 285 GGC ACA GAC ACC AAA AGC TTC ATC TTG GTG AGA AAA GAC ATG GCT GAT 960 Gly Thr Asp Thr Lys Ser Phe Ile Leu Val Arg Lys Asp Met Ala Asp 290 295 300 ATC CCA GGC CAC GTC TTC ACA AGA 984 Ile Pro Gly His Val Phe Thr Arg 305
【０１１０】配列番号：11 配列の長さ：975 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cDNA 配列の特徴 特徴を表す記号：sig peptide 存在位置：1..54 特徴を決定した方法：S 特徴を表す記号：mat peptide 存在位置：55..975 特徴を決定した方法：S 配列 ATG CAT CAT GAA GAA TTA ATC TTG ACA CTC TGC ATT CTC ATT GTT AAA 48 Met His His Glu Glu Leu Ile Leu Thr Leu Cys Ile Leu Ile Val Lys -15 -10 -5 AGT GCC TCA AAA AGT TGT ATT CAC CGA TCA CAA ATT CAT GTG GTA GAG 96 Ser Ala Ser Lys Ser Cys Ile His Arg Ser Gln Ile His Val Val Glu 1 5 10 GGA GAA CCT TTT TAT CTG AAG CCA TGT GGC ATA TCT GCA CCA GTG CAC 144 Gly Glu Pro Phe Tyr Leu Lys Pro Cys Gly Ile Ser Ala Pro Val His 15 20 25 30 AGG AAT GAA ACA GCC ACC ATG AGA TGG TTC AAA GGC AGT GCT TCA CAT 192 Arg Asn Glu Thr Ala Thr Met Arg Trp Phe Lys Gly Ser Ala Ser His 35 40 45 GAG TAT AGA GAG CTG AAC AAC AGA AGC TCG CCC AGA GTC ACT TTT CAT 240 Glu Tyr Arg Glu Leu Asn Asn Arg Ser Ser Pro Arg Val Thr Phe His 50 55 60 GAT CAC ACC TTG GAA TTC TGG CCA GTT GAG ATG GAG GAT GAG GGA ACG 288 Asp His Thr Leu Glu Phe Trp Pro Val Glu Met Glu Asp Glu Gly Thr 65 70 75 TAC ATT TCT CAA GTC GGA AAT GAT CGT CGC AAT TGG ACC TTA AAT GTC 336 Tyr Ile Ser Gln Val Gly Asn Asp Arg Arg Asn Trp Thr Leu Asn Val 80 85 90 ACC AAA AGA AAC AAA CAC AGC TGT TTC TCT GAC AAG CTC GTG ACA AGC 384 Thr Lys Arg Asn Lys His Ser Cys Phe Ser Asp Lys Leu Val Thr Ser 95 100 105 110 AGA GAT GTT GAA GTT AAC AAA TCT CTG CAT ATC ACT TGT AAG AAT CCT 432 Arg Asp Val Glu Val Asn Lys Ser Leu His Ile Thr Cys Lys Asn Pro 115 120 125 AAC TAT GAA GAG CTG ATC CAG GAC ACA TGG CTG TAT AAG AAC TGT AAG 480 Asn Tyr Glu Glu Leu Ile Gln Asp Thr Trp Leu Tyr Lys Asn Cys Lys 130 135 140 GAA ATA TCC AAA ACC CCA AGG ATC CTG AAG GAT GCC GAG TTT GGA GAT 528 Glu Ile Ser Lys Thr Pro Arg Ile Leu Lys Asp Ala Glu Phe Gly Asp 145 150 155 GAG GGC TAC TAC TCC TGC GTG TTT TCT GTC CAC CAT AAT GGG ACA CGG 576 Glu Gly Tyr Tyr Ser Cys Val Phe Ser Val His His Asn Gly Thr Arg 160 165 170 TAC AAC ATC ACC AAG ACT GTC AAT ATA ACA GTT ATT GAA GGA AGG AGT 624 Tyr Asn Ile Thr Lys Thr Val Asn Ile Thr Val Ile Glu Gly Arg Ser 175 180 185 190 AAA GTA ACT CCA GCT ATT TTA GGA CCA AAG TGT GAG AAG GTT GGT GTA 672 Lys Val Thr Pro Ala Ile Leu Gly Pro Lys Cys Glu Lys Val Gly Val 195 200 205 GAA CTA GGA AAG GAT GTG GAG TTG AAC TGC AGT GCT TCA TTG AAT AAA 720 Glu Leu Gly Lys Asp Val Glu Leu Asn Cys Ser Ala Ser Leu Asn Lys 210 215 220 GAC GAT CTG TTT TAT TGG AGC ATC AGG AAA GAG GAC AGC TCA GAC CCT 768 Asp Asp Leu Phe Tyr Trp Ser Ile Arg Lys Glu Asp Ser Ser Asp Pro 225 230 235 AAT GTG CAA GAA GAC AGG AAG GAG ACG ACA ACA TGG ATT TCT GAA GGC 816 Asn Val Gln Glu Asp Arg Lys Glu Thr Thr Thr Trp Ile Ser Glu Gly 240 245 250 AAA CTG CAT GCT TCA AAA ATA CTG AGA TTT CAG AAA ATT ACT GAA AAC 864 Lys Leu His Ala Ser Lys Ile Leu Arg Phe Gln Lys Ile Thr Glu Asn 255 260 265 270 TAT CTC AAT GTT TTA TAT AAT TGC ACC GTG GCC AAC GAA GAA GCC ATA 912 Tyr Leu Asn Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Asn Glu Glu Ala Ile 275 280 285 GAC ACC AAG AGC TTC GTC TTG GTG AGA AAA GAA ATA CCT GAT ATC CCA 960 Asp Thr Lys Ser Phe Val Leu Val Arg Lys Glu Ile Pro Asp Ile Pro 290 295 300 GGC CAT GTC TTT ACA 975 Gly His Val Phe Thr 305
【０１１１】配列番号：12 配列の長さ：5 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント
【０１１２】配列番号：13 配列の長さ：7 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント
【０１１３】配列番号：14 配列の長さ：13 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Ser Ser Gly Ser Gln Glu His Val Glu Leu Asn Pro Arg 1 5 10
【０１１４】配列番号：15 配列の長さ：4 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント
【０１１５】配列番号：16 配列の長さ：10 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント
【０１１６】配列番号：17 配列の長さ：6 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント
【０１１７】配列番号：18 配列の長さ：15 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント 配列 Thr Val Lys Pro Gly Arg Asp Glu Pro Glu Val Leu Pro Val Leu 1 5 10 15
【０１１８】配列番号：19 配列の長さ：11 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド フラグメント型：中間部フラグメント配列Ser Asn Ile
Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys1 5
10
【０１１９】配列番号：20 配列の長さ：521 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ポリペプチド 配列 Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu Gly Glu Pro 1 5 10 15 Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu Ile Glu Thr 20 25 30 Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu His Val Glu 35 40 45 Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp Cys Val Leu 50 55 60 Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Gln 65 70 75 80 Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile Arg Arg Asn 85 90 95 Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg Gln Val Thr Ser Lys Ile Val Glu 100 105 110 Val Lys Lys Phe Phe Gln Ile Thr Cys Glu Asn Ser Tyr Tyr Gln Thr 115 120 125 Leu Val Asn Ser Thr Ser Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Lys Leu Leu Leu 130 135 140 Glu Asn Asn Lys Asn Pro Thr Ile Lys Lys Asn Ala Glu Phe Glu Asp 145 150 155 160 Gln Gly Tyr Tyr Ser Cys Val His Phe Leu His His Asn Gly Lys Leu 165 170 175 Phe Asn Ile Thr Lys Thr Phe Asn Ile Thr Ile Val Glu Asp Arg Ser 180 185 190 Asn Ile Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys Leu Asn His Val Ala Val 195 200 205 Glu Leu Gly Lys Asn Val Arg Leu Asn Cys Ser Ala Leu Leu Asn Glu 210 215 220 Glu Asp Val Ile Tyr Trp Met Phe Gly Glu Glu Asn Gly Ser Asp Pro 225 230 235 240 Asn Ile His Glu Glu Lys Glu Met Arg Ile Met Thr Pro Glu Gly Lys 245 250 255 Trp His Ala Ser Lys Val Leu Arg Ile Glu Asn Ile Gly Glu Ser Asn 260 265 270 Leu Asn Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Ser Thr Gly Gly Thr Asp 275 280 285 Thr Lys Ser Phe Ile Leu Val Arg Lys Asp Met Ala Asp Ile Pro Gly 290 295 300 His Val Phe Thr Arg Gly Met Ile Ile Ala Val Leu Ile Leu Val Ala 305 310 315 320 Val Val Cys Leu Val Thr Val Cys Val Ile Tyr Arg Val Asp Leu Val 325 330 335 Leu Phe Tyr Arg His Leu Thr Arg Arg Asp Glu Thr Leu Thr Asp Gly 340 345 350 Lys Thr Tyr Asp Ala Phe Val Ser Tyr Leu Lys Glu Cys Arg Pro Glu 355 360 365 Asn Gly Glu Glu His Thr Phe Ala Val Glu Ile Leu Pro Arg Val Leu 370 375 380 Glu Lys His Phe Gly Tyr Lys Leu Cys Ile Phe Glu Arg Asp Val Val 385 390 395 400 Pro Gly Gly Ala Val Val Asp Glu Ile His Ser Leu Ile Glu Lys Ser 405 410 415 Arg Arg Leu Ile Ile Val Leu Ser Lys Ser Tyr Met Ser Asn Glu Val 420 425 430 Arg Tyr Glu Leu Glu Ser Gly Leu His Glu Ala Leu Val Glu Arg Lys 435 440 445 Ile Lys Ile Ile Leu Ile Glu Phe Thr Pro Val Thr Asp Phe Thr Phe 450 455 460 Leu Pro Gln Ser Leu Lys Leu Leu Lys Ser His Arg Val Leu Lys Trp 465 470 475 480 Lys Ala Asp Lys Ser Leu Ser Tyr Asn Ser Arg Phe Trp Lys Asn Leu 485 490 495 Leu Tyr Leu Met Pro Ala Lys Thr Val Lys Pro Gly Arg Asp Glu Pro 500 505 510 Glu Val Leu Pro Val Leu Ser Glu Ser 515 520
【０１２０】配列番号：21 配列の長さ：519 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ポリペプチド 配列 Ser Lys Ser Cys Ile His Arg Ser Gln Ile His Val Val Glu Gly Glu 1 5 10 15 Pro Phe Tyr Leu Lys Pro Cys Gly Ile Ser Ala Pro Val His Arg Asn 20 25 30 Glu Thr Ala Thr Met Arg Trp Phe Lys Gly Ser Ala Ser His Glu Tyr 35 40 45 Arg Glu Leu Asn Asn Arg Ser Ser Pro Arg Val Thr Phe His Asp His 50 55 60 Thr Leu Glu Phe Trp Pro Val Glu Met Glu Asp Glu Gly Thr Tyr Ile 65 70 75 80 Ser Gln Val Gly Asn Asp Arg Arg Asn Trp Thr Leu Asn Val Thr Lys 85 90 95 Arg Asn Lys His Ser Cys Phe Ser Asp Lys Leu Val Thr Ser Arg Asp 100 105 110 Val Glu Val Asn Lys Ser Leu His Ile Thr Cys Lys Asn Pro Asn Tyr 115 120 125 Glu Glu Leu Ile Gln Asp Thr Trp Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Glu Ile 130 135 140 Ser Lys Thr Pro Arg Ile Leu Lys Asp Ala Glu Phe Gly Asp Glu Gly 145 150 155 160 Tyr Tyr Ser Cys Val Phe Ser Val His His Asn Gly Thr Arg Tyr Asn 165 170 175 Ile Thr Lys Thr Val Asn Ile Thr Val Ile Glu Gly Arg Ser Lys Val 180 185 190 Thr Pro Ala Ile Leu Gly Pro Lys Cys Glu Lys Val Gly Val Glu Leu 195 200 205 Gly Lys Asp Val Glu Leu Asn Cys Ser Ala Ser Leu Asn Lys Asp Asp 210 215 220 Leu Phe Tyr Trp Ser Ile Arg Lys Glu Asp Ser Ser Asp Pro Asn Val 225 230 235 240 Gln Glu Asp Arg Lys Glu Thr Thr Thr Trp Ile Ser Glu Gly Lys Leu 245 250 255 His Ala Ser Lys Ile Leu Arg Phe Gln Lys Ile Thr Glu Asn Tyr Leu 260 265 270 Asn Val leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Asn Glu Glu Ala Ile Asp Thr 275 280 285 Lys Ser Phe Val Leu Val Arg Lys Glu Ile Pro Asp Ile Pro Gly His 290 295 300 Val Phe Thr Gly Gly Val Thr Val Leu Val Leu Ala Ser Val Ala Ala 305 310 315 320 Val Cys Ile Val Ile Leu Cys Val Ile Tyr Lys Val Asp Leu Val Leu 325 330 335 Phe Tyr Arg Arg Ile Ala Glu Arg Asp Glu Thr Leu Thr Asp Gly Lys 340 345 350 Thr Tyr Asp Ala Phe Val Ser Tyr Leu Lys Glu Cys His Pro Glu Asn 355 360 365 Lys Glu Glu Tyr Thr Phe Ala Val Glu Thr Leu Pro Arg Val Leu Glu 370 375 380 Lys Gln Phe Gly Tyr Lys Leu Cys Ile Phe Glu Arg Asp Val Val Pro 385 390 395 400 Gly Gly Ala Val Val Glu Glu Ile His Ser Leu Ile Glu Lys Ser Arg 405 410 415 Arg Leu Ile Ile Val Leu Ser Gln Ser Tyr Leu Thr Asn Gly Ala Arg 420 425 430 Arg Glu Leu Glu Ser Gly Leu His Glu Ala Leu Val Glu Arg Lys Ile 435 440 445 Lys Ile Ile Leu Ile Glu Phe Thr Pro Ala Ser Asn Ile Thr Phe Leu 450 455 460 Pro Pro Ser Leu Lys Leu Leu Lys Ser Tyr Arg Val Leu Lys Trp Arg 465 470 475 480 Ala Asp Ser Pro Ser Met Asn Ser Arg Phe Trp Lys Asn Leu Val Tyr 485 490 495 Leu Met Pro Ala Lys Ala Val Lys Pro Trp Arg Glu Glu Ser Glu Ala 500 505 510 Arg Ser Val Leu Ser Ala Pro 515
【０１２１】配列番号：22 配列の長さ：309 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ポリペプチド 配列 Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu Gly Glu Pro 1 5 10 15 Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu Ile Glu Thr 20 25 30 Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu His Val Glu 35 40 45 Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp Cys Val Leu 50 55 60 Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Gln 65 70 75 80 Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile Arg Arg Asn 85 90 95 Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg Gln Val Thr Ser Lys Ile Val Glu 100 105 110 Val Lys Lys Phe Phe Gln Ile Thr Cys Glu Asn Ser Tyr Tyr Gln Thr 115 120 125 Leu Val Asn Ser Thr Ser Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Lys Leu Leu Leu 130 135 140 Glu Asn Asn Lys Asn Pro Thr Ile Lys Lys Asn Ala Glu Phe Glu Asp 145 150 155 160 Gln Gly Tyr Tyr Ser Cys Val His Phe Leu His His Asn Gly Lys Leu 165 170 175 Phe Asn Ile Thr Lys Thr Phe Asn Ile Thr Ile Val Glu Asp Arg Ser 180 185 190 Asn Ile Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys Leu Asn His Val Ala Val 195 200 205 Glu Leu Gly Lys Asn Val Arg Leu Asn Cys Ser Ala Leu Leu Asn Glu 210 215 220 Glu Asp Val Ile Tyr Trp Met Phe Gly Glu Glu Asn Gly Ser Asp Pro 225 230 235 240 Asn Ile His Glu Glu Lys Glu Met Arg Ile Met Thr Pro Glu Gly Lys 245 250 255 Trp His Ala Ser Lys Val Leu Arg Ile Glu Asn Ile Gly Glu Ser Asn 260 265 270 Leu Asn Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Ser Thr Gly Gly Thr Asp 275 280 285 Thr Lys Ser Phe Ile Leu Val Arg Lys Asp Met Ala Asp Ile Pro Gly 290 295 300 His Val Phe Thr Arg 305
【０１２２】配列番号：23 配列の長さ：207 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ポリペプチド 配列 Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu Gly Glu Pro 1 5 10 15 Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu Ile Glu Thr 20 25 30 Thr Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu His Val Glu 35 40 45 Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp Cys Val Leu 50 55 60 Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Gln 65 70 75 80 Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile Arg Arg Asn 85 90 95 Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg Gln Val Thr Ser Lys Ile Val Glu 100 105 110 Val Lys Lys Phe Phe Gln Ile Thr Cys Glu Asn Ser Tyr Tyr Gln Thr 115 120 125 Leu Val Asn Ser Thr Ser Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Lys Leu Leu Leu 130 135 140 Glu Asn Asn Lys Asn Pro Thr Ile Lys Lys Asn Ala Glu Phe Glu Asp 145 150 155 160 Gln Gly Tyr Tyr Ser Cys Val His Phe Leu His His Asn Gly Lys Leu 165 170 175 Phe Asn Ile Thr Lys Thr Phe Asn Ile Thr Ile Val Glu Asp Arg Ser 180 185 190 Asn Ile Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys Leu Asn His Val Ala 195 200 205
【０１２３】配列番号：24 配列の長さ：104 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ポリペプチド 配列 Glu Ser Cys Thr Ser Arg Pro His Ile Thr Val Val Glu Gly Glu Pro 1 5 10 15 Phe Tyr Leu Lys His Cys Ser Cys Ser Leu Ala His Glu Ile Glu Thr 20 25 30 The Thr Lys Ser Trp Tyr Lys Ser Ser Gly Ser Gln Glu His Val Glu 35 40 45 Leu Asn Pro Arg Ser Ser Ser Arg Ile Ala Leu His Asp Cys Val Leu 50 55 60 Glu Phe Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Gln 65 70 75 80 Met Lys Asn Tyr Thr Gln Lys Trp Lys Leu Asn Val Ile Arg Arg Asn 85 90 95 Lys His Ser Cys Phe Thr Glu Arg 100
【０１２４】配列番号：25 配列の長さ：307 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ポリペプチド 配列 Ser Lys Ser Cys Ile His Arg Ser Gln Ile His Val Val Glu Gly Glu 1 5 10 15 Pro Phe Tyr Leu Lys Pro Cys Gly Ile Ser Ala Pro Val His Arg Asn 20 25 30 Glu Thr Ala Thr Met Arg Trp Phe Lys Gly Ser Ala Ser His Glu Tyr 35 40 45 Arg Glu Leu Asn Asn Arg Ser Ser Pro Arg Val Thr Phe His Asp His 50 55 60 Thr Leu Glu Phe Trp Pro Val Glu Met Glu Asp Glu Gly Thr Tyr Ile 65 70 75 80 Ser Gln Val Gly Asn Asp Arg Arg Asn Trp Thr Leu Asn Val Thr Lys 85 90 95 Arg Asn Lys His Ser Cys Phe Ser Asp Lys Leu Val Thr Ser Arg Asp 100 105 110 Val Glu Val Asn Lys Ser Leu His Ile Thr Cys Lys Asn Pro Asn Tyr 115 120 125 Glu Glu Leu Ile Gln Asp Thr Trp Leu Tyr Lys Asn Cys Lys Glu Ile 130 135 140 Ser Lys Thr Pro Arg Ile Leu Lys Asp Ala Glu Phe Gly Asp Glu Gly 145 150 155 160 Tyr Tyr Ser Cys Val Phe Ser Val His His Asn Gly Thr Arg Tyr Asn 165 170 175 Ile Thr Lys Thr Val Asn Ile Thr Val Ile Glu Gly Arg Ser Lys Val 180 185 190 Thr Pro Ala Ile Leu Gly Pro Lys Cys Glu Lys Val Gly Val Glu Leu 195 200 205 Gly Lys Asp Val Glu Leu Asn Cys Ser Ala Ser Leu Asn Lys Asp Asp 210 215 220 Leu Phe Tyr Trp Ser Ile Arg Lys Glu Asp Ser Ser Asp Pro Asn Val 225 230 235 240 Gln Glu Asp Arg Lys Glu Thr Thr Thr Trp Ile Ser Glu Gly Lys Leu 245 250 255 His Ala Ser Lys Ile Leu Arg Phe Gln Lys Ile Thr Glu Asn Tyr Leu 260 265 270 Asn Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Asn Glu Glu Ala Ile Asp Thr 275 280 285 Lys Ser Phe Val Leu Val Arg Lys Glu Ile Pro Asp Ile Pro Gly His 290 295 300 Val Phe Thr 305
【０１２５】配列番号：26 配列の長さ：157 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ポリペプチド 配列 Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn 1 5 10 15 Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp 20 25 30 Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile 35 40 45 Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile 50 55 60 Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Xaa Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile 65 70 75 80 Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys 85 90 95 Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys 100 105 110 Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu 115 120 125 Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu 130 135 140 Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp 145 150 155
【０１２６】配列番号：27 配列の長さ：157 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ポリペプチド 配列 Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn 1 5 10 15 Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met 20 25 30 Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile 35 40 45 Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser 50 55 60 Val Lys Asp Ser Lys Xaa Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile 65 70 75 80 Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser 85 90 95 Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Arg Val Pro Gly His Asn Lys Met Glu 100 105 110 Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu 115 120 125 Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp 130 135 140 Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser 145 150 155
【図面の簡単な説明】
【図１】モノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−１０Ｃ
が、ＩＬ−１８と競合してＬ４２８細胞及びＩＬ−１８
Ｒに結合する様子を示す図である。
【図２】モノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−１０Ｃを
用いるウェスタン・ブロッティング法により可視化し
た、ＩＬ−１８Ｒのゲル電気泳動のディスプレー上に表
示した中間調画像である。
【図３】モノクローナル抗体ＭＡｂ＃１１７−１０Ｃに
よるＩＬ−１８の活性阻害を示す図である。
【図４】ＩＬ−１８Ｒにモノクローナル抗体ＭＡｂ＃１
１７−１０Ｃを用いるイムノアフィニティークロマトグ
ラフィーを適用したときのクロマトグラムである。
【図５】ＩＬ−１８Ｒのペプチド・マップである。
【図６】この発明の組換えＤＮＡである『ｐｃＤＮＡ／
ＨｕＩＬ−１８Ｒ』の構造を示す図である。
【図７】この発明の組換えＤＮＡである『ｐＥＦＨＩＬ
１８Ｒ−１４』の構造を示す図である。
【図８】この発明の組換えＤＮＡである『ｐＥＦＨＩＬ
１８ＲＤ１−２−Ｈ』の構造を示す図である。
【図９】この発明の組換えＤＮＡである『ｐＥＦＨＩＬ
１８ＲＤ１−Ｈ』の構造を示す図である。
【図１０】この発明の組換えＤＮＡである『ｐＥＦＭＩ
Ｌ１８ＲＳＨＴ』の構造を示す図である。
【符合の説明】
Ｐｃｍｖ サイトメガロウイ
ルス・プロモーター ＥＦ１αＰ 延長因子１プロモ
ーター ＩＬ−１８Ｒ ｃＤＮＡ この発明のポリペ
プチドをコードするｃＤＮＡ ＥＦＨＩＬ１８Ｒ−１４ ｃＤＮＡ この発明によるヒ
ト由来の可溶性ポリペプチドをコードするｃＤＮＡ ＨＩＬ１８ＲＤ１−２−Ｈ ｃＤＮＡこの発明によるヒ
ト由来の可溶性ポリペプチドをコードするｃＤＮＡ ＨＩＬ１８ＲＤ１−Ｈ ｃＤＮＡ この発明によるヒ
ト由来の可溶性ポリペプチドをコードするｃＤＮＡ ＥＦＭＩＬ１８ＲＳＨＴ ｃＤＮＡ この発明によるマ
ウス由来の可溶性ポリペプチドをコードするｃＤＮＡ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＤＹ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＧ ＡＤＺ ＡＤＰ Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ ＡＤＹ Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＤＺ // Ｃ０７Ｋ 14/54 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (31)優先権主張番号 特願平9−366908 (32)優先日 平９(1997)12月26日 (33)優先権主張国 日本（ＪＰ）

Claims (25)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 遺伝子の発現によって得ることができ
    る、インターロイキン−１８受容体としてのポリペプチ
    ド。
  2. 【請求項２】 ヒト又はマウス由来の遺伝子を動物、植
    物又は微生物由来の宿主内で発現させることによって得
    ることのできる請求項１に記載のポリペプチド。
  3. 【請求項３】 遺伝子が配列表における配列番号１又は
    ２に示す塩基配列の一部又は全部を含有する請求項１又
    は２に記載のポリペプチド。
  4. 【請求項４】 遺伝子が配列表における配列番号３又は
    ４に示す塩基配列を含有する請求項１、２又は３に記載
    のポリペプチド。
  5. 【請求項５】 遺伝子が配列表における配列番号５乃至
    １１に示す塩基配列のいずれかを含有する請求項１、
    ２、３又は４に記載のポリペプチド。
  6. 【請求項６】 部分アミノ酸配列として、配列表におけ
    る配列番号１２乃至１９に示すアミノ酸配列の１又は複
    数を含有する請求項１、２、３、４又は５に記載のポリ
    ペプチド。
  7. 【請求項７】 配列表における配列番号２０又は２１に
    示すアミノ酸配列の一部又は全部を含有する請求項１、
    ２、３、４、５又は６に記載のポリペプチド。
  8. 【請求項８】 配列表における配列番号２２乃至２５に
    示すアミノ酸配列を含有する請求項１、２、３、４、
    ５、６又は７に記載のポリペプチド。
  9. 【請求項９】 有効成分として、請求項１乃至８のいず
    れかに記載のポリペプチドを含んでなるインターロイキ
    ン−１８受容体感受性疾患剤。
  10. 【請求項１０】安定剤として、蛋白質、糖質及び／又は
    緩衝剤を含んでなる請求項９に記載のインターロイキン
    −１８受容体感受性疾患剤。
  11. 【請求項１１】抗自己免疫疾患剤としての請求項９又は
    １０に記載のインターロイキン−１８受容体感受性疾患
    剤。
  12. 【請求項１２】免疫抑制剤としての請求項９又は１０に
    記載のインターロイキン−１８受容体感受性疾患剤。
  13. 【請求項１３】請求項１乃至８のいずれかに記載のポリ
    ペプチドをコードするＤＮＡ。
  14. 【請求項１４】ヒト又はマウスに由来する請求項１３に
    記載のＤＮＡ。
  15. 【請求項１５】配列表における配列番号１若しくは２に
    示す塩基配列又はその塩基配列に相補的な塩基配列の一
    部又は全部を含有する請求項１３又は１４に記載のＤＮ
    Ａ。
  16. 【請求項１６】配列表における配列番号３若しくは４に
    示す塩基配列又はその塩基配列に相補的な塩基配列を含
    有する請求項１３、１４又は１５に記載のＤＮＡ。
  17. 【請求項１７】配列表における配列番号５乃至１１のい
    ずれかに示す塩基配列又はそれらの塩基配列に相補的な
    塩基配列を含有する請求項１３、１４、１５又は１６に
    記載のＤＮＡ。
  18. 【請求項１８】遺伝子の縮重に基づき、コードするアミ
    ノ酸配列を変えることなく、塩基の１又は複数を他の塩
    基で置換した請求項１３、１４、１５、１６又は１７に
    記載のＤＮＡ。
  19. 【請求項１９】自律複製可能なベクター内に挿入された
    請求項１３、１４、１５、１６、１７又は１８に記載の
    ＤＮＡ。
  20. 【請求項２０】動物、植物又は微生物由来の宿主内に導
    入された請求項１３、１４、１５、１６、１７、１８又
    は１９に記載のＤＮＡ。
  21. 【請求項２１】請求項１乃至８に記載のポリペプチドを
    コードするＤＮＡを発現させる工程と、生成したポリペ
    プチドを採取する工程を含んでなるポリペプチドの製造
    方法。
  22. 【請求項２２】生成したポリペプチドを塩析、透析、濾
    過、濃縮、分別沈澱、イオン交換クロマトグラフィー、
    ゲル濾過クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィ
    ー、等電点クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフ
    ィー、逆相クロマトグラフィー、アフィニティークロマ
    トグラフィー、ゲル電気泳動及び／又は等電点電気泳動
    を含む工程により採取する請求項２１に記載のポリペプ
    チドの製造方法。
  23. 【請求項２３】生成したポリペプチドを、モノクローナ
    ル抗体を用いるイムノアフィニティークロマトグラフィ
    ーを含む工程により採取する請求項２１又は２２に記載
    のポリペプチドの製造方法。
  24. 【請求項２４】請求項１乃至８のいずれかに記載のポリ
    ペプチドを有効成分とするインターロイキン−１８の中
    和剤。
  25. 【請求項２５】インターロイキン−１８に請求項１乃至
    ８のいずれかに記載のポリペプチドを作用させることを
    特徴とするインターロイキン−１８の中和方法。
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